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Andrs Daz, Javier Flrez, Alba Marina Cotes
Optimizacin de un medio de cultivo para la produccin de la levadura Pichia onychis (Lv027)
Revista Colombiana de Biotecnologa, vol. VII, nm. 1, julio, 2005, pp. 51-58,
Universidad Nacional de Colombia
Colombia
Cmo citar? Fascculo completo Ms informacin del artculo Pgina de la revista
Revista Colombiana de Biotecnologa,
ISSN (Versin impresa): 0123-3475
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Universidad Nacional de Colombia
Colombia
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Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
Optimizacin de un medio de cultivo
para la produccin de la levadura Pichia onychis
(Lv027)
Optimising culture medium for producing the yeast
Pichia onychis (Lv027)
Andrs Daz
*
, Javier Flrez
**
, Alba Marina Cotes
***
RESUMEN
La optimizacin de la produccin masiva de la levadura Pichia onychis fue investigada usando varios sustratos
y evaluando diferentes condiciones fsico-qumicas de fermentacin lquida. Inicialmente se realiz un
screening aplicando el diseo estadstico Plackett-Burman para evaluar tres fuentes de carbono y ocho fuentes
de nitrgeno (tanto orgnicas como inorgnicas) con el fin de seleccionar los factores nutricionales ms
influyentes sobre el crecimiento de la levadura. Posteriormente, se evaluaron cuatro fuentes nutricionales y
dos variables fsico-qumicas utilizando un diseo factorial fraccionado como punto de partida, para llevar a
cabo despus un proceso de optimizacin aplicando un diseo estadstico Central Compuesto Rotacional. Un
modelo de regresin polinomial se desarroll usando los datos experimentales; los resultados muestran que
la produccin de biomasa fue afectada significativamente por condiciones tanto nutricionales como
fsico-qumicas del medio de cultivo; el mximo rendimiento obtenido fue de 8,9510
9
clulas/mL
equivalentes a una biomasa seca de 6,30 g/L, el cual se logr con las siguientes condiciones: 43,42 g/L de fuente
de carbono, 0,261 g/L de fuente de nitrgeno orgnica, agitacin de 110 rpm, pH = 6,0 con un tiempo de
fermentacin de 48 horas.
Palabras clave: Pichia onychis, optimizacin, fermentacin lquida.
ABSTRACT
Optimising Pichia onychis yeast biomass production was evaluated using different substrates and different
physicochemical conditions for liquid fermentation. The Plackett-Burman statistical design was initially
applied for screening the most important nutritional variables (three carbon sources and eight nitrogen
sources) affecting yeast biomass production. Four nutritional sources and two physicochemical variables
were subsequently evaluated using a factorial fractionated design as the starting point for optimising the
process by applying a central composite rotational design. The results obtainedfromemploying a polynomial
regression model using the experimental data showed that biomass production was strongly affected by
nutritional andphysicochemical conditions. The highest yieldwas obtainedinthe following conditions: 43,42
g/L carbon source, 0,261 g/L nitrogen organic source, shaking at 110 rpm, 6,0 pH, 48 h total fermentation time
during which 8,9510
9
cells/mL were obtained, equivalent to 6,30 g/L dry biomass.
Key words: Pichia onychis, optimisation, liquid fermentation.
51
REVISTA COLOMBIANA DE BIOTECNOLOGA VOL. VII No. 1 Julio 2005 51-58
* Ingeniero qumico. Investigador Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica C. I. Tibaitat
Correo electrnico: andresdiazg@yahoo.com
** Ingeniero qumico. Investigador Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica C. I. Tibaitat.
Correo electrnico: javiflorez11@hotmail.com
*** Ph. D. Fitopatologa. Directora Laboratorio de Control Biolgico, Corpoica C. I. Tibaitat.
Correo electrnico: cotesprado@yahoo.com
Recibido: diciembre 10 de 2004 Aceptado: junio 30 de 2005
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REVISTA COLOMBIANA DE BIOTECNOLOGA VOL. VII No. 1 Julio 2005 51-58
INTRODUCCIN
Las prdidas en frutas y hortalizas despus de la co-
secha provocadas por microorganismos fitopatge-
nos pueden alcanzar hasta un 50%en pases en de-
sarrollo dependiendo de las especies, mtodos de
cosecha, tiempo de almacenamiento, condiciones
de comercializacin, etc. (Wilson y Wisnieski, 1989).
Tradicionalmente el uso de fungicidas sintticos es
la principal medida para el control de enfermedades
en poscosecha; sin embargo, estos son costosos,
pueden causar contaminacin ambiental, pueden in-
ducir resistencia en los patgenos y presentan pro-
blemas de toxicidad debido a su alta residualidad en
los productos alimenticios (Wilson y Wisnieski,
1994). El control biolgico de agentes patgenos
mediante el uso de microorganismos biocontrolado-
res es una de las alternativas ms promisorias, da-
das sus ventajas de sostenibilidad ambiental; de es-
tos microorganismos, las levaduras han demostrado
una alta actividad antagnica, se han aislado de la
superficie de diversos frutos y no presentan efectos
negativos sobre el hombre o los animales. En traba-
jos previos realizados en Corpoica, se seleccion la
levadura Pichia onychis cepa Lv027 por su alta acti-
vidad biocontroladora de Botrytis cinerea en cebolla
de bulbo y Rhizopus stolonifer en tomate (Garca et
al., 2002). Sin embargo, para la utilizacin de este
microorganismo a nivel comercial se requiere un
proceso de desarrollo tecnolgico que incluye la es-
tandarizacin de las condiciones de produccin
masiva.
En general, las condiciones de cultivo son tradi-
cionalmente optimizadas por la estrategia de una va-
riable a la vez, es decir, cambiando un factor mien-
tras se mantienen constantes los otros. Aunque esta
estrategia es sencilla y no exige aplicar un anlisis
estadstico, requiere un gran nmero de experimen-
tos y la interaccin entre factores es ignorada. En
contraste, los diseos experimentales basados en la
estadstica son aproximaciones ms eficientes que
pueden llevarse a cabo con un gran nmero de va-
riables simultneamente; adems, se puede estimar
la interaccin entre variables. Actualmente, esta tc-
nica ha sido ampliamente usada por diferentes in-
vestigadores para optimizar los componentes de un
medio de cultivo, ya que es una herramienta eficien-
te que permite el desarrollo de modelos matemticos
empricos (Masetto et al., 2001; Joo et al., 2002).
Una estrategia que permite generar un modelo
con alta calidad de prediccin es la utilizacin de mo-
delos predictivos, ya sean matemticos o grficos,
que permitan optimizar o maximizar la variable de
respuesta evaluada.
Entre los muchos modelos disponibles, en el
presente trabajo se decidi utilizar el Diseo Central
Compuesto Rotacional (DCCR) ya que presenta va-
rias ventajas sobre otro tipo de diseos experimenta-
les, si se tiene en cuenta que permite generar una
superficie de respuesta en la que se garantiza igual
prediccin del error a R unidades del centro en cual-
quier direccin, su uso se recomienda cuando se re-
quiere obtener un modelo predictivo, es un diseo
secuencial, y el modelo obtenido permite que se
aproxime mediante la aplicacin de un modelo poli-
nomial de segundo orden (Panda et al., 1999). Por
lo tanto, el objetivo de la presente investigacin fue el
de examinar mediante la utilizacin del mencionado
diseo los efectos de las condiciones de cultivo so-
bre la produccin de biomasa de la levadura Pichia
onychis a nivel de erlenmeyer.
METODOLOGA
Microorganismo y medio de cultivo. El microorga-
nismo usado en este estudio fue la cepa de levadura
Pichia onychis, codificada como Lv027, suministra-
da por el Banco de Germoplasma del Laboratorio de
Control Biolgico de Corpoica, C. I. Tibaitat. El mi-
croorganismo fue mantenido en el medio YM que
contiene: extracto de levadura (0,3%), extracto de
malta (3%), dextrosa (1%), peptona (0,5%) y agar
(1,5%) ajustado a un pHde 6,0. El cultivo se almace-
n a 4 C. Todos los experimentos se llevaron a cabo
en erlenmeyers de 125 mL que contenan 25 mL de
medio, que fueron inoculados con 5 mL de una su-
pensin de clulas de levadura ajustada previamen-
te a una concentracin de 110
7
clulas/mL; cada
tratamiento se desarroll por triplicado.
Produccin masiva. Mtodos analticos. Las ma-
terias primas (melaza, hidrolizado de soya, hidroliza-
do de levadura, hidrolizado de maz), las cuales iban
a ser utilizadas en los medios de produccin masiva,
fueron caracterizadas en el Laboratorio de Nutricin
Animal de Corpoica, siguiendo protocolos previa-
mente estandarizados, y se determin protena cru-
da por el mtodo de Kjeldahl y azcares reductores
por el mtodo de Nelson/Somogy.
La concentracin celular se determin median-
te la tcnica de conteo en cmara de Neubauer, para
esto se suspendi 1 mL del caldo de fermentacin en
10 mL de agua destilada estril; a partir de esta sus-
pensin se realizaron diluciones seriadas y el resul-
tado se expres como clulas/mL.
La biomasa seca fue determinada por una tc-
nica gravimtrica, se tomaron 50 mL del caldo de fer-
mentacin y se centrifugaron en una centrfuga
Jouan G4,11 a 4500 rpmdurante 20 minutos, el so-
brenadante se descart y la biomasa hmeda se ubi-
c en un Analizador Halgeno de Humedad Ohaus
MB-45 hasta obtener peso constante.
Diseo experimental y anlisis de datos. Para es-
tudiar los efectos combinados de tres fuentes de car-
bono con ocho fuentes de nitrgeno sobre el creci-
miento de la levadura, se us un diseo estadstico
de screening Plackett-Burman como primer paso en
el proceso de optimizacin, se mantuvo constante a
travs de este experimento una temperatura de 26
C y una agitacin de 150 rpm. Los factores y los ni-
veles aplicados se muestran en la tabla 1, cada va-
riable est representada por dos niveles: un nivel
alto denotado por (+) y un nivel bajo designado por
(-); el diseo implic el montaje de 12 tratamientos
experimentales por triplicado.
El anlisis de los datos obtenidos se llev a
cabo con el paquete estadstico SAS (Statistical
Analysis System) versin 8.1.
En la segunda etapa se aplic un diseo facto-
rial fraccionado para ajustar los niveles de las
variables seleccionadas en la etapa anterior y deter-
minar su comportamiento al interactuar con dos va-
riables fsico-qumicas influyentes en la fermenta-
cin lquida (pH y agitacin). Los factores y los
niveles aplicados se muestran en la tabla 2. Cada
variable est representada por dos niveles: un nivel
alto denotado por (+) y un nivel bajo designado por
(-); el diseo implic el montaje de 8 tratamientos por
triplicado.
El anlisis de los datos obtenidos se realiz con
el paquete estadstico Minitab versin 13.32.
En la ltima etapa del proceso de optimizacin
se determin el nivel ptimo de cada variable inde-
pendiente clave, previamente identificada en el dise-
o factorial fraccionado; para el desarrollo de este
experimento se utiliz un diseo Central Compuesto
Rotacional, que permiti evaluar los efectos cuadr-
ticos y las interacciones de orden superior entre las
variables y determinar as la naturaleza no lineal de
la respuesta. Para los clculos estadsticos, las va-
riables independientes X
i
fueron codificadas como x
i
de acuerdo con la siguiente ecuacin:
! " x X X / X
i i 0
# $ % (Ec. 1)
Donde x
i
= valores codificados adimensionales
de la variable X
i
; X
0
= valor de X
i
en el punto central;
DX = cambio en la magnitud de la variable. El com-
portamiento de la produccin de biomasa fue expli-
cado por la siguiente ecuacin cuadrtica:
Y x x x x
0 i i ij i
2
ij i j
# & & & ' ' ' ' ( ( ( (Ec. 2)
Donde Y es la respuesta predecida,
los subndices i,j varan desde 1 al nme-
ro de variables,
o
es el trmino del inter-
cepto,
i
son los coeficientes lineales,
ij
son los coeficientes cuadrticos. La
ecuacin (2) fue resuelta usando el pa-
quete estadstico Statgraphics versin
5.0 para estimar la respuesta de la varia-
ble dependiente. En el modelo final se
incluyeron solamente las estimaciones
de los coeficientes con niveles significati-
vos mayores del 90% (es decir, p <
0,10). El estadstico F se us para eva-
luar la significancia del modelo. El diseo
implic el montaje de 31 tratamientos por
triplicado.
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OPTIMIZACIN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA LA PRODUCCIN DE LA LEVADURA Pichia onychis (Lv027)
Tabla 1. Factores analizados con un diseo Plackett-Burman
y codificacin de los niveles usados
Los factores y los niveles aplicados se presen-
tan en la tabla 3.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Diseo Plackett-Burman. La relacin carbo-
no-nitrgeno es el parmetro ms importante en la
produccin de biomasa de la levadura Pichia onychis
en fermentacin lquida. Los resultados obtenidos se
analizaron usando un anlisis de varianza (Anova), la
significancia de cada coeficiente se determin usan-
do los valores del estadstico P, donde valores de P<
0,1 indican alta significancia del
correspondiente coeficiente. Se
determin que la variable ms sig-
nificativa fue el homogeneizado
proteico (X
7
) y la variable con el
menor efecto fue el hidrolizado
proteico 2 (X
5
). De acuerdo con la
Carta de Pareto (figura 1) se de-
termin que los factores con efec-
tos significativos sobre la respues-
ta son, en su orden: homoge-
neizado proteico (X
7
), microele-
mento 1 (X
8
), fuente de carbono 2
(X
3
) y melaza (X
1
); el factor X
7
pre-
sent signo negativo, lo que indica
que la concentracin adecuada
de homogeneizado proteico por
evaluar en la siguiente etapa de-
bera ser una concentracin igual
o menor que la usada en esta
etapa; los dems factores pre-
sentaron signo positivo, lo que in-
dica que se debe evaluar una
concentracin mayor que la usa-
da en la siguiente etapa de
seleccin.
Los factores cido orgnico
(X
2
), hidrolizado proteico 1 (X
4
),
hidrolizado proteico 2 (X
5
), hidro-
lizado proteico 3 (X
6
), microele-
mento 2 (X
9
) y microelemento 4
(X
11
) no presentaron efectos sig-
nificativos sobre la variable de
respuesta.
Del anlisis de los resulta-
dos obtenidos de los efectos esti-
mados y del anlisis de varianza,
se puede concluir que los facto-
res nutricionales seleccionados
para la siguiente etapa fueron: homogeneizado pro-
teico (X
7
), microelemento 1 (X
8
), fuente de carbono 2
(X
3
) y melaza (X
1
).
Diseo Factorial Fraccionado. En esta etapa del
proceso de optimizacin se evaluaron cuatro fuentes
nutricionales (dos fuentes de carbono, una fuente de
nitrgeno orgnica y una fuente de nitrgeno inorg-
nica) seleccionadas previamente y dos factores fsi-
co-qumicos que se ha demostrado que tienen gran
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REVISTA COLOMBIANA DE BIOTECNOLOGA VOL. VII No. 1 Julio 2005 51-58
Tabla 2. Factores analizados con un diseo Factorial Fraccionado y codificacin
de los nieles usados
Tabla 3. Factores analizados con un diseo Central Compuesto Rotacional
y codificacin de los niveles usados
Figura 1. Carta de Pareto para biomasa aplicando un diseo Plackett-Burman. Codificacin
de los factores: X1 = melaza, X2 = cido orgnico, X3 = fuente de carbono 2, X4 = hidroliza-
do proteico 1, X5= hidrolizado proteico 2, X6 = hidrolizado proteico 3, X7 = homogeneizado
proteico, X8 = microelemento 1, X9 = microelemento 2, X10 = microelemento 3, X11 = mi-
croelemento 4.
influencia en la produccin de biomasa de levadu-
ras: agitacin y pH.
Se llev a cabo un anlisis de varianza de los
resultados experimentales obtenidos y los efectos
de cada variable se representaron grficamente
mediante una Carta de Pareto (figura 2); se conclu-
y que la fuente de nitrgeno orgnico (homoge-
neizado proteico) present el mayor efecto sobre
la variable de respuesta con un coeficiente de
0,071 en comparacin con las fuentes de carbono
melaza y fuente de carbono 2 que tuvieron coefi-
cientes de 0,023 y 0,005 respectivamente y con
respecto a la agitacin que present un efecto de
0,020. El factor pHmostr un efecto significativo de
magnitud 0,013; sin embargo, para la etapa de op-
timizacin se seleccionaron los tres factores ms
significativos y el pH se ajust a un valor de 6,0. La
fuente de nitrgeno inorgnica y la fuente de car-
bono 2 no presentaron efectos significativos, con
magnitudes de 0,002 y 0,005; por tanto, estas dos
variables se aplicaron como parmetros en sus nive-
les altos en la ltima etapa de optimizacin.
Los rendimientos obtenidos expresados como
biomasa estuvieron en un rango entre 4,48 g/L para el
tratamiento 1 y 6,51 g/L para el tratamiento 6, y expre-
sados como concentracin de clulas estuvieron entre
6,6510
8
clulas/mL para el tratamiento 8 y 1,1110
9
clulas/mL para el tratamiento 3 (tabla 4).
Diseo Central Compuesto Rotacional. La se-
cuencia experimental se llev a cabo en dos bloques
en el tiempo: en una primera secuencia experimental
se evaluaron 16 tratamientos con 4 puntos centrales
y en una segunda secuencia experimental se eva-
luaron 15 tratamientos con 3 puntos centrales. Los
puntos centrales sirvieron para evaluar el error
experimental.
Cada una de las corridas experimentales se
realiz por triplicado; la desviacin estndar entre
duplicados y puntos centrales fue menor del 10%,
valor aceptable de acuerdo con el anlisis estadsti-
co. Para todas las fermentaciones se tom como
tiempo final 48 horas, como se haba determinado
en un trabajo previo (Garca et al., 2002).
Se realiz un anlisis de varianza para una regre-
sin mltiple, con el fin de evaluar el efecto de las varia-
bles independientes sobre la variable dependiente
(biomasa). Enlatabla5sepresentael resultadoarroja-
do por el software utilizado, en la tercera columna se
presenta el error estndar que mide la desviacin del
efectoanalizado, el cual estuvoalrededor del 4,5%; por
ejemplo, para la agitacin indica que los valores calcu-
lados para el modelo se alejan en promedio 0,3% de
los datos experimentales. En general, el grado de ajus-
te del modelo fue del 91%, valor aceptable para la des-
cripcin de procesos biolgicos.
Se present un efecto sig-
nificativo de los factores nutricio-
nales sobre la produccin de
biomasa de la levadura Pichia
onychis evaluada.
En este anlisis no se tuvie-
ron en cuenta las interacciones de
tercer orden porque, en general,
no tienen efecto significativo al
considerar un nivel de significan-
cia del 10% (Moreno, 1995).
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OPTIMIZACIN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA LA PRODUCCIN DE LA LEVADURA Pichia onychis (Lv027)
Figura 2. Carta de Pareto para biomasa aplicando un diseo factorial
fraccionado. Codificacin de los factores: A = pH, B = fuente de carbo-
no 2, C = homogeneizado proteico, D = microelemento 1, E = agita-
cin, F = melaza.
Tabla 4. Matriz del diseo factorial fraccionado y resultados de produccin
de biomasa y concentracin de clulas de la levadura Pichia onychis Lv027
Adicionalmente, se llev a cabo un anlisis
de las superficies de respuesta de los modelos ob-
tenidos tanto para biomasa (datos no mostrados)
como para la concentracin de clulas (figuras 3 y
4); estas muestran los efectos relativos de dos va-
riables cuando la concentracin de la tercera va-
riable se mantuvo en un nivel constante. Se obser-
v que se present un mximo en la regin del
espacio explorada; para la agitacin se observ
una tendencia a maximizar la respuesta si se usa
un nivel de -2, para el nitrgeno la tendencia es
clara y muestra que las mximas productividades
se obtienen cuando esta variable est cercana al
nivel 0 y para la melaza no
es clara la tendencia, ya
que se presentan buenas
productividades en casi
todo el rango de niveles
(entre -2 y 2).
Para realizar el anlisis
matemtico de los resulta-
dos se remplazaron los coe-
ficientes de regresin obteni-
dos para cada factor en la
ecuacin 2 y se estableci el
modelo de regresin para la
productividad en clulas (Y),
previa decodificacin del mo-
delo de regresin empleando
la ecuacin 1; el modelo ge-
nerado est en trminos de
las variables originales as:
Y = -1.459 1.4310
-3
X1 + 10.6410
-3
X2 + 40.88X3 + 1.0610
-5
X
1
2
+ 1.5810
-3
X
2
2
217.16X
3
2
3.4510
-4
X1X2 0.0372X1X3 0.1325X2X3 (Ec. 3)
Esta ecuacin tiene la ventaja de mostrar el
efecto de cada factor independientemente de su ni-
vel. De acuerdo con esta ecuacin, la agitacin tiene
un efecto lineal negativo sobre la productividad, as
como la melaza y la fuente de nitrgeno presentan
un efecto lineal positivo. As mismo, el efecto cuadr-
tico del factor homogeneizado proteico fuente de
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REVISTA COLOMBIANA DE BIOTECNOLOGA VOL. VII No. 1 Julio 2005 51-58
Tabla 5. Anlisis de varianza para la regresin obtenida aplicando
un Diseo Central Compuesto Rotacional
Figura 3. Superficie de respuesta obtenida para la concentra-
cin de clulas de la levadura Pichia onichys como funcin de ni-
trgeno y melaza con agitacin constante.
Figura 4. Superficie de respuesta obtenida para la concentra-
cin de clulas de la levadura Pichia onychis como funcin de
agitacin y melaza con homogeneizado proteico (nitrgeno)
constante.
nitrgeno present el mayor efecto (positivo) sobre
la productividad.
Para determinar las condiciones ptimas de
produccin de biomasa de Pichia onychis en funcin
del modelo obtenido se aplic una tcnica de maxi-
mizacin matemtica, los resultados se presentan
en la tabla 6.
De la tabla 6 se observ que los resultados nu-
mricos obtenidos concuerdan con los predecidos
cualitativamente por el anlisis grfico, el nivel de
concentracin de la fuente de nitrgeno en el medio
prcticamente no cambia (+7,8%) y los niveles de
agitacin y concentracin de melaza deben reducir-
se (-26,7% y -16,25% respectivamente).
Reemplazando los valores obtenidos (tabla 6)
en la ecuacin de productividad (ecuacin 3) se ob-
tiene un rendimiento predecido, Y
P
, de: Y
P
=
1,0110
11
clulas/mL.
Estos resultados indican que los cambios que
se le deben realizar al medio de cultivo para optimi-
zarlo no son drsticos; sin embargo, el rendimiento
se mejora notablemente ya que el valor de Y
P
supera
en un 42%el rendimiento obtenido con el mismo me-
dio sin optimizar.
Adicionalmente, se mejora la economa del
proceso, ya que se estn disminuyendo las cantida-
des de materias primas por adicionar en el medio de
cultivo para obtener el mismo rendimiento o
superior.
Posteriormente, se llev a cabo la validacin de
los resultados obtenidos con las condiciones nutri-
cionales y de fermentacin determinadas previa-
mente (tabla 6); se obtuvo una concentracin de c-
lulas de 8,9510
10
clulas/mL equivalentes a una
biomasa seca de 6,30 g/L; estos resultados presen-
tan un ajuste superior al 90%con respecto al modelo
propuesto.
CONCLUSIONES
La aplicacin de herramientas estadsticas y de dise-
o de experimentos demostraron ser estrategias ti-
les y eficientes para llevar a cabo la optimizacin de
medios de cultivo y la estandarizacin
de condiciones de fermentacin. El
anlisis demostr que las fuentes de
carbono, nitrgeno y la agitacin son
los factores ms influyentes sobre la
produccin de biomasa de la levadura
Pichia onychis Lv027; adems, a par-
tir del anlisis de las superficies de
respuesta obtenidas al aplicar un Di-
seo Central Compuesto Rotacional
se concluye que el balance de las
magnitudes de los factores mencio-
nados debe realizarse cuidadosamente con el fin de
alcanzar regiones de ptima respuesta.
AGRADECIMIENTOS
Los autores expresan sus agradecimientos a Col-
ciencias que financi el proyecto Diseo y evalua-
cin de un bioplaguicida a base de la levadura Pi-
chia onychis (Lv027), para el control de Rhizopus
stolonifer de poscosecha en tomate, cdigo PN
25100015.
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OPTIMIZACIN DE UN MEDIO DE CULTIVO PARA LA PRODUCCIN DE LA LEVADURA Pichia onychis (Lv027)
Figura 5. Superficie de respuesta obtenida para la concentra-
cin de clulas de la levadura Pichia onychis como funcin de
agitacin y homogeneizado proteico (nitrgeno) con melaza
constante.
Tabla 6. Resultados obtenidos en las variables independientes utilizando
el anlisis matemtico de optimizacin
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