Ao de la Integracin Nacional y el Reconocimiento de Nuestra Diversidad

Instituto de Educacin Superior Tecnolgico

Privado
Sergio Bernales Garca












Curso :
Tema :
Alumno :
Especialidad :
Ciclo :
Docente :

San Vicente - Caete
2012

























DEDICATORIA
A todos los que creen en el futuro y hacen
de sus vidas una realidad permanente, y en
especial a nuestros seres queridos que
hicieron posible la realizacin de este
trabajo.






INTRODUCCION

Las molculas de histocompatibilidad fueron inicialmente descubiertas por ser las
principales responsables de las reacciones de rechazo de tejidos trasplantados entre
individuos de la misma especie. Los loci genticos reguladores de la sntesis de estos
antgenos se agrupan en una regin denominada Complejo Mayor de
Histocompatibilidad (MHC) y se heredan de acuerdo con las leyes de Mendel.

Una de las principales caractersticas de estas molculas es su extraordinario
polimorfismo. Hoy da se considera que las molculas de histocompatibilidad tienen
como funcin principal recoger pptidos del interior de la clula, transportarlos a la
superficie celular y all presentarlos a las clulas T.

Las molculas de histocompatibilidad se localizan en la superficie de las clulas de las
distintas especies animales. En el ratn se denominan antgenos H-2 y los genes que las
codifican se localizan en el cromosoma 17. En el humano se denominan antgenos HLA
(Human Leucocyte Antigens) y estn codificadas por genes ubicados en el brazo corto
del cromosoma 6. Los primeros trabajos sobre los antgenos H-2 fueron realizados por
Gorer (1936) en cepas murinas endogmicas (inbred), obtenidas por el cruce entre
animales hermanos de forma continuada durante al menos 20 generaciones. El rechazo
de trasplantes entre animales de distintas cepas endogmicas y la obtencin de
aloantisueros mediante inmunizacin de animales de una cepa con clulas de otra,
permitieron una primera definicin de este sistema gentico.

En el caso humano, el primer antgeno de histocompatibilidad descrito fue Mac (en la
actualidad definido como HLA-A2), descubierto por Jean Dausset en 1958. Pronto se
vio que exista una relacin entre estos antgenos y la supervivencia de riones
trasplantados.

En este trabajo estudiaremos la estructura de estas molculas y la organizacin de los
genes que las codifican. Su funcin en el procesamiento y presentacin de pptidos se
estudiar en el captulo siguiente.


NDICE
PORTADA .. 1
DEDICATORIA .. 2
INTRODUCCION ... 3
NDICE 4
Estructura y funcin de las molculas de histocompatibilidad 5
Estructura de las molculas HLA de clase I 5
Estructura de las molculas HLA clase II 6
Estructura tridimensional . 6
Distribucin tisular de las molculas clase I y II . 7
Molculas de histocompatibilidad no clsicas . 8
Funcin de las molculas de histocompatibilidad 9
Polimorfismo HLA .. 9
Desequilibrio de ligamento .. 10
Cmo se genera la diversidad de las molculas HLA? .. 10
Factores inductores de la generacin de polimorfismo ... 11
Mecanismo de generacin de polimorfismo 12
Ventajas y desventajas aportadas por el polimorfismo HLA ..... 13
Asociacin entre HLA y enfermedad 14
Tipaje HLA .. 15
Mtodo Serolgico ... 16
Mtodos basados en tcnicas de Biologa Molecular .. 17
Gentica del Complejo Mayor de Histocompatibilidad .. 17
Loci HLA-A, B, C .. 20
Regin HLA-D 20
Procesamiento y presentacin de antgenos . 21
Captacin y procesamiento de antgenos por clulas APC .. 22
Sntesis de HLA-I y procesamiento de antgenos en clulas diana . 24
Las molculas HLA como receptores de pptidos .. 25
BIBLIOGRAFIA . 26




Estructura y funcin de las molculas de histocompatibilidad

Segn su estructura, las molculas de
histocompatibilidad se dividen en dos grandes
grupos: molculas de histocompatibilidad clase I
y clase II, que presentan estructura y funciones
diferentes.
Entre las primeras se encuentran las molculas
clsicas de clase I que se corresponden con los
antgenos HLA-A, B y Cw y las molculas no clsicas entre las que se encuentran HLA-
E, F, G y CD1. Las molculas HLA clase II pueden ser HLA-DR, DQ y DP. (Tabla:
Clases y formas de HLA).

Estructura de las molculas HLA de clase I
Las molculas HLA clase I se encuentran constituidas por 2 cadenas polipeptdicas: una
cadena pesada, glicosilada, de mayor tamao, que se encuentra asociada, mediante
interacciones no covalentes a una cadena ms pequea, cadena ligera, la
-2-microglobulina. (Figura: HLA I y II).

La cadena pesada es altamente variable entre individuos de la misma especie, siendo la
responsable del polimorfismo antignico de las molculas de histocompatibilidad clase
I, mientras que la cadena ligera es igual en todos los individuos (Figura: Variabilidad
HLA).

En la cadena pesada se distinguen tres zonas: una zona extracelular de mayor tamao y
otras dos ms pequeas que corresponden a la regin transmembrana e
intracitoplasmtica respectivamente. La zona extracelular se halla organizada en tres
dominios de aproximadamente unos 90 residuos cada uno, denominados -1, -2 y -3,
mantenidos por la existencia de puentes intracatenarios.

Los dominios -1 y -2 constituyen regiones de contenido variable en aminocidos
mientras que el dominio -3 es bastante constante. Estas molculas pertenecen a la
superfamilia de las
inmunoglobulinas por
mostrar una notable
homologa con la regin
constante de las
inmunoglobulinas.
La cadena
-2-microglobulina
pertenece tambin a la
familia de las
inmunoglobulinas y en todos los individuos es un polipptido idntico. (Figura
Estructura HLA-I)

Estructura de las molculas HLA clase II
Las molculas de clase II son glicoprotenas que se encuentran en la superficie celular
y estn formadas por dos cadenas, y de tamaos similares y unidas entre s
mediante interacciones de naturaleza no covalente. Estn constituidas por dos dominios
extracelulares, -1 y -2 y -1 y -2 en cada una de ellas, un dominio transmembrana
y otro intracitoplasmtico.

Estructura tridimensional
El anlisis de la estructura tridimensional de los antgenos de histocompatibilidad de
clase I y clase II, determinada mediante cristalografa, demuestra que el dominio -3 y
la -2-microglobulina estn organizados en estructura de hoja plegada . Por el
contrario los dominios a1 y a2 constan cada uno de ellos de una sola zona formada por
cuatro fragmentos en estructura de hoja plegada seguido de otro segmento organizado
en forma de a-hlice.

Esta organizacin delimita una hendidura denominada sitio de unin al pptido (peptide
binding groove) en el que los residuos ms polimrficos se encuentran en el suelo y las
paredes de la hendidura. En esa hendidura se localiza un pptido que no pertenece a la
molcula y de aproximadamente 8-10 aminocidos. Ese pptido procede de protenas
endgenas, como veremos despus, e interacciona con las molculas de
histocompatibilidad mediante fuerzas no covalentes entre sitios concretos de ambas
estructuras. Un determinado antgeno de histocompatibilidad puede unirse a numerosos
pptidos diferentes siempre que stos posean uno o varios motivos que interaccionen
con zonas de la molcula cuya estructura suele estar condicionada por residuos
polimrficos.

La estructura tridimensional de los antgenos de clase II es semejante a la de los
antgenos de clase I. Los dos dominios proximales (2 y 2) son los equivalentes al
dominio -3 y a la -2-microglobulina de los antgenos clase I, mientras que los dos
dominios distales (-1 y -1) de los antgenos clase II se corresponden con los dominios
-1 y -2 de la molcula clase I. La hendidura donde se ubica el pptido se forma entre
los dominios -1 y -1 de las molculas clase II.

Distribucin tisular de las molculas clase I y II
Las molculas de clase I se encuentran presentes en
la mayora de las clulas nucleares del organismo
pero no en todas, dado que, en algunas
localizaciones, su expresin es mnima o incluso
nula. Esto sucede con los hemates en el endotelio,
glndulas de Brunner duodenales, trofoblasto
velloso o neuronas del sistema nervioso central. La
expresin de las molculas de clase II se encuentra
fundamentalmente restringida a macrfagos en sus
diversas localizaciones, monocitos, linfocitos B y cuando estn activados tambin en
linfocitos T y NK. Igualmente se encuentran expresados en alta densidad en otras
clulas que actan como presentadoras de antgenos, tales como clulas dendrticas.
Esta distribucin diferencial de las molculas de histocompatibilidad de clase I y II se
encuentra directamente relacionada con la diferente funcin de cada una de ellas.
En suma las molculas de histocompatibilidad clase I estn presentes en la mayora
de clulas del organismo actuando as para las clulas del sistema inmunitario como
"marcadores de lo propio" (el yo inmunolgico).

Molculas de histocompatibilidad no clsicas
Entre este grupo destacan de manera ms significativa, las molculas de
histocompatibilidad HLA-G, HLA-E y HLA-F, que presentan una gran homologa con
las molculas clsicas clase I (HLA-A, -B y -C), aunque poseen una funcin, exposicin
y polimorfismo diferencial.

Molcula HLA-E: Esta molcula se encuentra en la mayora de las clulas del
organismo y su importancia radica en que cuando es reconocida por los receptores
CD94/NKG2A, presentes en la mayora de las clulas NK, y ciertos linfocitos T, los
inhiben. De esta manera parece que se protegen las clulas del organismo frente a su
destruccin, sobre todo de clulas NK.
Molcula HLA-F: Se sabe que esta molcula se expresa principalmente en clulas
de amgdalas, bazo y timo. La localizacin de la protena es intracelular y est
descrito que los tetrmeros de HLA-F se unen a receptores inhibidores presentes en
NK y otros leucocitos.
Molcula HLA-G: Esta molcula se caracteriza por su distribucin celular
restringida al trofoblasto fetal y clulas del epitelio tmico. Puede presentarse en
siete isoformas distintas: cuatro de ellas son protenas unidas a membrana (HLA-
G1, G2, G3 Y G4), y otras tres isoformas que son protenas solubles (HLA-G5, G6
Y G7). Parece que juega un papel muy importante inhibiendo el sistema inmune de
la madre para proteger al feto, que en definitiva es un trasplante, debido al contenido
paterno presente en el mismo. Recientemente se ha demostrado tambin su efecto
protector en clulas infectadas por el virus HIV y en trasplante de corazn.
Familia de molculas CD1. Se ha definido como una molcula presentadora de
antgeno presente tanto en las clulas dendrticas como en timocitos. En humanos
CD1 presenta antgenos no peptdicos de origen microbiano, generalmente a un
subtipo de clulas T.

Funcin de las molculas de histocompatibilidad
Las molculas de histocompatibilidad estn presentes en la mayora de las clulas del
organismo, actuando as para las
clulas del sistema inmunitario
como "marcadores de lo propio" (el
yo inmunolgico) en tanto que han
intervenido en el proceso de
seleccin de los linfocitos T en el
timo y eliminndose todos aquellos
clonos potencialmente
autorreactivos, permaneciendo
aquellos que reconocen a las
molculas de histocompatibilidad propias.

Complementariamente a lo indicado anteriormente, la funcin biolgica ms relevante
de las molculas de histocompatibilidad propias presentes en las clulas del organismo,
es la de presentar pptidos antignicos para la activacin de los linfocitos T. Los
linfocitos T que reconocen molculas HLA clase I y su pptido pertenecen a la
subpoblacin de linfocitos T citotxicos, mientras que las clulas T que reconocen
molculas HLA clase II en su mayora son T colaboradores y tienen la funcin de
producir citocinas (Tabla: Funciones HLA).

Polimorfismo HLA
El complejo mayor de histocompatibilidad posee diferentes
locus y un nmero extraordinariamente grande de alelos
diferentes en cada uno de los mismos. Es por tanto, el
complejo ms polignico y polimrfico que se conoce en
vertebrados superiores.

Se han descrito ms de mil alelos para HLA clase I y ms de
500 para clase II. Este enorme polimorfismo da como
resultado una gran diversidad de molculas del complejo mayor de histocompatibilidad
dentro de una especie. (tabla polimorfismo HLA).
Esto es as porque nuestras molculas HLA no pueden presentar todos los pptidos, sino
que cada HLA podra presentar slo una seleccin de los mismos y por tanto a mayor
variabilidad ms posibilidad de presentar pptidos diferentes.

Desequilibrio de ligamento
El polimorfismo no se explica slo como resultado de una combinacin al azar, sino que
algunos haplotipos se encuentran en mayor frecuencia a la esperada. Este fenmeno se
conoce como desequilibrio de ligamento y se corresponde, pues, a la mayor frecuencia
observada para una combinacin particular de alelos en un haplotipo que la esperada
con base a las frecuencias de los mismos considerado individualmente.

Para explicar este fenmeno, se ha propuesto la intervencin de varios procesos que no
son excluyentes entre s:
Que los haplotipos con representacin mayor en la poblacin actual reflejaran las
combinaciones de alelos presentes en los fundadores (esto es por ejemplo lo que
ocurrira en la poblacin india de americana).
Que se presente como consecuencia de los efectos del proceso evolutivo; por
ejemplo, algunas combinaciones de alelos proporcionaran resistencia a ciertas
enfermedades y haran que se seleccionaran y estuvieran representadas en mayor
frecuencia mientras que otros que podran generar efectos perjudiciales, como
mayor susceptibilidad enfermedades, y se expresasen con menor frecuencia debido
a un proceso de seleccin negativo.

Cmo se genera la diversidad de las molculas HLA?
Las molculas HLA que una
persona expresa estn fijadas en
los genes y no cambian con el
tiempo como ocurre con las
inmunoglobulinas, que pueden ir
adoptndose al patgeno.
La diversidad de las molculas
HLA de un individuo se deben
a la presencia de diferentes
genes y diferentes alelos que cada uno de ellos puede presentar.

Todo hace indicar que el polimorfismo del CMH evolucion con el objeto de
contrarrestar la evolucin de los microorganismos hacia variantes cuyos pptidos no son
presentados por las molculas del CMH y evitar de esa manera su patogenicidad una
vez que infectan al individuo. La lucha entre el individuo y microorganismos es
evidente desde el origen de la vida, dado que los microorganismo existen desde antes
que el propio individuo. Obviamente, si se evade la presentacin antignica de los
microorganismos, stos adquieren la capacidad de establecer una infeccin sin ser
detectados por el sistema inmune.

Por lo tanto, el sistema inmune ha ido mutando los genes del CMH para generar una alta
variabilidad en el sitio de unin al pptido, de manera que se anula la posibilidad de que
los microorganismos generen variantes cuyos pptidos no son presentados por las
molculas del CMH. Esta presin de seleccin hace que la frecuencia de modificaciones
de secuencias en diferentes alelos del CMH sea muy superior a lo esperado si el proceso
fuera una simple introduccin de mutaciones al azar.

Factores inductores de la generacin de polimorfismo
La diversidad en las molculas HLA se va generando de manera permanente aunque
lenta. En este hecho han influido mltiples factores y circunstancias. Entre ellas
destacan el efecto de grmenes
frente a los cuales tiene que
defenderse el individuo y tambin
parecen ser decisivas otras fuerzas
naturales, como son el hecho de una
mayor atraccin hacia una pareja
ms distante HLA, que la
implantacin embrionaria en el tero
es ms factibles en embriones ms
heterocigticos as como el hecho
que la progresin del embarazo presenta menos complicaciones en fetos heterocigticos
que homocigticos.

Efectivamente, a mayor cantidad de alelos, mayor ser la variabilidad y posibilidades de
unin de los distintos pptidos a las molculas HLA. Esto trae como consecuencia que
la respuesta inmune mediada por linfocitos T contra cualquier agente patgeno ser ms
amplia y eficiente. En consecuencia a mayor polimorfismo, ms posibilidades de
sobrevivir ante plagas o infecciones concretas.

Todo ello justifica que con el paso del tiempo desaparecen las poblaciones con menos
capacidad de defensa (por ejemplo en una plaga en la antigedad) y slo sobreviven los
ms aptos. Por ejemplo al paludismo, sobre todo a la forma grave o el mayor grado de
progresin a SIDA de las personas infectadas por el virus HIV que son homocigticas
en relacin a las heterocigticas.

Mecanismo de generacin de polimorfismo
El polimorfismo del MHC es el resultado de un largo proceso de evolucin a lo largo de
miles de millones de aos
como consecuencia de la
presin evolutiva ejercida por
los agentes infecciosos. Para la
generacin de este elevado
polimorfismo el MHC ha
utilizado diferentes
mecanismos que han
contribuido de diferente forma
a la creacin de nuevos alelos.
As, algunos son el resultado de mutaciones puntuales mientras que otros proceden de la
combinacin de secuencias completas entre diferentes alelos, bien mediante un proceso
de recombinacin gnica o bien mediante el proceso denominado conversin gnica,
segn el cual una secuencia es reemplazada por otra semejante de un gen homlogo.
La recombinacin entre alelos del mismo locus parece ser el mecanismo ms
frecuentemente utilizado para la creacin del polimorfismo y as muchos alelos
diferentes pueden proceder de procesos de recombinacin repetidos a partir de un
pequeo nmero de genes ancestrales. La existencia de este proceso evolutivo apoya
que el polimorfismo es esencial para la funcin de los antgenos de histocompatibilidad.

Ventajas y desventajas aportadas por el polimorfismo HLA
Para un individuo, la ventaja de tener mltiples genes del CMH de clase I y de clase II
es que estos genes aportan diferentes especificidades de unin a los pptidos, lo que
permite que se pueda presentar un mayor nmero de pptidos derivados del patgeno
durante cualquier infeccin determinada. Esto mejora la potencia de la respuesta
inmunitaria contra el patgeno al aumentar el nmero de linfocitos T especficos del
patgeno activados.

El mismo argumento es vlido para el polimorfismo de cualquier locus determinado del
CMH; la ventaja de ser heterocigoto es que pueden ponerse en juego dos
especificidades diferentes de HLA, en comparacin con una sola en el caso del
homocigoto. Adems, el alto grado de polimorfismo de los isotipos presentadores de
antgeno del HLA asegura que la mayora de los miembros de la poblacin sean
heterocigotos. Sin embargo, la magnitud de la ventaja de ser heterocigoto variar de
acuerdo con la diferencia de especificidades de unin a los pptidos de los dos alotipos.
Puede suponerse que este tipo de ventaja surge de una seleccin compensadora porque
acta para mantener una variedad de isoformas del CMH en la poblacin al tener ms
posibilidades de sobrevivir.

Ejemplos de este fenmeno de distribucin selectiva de un determinado alelo que
confiere ventajas evolutivas al
antgeno en una poblacin son
frecuentes. Veamos por ejemplo,
lo que ocurre en oeste de
frica donde el paludismo es
endmico y mortal en algunos
casos. Pues bien se ha visto que
los individuos de dichas zonas
suelen enfermarse desarrollando un cuadro leve de la enfermedad, lo que no ocurre con
los individuos de otras zonas o endmicas para el paludismo de frica. Hoy sabemos
cmo esta resistencia est ligada al antgeno, a la presencia de una molcula HLA clase
I, HLA-Bw52, que se encuentra en muy alta proporcin en las regiones arriba indicadas
y por el contrario en muy baja proporcin en otras regiones, donde el paludismo no es
endmico. (Tabla: Ventajas y desventajas del polimorfismo).
As, los individuos que no tiene este antgeno moriran ms fcilmente antes de
procrear, con lo que al pasar el tiempo solo sobreviviran los ms aptos, que son los que
posen la molcula HLA-Bw53 que como decimos confiere la capacidad de defensa
frente al paludismo. En suma se ha efectuado una seleccin positiva del antgeno
HLQA-Bw53 que ha hecho que se mantengan en la poblacin dicho antgeno que
proporciona una clara ventaja evolutiva en las regiones donde el paludismo es
endmico. Una cuestin interesante es lo que ocurre con las enfermedades reumticas
tan ampliamente ligadas a genes del CMH y es que no estn influyendo en un proceso
de seleccin negativa de la poblacin que los porta.

Una explicacin a ello deriva del hecho de que la manifestacin de estas enfermedades
es tarda (habitualmente pasados los 35-40 aos) fecha ya en donde se ha realizado la
seleccin de pareja y sta ha procreado. En este mismo sentido, es de destacar que
incluso se observa una seleccin favorecedora de procesos autoinmunes (reumticos
sobre todo) y ello tiene su explicacin en el hecho de que el haplotipo ms
autoinmuntiario es a la vez el haplotipo con mayores potencialidades defensivas frente a
la infeccin como es en la actualidad la epidemia de infeccin por VIH, que pro-
porciona una oportunidad nica para estudiar los efectos del polimorfismo del HLA
sobre una enfermedad infecciosa.

As, se sabe que el carcter de heterocigoto para el HLA proporciona grandes ventajas
(Figura: Sida y HLA). Como desventajas del polimorfismo HLA cabe destacar el mayor
nmero de enfermedades autoinmunes presentadas en estos individuos, los
inconvenientes de la realizacin de trasplantes por incompatibilidad entre donante y
receptor y la dificultad en el generacin de vacunas de tipo celular (Tabla: ventajas y
desventajas polimorfismos HLA).

Asociacin entre HLA y enfermedad
Desde hace varias dcadas se sabe que el padecimiento de ciertas enfermedades se
asocia con el incremento en la frecuencia de un determinado alelo HLA. Esta asociacin
cuando tiene un valor estadsticamente significativo, se viene considerando como un
factor de susceptibilidad o un marcador de riesgo a padecer una
determinada enfermedad. Esto puede cifrarse estadsticamente como riesgo relativo
(RR) y da una idea de la mayor o menor probabilidad que tiene un sujeto a padecer una
determinada enfermedad si presenta dicho marcador o
alelo HLA con respecto a aquellos individuos que no
lo tienen.

Efectivamente, a pesar del alto polimorfismo de las
molculas HLA y de la ampliacin del nmero de
subtipos allicos de clase I y de clase II, hoy se
conocen diversas enfermedades que estn asociadas a
clase I y otras a clase II. El nmero de enfermedades
asociadas a alelos de clase I es menor que el de las
asociadas a clase II (Tabla Enfermedades asociadas)

Las causas de esta asociacin HLA y enfermedad no son conocidas completamente. Por
ejemplo en espondilitis anquilopoytica (EA), enfermedad invalidante y que afecta a
las articulaciones de la columna principalmente, y en la que se ha descrito una fuerte
asociacin con HLA-B27, se ha podido observar que ciertos pptidos antignicos de
origen articular serian capaces de formar un complejo con HLA-B27 que inducira
fenmenos de autoinmunidad, bien por generar en la molcula B-27 modificaciones
conformacionales que la haran no ser reconocida como propia, bien por generar
complejos HLA-pptido con cierta similitud con antgenos bacterianos que provocaran
reacciones cruzadas autoagresivas en individuos HLA-B27, previamente sensibilizados
a tales antgenos bacterianos.

En el caso de la diabetes mellitus insulino dependiente (DMID), enfermedad que cursa
con una destruccin selectiva de los islotes de Langerhans del pncreas, con infiltracin
linfocitaria, se considera que es el resultado de una respuesta autoagresiva frente a
antgenos presentes en la membrana celular
mediada por linfocitos T.

Tipaje HLA
Se denomina tipaje HLA al anlisis que se
realiza en el laboratorio para conocer las
molculas de histocompatibilidad o los
alelos HLA de un determinado individuo mediante mtodos serolgicos o de biologa
molecular (Figura Tipaje HLA). El tipaje HLA tiene especial inters en las siguientes
situaciones:
Estudio de la asociacin con distintas enfermedades. Por ejemplo las
espondiloartropatias estn asociadas a B27.
En trasplantes de rganos slidos y medula sea.
Estudios de filiacin familiar: ya hemos comentado que es el sistema ms
polimrfico en humanos y por tanto representa una alternativa ideal para estos
estudios.

Mtodo Serolgico
El mtodo serolgico ms utilizado es el test de microlinfocitotoxicidad dependiente de
complemento. ste se realiza enfrentando una poblacin de linfocitos a una batera de
anticuerpos monoclonales
especficos para cada uno de
los antgenos posibles.
Posteriormente se aade
complemento de tal manera
que en los pocillos en los que
se encuentre el anticuerpo
especfico para los antgenos
de un individuo determinado,
se producir la lisis celular que
podr ser visualizada al
microscopio.

Para visualizar la lisis, actualmente se usa una tcnica fluorescente con una mezcla de
anaranjado de acridina y bromuro de etdio. El bromuro de etdio se fija al ADN de las
clulas muertas (que aparecen de color rojo) y desplaza al anaranjado de acridina que
tie a las clulas vivas de color verde brillante. (Figura Tipaje serolgico).
Para llevar a cabo la tipificacin de los antgenos de clase II no se suelen utilizar
mtodos serolgicos porque nos obligan a purificar la poblacin de linfocitos B y puede
suponer un proceso lento y complejo. Es preferible utilizar mtodos de biologa
molecular.

Mtodos basados en tcnicas de Biologa Molecular
Las tcnicas de biologa molecular ms usadas requieren un paso previo de
amplificacin del ADN por la reaccin en cadena de la ADN polimerasa (PCR,
polymerase chain reaction).

Segn el mtodo utilizado para discriminar el material amplificado tenemos 3 mtodos
principales de tipaje: PCR-SSO, PCR-SSP y PCR-SBT. La PCR-SSO (Figura Tipaje
por biologa
molecular) se basa en
la hibridacin con
oligonucletidos
especficos de
secuencia (SSO)
fijados a membranas
de nylon del material
amplificado por PCR.
Con la tcnica de
PCR-SSP (Primers especficos de secuencia) detectamos en qu reacciones ha habido
productos de amplificacin de ADN mediante una electroforesis en gel de agarosa y en
la tcnica de PCR-SBT se hace una secuenciacin, pero slo del producto amplificado
por PCR y se compara la secuencia con diferentes patrones conocidos.

Gentica del Complejo Mayor de Histocompatibilidad
Como ya se ha dicho, los genes que codifican las molculas de histocompatibilidad se
encuentran agrupados en
el genoma formando el
Complejo Mayor de
Histocompatibilidad
(CMH) que en el humano
est situado en el brazo
corto del cromosoma 6.
(Figura: Complejo Mayor
de Histocompatibilidad)

Entre los de clase I se encuentran los genes que codifican las cadenas alfa de los
antgenos HLA-A, HLA-B y HLA-C y entre los de clase II se encuentran los pares de
genes que codifican las cadenas alfa y beta de los antgenos HLA-DR, HLA-DQ y
HLA-DP. Los genes que codifican la beta-2-microglobulina sin embargo no se
encuentran en el CMH. Este grupo de genes se heredan de acuerdo con las leyes de
Mendel, como caracteres codominantes simples.

La regin gentica de un cromosoma que contiene todos los genes HLA (a excepcin de
los que codifican la beta-2-microglobulina) se denomina haplotipo HLA
(Figura Haplotipo HLA).
As pues un haplotipo HLA incluye los genes clase I: HLA-A, HLA-B y HLA-C y los
genes clase II: HLA-DR, HLA-DQ y
HLA-DP y otros loci situados tambin en
esta regin.
Gracias a las tcnicas de biologa molecular
se ha descubierto la existencia en esta
regin de numerosos genes y pseudogenes
relacionados estructuralmente con las
molculas HLA y otros no relacionados con
las mismas.
Cada clula del organismo, (excepto las
clulas germinales), poseen un haplotipo
procedente del padre y otro de la madre.








La mayora de los genes del MHC son altamente polimrficos, es decir pueden ser
estructuralmente diferentes entre individuos de la misma especie.

Dado que cada individuo posee dos de cada uno de estos alelos por loci, el nmero de
combinaciones tericas posibles en la poblacin considerada en su conjunto es muy
alto. A menudo se describen nuevas especificidades asociadas a otras previamente
establecidas. Estas nuevas especificidades se suelen denominar especificidades
subtpicas, que aparecen por divisin de otras anteriores y a las antiguas especificidades
supertpicas. As por ejemplo, las especificidades HLA-B51 y HLA-B52 se consideran
como productos de la divisin del antgeno HLA-B5.

La secuenciacin de los genes HLA ha demostrado que el polimorfismo a nivel
genmico es mayor que el detectado a nivel serolgico. As por ejemplo existen
numerosos subtipos de HLA-A2 y numerosos subtipos de HLA-B27. Para incluir estos
suptipos se ha establecido un nuevo sistema de nomenclatura para los diferentes alelos
HLA, aadiendo 2 dgitos ms a la denominacin de 2 dgitos iniciales. Los dos
primeros dgitos seran los de la especificidad serolgica o genmica de baja resolucin
y los otros dos indicaran el subtipo de los anteriores y, como slo se detecta a nivel
genmico, se denomina genmico de alta resolucin.

Los haplotipos heredados de cada padre van a
determinar el genotipo del hijo, es decir, el
genotipo de ste ser la suma de un haplotipo
procedente de padre y otro procedente de la
madre (Figura: Herencia haplotipos). Se ilustra
grficamente todo lo anteriormente expuesto.
Como la herencia de los haplotipos se haceen
bloque de generacin, en una familia
determinada en la que el padre tiene los
haplotipos (a) = A2, B8, Cw1, DR1 y (b) = A3,
B7, Cw3, DR4 y la madre los haplotipos (c) =
A2, B7, slo Cw2, DR12 y (d) = A11, B13,
Cw3, DR15 los hijos podrn heredar cuatro combinaciones distintas de estos haplotipos,
siendo (a, b), (a, d), (b, c) y (b, d) los posibles genotipos resultantes.

Probablemente el estudio del polimorfismo de esta regin ayudar a comprender por
qu unas personas desarrollan unas enfermedades y otras no, en todo caso este avance
ser una importante herramienta para el estudio filogentico, la biologa y la evolucin
de las familias de multigenes, las poblaciones y la enfermedad.

Loci HLA-A, B, C
La regin que codifica las molculas de clase I est dividida en tres loci, conocidos
como A (Tabla I) , B (Tabla II-III) y C, (Tabla IV) que codifican tres tipos de cadenas
pesadas para las distintas molculas de clase I. Cada una de estas cadenas debe unirse a
la beta-2-microglobulina para conformar la molcula HLA.

Regin HLA-D
En la regin D se localizan los genes A y B que codifican las molculas HLA de clase II
HLA-DR (Tabla V-VI ), HLA-DQ (Tabla V ) y HLA-DP.

Los genes que codifican HLA-DR comprenden un gen DRA que codifica la cadena
DRalfa y posee escaso polimorfismo y al menos cuatro genes DRB (DRB1, 3, 4, 5) que
codifican cadenas DRbeta que contienen gran polimorfismo.

Se han descrito otra serie de pseudogenes DRB (DRB2, 6, 8) sin conocerse an su
funcin y expresin. La cadena proteica DR puede combinarse (Figura Recombinacin
genes clase II) Con las diferentes cadenas codificadas por los genes DRB dando
origen a HLA-DR (la unin de los productos de los genes HLA-DRA y HLA-DRB1) y
HLA-DRw51, 52 y 53 (la unin de los productos de los genes HLA-DRA y HLA-
DRB5, DRB3 o DRB4, respectivamente). La presencia de genes DRB3, DRB4 y DRB5
depende de la especificidad del gen DRB1 de cada persona.

Tanto las familias DQ como DP contienen diferentes genes, prximos entre s. Slo uno
de estos pares, DQA1 y DQB1 y DPA1 y DPB1, codifican las cadenas alfa y beta de las
molculas de clase II HLA-DQ y HLA-DP respectivamente. Los otros pares de genes
DQA2, DQB2 y DQB3 (pseudogen) y DPA2 y DPB2 poseen un limitado polimorfismo
y no se encuentran expresados en la superficie celular. Adems existe otra subregin
que contiene un gen A, denominado DNA, y un gen B, DOB, que podran codificar una
protena. Por otra parte tambin se encuentra una pareja de genes, HLA-DM, no
polimrficos, implicados en el procesamiento y presentacin de antgeno como se
expondr a continuacin.

Procesamiento y presentacin de antgenos
El receptor de los linfocitos T (TCR) reconoce el complejo molecular formados por las
molculas HLA clase I o clase II, a las que se han unidas pptidos resultantes de la
degradacin intracelular de
antgenos.

El TCR interacciona de forma
especfica con el pptido y las
propias molculas HLA (Figura 1).
El fenmeno de reconocimiento del
TCR fue originalmente descrito por
Zinkernagel y Doherty (1974). Estos autores demostraron que los pptidos solo son
reconocidos por el TCR cuando stos son presentados por molculas de
histocompatibilidad propias del individuo y no de otras personas.

Las clulas que exponen los pptidos unidos a molculas HLA- II, se conocen como
clulas presentadoras de antgenos (APC), mientras que aquellas que lo hacen unidos
molculas de HLA-I, se conocen como clulas diana o clula blanco.

Las clulas APC, que como decimos utilizan las
molculas HLA clase II, tienen que capturar del medio
exterior los antgenos y adems deben de
fraccionarlos hasta su degradacin en pptidos capaces
de ser presentados por las molculas de HLA-II. Los
tres tipos celulares que cumplen estos requisitos son las
clulas dendrticas, los macrfagos y los linfocitos B.
Por otra parte las clulas, que utilizan las molculas
HLA clase I, se caracterizan por presentar pptidos
procedentes del procesamiento de protenas ya
presentes dentro de la clula. Estos pptidos pueden provenir de protenas virales o de
protenas tumorales entre otros. Veamos estos procesos con detalle.

Captacin y procesamiento de antgenos por clulas APC
Las clulas APC incorporan en su citoplasma los antgenos del medio externo
mediante procesos de pinocitosis o bien de fagocitosis segn el tipo celular. Una vez
en el interior, los antgenos, forman fagosomas, que tras fusionarse con elementos de la
va endoctica culminan en la formacin de lisosomas.

En los lisosomas se realiza el procesamiento de antgenos exgenos consiste en la
desnaturalizacin y protelisis de las protenas captadas en las vesculas acdicas gracias
al pH bajo y presencia de proteasas en los lisosomas en donde las protenas endgenas
son degradadas por un complejo cataltico denominado proteosoma

La biosntesis de las molculas HLA-
II se produce en el retculo
endoplasmtico y a este complejo se
une posteriormente a una cadena
llamada invariable (Ii).

Posteriormente los complejos
formados por HLA y la cadena
invariante se trasladan al aparato de
Golgi desde donde se desvan a un compartimento de la va endoctica denominado
MIIC (Compartimento para las molculas HLA de Clase II).

En este compartimento (MIIC), (Figura 4), se inicia la proteolisis parcial de la cadena Ii,
quedndose slo unido a la molcula HLA-I la porcin de Ii que ocupa la hendidura de
unin a pptidos, llamada CLIP (class II-associated invariant chain peptide). El CLIP se
separa posteriormente, pero el dmero se mantiene estable gracias a la intervencin de
una nueva chaperona de tipo HAL, el HLA-DM, presente en el del MIIC.

Las molculas HLA-I se separa de HLA-DM si se asocia a un pptido capaz de
conferirle suficiente estabilidad. Por ltimo, el complejo estable HLA-II/pptido viaja a
la superficie celular de la APC por va vesicular (Figura Procesamiento APC).



Las molculas HLA-DM, a
diferencia de las molculas de
clase II, no se expresan en la
superficie celular, sino que
interviene en la ruta endoctica
de procesamiento para que se
pueda generar el complejo
HLA-II/pptido, sugiriendo un
papel esencial en el intercambio
entre CLIP y los pptidos ubicados en la va endoctica.

Tambin el HLA-DM ejercen funcin de chaperona, mediando la retencin en el HLA-
Ivacos o asociados a CLIP, hasta que se asocien con un pptido capaz de conferirles
alta estabilidad.



Sntesis de HLA-I y procesamiento de antgenos en clulas diana
La biosntesis de molculas HLA clase I, se realiza en el retculo endoplamtico (RE)
en donde una vez formada la cadena pesadas y la beta-2-microglobulina (beta-2-m), se
unen con la ayuda de diversas chaperonas. Despus las molculas HLA-I generadas en
el RE se desplazan al aparato de Golgi, desde donde pasan a travs del tras-Golgi y por
va vesicular, llegan a la membrana celular (Figura Procesamiento clula diana).

En concreto el proceso es como sigue: el heterodmero formado por la cadena pesada y
la beta-2-m formado en el RE es inestable en condiciones fisiolgicas y requiere de la
unin a un pptido para alcanzar una conformacin estable que le permita la salida del
retculo endoplsmico. La cadena pesada se une a una molcula llamada calnexina,
chaperona de HLA-I por excelencia, que funciona unindose a protenas de nueva
sntesis que an no se han plegado o ensamblado correctamente, retenindolas en el RE.
Cuando la beta-2-m se une a la cadena pesada, la calnexina se desplaza para que HLA-I
se una a otras chaperonas, entre ellas la calreticulina, cuya funcin es parecida a la
calnexina. El complejo calreticulina/beta-2-m se une a una tercera chaperona llamada
tapasina (Figura Procesamiento clula diana).

Las protenas endgenas son degradas en los proteosomas que son complejos catalticos
multienzimtico en donde las protenas son degradas hasta pptidos que
posteriormente sern trasladados al interior del RE con ayuda del trasportador de
pptidos TAP (Transporter Associated with antigen Processing). Para ello, el pptido
interacciona con la parte citoplasmtica de TAP provocando la hidrlisis del ATP, que
induce un cambio conformacional del transportador permitiendo el paso del sustrato al
lumen del RE.

Posteriormente las molculas HLA-I estabilizadas por los pepidos unidos a ellas son
trasportadas a la membrana celular donde quedan ancladas exponindose a los
receptroes de los linfocitos T.

Las molculas HLA como receptores de pptidos

Las molculas HLA necesitan formar complejo con un pptido para convertirse en
molculas estables y maduras. En
estado de reposo celular, las molculas
del HLA estn ocupadas por pptidos
propias, endgenas o
exgenas. Cuando el organismo es
atacado por un agente extrao, como
por ejemplo un virus, estos pptidos
naturales son desplazados por los
pptidos vricos que, durante la
infeccin, sern mayoritarios en el
interior de las clulas presentadoras.
Debido al polimorfismo de las
molculas del HLA, cada molcula de
histocompatibilidad presenta una
secuencia distinta en el lugar de unin
al pptido, lo cual implica que existan
preferencias en cuanto al patrn de
pptidos que se unirn a cada
molcula de HLA. Por otra parte, los pptidos que se unen a las molculas de HLA-I y
HLA-II presentan caractersticas especiales que describen a continuacin (Figura 7).
Las molculas de clase I unen pptidos cortos, de 8-10 aa y en general, cada molcula
de clase I puede unir de 2.000 a 10.000 pptidos distintos. En la unin tienen especial
importancia a los aminocidos en posicin 2 y 9 del pptido que son los "puntos de
anclaje" a la molcula de clase I.

Las molculas de clase II, unen pptidos de mayor tamao que las de clase I. Estos
pptidos oscilan entre 12 y 20 aa y sus puntos de anclaje a la cavidad del HLA se hace
por aminocidos situados en las posiciones extremas, generalmente, 2 o 4 y 9. El tipo
de pptido se halla sujetos a un proceso selectivo de unin que depende del alelo del
HLA-II.



BIBLIOGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/Complejo_mayor_de_histocompatibilidad
http://www.inmunologiaenlinea.es/index.php?option=com_content&view=article&c
atid=40%3Ahistocompatibilidad&id=67%3Ahistocompatibilidad&Itemid=126&sho
wall=1
http://www.uco.es/grupos/inmunologia-molecular/inmunologia/
tema05/etexto05.htm