ESPECTROFOTOMETRIA

Tecnologa Mdica
INTRODUCCIN
Espectrofotometra
Es la medida de la cantidad de energa
radiante absorbida por las molculas a
longitudes de onda especficas.
La espectrofotometra es el mtodo de
anlisis ptico ms usado en las
investigaciones biolgicas.
Tipos de Espectrofotometra
La espectrofotometra de absorcin de infrarrojos
La espectrofotometra por resonancia magntica
nuclear (RMN)
La espectrofotometra de fluorescencia.
La espectrofotometra de emisin atmica
La espectrofotometra absorcin atmica
La espectrofotometra de masas
La espectrofotometra de fluorescencia de rayos X
Espectrofotmetro
El espectrofotmetro es un instrumento usado en la
fsica ptica que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que
contiene una cantidad desconocida de soluto, y una
que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia en funcin de la longitud de onda
Los componentes esenciales de un
espectrofotmetro son :
Una fuente estable de energa radiante
Un sistema de lentes, espejos y aberturas (Slits ), que definan,
colimen (hagan
paralelo) y enfoquen el haz de radiacin y un monocromador que
separe la radiacin de bandas estrechas de longitud de onda.
Un componente transparente a la radiacin que contenga la
muestra
Un detector de radiacin o transductor que recibe la seal de
radiacin electromagntica y la convierte en una seal elctrica
de magnitud proporcional a la intensidad de la radiacin recibida.
Un sistema amplificador que produzca o genere una seal
elctrica mucho mayor a la seal recibida
Un sistema de lectura tal como: Una escala de aguja, un
registrador, un sistema de dgitos o una computadora, que
transforme la seal elctrica en una seal que el operador pueda
interpretar.
Espectrofotmetro
Esquema de un espectrofotmetro
de un solo haz y de doble haz
CELDAS
Diagrama de funcionamiento del
espectrofotmetro de un solo haz.
Mtodos Espectroscpicos
Los mtodos espectroscpicos de anlisis se basan
en la medida de la radiacin electromagntica
emitida o absorbida por la materia.
Los mtodos de emisin utilizan la radiacin
emitida cuando un soluto es excitado por energa
trmica, elctrica, o energa radiante.
Mtodos Espectroscpicos
Los mtodos de absorcin, por el contrario, estn
basados en la disminucin de la potencia (o
atenuacin) de la radiacin electromagntica como
consecuencia de la absorcin que se produce en su
interaccin con el soluto.
Los mtodos de absorcin poseen la considerable
ventaja de producir poca o ninguna alteracin en el
sistema estudiado.
Mtodos Espectroscpicos
Los mtodos espectroscpicos se consideran como
una de las mejores y ms utilizadas tcnicas
instrumentales a disposicin del cientfico, para la
adquisicin de informacin tanto cuantitativa como
cualitativa.
Los mtodos espectroscpicos se clasifican segn la
regin del espectro electromagntico que est
implicada; siendo las ms importantes las regiones de:
rayos X,
ultravioleta,
visible,
infrarroja,
microondas
Radiofrecuencia.
El Espectro Electromagntico
Color de la sustancia
El color de las sustancias se debe a que stas
absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca
que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros
ojos aquellas longitudes de onda no absorbida
COLORES DE LA LUZ VISIBLE
Leyes Fundamentales de la Absorcin
Se denomina absorcin al proceso por el cual una
especie, en un medio transparente, capta
selectivamente ciertas frecuencias de la radiacin
electromagntica.
Leyes Fundamentales de la Absorcin
Ley de Lambert: cuando un haz de luz atraviesa
un medio absorbente de concentracin constante, la
cantidad de energa luminosa absorbida por el
medio vara en forma directamente proporcional a
la distancia recorrida.
Energa absorbida b
Leyes Fundamentales de la Absorcin
Ley de Beer: cuando un haz de luz atraviesa un
medio absorbente de espesor constante, la cantidad
de energa luminosa absorbida por el medio varia en
forma directamente proporcional a la concentracin
del absorbente en el medio
Energa absorbida [C]
Transmitancia
es la fraccin de radiacin insidente transmitida
por la solucin, por lo general la transmitancia se
expresa en porcentaje. Esta definida por la
ecuacin:
T= P / P0 T= 10-A %T= T * 100
Absorbancia
Es la medida de la energa radiante que es
absorbida por un material o una superficie como
funcin de la longitud de onda de dicha energa.
A diferencia de la transmitancia, la absorbancia
de una solucin que aumenta la atenuacin del
haz esta definida por la ecuacin:
A= Log P0 / P A= Log 1/T
Absorvatividad y Absorvatividad Molar
la absorbancia es directamente proporcional a la
trayectoria de la radiacin a travs de la solucin
y a la concentracin de la especie que produce la
absorbancia. Esta definida por la ecuacin:
A= abC ( g/lt ) a= A/bC
Donde:
a: constante de proporcionalidad llamada
absorvatividad. Cuando se expresa la concentracin
en moles / litro y la trayectoria a travs de la celda
en cm., la absorvatividad se denomina
absorvatividad molar y se representa con el smbolo
. En consecuencia cuando b se expresa en
cm. y C en moles/ litro.
A= bC (mol/lt) = A/ bC C= A/ b
Curva Estandar
0
1
2
3
4
5
6
7
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Concnetracin (moles/lt)
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
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