PRCTICA No 1

DETERMINACION DE ALCOHOL METILICO EN MUESTRAS BIOLOGICAS

GENERALIDADES:

Cuando se sospecha de una intoxicacin por alcohol metlico, debern remitirse al
laboratorio para su anlisis cualquiera de las siguientes muestras:
10mL de sangre sin anticoagulante.
100ml de orina
Contenido gstrico ( vmitos)
Residuos de botellas de licor.

Si bien en todo caso es aconsejable no aadir conservantes, en este caso es
fundamental abstenerse de conservar la muestra con formol, formaldehido, o acido
frmico, porque precisamente los mtodos de investigacin se basan en tcnicas de
deteccin de acido frmico, y formaldehido.

Su amplio uso en la industria aumenta el riesgo de exposicin ocupacional por
inhalacin de sus vapores o la absorcin por piel. La principal causa de intoxicacin
aguda en la poblacin general adulta ocurre principalmente por el consumo de licor
adulterado; no obstante, su venta libre, fcil acceso, bajo costo (es tres veces ms
econmico que el alcohol etlico) y capacidad de producir similares efectos
embriagantes al etanol, hacen de l una sustancia ideal para la adulteracin de las
bebidas alcohlicas

Diagnstico
Antecedente o sospecha de exposicin a la sustancia
Cuadro clnico compatible con la intoxicacin aguda por metanol
Presencia de alteraciones visuales.
Aparicin de acidosis metablica.
Anin Gap elevado: (> 14 mEq/L)

La confirmacin se obtiene mediante la determinacin de niveles de metanol en sangre
o niveles de formaldehido y acido frmico en orina/sangre
Niveles sricos de > 20mg/dl son txicos
Niveles sricos > 40 mg/dl son letales
Niveles sricos bajos o ausentes de metanol no descartan la intoxicacin





Materiales y reactivos:

Soluciones:

Solucin de permanganato de potasio 0.2N
Sulfito o bisulfito de sodio anhidro.
cido cromotrpico.
cido sulfrico concentrado.
Sangre (muestra).
Etanol (absoluto).
Metanol (absoluto).
Agua destilada.
Acido pcrico.
Fenilhidracina clorhidrato al 1%.
Ferricianuro de potasio (1-10)
Resorcinol (1-200)
Cloruro frrico al 10%

Otros:

Tubos de centrifuga.
Pipetas de 1, 2, 5 ml.
Papel de filtro.
Embudo.
Agitador.
Probetas de 10 ml.




PROCEDIMIENTO:

Se coloca la muestra a analizar en un baln de destilacin, se agregan 20ml de
solucin saturada de acido pcrico, 20mL de agua, unas perlas de vidrio y se somete a
destilacin, recogiendo unos 10-15 mL del destilado en unos 2 mL de agua para evitar
prdidas por volatilizacin.

OXIDACION DEL DESTILADO: a la cantidad del destilado se aade 1 ml de acido
sulfrico al 25% y 4mL de KMnO4 0.2N agitar y dejar reposar por diez minutos, filtrar y
decolorar el exceso de permanganato con bisulfito de sodio.
Al filtrado se le realizan las siguientes pruebas para reconocimiento de formaldehido:

CH3OH + MnO4- + 2H + HCOH+ MnO2 - +2 H2O

REACCION CON ACIDO CROMOTROPICO:

En un tubo de ensayo que contenga 3 ml del filtrado se agregan unos mg de cido
cromo trpico (lo que tome con la punta de una esptula) se agita la solucin y se
agrega lentamente por las paredes del tubo inclinado para evitar que se mezclen los
lquidos 4 ml de cido sulfrico concentrado, la aparicin en la zona de contacto de un
anillo de color prpura indica la presencia de formaldehido en la muestra.
limite de deteccin 1 ppm.

REACCION DE HEHNER:

En un tubo de ensayo con 2ml del filtrado se aade 1ml de solucin de FeCl3 al 10%,
se agita y se aade 5ml de leche, luego cuidadosamente por las paredes del tubo
inclinado se aade 4ml de H2SO4 concentrado; un anillo de color violeta en la interface
indica la presencia de formaldehido.

CONFIRMACION:

A 2ml del filtrado contenidos en un tubo de ensayo aada unas gotas (8) se solucin
de resorcinol (1-200), cuidadosamente por las paredes del tubo aada 4ml de H2SO4
concentrado, dejar en reposo por tres minutos, un anillo de color rosa en la interface
indica la presencia de formaldehido. Limite de deteccin 3ppm.

REACCION CON EL REACTIVO DE SHIFF:

En un tubo de ensayo que contenga 1ml del reactivo de shiff se aaden algunas gotas
del filtrado, se deja en reposo, despus de un rato entre dos minutos y media hora
aparecer una coloracin prpura dependiendo de la cantidad de aldehdo presente.
A la solucin coloreada aada algunas gotas de HCL concentrado. La aparicin de un
color azulado indica la presencia de formaldehido, el acetaldehdo se decolora.


REACCION DE SCHRYVER:

A 2ml del filtrado aada 2ml de fenilhidracina clorhidrato al 1%, luego 1ml de solucin
recin preparada de ferricianuro de potasio (1-10) y unas gotas de HCL (c), la aparicin
de una coloracin rojo cereza indica la presencia del formaldehido.


Precauciones

Consultar la M.S.D.S para mayor informacin.

Tenga cuidado con:

cido Sulfrico (H2SO4): esta sustancia provoca quemaduras graves, es un
fuerte oxidante, ataca la ropa, madera y otros materiales carbonizndolos. En caso de
contacto con los ojos, lave inmediatamente y con abundante con agua y obtenga
atencin mdica inmediata. NUNCA le adicione agua a este producto. En caso de
accidente o malestar, acuda inmediatamente al mdico.

Permanganato de potasio: con esta sustancia existe peligro de fuego en
contacto con materias combustibles. Nocivo por ingestin. Muy txico para los
organismos acuticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio
ambiente acutico. Elimnese el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
Evtese su liberacin al medio ambiente.

Bisulfito de sodio: esta sustancia es nociva por ingestin. En contacto con cidos
libera gases txicos. Evtese el contacto con los ojos. En caso de ingestin, acdase
inmediatamente al mdico y mustrele la etiqueta o el envase.

Etanol: esta sustancia es fcilmente inflamable. Mantngase el recipiente bien
cerrado. Conservar alejado de toda llama o fuente de chispas. No fumar.



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