UNIVERSIDAD NACIONAL

DE JAN
CARRERA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA
CURSO:
URIANALISIS Y MICROSCOPIA
TEMA:
CONTROL DE CALIDAD DE MICROBIOLOGIA Y MECANISMOS DE RESISTENCIA
BACTERIANA
CICLO:
V
DOCENTE:
Blgo. POLO ZAVALA

TRABAJO PRESENTADO POR:
CORONEL RONCAL, Lesly Arllet
GUEVARA ESTELA, Olivia Mayoli
YAJAHUANCA GAYTAN, Shirley Ludy
JAN PER

2014
I. INTRODUCCION


El en siguiente trabajo hablaremos sobre, control de calidad de microbiologa que es un elemento vital
en el laboratorio, ya que ayuda en la confiabilidad de las pruebas, su reproducibilidad, asegura la
calidad de los materiales, reactivos y equipos empleados, mejora la auto confianza del personal,
detecta fallas que pueden reflejarse en el informe de muestras clnicas y en general provee un entorno
de excelencia en todos los aspectos del trabajo.

En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar metodologas relativas al
cuidado del paciente. En este contexto el control de calidad en microbiologa clnica envuelve el
monitoreo de los medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para
asegurar una adecuada prctica en el aislamiento, identificacin y caracterizacin de agentes
etiolgicos.

Es por ello que muchos expertos consideran que el control de calidad en microbiologa, es ms
un arte que una ciencia.

Adems la resistencia bacteriana es un fenmeno creciente con implicaciones sociales y econmicas
enormes dadas por el incremento de morbilidad y mortalidad, aumento de los costos de los
tratamientos y de las largas estancias hospitalarias generadas.















II. MARCO TEORICO

CONTROL DE CALIDAD DE MICROBIOLOGIA
1. CONTROL DE CALIDAD DE LAS MUESTRAS CLNICAS

1.1 Uno de los aspectos ms importantes en un laboratorio de microbiologa es la apropiada seleccin, recoleccin
y transporte de las muestras clnicas. Por lo que todo el personal relacionado con estas responsabilidades,
debe comprender lo determinante que es el mantenimiento de la calidad de la muestra, en la evaluacin e
informe de un espcimen clnico. Es responsabilidad del laboratorio proveer sta informacin en forma clara y
que sea fcilmente incorporada en la metodologa de trabajo de todas las salas de atencin y hospitalizacin, la
cual debe estar siempre accesible al personal de enfermera y medicina y que debe funcionar como una
referencia.
A pesar de que algunos tipos de muestras requieren metodologa de recoleccin y transporte muy
especiales, se pueden enumerar algunos aspectos generales que deben tenerse en cuenta al recolectar las
muestras clnicas:
La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso.
Al tomar una muestra clnica, es importante evitar la contaminacin con microorganismos de la flora
normal del rea afectada.
Debe seleccionarse el lugar anatmico correcto de donde se obtendr la muestra, utilizar la
tcnica apropiada y los instrumentos o elementos adecuados para su obtencin.
Se debe recolectar un volumen apropiado de muestra para evitar los resultados falsos negativos.
Se debe identificar cada muestra con el nombre del paciente y su nmero de identificacin.
Se debe colocar la muestra en un recipiente adecuado para su transporte, con el fin de asegurar
la sobrevivencia del posible agente infeccioso.
Por ltimo, se debe evitar derramar la muestra y mantener en todo momento las medidas debido
seguridad apropiadas.


2. CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

2.1. Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo, con el nombre del producto, nombre de
la casa proveedora, fecha de recibo, fecha de expiracin, nmero de lote y fecha en que se abri el frasco.

2.2.Cada lote preparado de medio de cultivo se debe probar antes de su uso rutinario, mediante la
inoculacin de microorganismos cuyo comportamiento se conoce, tanto para reacciones positivas, como
negativas. Para esto pueden utilizarse cepas bacterianas control de la ATCC (American Type Culture Collection).
Se debe guardar un registro de los resultados obtenidos.

2.3. Para el agar Mueller-Hinton, empleado como medio de soporte para realizar la prueba de
susceptibilidad por el mtodo de difusin en agar (Mtodo de Bauer and Kirby), el control de calidad debe
extenderse hacia la determinacin de las concentraciones de timina/timidina, la concentracin de cationes, as
como en medir la profundidad del agar y que sta sea igual en todo el plato de agar.

2.4 Las pruebas bsicas de control de calidad de los medios preparados deben incluir: medicin del pH,
pruebas de esterilidad, capacidad de crecimiento y reaccin, aspecto, dureza y profundidad del agar.


3. CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS

3.1 Un elemento fundamental en el trabajo diario del laboratorio de microbiologa lo constituyen los
reactivos, tanto comerciales como de preparacin domstica, que son utilizados en la caracterizacin de
microorganismos. Por ello, deben efectuarse controles diarios con las bacterias tipo y seguir estrictamente
las indicaciones en cuanto a almacenamiento de los reactivos, metodologa de la prueba y tiempo de lectura. Es
recomendable que los reactivos comerciales sean examinados inmediatamente cuando se abre un nuevo lote o
vial y llevar un registro de su funcionamiento.
3.2 El registro de funcionamiento debe efectuarse en forma diaria o al menos
cada vez que se efecta la prueba.


4. CONTROL DE CALIDAD DE LAS TINCIONES

4.1 La concentracin de las soluciones de tincin, por efecto de la evaporacin de los solventes o las
variaciones introducidas en los mtodos recomendados, pueden afectar los resultados de las tinciones para
diferenciar microorganismos por su reaccin a la tincin de Gram y la morfologa, tintes para cpsulas, esporas,
etc.

4.2 El control de calidad de stos tintes debe realizarse primero con cada nuevo lote, luego basta con un
control semanal para mantener un grado de seguridad apropiado.
4.3 Para el control diario de la tincin de Gram, se recomienda el uso de una cepa ATCC de Staphylococcus
aureus y de Escherichia coli.

4.4. Es necesario llevar un registro de estos controles.

5. CONTROL DE CALIDAD DE ANTISUEROS Y OTROS PRODUCTOS COMERCIALES COMO
KITS DE IDENTIFICACIN

5.1 En microbiologa existen cada vez ms productos comerciales que tienen como objetivo ayudar en el
diagnstico de agentes etiolgicos de enfermedades en el menor tiempo posible, con el mayor grado de
especificidad y sensibilidad. Estos antisueros deben ser probados cada vez que se recibe un nuevo lote y cada
vez que se utilicen, deben de analizarse los controles positivo y negativo que vienen con cada juego de reactivos.
Se deben llevar registros con la fecha de expiracin del lote, casa comercial, fecha en que ingres al laboratorio,
fecha en que se abri el juego y el registro de los controles realizados.

6. CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD

6.1. Se debe monitorear la precisin y exactitud del procedimiento de la prueba de susceptibilidad, el
comportamiento de los reactivos utilizados en la prueba y el desempeo de las personas que llevan a cabo las
pruebas y sus resultados.

6.2. Al hacer el control de calidad de discos, tiras de E-test o mtodos de sensibilidad para sistemas
automatizados o semi automatizados, se recomienda utilizar cepas ATCC. Cada nuevo lote de estos insumos debe
evaluarse antes de su uso rutinario y luego una vez al mes, si no existe cambio de lote en ese periodo.







7. CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS

7.1 Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio deben estar respaldados por un programa de
control de calidad y de mantenimiento preventivo y correctivo, basados en las instrucciones del fabricante y los
procedimientos establecidos. Debe mantenerse un registro de todo lo realizado al respecto, con el nombre del
instrumento, fecha, resultado y comentarios.

8. SUPERVISIN DEL PERSONAL

8.1 El personal es el factor ms importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiologa. Este
personal debe tener una dedicacin y actitud positiva hacia el trabajo, capacidad acadmica, actualizacin
constante y contar con los elementos indispensables para su labor.

8.2 Debe existir una ficha tcnica de cada trabajador donde se registren los posibles accidentes sufridos,
as como las infecciones suscitadas al manipular secreciones u organismos infecciosos. Adems, se recomienda
realizar estudios radiolgicos y colocacin de PPD, en aquel personal ligado al trabajo con Mycobacterium
tuberculosis.

9. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO

9.1 Es recomendable que los laboratorios de microbiologa puedan participar en programas de evaluacin
externa. Estos programas miden la capacidad del laboratorio para evaluar una muestra desconocida y llegar a un
resultado seguro.

9.2 Estos controles de calidad externos pueden ser nacionales o internacionales.


MECANISMOS DE RESISTENCIA BACTERIANA
Desde el punto de vista molecular y bioqumico existen bsicamente tres mecanismos por medio
de los cuales una bacteria puede hacerse resistente al efecto del antibitico, a saber:

1. DESTRUCCIN E INACTIVACIN DEL ANTIBITICO

Se realiza mediante la produccin de enzimas que hidrolizan el antobitico. Son ejemplos de esta
la produccin de B-lactamasa, B-lactamasa de amplio espectro, eritromicina estereasa y enzimas
modificadoras de aminoglucsidos, cloramfenicol, lincosamidas y estreptograminas.

Sabemos que los antibiticos, B-lactmicos como penicilina, oxacilina, cefalosporinas, actan
inhibiendo la enzima D-alanil D-alanin carboxipeptidasa (PBPS) encargada de la sntesis de la pared.
La B-lactamasa hidroliza el enlace amida del anillo penicilnico o cefalospornico resultando un
derivado cido inactivo. Se trata de un sistema enzimtico amplio, comn y eficiente de resistencia
frecuentemente producidas por bacterias Gram negativas, para las cuales se han elaborado
mltiples clasificaciones, siendo la ms aceptada la de Bush. Pueden clasificarse de acuerdo con
su forma de produccin en cuatro grupos:


Por localizacin gentica (cromosomas o plsmidos).
Por exposicin gentica (constitutiva o inducida).
Por produccin primaria (dependiente de
microorganismo).
Por sustrato mayor (depende de la clase de antibitico).
Igualmente por su amplia difusin se deben reconocer algunas codificadas por
plsmidos
Enzimas de amplio espectro que hidrolizan las bencilpeni-cilinas y cefaloridina.

Otra va para inactivacin del antibitico es la modificacin enzimtica del mismo. Este es el
caso de las enzimas modificadoras de aminoglucsidos codificadas en plsmidos. Entre las
principales enzimas responsables de catalizar la modificacin, estn la acetil transferasa (AAC),
fosfatidil transferasa (APH) y adenil transferasa (ANT o AAD). Cuando un aminoglucsido es
inactivado ya no puede unirse a la subunidad 30s ribosomal y por lo tanto no pueden interferir en la
sntesis de protenas.

El mecanismo de resistencia a eritromicina es comn a lincosamidas y estreptograminas (grupo
MLS). La produccin de eritromicina esterasas, cataliza la hidrlisis del anillo de lactona del
antibitico. Se han descrito Estearasa I y II confinadas a Gram negativos.

La modificacin del cloramfenicol la realiza una enzima intracelular, cloranfenicol acetil
transferasa (CAT), existente tanto en Gram positivos como en Gram negativos. Esta enzima acetila
los dos grupos hidroxilo y previene la unin del cloranfenicol al ribosoma 50S.

2. BARRERAS DE PERMEABILIDAD

Existen fundamentalmente dos mecanismos de resistencia:

a. ENTRADA DISMINUIDA:

1.1. Permeabilidad de la membrana externa: claramente definida en los
microorganismos Gram negativos que poseen una membrana lipdica externa que constituye
una barrera intrnseca para la penetracin de antibitico.
1.2. Permeabilidad de la membrana interna: otra forma de resistencia de la bacteria consiste en
una modificacin energtica que compromete el transportador aninico que lleva el
antibitico hacia el interior de la clula. La presencia de capa lipdica en la membrana acta
como un mecanismo de resistencia para medicamentos hidrofbicos.

1.3. Porinas: son canales de difusin presentes en la membrana externa de la bacteria.
De la modificacin por mutacin de estas protenas se genera una disminucin del
paso del antibitico. ste es el mecanismo empleado por Salmonella typhimurium (OmpC)
contra cefalosporinas de primera generacin, Serratia marcescens, E. coli y Pseudomonas
aeruginosa contra aminoglucsidos y carbapenem.

b. EFLUJO ACTIVO: es debido a la presencia de protenas de membrana especializadas.
Se altera la produccin de energa y se disminuye no solamente la entrada del antibitico
sino que a su vez las bacterias reducen la concentracin del antibitico y se promueve la
extraccin activa del mismo. Confiere resistencia a tetraciclinas, fluoroquinolonas,
cloramfenicol y B-lactmicos, antispticos y desinfectantes de tipo amonio cuaternario.






3. ALTERACIN DEL SITIO BLANCO

En este mecanismo de resistencia bacteriana se modifican algunos sitios especficos de la
anatoma celular, como pared celular, subunidad 50s, 30S ribosomales, etc.

De esta manera la modificacin de enzimas catalizadoras en la produccin de proteoglicanos
celulares, conferirn resistencia a los b-lactmicos dado que es esta enzima su sitio de accin.

La resistencia a las quinolonas de grmenes como Pseudomonas aeruginosa, Citrobacter
freundii, Escherichia coli y Staphylococcus aureus obedece a la modificacin por mutacin de los
genes GyrA y Gyr B que codifican para las topoisomerasas II y IV. Caractersticamente las
mutaciones mencionadas se presentan como cromosmicas y no como plsmidos.

Un mecanismo similar se presenta para sulfonamidas y trimetoprim donde se presentan
modificaciones de la sintetasa de hidropteorato y dihidrofolato reductasa.

La rifampicina acta sobre la subunidad 13 de la RNA polimerasa, inhibiendo la extensin del RNA
durante su sntesis. La resistencia a rifampicina se presenta cuando cambios en un aminocido de
esta subunidad alteran la unin del antibitico a la RNA polimerasa. Esta resistencia es comn en
enterobacterias y puede desarrollarse en Staphylococcus, N. meningitidis y H. influenzae.

Respecto a las dems estructuras ribosomales encontramos modificaciones a nivel de mltiples
subunidades como 30s, 50s. Sitios de accin de aminoglucsidos, lincosamidas, macrlidos y
tetraciclinas. Por ejemplo: la metilacin ARN ribosomal de la subunidad 50S es el mecanismo de
resistencia de S. aureus, Bacteroides fragilis y Clostridium perfringens a tetraciclinas, cloramfenicol y
macrlidos.

El mecanismo de resistencia (ribosomal) a gentamicina, tobramicina y amikacina es poco
frecuente y consiste en la mutacin del pptido S12 de la subunidad 30S.

Cabe destacar en este punto los mecanismos de meticilino resistencia por produccin de una
protena ligadora de penicilina (PBP), la resistencia a penicilina por S. pneumoniae, la resistencia a
glicopptidos por S. aureus.









Equipo
Procedimiento Periodo Lmites de Tolerancia Precauciones
Refrigerador 4C
Registro
temperatura

Diario

+/- 1C

Limpieza mensual
Congelador 70C
Registro
temperatura
Diario +/- 1C
Limpiar y descongelar
cada 6 meses
Incubadoras 35, 42
y 56C
Registro
temperatura

Diario

+/- 1C

Limpieza mensual
Incubadora con CO
Registro
temperatura

Diario
36 a 38C
5 a 10% CO

2

Limpieza mensual

pH metro
Registro solucin
calibradora
certificada
Cada vez que
se use

+/- 0.1

Limpiar cada vez que
se use

Autoclave
Controles
biolgicos

Diario

No-crecimiento
Limpiar cada vez que
se use
Microscopio Limpieza
Cada vez que
se use
---
Revisin general
cada 6 meses
Centrfuga

Comprobar rpm Cada seis meses

---
Revisin general
cada 12 meses
Cabina de
Seguridad Biolgica
Registro flujo de
aire y luz UV
Limpieza

Diario

---
Cambio de filtros
cada 3000 horas de
funcionamiento


III. BIBLIOGRAFIA

Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos75/manual-control-calidad-microbiologia/manual-control-
calidad-microbiologia.shtml#ixzz39LzTeniV