tcnicas de LABORATORIO 1 N 365 OCTUBRE 2011

Elga LabWater
Introduccin
a LC-MS es una tcnica extremadamente verstil, muy
sensible y selectiva, utilizada usualmente en labora-
torios farmacuticos, bioanalticos, ambientales, de
alimentos y bebidas, clnicos, forenses, de protemica, de me-
tabolmica y de desarrollo de frmacos.
Un buen rendimiento cromatogrco y la obtencin de datos es-
pectrales de masas de alta calidad dependen de la pureza del agua
1
.
El agua puede contener diversas impurezas capaces de inuir nega-
tivamente en el rendimiento cromatogrco por su impacto sobre
la resolucin, la integracin y las lneas basales, introduciendo picos
fantasma y alterando la selectividad de la fase estacionaria. Las par-
tculas presentes en el agua impura pueden daar el sistema LC y
originar bloqueos de columna que tienen como consecuencia un
aumento de los tiempos de parada, mientras que los contaminan-
tes inicos pueden hacer que resulte ms complicada la interpreta-
cin de los espectros de masas, al interferir con la identicacin y
cuanticacin espectral de analitos de bajo nivel.
Compuestos orgnicos
Los contaminantes orgnicos presentes en el agua pueden
provocar diversos problemas cromatogrcos. Si se hallan
presentes en la fase mvil, los compuestos orgnicos pueden
competir con el analito para jarse a los puntos activos de la
fase estacionaria. Esto reduce la cantidad de analito retenido
en la columna y en consecuencia eluido, con la correspondiente
reduccin de sensibilidad del mtodo. Si sobre la supercie de
la columna se acumulan compuestos orgnicos pueden limitar
el acceso de analitos y disolventes a puntos activos, teniendo
agua ultrapura
El agua ultrapura proporciona un rendimiento
excelente en el anlisis LC -MS
L
Resumen
La cromatografa lquida - espectrometra de masas (LC-MS) es una potente tcnica analtica que
combina las capacidades de separacin de la cromatografa lquida de alto rendimiento (HPLC) o la
cromatografa lquida de ultra-alto rendimiento (UHPLC) con el anlisis de masas por espectrome-
tra de masas. Se presta mucha atencin a que la calidad de los patrones, los disolventes orgnicos
y las fases mviles para HPLC sean de la mxima pureza, pero frecuentemente se da por sentada la
calidad del agua, que puede tener un impacto sobre el rendimiento cromatogrco y la calidad de
los datos espectrales de masas.
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agua ultrapura
como resultado problemas de transferencia de masa y prdida
de resolucin, mientras que cualquier acumulacin en la cabeza
de la columna puede causar picos fantasma. Adems, la acumu-
lacin de contaminantes orgnicos en la columna puede tener
como resultado un incremento de la contrapresin y, en ltimo
trmino, acortar la vida de la columna. En situaciones en que los
niveles de contaminacin orgnica sean muy elevados, es posi-
ble que los compuestos orgnicos se acumulen con el tiempo
y acten como una nueva fase estacionaria, provocando picos
con colas y cambios en los tiempos de retencin.
Bacterias
Las bacterias originan subproductos orgnicos, tales como
pirgenos, nucleasas o fosfatasa alcalina, que pueden provo-
car bloqueos de columna y problemas cromatogrcos como
los descritos.
Iones
Los contaminantes inicos pueden modicar la fuerza inica
de una solucin, lo que puede afectar a algunas separacio-
nes cromatogrcas. Los analitos pueden formar considerables
aductos con iones metlicos contaminantes, como Na
+
y K
+
, lo
que complicara la interpretacin del espectro de masas.
Partculas y coloides
Las partculas pueden causar daos en la bomba de HPLC y
tambin hacer que se bloqueen columnas. Este efecto es an
ms importante para los usuarios de UHPLC, ya que los tamaos
muy pequeos de las partculas y los menores dimetros de esas
columnas hacen que sean ms susceptibles a un bloqueo pre-
maturo que sus equivalentes de HPLC. Los coloides pueden ser
absorbidos irreversiblemente por la fase estacionaria, causando
un cambio en la eciencia de separacin de la columna.
Radiacin ultravioleta (UV)
Pasar el agua a travs de un rayo de luz ultravioleta descom-
pone los compuestos orgnicos. Una longitud de onda de
185 nm descompone y oxida efectivamente las molculas que
contienen carbono, produciendo fragmentos ionizados para
su posterior eliminacin por intercambio inico, mientras que
una longitud de onda de radiacin UV ms larga (254 nm)
altera la actividad de los enzimas bacterianos, impidiendo la
replicacin. Para maximizar la descomposicin de las molcu-
las orgnicas, Purelab Ultra Analytic y Purelab ex utilizan una
lmpara UV de espectro total.
Medios
Los cartuchos de tratamiento de Purelab Ultra Analytic y Pu-
relab ex contienen perlas sintticas de carbn activado, que
absorben una amplia variedad de compuestos orgnicos, y re-
sinas de intercambio inico de alta pureza para minimizar la
liberacin de impurezas.
Puricar el agua para LC-MS
La elevada sensibilidad de la LC-MS requiere el uso de agua ul-
trapura para la preparacin de todos los reactivos, tampones, fa-
Niveles de COT en Purelab Ultra Analytic y Purelab ex 3.
C
O
T

(
p
p
b
)
Tiempo (minutos)
Figura 1. Grco LCMS.
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agua ultrapura
ses mviles y todos los pretratamientos de muestras2. Para apli-
caciones LC-MS ultrasensibles que requieran niveles muy bajos
de carbono orgnico total (COT), es muy recomendable el agua
Purelab Ultra Analytic (Tipo 1+) de Elga, generalmente con una
resistividad de 18,2 Mcm, un valor COT muy bajo, inferior a
2 ppb (Figura 1) y unos niveles bacterianos inferiores a 0,1 UFC/
ml. Para todas las dems aplicaciones LC-MS, se recomienda el
equipo Purelab ex de Elga, con un COT inferior a 5 ppb.
Conclusin
Para todas las aplicaciones LC-MS se debe utilizar agua ultra-
pura con una elevada resistividad (> 18,2 Mcm), sin partcu-
las, compuestos orgnicos e inicos, para garantizar un buen
rendimiento cromatogrco y unos datos de espectro de ma-
sas de alta calidad.
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y soluciones para aplicaciones de ciencias de la vida de Elga
LabWater, visite www.elgalabwater.com
Referencias
1. Whitehead, P. Ultra-pure water for HPLC. Why is it needed and
how is it produced? Laboratory Solutions, December 1998.
2. ASTM Standard Guide for Bio-applications Grade Water D
5196-06.
www.elgalabwater.com
Stand en Expoquimia 2011: Pabelln 5, F 607