UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE QUMICA


LABORATORIO DE FARMACOLOGA I
Informe de la prctica nmero 6:

Determinacin experimental de la dosis efectiva 50(DE
50
)
sedante en ratones.

Equipo: 4


Elaborado por:

Determinacin experimental de la dosis efectiva 50 (DE
50
)sedante en ratones.

Introduccin

Los barbitricos como hipnticos son obsoletos, pero ejercen notables acciones
farmacolgicas y sobre todo tienen propiedades toxicolgicas; adems poseen
importantes aplicaciones teraputicas como anestsicos generales, como
anticonvulsivantes y antiepilpticos (Litter, 1988).
Un sedante eficaz (ansioltico) debe reducir la ansiedad y ejercer un efecto calmante con
poco o ningn efecto en las funciones motoras o mentales. El grado de depresin del
sistema nervioso central causado por un sedante debe ser el mnimo conforme a la
eficacia teraputica (Katzung, 1994).
Los barbitricos reciben este nombre porque derivan del cido barbitrico, que resulta de
la condensacin de la urea y el cido manlico.
El pentobarbital sdico pertenece a los barbitricos de accin corta de tres horas
La absorcin del pentobarbital sdico por va parenteral es rpida (Litter, 1988).
Los barbitricos deprimen la actividad neuronal en la formacin reticular del encfalo
medio. Es probable que faciliten y prolonguen los efectos inhibitorios de GABA y glicina y
pueden interactuar con los conductos para el ion cloruro (Katzung, 1997)
Aunque el etanol es fundamentalmente un depresor de la transmisin nerviosa en el SNC,
los efectos agudos del etanol dependen de su concentracin sangunea, de modo que los
efectos estimulantes que aparecen con el consumo de dosis bajas de etanol responden a
una accin farmacolgica de tipo inhibidor sobre circuitos nerviosos que limitan la
actividad cortical, es decir, se produce una desinhibicin cortical. Conforme aumentan los
niveles de etanol en sangre, se incrementa la depresin central, ya que el efecto inhibidor
sobre el funcionalismo neuronal va a ir afectando a otros centros nerviosos.
El GABA es el neurotransmisor inhibidor ms importante del SNC y est implicado en la
mediacin de la inhibicin pre y pos sinptica de la actividad neuronal. En este sentido se
ha postulado que los efectos iniciales estimulantes del etanol pueden deberse a la
inhibicin de la actividad gabargica, mientras que los efectos sedantes subsiguientes al
consumo de dosis altas pueden ser mediados por la activacin de este sistema inhibitorio.
En el receptor GABA-A el etanol favorece el flujo de Cl- inducido por GABA, lo que
ocasiona un estmulo de la hiperpolarizacin neuronal y la subsiguiente disminucin de la
excitabilidad ocasionada por el GABA. No todos los receptores GABA con sensibles al
etanol (Carrasco, 2000)

La potencia farmacolgica es la caracterstica del medicamento, cuando a menor dosis
(menor ocupacin de receptores) produce una mayor accin farmacolgica, esta
determinada por la afinidad con el receptor y demostrada por la ubicacin de la curva en
el eje de las abscisas, es relativa por estar influenciada por la va de administracin,
absorcin, distribucin y depuracin en sangre o sitio de accin. Se relaciona con la Dosis
Efectiva 50.(Carrasco, 2000)
El aparato consiste en un cilindro de vidrio (30 cm de altura,11 cm de dimetro, con
paredes de 3 mm). El cilindro se coloca sobre papel filtro en una habitacin con
iluminacin constante y aislado del ruido exterior.
Se coloca un ratn sobre el papel filtro y dentro del cilindro de cristal, se registra el
nmero de veces que eleva sus partes posteriores durante un periodo de 5-min. El lado
interior del aparato y piso se limpian con una solucin hidroalcohlica y el papel filtro se
cambia entre cada sesin de pruebas con animales. El Pentobarbital se administra 30 min
antes de probar en diferentes dosis, y el etanol se administra 5 minutos antes de la
prueba. Los frmacos se inyectados en el peritoneo. Durante la observacin, el
investigador debe estar de pie junto al aparato siempre en el mismo lugar. Las
observaciones se realizan sin conocimiento previo de las condiciones experimentales
aplicadas al animal.
Este modelo nos sirve para contar el nmero de levantamientos, en un periodo
determinado, despus de haberle administrado un frmaco, ya que estos levantamientos
estn relacionados con un estado de alerta, y si esta disminuye esta relacionado con
alguna actividad tranquilizante del frmaco administrado.
Referencia!!!
http://navarrete.fq-unam.org/docs/Balderasetal2008.pdf

Objetivos
Determinar la DE
50
para el efecto sedante del pentobarbital y etanol en ratn,
utilizando el modelo del cilindro de exploracin.
Resultados

Para los clculos de DE
50
, de Etanol y Pentobarbital, as como de la potencia relativa del
etanol se utilizaron datos sugeridos debido a que los resultados experimentales que se
obtuvieron, no permitieron que se realizara el anlisis cuantitativo requerido porque hubo
mucha dispersin en los datos grupales y no mostraron la relacin esperada dosis-efecto.

Para el Pentobarbital

Tabla 1. Datos experimentales del equipoque corresponden al nmero de levantamientos producidos por la
dosis respectiva de Pentobarbital.
Dosis
(mg/Kg)
Levantamientos
0 40
2.5 34
5 26
10 43
15 40
30 5

Tabla 2. Datos experimentales grupales que corresponden al nmero de levantamientos producidos por la
dosis respectiva de Pentobarbital.

Nmero de levantamientos
Dosis (mg/Kg) Equipo 2 Equipo 3 Equipo 4
0 34 9 40
2.5 28 29 34
5 18 23 26
10 16 27 43
15 10 18 40
30 3 5 5

El modelo que mejor ajust los datos de dosis-efecto del Pentobarbital fue el modelo de
Hill.

Tabla 3. Datos sugeridos para anlisis del porcentaje de efecto correspondiente al nmero de
levantamientos producidos por la dosis respectiva de Pentobarbital.
Dosis
(mg/kg)
Levantamientos % Sedacin % Alerta
0 39 0 100
2.5 37 5.1 94.9
5 30 23.1 76.9
10 22 43.6 56.4
15 14 64.1 35.9
30 6 84.6 15.4


Tabla 4. Logaritmo de la dosis correspondiente a cada

de los datos sugeridos
para el Pentobarbital.

Log Dosis Log E/E
max
-E
0.3979 -1.2672
0.6990 -0.5229
1.0000 -0.1120
1.1761 0.2518
1.4771 0.7404




Figura 1. Grfica de (

) vs. log Dosis del Pentobarbital

y = 1.8197x - 1.9107
R = 0.9905
-1.5
-1.0
-0.5
0.0
0.5
1.0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
l
o
g

%
s
e
d
/
%
s
e
d

m
a
x

-

%
s
e
d

Log dosis
Ajuste de los datos del pentobarbital con el modelo
de Hill
Para la determinacin de la DE50 del etanol a partir de la ecuacin obtenida del modelo
de Hill se tiene que:

(

Para el Etanol

Tabla 4. Datos experimentales grupalesque corresponden al nmero de levantamientos producidos por la
dosis respectiva de Etanol.

Nmero de levantamientos
Dosis (mg/Kg) Equipo 1 Equipo 5 Equipo 6
0 42 17 10
500 48 26 13
1000 43 21 21
2000 30 21 30
2500 22 30 11
3000 18 25 0



Para el caso del Etanol, el modelo que mejor ajust los datos de dosis-efecto fue el lineal
logartmico.

Tabla 5. Datos sugeridos para anlisis del porcentaje de efecto correspondiente al nmero de
levantamientos producidos por la dosis respectiva de Etanol.

Dosis (mg/Kg) Log Dosis Levantamientos % Alerta % Sedacin
0 ------ 40 100 0
500 2.698970004 39 97.5 2.5
1000 3 23 57.5 42.5
2000 3.301029996 15 37.5 62.5
2500 3.397940009 9 22.5 77.5
3000 3.477121255 2 5 95



Figura 2. Grfica del %Sedacin vs. log Dosis del Etanol


Para la determinacin de la DE50 del etanol a partir de la ecuacin obtenida del modelo
lineal logartmico se tiene que:

Para la potencia relativa del efecto sedante entre el etanol y el pentobarbital se tiene que:

Discusin

y = 109.22x - 290.76
R = 0.9742
0
20
40
60
80
100
2.5 3 3.5 4
%
S
e
d
a
c
i

n

Log Dosis
Ajuste de los datos del etanol con el modelo lineal
logartmico
Series1
Linear (Series1)
Una de las razones que se cree pudieron afectar a que los datos experimentales tanto del
equipo como grupales no fueran como se esperaban, es que posiblemente se requera
una dosis mayor, de administracin de etanol y Pentobarbital, que la indicada en el
procedimiento experimental, porque observando los resultados de las tablas 1,2 y 5, en
las dosis intermedias (5, 10 y 15 mg/kg para el Pentobarbital y 1, 2 y 2.5 g/kg para el
etanol), en la mayora de los casos, hubo un comportamiento de excitacin, reflejado en
un mayor nmero de levantamientos por parte de los ratones, el cual se atribuye a que
tanto el etanol como los barbitricos, a dosis bajas, deprimen el sistema reticular, que se
encarga del mantenimiento de la conciencia y del control de la conducta responsable.
Como los impulsos que el sistema reticular enva a la corteza cerebral son tanto
excitatorios como inhibitorios, los cambios de comportamiento dependen de cul de las
dos vas queda deprimida primero; para el caso de los ratones, estos se encontraban
estresados y de alguna forma excitados por el manejo que tuvieron y las condiciones a las
que se sometieron, antes y despus de la administracin, en este ambiente de recepcin
sensorial intensa, se da la depresin preferente del sistema reticular en algunas vas que
generan inhibicin, quedando solo la influencia excitatoria; manifestndose la inhibicin
del frmaco como una estimulacin (Levine, 1982 ; Meyers, 1982)
Tambin probablemente existi una administracin incorrecta que pudo provocar
que tanto para el Pentobarbital como para el etanol no se observara un efecto de
sedacin hasta aproximadamente la penltima dosis, cuando el nmero de
levantamientos comienza a disminuir, lo que puede ser consecuencia de que el frmaco
haya penetrado algn rgano donde la absorcin se da de forma ms lenta que si se
hubiera administrado exactamente en la cavidad peritoneal, donde existe mayor superficie
absorbente (Goodman, 1998).
La eliminacin del etanol pudo influir en el porcentaje de efecto producido por cada
dosis, ya que se sabe que su metabolismo, mediado por el hgado es muy rpido, y sus
metabolitos no tienes efectos sedantes, por lo cual, la cantidad de etanol que penetr a la
circulacin sistmica y se uni a los receptores GABA
A
pudo ser menor a la requerida
para producir un efecto sedante observable en las primeras dosis, presentndose
solamente es efecto estimulante -provocado por la inhibicin del sistema reticular-
(Flrez, 2003).
Los datos sugeridos que se utilizaron presentan la relacin esperada entre dosis-
efecto, y se utilizaron para realizar los clculos presentados porque los datos
experimentales no permitieron su anlisis cuantitativo correcto ya que en algunos casos el
porcentaje de efecto se obtena con clculos por encima del 100%, lo cual es incorrecto.
Las posibles causas de que la potencia relativa del etanol sea de 0.0085, y que con
el inverso del nmero se obtenga que el etanol es ~118 veces menos potente que el
Pentobarbital, primeramente es que el Pentobarbital tiene una vida media mayor a la del
etanol, y en consecuencia tiene ms posibilidad de interactuar con los receptores antes de
ser eliminado de la circulacin sistmica, mientras que el etanol sufre la biotransformacin
de oxidacin mucho ms rpido, adems de que este frmaco no solamente alcanza la
circulacin sistmica, si no que genera un equilibrio homogneo de concentracin del
mismo en todos los lquidos corporales incluidos el lquido cefalorraqudeo y la orina, lo
que genera que solo una fraccin de etanol administrado se una al receptor GABA
(Bevan, 1996)


Conclusiones
En esta prctica para determinar la DE
50
se utilizaron tres modelos matemticos (modelo
lineal, lineal logartmico y ecuacin de Hill) que nos permitieron ver de una manera ms
sencilla nuestros datos y de esta manera poder interpretarlos y calcular el DE
50
, para el
pentobarbital, el modelo que mejor se adecuo a los resultados fue la ecuacin de Hill, y
para el etanol, el modelo lineal logartmico. El criterio para elegir el modelo matemtico
que ms se adecuaba a nuestros datos fue realizar una regresin lineal en cada modelo y
el modelo que mejor se ajustara a la recta es el modelo que seleccionamos.

Calculamos una DE
50
mayor para el etanol que para el pentobarbital, debido a que el
etanol se metaboliza ms rpido en el hgado y por lo tanto tenemos menos cantidad
biodisponible para que acte el frmaco y se produzca el efecto.

Como los resultados no fueron los esperados, suponemos que debamos cambiar las
concentraciones, ya que en las primeras concentraciones nos dio un nmero mayor de
levantamientos que incluso en el control

El modelo del cilindro de vidrio es un modelo muy til debido a que los levantamientos
eran claros y contables, si los vea una sola persona, si tombamos una concentracin
corregida y tombamos un solo criterio para los levantamientos tendramos una buena
DE
50
.



Bibliografa
BEVAN, John A. et. al. (1996). Fundamentos de Farmacologa. Introduccin a los
principios de accin de los frmacos. 2 Edicin, Editorial Harla, Mxico, D.F.,
pp.103-107.
FLREZ, Jess. (2003). Farmacologa Humana. 4 Edicin, Editorial Masson,
Mxico, D.F., pp.604-607.
GOODMAN, Alfred. (1998). Las Bases Farmacolgicas de la Teraputica. Vol. 1, 9
Edicin, Mc Graw-Hill Interamericana, Mxico, D.F. pp. 398-417.
GOTH, et. al. (1991). Farmacologa Clnica. 12 Edicin, Editorial Panamericana,
Mxico, D.F., pp. 243,205, 236-237.
LEVINE, Ruth R. (1982). Farmacologa. Acciones y Reacciones Medicamentosas.
Salvat Editores, Espaa, Madrid, pp. 81, 120, 151, 350-353.
MEYERS, Frederick H. (1982). Farmacologa Clnica. , 5 Edicin, Editorial El
Manual Moderno, Mxico, D.F., pp.238-244.