El quitosano / suero pelcula de protena de revestimiento
como activo para extender Ricotta queso vida til
Abstracto Se evalu la extensin de la vida til de queso Ricotta recubierto con una pelcula comestible protena quitosano / suero y se almacenaron en atmsfera modificada a 4 C. La pelcula de protena quitosano / suero de leche tena 35% y 21% menor permeabilidad al oxgeno y dixido de carbono, respectivamente, y permeabilidad al vapor de alrededor de tres veces ms altas de agua que la pelcula preparada con quitosano solo. Durante un perodo de almacenamiento de 30 das, no se observaron diferencias en el pH del control y quesos ricotta recubiertas. Mientras que la acidez del control aument linealmente durante las dos primeras semanas y se mantuvo constante durante el resto del perodo de almacenamiento, los valores correspondientes para el queso Ricotta revestido no cambiaron significativamente durante los primeros 21 das y alcanzaron el nivel de acidez (0,34 0,02 milliequivalent/100 g de muestra analizada) del control slo en el da 30. Los nmeros viables de bacterias de cido lctico y microorganismos mesfilos y psicrotrficas fueron significativamente menores ( p <0,05) en el queso recubierto de protena de quitosano / suero de leche, en comparacin con el control, en cada tiempo de almacenamiento. Nuestros hallazgos sugieren una utilidad potencial de los recubrimientos de protenas quitosano / suero para ampliar producto lcteo vida til fresca. Palabras clave Queso ricotta ; Periodo de validez ; Recubrimiento de pelcula comestible ; El quitosano ; La protena del suero Abreviaturas CWP , protena de quitosano / suero de leche ; MAP , envasado en atmsfera modificada ; WP , protena de suero de leche
1. Introduccin Queso Ricotta es un producto lcteo sin madurar, cremoso obtenido por coagulacin inducida por el calor de la protena de suero de leche (WP). Es altamente perecedero y tiene una vida til limitada, incluso en condiciones de refrigeracin, debido a cambios en la textura y el crecimiento de moho. Recientemente, el envasado en atmsfera modificada (MAP) ha sido propuesto para el envasado de Ricotta ( Del Nobile, Conte, Incoronato, y Panza, 2009 ). El estudio investig si un recubrimiento de pelcula comestible protena de quitosano / suero de leche (CWP) sera capaz de retrasar la aparicin de un sabor cido y el crecimiento microbiano de queso ricotta envasado en MAP. El quitosano [poli--(1-4)-2-amino-2-desoxi- D -glucosa] es un biopolmero hidroflico obtenido por alcalina de N-desacetilacin de la quitina ( Kurita, 2001 ) que posee de amplio espectro propiedades antimicrobianas contra los hongos , bacterias y virus ( Coma et al., 2002 , Liu et al., 2001 , Rabea et al., 2003 y Rhoades y el rodillo, 2000 ). Aprobacin del quitosano como material en contacto con alimentos en Europa est pendiente ( Fernndez, Cava, Ocio, y Lagaron, 2008 ). El quitosano exhibe su antimicrobiana y otras propiedades deseables, tales como la disminucin de las prdidas por transpiracin ( El Ghaouth et al., 1991 y Jiang y Li, 2001 ) y el retraso en la maduracin de las frutas y hortalizas ( El Ghaouth et al., 1992 y Jiang y Li, 2001), en pelculas de quitosano-slo ( Butler et al., 1996 , Chen y Hwa, 1996 , Kittur et al., 1998 y Kumar et al., 2000 ) y en combinacin con otros polmeros tales como la pectina ( Hoagland y Parris, 1996 ), metilcelulosa ( Chen, Yeh, y Chiang, 1996 ) o protenas ( Jia et al., 2009 y Sztuka y Kolodziejska, 2008 ). Recientemente, se inform de la preparacin de ambos quitosano / WP (CWP) ( Di Pierro, Chico, Villalonga, Mariniello, Damiao, Masi et al., 2006 ) y las pelculas de quitosano / ovoalbmina ( Di Pierro et al., 2007 ). Estas pelculas mostraron buenas caractersticas visuales, y es probable comestible ya que son fcilmente degradados por las proteasas de serina. En el presente estudio, el queso ricotta fresco fue recubierto con pelcula CWP y se almacena por debajo de 40% de CO 2 / 60% N 2 condiciones MAP para reducir el crecimiento microbiano ( Dermiki, Ntzimani, Badeka, Savvaidis, y Kontominas, 2008 ). Microbiolgicas y fisicoqumicas Queso cambios a lo largo de un perodo de 30 das de almacenamiento fueron monitoreados para determinar si las pelculas podran conducir a una extensin de la vida til. 2. Materiales y mtodos 2.1. Materiales El quitosano, preparado como se describe por Baxter, Dillon, Taylor y Roberts (1992) con un grado de N-acetilacin 9,0%, fue un regalo del profesor RAA Muzzarelli (Universidad de Ancona, Italia). Suero seco-Spray de leche bovina (producto no. W1500, lote n. 81K0279), que contiene 11% w / w protenas (biuret) y 65% w / w de lactosa, se adquiri de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO ). Agua de peptona tamponada (BPW), Plate Count Agar (PCA) y "De Man Rogosa Coeficiente de Agar" (MRS) los medios de comunicacin para los anlisis microbiolgicos fueron de Merck (Darmstadt, Alemania). Todos los dems productos qumicos fueron de grado analtico. 2.2. Preparacin de la solucin de formacin de pelcula CWP Una pelcula CWP solucin formadora, que contiene 0,8% w / v de quitosano y 2.4% w / v de suero de leche liofilizada (11% WP), se prepar mediante la mezcla de quitosano disuelto en 0,1 N HCl y suero de leche liofilizado disuelto en agua destilada bajo agitacin continua . El pH de la disolucin de quitosano-suero de leche se ajust a pH 5,0 con HCl 0,1 N, y la solucin se esteriliz-filtro a travs de un sistema de filtracin Sterilcup (0,45 micras cortado, Millipore, Bedford, MA, EE.UU.). 2.3. Formacin de pelcula y caracterizacin Se prepararon pelculas por colada 32,5 ml de cualquiera de quitosano (0,8% w / v) o CWP (0,8% w / v de quitosano y 2.4% w / v de suero de leche liofilizada) soluciones en placas de Petri de poliestireno (60 15 mm). Las soluciones fueron previamente desaireado bajo vaco con el fin de evitar que pequeas burbujas que podran formar poros en la pelcula terminada, y despus se transfirieron en placas de Petri que se sec a 50 C durante la noche en virtud de la circulacin de aire. Las pelculas fueron peladas de las placas de Petri y se almacenaron a 20 C en un desecador (50% de humedad relativa). Espesor de la pelcula se midi utilizando un modelo HO62 micrmetro con una sensibilidad de 2 micras (Metrocontrol Srl, Casoria (NA), Italia). Pelcula vapor de agua permeabilidad (WVP) se evalu mediante la prueba gravimtrica ( Di Pierro et al., 2010 ) de acuerdo con el procedimiento ASTM E96 ( ASTM, 1993 ). De oxgeno y dixido de carbono propiedades de barrera se examinaron a 25 C y una humedad relativa del 50% mediante el uso de un oxgeno y dixido de carbono Multiperm Analizador (SRL ExtraSolution, Pisa, Italia). 2.4. Embalaje de queso Ricotta Queso Ricotta se obtuvo de un fabricante local de productos lcteos (Casa Madaio srl, Castelcivita, Salerno, Italia), tanto en junio como en septiembre de 2009 y tres lotes de produccin diferentes se sometieron a dos experimentos de vida til diferentes. Una serie de muestras de queso Ricotta, suministrados a 4 h de su produccin en un polipropileno termoformado colador tradicionales (peso neto de aproximadamente 100 g), se sumergi 30 s en la solucin estril de formacin de pelcula CWP. El exceso de solucin se dej escurrir de la superficie de las muestras durante 30 s antes de que se colocaron en bandejas de plstico y se envasa en atmsfera modificada. Ambos de cruce y sumergible (control) quesos fueron colocados en bandejas de plstico y se envasa en atmsfera modificada (40% de CO 2 / 60% N 2 mezcla), como se describe por Dermiki et al. ( Dermiki, Ntzirnani, Badeka, Savvaidis y Kontominas, 2008 ), mediante el uso de un sistema operativo 600 INOX VGP (Ormad macchine snc, Terlizzi, Bari, Italia) y finalmente se almacena a 4 0,5 C.Despus de 7, 14, 21 y 30 das de almacenamiento, las muestras duplicadas (5-10 g), tanto de CWP-estucado y no estucado (control) quesos Ricotta fueron tomadas con corcho-barrenadores pre-esterilizados. 2.5. medicin de pH Las muestras de queso ricotta (10 g cada uno) se homogeneizaron, a la velocidad mxima durante 5 minutos, en 100 ml de agua destilada con un homogeneizador Ultra-Turrax T8 (IKA-Werke GmbH, Staufen, Alemania). Despus de agitar durante 15 min, los homogeneizados se centrifugaron a 3.000 g durante 10 min y los sobrenadantes obtenidos se filtraron a travs tanto de la fibra de algodn y el filtro de papel. La medicin de pH se llev a cabo utilizando un medidor de pH digital, modelo 211 (instrumentos de Hanna, PBI Internacional), de acuerdo con los procedimientos de la AOAC ( AOAC, 1990 ). 2.6. La acidez titulable Se aadieron muestras de 10 g de queso ricotta a 50 ml de agua destilada y se homogeneiz durante 5 min a la mxima velocidad con un homogeneizador Ultra-Turrax T8. Los homogeneizados se calentaron primero, bajo agitacin, hasta que se alcanz una temperatura de 40 C y despus se diluy hasta el volumen final de 150 ml con agua destilada. Despus de centrifugacin a 3000 g durante 10 minutos, los sobrenadantes se filtraron a travs tanto de la fibra de algodn y el filtro de papel. Entonces, se aadieron 5 gotas de fenolftalena (1% en etanol) a 25 ml de sobrenadante filtrado y la acidez valorable (TA) se determin mediante la adicin de NaOH 0,1 N hasta que la solucin se volvi de color rosa. El TA, expresado como milliequivalent/100 g, se calcul de la siguiente manera:
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donde un y b corresponden a la concentracin y el volumen de la solucin de reactivo de valoracin, respectivamente, y C se refiere a los gramos de muestra analizada. 2.7. Anlisis microbiolgico Las muestras de queso ricotta (5 g cada una) se transfirieron aspticamente en tubos Falcon estriles de plstico y se homogeneizaron en 45 ml de 0,1% (w / v) de agua de peptona tamponada estril durante 5 min, a temperatura ambiente y a la velocidad mxima, por un Ultra-Turrax homogeneizador T8. El volumen se ajust a 50 ml y, a continuacin diluciones decimales de serie, preparados con 0,1% (w / v) de agua de peptona tamponada estril, se inocularon por duplicado en medio de crecimiento para la estimacin de recuentos de placas aerbicas (APC). Los anlisis microbiolgicos se llevaron a cabo de acuerdo con el mtodo de la placa verter ( APHA, 1992 ). Ambos microorganismos mesfilos y psicrotrficas fueron enumerados en placas de PCA que se incubaron por separado en diferentes condiciones experimentales (a 30 C durante 48 h para la microflora mesfila contar; a 12 C durante 4-5 das para la determinacin psicrotrfico). Las bacterias cido lcticas se determinaron en placas de MRS de acuerdo con el mtodo de verter la placa, con superposicin, despus de incubacin a 30 C durante 2-3 das. 2.8. La evaluacin sensorial Una evaluacin sensorial simple, estructurado fue realizada por siete individuos entrenados cada vez que las muestras fueron sometidas a anlisis microbiolgicos. Color, sabor, olor y textura fueron los parmetros seleccionados. Los catadores evaluaron los diferentes parmetros mediante el uso de una escala hedonista de 0 a 4 (0 = inaceptable; 1 = deficiente, 2 = regular, 3 = bueno, 4 = muy bueno). 2.9. El anlisis estadstico Software JMP 5.0 (SAS Campus Drive, edificio S, Cary, NC, EE.UU.) se utiliz para todos los clculos estadsticos. Los datos fueron sometidos a anlisis de varianza y las diferencias estadsticas en un momento dado de muestreo se determinaron mediante la prueba de Tukey- Kramer HSD. Las diferencias se consideraron significativas a p <0,05. 3. Resultados y discusin La hiptesis de que la pelcula CWP sera til como material de recubrimiento para el queso ricotta, ya que podra combinar la actividad antimicrobiana de quitosano con oxgeno deseable, dixido de carbono y permeabilidad al vapor de agua ( Tabla 1 ). El recubrimiento permitira el movimiento del vapor de agua a travs de la pelcula, evitando as la condensacin de agua y, como consecuencia, el deterioro microbiano.Los valores de pH de control y quesos ricotta recubiertas- CWP durante el almacenamiento se muestran enla figura. 1 . Los valores de pH disminuyeron, despus de 7 das de almacenamiento probablemente debido a la sntesis de cido lctico por Lactobacillus spp. ( Dermiki et al., 2008 y Whitley et al., 2000 ) y aminocidos cidos y cidos grasos libre de formacin debido a la proteolisis y liplisis. Adems, la disolucin de algunas de las emisiones de CO 2 en la atmsfera modificada (aproximadamente un 15% durante los primeros 5 das de almacenamiento) puede haber contribuido a la disminucin del pH ( Daniels et al., 1985 , Farber, 1991 , Gonzlez-Fandos et al ., 2000 y Olarte et al., 2002 ), pero tambin podra haber proporcionado alguna efecto amortiguador ( Salaun, Mietton, y Gaucheron, 2005 ). Los valores de pH se mantuvieron relativamente constantes hasta el da 30 ( . Fig. 1 ). Tabla 1. Propiedades de barrera de las pelculas obtenidas por colada quitosano o quitosano solucin de protena / suero. Pelcula Espesor (micras) Permeabilidad (g mm m -2 da -2 kPa -2 )
O 2 CO 2 El vapor de agua El quitosano 55,3 0,4 32.8 0.7 22,5 0,9 0,4 0,3 Protena de quitosano / suero de leche 61,5 0,3 21.3 0.9 17,7 1,2 1,3 0,2 Los resultados se expresan como media de diez muestras SD. Ms detalles experimentales se dan en el texto. Opciones de la tabla
La figura. 1. Efecto de recubrimiento CWP sobre la evolucin del pH durante el almacenamiento queso ricotta a 4 C bajo atmsfera modificada (40% de CO 2 / 60% N 2 ). , las muestras no recubiertas (de control); , muestras CWP recubierto-. Los datos son las medias SD de dos experimentos diferentes se ejecutan en diferentes ocasiones (junio y septiembre, verMateriales y mtodos ). Opciones Figura La AT mostr una tendencia diferente en CWP-revestida que en el queso sin recubrimiento ( . Fig. 2 ). En la muestra de control, que aument de forma lineal durante las dos primeras semanas y luego se mantuvo estable, mientras que no cambi de forma significativa en el queso recubierto de CWP hasta el da 21 y despus alcanza el mismo nivel que mide para la muestra de control en el da 30. El aumento en TA fue probablemente causada por la produccin de cido orgnico principalmente por bacterias productoras de cido lctico que aumentaron durante el almacenamiento ( . Fig. 3 -C). Los quesos con recubrimiento de CWP mostraron slo un ligero aumento en las bacterias del cido lctico viables durante las tres primeras semanas lo que podra explicar los valores constantes TA durante los primeros 21 das ( . Fig. 2 ). Como el nmero de bacterias de cido lctico aument ( . Fig. 3 -C), el TA tambin aument ( . Fig. 2 ). En ambas muestras TA mxima se observ cuando las bacterias del cido lctico se encontraban en el rango de 5-6 log ufc / g y esto ocurri en el da 14 para el control y en el da 30 para el queso recubierto de CWP.
La figura. 2. Efecto de recubrimiento CWP en la acidez titulable (AT) durante Ricotta queso de almacenamiento a 4 C bajo atmsfera modificada (40% de CO 2 / 60% N 2 ). , las muestras no recubiertas (de control); , muestras CWP recubierto-. Los datos son las medias SD de dos experimentos diferentes se ejecutan en diferentes ocasiones (junio y septiembre, verMateriales y mtodos ). Opciones Figura
La figura. 3. Efecto de recubrimiento CWP en el desarrollo de mesfilos (A), psicrotrfico (B) y cido lctico (C) las bacterias durante el almacenamiento queso ricotta a 4 C bajo atmsfera modificada (40% de CO 2 / 60% N 2 ). , las muestras no recubiertas (de control); , muestras CWP recubierto-. Los datos son las medias SD de dos experimentos diferentes se ejecutan en diferentes ocasiones (junio y septiembre, ver Materiales y mtodos ). Opciones Figura Los nmeros de viables de microorganismos mesfilos y psicrotrficas fueron significativamente menores (p <0,05) en CWP-revestido que en las muestras de control ( . Fig. 3 -A y-B). De hecho, el lmite microbiolgico de aceptabilidad, 7 log ufc / g ( ICMSF, 1986 ), se alcanz en muestras de control dentro de 7 das para las bacterias mesfilas ( . Fig. 3 -A), entre los das 7 y 14 para psicrtrofos ( Fig. 3 -B), y entre los das 14 y 21 para las bacterias de cido lctico ( . Fig. 3 -C). En contraste, el lmite nunca se alcanz en quesos ricotta CWP-revestido. De este modo, la pelcula CWP podra ser un recubrimiento eficaz ampliar Ricotta queso vida til. No hay diferencias en la apariencia visual, textura, sabor y olor entre sin revestir y se detectaron muestras de queso ricotta recubiertos con pelcula CWP durante la evaluacin sensorial (datos no mostrados).Adems, el queso ricotta con recubrimiento de CWP mantiene su textura mejor que el queso control. 4. Conclusiones Recubrimiento de superficie de Ricotta con una pelcula comestible CWP reduce el crecimiento de contaminantes microbianos y se extendi el tiempo de conservacin del producto envasado bajo atmsfera modificada. El recubrimiento retrasa el desarrollo de la acidez deseada, mantiene mejor la textura y no pareca modificar las caractersticas sensoriales. Es posible que los beneficios derivados de los biopolmeros tambin se pueden realizar con otros productos lcteos. Agradecimientos Los autores desean agradecer a la seora Maria Fenderico por su asistencia tcnica en un crack. Esta investigacin fue apoyada por una beca de RP del POR 2000-2006 Regione Campania "Asse prioritario di riferimento 3 - Recursos Umane-Misura 3.16" Promozione della Ricerca e del trasferimento Tecnologico nei settori connessi alla crescita ed Allo Sviluppo sostenibile del Sistema Campania ". Referencias 1. o AOAC, 1990 o AOAC o Mtodos de anlisis oficiales o (Ed. 15a.) Asociacin de Qumicos Analticos Oficiales, Washington, DC, EE.UU. (1990) o 2. o APHA, 1992 o APHA o Compendio de mtodos de anlisis microbiolgico de los alimentos o American Public Health Association, Washington (1992) o 3. o ASTM, 1993 o ASTM o Mtodos de prueba estndar para la transmisin de vapor de agua de los materiales.E96-93 o Libro anual de las normas ASTM, Sociedad Americana de Pruebas y Materiales, Philadelphia, PA (1993), pp 701-708 o 4. o Baxter et al., 1992 o A. Baxter, M. 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