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UNIVERSIDAD DE PUEBLA

ESCUELA SUPERIOR DE
CIENCIAS QUMICAS

MANUAL DE LABORATORIO

MICOLOGA

NOMBRE DEL ALUMNO:


GRUPO:

MICOLOGA

DATOS PERSONALES DEL ALUMNO

NOMBRE____________________________________________________
GRADO____________

GRUPO__________

SECCIN_____________

ESCUELA____________________________________________________
PROFESOR___________________________________________________

EVALUACIN
No.
1

NOMBRE DE LA PRCTICA
Morfologa de los hongos

Dermatofitos

Microcultivo

Tubo germinativo en suero

Pruebas de identificacin de hongos


levaduriformes
por
asimilacin
de
carbohidratos (Auxanograma de Beijerinck)

Efecto de antifngicos sobre levaduras

CALIFICACIN

FIRMA

CALIFICACIN FINAL___________________

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MICOLOGA

NDICE

Pg.
I.

Reglamento de Laboratorio

II

Normas de seguridad

III

Prctica No 1: Morfologa de los hongos

10

IV

Prctica No 2: Dermatofitos

13

V.

Prctica No 3: Microcultivo

16

VI

Prctica No 4: Tubo germinativo en suero

19

VI.

Prctica No 5: Pruebas de identificacin de hongos levaduriformes


por asimilacin de carbohidratos (Auxanograma de Beijerinck)

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VII.

Prctica No 6: Efecto de antifngicos sobre levaduras

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MICOLOGA

REGLAMENTO DE LABORATORIO

CAPTULO I
GENERALIDADES
Artculo 1.-El presente reglamento es de observancia general para los
alumnos de UNIPUEBLA que contemplen en su plan de estudios alguna
materia de carcter experimental

CAPTULO II
DE LOS DERECHOS
Artculo 2.-Los alumnos tienen derecho a recibir el nmero de prcticas
especificadas al inicio de cada curso.
Artculo 3.
-Igualmente el alumno tiene derecho a:
1. Recibir una explicacin terica previa a cada sesin, donde se orienta al
estudiante sobre cmo desarrollar el trabajo experimental.
2. Que se le proporcione el material y reactivos analticos especificados en el
formato que contiene las instrucciones y procedimientos para el desarrollo
de la prctica.
3. Ser orientado por parte del profesor durante el proceso de la prctica.
4. Solicitar asesora posterior a la prctica, para elaborar adecuadamente su
reporte.

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MICOLOGA

CAPTULO III
DE LAS OBLIGACIONES
Artculo 4.-Los alumnos que permanezcan en el laboratorio debern portar
bata. No se permitir la estancia en el laboratorio a personas que no
cumplan con este requisito.
Artculo 5.-Queda prohibido el ingreso de alumnos de UNIPUEBLA que no
tengan motivos acadmicos para permanecer durante el desarrollo
experimental.
Artculo 6.-Se prohbe estrictamente a los alumnos introducir al rea de
laboratorio personas ajenas a UNIPUEBLA.
Artculo 7.-Se considera faltante al alumno que a los diez minutos de iniciada
la prctica no est presente, no permanezca en el laboratorio, ni efecte
la prctica.
Artculo 8.-El alumno deber tener el 100% de asistencia para que tenga
derecho a acreditar el laboratorio, con la excepcin de que la falta se
justifique y sea validada por el personal acadmico.
Artculo 9.-Para abandonar temporalmente el laboratorio durante el desarrollo
de la prctica, deber solicitarse permiso al profesor responsable de la
misma.
Artculo 10.-En la primera prctica que se efecte, se formarn los grupos de
trabajo, los cuales sern fijos durante el curso. Se modificarn
temporalmente slo cuando el profesor lo considere conveniente en
funcin de un mejor desempeo del trabajo experimental.
Artculo 11.-La eleccin de los integrantes de los grupos de trabajo quedar a
discrecin de los alumnos, y una vez formados dichos grupos, no se
permitir cambio alguno.
Artculo 12.-Los alumnos slo podrn adquirir material y reactivos de
laboratorio mediante un vale que especifique con claridad sus
caractersticas y propiedades, estando acompaado por el nombre y
firma de un responsable del equipo.
Artculo 13.-Los alumnos llevarn al laboratorio el material y sustancias que el
profesor le solicite, mismos que cumplirn con las caractersticas de no
ser muy especializados y costosos.
Artculo 14.-Por razones de seguridad de los propios alumnos, queda
terminantemente prohibido ingerir alimentos en el laboratorio.

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MICOLOGA

Artculo 15.-Al trmino de la prctica, los alumnos debern entregar el material


de laboratorio con absoluta limpieza.
Artculo 16.-Al abandonar los alumnos el laboratorio, los lugares de trabajo
debern quedar perfectamente limpios.

CAPTULO IV
DE LAS SANCIONES
Artculo 17.-Los alumnos sern responsables del material de laboratorio que
se les facilite, mismo que debern de entregar en buenas condiciones
cuando finalice la sesin de trabajo.
A) Los alumnos que no cumplan con el tiempo especificado para la devolucin
del material sern suspendidos en las prcticas siguientes
B) En el caso de que el material sea daado, los alumnos debern reponerlo
en la siguiente sesin. En caso de no hacerlo sern suspendidos en las
prcticas siguientes
Artculo 18.-Se expulsar del laboratorio a los alumnos que no guarden el
comportamiento debido o hagan mal uso de los reactivos y material de
laboratorio que provoque algn accidente en contra de los asistentes a
la prctica.

CAPTULO V
DE LA EVALUACIN
Artculo 19.-La evaluacin del laboratorio ser determinada al inicio del curso,
y quedar a criterio del profesor, con la aclaracin de que para efecto de
calificacin final del curso, el no aprobar el laboratorio quita derecho a la
calificacin terica.

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MICOLOGA

NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Los usuarios de laboratorios pueden sufrir quemaduras o intoxicaciones por


contacto, inhalacin o ingestin de reactivos qumicos. Se recomienda que al
transportar, almacenar o utilizar un reactivo, se preste atencin a las
recomendaciones de seguridad.

RECOMENDACIONES GENERALES
Revisar que las llaves de agua y gas estn bien cerradas al finalizar cada
prctica.
Abstenerse de fumar, jugar e ingerir alimentos en el laboratorio.
Utilizar bata, guantes y, cuando sea necesario, lentes de proteccin lateral.
Mantener limpios el rea de trabajo, los aparatos y el equipo.
Emplear los reactivos slo despus de cerciorarse de que son los
requeridos.
Poner atencin a las indicaciones de riesgos impresas en las etiquetas.
No utilizar reactivos que carezcan de etiquetas.
No probar las sustancias ni aspirar de manera directa los vapores que
desprenden.
Tapar de inmediato los frascos de reactivos.
Al preparar una solucin etiquetar de inmediato el frasco, anotando la fecha
de preparacin, y si se conoce, el tiempo probable de caducidad.
Manejar con cuidado las sustancias inflamables, corrosivas o txicas, como
el cido sulfrico, los perxidos orgnicos y los xidos de nitrgeno. Estos
ltimos se generan cuando el cido ntrico se pone en contacto con algunos
metales como el cobre o con materiales orgnicos como el algodn y el
papel.

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MICOLOGA

De ser posible, utilizar la campana de extraccin al trabajar con sustancias


que desprenden vapores como el ter, acetona, benceno, cloroformo, cido
sulfhdrico y amonaco.
Utilizar una esptula al manipular las sustancias slidas y proteger el vidrio
de la balanza con un vidrio de reloj o pesar sobre un papel previamente
tarado.
Para medir lquidos peligrosos se deber usar una probeta, y si se requiere
mayor precisin, colocar un volumen suficiente del lquido dentro de un
recipiente estrecho (probeta) y llenar la probeta por inmersin o utilizar una
perilla de succin o una propipeta.
Utilizar una pipeta diferente para medir cada lquido y enjuagarlas si ya no
se van a utilizar.
Al utilizar una solucin de un cido o una base fuerte, en especial cuando
se trate del cido sulfrico, verter siempre el cido sobre el agua y nunca al
revs, ya que el calor que se genera, puede hacer hervir el agua, con la
consiguiente salpicadura de cido a la cara del operador.
Manejar con cuidado la cristalera. Es preciso recordar que el material de
medicin volumtrica, como cristalizadores, probetas, pipetas, buretas y
matraces aforados, no deben calentarse directamente sobre la parrilla o el
mechero.
Para insertar un tubo de vidrio o una conexin en un tapn, lubrquelo con
unas gotas de agua y haga girar el tubo como si lo estuviera atornillando
(proteja sus manos con un trapo).
Deje correr el agua en abundancia cuando deseche, en vertederos y lneas
de drenaje, materiales no corrosivos. Neutralice los cidos y las bases
fuertes antes de desecharlos, y vace lentamente el material que desea
eliminar. Si va a desechar varias sustancias, hgalo de una en una, dejando
correr el agua para espaciarlas y evitar que reaccionen entre s.
Depositar los residuos slidos en los botes de basura, excepto aquellos que
requieran un tratamiento previo.

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MICOLOGA

Leer cuidadosamente y razonar las instrucciones de cada experimento


antes de realizarlo en el laboratorio. Actuar una vez que se sabe lo que se
tiene que hacer.
Prestar atencin a las indicaciones del profesor y a las del manual del
laboratorio, respecto al cuidado y manejo de los reactivos empleados en
cada uno de los experimentos.
Confirmar la disponibilidad de agua, luz y gas en la mesa, antes de empezar
a trabajar. Asegrese de que las llaves del agua y gas estn cerradas al
desmontar el equipo.
Cercirese de que cuenta con los reactivos requeridos y poner atencin a
las indicaciones de riesgo que aparecen en la etiqueta.
No utilizar reactivos que carezcan de etiqueta.
Medir cuidadosamente los reactivos lquidos, conforme a las condiciones
que especifique la tcnica.
Al estar recogiendo un gas por desplazamiento de un lquido, mantener una
presin positiva en el generador para evitar que el lquido se sifonee.
Al calentar lquidos en tubos de ensayo, no dirigir la boca del tubo hacia
ninguna persona, ya que el lquido puede hervir violentamente y ser
proyectado a gran distancia.
No utilice flamas abiertas (mecheros) cuando algn equipo en el laboratorio
este trabajando con materiales inflamables como ter, benceno, acetona o
alcohol.
Si NO EST SEGURO del manejo de un instrumento, solicite el apoyo del
profesor.
Extinguir todas las flamas cercanas y retirar rpidamente los materiales
inflamables, en caso de que ocurra un incendio. Si este es pequeo puede
sofocarse con una toalla hmeda; si el fuego se extiende utilice un extintor.
Es una regla de laboratorio que CUALQUIER ACCIDENTE, por trivial que
parezca, debe comunicarse de inmediato al profesor. Si el accidente no es
grave, lave con abundante agua fra la zona afectada y utilice el botiqun del
laboratorio, si es delicado, se debe acudir al servicio mdico.

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MICOLOGA

PRCTICA No. 1
MORFOLOGA DE LOS HONGOS
OBJETIVO
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1.-Sembrar y teir hongos.
2.- Identificar las diferentes estructuras de un hongo.
INTRODUCCIN
Las micosis o enfermedades micticas son causadas por hongos. Estos
microorganismos relativamente grandes, parecidos a las plantas y que no
poseen clorofila comprenden las variedades generalmente llamadas Levaduras
y Mohos y un grupo numeroso llamado Fungi Imperfecti (hongos imperfectos).
La clasificacin de los hongos se basa principalmente en la morfologa de estos
microorganismos; cuando se desarrollan fuera del organismo se observa una
red de hilos ramificados llamados hifas que crecen formando una masa
enmaraada (micelio). Generalmente se encuentran esporas o corpsculos
reproductores.

MATERIAL
Muestra problema (hongos)
Agar de papa dextrosa
Hojas de bistur
Pinzas
Portaobjetos y cubreobjetos
Caja de petri con puente en forma de tringulo
PROCEDIMIENTO
1.- En una caja de petri con puente en forma de tringulo se le coloca el
portaobjetos, y en este mismo se deposita un cuadrito del agar de papa
dextrosa con el respectivo cubreobjetos.
2 Con un asa con punta en forma de L se toma una parte del hongo y se
deposita picando los cuatro lados del agar.
3.- Se incuba a 37C por 4 das.
4.- Se quita el agar que se encuentra en el portaobjetos y se adicionar una
gota de azul de metileno o azul de lactofenol y se tapa con el mismo
cubreobjetos.
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MICOLOGA

5.- Se sella con barniz transparente de uas. Dejar secar.


6.-Observe al microscopio, identifique las estructuras y realice un dibujo de lo
encontrado.

PRECAUCIN
Trabajar siempre con el mechero encendido.
CUESTIONARIO
1.- Cul es la diferencia entre un moho y una levadura?
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2.- A qu se llama dimorfismo de los hongos?
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3.- Describir las caractersticas morfolgicas de los hongos filamentosos.
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4.- Describir las caractersticas morfolgicas de los hongos levaduriformes.


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MICOLOGA

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5.- Nombrar y describir 2 tipos de esporas sexuales y 2 asexuales de los
hongos.
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6.- Hacer un dibujo lo ms exacto posible de tus hallazgos al microscpico.
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MICOLOGA

PRCTICA No 2.
DERMATOFITOS
OBJETIVOS:
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1.-Identificar el desarrollo de los dermatofitos en el laboratorio, y que observe
las estructuras que les caracterizan.
INTRODUCCIN
El tipo de infeccin por hongos ms comn en el hombre es la dermatofitosis,
infeccin superficial de la epidermis y anexo epidrmicos queratinizados, pelo y
uas. Los agentes responsables de las mismas son microorganismos cuyas
numerosas variedades estn ntimamente relacionadas y se ha demostrado
que varios tienen una etapa sexual (y por tanto un estado perfecto).
La diferenciacin primaria que hay en los tres gneros importantes, son:
Trichophyton, Microsporum y Epidermophyton, es morfolgica, basada en el
carcter de los conidios y estructuras accesorias.
En medios adecuados estos microorganismos crecen lentamente, en forma de
colonias densas, cubiertas de hifas areas, lo que les da aspecto felpudo.

MATERIAL
Muestras de crecimiento de dermatofitos de piel, pelo o uas.
Agar
Mechero bunsen
Asa bacteriolgica
Pinzas de diseccin
Colorante azul de metileno

PROCEDIMIENTO
1.- Con abatelenguas o la punta de unas tijeras descame respectivamente
la piel o la ua del paciente y el producto de la descamacin se deja caer en el
medio de transporte o de cultivo.
2.- Incube a 370 C por 1-2 semanas, revisando peridicamente.

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MICOLOGA

3.- Observe el aspecto de la colonia en desarrollo; proceda a tomar una


pequea muestra de la misma con asa bacteriolgica si la colonia es lisa y
proceda a efectuar frotis y tincin de Gram de la forma acostumbrada.
Observe a inmersin.
Si la colonia es algodonosa, tome una fraccin de ella con pinzas y depostela
sobre un portaobjetos dilacrela, colquele una gota de lugol y observe al
microscopio con objetivo seco dbil y luego con objetivo seco fuerte 40X.
CUESTIONARIO
1.- Describe las caractersticas morfolgicas del gnero Trichophyton.
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2.- Cules son las caractersticas morfolgicas del gnero Microsporum y
Epidermophyton?
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3.- Qu tejidos infecta el gnero Trichophyton?
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4.- Cul de los tres gneros antes mencionados es el ms frecuente en la


poblacin mexicana?
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MICOLOGA

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5.- Formas comunes de micosis superficiales son:
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6.- La tia cruris se manifiesta clnicamente por los siguientes signos y
sntomas.
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CONCLUSIONES.
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MICOLOGA

PRCTICA No. 3

MICROCULTIVO
OBJETIVO
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1.- Identificar las diferentes estructuras de un hongo.
INTRODUCCIN
Las micosis o enfermedades micoticas son causadas por hongos. Estos
microorganismos relativamente grandes, parecidos a las plantas y que no
poseen clorofila comprenden las variedades generalmente llamadas Levaduras
y Mohos y un grupo numeroso llamado Fungi Imperfecti (hongos imperfectos).
La clasificacin de los hongos se basa principalmente en la morfologa de estos
microorganismos; cuando se desarrollan fuera del organismo se observa una
red de hilos ramificados llamados hifas que crecen formando una masa
enmaraada (micelio). Generalmente se encuentran esporas o corpsculos
reproductores.

MATERIAL
Muestra problema (hongos)
Agar de papa dextrosa
Hojas de bistur
Pinzas
Portaobjetos y cubreobjetos
Caja de petri con puente en forma de tringulo

PROCEDIMIENTO
1.- En la caja de petri con puente en forma de tringulo se le coloca el
portaobjetos, y en este mismo se deposita un cuadrito del agar de papa
dextrosa
con el respectivo cubreobjetos.
2.- Con una asa con punta en forma de L se toma una parte del hongo y se
deposita picando los cuatro lados del agar.
3.- Se incuba a 37 C por 4 das.
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MICOLOGA

4.- Se quita el agar que se encuentra en el portaobjetos y se adicionar una


gota de azul de metileno o azul de lactofenol y se tapa con el mismo
cubreobjetos.
5.- Se sella con barniz transparente de uas. Dejar secar.
6.-Observe al microscopio, identifique las estructuras y realice un dibujo de lo
encontrado.

PRECAUCION
Trabajar siempre con el mechero encendido.
Con cubrebocas doble y lentes de proteccin con pared lateral.
CUESTIONARIO
1.- Cul es la diferencia entre un moho y una levadura?
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2.- A qu se llama dimorfismo de los hongos?
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3.- Describir las caractersticas morfolgicas de los hongos filamentosos.
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4.- Describir las caractersticas morfolgicas de los hongos levaduriformes.
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MICOLOGA

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5.- Nombrar y describir 2 tipos de esporas sexuales y 2 asexuales de los
hongos.
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_______________________________________________________________
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_______________________________________________
6.- Hacer un dibujo lo ms exacto posible de tus hallazgos microscpico.

CONCLUSIONES
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MICOLOGA

PRCTICA No. 4
TUBO GERMINATIVO EN SUERO
OBJETIVO.
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
1.- Identificar el desarrollo de un tubo germinativo de C. albicans comparando
la muestra con otras levaduras que no lo producen.
INTRODUCCIN
Esta tcnica es utilizada como prueba diferencial entre los gneros de
levaduras de Candidas y Candida albicans. Es una prueba de Diagnstico
comn en el Laboratorio de Anlisis Clnicos cuando a travs del examen en
fresco se observan levaduras y estas son recuperadas en un cultivo es una
prueba que debe de hacerse para finalizar el trabajo. Recordar que la Candida
albicans es considerada habitante saprofito de los humanos y se puede
encontrar en el agua alimentos y otros fomites sin embargo esta afirmacin
pierde su fuerza cuando C. albicans causa daos graves en los pacientes que
estn infectados, tales como dermatitis, infecciones balnicas, vaginales,
gastrointestinales, ticas y sistmicas. Los ms afectados como en el resto de
las micosis son pacientes inmuno-deprimidos, nios, ancianos, mujeres
embarazadas diabticos, etc.

MATERIAL
Cepas de C. albicans y otras levaduras crecidas en agar Biggy o Sabouraud.
Asas Bacteriolgicas
Tubos de ensaye con 1 ml de Suero Humano (mantenidos a temperatura de
bao Mara- 37 C)
Lugol o azul de algodn
Bao Mara
Mecheros
Portaobjetos y Cubreobjetos
Microscopio Elctrico

PROCEDIMIENTO

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MICOLOGA

Con el asa bacteriolgica previamente esterilizada y enfriada tonar una porcin


de una colonia levaduriforme y depositarla en el suero del tubo de ensaye, el
asa debe ser esterilizada perfectamente, una vez terminado este
procedimiento.
El tubo de ensaye es cerrado perfectamente con papel para film, o con un
tapn de caucho, y puesto a temperatura de bao Mara 37C por espacio de 3
a 4 horas.
Con ayuda de un asa bacteriolgica tomar una gota del suero y depositarla en
un portaobjeto agregar con cuidado sin tocar la muestra una gota de lugol o
azul de algodn, tapar la gota con un cubreobjeto y observar a seco fuerte
(40x).
CUESTIONARIO
1.-Por qu se utiliza suero humano para esta prueba?
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2.-Qu factores que afecten la prueba dara resultados falsos negativos?
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3.-Por qu se debe usar siempre un testigo positivo al observar una muestra?
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DIBUJOS

CONCLUSIONES.
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PRCTICA No. 5

PRUEBAS DE IDENTIFICACIN DE HONGOS


LEVADURIFORMES POR ASIMILACIN DE CARBOHIDRATOS
(AUXANOGRAMA DE BEIJERINCK)
OBJETIVO
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
1.- Identificar las diferentes especies de Cndida a travs de la asimilacin de
carbohidratos.
MATERIAL
Placas de Petr grandes con agar libre de carbohidratos
Hisopos
Asa bacteriolgica
Cepas de diferentes Candidas crecidas sobre agar Biggy o Sabouraud
Tubos de ensaye con solucin Salina isotnica
Sensidiscos impregnados con diferentes carbohidratos
PROCEDIMIENTO
Depositar una colonia de la levadura con ayuda del asa bacteriolgica en la
solucin salina del tubo de ensaye, homogenizar perfectamente la muestra
Con un hisopo tomar muestra e impregnar perfectamente toda la superficie de
las placas con agar de tal forma que ninguna parte de la superficie quede libre
del inculo.
Pon unas pinzas distribuir los sensidiscos de diferentes carbohidratos , mximo
4 por caja.
Invertir las cajas e incubar a 28 C por 4 das.
El resultado positivo se interpreta como la presencia de crecimiento de la
levadura alrededor del sensidisco con el carbohidrato.
Realizar un cuadro sinptico con los requerimientos de carbohidratos de las
diferentes especies de Candida y de acuerdo a el concluir que especie es la
cepa problema.

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MICOLOGA

DIBUJOS

CONCLUSIONES
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PRCTICA No. 6
EFECTO DE ANTIFNGICOS SOBRE LEVADURAS.
OBJETIVO
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
1.- Efectuar un anlisis antimicolgico y explicar la utilidad de la misma en el
tratamiento de un paciente.
INTRODUCCIN
Una levadura es un microorganismo aislado de una muestra sembrada en agar
y puede presentar diferentes grados de sensibilidad a un antimictico o incluso
ser resistente al mismo. La resistencia a los antimicticos puede transferirse
por segmentos de DNA extracromosmicos
(como los plsmidos, por
ejemplo), lo que hace variar esa susceptibilidad. En el estudio antifngico se
busca determinar el grado de sensibilidad o resistencia de una levadura a uno
o un grupo de antimicticos a los que normalmente es sensible. Sin embargo
es preciso tener en mente que las condiciones bajo las que se efecta ste
examen no son las mismas que prevalecen en el organismo humano como son:
los antagonismos , el pH, los mecanismos defensivos por parte del husped, la
temperatura, etc.
MATERIAL
Cultivos de levaduras
Cajas petri con agar papa Dextrosa Saboraud o Biggy
Tubos con solucin salina isotnica
Mechero bunsen
Asas bacteriolgicas
Hisopos estriles
Pinzas de diseccin
Sensidiscos de varios antimicticos
PROCEDIMIENTO
1.- Trabajando siempre junto al mechero encendido, tom una o ms colonias
que sean idnticas, segn lo indique el instructor con una asa bacteriolgica en
punta, estril, y descargarlas en un tubo que contiene solucin salina isotnica.
2.- Sin hablar, y con mucho cuidado para no contaminar se humedece un
hisopo con la suspensin que se hizo en el tubo, se abre la caja petri que
contiene el medio de papa dextrosa Sabouraud y se descarga el contenido del
hisopo en toda la placa con un movimiento rpido y suave y sin perforar el
medio de cultivo.

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MICOLOGA

3.- Con pinzas de diseccin estriles o una asa bacteriolgica tambin estril
tome un sensidisco y colquelo en la caja sembrada, presionando ligeramente
para asegurar su contacto con la superficie; procure que los discos queden
separados unos de otros y de las paredes de las cajas de cultivo.
4.- Incube a 370 C por 24 horas y despus lea sus resultados.

PRECAUCIONES
Despus que se haya sembrado el inculo, no deje pasar ms de 15 minutos
para colocar los sensidiscos. Y una vez realizado esto colocar en la incubadora
a 28 C por dos a cuatro das dependiendo del tiempo de crecimiento de las
levaduras.
La interpretacin de sensibilidad es una zona de inhibicin alrededor del
sensidisco.

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