Apuntes Biologa de la Celula BIO141-C

Maximiliano Ibaceta Acevedo

3 de julio de 2012
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Indice
I La celula como unidad Funcional 6
1. La celula es la unidad fundamental de la vida 6
2. Orgenes de la Teora Celular 6
3. Medidas Utilizadas en Biologa Celular 6
4. Clasicacion de Celulas 6
4.1. Celula Eucarionte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
4.2. Celula Procarionte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
4.2.1. Componentes moleculares de la celula . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
5. Interacciones atomicas y Macromoleculas 8
5.1. Fuerzas de interaccion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
6. Az ucares 8
6.1. Monosacaridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
6.2. Disacaridos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
II Estructura de Las protenas 9
7. Formacion del enlace peptdico 9
8. Niveles estructurales de las protenas 10
9. Funciones de las protenas 10
10.Clasicacion de protenas 11
10.1. Separacion de Protenas por Cromatografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
10.2. Separacion de Protenas por Electroforesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
11.Fraccionamiento Subcelular 13
11.1. Los organelos y las macromoleculas pueden separarse por ultracentrifugacion . . . . . . . . . . . . . . . . 13
11.2. Comparacion entre los metodos de velocidad de sedimentacion y equilibrio de sedimentacion . . . . . . . . 13
III Estructura y clasicacion de Fosfolpidos y Membranas 14
12.Estructura del colesterol 14
13.Distribucion y movimientos de los fosfolpidos a traves de la membrana plasmatica 15
13.1. Movilidad de los Fosfolpidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
14.Protenas de Membrana 15
14.1. Ejemplo de Protena Transmembrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
14.2. Reconstitucion funcional de una protena de Membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
14.3. Migracion de protenas a traves de la membrana . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
14.4. Glucocaliz . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
IV Comunicaci on Celular y Receptores 18
15.Tipos de Receptores celulares 18
15.1. Receptores de supercie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
15.2. Receptores Intracelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
15.3. Se nalizaciones intercelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
1
16.Transduccion de se nales (ligandos) 19
16.1. Velocidad de respuesta celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
16.2. Regulacion de la sensibilidad a una se nal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
17.Ligandos Lipoflicos se unen a receptores intracelulares 20
18.Receptores de Supercie Celular para Moleculas Hidrolicas 21
18.1. Receptor acoplado a Protena G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
18.2. Receptor acoplado a Enzimas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
V Transporte a traves de la membrana plasmatica 24
19.Paso de moleculas hidrosolubles a traves de la membrana 25
19.1. Transporte Pasivo asociado a protenas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
19.2. Transporte Activo: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
20.Canales ionicos y propiedades electricas de la membrana: 27
20.1. Potencial de Membrana asociado a canales ionicos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
VI Citoesqueleto y movimiento Celular: 28
21.Microlamentos o Filamentos de Actina: 29
21.1. Funciones de los microlamentos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
21.2. Estructura de la Actina: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
21.2.1. Fenomeno de nucleacion: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
21.2.2. Reguladores de la polimerizacion: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
21.2.3. Protenas asociadas a la actina: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
22.Microt ubulos 34
22.1. Funciones: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
22.2. Estructura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
22.2.1. Regulacion de la dinamica de los MTs: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
22.2.2. Protenas Motoras que se mueven a lo largo de los microt ubulos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
23.Filamentos Intermedios 36
23.1. Organizacion Estructural: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
23.2. Comparacion deformacion/tension entre los componentes del citoesqueleto: . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
23.3. Tipos de lamentos intermedios: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
23.3.1. Tipo I: Queratinas - Quinasas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
23.3.2. Tipo II: Familia de las vimentinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
23.3.3. Tipo III: Neurolamentos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
23.3.4. Tipo IV: Laminas nucleares. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
VII N ucleo, ADN y replicaci on. 38
24.Estructura y organizacion del n ucleo: 38
24.1. La matriz nuclear y la lamina nuclear: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
24.1.1. Poros nucleares: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
25.Organizacion del ADN y Cromosomas 40
25.1.

Acidos nucleicos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
25.1.1. Apareamiento de bases nitrogenadas en la cadena de ADN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
26.Replicacion del ADN 42
26.0.2. Polimerizacion en la Hebra retardada: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
VIII Transcripci on y Traducci on: 44
27.Estructura del ARN: 44
2
28.Transcripcion: 44
28.1. Reconocimiento de la hebra molde: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
28.1.1. Promotor: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
28.1.2. Inicio de la Transcripcion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
28.2. Fase de elongacion: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
28.3. Termino de la sntesis de RNA en procariontes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
28.3.1. Termino independiente de la protena : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
28.3.2. Termino dependiente de la protena : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
28.4. Detalles de la transcripcion en Eucariontes (Maduracion del mRNA): . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
29.Componentes Fundamentales de la traduccion: 48
29.1. Ribosomas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
29.2. ARN de transferencia y el codigo genetico: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
29.2.1. El codigo genetico: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
29.3. El proceso de traduccion: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
29.3.1. Elongacion: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
29.3.2. Termino: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
29.3.3. Procesos posttraduccionales: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
IX Retculo Endoplasmatico: 51
30.Generalidades de la expresion genica: 51
31.El retculo endoplasmatico: 51
31.1. Protenas y su transporte hacia el RE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
31.1.1. Funciones del Retculo endoplasmatico Rugoso: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
31.1.2. Funciones y caractersticas del Retculo endoplasmatico Liso: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
31.1.3. Otras funciones del RE: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
32.Sntesis de Protenas en una ruta Exoctica: 52
32.1. Sntesis Proteica a nivel reticular: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
32.2. Tipos de protenas Sintetizadas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
32.3. Modicaciones Post-traduccionales: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54
33.Respuesta al plegamiento defectuoso de protenas en la ruta exoctica: 55
33.1. Ciclo de glucosilacion/deglucosilacion a nivel del RE: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
33.2. Retro-Translocacion de protenas mal plegadas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
33.3. El plegamiento defectuoso genera se nales UPR(Unfolded Protein Response) hacia el n ucleo . . . . . . . . 57
33.3.1. Inductores del UPR: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
X Aparato de Golgi: 58
34.Organizacion de las funciones de las Cisternas del Golgi: 58
35.Procesamiento de Oligosacaridos en el Aparato de Golgi 59
36.Procesamiento Proteoltico de protenas: 60
XI Mecanismos moleculares del transporte vesicular: 61
37.Etapas en la formacion de vesculas: 61
38.Etapas del transporte vesicular: 61
38.1. Iniciacion, Yemacion y Escicion: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
38.1.1. Vesculas revestidas por COP: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62
39.Celulas epiteliales como modelo de la destinacion de protenas en el aparato de Golgi: 64
40.Protenas adaptadoras y su funcion en vesculas revestidas de clatrina: 64
40.1. Protenas de cubierta adaptadoras complejo AP: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
3
41.Fusion de vesculas con el organelo o membrana diana: 65
42.Direccionalidad de proceso y protenas RABs: 65
XII Ciclo Celular: 67
43.Estimacion de la duracion de las etapas del ciclo celular: 67
44.Deteccion del Factor promotor de la Mitosis MPF: 68
44.1. Ciclinas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69
44.1.1. Mecanismo molecular de activacion e inactivacion de Cdk1-M (MPF) . . . . . . . . . . . . . . . 69
44.1.2. Control de la proteolisis de ciclinas mediante APC/C (Complejo promotor de la anafase): . . . . . 70
45.Sitios de Control del ciclo celular: 71
46.Control del Ciclo celular en organismos Multicelulares: 71
46.1. Efectos Tempranos y Tardos de Los oncogenes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72
46.1.1. Oncogenes y Genes supresores de tumores: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72
46.1.2. Retinoblastoma Humano: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
XIII Mecanismos de la divisi on celular: 75
47.Etapas de la mitosis: 75
47.1. Profase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
47.2. Prometafase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
47.3. Metafase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
47.4. Anafase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
47.5. Telofase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
47.6. Citocinesis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
48.Detalles de la division Celular: 78
48.1. Condensacion de los cromosomas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
48.1.1. Condensinas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
48.1.2. Cohesinas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
48.2. Formacion del Huso mitotico: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79
48.2.1. Cinetocoro: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80
48.3. Complejo Promotor de la Anafase APC/C: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80
48.4. Detalles de la anafase y la migracion cromosomica: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
48.5. Detalles de la Telofase y citocinesis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
48.5.1. Telofase: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
48.5.2. Citodieresis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
49.Telofase Vegetal: 83
50.Mitosis Carente de G1: 84
XIV Meiosis 84
51.Etapas de la Meiosis: 85
51.1. Meiosis 1: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
51.1.1. Profase I: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
51.1.2. Metafase I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
51.1.3. Anafase I y Telofase I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
52.Ovogenesis y Espermatogenesis 88
52.1. Ovogenesis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88
52.2. Espermatogenesis: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88
4
53.Cromosomas 89
53.1. Cromosomas Politenicos: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89
53.2. Cromosomas Plumulados: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89
53.3. Cariotipo Humano: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89
53.3.1. Preparacion de un Cariotipo de Sangre: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
53.4. Clasicaci on de modelos de cromosomas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
53.4.1. Nomenclatura en citogenetica de cromosomas bandeados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
54.Sndrome de Down. 91
XV Estructura y Funcion de la Mitocondria 92
55.Estructura de la Mitocondria: 92
56.Teora Endosimbiotica: 93
57.Importacion de Protenas la mitocondria. 93
58.Sntesis de ATP: 94
58.1. Fosforilacion oxidativa y cadena transportadora de electrones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94
58.2. Detalles de la cadena transportadora y el acoplamiento quimiosmotico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
58.2.1. Potencial Redox asociado a la cadena transportadora de electrones: . . . . . . . . . . . . . . . . . 96
58.2.2. La ATP Sintasa: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96
XVI Matriz extracelular y moleculas de ahesi on celular 97
59.Fibroblastos y componentes de la ECM: 97
59.1. Protenas Fibrilares: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97
59.1.1. Colageno: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97
59.1.2. Elastina: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 98
59.2. Protenas no Fibrilares: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
59.2.1. Fibronectina: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
59.2.2. Laminina: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
59.3. Proteoglicanes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
59.4. Laminas Basales: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100
60.Moleculas de Adhesion. Interaccion celula-celula y celula-matriz: 100
61.Uniones Celulares: 101
61.1. Uniones estrechas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
61.2. Anclaje celular: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
61.2.1. Uniones adherentes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 102
61.2.2. Desmosomas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
61.2.3. Hemidesmosomas: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
61.2.4. Adhesiones focales: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
61.3. Uniones de comunicacion (Gap junctions): . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103
XVII Tarea 1: Por que el ADN contiene Timina en vez de Uracilo? 105
A. Desaminacion de la Citosina y correccion en el ADN mediante enzimas 105
B. Por que el ADN utiliza una base metilada (timina) y no lo hace en el ARN? 106
5
Parte I
La celula como unidad Funcional
1. La celula es la unidad fundamental de la vida
La celula es la unidad estructural, funcional y de herencia de la vida.
Una celula es capaz de:
Procesar informacion y responder a estmulos.
Realizar reacciones qumicas complejas.
Crecer y reproducirse.
Cambiar/adaptarse
2. Orgenes de la Teora Celular
Los primeros dos postulados de esta teora fueron establecidos por Matthias Schleiden (1838) y por Theodor Schwann
(1839) . El tercero fue realizado por Virchow en 1855.
La Teora Celular arma:
1. Todos los organismos vivos estan compuestos por celulas. Primera evidencia: Laminas de corcho (Hooke)
2. La celula es la unidad estructural de la vida.
3. Todas las celulas se originan a partir de celulas pre-existentes.
3. Medidas Utilizadas en Biologa Celular
La medida mas comoda para cuanticar longitud en la celula es el micrometro ()m = 10
6
m.
Equivalentemente para los organelos, la medida a utilizar es el nanometro nm = 10
9
m.
Imagen que muestra la relacion entre los tama nos de distintas estructuras celulares
4. Clasicaci on de Celulas
Seg un el tama no y la complejidad celular estas se pueden clasicar en:
6
4.1. Celula Eucarionte
tama no entre 10-100m
Caracterizada por su envoltura nuclear denida
organizacion interna mas compleja, presencia de organelos)
delimitados por membrana plasmatica
Ejemplos: animales, plantas, hongos y protozoos
4.2. Celula Procarionte
tama no entre 1-10 m
material genetico sin envoltura nuclear (nucleoide)
organizacion interna relativamente simple
delimitados por membrana plasmatica (en algunos casos, pared celular)
eubacterias, arqueobacterias
4.2.1. Componentes moleculares de la celula
Del 30 % de peso seco molecular, la mitad corresponde a estructuras proteicas.
7
5. Interacciones at omicas y Macromoleculas
5.1. Fuerzas de interacci on
Existen cuatro tipo de fuerzas interatomicas que permiten la union entre las estrcuturas moleculares de la celula:
Enlace covalente
Longitud de 0.15 nm
Corresponde a la interaccion mas potente entre dos atomos en donde estos comparten electrones para estabili-
zarse. No es casualidad que el carbono sea la estructura central de la celula pues sus enlaces C-C
tienen una energia cercana a los 100 Kcal/mol
Fuerza en agua : 90 Kcal/mol
Enlace Ionico
Longitud de 0.25 nm
Atraccion electrostatica producida por dos atomos completamente cargados.
Fuerza en agua : 3 Kcal/mol
Puentes de hidrogeno
Longitud de 0.30 nm (medido desde el centro del atomo central. medido desde el principio de la interaccion la
longitud no supera los 0.17 nm)
Para producirse es necesaria la presencia de moleculas con alg un area polar y que la interaccion sea estricta-
mente entre H-F, H-O y H-N.
Fuerza: 1 Kcal/mol
No es una interaccion estatica, constantemente se estan formando y deshaciendo enlaces por puentes de H
Fuerzas de van del Walls (Atraccion natural entre atomos)
Longitud de 0.35 nm
Atraccion natural entre atomos, es mas fuerte a medida que aumenta la cantidad de atomos que interactuan
Fuerza: 0.1 Kcal/mol
Enlaces debiles participan en el reconocimiento entre Macromoleculas(i.e : subunidades proteicas)
6. Az ucares
Las macromoleculas se forman a partir de unidades individuales identicables llamads monomeros. En esta seccion se
estudiaran las macromoleculas compuestas por uniones de monosacaridos.
6.1. Monosacaridos
Los monosacaridos presentan una formula general de C
n
H
2n
O
n
donde n vara entre 3 y 7.
Los monosacaridos mas comunes son las hexosas y existen 3 tipos principales:
1. Glucosa
2. Galactosa
3. Fructosa (Manosa)
6.2. Disacaridos
El carbono que lleva el grupo aldehdo o cetona puede reaccionar con cualquier grupo OH de otra molecula, formando
un enlace glucosdico. En cada union por condensacion se libera una molecula de agua.
1. Maltosa = Glucosa + Glucosa
2. Lactosa = Galactosa + Glucosa
3. Sacarosa = Glucosa + Fructosa
8
Repetitivas uniones forman oligosacaridos y posteriormente polisacaridos.
Una de las muchas importancias de los Oligosacaridos para nuestro organismo se ejemplica en que
nuestro grupo sanguneo esta determinado por el tipo de estos az ucares en la membrana celular de los
globulos rojos.
Parte II
Estructura de Las protenas
Las proteinas constituyen alrededor de la mitad de las estructuras celulares y desempe nan la mayora de funciones
para mantener la actividad celular.
Aminoacidos: Constituyen la unidad basica de las proteinas, son anfoteros: Neutralizan tanto acidos como bases
Esta cualidad esta intimamente relacionada a la estructura qumica de los aminoacidos. El grupo amino libera protones
en un medio basico y el grupo carboxilo es capaz de aceptar protones en presencia de un medio acido.
Estructura com un a los aminoacidos
El grupo radical determina al aminoacido y bajo este grupo existe una nueva clasicacion:
Grupos Radicales no Polares: Prolina, Leucina, Fenilalanina
Grupos Radicales Polares sin carga: Glicina, Serina.
Grupos Radicales con carga positiva: Lisina.
Grupos Radicales con carga negativa: Aspartato
Protenas: Las Protenas se pueden denir como polmeros formados por la union mediante Enlaces peptdicos de
aminoacidos.
Las protenas con macromoleculas
Compuestos mas abundantes de la materia viva
Son altamente especcas
A traves de ellas se expresa la informacion genetica.( Dogma central de la biologa molecular )
7. Formacion del enlace peptdico
El enlace se forma entre los grupos carboxilo del aminoacido 1 y el grupo amino del aminoacido numero 2. En esta
union se libera una molecula de agua (sntesis por deshidratacion) y se forma un dipeptido.
Enlace peptdico
9
Cisteina: Este aminoacido posee en su estructura un radical tipo CH
2
SH que permite la union con otras cistenas
dentro de la misma estructura proteica o con otras subunidades, facilitando el plegamiento molecular de la protena. El
complejo Cisteina-Cisteina se denomina Cistina.
Existe otro aminoacido que tambien presenta S en su estructura pero no forma puentes disulfuro, hablamos de la
Metionina
Protenas de membrana: las protenas de la supercie celular a menudo forman enlaces covalentes adicionales intra-
catenarios. Sin embargo rara vez forman enlaces de tipo disulfuro, pues el plegamiento de las protenas normalmente tiene
lugar en presencia de agentes reductores que impiden la formacion de enlaces S-S
Interaccion entre Cisteinas en la molecula de la insulina
Urea y Mercaptoetanol : Estos dos compuestos actuan como agentes denaturantes de la estructura terciaria de la
protena pues afectan los enlaces disulfuro, actuan como agentes reductores (que oxidan) devolviendoles su estructura SH
individual a cada Cistena. Sin embargo, las protenas pueden renaturalizarse mediante la dialisis.
8. Niveles estructurales de las protenas
1. Estructura Primaria: Determinada por la secuencia de aminoacidos.
2. Estructura Secundaria: Plegamiento basico de la cadena debido a interacciones por puentes de hidrogeno, o puentes
disulfuro entre los grupos de la union peptdica. Estructura de helice (Globulares) o de plegada (Fibrosas)
3. Estructura Terciara: Vision tridimensional de la protena.
4. Estructura Cuaternaria: Union de subunidades terciarias proteicas (Hemoglobina).Filamentos de actina (estructura
cuaternaria, se unen entre s mediante interacciones no covalentes.
Es importante aclarar que existen proteinas funcionales tanto en estructura terciaria (i.e : mioglobina) como en estructura
cuaternaria (i.e : insulina)
Fuerzas que mantienen la estructura terciaria:
Tipo hidrofobico (en ambiente acuoso)
Enlaces de hidrogeno
Interacciones ionicas
Enlaces Disulfuro
9. Funciones de las protenas
1. Transporte: Hemoglobina
2. Enzimatica: Lisozima.
3. Homeostatica: Insulina
4. Estructural: Colageno
5. inmunologica: Inmunoglobulinas
6. movimiento: Actina y Miosina
7. Reserva: (Funcion utilizada solo cuando se acaban las reservas de hidratos de carbono y lpidos)
10
10. Clasicaci on de protenas
I. Seg un presencia o no de un grupo prostetico:
Protenas simples: Solo estan formadas por protena
Protenas conjugadas :Estan formadas por la protena mas un grupo no proteico llamado grupo prostetico
II. Seg un estructura global:
Protenas brosas y protenas globulares
10.1. Separaci on de Protenas por Cromatografa
Las protenas se suelen fraccionar mediante la cromatografa en columna , en la que una mezcla de protenas en
solucion se hace pasar a traves de una columna que contiene una matriz solida porosa. Las diferentes protenas de la
mezcla se van retrasando mas o menos a causa de su interaccion con la matriz de la columna y pueden recogerse por
separado en su estado funcional nativo a medida que uyen por el extremo inferior de la columna. En funcion del tipo de
matriz que se utilice, las protenas se pueden separar seg un:
su carga: Cromatografa de intercambio ionico
su hidrofobicidad: Cromatografa hidrofobica
su tama no: Cromatografa de Filtracion
su capacidad para unirse a determinados grupos qumicos: Cromatografa de anidad.
Cromatografa de Intercambio ionico Cromatografa de Filtracion en Gel Cromatografa de anidad
Cromatografa de intercambio ionico: La matriz insoluble presenta cargas ionicas que retardan las moleculas de
carga opuesta. Las mas utilizadas son las de dietilaminoetilcelulosa (DEAE-Celulosa), de carga positiva y la fosfocelulosa,
de carga negativa. La fuerza de union entre las moleculas disueltas y la matriz depende de la fuerza ionica y del pH de la
solucion que atraviesa la columna. Estos dos parametros pueden variarse para obtener una separacion mas efectiva.
Cromatografa de Filtracion en Gel: La matriz es inerte pero porosa. Las moleculas sucientemente peque nas para
penetrar en el interior de la matriz se retrasan y viajan mas lentamente a traves de la columna. Las esferas porosas mas
comunes son polisacaridos como el dextrano o agarosa.
Cromatografa de anidad: utiliza una matriz insoluble que esta unida covalentemente a un ligando especco (i.e
substrato enzimatico), que se unira a una protena determinada de la muestra. Las moleculas de enzima que se han unido
a los substratos inmovilizados en columnas de este tipo se pueden liberar con una solucion concentrada del substrato en
forma libre, mientras que moleculas que se han unido a anticuerpos inmovilizados pueden eluirse disociando el complejo
antgeno-anticuerpo con soluciones concentradas de sales o soluciones con pH alto o bajo. Suelen ser las mas efectivas al
poder conseguir un alto grado de pureza en solo una pasada por estas columnas.
11
10.2. Separaci on de Protenas por Electroforesis
Las protenas suelen tener una carga neta positiva o negativa, que reeja la de los aminoacidos cargados que contiene.
Al aplicar un campo electrico a una solucion que contenga una molecula proteica, la protena migrara a una velocidad
dependiente de su carga, tama no y forma. Esta tecnica se conoce como electroforesis.
Actualmente este tipo de separacion se realiza en conjunto con SDS, mercaptoetanol y gel de poliacrilamida.
distintas cadenas polipeptdicas forman un complejo con las mol eculas cargadas negativamente de
SDS (Dodecil sulfato s odico), para luego migrar hacia el anodo (polo positivo) a trav es de la
soluci on porosa de poliacrilamida. A trav es de esta t ecnica se puede determinar de forma
aproximada el peso molecular de la protena asi como tambi en de la composici on de subunidades de
la protena. Sin embargo, si la protena presenta variados grupos prost eticos de carbohidratos, su
desplazamiento ser a an omalo, de forma que su peso molecular estimado ser a erroneo.
12
11. Fraccionamiento Subcelular
De la misma forma que un tejido puede ser disgregado en sus diferentes tipos celulares vivos, la celula puede ser
fraccionada en sus organelos y macromoleculas funcionales.
11.1. Los organelos y las macromoleculas pueden separarse por ultracentrifugaci on
Para lograr la separacion de los organelos celulares se utiliza el proceso de ultracentrifugacion donde un rotor gira
a alta velocidad y aumenta la fuerza de gravedad sobre la solucion. Sin embargo, para poder diferenciar organelos, en
primer lugar,debemos realizar una centrifugacion diferencial para generar un comlejo denominado homogenado celular.
el
cual contiene organelos libres en solucion.
El complejo precipitado se denomina pellet, y el no precipitado sobrenaturante
11.2. Comparaci on entre los metodos de velocidad de sedimentaci on y equilibrio de se-
dimentaci on
Velocidad de sedimentacion: la muestra se coloca sobre una solucion diluida de sacarosa y los componentes sub-
celulares sedimentan a velocidades dependiente de su tama no. Para estabilizar las bandas que sedimentan y evitar que
se mezclen, el tubo contiene un gradiente continuo de sacarosa que aumenta de concentracion hacia el fondo del tubo.
Despues de la centrifugacion, los componentes pueden recogerse por separado.
Equilibrio de Sedimentacion: Cuando los componentes subcelulares se centrifugan en un gradiente, pueden despla-
zarse hacia arriba o abajo hasta que alcanzan una zona en que su densidad esta comprendida entre las densidades vecinas
del gradiente. En este Equilibrio se utiliza un gradiente discontinuo de sacarosa (20-70 %). Sin embargo, para la separacion
de protenas y de acidos nucleicos se utilizan gradientes preparados con cloruro de cesio. Cada organelo posee estructuras
propias, por lo que existen enzimas marcadoras para marcar distintos organelos. Por ejemplo:
Lisosomas: Fosfatasa acida
Peroxisomas: Catalasa
Mitocondrias: Citocromo-C Oxidasa
Golgi: Galactocil Transferasa
RER: Glucosa-6-Fosfatasa
13
Parte III
Estructura y clasicaci on de Fosfolpidos y
Membranas
Los fosfolpidos son estructuras que presentan una cabeza polar y una cola formada por cadenas de acidos grasos
altamente hidrofobicas. La cabeza polar esta formada por un grupo colina con carga positiva, un grupo fosfato PO
4
con
carga negativa, y una molecula de glicerol.
Principales fosfolpidos de las membranas plasmaticas en mamferos
1. Fosfatidiletanolamida
2. Fosfatidilserina
3. Fosfatidilcolina
12. Estructura del colesterol
Facilmente caracterizable por su anillo esteroidal. Posee tambien una cabeza polar y una cadena hidrocarbonada
apolar.
Estructura del colesterol
La molecula de colesterol tiene una funcion importante en la membrana plasmatica: Participa en la regulacion de la rigidez
de esta. A bajas temperaturas estimula el movimiento y la uidez de la membrana, al contrario aumenta su rigidez para
mantener unida a esta estructura celular.
14
13. Distribuci on y movimientos de los fosfolpidos a traves de la membrana
plasmatica
La distribucion de fosfolpidos y glucolpidos a traves de la membrana plasmatica es asimetrica. Generalmente, los
fosfolpidos con carga neta negativa quedan mirando hacia el interior de la celula.
La membrana plasmatica se caracteriza por ser una bicapa fosfolipdica donde las cabezas polares miran hacia el
exterior y el interior celular, mientras que las colas hidrofobicas quedan mirandose entre si al interior de la membrana.
13.1. Movilidad de los Fosfolpidos
Existen cuatro movimientos comunes al movimiento de los Fosfolpidos a traves de la membrana plasmatica, recordando
que esta no es rgida:
1. Flexion: Movimiento en donde se estira o se acorta la distancia entre las 2 colas hidrofobicas de los Fosfolpidos.
2. Rotacion: Movimiento en donde el Fosfolpido gira sobre su eje.
3. Flip-Flop (Difusion transversal): Este tipo de accion es escasa pues requiere gran cantidad de energa para
mover un fosfolpido a traves de la bicapa (de un extremo a otro).
4. Difusion lateral: Desplazamiento horizontal de cada fosfolpido.
14. Protenas de Membrana
Aunque la estructura basica de las membranas biologicas esta determinada por la bicapa lipdica, la mayora de
sus funciones especcas estan desempe nadas por protenas. Existen 6 sistemas comunes de asociacion de protenas a la
membrana plasmatica:
1. Helice unica.
2. Helices multiples.
3. Union covalente con un lpido.
4. A traves de un oligosacarido.
5. Interacciones no covalentes con otras protenas de membrana. Union de una protena intrinseca con una periferica.
Organizacion de protenas a traves de la bicapa lipdica
14.1. Ejemplo de Protena Transmembrana
15
En esta figura observamos una de las estructuras m as comunes en las protenas integrales, la
-helice. No es un detalle menor que los amino acidos expuestos a las colas apolares de los
fosfolpidos corresponden a amino acidos estrictamente apolares como por ejemplo: Leucina,
Alanina, Triptofano.
Del mismo modo existe en menor medida presencia de amino acidos polares pero sin carga neta como
la Glicina
14.2. Reconstitucion funcional de una protena de Membrana
Al estudiar el comportamiento de cierta protena de membrana, primero es necesario aislarla del resto de las protenas
y generar una nueva membrana compuesta en su totalidad por la protena a investigar. La adicion de un detergente
como el SDS disuelve la membrana plasmatica y se puede obtener la protena de interes asociada al detergente y a restos
fosfolipdicos de la membrana (formando micelas debido a la interaccion con el medio acuoso y la naturaleza hidrofobica de
estos lpidos). Posteriormente se procede a puricar la protena y remover el detergente. Finalmente se a naden fosfolpidos
para formar una bicapa compuesta por la protena a estudiar.
Puricacion de la bomba Na-K
14.3. Migraci on de protenas a traves de la membrana
Un experimento que utiliza marcajes uorescentes a distintas protenas permite demostrar que las protenas no per-
manecen rgidas en la membrana plasmatica sino que tambien presentan uidez
Movimiento de protenas uorescentes a traves de la membrana del heterocarion.
16
14.4. Glucocaliz
El termino cubierta celular o glucocaliz se utiliza a menudo para describir la zona de la supercie celular rica en
carbohidratos.
En principio la diversidad y la posicion expuesta de estos polisacaridos en la supercie celular les hace especialmente
indicados para participar en procesos de reconocimiento celular.
Glucocaliz en un acercamiento por microscopio optico
17
Parte IV
Comunicaci on Celular y Receptores
Se nales Externas inducen respuestas a nivel celular que permiten la adaptacion y supervivencia del organismo. Las
celulas constantemente estan censando el medio.
15. Tipos de Receptores celulares
Las ligandos mas comunes a los que se pueden ver enfrentadas las celulas son se nales de tipo:
Protenas
Peptidos
Derivados de aminoacidos
Lpidos
Luz
Gases
Movimientos mecanicos
15.1. Receptores de supercie
La mayora de las moleculas se nal son hidroflicas, por lo que son incapaces de atravesar directamente la membrana
plasmatica; en lugar de ello se unen a receptores ubicados en la supercie celular. Componentes del receptor:
1. Dominio extracelular: participa en la recognicion del ligando
2. Dominio de transmembrana: Lleva la se nal del medio extracelular al intracelular
3. Dominio intracelular: Transmite y propaga la se nal.
15.2. Receptores Intracelulares
Muchas de estas peque nas moleculas se nal son hidrofobicas por lo que presentan una facilidad para atravesar por la
membrana plasmatica. La mayora de estas moleculas se encuentran asociadas a proteinas carrier o transportadoras.
El ligando difunde directamente a traves de la membrana. El complejo Ligando-Receptor activa directamente la expresion
de genes del n ucleo.
15.3. Se nalizaciones intercelulares
Cada celula est a programada para responder a combinaciones especcas de se nales.
1. Se nalizaciones Paracrinas: La celula productora de la se nal, afecta solamente a las celulas en una vecindad a
ella
2. Se nalizaciones Autocrinas: La misma celula produce una se nal que es captada por receptores de ella misma
18
3. Se nalizacion dependiente de contacto: La celula productora, exocita una se nal que va a parar directamente
a un receptor de membrana de otra celula que esta en contacto directo con la primera.
4. Se nalizacion Endocrina: Celulas endocrinas liberan su contenido al torrente sanguineo, distribucion a todo el
cuerpo, pero solamente las celulas que posean en sus membranas receptoras de esta se nal, responderan al estmulo.
Ademas, un tipo de estmulo no asegura que la respuesta en las celulas receptoras sea la misma.
El tiempo de respuesta de la se nalizacion endocrina es lento comparada con la sinaptica pero afecta a una gran
cantidad de celulas
Misma se nal (Adrenalina) produce respuestas diferentes entre las celulas cardiacas y las celulas hepaticas
5. Se nalizacion Sinaptica: Se nales electricas y liberacion de neurotransmisores lejos del cuerpo celular (Dendrita-
Axon). El tiempo de respuesta de este tipo de se nal es mas rapido pero a la vez mas especco.
16. Transduccion de se nales (ligandos)
El proceso de Transduccion celular lo podemos resumir en 3 pasos. En primer lugar existe una captacion de se nal
(Extra o intracelular) que transforma esta se nal al lenguaje interno celular, mediante una accion de relevo. Esta nueva
se nal es amplicada hacia numerosos segundos mensajeros que tienen como funcion dar origen a la respuesta celular
que puede ser:
Alteracion del metabolismo
Alteracion celular o movimiento
Alteracion de la expresion genica
Es importante aclarar que no todas las respuestas nalizan en una alteracion a la expresion genica. Pues
respuestas a determinadas se nales pueden ser simplemente llevar a cabo la activacion de enzimas que no
necesitan ser codicadas, ya que estaban presentes en la celula en su forma inactiva.
16.1. Velocidad de respuesta celular
Las respuestas celulares que requieren de activacion de genes para la codicacion de protenas requieren un tiempo
mayor (minutos-horas) que si solamente se necesitase la activacion o la alteracion de una estructura proteica (segundos-
minutos). Sin embargo, ambas son efectivas y alteran el comportamiento celular en respuesta a la se nal recibida.
16.2. Regulaci on de la sensibilidad a una se nal
Existen 5 formas en las que una celula puede regular la sensibilidad de respuesta a una se nal:
1. Secuestro del receptor
2. Degradacion del receptor
3. Inactivacion del receptor
4. Inactivacion de una protena se nalizadora (i.e: Protenas G)
5. Produccion de una protena inhibitoria
19
17. Ligandos Lipoflicos se unen a receptores intracelulares
El ligando (hidrofobico) viaja unido en una protena carrier para atravesar directamente la membrana plasmatica y
alterar la expresion genica.
Receptores nucleares: En la mayora de los casos donde el ligando posee caractersticas lipdicas la respuesta esta re-
lacionada a la expresion genica de nuevas protenas. Los receptores nucleares corresponden a protenas que regulan esta
expresion moduladas por la interaccion con el ligando. No requiere necesariamente de la accion de segundos
mensajeros.
El receptor nuclear en ausencia de ligando se encuentra a unido a una protena inhibitoria para mantenerlo en su estado
inactivo. En presencia del ligando la protena inhibitoria deja cede su lugar para comenzar la transcripcion de genes. Es
importante destacar que el receptor nuclear posee en su estructura un sitio de union al DNA para la codicacion precisa
de la protena necesitada.
Existen dos tipos de respuesta para a esta se nal:
20
18. Receptores de Supercie Celular para Moleculas Hidrolicas
As como existen ligandos hidrofobicos, tambien se encuentran en el medio extracelular se nales de tipo hidroflicas. La
forma de transduccion de estas se nales pueden ser de dos formas:
1. Receptores asociados a Protenas G
2. Receptores asociados a Enzimas.
Paralelo a estos dos procesos existe un tipo de se nalizacion que caracteriza el Encendido y apagado de protenas a lo
largo de la transduccion y ampliacion de la se nal. Este switch esta relacionado a la accion de tres protenas enzimaticas:
1. Protena Quinasa: Cuya funcion es Transformar ATP en ADP para fosforilar y encender una protena
2. Protena Fosfatasa: Remueve el fosfato de la protena activa para apagarla.
3. Adenilato Ciclasa: Transforma el ATP a AMPc Liberando 2 grupos fosfatos.
18.1. Receptor acoplado a Protena G
Una protena receptora activada por una se nal extracelular genera un cambio conformacional de las subunidades , ,
de la Protena G. Mediante una molecula de GTP se activa y se separa la unidad , tras esta activacion tambien se
genera un complejo activo que permite la transduccion de la se nal a receptores intracelulares
Posterior a la transduccion interna de la se nal extracelular, mediante la accion de enzimas especcas se deben liberar
los segundos mensajeros que funcionan como Amplicadores de la se nal. Existen dos tipos de segundos mensajeros
Via del AMPc
Via del Ca
2+
Existen distintos tipos de protenas G que activan distintas enzimas para favorecer la accion de los segundos mensa-
jeros. Las familia mas relevante sin embargo, es la de las Protenas Gs : activa los canales de Ca y la adenilato Ciclasa
y las Protenas Gq : activan la fosfolipasa C que participa en la liberacion del Ca
2+
como segundo mensajero.
Activacion de Protena Gs
21
Protena G activa a la adenilato ciclasa para formar AMPc (Segundos mensajeros) + 2 grupos fosfatos que activan la
PKA(Protena quinasa dependiente de AMPc).
PKA o protenas quinasas dependientes del AMPc : El PKA puede regular tanto la expresion genica alterada
en respuesta a una se nal, como estimular funciones metabolicas y homeostaticas de la celula. La regulacion del metabo-
lismo por PKA es un proceso rapido comparado con la accion de la misma protena de relevo sobre la expresion genica
(Principalmente porque la respuesta genetica suele ser mas lenta, ademas que existe una mayor cantidad de relevos en la
propagacion de la se nal).
Activacion de Protena Gq
Protena G activa a la Fosfolipasa C para liberar IP
3
que abre los canales de Ca
2+
(Segundos mensajeros) que activan la
PKC(Protena quinasa dependiente de Calcio).
Un descubrimiento importante a partir del uso del Calcio como Segundo Mensajero es su inmediata actividad en el ovocito
tras fertilizacion. Con el paso del tiempo se observa como este ion se libera a la celula y la recorre en un tiempo cercano
a los 3 minutos.
18.2. Receptor acoplado a Enzimas
Existen 6 clases principales de receptores acoplados a enzimas:
1. Receptor Tirosina Quinasas
2. Receptor asociado a Tirosina Quinasas
3. Receptor Serina/Treonina quinasas
4. Receptor asociado a Histidina Quinasas
5. Receptor Guanilato Ciclasa
6. Receptor-like Tirosina Fosfatasa
Los receptores mas estudiados en esta seccion corresponden a los receptores asociados a Tirosina Quinasas. Recordemos
que las protenas Quinasas tienen como funcion Transformar ATP a ADP para fosforilar y encender una protena.
Activacion de RTK (Receptores con actividad Tirosina Quinasa)
22
La presencia del ligando en los receptores celulares RTK, activa este complejo produciendo una autofosforilacion cruzada
entre los dominios Tirosina Quinasas
Autofosforilacion de RTKs: Un aumento en la autofosforilacion de RTKs puede conseguir dos resultados. Un
aumento en la actividad de Tirosina Quinasa del receptor (Mantencion de la fosforilacion cruzada) y la union de este
complejo con protenas se nalizadoras o adaptadoras para seguir el curso de la transduccion de la se nal hacia las protenas
RAS.
Protena Ras: Una protena RAS es una protena G monomerica, especcamente es una peque na GTPasa que alterna
dos conformaciones estructurales:
Una forma activada, donde la protena RAS esta unida al guanosn trifosfato (GTP), llamada RAS-GTP.
Otra forma inactivada, donde la protena RAS esta unida al guanosn difosfato (GDP), llamada RAS-GDP
Las protenas Ras son activadas por los receptores TirosinaQuinasas
Activacion de protenas Ras
En su forma inactiva la proteina Ras se encuentra asociada a una molecula de GDP, Tras la activacion de las RTKs y
el encendido de las protenas se nalizadoras, la protena Activadora Ras Cambiar el GDP por GTP dejando a la protena
Ras en su forma activa
La Activacion de las protenas Ras Permite realizar el relevo de la se nal a otros modulos de se nalizacion. Por ejemplo
MAPKs
Relevo a MAPKs
23
Parte V
Transporte a traves de la membrana plasmatica
En esta seccion se revisan dos tipos de transporte asociado a protenas:
1. Transporte de solutos mediados por protenas de membrana:
Transporte Activo
Transporte Pasivo
2. Canales ionicos y propiedades electricas de la membrana plasmatica.
Conceptos basicos:
Difusion por gradiente de concentracion: Principio basico de la membranas permeables de soluto. Las molecu-
las se mueven de lugares de mayor concentracion a zonas de menor concentracion. En el equilibrio no cesa el
movimiento, sin embargo el movimiento neto de partculas es 0.
Osmosis: Membrana no permeable al soluto, pero si permeable al solvente: Sea la concentracion de soluto A mayor
que la concentracion en B,A y B unidos por la membrana, el agua trata de moverse desde B a A para diluir el soluto
concentrado. En el equilibrio ambas soluciones tienen igual concentracion Molar de soluto.
Osmoralidad: Cantidad de soluto presente en la solucion, sin importar su naturaleza. La osmoralidad vara si es
que el compuesto se disocia o se asocia en el medio acuoso. Una mayor osmoralidad provoca un desplzamiento de
agua hacia esta concentracion.
Presion osmotica: Fuerza que empuja el ujo de agua desde zonas de menor osmolaridad hacia zonas de mayor
osmolaridad.
La celula es electricamente neutra, debe poseer igual cantidad de cargas positivas y negativas. Sin embargo, la con-
centracion ionica y electrica presente en la celula presenta diferencias. Recordemos ademas, que la membrana plasmatica
suele estar cargada negativamente en su cara interna y ser positiva en su cara mirando al medio extracelular.
Caractersticas generales en la concentracion ionica a nivel extra e intracelular
Importante es recalcar las concentraciones de los iones Na
+
y K
+
. El primero se encuentra presente en mayor medida
en el medio extracelular (generando un gradiente de concentracion hacia el interior, y el potasio genera un gradiente de
concentracion hacia el medio extracelular.
La bicapa lipdica de la membrana plasmatica presenta permeabilidad a los siguientes compuestos:
Gases: como el CO
2
, O
2
, N
2
Moleculas peque nas no polares: Etanol.
Sin embargo, moleculas neutras, peque nas pero con polaridad denida(agua, urea) presentan una baja permeabilidad a
la membrana, siendo protenas transportadoras el principal medio de ingreso hacia el medio intracelular.
Moleculas grandes,iones, o moleculas polares (de tama no considerable) son impermeables a la membrana celular.
24
19. Paso de moleculas hidrosolubles a traves de la membrana
El paso de moleculas hidrosolubles depende de protenas especializadas en transporte a traves de la membrana.
El 15-30 % de las protenas asociadas a la membrana tienen como funcion el transporte de solutos.
Distintas protenas transportan tipos de solutos especcos.
2 grandes clases de protenas: Transportadoras (Carriers) y canales.
Tipos de transporte celular:
En el transporte pasivo los solutos se mueven a favor del gradiente de concentracion. En el transporte activo, los solutos
se desplazan en contra tanto de su gradiente de concentracion como su gradiente electroqumico, este tipo de transporte
requiere ATP o de la energa potencial del gradiente electroqumico.
La gradiente electroqumica inuencia el movimiento de iones a traves de la membrana:
19.1. Transporte Pasivo asociado a protenas:
La difusion facilitada mediada por un transportador involucra cambios conformacionales en la protena. Esta protena
puede presentar 1 o mas sitios de union para el soluto a transportar, y los cambios en la conformacion son secuenciales y
reversibles (soluto puede entrar y salir a traves de la misma protena)
Como la concentracion de glucosa es mayor en el medio extracelular, se genera un gradiente de concentracion para este
soluto. Como la glucosa es una molecula Grande necesita de una protena transportadora de tipo uniporte
Es importante evidenciar que la difusion facilitada alcanza una velocidad mayor que la difusion simple en el paso de solutos
a traves de la membrana. La velocidad maxima de transporte en protenas viene dada por las siguientes condiciones:
1. Nivel de saturacion de la protena transportadora
2. Velocidad del cambio conformacional del transportador (lmite de velocidad)
25
19.2. Transporte Activo:
Existen 3 estrategias basicas para medir el transporte activo de un soluto:
Transporte Activo Simporte: los gradientes de concentracion de los solutos apuntan en direcciones opuestas. la
partcula cargada de este sistema ingresa a favor de su gradiente electroqumico para generar la energa necesaria para
ingresar un soluto en contra de su gradiente de concentracion.
Transporte Activo Antiporte: Los gradientes de concentracion de los solutos apuntan en la misma direccion. La
partcula cargada del sistema ingresa a favor de su gradiente electroqumico para generar la energa necesaria para sacar
el soluto en la direccion opuesta.
Bombas dependientes de ATP:
Casi un tercio del ATP de una celula se utiliza en bombas de tipo Sodio-Potasio ATPasa
La bomba sodio-potasio permite regular la osmolaridad intracelular maneniendo el gradiente de Na
+
26
20. Canales i onicos y propiedades electricas de la membrana:
En el caso de un canal, se habla de una protena que tiene un poro donde pasan los iones. Una protena canal
siempre transporta solo iones, a excepci on de las aquaporinas. Estas protena siempre transportan a favor del gradiente
de concentracion. Es mucho mas rapido y eciente que el paso de soluto mediado por protenas transportadoras.
Caractersticas de los canales:
Transporte de iones especcos.
Transporte siempre a favor de la corriente.
hasta 10
9
iones/seg.
Canales ionicos abiertos y cerrados
Los canales ionicos, ademas pueden clasicarse de acuerdo al estmulo que gatilla su apertura.
Apertura de canales ionicos por los 3 posibles caminos
27
20.1. Potencial de Membrana asociado a canales i onicos:
Un potencial de membrana se logra cuando existe una diferencia de cargas en ambos lados de la membrana. En
condiciones de equilibrio, el potencial base de la celula bordea los -80mv.
Potencial de membrana y canales de sodio asociados a diferencias de voltaje.
Durante el impulso nervioso, los canales que se encontraban cerrados se abren por la diferencia de voltaje asociado y el
sodio ingresa a la celula. Posteriormente en el periodo refractario, los canales de sodio se cierran y quedan inactivados.
Es responsabilidad de una protena de Transporte activo (bomba Sodio-Potasio) restituir las concentraciones iniciales de
la celula neuronal para volver a recibir un impulso nervioso
Canales asociados a ligando convierten se nales qumicas en electricas: En la sinapsis qumica, una celula
presinaptica mediante la liberacion de neutransmisores transere el impulso nervioso gracias a la accion de canales
asociados a ligando
Neurotransmisores en la sinapsis qumica.
28
Parte VI
Citoesqueleto y movimiento Celular:
La capacidad de las celulas eucariontes de adoptar una gran variedad de formas y llevar a cabo movimientos direcciona-
les y coordinados depende de una red compleja de lamentos proteicos llamada citoesqueleto. A diferencia del esqueleto
oseo, el citoesqueleto es una estructura sumamente dinamica. Las diversas actividades del citoesqueleto dependen de tres
tipos de lamentos proteicos:
1. Filamentos de actina.
2. Microt ubulos.
3. Filamentos intermedios.
Estos lamentos deben ser solidos para mantener la forma celular, pero ademas deben ser dinamicos e
inestables para responder a se nales como nutrientes o se nales qumicas.
Funciones del Citoesqueleto:
1. Permite adoptar diversas formas participando activamente en la diferenciacion celular:
Neuroblasto Neurona.
Plaquetas Activacion que provoca un cambio hacia una forma irregular para detener hemorragias.
2. Permite realizar movimientos coordinados y dirigidos (Presencia de cilios y agelos).
3. Controla la organizacion espacial de organelos y complejos proteicos.
4. Permite la comunicacion entre organelos (Transporte mediante vesculas, se nalizacion).
21. Microlamentos o Filamentos de Actina:
Los lamentos de actina son polmeros helicoidales, enroscados de dos en dos, de la protena actina. Aparecen como
estructuras exibles, con un diametro de 5 a 10 nm que estan organizadas en una gran variedad de haces, de redes
bidimensionales, o geles tridimensionales.
Estructura de la Actina
Aunque los lamentos de actina estan dispersos por el citoplasma de la celula, estan altamente concentrados en el cortex,
justo por debajo de la membrana plasmatica.
Filamentos de actina asociados a una red de protenas para formar el cortex celular.
29
21.1. Funciones de los microlamentos:
Da fuerza mecanica a la supercie celular.
Permite el cambio de forma celular.
Movimiento.
El cortex de actina puede generar y mantener la polaridad celular junto con los microt ubulos.
Determinadas se nales extracelulares que afectan a una parte de la supercie pueden provocar reestructuraciones locales del
c ortex de actina debajo de la zona correspondiente de la membrana plasmatica. De manera recproca, la organizacion del
c ortex de actina puede tener una inuencia determinada en el comportamiento de la membrana plasmatica que esta por
encima. Mecanismos basados en los lamentos de actina corticales pueden empujar la membrana plasmatica hacia afuera
formando largas y nas microespinas o lamelipodios (lopodios) o pueden invaginar la membrana durante la division
celular.
Fibras de stress se organizan en bandas o haces contractiles, la actina presente en el c ortex forma una red tipo gel
tridimensional, nalmente los lopodios se organizan en peque nos haces paralelos estrechos.
21.2. Estructura de la Actina:
La actina corresponde a una protena globular en donde distintas subunidades se juntan para formar el microlamento:
subunidades de G-Actina de naturaleza globular se unen entre s para formar F-Actina de estructura brosa.
Caracterizada por su extremo m as y su extremo menos; El extremo plus tiene la capacidad de unirse a monomeros de
actina de una forma mucho mas rapida y dinamica que la zona minus.
(A): Estructura tridimensional de la molecula de actina, deducida mediante difraccion de rayos X, una molecula de
ATP (en amarillo) est a estrechamente unida en una sura entre los dos dominios de la protena.
(B): Molecula de actina que pone de maniesto sus dos dominios y el lugar de union al ATP que se encuentra entre
ellos.
(C): Filamento de actina que muestra como las moleculas de actina interact uan unas con otras formando el polmero
helicoidal. A medida que las moleculas de actina se ensamblan en el polmero, ocurre hidrolisis del ATP
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21.2.1. Fenomeno de nucleacion:
Un trmero de actina es estable, al formarse este trmero por nucleacion, uniones no covalentes (necesarias para
entregarle dinamismo al lamento) comienzan la polimerizacion de monomeros de actina, generando una cadena doble.
Los extremos menos crecen mas lentamente que los mas
Dentro del bolsillo de actina hay un sitio de union para el ATP. La mayora de las actinas esta unida a ATP mas que a
ADP, La actina despues de unirse hidroliza el ATP y queda como ADP salvo en la unidad recien incluida en la cadena.
Solo la actina-ATP tiende a formar lamentos. La Actina-ADP es mas facil de desarmar.
El ensamblaje del lugar de nucleacion es relativamente lento, lo cual explica la fase inicial (lag phase) producida
durante la polimerizacion. La fase lenta puede ser reducida o eliminada del todo si se a naden lugares de nucleacion
prefabricados como fragmentos de microt ubulos o lamentos de actina previamente polimerizados. Posterior a la fase
lag comienza la fase de crecimiento o elongacion en donde los monomeros se a naden a los extremos expuestos del
polmero en crecimiento. Finalmente se llega a la fase de equilibrio en donde el crecimiento del polmero esta en
equilibrio con el acortamiento del polmero debido a la perdida de monomeros.
21.2.2. Reguladores de la polimerizacion:
Colina: Protena de union a la actina que favorece la despolimerizacion de los microlamentos regulando la longitud
de los lamentos de actina.
Prolina: Protena de union a la actina involucrada en el equilibrio dinamico de ensamblaje del citoesqueleto de actina.
Controla espacial y temporalmente el crecimiento de microlamentos.
ARP2/3 : Favorece la nucleacion de monomeros de actina a partir de un actmero (centro de nucleacion). Ademas
participa en la ramicacion de polmeros de F-Actina.
Imagen que muestra las funciones de la Colina, Prolina y el ARP2/3
Importante es recalcar que el ensamblaje de la malla de actina empuja hacia adelante el borde activo de
un Lamelipodio en respuesta a una se nal extra o intracelular.
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21.2.3. Protenas asociadas a la actina:
Organizacion de F-actina junto con -actinina generan un haz contractil que permite el paso de la miosina II a traves
del haz.
El empaquetamiento con mbrina impide la entrada de miosina II en el haz, lo que en principio la inhibe como banda
contractil y le otorga una gura de haz paralelo.
Participacion de la Miosina: La miosina es otra de las protenas asociadas al citoesqueleto de la actina, participa
en el movimiento de organelos y la reestructuracion de redes durante el movimiento.
Miosina Tipo 1: Protenas que ayudan al transporte de vesculas a traves del lamento de actina. Permite a las
vesculas Caminar sobre el lamento de actina.
Miosina tipo 2: permite la contraccion muscular.
32
Contraccion Muscular: en la contraccion muscular, los lamentos de miosina y de actina se deslizan uno sobre otro,
disminuyendo la longitud del sarcomero. El deslizamiento de los lamentos gruesos y los delgados se produce debido a la
fuerza generada de las cabezas de miosina con los lamentos de actina. Este proceso es dependiente del ATP.
Ciclo de los enlaces cruzados
1. Al unirse ATP a la miosina, esta se suelta de su sitio de union a actina
2. La cabeza de miosina libre hidroliza ATP y se desplaza (cambio de conformacion) hacia el extremo + del lamento
de actina (hacia Z) donde se une a actina
3. Se libera el fosfato (Pi) y produce un cambio de conformacion que desplaza el lamento de actina
4. Se libera ADP y queda la cabeza de miosina jada a actina (rigor)
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22. Microt ubulos
Los microt ubulos son cilindros largos y huecos formados por una protena tubulina. Su diametro externo es de 25 nm
y son mucho mas rgidos que los lamentos de actina. Los microt ubulos son largos y rectos y tpicamente disponen de un
extremo unido a un centro organizado de microt ubulos llamado centrosoma, Los microt ubulos emanan a partir de estos
centros organizadores. Los extremos menos se encuentran en el centro organizador de MTs, los extremos
mas,cerca de la membrana plasmatica.
Organizacion de los microt ubulos.
22.1. Funciones:
Participan en la Mitosis. Permiten la segregacion de los cromosomas durante la division celular.
Son esenciales en mantencion de la forma celular y en transporte interno. (carreteras de vesculas. i.e: migracion de
neurotransmisores por el axon de una neurona hacia el boton sinaptico).
Movilidad Cilios y Flagelos. Los cilios estan presentes en celulas que no se mueven, en cambio los agelos permiten
nadar a una celula.
Cilios: Movimiento coordinado, mueven el uido extracelular. I.E : Alveolos y su movimiento de mucosa. Poseen
un diametro cercano a los 0.25m
Flagelos: Representante caracterstico: Espermatozoide.
La dinena causa que los microt ubulos del axonema se doblen
La estructura del axonema se compone de 9 pares de microt ubulos perifericos y 1 par central.
22.2. Estructura:
Los microt ubulos se forman a partir de uniones de subunidades de -tubulina y -tubulina. A este complejo se le
denomina heterodmero de tubulina y corresponde a la subunidad basica del microt ubulo.
34
Tambien ocurre nucleacion con los microt ubulos. Los MT crecen a partir de los anillos de y-tubulina en el centrosoma.
Los microt ubulos son estructuras altamente dinamicas. El extremo mas sufre mayores ciclos de crecimiento y acortamiento,
el extremo menos se ubica dentro del centrosoma.
Proceso que muestra las 3 fases similares a las de la nucleacion y elongacion de la actina.
La inestabilidad dinamica de los MTs esta dada por la hidrolisis de GTP. Las regiones mas estables del microt ubulo
contienen GTP y se denominan Casquete o Cap. Tras la union y la formacion de un prolamento corto, la hidrolisis
del GTP cambia la conformacion de esta subunidad y debilita el enlace del polmero. Posterior a esto ocurre una des-
polimerizacion para nalmente recambiar el GDP de esta subunidad (-tubulina y -tubulina) por GTP y repetir el
proceso.
Crecimiento acelerado debido a la presencia de un area estable como el casquete. Una perdida repentina de este
casquete se denomina catastrofe y favorece un rapido acortamiento del polmero. Si se llega a formar un nuevo cap,
hablamos de que hubo un Rescate y de ahi el ciclo sigue su curso normal.
22.2.1. Regulacion de la dinamica de los MTs:
Protenas MAP: La presencia de estas protenas sobre el CAP provocan un aumento en la tasa de crecimiento y una
disminucion de la frecuencia de catastrofes, lo que trae como consecuencia microt ubulos mas largos y menos dinamicos.
35
Kinesina 13 Aumenta la frecuencia de catastrofes por lo que el efecto observado corresponde a microt ubulos mas
cortos pero mas dinamicos.
Es importante destacar que protenas en la membrana celular estabilizan estos microt ubulos conriendo-
les una mayor resistencia y longitud.
22.2.2. Protenas Motoras que se mueven a lo largo de los microt ubulos:
Las quinesinas se mueven hacia el extremo mas de los microt ubulos, mientras que las dinenas se mueven hacia el
extremo menos. Funcionan como transportadores de cargas (Substrato, enzima, vescula, etc) especcas en base a ATP.
Quinesina dependiente de ATP para movilizar su carga
23. Filamentos Intermedios
Los lamentos intermedios corresponden a bras proteicas de gran resistencia y de un diametro de 10 nm. Tienen
vital importancia en celulas sujetas a tension (i.e: celulas epiteliales), neuronas y celulas musculares. Su estructura
intracelular se puede observar como una red alrededor del n ucleo, que se extiende hacia la periferia. Los lamentos
intermedios mantienen la estabilidad de los tejidos.
Ante un corte, las celulas del tejido no pueden permanecer juntas pues se rompe la conexion de lamentos intermedios
entre la lamina basal y las celulas epidermicas en la piel.
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23.1. Organizaci on Estructural:
El monomero de los lamentos intermedios corresponde a una region de tipo -helice con un dominio central compuesto
por alrededor de 310 aminoacidos, en esta region existen ademas repeticiones de 7 aminoacidos. Los dominios carboxilo
y amino terminales de este monomero varan en tama no y en secuencia.
Tetrameros y polimerizacion de lamentos intermedios.
23.2. Comparaci on deformacion/tensi on entre los componentes del citoesqueleto:
los lamentos intermedios, a diferencia de los microlamentos y los microt ubulos son altamente resistentes a la tension,
se deforman rapidamente y no se rompen. Los microt ubulos en cambio, tienen una amplia tasa de deformacion al aplicar
una peque na fuerza tensora. Finalmente los monomeros de actina son los menos elasticos, pues se deforman muy poco,
pero si son mas resistentes que los microt ubulos.
Relacion deformaci on/tension entre los distintos componentes del citoesqueleto.
23.3. Tipos de lamentos intermedios:
23.3.1. Tipo I: Queratinas - Quinasas.
Los lamentos de queratina mantienen juntas las capas de celulas (i:e epitelio, piel, cabello). Los desmosomas conectan
los lamentos de keratina de una celula a otra.
Desmosoma: Los desmosomas son estructuras celulares que mantienen adheridas a las celulas vecinas. Estructural-
mente esta union esta ligada a sus lamentos intermedios de queratina.
Filamentos de queratina unidos mediante el desmosoma
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23.3.2. Tipo II: Familia de las vimentinas.
La vimentina es una de las protenas brosas que forman los lamentos intermedios del citoesqueleto intracelular de
celulas embrionarias, ciertas celulas endoteliales, as como tambien como en las celulas sanguneas. Desminas participan en
el m usculo liso y estriado. La vimentina corresponde a una protena glial acdica que participa en celulas como (astrocitos
y celulas de Schwann).
23.3.3. Tipo III: Neurolamentos.
Los neurolamentos presentan numerosos puentes, lo cual los hace especialmente importantes para dar estabilidad
y largo no al axon. Los neurolamentos se ubican con mayor presencia justo por debajo de la membrana
plasmatica.
Los lamentos intermedios de las celulas gliales son mas lisos y con menos puentes que los neurolamentos
23.3.4. Tipo IV: Laminas nucleares.
Presentes en todas las celulas eucariontes, forman una red bajo la membrana nuclear. Esta red es dinamica y es
capaz de disociarse durante la mitosis.
Laminas nucleares otorgan rgidez y dinamismo al n ucleo.
Parte VII
N ucleo, ADN y replicacion.
24. Estructura y organizaci on del n ucleo:
El n ucleo celular es un organelo compuesto por una doble membrana fosfolipdica la cual posteriormente se continua con
el retculo endoplasmatico, entre las dos membranas que cubren el n ucleo celular, existe un espacio llamado perinuclear.
Su volumen es el mayor comparado con cualquier otro organelo dentro de la celula. Inmediatamente bajo la membrana
nuclear se encuentran los lamentos intermedios de Laminas nucleares A,B y C. Dentro del n ucleo existe una zona
de mayor densidad llamada nucleolo, que en primera instancia corresponde al lugar de sntesis de rRNA.
24.1. La matriz nuclear y la lamina nuclear:
Siendo el n ucleo el centro organizador de la celula, la ventaja que otorga la separacion del material genetico del resto
de la celula es que permite una regulacion mas ordenada y eciente de los procesos celulares. Sin embargo, el n ucleo no
es una estructura impermeable, de echo la existencia de poros nucleares permiten el paso de sustancias desde y hacia
afuera del n ucleo. Cada n ucleo celular posee entre 3000 y 4000 poros nucleares.
38
Representacion de la envoltura nuclear
24.1.1. Poros nucleares:
Cada poro nuclear esta compuesto por una subunidad llamada anillo, que representa la base del poro, sobre este anillo
existen proyeccciones hacia el citoplasma y nucleoplasma de protenas brilares. Las bras hacia el interior del n ucleo
foman el basket o cesta.
El transporte mediado por el n ucleo tiene diferentes medios de transporte (activo o pasivo). El dametro
de exclusion para pasar por difusion facilitada a traves de los poros es de 10 nm.
estructura b asica del poro nuclear.
Surge la interrogante acerca de como una protena tras ser sintetizada sabe a que region de la celula debe migrar para
realizar su funcion, en una experimentacion con nucleoplasmina (protena acida que participa en el ensamblaje del
nucleosoma uniendose a las protenas Histonas) se logro determinar la forma en que las diferentes partes de esta protena
presentan actividad para migrar al n ucleo celular:
Captura de protenas nucleares a traves del poro nuclear.
Las protenas que migran hacia el n ucleo poseen una se nalizacion correspondiente a una secuencia de aminoacidos que
permite la recognicion del lugar de trabajo de esta sustancia. En el caso de las protenas nucleares la secuencia es Lisina-
Lisina-Lisina-Arginina-Lisina, observemos que en esta secuencia de aminoacidos todos son polares con carga positiva.
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El transporte nuclear de protenas esta impulsado por la hidrolisis del GTP, y la accion de importinas:
Las importinas poseen en su estructura sitios de union a los aminoacidos se nalados anteriormente y tras esta interaccion,
la protena destinada al n ucleo atraviesa la membrana nuclear. Posteriormente, este complejo debe disociarse para que
la protena pueda llevar a cabo su funcion, este proceso se realiza gracias a la competencia del ligando con una protena
RAN-GTP que tambien tiene anidad por la importina. La RAN-GTP al tener mayor anidad desplaza de su sitio de
union al ligando primario y permite la liberacion de la protena transportada. La importina unida al RAN-GTP, sale del
n ucleo hacia el citosol, y tras una reaccion de hidrolisis de GTP, el complejo RAN-GTP-Importina se disocia y permite
el transporte de una nueva protena.
Imagen de la izquierda muestra el proceso de transporte nuclear mediado por protenas, la imagen de la derecha nos
muestra que sustancias son capaces de entrar y salir del n ucleo.
25. Organizaci on del ADN y Cromosomas
Si un cromosoma estuviera formado unicamente por DNA extendido, sera difcil de imaginar como se podra replicar o
segregar entre celulas hijas sin ser da nado severamente (anafase). De echo, el DNA de todos los cromosomas se encuentra
empaquetado en una estructura muy compacta con la ayuda de protenas especializadas. Tradicionalmente las protenas
de los eucariontes que se unen al DNA se clasican en dos grupos:
Histonas.
Protenas cromosomicas no-histonas.
El complejo formado por el DNA cromosomico y las dos clases de protenas se denomina cromatina. en la cromatina la
masa total de histonas es aproximadamente igual a la masa de ADN.
Histonas: las histonas son protenas relativamente peque nas con una proporcion muy elevada de aminoacidos cargados
positivamente Lisina y Arginina. La carga positiva ayuda a las histonas a unirse rmemente al DNA, el cual esta muy
cargado negativamente, debido a la presencia de grupos fosfatos. Los cinco tipos de histonas de las celulas se clasican
en dos grupos principales las histonas nucleosomicas y las histonas H1, las histonas nucleosomicas son responsables del
pregado del DNA en nucleosomas, estas cuatro histonas se denominan H2A, H2B,H3 y H4.
La H1 act ua sobre este complejo y permite que empiezen a interactuar los distintos nucleosomas entre ellos.
estructura del nucleosoma y sus componentes:
40
Niveles de empaquetamiento de la cromatina:
El DNA debe desempaquetarse para que ocurra transcripcion: es por ello que en la cromatida compactada
existen partes que se encuentran libres que poseen una alta tasa de expresion genica.
Si se utiliza una sonda (secuencia complementaria de nucleotidos, marcada). Los cromosomas tienen ciertas regiones a
utilizar dentro del n ucleo, Por lo tanto el DNA no esta aleatoriamente organizado en el n ucleo.
25.1.

Acidos nucleicos:
La unidad monomerica de los acidos nucleicos es el nucleotido, un nucleotido esta compuesto por una pentosa
,Desoxirribosa(ADN) o Ribosa(ARN) , un grupo fosfato y una base nitrogenada. El nucleotido puede a su vez
ser considerado una forma mayor de un nucleosido, el cual carece del grupo fosfato mencionado.
Estructura basica de un nucleotido de ADN
La union de nucleotidos se produce por condensacion de una molecula de agua entre el grupo fosfato ubicado en el carbono
5 y el grupo OH presente en el carbono 3.
25.1.1. Apareamiento de bases nitrogenadas en la cadena de ADN
Existen dos tipos de clasicacion para cada base nitrogenada:
Purinas: cuya principal caracterstica es la presencia de un anillo doble en su base nitrogenada.
1. Adenina.
2. Guanina.
Pirimidinas: Presencia de solo un anillo en la base nitrogenada:
1. Timina
2. Citosina
3. Uracilo (exclusivo del ARN)
41
En la molecula de ADN, la Adenina se une a la Timina formando dos puentes de hidrogeno, mientras que la Guanina
y Citosina se unen formando 3 puentes de hidrogeno. Una molecula de ADN con una alta presencia de Guanina
o Citosina presentara una mayor cohesion y se requerira mas fuerza para separar la hebra.
26. Replicaci on del ADN
Durante la interfase hay duplicacion de ADN ,la celula rompe la envoltura nuclear para entrar en mitosis.
La lamina nuclear esta compuesta por protenas llamadas Lamins(A,B,C). Estas protenas son lamentos intermedios
y forman una red tipo gasa bajo la membrana. Al entrar en mitosis esta estructura se separa. Una de las se nales clave
es la activacion de una protena kinasa CDK la cual fosforila a las Laminas, generando un cambio estructural que
separa a estos lamentos. Al desensamblarse estos lamentos, la membrana nuclear se desmembra y se forman vesculas.
La protena Lamin Bpermanece asociada a peque nas vesculas o pedacitos de membrana. Las protenas A y C quedan
solubles en el citoplasma. Al nal de la mitosis estas protenas se reensamblan.
La replicacion del DNA supone unas velocidades de polimerizacion de aproximadamente 1000 nucleotidos por segundo.
Evidentemente, las enzimas de replicacion han de ser exactas y rapidas.
Replicacion Semiconservativa de ADN. Watson y Crick mostraron que las dos hebras de la molecula parental se
separan y cada una funciona como un molde para la sntesis de una nueva hebra complementaria. El experimento se
realizo a base de N
14
Modelo de replicacion semiconservativa.
Inicio de la Replicacion: El inicio de la replicacion esta dado por la formacion de una Horquilla de replicacion. En
las celulas eucariontes existen muchos lugares de inicios de replicacion. Las horquillas se extienden hacia las dos direcciones
de la doble hebra. En celulas procariontes solamente existe una horquilla de replicacion. Este proceso esta mediado por
la accion de las siguientes enzimas:
1. Helicasas: Separan la doble hebra cortando los puentes de hidrogeno de las bases nitrogenadas.
2. Single-Strand Binding Proteins (SSB): Son protenas que se unen a una hebra simple de DNA y ayudan a
mantener las hebras separadas.
3. Topoisomerasa: A medida que vamos abriendo la molecula de ADN, buscamos que la helice se relaje lo mas
posible para que quede estirada. la Topoisomerasa relaja la molecula de DNA permitiendo una libre rotacion de la
simple hebra (desenrrolla).
Iniciacion: La horquilla de replicacion del ADN es asimetrica, la cadena hija de ADN que se sintetiza de manera
continua recibe el nombre de cadena conductora y se sintetiza antes que la cadena hija, que se sintetiza de forma
discontinua y recibe el nombre de cadena retrasada. La sntesis de la cadena retrasada es mas lenta debido que a que
debe esperar a que la cadena conductora exponga la cadena patron sobre la que se sintetizara cada uno de los fragmentos
de Okazaki.
Enzimas que participan en este proceso:
1. RNA Primasa: Enzima que polimeriza el RNA partidor o primer.
2. ADN Polimerasa: Una vez sintetizado el RNA partidor, la ADN polimerasa cataliza la sntesis de la nueva hebra
de ADN siempre en direccion 5-3
42
26.0.2. Polimerizacion en la Hebra retardada:
Esta hebra tambien debe sintetizarse en direccion 5-3 pero en forma discontinua en contra de la direccion de la
hebra lider. La principal enzima responsable de la union de cadenas discontinuas es la DNA Ligasa: que es una enzima
que cataliza la union covalente de los extremos 3-5 de dos hebras de DNA. Participa especialmente en la union de los
fragmentos de Okazaki.
Revision y Correccion: El apareamiento inicial de las bases es normalmente corregido por la DNA polimerasa al
terminar la replicacion.
Horquilla de replicacion en tres dimensiones
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Parte VIII
Transcripcion y Traduccion:
El dogma central de la biologa molecular propuesto por Crick establece que el ujo del a informacion genica esta dada
por la siguiente cadena:
Dogma central de la biologa molecular
Para entender a cabalidad el proceso de transcripcion y traduccion primero debemos entender la estructura de la molecula
que transporta esta informacion:
27. Estructura del ARN:
El ARN corresponde a una hebra simple, donde la desoxirribosa es reemplazada por una ribosa (recordemos que la
diferencia radica en que la ribosa posee en su carbono 2 un grupo OH en vez de H). Las potenciales timinas se reemplazan
por uracilos (ver Tarea). El RNA esta presenta tanto en el n ucleo como el citoplasma. Contiene la informacion genica
codicada en el ADN y son en tama no mas peque nas que el DNA.
Diferencias entre ribosa/desoxirribosa y timina/uracilo
Existen tres tipos de RNA:
1. RNA ribosomal rRNA: En eucariontes es sintetizada por la RNA Polimerasa I
2. RNA mensajero mRNA: En eucariontes es sintetizada por la RNA Polimerasa II
3. RNA de transferencia tRNA: En eucariontes es sintetizada por la RNA Polimerasa III
Es necesaria hacer la salvedad pues en procariontes un tipo de RNA Polimerasa transcribe los tres tipos de RNA.
Existen Otros tipos de RNA y se denominan miRNA, siRNA, snRNA. Estos ultimos 3 estan relacionados con la
regulacion de la transcripcion de genes o la formacion de una protena.
Enzimas Primitivas, El mundo RNA: Los primeros organismos estuvieron constituidos por RNA en vez de ADN,
El RNA ademas puede actuar como enzima (RIBOZIMAS).
28. Transcripcion:
28.1. Reconocimiento de la hebra molde:
En la transcripcion, hebra molde es la cadena que va en direccion 3-5, ya que la transcripcion tambien se realiza
en sentido 5-3. La hebra 5-3 Se conoce como hebra Codicante.
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28.1.1. Promotor:
El promotor es una secuencia del DNA donde se une la RNA Polimerasa y comienza la transcripcion. El promotor
es vital para la regulacion de expresion genica, en eucariontes los promotores tienen secuencias de nucleotidos denidas
como la caja TATA (Ubicado en la posicion -10). El lugar de inicio de la transcripcion se denomina +1.
En la posicion -10 la RNA polimerasa hace contacto con la hebra molde de ADN.
En la posicion -35 se ubica una secuencia de nucleotidos denominada . Es importante para la regulacion, indica la
posicion donde debe sentarse la RNA Polimerasa.
Promotor de ADN
En organismos eucariontes, este proceso es mucho mas complejo, pues debemos recordar que el ADN se encuentra
compactado en forma de cromatina:
Histona desacetilasa: Las histonas suelen estar cargadas positivamente debido a los grupos amino presentes en
los residuos de lisina y arginina. Estas cargas positivas ayudan y aanzan la interaccion con las cargas negativas de
los grupos fosfato del esqueleto carbonado del ADN. La acetilacion, una reaccion que se produce corrientemente
en la celula, neutraliza las cargas positivas de las histonas, convirtiendo las aminas en amidas y reduciendo as la
capacidad de las histonas para unirse al ADN. Esta reduccion de la anidad de union permite la expansion de la
cromatina y as la transcripcion genetica de esa region cromosomica. Las histona desacetilasas eliminan los grupos
acetilo, reduciendo la carga positiva de las histonas y por tanto la anidad de estas por el ADN.
Complejo remodelador de cromatina: El CRM (Chromatin-Remodeling-Machine) tiene anidad por las lisinas
acetiladas de las histonas y se une a ellas a traves del dominio llamado Bromodominio. El CRM desorganiza los
nucleosomas aumentando el grado de exposicion y de accesibilidad de los promotores. Finalmente el mediador, la
ARN polimerasa II y los factores de transcripcion hacen que se inicie la transcripcion.
28.1.2. Inicio de la Transcripcion
Posteriormente, se forma el complejo de iniciacion abierto gracias a la actividad helicasa de uno de los factores. En
este instante comienza la sntesis de ARNm por la ARN polimerasa II a partir del sitio llamado +1 que marca el punto
de inicio de la transcripcion de un gen. En el sitiode Inicio el DNA se abre formando una burbuja
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Burbuja de ADN y transcripcion de la hebra molde
La transcripcion adiciona 60 nt/seg. La transcripcion es mas lenta que la replicacion porque el complejo de la RNA
polimerasa debe hacer todo el trabajo (abrir y copiar) y segundo, la RNA polimerasa avanza arrastrando la cola de ARN
sintetizada.
28.2. Fase de elongacion:
En esta etapa, la ARN polimerasa II cataliza la formacion de los enlaces fosfodiester entre nucleotidos. Intervienen
otros factores, conocidos como factores de elongacion. Sus funciones son disminuir las pausas de la ARN polimerasa II, des-
organizar los nucleosomas y favorecer los procesos de correccion de errores. Tambien intervienen factores de transcripcion
involucrados en la iniciacion.
Concretamente (en eucariontes), la formacion de la caperuza (cap) metilada ocurre en la fase de iniciacion de la
transcripcion y normalmente, el proceso de splicing durante la elongacion. La poliadenilacion comienza en la fase de
terminacion de la transcripcion y acaba una vez nalizada esta.
28.3. Termino de la sntesis de RNA en procariontes:
28.3.1. Termino independiente de la protena :
Durante la transcripcion, existe una secuencia rica en CG en la que se genera una horquilla, la cual forma uniones
entre el ARN. Posteriormente una secuencia de ARN rica en uracilos, que tienen una anidad menor con la adenina
provocan, sumado al apareamiento intraRNA, el n a la transcripcion.
28.3.2. Termino dependiente de la protena :
La protena es una helicasa RNA-DNA dependiente de ATP que rompe el hbrido DNA-RNA naciente. tambien
necesita la presencia de la horquilla entre C y G, al reconocerla se pone n a la transcripcion.
Protena rho en la recognicion de la horquilla y n de la transcripcion.
Tiempo de vida media de ARN
1. Procariontes, vida media de mRNA: 2min
2. Eucariontes: 4-24 hrs
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28.4. Detalles de la transcripcion en Eucariontes (Maduracion del mRNA):
Procesos de transcripcion y posterior traduccion en eucariontes
Capping: El Capping consta de la adicion de la adicion de 7-metilguanosina, es una interaccion 5-5 y preserva los
3 fosfatos. Todos los RNA que salen del n ucleo sufren capping.
Capping de metilguanosina
Splicing: Secuencias especcas en la union intron-exon. Complejos formados por RNA y protenas realizan el Splicing
(Spliciosoma). Este proceso esta mediado por un ataque nucleoflico de una adenina haca un grupo fosfato de la guanina
del grupo GU, se unen estas 2 estrcuturas formando un lazo y se libera el intron.
Splicing y ataque nucleoflico de adenina hacia el grupo GU.
Adicion de la cola de Poli-A: Secuencia AAUAAA CA se reconoce por una endonucleasa y rompe una zona rica en
G-U. Posteriormente se comienza la adicion de la cola de Poli-A por la Poli-A Polimerasa (entre 10 y 200). Mientras mas
adenina tenga, mas estable es el mensajero. Tanto el CAP como la cola de Poli A son reconocidos por el ribosoma para
iniciar y terminar la transcripcion.
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29. Componentes Fundamentales de la traducci on:
1. La maquinaria:
mRNA.
Ribosomas.
Aminoacil-tRNA
Aminoacil-tRNA sintasa.
Factores proteicos.
2. La informacion:
El codigo genetico.
Se nales de inicio y termino.
Acoplamiento tRNA-Aminoacido.
29.1. Ribosomas:
Cada subunidad de los ribosomas, estan numeradas por su coeciente de sedimentacion S. Las subunidades riboso-
males de las celulas eucariontes son un poco mas pesadas que las subunidades ribosomales en organismos procariontes,
lo que habla del exito evolutivo de los ribosomas como herramienta utilizada en la traduccion.
Estructura del ribosoma.
Los ribosomas estan compuestos principalmente por rRNA, el cual es sintetizado en el n ucleo. Los ribosomas tambien
funcionan como ribozimas.
En los ribosomas se realiza la traduccion. Exsten 3 sitios caractersticos del ribosoma que ayudan en la sntesis de la
protena:
Sitio P o Peptidil: Almacena la protena en traduccion.
Sitio A o aminoacil: Caracterizado pues en esta zona ingresan los aminoacidos que siguen la secuencia del mRNA.
sitio E o exit: Salida del tRNA para poder reabastecerse de otro aminoacido.
Sitios de union de los tRNA al ribosoma
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29.2. ARN de transferencia y el codigo genetico:
Estructura de un tRNA con anticodon AAG
Los tRNA son moleculas relativamente peque nas que act uan como transportadoras de amonacidos individuales especi-
cos durante la sntesis proteica en los ribosomas. Contienen entre 75 y 90 unidades nucleotdicas. Cada uno de los 20
aminoacidos hallados en las protenas posee por lo menos un tRNA correspondiente.
Ademas de las bases p uricas y pirimdicas principales, los tRNA se caracterizan por contener un n umero muy grande de
bases no frecuentes como por ejemplo acido seudoruridlico y el acido ribotimidlico.
En uno de los extremos de la cadena, todos los tRNA contienen un resto de acido guanlicoterminal; al otro extremo,
todos los tRNA contienen la secuencia terminal C-C-A. El grupo 5-hidroxilo del resto adenlico terminal se halla unido
al hidroxilo 3 del resto citidlico mediante un puente fosfodiester.
29.2.1. El codigo genetico:
Existen 4 nucleotidos que forman la secuencia del mRNA. Como los codones se organizan en trios, existen 64 posibles
combinaciones de nucleotidos, y solamente disponemos de 20 aminoacidos conocidos; por lo tanto, el codigo genetico es
degenerado. Mas de una secuencia de codones codican para un mismo aminoacido.
El codigo genetico es redundante:
Hay mas de un tRNA para el mismo aminoacido.
Algunas moleculas de tRNA pueden aparear sus moleculas con mas de un codon.
El codigo genetico no se superpone: 1 nucleotido pertenece a un unico triplete.
El codigo genetico es universal: La excepcion es el codigo genetico mitocondrial.
29.3. El proceso de traduccion:
El proceso parte con la Formacion de un complejo de iniciacion, el cual se debe componer de las siguientes
estructuras: mRNA + tRNA-Met iniciador + subunidad peque na + hidrolisis de GTP + subunidad grande.
Formacion del complejo de iniciacion.
Ademas de los factores de iniciacion, el complejo reconoce el 5cap mG del mRNA y luego avanza hasta encontrar el
primer AUG que corresponde a la metionina.
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29.3.1. Elongacion:
Esta fase consiste en un ciclo de 3 pasos en donde en el primer paso se incorpora un tRNA al sitio aminoacil del
ribosoma; posteriormente el aminoacido unido al tRNA, recibe el resto de la protena que esta siendo codicada en el
sitio P, trasladandose hacia el sitio A, este proceso esta mediado por la Peptidil transferasa:
La enzima peptidil transferasa es una ribozima aminoacil transferasa que realiza la funcion esencial de los ribosomas.
Se encarga de la formacion de enlaces peptdicos entre aminoacidos adyacentes durante la traduccion de ARN mensajero
y, por tanto, la sntesis proteica.
Finalmente ocurre la translocacion proceso dependiente de la hidrolisis de GTP, que traslada los 2 tRNA un lugar
en direccion al sitio E. el tRNA que contiene la protena pasa al sitio peptidil y el tRNA que carece de elementos de union
se liberta por el sitio E.
Proceso de elongacion en los ribosomas y traduccion de la protena.
29.3.2. Termino:
Los codones de termino son reconocidos por los factores de liberacion, los codones de termino no codican para ning un
aminoacido. Posteriormente las subunidades se desensamblan y el mRNA es degradado por ribonucleasas.
Termino de la traduccion.
29.3.3. Procesos posttraduccionales:
El plegamiento de las protenas es cotraduccional: Si 2 subunidades de una protena son necesarias para
la estructura cuaternaria funcional, puede ocurrir que al termino de la traduccion de una protena, esta se una por
interacciones no covalentes a otra subunidad proteica que este en proceso de traduccion. Ademas, las protenas van
tomando su estructura terciaria conforme se van traduciendo.
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Las chaperonas ayudan al correcto plegamiento:
Chaperonas unidas a ATP se encuentran libres en el citoplasma o en el lumen del retculo endoplasm atico rugoso,
para facilitar el plegamiento correcto de la protena, La chaperona hidroliza ATP para unirse a la protena en
formacion. Cuando la protena termina de ser traducida, las chaperonas dejan su sitio de union con el ADP y
vuelven a formar el complejo con el ATP quedando utiles para facilitar un nuevo plegamiento
Polirribosomas: Los polirribosomas son agrupamientos simultaneos de ribosomas a una sola molecula de mRNA que
esta siendo traducida.
Parte IX
Retculo Endoplasmatico:
30. Generalidades de la expresi on genica:
En cada celula existen entre 20.000 y 25.000 genes. Cada celula produce para cumplir su funcion alrededor de 10.000-
20.000 protenas diferentes. Finalmente, la velocidad de sntesis de protenas por celula es de 1.000.000 de moleculas por
minuto.
31. El retculo endoplasmatico:
Todas las celulas tienen un retculo endoplasmatico (RE o ER). Su membrana constituye normalmente mas de la
mitad del total de la membrana de la celula. Al igual que el n ucleo posee membrana doble. Esta organizado en forma de
una red laberntica de tubos ramicados y de sacos aplanados que se extienden por todo el citoplasma. La membrana del
RER formara una lamina continua que dene un unico espacio interno. Este espacio es denominado lumen del RE y
ocupa alrededor del 10 % del volumen celular. La membrana del RER separa el lumen del citosol y media la transferencia
selectiva de compuestos entre estos 2 compartimientos.
La membrana del RE es el lugar de produccion de todas las protenas de transmembrana y lpidos de la mayora
de los organelos celulares La membrana del RE tambien contribuye a la formacion de las membranas mitocondriales
y peroxisomas. Todas las protenas que seran secretadas al exterior y las que se quedaran en el lumen del RE, golgi o
lisosomas, son inicialmente transportadas al lumen del RE.
Estructura y continuidad de la membrana nuclear con la del RER
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31.1. Protenas y su transporte hacia el RE
El RE extrae determinadas protenas desde el citosol a medida que son sintetizadas. Estas protenas son de dos tipos:
Protenas Transmembrana que son parcialmente translocadas hacia el lumen.
Protena solubles en agua que atraviesan la membrana del RE y quedan liberadas al lumen.
Independiente de su destino posterior, estas protenas son dirigidas a la membrana del RE por el mismo tipo de peptido
se nal.
31.1.1. Funciones del Retculo endoplasmatico Rugoso:
1. En RER se sintetizan protenas solubles o de membrana para la membrana plasmatica o para otros organelos.
2. El RER detecta protenas mal plegadas por sus chaperonas.
3. Es el primer organelo que participa de la ruta exoctica de protenas.
4. Se denomina rugoso pues el adosamiento ribosomal a las paredes del retculo le otorga ese aspecto.
31.1.2. Funciones y caractersticas del Retculo endoplasmatico Liso:
El retculo endoplasmatico liso es abundante en celulas que sintetizan hormonas esteroidales y en neuronas. Ademas
es particularmente predominante en celulas especializadas en el metabolismo lipdico; es continuo con el RER y forma
t ubulos entre 30 y 60 nm en diametro. Son funciones del REL:
Sntesis de lpidos: Fosfolpidos y Colesterol.
Sntesis de hormonas esteroidales y sales biliares (que participan en la emulsion de las grasas).
Participacion en la detoxicacion celular, principalmente de drogas liposolubles. Las reacciones de destoxicacion
mas estudiadas estan catalizadas por la familia de enzimas de la familia citocromo P450.
En Neuronas el REL es muy importante para el transporte de ciertas vesiculas o protenas que van a llegar al
terminal nervioso.
31.1.3. Otras funciones del RE:
Otra funcion del RE en la mayora de las celulas es la de secuestrar Ca
2+
. La liberacion del Ca
2+
en el citosol a partir
del RE y su posterior recaptura, median muchas respuestas rapidas a las se nales extracelulares.
32. Sntesis de Protenas en una ruta Exoctica:
Tanto para sintetizar las protenas que permaneceran en el citosol como para sintetizar las que seran transportadas
al RE, se utiliza el mismo acervo de ribosomas. Lo que dirige al ribosoma correspondiente a la membrana del RE es la
presencia del peptido se nal de la cadena que se esta sintetizando.
Sistema de Sntesis proteica a nivel citosolico y reticular.
52
32.1. Sntesis Proteica a nivel reticular:
Una partcula de reconocimiento de la se nal (SRP) reconoce una secuencia especca de la protena creciente y dirige
su direccion hacia la membrana del retculo endoplasmatico rugoso. El SRP dirige la union del ribosoma a la
membrana y permite la insercion De la protena naciente al canal de trasmembrana
El peptido se nal se compone principalmente de aminoacidos hidrofobicos. Las protenas que translocan la membrana
del RER lo realizan en un estado desplegado principalmente determinado por una estructura lineal.
Una vez formado el complejo ribosoma-SRP se une a una protena integral llamada receptor del SRP. Posteriormente
la SRP es liberada y comienza la translocacion a traves de la membrana del polipeptido creciente. Dado que una de las
protenas del SRP y el receptor del SRP tienen sitios de union al GTP; los cambios conformacionales que tienen lugar
durante la translocacion estaran establecidos mediante la hidrolisis de GTP.
Existen dos tipos de translocacion:
Translocacion Co-Traduccional. Dependiente del GTP.
Translocacion Post-Traduccional. Dependiente del ATP.
Translocacion Co y post traduccional
32.2. Tipos de protenas Sintetizadas:
Protenas de Secrecion:
Sntesis de protenas de secrecion atraviesan completamente la membrana reticular siendo procesadas en el lumen.
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Protenas de Membrana.
Protenas Tipo 1: Se nalizador de translocacion ubicado al inicio de la protena.
Protena Tipo 2: Se nalizador de transolaci on ubicado entre la cadena polipeptdica.
Protenas Politopicas: Caracterizadas por su presencia de m ultiples sitios de termino de la translocacion.
Las protenas tipo 1 y tipo 2 se subdividen en protenas tipo A y B. Las protenas A tienen el grupo amino terminal
mirando hacia el lumen del RER. Las protenas B poseen el grupo carboxilo terminal orientado hacia esta misma seccion.
Translocacion de protenas tipo I y tipo II
Translocacion de proteinas politopicas.
32.3. Modicaciones Post-traduccionales:
Durante este proceso se forma y amolda la estructura secundaria y terciaria de la protena en sntesis. En esta etapa
se producen:
Incorporacion y procesamiento de az ucares.
La mayora de las protenas sintetizadas en el RER son glucosiladas por la adicion de un N-oligosacarido com un. La
adicion covalente de az ucares a las protenas es una de las principales funciones biosinteticas del RER. La mayora
de las protenas solubles y unidas a la membranas que son fabricadas por el lumen del RER, son glucoprotenas.
Casi inmediatamente despues que la cadena polipeptdica entre en el lumen, se glucosila sobre los residuos de
asparagina diana. El oligosacarido se transere al aminoacido a traves de la enzima oligosacaril transferasa
(enzima adosada a la membrana). Existe una copia de esta enzima para cada translocador proteico.
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Formacion y reordenamiento de puentes dis ulfuro.
La enzima PDI o Disulfuro Isomerasa es la enzima encargada de adicionar o restaurar enlaces dis ulfuro en las
protenas, favoreciendo un correcto plegamiento para la estructura terciaria de la protena.
Accion de la Disulfuro Isomerasa en el reordenamiento de los puentes disulfuro entre cistenas.
Cortes proteolticos especcos.
Ensamblaje de complejos multimericos:
La glicosilacion en el retculo cumple varias funciones: Plegamiento correcto y sistema de control. (que se v era mas
adelante):
Plegamiento de la Hemaglutinina mediado por Chaperonas
33. Respuesta al plegamiento defectuoso de protenas en la ruta exoctica:
Dado que la velocidad de sntesis de proteinas es alrededor de 1.000.000 de moleculas por segundo, es de esperar que
puedan ocurrir errores en la conformacion de la estructura terciaria de la protena. Sin embargo, la celula cuenta con tres
tipos de respuesta frente a una protena mal plegada:
1. ciclo deglucosilacion/glucosilacion mediado por chaperonas a nivel del RER
2. Retro-Translocacion o dislocacion de protenas mal plegadas.
3. Respuesta a nivel nuclear (expresion de mas chaperonas).
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Distintos caminos de procesamiento defectuoso en protenas formadas en el RER.
33.1. Ciclo de glucosilaci on/deglucosilacion a nivel del RE:
Una enzima Glucosiltransferasa detecta protenas mal plegadas y glucosila a la proteina. Esta glucosa al ser reco-
nocida por la calnexina (chaperona transmembrana) produce una glicosidacion para formar correctamente.
a
la protena.
Si la calnexina logra arreglar la protena, esta continua su viaje hacia el golgi.
Es importante destacar los tipos de chaperonas presentes en el RER : Calnexina, Calreticulina , ERp57 y BIP/Grp78.
Calnexina como Chaperona en el RER y ciclo de la glucosilacion/deglucosilacion
33.2. Retro-Translocacion de protenas mal plegadas:
Si el primer ciclo no logra arreglar el plegamiento de la proteina,esta es llevada al citosol donde son degradadas por los
proteosomas. Una enzima N-Glicanasa marca a la asparagina marcada con oligosacaridos y en conjunto con una protena
ubiquitina cuya funcion es dirigir el reciclaje de protenas, llevan a esta protena hacia un proteosoma.
Los proteosomas representan un importante mecanismo por el cual las celulas controlan la concentracion de
determinadas protenas mediante la degradacion de las mismas.
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33.3. El plegamiento defectuoso genera se nales UPR(Unfolded Protein Response) hacia
el n ucleo
Una protena UPR es activada en respuesta a la acumulacion de protenas mal formadas o no formadas en el lumen
del retculo endoplasmatico. Existen tres protenas que sensan la presencia de protenas mal formadas:
IRE1, PERK y ATF6 Como sensores de protenas mal formadas.
Inicio del UPR: La protena chaperona BIP/Grp78 se asocia a receptores de UPR en la membrana del RER y los
mantiene inactivos (IRE1, PERK y ATF6). Si se acumulan protenas mal plegadas BIP/Grp78 se sueltan de los receptores
( y se dirigen hacia las protenas malformadas) activando a los receptores del UPR los cuales se fosforilan y activan el
UPR. Si la protena activada corresponde a una PERK, el resultado es una inhibicion de la traduccion proteica, teniendo
como resultado un arresto del ciclo celular. Si la respuesta esta asociada a la activacion de una protena ATF6, esta se
transloca hacia el golgi para luego generar la respuesta de activacion de genes a nivel nuclear de factores reguladores
UPR.
Via del IRE1:
Activacion del IRE1 favorece la sntesis de chaperonas en consecuencia a una acumulacion de protenas mal plegadas.
33.3.1. Inductores del UPR:
Tunicamicina: Afecta la glicosilacon de las protenas y por tanto las celulas se pliegan mal.
Tapsigargina: Induce la liberacion de Ca2+ desde el lumen del RER al citoplasma afectando la funcion de las
chaperonas como calnexina y calreticulina.
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Ditiotreitol (DTT): agente fuertemente reductor que rompe los puentes dis ulfuros (S-S), haciendo que las protenas
se desplieguen.
Parte X
Aparato de Golgi:
El Aparato de Golgi constituye el segundo organelo de la ruta exoctica de protenas. El transporte posterior de
protenas desde el RER hacia el Golgi y desde este hacia cualquier otro sitio, tiene lugar a traves de vesculas. La via
que va desde el RE, pasando por el complejo de Golgi, hasta la supercie celular se llama a menudo via por defecto ya
que parece que las proteans no necesitan presentar se nales especcas para seguirla.
Estructura del Aparato de Golgi: EL complejo de Golgi se localiza cerca del n ucleo celular, y en una celula animal
esta a menudo cerca del centrosoma o centro celular. Esta formado por una serie de cisternas limitadas por membrana
y de forma aplanada. Muchas vesculas se hallan asociadas a los dictiosomas del Golgi, se cree que estas vesculas del
Golgi son vesculas de transporte de protenas y de lpidos desde y hacia el Golgi y entre las mismas cisternas del
organelo. Durante su paso a traves del complejo de Golgi, las moleculas transportadas sufren una serie de
modicaciones covalentes ordenadas.
Estructura del Aparato de Golgi
Los dictiosomas del Golgi tienen dos caras distintas: Una cara cis (o de entrada) y una cara trans (o de salida). Ambas
caras estan conectadas por la red Cis y Trans del golgi formadas por estructuras tubulares.
Las vesculas destinadas al complejo de Golgi emergen desde regiones especializadas del ER llamadas Elementos
transicionales cuya membrana no tiene ribosomas adheridos, y se encuentra a menudo entre el RER y el complejo de
Golgi. Se cree que estas vesculas no son selectivas, transportaran cualquier protena desde el RE hacia el Golgi. Sin
embargo, para que una protena emigre al golgi debe estar correctamente plegada y formada.
34. Organizaci on de las funciones de las Cisternas del Golgi:
Las protenas exportadas desde el RE entran por la cara Cis del Golgi; luego se desplazan al compartimiento medial
formado por la cisterna central del dictiosoma, y nalmente se desplazan al compartimiento Trans, donde se completa la
glucosilacion.
58
Compartimentalizacion del Golgi
35. Procesamiento de Oligosacaridos en el Aparato de Golgi
El procesamiento de oligosacaridos pasa por distintas fases a medida que la protena avanza a traves del complejo de
Golgi, en donde cada cisterna contiene sus propias enzimas. Las protenas se modican a traves de sucesivas etapas a
medida que pasan de cisterna en cisterna a traves del dictiosoma, de forma que las cisternas constituyen una unidad de
procesamiento m ultiple. El procesamiento tiene lugar tanto en una secuencia espacial como en una secuencia bioqumica:
as, las enzimas que catalizan las primeras etapas se localizan en las cisternas cis, mientras que las que catalizan las
ultimas etapas se ubican en las cisternas trans.
El procesamiento de oligosacaridos es altamente ordenado, de forma que cada uno de los pasos depende de las reacciones
anteriores. En los dictiosomas del Golgi, la manosidasa I elimina 3 residuos de manosa y la N-acetilglucosamina
transferasa I a nade un residuo de GlcNAc, lo que permite que la manosidasa II elimine dos residuos mas de manosa.
De esta manera, se obtiene el n ucleo nal de 3 residuos de manosa que presenta un oligosacarido complejo. En este
estado, el enlace existente entre los residuos del GlcNAc se vuelve resistente al ataque de una endoglucosidasa la Endo-H.
Procesamiento de los oligosacaridos en el RER y el complejo de Golgi para un oligosacarido complejo Proceso que
ocurre entre las caras Cis y Medial del organelo.
procesamiento nal donde se a naden dos GlcNAc, tres Gal y tres NANA
59
36. Procesamiento Proteoltico de protenas:
En el aparato de Golgi tambien ocurre procesamiento de protenas como en el siguiente ejemplo:
Procesamiento proteoltico de la Insulina y ovoalb umina
Finalmente, en la cara trans del Golgi ocurre la segregacion de protenas hacia los distintos organelos o
al espacio extracelular:
Fin de la ruta exoctica
60
Parte XI
Mecanismos moleculares del transporte vesicular:
37. Etapas en la formaci on de vesculas:
En todas las etapas de formacion de vesculas existen tres etapas fundamentales:
Yemacion: Aproximacion a la formacion vesicular:
Fision: Separacion total entre la vescula y la membrana plasmatica.
Fusion: Union de la vescula a la membrana el organelo o estructura diana.
Para que que el proceso de formacion vesicular ocurra de manera efectiva necesitamos la presencia de los siguientes
factores:
Protena cargo o peptido se nal: que indican se nales de exocitosis o de destinacion de protenas.
Protenas de coating y adaptadoras: las cuales ayudan a deformar la membrana plasmatica.
Receptores de membrana para las protenas cargo.
Protenas con sitios de union al GTP.
38. Etapas del transporte vesicular:
La mayora de las vesculas de transporte se forman a partir de regiones revestidas especializadas de la membrana,
por lo que generan vesculas rveestidas de una red de proteinas distintas de las que recubren la supercie citosolica. Antes
de que la vescula se fusione con la membrana receptroa, este recubrimiento ha de eliminarse para permitir que las dos
membranas interaccionen directamente.
Etapas del transporte vesicular enumeradas del 1 al 7.
38.1. Iniciaci on, Yemaci on y Escicion:
Existen dos tipos de vesculas revestidas bien caracterizadas (las revestidas de clatrina y las revestidas de coatomero
(COP1 y COP2, pondremos n umeros arabicos en vez de n umeros romanos para evitar equivocaciones en la pronunciacion).
61
38.1.1. Vesculas revestidas por COP:
Las vesculas revestidas por COP median el transporte vesicular de la ruta por defecto, incluye en transporte desde el
retculo endoplasmatico al complejo de Golgi COP2 , de una cisterna del Golgi a otra mas baja y desde el Golgi hacia
el RER. COP1.
Protenas de cubierta COP2: El transporte mediado por protenas tipo COP2 es principalmente de tipo anterogra-
do. Si tomamos como referencia la ruta exoctica, este tipo de transporte es hacia fuera de la membrana celular.
La protena ARF-GDP permanece al principio en un estado soluble e inactivo. Esta se une posteriormente a una
protena liberadora de nucleootidos de guanina (GNRP) en la membrana dadora, lo cual provoca que el ARF libere su
GDP y se una al GTP. El GTP desencadena un cambio conformacional en el ARF dejando expuesta su cadena de acido
graso. Entonces, la protena ARF-GTP activa y unida a la membrana comienza a reclutar las subunidades del
coatomero de la membrana.
Protenas de Cubierta COP1: El transporte mediado por protenas COP1 es en su mayora de tipo retrogrado.
El complejo COP1 esta formada por la ARF1(GTP-asa monomerica), un coatomero (complejo de 7 protenas)y
protenas de membrana reclutadas por el coatomero. A diferencia de las protenas COP2, la cubierta se adosa
a la membrana una vez activada la ARF1
Vesculas revestidas de Clatrina: El principal componente proteico de las vesculas recubiertas de clatrina es la
propia protena. Un complejo altamente conservado en la escala evolutiva. Consiste en tres cadenas polipeptidicas grandes
y tres peque nas que forman una estructura llamada Triquelion. Los trisquelions de clatrina se unen dando lugar a un
esqueleto en forma de cesto. La formacion de una yema revestida de clatrina se produce por fuerzas generadas por el
ensamblaje de protenas de la cubierta sobre la supercie citosolica de la 0membrana.
Adosadas en la parte mas distal del aparato de Golgi. La podemos encontrar tanto en la parte mas distan como en
organelos llamados endosomas y en la membrana plasmatica.
62
Estructura del Trisquelion
El ensamblaje de la cubierta de vesculas revestidas tiene dos funciones como mnimo: Proporciona la fuerza mecanica
para estirar hacia el exterior la membrana y ayuda a capturar receptores de membrana especcos junto con las moleculas
a las que estan unidos.
Protenas llamadas adaptinas se utilizan para unir el revestimiento de clatrina a la membrana, ademas de reclutar
diversos receptores proteicos de transmembrana, los cuales capturan moleculas especcas en el interior de la vescula
(protenas cargo)
Finalmente, el proceso de escicion se produce por la accion de una protena con una naturaleza similar a la actina,
hablamos de la dinamina y un complejo proteico cuya estructura principal es esta protena.
Dinamina y la escicion vesicular.
Resumen accion de protenas COP1, COP2 y Clatrinas
63
39. Celulas epiteliales como modelo de la destinacion de protenas en el
aparato de Golgi:
En esa seccion se observara el efecto de la destinacion hacia la membrana plasmatica de celulas polares como por
ejemplo las celulas epiteliales. Donde una cara de la membrana apunta en sentido apical y la otra en sentido basolateral.
Los cambios en la destinacion se realizan principalmente en el TGN (trans Golgi Network) en la cara mas alejada del
aparato de Golgi.
El estudio contempla la utilizacion de dos tipos de virus que generan salidas exocticas distintas: Hablamos del virus
HA (o de la gripe) y el VSVG.
En la imagen de la izquierda observamos la liberacion del virus de la inuenza HA, y por la seccion basolateral vemos la
salida del virus de la VSVG (vesicular stomatitis viurs)
La explicacion a la destinacion de la salida de la HA y VSVG estaba determinada por la region donde se encontraba la
se nal de salida. En el caso la salida del HA se encontraba en la region transmembrana de la protena, y la del VSVG se
hallaba en la region citosolica de la protena.
Las se nales Apicales son N y O-glicosilaciones y estaban presentes tanto en la membrana, dominio intracelular como la
rodopsina o incluso el emdio extracelular. Las protenas apicales se subian a unas balsas compuestas de glicoesngolpidos
y colesterol llamadas rafts. Todas las se nales Basolaterales, en cambio, son peptdicas y estan en unidas al carboxilo
terminal. Las se nales basolaterales dominan sobre las apicales. Las se nales se pueden transferir de una protena a otra.
Presencia de la se nal en protenas con salida a la cara apical y a la basolateral.
Caractersticas de las se nales:
Existe mas de un tipo de se nal para destinar protenas a diferentes organelos. Mas que la secuencia especca de
aminoacidos de la protena, importan mas sus propiedades fsicas: (hidrofobicidad, hidolidad).
Las se nales se pueden transferir de una protena a otra. Son necesarias, sucientes e intercambiables entre las
protenas.
Las se nales pueden tener diferente naturaleza. (Carbohidratos, lpidos o protenas).
Las se nales son reconocidas por una maquinaria especca de protenas citosolicas de cubierta y adaptadores.
40. Protenas adaptadoras y su funci on en vesculas revestidas de clatrina:
Las protenas adaptadoras como las AP o GGAs sirven de conectores entre se nales y la cubierta de clatrina; a su vez,
las se nales de destinacion son reconocidas por los adaptadores que a su vez reconocen a la clatrina.
64
40.1. Protenas de cubierta adaptadoras complejo AP:
El complejo AP tiene cuatro subunidades una de las cuales se une a la se nal de destinacion que puede ser citosolica o
basolateral, lo importante es que hay un reconocimiento y este adaptador acomoda la clatrina con la se nal para formar
la vescula.
Proteinas adaptadoras del complejo AP
Otras protenas como la cubierta de retromero participan en el transporte vesicular entre endosomas y el aparato de
Golgi. Ademas, las protenas adaptadoras GGAs participan en la segregacion lisosomal desde el aparato de Golgi hacia
los lisosomas.
41. Fusion de vesculas con el organelo o membrana diana:
Las vesculas de transporte, sean o no selectivas al tomar la carga del compartimiento dador, han de ser altamente
selectivas en cuanto a la membrana diana a la que se fusionan. Esto sugiere que todos lso tipos de vesculas de transporte
en la celula han de expresar marcadores de supercie que las identiquen se un su origen y su carga y que sean reconocidas
por receptores de las membranas diana. Las vesculas de transporte son reconocidas especcamente en la membrana
receptora a traves de los Snares.
Existen dos tipos de Snares para el reconocimiento vesicula-membrana:
V-Snares: Se encuentran en vesculas y estan formados por un unico polipeptido.
T-Snares: Se encuentran en el organelo blanco y estaran compuestos por dos o tres protenas.
Ambos Snares tienen dominios helicoidales que interact uan formando un haz de cuatro hebras.
Snares vesiculares y de la membrana blanco interactuan para comenzar el proceso de fusion tras la recognicion de las dos
partes.
42. Direccionalidad de proceso y protenas RABs:
En la celula existen muchos sistemas de membrana por lo que el proceso de union de las distintas vesculas ha de ser
altamente selectivo. Una vescula puede inspeccionar muchas membranas potencialmente diana antes de que su v-SNARE
encuentre una t-SNARE complementaria <3. Este proceso crucial de reconocimiento esta controlado por miembros de una
familia de protenas GTPasas monomericas llamadas protenas Rab, que controlan que la interaccion entre el v-SNARE
y el t-SNARE sea correcta. Las protenas Rab estan unidas a la supercie de las vesculas revestidas que estan formando
en la membrana dadora. Cuando una vescula encuentra la membrana diana adecuada, la union de los Snares permite
que la vescula permanezca unida durante el tiempo necesario para que la protena Rab hidrolice el GTP que lleva unido,
lo cual bloquea a la vescula en la membrana diana, preparandola para la fusion posterior.
65
La interaccion entre v-SNARE y t-SNARE provoca la hidrolisis del GTP de la protena RAB para controlar que la
interaccion sea correcta, mediante el efecto del Rab.
Caractersticas generales de las protenas GTPasas monomericas:
Garantizan un traco vesicular ordenado.
existen alrededor de 600 tipos de GTPasas.
Direccionan a la vescula a puntos especcos en la membrana blanco correcta.
Rabs funcionan en las vesculas de transporte, en las membranas blanco y/o en ambas.
Caractersticas generales de las protenas Rabs (caso particular de GTPasa):
las protenas Rabs circulan entre el citosol y las membranas y regulan el ensamblaje del complejo de protenas en
la membrana.
GDP-Rab (inactiva), se unen a GDI(Rab-GDP inhibidor de disociacion) que la mantiene en el citosol.
GTP-Rab (activa) se une fuertemente a la membrana del organelo y de la vescula.
GTP-Rab se une a efectores que facilitan la union y la fusion de membranas.
Una protena liberadora de nucleotidos de guanina en la membrana dadora reconoce una protena rab especca y la
induce a intercambiar su GDP por GTP. Este cambio altera la conformacion de la proteina Rab, exponiendo su grupo
lipdico unido covalentemente, el cual ancla la protena Rab a la membrana que sale. La proteina Rab-GTP permanece
unida a la supercie de la vescula de transporte despues de que eesta se separe de la membrana dadora. Una protena
v-SNARE de la supercie de la vescula se une a una t-SNARE inmovilizando parcialmente la vescula. Entonces la
protena Rab hidroliza su GTP anclando la vescula a la membrana diana y liberandose al citosol como Rab-GDP.
66
Parte XII
Ciclo Celular:
El ciclo celular se divide tradicionalmente en varias fases, de las cuales la mas importante es la mitosis o fase M. En la
mayora de las celulas, toda la fase M solo dura una hora aproximadamente, lo cual corresponde solo una peque na fraccion
de la duracion total del ciclo. El periodo comprendido entre 2 fases M consecutivas se denomina interfase. Este proceso
presenta una alta actividad celular, durante el cual tienen lugar, en una secuencia de eventos ordenados, la duplicacion
del material genetico y preparacion para entrar en la fase M.
Las cuatro fases sucesivas del ciclo de una celula eucariotica tpica. Durante la interfase la celula crece continuamente;
durante la fase M se divide. La replicacion del DNA se produce unicamente durante la fase S.
Necesariamente antes de que la celula entre en mitosis deben duplicarse los cromosomas. Conociendo el concepto, Mesia
realiza una experimento para saber como logran duplicarse estos cromosomas antes de la mitosis: Antes de hacer un
preparado histologico, se inyecta al animal timidina tritiada (Radiactiva), la gracia del tritio es que si la timidina
tritiada se incorpora en el DNA, en una solucion con plata, la timina tritiada reducira la Ag, y al microscopio optico se
observan granulos de plata. (Periodo S). Si no se observan estructuras mitotitcas pero tampoco se observan granos de
plata la celula se puede encontrar en un periodo antes (Gap 1) o despues de S (Gap 2).
El ciclo celular dura al entre 17 y 20 horas. En las celulas de mamferos superiores, la fase S demora 7 horas, ya que se
deben copiar 3200 millones de pares de bases. G2 dura alrededor de 3 horas y G1 puede durar entre 5 y 7 horas.
43. Estimaci on de la duracion de las etapas del ciclo celular:
Para determinar las etapas del ciclo celular de un determinado cultivo, lo que se hace es alimentar a este cultivo con
un pulso de timidina tritiada, la cual migrara a las celulas que dupliquen su DNA. 24 Horas despues se toma el cultivo y
se hace una autorradiografa del mismo. Si se observan 2 celulas con la presencia de granulos de plata entonces la duracion
de la fase S estara dada (en horas) por:
S =
2
12
24 = 4 factor de correccion
Estimacion de la duracion de las fases del ciclo celular
67
Sin embargo, este metodo no es lo sucientemente efectivo debido a que no sabemos si las celulas estan efectivamente
sincronizadas (todas en G1 por ejemplo). Por lo que Renato Dulbecco (Padre del cultivo celular) descubrio que las
celulas que estan en interfase se encuentran estiradas y las que estan en mitosis tienen una forma redondeada, por lo que
si se perturba el cultivo caeran solo las celulas que estan en fase M teniendo un cultivo mucho mas sincronizado.
Sincronizacion del cultivo celular mediante golpecitos?
Metodo del Metotrexato: Lo que hace esta droga es inhibir el metabolismo del acido folico que se necesita para
realizar la sntesis de DNA, por lo tanto si se le suministra la droga a un cultivo de celulas, este se bloquea exactamente
al inicio de S. De esta manera queda sincronizado el cultivo de manera optima.
Gracias a los cultivos sincronizados con metotrexato se logro determinar el factor promotor de la mitosis (MPF)
44. Detecci on del Factor promotor de la Mitosis MPF:
Imagen Izquierda: Mediante la fusion de celulas en distintas fases del ciclo celular con celulas en la fase M, se logro la
induccion de los cromosomas en celulas que se encontraban en G1,S y G2 (MPF)
Imagen Derecha: Los citoplasmas en fase S contienen factores que hacen que los n ucleos en G1 entren directamente en
proceso de sntesis del DNA. Sin embargo, los n ucleos en G2 son refractarios a dichos factores. Notese que la fusion de
una celula en G2 con una celula en G1 no hace que el n ucleo G1 inice la sntesis de su DNA. Por lo tanto los factores
presentes en la fase S desaparecen en la fase G2.
En un experimento realizado con levaduras que se dividan por sion y yemacion, se busco determinar cuales son estos
factores que inducan la duplicacion del material genetico . Para ello cultivaron levaduras que tenan una restriccion para
dividirse a altas temperaturas obteniendo un resultado como el siguiente:
68
Arresto del ciclo celular mediado por variaciones de temperatura
A una temperatura permisiva, las celulas se dividan con normalidad. Si elevamos la temperatura hasta la restrictiva, uno
de los genes dejara de actuar con normalidad y conllevara a un arresto del ciclo. A estos genes se les denomina genes cdc.
44.1. Ciclinas:
EL MPF corresponde a un complejo proteico formado esencialmente por 2 protenas. Una quinasa dependiente de
ciclina Cdk y la ciclina correspondiente.
Complejo proteico MPF
Existen distintos tipos de ciclinas:
Ciclinas G
1
/S: Activan el CdKs al nal de G
1
.
Ciclinas-S: Estimulan la duplicacion de los cromosomas.
Ciclinas-M: Estimulan la entrada en M en el checkpoint G
2
/M
Ciclinas-G
1
: Ayudan a las ciclinas G1/S y su funcion es llevar a cabo el crecimiento y desarrollo celular para entrar
en S.
Accion de los distintos tipos de ciclinas durante distintas fases del ciclo celular.
44.1.1. Mecanismo molecular de activacion e inactivacion de Cdk1-M (MPF)
El MPF siempre esta formado en el ciclo celular. La actividad del MPF aparece en la mitosis pero esta presente
durante todo el ciclo en su forma inactiva. Para poder inducir la mitosis se requiere una activacion mediante fosforilacion
y desfosforilacion de los CdK. Existen dos enzimas quinasa que act uan sobre el MPF inactivo. Una quinasa activadora
fosforila a la quinasa del MPF en un punto. Simultaneamente hay otra quinasa que fosforila otro fosfato en otro lugar de
la quinasa y se transforma en un fosfato inhibitorio. Para poder activarlo necesitamos de la actividad de una fosfatasa
que saca el fosfato inhibitorio y deja al MPF en su conformacion funcional:
69
Mecanismo de regulacion y activacion de la CdK1-M
A medida que el nivel de ciclina-M aumenta, una protena CAK (Protena activadora de CdK) fosforila a la CdK1 en
su sitio activo, mientras que al mismo tiempo una protena Wee1 (Protena inhibitoria de CdK) fosforila a la CdK1
en su sitio inactivo. La activacion de la CdK se lleva a cabo por una fosfatasa cdc25 que hidroliza el fosfato inhibitorio
activando el MPF. Se cree que el MPF activo estimula su propia activacion por retroalimentacion positiva con Cdc25 y
negativa con Wee1.
Es importante recalcar que tanto la quinasa de inicio y el MPF se componen de Cdc2, pero se asocian
con diferentes tipos de ciclina. Esto sugiere que la Cdc2 esta presente de forma permanente, pero cambia su estado
de asociacion con las ciclinas, lo cual dene las fases del ciclo de division mitotica (Inicio y Fin de fase M).
La activacion del M-CdK estimula:
1. Ruptura de la membrana nuclear.
2. Condensacion de los cromosomas.
3. Formacion de la maquinaria mitotica.
4. Degradacion de la ciclina.
44.1.2. Control de la proteolisis de ciclinas mediante APC/C (Complejo promotor de la anafase):
La degradacion y desensasmble de protenas ciclinas al CDK esta mediado por ubiquitinas
70
45. Sitios de Control del ciclo celular:
Cada una de las acciones principales del sistema de control del ciclo celular (La activacion del MPF al inicio de la
mitosis, su inactivacion en la transicion de la metafase a la anafase, la activacion de la quinasa de Inicio) desencadenan
un complejo proceso subordinado que requiere un cierto intervalo de tiempo para completarse. Si el sistema de control
inicia la siguiente accion sin que cada uno de estos procesos se haya completado, es probable que las consecuencias sean
fatales o mutagenicas para la celula.
Puntos de control sobre el ciclo celular.
Puntos de control:
Transicion G2-M: Este punto de control esta inuenciado por el tama no celular, da nos producidos en el DNA y
la replicacion del material genetico.
Transicion Metafase-Anafase: Inuenciado por la posicion ecuatorial de los cromosomas.
Punto de restriccion G1-S/Go: Inuenciado principalmente por la presencia adecuada de factores de crecimiento,
nutrientes, tama no celular o da nos en el DNA.
Es importante armar que tras el cumplimiento requerido por los puntos de control, recien comienza la
actividad de las ciclinas y Cdk.
46. Control del Ciclo celular en organismos Multicelulares:
La proliferacion de celulas en el cuerpo tiene que estar regulada de forma que se mantenga el n umero de celulas y su
organizacion espacial. Esta regulacion depende de interacciones de unas celulas con otras y con la matriz extracelular.
Consideremos un tejido epitelial: La proliferacion celular tiene que estar controlada de forma precisa para
equilibrar la perdida de celulas, de forma que el epitelio ni crezca ni decrezca. Las nuevas celulas han de
encajar perfectamente en la estructura. De hecho, en la mayora de los epitelios solo se dividen las celulas que contin uan
en contacto con la lamina basal.
Habitualmente, las celulas situadas en la supercie de una placa de cultivo proliferan hasta que se tocan unas con otras,
formando una monocapa conuente. El siguiente diagrama muestra lo que ocurre si se rasga la monocapa. Las celulas que
quedan en los margenes de la herida se aplanan y empiezan a crecer y a dividirse hasta que se reconstituye la monocapa
conuente.
Es importante recordar que la interaccion celula-celula no es suciente para el cese de la proliferaci on. El medio tambien
puede modicar la densidad celular.
71
46.1. Efectos Tempranos y Tardos de Los oncogenes
Respuesta temprana mediada por Myc: Myc es el producto de un gen myc de respuesta rapida. El graco a
continuacion muestra los cambios de concentracion de Myc tras un incremento repentino de la concentracion del factor
de crecimiento hacia un nuevo estado estacionario, lo que provocara la salida de la celula en Go y su proliferacion. Los
cambios en la concentracion de Myc reejan cambios en la transcripcion del gen myc. La propia protena
Myc inhibe la transcripcion del myc y se cree que su retroalimentacion negativa explica por que el nivel de Myc disminuye
desde su valor maximo inicial hacia un valor mas bajo pero estable:
Respuesta celular y salida de Go provocado por la presencia repentina del factor de crecimiento adecuado.
Debemos tener en cuenta que las poblaciones celulares en condiciones normales tienen un tiempo de vida determinado,
caracterizado principalmente por la etapa de Senescencia y muerte. Las celulas tienen una capacidad limitada de
division, tras ciertas divisiones mitoticas, la celula no puede salir de Go y la poblacion muere. Sin embargo, celulas
transformadas son por denicion inmortales:
46.1.1. Oncogenes y Genes supresores de tumores:
Todas las celulas de un tumor proceden de una unica celula (pertenecen a un mismo clon), un ancestro com un que en un
momento dado inicio un programa inadecuado de proliferacion. Esta transformacion maligna se produce por acumulacion
de mutaciones en un conjunto de genes muy especco. Existen dos clases de genes, que en conjunto representan una
proporcion muy peque na del conjunto del genoma, pero que juegan un papel fundamental en el inicio de la progresion
tumoral.
Protooncogenes: contribuyen a la progresion tumoral cuando sufren mutaciones que los activan, es decir, cuando
se produce una ganancia de funcion; este tipo de mutacion tiene un efecto dominante. Por lo que solo basta que
uno de los 2 alelos presente la mutacion para desarrollar el tumor.
Genes supresores de tumores: intervienen en el proceso tumoral si sufren mutaciones que los inactivan, es decir,
si se produce una perdida de funcion; este tipo de mutacion tiene un efecto recesivo: para eliminar la actividad,
tienen que estar mutados los dos alelos
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Oncogenes activados por virus: El caso mas estudiado corresponde al virus del sarcoma de Rous. Los oncogenes
virales provienen de genes celulares que fueron en alg un momento secuestrados por el virus y posteriormente mutaron.
Para efectos de notacion un oncogen viral se denomina v-src y la forma benigna del mismo (ubicado en los genes celulares)
se denomina c-src.
Secuestro del gen c-src unido al genoma del virus para que este protooncogen se transforme en un oncogen y tenga
efectos malignos.
46.1.2. Retinoblastoma Humano:
El gen retinoblastoma Rb fue inicialmente identicado a traves de estudios sobre una predisposicion hereditaria
para un cancer poco conocido, que se produce en los ojos de algunos ni nos. La perdida de las dos copias de este gen
conduce a una proliferacion celular excesiva en la retina inmadura, lo cual sugiere que normalmente el producto del gen
ayuda a mantener controlada la proliferacion celular. La clonacion del gen retinoblastoma posbilita explorar como ejerce
este efecto el producto de gen.
La protena Rb es una molecula abundante en el n ucleo de celulas de mamferos. Tiene la capacidad de unirse a diferentes
protenas, incluso algunas protenas reguladoras de genes, pero su capacidad de union depende de su estado de
fosforilacion.
Cuando Rb se desfosforila, se une a un conjunto de protenas reguladoras que favorecen la proliferacion celular,
manteniendolas secuestradas y fueras de accion Celulas en Go.
La fosforilacion de Rb facilita la liberacion de estas protenas permitiendo que act uen. En celulas normales Rb
esta siempre presente. Estimula la proliferacion.
Protena Rb desfosforolizada mantiene a la celula en Go, y la protena fosforolizada activa la proliferacion celular.
La Rb se desfosforila cuando la celula sale de la mitosis y se refosforila al nal de G1, cuando la celula se
prepara para superar el inicio.
Posibles vas de eliminacion de genes supresores de tumores Rb.
73
El siguiente graco demuestra la regulacion completa del inicio del ciclo celular tras la recepcion de un factor que estimula
la proliferacion y el paso a la fase S.
Paso del checkpoint G1/S
Regulacion del Ciclo celular por la protena P53: Resulta esencial para inducir la respuesta de la celula ante el
da no del ADN, deteniendo el ciclo celular en caso de mutacion. El gen p53 es un gen supresor tumoral que desempe na
un papel importante en apoptosis y control del ciclo celular. Un p53 defectuoso podra permitir que las celulas anormales
proliferen dando por resultado cancer.
Si la activaci on del P53 se debe por una produccion excesiva de MyC (factor proteico que estimula la proliferacion),
la P53 activa puede llevar a la celula a un arresto temporal del ciclo celular o a una apoptosis programada.
Si la activacion del P53 se debe a un da no explcito del DNA, la P53 act ua como protena reguladora que activa la
transcripcion de la P21, la cual act ua sobre el complejo activo CdK-S y CdK-G1/S inactivandolos manteniendo a
la celula en el punto de control G1.
Regulacion por P53
74
Resumen y progresion molecular del ciclo celular
Parte XIII
Mecanismos de la divisi on celular:
La fase M incluye los diferentes estadios de division nuclear (mitosis) y de la division citoplasmatica (citocinesis). En
un periodo breve, los contenidos de la celula madre, que se han duplicado mediante las actividades biosinteticas de la
interfase precedente, se segregan en dos celulas hijas.
La primera manifestacion apreciable de la fase M es la progresiva compactacion de la dispersa cromatina interfasica,
formando unos cromosomas en forma de hilo. Esta condensacion cromosomica es necesaria para la segregacion organi-
zada de cromosomas en dos celulas hijas que tendra lugar a continuacion, y se ve acompa nada por la extensa fosforilacion
de moleculas histona H1. Se cree que la fosforilacion de la H1 en el comienzo de la fase M contribuye a la condensa-
ci on cromosomica, ya que su concentracion es 1 molecula por nucleosoma y se sabe que participa uniendo nucleosomas.
Un cromosoma es aquel que esta formado por 2 cromatidas, se entiende por cromosoma unicamente el
cromosoma metafasico.
Cambios en la cantidad de DNA a traves del ciclo celular
La mitosis tiene 2 funciones facilmente identicables:
Proliferacion: Segregacion del material genetico en multicelulares.
Reproduccion: En la mayora de los organismos eucariontes unicelulares, la mitosis ademas tiene la funcion
reproductiva de la especie.
No olvidar que tras una division mitotica en condiciones normales existe conservacion del material genetico, por lo que
las 2 celulas hijas son clones.
47. Etapas de la mitosis:
Tradicionalmente la fase M se divide en 6 estadios:
47.1. Profase:
La transicion de G2 a la fase M del ciclo celular no es un proceso estrictamente denido. La cromatina, que en la
interfase se halla difusa, se condensa lentamente formando cromosomas bien denidos. Cada cromosoma se ha duplicado
durante la fase S precedente y ahora consta de 2 cromatidas hermanas, cada una de las cuales contiene una secuencia
de DNA especca conocida como centromero, necesaria para la correcta segregacion del cromosoma. Hacia el nal de
la profase los microt ubulos citoplasmaticos que forman parte del citoesqueleto interfasico se despolimerizan y empieza a
75
formarse el huso mitotico.
Ademas de los procesos que ocurren a nivel nuclear, se necesita la duplicacion del centrosoma. Los procesos de la
duplicacion y separacion del centrosoma se conocen como ciclo del centrosoma. Durante la interfase de cada ciclo celular,
los centriolos y los otros componentes del centrosoma se duplican pero permanen juntos como un unico complejo en una
cara de la membrana nuclear. Al iniciarse la mitosis, este complejo se divide en dos y cada pareja de entriolos forma parte
de un centro organizador de microt ubulos.
Interfase, Profase y Prometafase en una celula animal (presencia de centriolos)
47.2. Prometafase:
La prometafase se inicia bruscamente con la desintegracion de la envoltura nuclear formando vesculas que
permaneceran visibles alrededor del huso durante la mitosis. Los microt ubulos del huso, que hasta este momento se
hallaban fuera del n ucleo celular, pueden entrar en la region nuclear. En cada centromero maduran complejos especializados
llamados cinetocoros y que se unen a algunos de los microt ubulos del huso, que recibiran el nombre de microt ubulos
cinetocoricos. Los microt ubulos remanentes del huso se denominan microt ubulos polares, mientras que los que son
exteriores al huso se llaman microt ubulos astrales. Los microt ubulos cinetocoricos o cromosomicos ejercen tension
sobre los cromosomas, los cuales se ven sometidos a movimientos agitados.
Esquema del huso mitotico en una celula metafasica.
47.3. Metafase:
Los microt ubulos cinetocoricos alinean los cromosomas en un plano situado a medio camino de los polos del huso.
Cada cromosoma se mantiene en tension en esta placa metafasica por los cinetocoros apareados y por sus microt ubulos
asociados, los cuales estan unidos a los polos opuestos del huso.
76
Metafase, anafase y telofase en una celula animal.
47.4. Anafase:
Impulsada por una se nal especica (degradacion de M-ciclina), la anafase empieza bruscamente cuando los cinetocoros
apareados de cada cromosoma se separan, permitiendo que cada cromatida (que solo ahora se denomina cromosoma) sea
arrastrada lentamente hacia un polo del huso. Se pueden distinguir dos categoras de movimiento:
Anafase A: Los microt ubulos cinetocoricos se acortan a medida que los cromosomas se aproximan a los polos.
Anafase B: Los microt ubulos polares se alargan y los polos del huso se separan.
Anafase
47.5. Telofase:
En la Telofase los cromosomas hijos separados llegan a los polos y los microt ubulos cinetocoricos desaparecen. Los
microt ubulos polares se alargan a un mas y se vuelve a formar la carioteca. La cromatina condensada se expande de nuevo.
47.6. Citocinesis:
El citoplasma se divide mediante un proceso llamado segmentacion, que por lo general empieza en alg un momento
de la anafase. Este ejemplo ilustra como ocurre este proceso en celulas animales. La membrana de la zona central de la
celula perpendicular al eje del huso y situada entre los 2 n ucleos, genera el surco de segmentacion que gradualmente se
vuelve mas profundo, hasta que entra en contacto con los estrechos restos del huso mitotico que quedan entre los dos
n ucleos. Finalmente este anillo contractil separa a las celulas hijas.
Telofase y citodieresis
77
48. Detalles de la divisi on Celular:
48.1. Condensaci on de los cromosomas:
Todos los cambios que ocurren al comienzo de la mitosis dependen de la activacion de la M-Cdk. En esta etapa el MPF
fosforila a las laminas nucleares A,B,C (materia I2). Ademas, fosforila las protenas del nucleolo y lo desagrega. Finalmente
el MPF participa en la condensacion de la cromatina fosforilando a la H1. El cordon formado se llama solenoide o bra
basica (formado por 6 nucleosomas apilados), mide 30 nm. Protenas Scafoldinas forman el esqueleto cromosomico.
48.1.1. Condensinas:
Las condensinas son complejos proteicos que juegan un rol central en el ensamblado y segregacion cromosomica en
las celulas eucariontes. En las celulas de los vertebrados hay al menos dos tipos diferentes de complejos de condensinas,
conocidos como condensina I y condensina II. Ambos complejos comparten el mismo par de subunidades centrales, SMC2
y SMC4, con actividad ATP-asa para realizar su funcion. Las SMC (de Structural Maintenance of Chromosomes)
son protenas encargadas del mantenimiento estructural de los cromosomas.La principal funcion de las
condensinas es
Condensina II: Esta presente dentro del n ucleo celular durante la interfase y esta involucrada en las etapas mas
tempranas de la condensacion de cromosomas durante la profase.
Condensina I: Esta presente en el citoplasma durante el periodo interfasico, y gana acceso a los cromosomas una
vez que la membrana nuclear se desagrega.
Durante la prometafase y la metafase, tanto la condensina I como la condensina II contribuyen a condensar y ensamblar
los cromosomas.
Las condensinas estan formadas por Dmeros de SMC.
La fosforilaci on de condensina por M-Cdk, estimula la capacidad de condensar el DNA. (Al menos una de las
subunidades de condensina es uno de los blancos conocidos de las kinasas dependientes de ciclinas (Cdk).)
Las condensinas son protenas encargadas del mantenimiento estructural de los cromosomas.
Condensinas: En azul y celeste se observan los dmeros del SMC, con su dominio ATP-asa para enrollar la cromatina y
los solenoides. Es importante rearmar que las condensinas se asocian en grupos de 8 en la formacion de la estructura
cromosomal.
48.1.2. Cohesinas:
La cohesina es un complejo de protenas involucrado en la separacion de las cromatidas, encargada de mediar la
union de las cromatidas en la metafase. Es uno de los complejos proteicos responsables de mantener la estructura de los
cromosomas. A diferencia de las condensinas que actuan sobre todo el ADN, las cohesinas son vitales para
mantener unidas a las cromatidas hermanas durante la metafase.
En el momento de la separacion de cromatidas en anafase, las cohesinas son destruidas por la separasa que anteriormente
se encontraba inhibida por una protena llamada securina. En la anafase, el APC/C (Complejo Promotor de Anafase)
marca la securina para la degradacion. Proceso especco del checkpoint de la fase M.
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Cohesinas, formadas por SMC1 y SMC3, participa en el ensamblaje y el mantenimiento de la union entre cromatidas
hermanas
48.2. Formacion del Huso mit otico:
El ensamblaje del huso, la captura de cromosomas , su alineacion en la placa metafasica y el posterior alargamiento
del huso con el desplazamiento de los cromosomas a los polos, dependen de una serie de procesos que ocurren cerca de
los extremos de los microt ubulos. Los extremos no son tan solo el lugar donde se localiza el ensamblaje y desensamblaje
de microt ubulos, sino tambien donde se produce la fuerza mecanica para la mitosis. Existen tres tipos de microt ubulos
asociados al huso mitotico:
Microt ubulos polares: se solapan en la lnea media del huso y son responsables de empujar a los polos del huso
causando su separacion.
Microt ubulos cinetocoricos: Se adhieren al cinetocoro especializado que forma el centromero.
Microt ubulos astrales: Parten en todas direcciones desde los centrosomas y se cree que contribuyen a generar las
fuerzas que separan los polos.
Estructura de los centrosomas al microscopio y ilustracion de la duplicacion de centriolos en forma ortogonal en la fase
S.
Esquema del huso mitotico de una celula animal
79
48.2.1. Cinetocoro:
Los microt ubulos cromosomicos van desde el polo hacia los cromosomas, se dirigen directamente hacia el cinetocoro
(anillo proteico) que es una region del centromero.
En la capa mas externa del cinetocoro se insertan los microt ubulos cromosomicos. Esto se descubrio gracias a pacientes
con enfermedades autoinmunes. Las protenas del cinetocoro reconocen una secuencia de 171 pares de bases. Este DNA
no codica pero tiene funciones estructurales. Por ingeniera genetica en celulas Hila, se introdujo una letra cambiada en
estos pares de bases. Esta mutacion resulto en una muerte celular (Entra en apoptosis): Al estar mutada en 1 base, las
protenas del cinetocoro no reconocen la secuencia y no se arma el complejo. Por lo tanto la celula se detiene en metafase.
Region cinetocorica del cromosoma
Detalles de la union cinetocoro-microt ubulo: Hemos armado que el cinetocoro es un complejo proteico externo
del centrosoma, en donde el ADN tiene una secuencia especca de bases ricas en AT. Los microt ubulos cromosomicos
solamente se unen a la estructura externa del cinetocoro. En este punto se pueden llegar a producir las no disyunciones
cromosomicas pues existe la posibilidad de que dos microt ubulos cromosomicos no queden equitativamente distribuidos
en los cinetocoros.
Detalles de la union cinetocoro-microt ubulo
48.3. Complejo Promotor de la Anafase APC/C:
Corresponde a la accion de una ligasa de ubiquitina multisubunitaria, que se activa por la adicion de una subunidad
dependiente del ciclo celular. Su activacion produce la degradacion de ciclinas M y otras protenas regulatorias en la
transicion Metafase-Anafase.
Durante la fase M hasta la metafase una protena separasa que en su forma activa se encarga de degradar las cohesinas
se encuentra unida a una protena securina (que la mantiene en su forma inactiva). La activacion del APC/C por medio de
una protena Cdc20 hace que el APC/C act ue sobre la securina ligandole una cadena de poliubiquitina para su posterior
degradacion. Similar es el caso para la degradaci on de M-ciclina.
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Accion del APC/C sobre las cohesinas y la degradacion de la M ciclina que permite el paso de la metafase hacia la
anafase.
48.4. Detalles de la anafase y la migraci on cromosomica:
En la anafase se separan las cromatidas y las celulas animales se elongan para que ocurra citodieresis. Se distinguen
2 tipos de anafase:
1. Anafase A : Viaje de las cromatidas hacia los polos (Acortamiento de los microt ubulos del cinetocoro).
2. Anafase B: Elongacion de la celula animal y ocurre por accion de microt ubulos interpolares. Estos se empiezan a
separar y permiten la elongacion celular.
Si cualquiera de los mecanismos del complejo promotor de la anafase falla, se produce una no disyuncion cromosomal que
se traducira en celulas hijas con desigual cantidad de cromosomas.
Anafase A por acortamiento de los microt ubulos cinetocoricos y problemas por no disyuncion cromosomica
Recordemos tambien que las funciones de los microt ubulos no estan estrctamente limitadas a la separacion de cromatidas
hermanas durante la mitosis. En esta misma fase, los organelos deben ser capaces de migrar hacia los 2 polos de la celula
de manera equitativa. Este transporte de organelos esta mediada (como vimos en la I2) por la accion de kinesinas y
dinenas.
Accion de kinesinas y dinenas
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48.5. Detalles de la Telofase y citocinesis:
48.5.1. Telofase:
Al nal de la anafase los cromosomas se han separado en dos grupos iguales, uno en cada polo del huso. En la telofase,
el estadio nal de la mitosis, se recompone una envoltura nuclear alrededor de cada grupo de cromosomas, formando los
dos n ucleos hijos de la interfase.
Esquema de la telofase en donde se hace enfasis en la formacion de la membrana nuclear
La repentina transicion desde la metafase a la anafase inicia la desfosforilacion de las muchas protenas que se fosforilaron
en la profase: aunque las fosfatasas pertinentes permanecen activas durante la mitosis, no pueden actuar hasta que se
desactiva el MPF. poco despues de esto, en la telofase, las vesculas de la membrana nuclear se asocian con la supercie de
cromosomas individualizados y se fusionan entre s, recomponiendo las membranas nucleares, envolviendo parcialmente
grupos de cromosomas, antes de coalescer y recomponer la envoltura nuclear completa.
48.5.2. Citodieresis:
Durante la citocinesis el citoplasma se divide mediante un proceso denominado segmentacion. Aunque normalmente la
division nuclear y la division citoplasmatica estan relacionadas, son acontecimientos que se pueden separar. Por ejemplo,
el embrion temprano de Drosophila experimenta 13 divisiones celulares sin division citoplasmatica. En una celula normal,
cada mitosis viene acompa nada de una citocinesis que comienza en la anafase, continua en la telofase y alcanza su
culminacion al comenzar la interfase siguiente.
El anillo contractil formado en la anafase se realiza sobre los microt ubulos interpolares. Este anillo esta compuesto por
microlamentos de actina y miosina. La activacion pertinente para la formacion de la esctructura contractil esta mediada
por la activacion de una protena Rho.
Accion del anillo contractil de actina y miosina
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Activacion de la protena Rho
49. Telofase Vegetal:
La mayora de las celulas de plantas superiores estan encerradas en una pared celular rgida, y en estas celulas el
mecanismo de la citocinesis es distinto al de las celulas animales. En vez de separar ambas celulas mediante un anillo
contractil en la supercie celular, el citoplasma vegetal se parte por la construccion de una nueva pared celular en el
interior de la celula. La nueva pared transversal, o placa celular, empieza a ensamblarse en un plano situado en los
dos n ucleos hijos y en asociacion con los microt ubulos polares del huso, que forman una estructura cilndrica llamada
fragmoplasto.
El proceso para formar el fragmoplasto pareciera partir por peque nas vesculas rodeadas de membrana, derivadas del
complejo de Golgi y repletas de precursores de la pared celular. Estas vesculas contactan con los microt ubulos en cada
cara del fragmoplasto y se dejan transportar por ellos hasta alcanzar la region ecuatorial. All se fusionan entre s formando
una estructura rodeada de membrana llamada placa celular precoz. Las moleculas de polisacaridos liberadas por estas
vesculas se ensamblan en la placa celular precoz formando la matriz de la pared celular primaria. Ahora, esta pared debe
expandirse hacia la periferia de la celula. Para ello, microt ubulos del fragmoplasto temprano se reorganizan en la periferia
de la placa celular, donde atraen mas vesculas que se fucionan en el ecuador extendiendo el borde de la placa.
Formacion del fragmoplasto vegetal. Notar la importancia de la presencia de microt ubulos interfasicos en el lugar de la
futura membrana. Estos microt ubulos, junto con bandas de actina, aparecen en G2 y son el primer indicio de la
inminente division celular vegetal.
83
50. Mitosis Carente de G1:
En muchas celulas embrionarias durante el periodo de implantacion, la masa celular no crece, pero contin ua dividien-
dose para la posterior diferenciacion.
Desarrollo embrionario de los mamferos: a. huevo fertilizado, b. Estado de 2 celulas (1,5 das), c. Estado de 8 celulas
o morula (2,5 das), d. Estado de 16 celulas (3 das) y e. Estado de blastocisto (4 das).
Comparacion actividad de ciclinas en celulas proliferativas carentes de G1 con celulas con ciclo celular normal.
Parte XIV
Meiosis
En principio la meiosis(meio = mitad) es el proceso por el cual se generan celulas haploides a partir de celulas diploides.
Si la celula progenitora tena una cantidad de cromosomas y material genetico 2n=2c. El resultado nal seran cuatro
celulas con dotacion haploide n=c.
Resultado nal de la meiosis.
Meiosis y evolucion:
Mantencion del genoma en las especies.
Origen de la variabilidad genetica (la variabilidad genetica produce distintos fenotipos y los mas adaptados generan
mayor desendencia.).
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resultados de la meiosis: Cromosomas hom ologos no son identicos, no tienen la misma combinacion de genes. Tienen
distintos Alelos (Modicaciones de genes). En la primera division meiotica se dividen los cromosomas homologos. En la
segunda meiosis ocurre una mitosis com un y corriente; sin replicacion del material genetico.
51. Etapas de la Meiosis:
En la meiosis se producen dos divisiones celulares consecutivas, sin la replicacion de material genetico entre las
divisiones.
Reduccion cromosomica y recombinacion genetica en la meiosis.
51.1. Meiosis 1:
51.1.1. Profase I:
Corresponde a la etapa mas importante y mas larga de este proceso, pues en la profase I ocurre la recombinacion
genetica que produce variabilidad fenotpica y genotpica en la descendencia. Dada su importancia la profase I puede
subdividirse de la siguiente manera:
Leptoteno, Zigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis.
Leptoteno: Etapa durante la cual los cromosomas individuales comienzan a condensar en lamentos largos dentro del
n ucleo. Cada cromosoma tiene un elemento axial, un armazon proteico que lo recorre a lo largo, y por el cual se ancla
a la envoltura nuclear. A lo largo de los cromosomas van apareciendo unos peque nos engrosamientos denominados
cromomeros. La masa cromatica es 4c y es diploide 2n.
Zigoteno: Los cromosomas homologos comienzan a acercarse hasta quedar recombinados en toda su longitud. Esto
se conoce como sinapsis (union) y el complejo resultante se conoce como bivalente o tetrada. Lugar donde los
cromosomas homologos (paterno y materno) se aparean, asociandose as cromatidas homologas. Los cromosomas se
ven atrados por una serie de protenas encargadas de la union de los cromosomas homologos llamado complejo
sinaptonemico.
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Estructura del complejo sinaptonemico entre cromosomas homologos
Paquiteno: Una vez que los cromosomas homologos estan perfectamente apareados formando estructuras que se de-
nominan bivalentes se produce el fenomeno de entrecruzamiento (crossing-over) en el cual las cromatidas homologas
no hermanas intercambian material genetico. La recombinacion genetica resultante hace aumentar en gran medida
la variacion genetica entre la descendencia de progenitores que se reproducen por va sexual. La recombinacion
genetica esta mediada por la aparicion entre los dos homologos de una estructura proteica de 90 nm de diametro
llamada nodulo de recombinacion. En el se encuentran las enzimas que medan en el proceso de recombinacion.
Durante esta fase se produce una peque na sntesis de ADN, que probablemente esta relacionada con fenomenos de
reparacion de ADN ligados al proceso de recombinacion.
nodulo de recombinacion: lugar sistematico donde ocurre el crossing over.
Diploteno: Los cromosomas contin uan condensandose hasta que se pueden comenzar a observar las dos cromatidas
de cada cromosoma. Ademas en este momento se pueden observar los lugares del cromosoma donde se ha producido
la recombinacion. Estas estructuras en forma de X reciben el nombre quiasmas. Cada quiasma se origina en un sitio
de entrecruzamiento, lugar en el que anteriormente se rompieron dos cromatidas homologas que intercambiaron
material genetico y se reunieron.
Diploteno
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Diacinesis: El nal de la diacinesis y por tanto de la profase I meiotica viene marcado por la rotura de la membrana
nuclear. Durante toda la profase I continuo la sntesis de ARN en el n ucleo. Al nal de la diacinesis cesa la sntesis
de ARN y desaparece el nucleolo.
Resumen e interacciones entre cromosomas homologos durante la profase I
51.1.2. Metafase I
En esta seccion aparece el huso mitotico desarrollado y en vez de anclarse a cada cinetocoro de cada cromatida
hermana, lo hace sobre los cromosomas homologos de las tetradas.
51.1.3. Anafase I y Telofase I
Separacion de cromosomas homologos y comienza la invaginacion de la membrana celular para posteriormente dar
lugar a 2 nuevas celulas con la mitad de cromosomas, pero con cantidad de ADN doble, pues existen cromosomas con 2
cromatidas. Notar que es un error llamar a estos cromosomas : homologos, pues tienen alelos distintos para determinados
genes (en donde hubo recombinacion). Se vuelve a formar temporalmente la membrana nuclear.
La meiosis II es simplemente una mitosis sin duplicacion de material genetico, por lo que su apunte es
redundante.
Comparacion Mitosis y Meiosis
Mecanismos que originan variabilidad genetica:
Permutacion cromosomica al azar (tiene lugar durante la metafase-anfase I o II).
Crossing Over (Paquiteno de la profase I)
87
52. Ovogenesis y Espermatogenesis
52.1. Ovogenesis:
Los ovogonios se desarrollan a partir de las celulas germinales primordiales que al principio de la embriogenesis migran
hacia la gonada en desarrollo. Tras un cierto n umero de divisiones mitoticas, los ovogonios empiezan la division meiotica I
recibiendo el nombre de ovocitos primarios. En los mamferos, los ovocitos primarios se forman muy temprano (entre
los 3 y 8 meses de gestacion) y permanecen en la profase de la division meiotica I hasta que la hembra es sexualmente
madura. En este momento y de forma periodica un peque no n umero de ovocitos madura bajo la inuencia hormonal
completando la division meiotica I y constituyendose los ovocitos secundarios. Cuando comienza la pubertad LA FSH,
provoca que las celulas en el dictioteno vuelvan a la meiosis y completa la primera division meiotica. Es una citodieresis
no ecutatorial. Una se convierte en el ovocito 2 y otra en el cuerpo polar. Los ovocitos secundarios, nalmente pasan
por la division mei otica II. En la mayora de los vertebrados la maduracion de los ovocitos se encuentra detenida en la
metafase de la meiosis II, y el ovocito secundario solo completa la meiosis II tras la fecundacion. Finalmente todos los
cuerpos polares degeneran.
52.2. Espermatogenesis:
Los espermatogonios se desarrollan a partir de las celulas germinales primordiales que migran hacia los testculos
durante las primeras fases de la embriogenesis. Cuando el animal alcanza la madurez sexual, la espermatogonia empieza
a proliferar rapidamente, generando alguna progenie que retiene la capacidad de continuar dividiendose indenidamente
(como celulas madre de espermatogonias) y otra progenie (espermatogonia en maduracion) que despues de un n umero
limitado de ciclos de division normal inician la meiosis hacia espermatocitos primarios.

Estos contin uan a traves de la
division I para transformarse en espermatocitos secundarios. Despues de completar la meiosis II, estos espermatocitos
producen espermatidas haploides que se diferencian pasando a ser espermatozoides maduros. Es importante recalcar
que la madurez total del espermatozoide se produce cuando entra en contacto con el tracto femenino.
La espermatogenesis se diferencia de la ovogenesis en varios aspectos: (1) A partir de la pubertad continuamente existen
nuevas celulas que inician la meiosis, (2) cada celula que empieza la meiosis da lugar a cuatro gametos maduros y no a
uno solo, y (3) los espermatozoides maduros se forman por un proceso elaborado de diferenciacion celular que empieza
despues que se complete la meiosis.
88
53. Cromosomas
53.1. Cromosomas Politenicos:
Los cromosomas gigantes se forman por la repeticion del periodo S interfasico, formados por cientos de hebras de
cromatidas. Poseen unas bandas caractersticas que es donde se enrolla la cromatina. Las interbandas son lugares donde
la cromatina se encuentra mas laxa. Los pus cromosomicos son lugares donde se desenrrollan las bandas para la
sntesis de transcriptos. Como esta formado por cientos de hebras, los pus funcionan como zonas amplicadoras de
genes.
Cromosomas politenicos y estructura de un Pu cromosomico
53.2. Cromosomas Plumulados:
Cromosomas que aparecen en el diploteno (etapa meiotica) de la ovogenesis de anbios. La cromatina se organiza en
base a asas. En estas asas se expone mas ADN y hay mayor posibilidad de transcripcion. Por lo tanto, en el diploteno de
la ovogenesis de los anbios se producen los Rnas necesarias para la formacion del cigoto.
Cromosoma plumulado
53.3. Cariotipo Humano:
El orden de los cromosomas representa el cariotipo especco de una especie. Para la formacion del cariotipo, los
cromosomas se juntan por homologos y se ordenan por tama no. El cariotipo humano corresponde a 22 pares de cromosomas
autosomicos y 1 par sexual.
Cariotipo Humano
89
53.3.1. Preparacion de un Cariotipo de Sangre:
La imagen a continuacion muestra el proceso para obtener el cariotipo en seres humanos. La importancia de este
parrafo radica en conocer la funcionalidad de la Colchicina. La colchicina es un farmaco antimitotico que detiene o
inhibe la division celular en metafase o en anafase. Es un compuesto que evita el reparto de los cromatidas de un
cromosoma durante la mitosis. Su efecto se debe a su accion sobre las protenas citoesqueleticas del huso mitotico ya
que al desorganizar el huso, este no puede unirse a los microt ubulos cinetocoricos de las cromatidas y tirar de ellas para
separarlas. Act ua sobre la alfa tubulina, inactivandola e inhibiendo la formacion de microt ubulos.
Tratamiento para la obtencion del cariotipo con cromosomas metafasicos.
53.4. Clasicaci on de modelos de cromosomas:
Seg un la posicion del centromero podemos clasicar a los cromosomas metafasicos seg un el siguiente orden:
Metacentricos: Donde el brazo p es igual al brazo q. Por nomenclatura el brazo p tiende a ser el brazo mas corto
del cromosoma. La nomenclatura es importante para la identicacion del lugar de ciertos genes.
Submetacentricos: Diferencia de tama no entre el brazo p y q del cromosoma.
Acrocentrico: El brazo P es excesivamente peque no comparado con el brazo q.
Telocentrico: Carente totalmente del brazo P. (No existe en humanos).
Clasicacion cromosomica.
53.4.1. Nomenclatura en citogenetica de cromosomas bandeados
El bandeo de cromosomas esta dado por la accion de enzimas de actividad proteasa que son capaces de degradar
protenas pertenecientes el esqueleto cromosomico. El bandeo mas utilizado (y que se vio en clases) es el bandeo G. Las
bandas G positivas son regiones con alta presencia de AT. La mayor parte de los genes estan en las bandas G negativas.
La representacion de cromosomas bandeados se denomina idiograma.
6p23.1 Signica: Cromosoma 6, brazo p, region 2, banda 3. Sub-banda 1
90
54. Sndrome de Down.
El 95 % de los ni nos con sindrome de Down tiene trisomina en el cromosoma 21. A mayor edad aumenta la probabilidad
de tener un ni no Down. el 85 % de las no disyunciones vienen de la madre. el 15 % viene del padre. Es importante recalcar
que las monosomas autosomicas son letales en los seres humanos, solamente se acepta monosoma sexual (sndrome de
Turner). Es por esta razon que no existe el sndrome de down con carencia de un cromosoma 21.
No disyuncion meiotica que produce trisoma y monosoma; y presencia evidente del aumento la tasa de sndrome de
down conforme avanza la edad materna.
El 95 % de los casos de sndrome de down se produce por trisoma del cromosoma 21
El 4 % de los ni nos con sndrome de down proviene de una traslocacion cromosomica del cromosoma 21 al 14. La
traslocacion al cromosoma 14 no es aleatoria, pues durante la condensacion cromosomica en la meiosis,
el cromosoma 14 y el 21 estan muy cerca. Este porcentaje de los ni nos con sndrome de Down tiene 2 cromosomas
21. Pero El 21 libre esta translocado al 14. Habitualmente el 21 es acrocentrico, entonces se une al 14 que tambien es
acrocentrico.
La madre es sana, pero portadora de una translocacion del cromosoma 21 al cromosoma 14:
Los padres pueden ser portadores asintomaticos del sndrome de down. El problema es que la madre puede generar ni nos
con trisoma por traslocacion. Cuando la madre es portadora el riesgo es 16 %. Cuando el padre es portador es del 8 %.
Dentro de este 4 porciento, hay un porcentaje que no tiene trisomia 21, ni translocacion del 14. Sin embargo, la presencia
de la region 21q22.2 es necesaria y suciente para el Sndrome de Down.
21q22.2
El 1 porciento restante, se produce por mosaicos de Down. Durante la division mitotica, en las celulas somaticas ocurre
una no disyuncion del cromosoma 21. La monosoma de cromosomas autosomicos es local. Sobreviven 2 poblaciones
91
celular. 46 y 47 cromosomas. el 1 % tiene mosaico. El grado de compromiso del Sndrome de Down es el Mosaicismo. Sin
embargo, el grado de mosaicismo sanguneo no asegura nada.
Parte XV
Estructura y Funcion de la Mitocondria
La mitocondria ocupa una parte substancial del volumen citoplasmatico de las celulas eucariotas, y han sido esenciales
para la evolucion de los animales pluricelulares. Sin las mitocondrias las celulas animales actuales dependeran de la
gluc olisis anaerobica para formar ATP. En las mitocondrias el metabolismo de los az ucares esta integrado: el piruvato
(producto de la glicolisis) es importado y oxidado por el oxgeno molecular.
Las mitocondrias se describen como cilindros alargados y rgidos, de un diametro entre 0,5 y 1 m parecidos a las
bacterias. Las mitocondrias son organelos claramente moviles y plasticos, que cambian constantemente de forma e incluso
se fusionan y sionan entre ellos. Cuando las mitocondrias se desplazan por el citoplasma, aparecen asociadas a
microt ubulos, lo que determina la orientacion y distribucion de las mitocondrias en distintos tipos celulares.
Estructura de la mitocondria y localizacion en tipos celulares
55. Estructura de la Mitocondria:
1. Matriz: Contiene una mezcla altamente concentrada de cientos de enzimas, incluyendo las que son necesarias para
la oxidacion del piruvato y los acidos grados y para el ciclo de Krebs. La matriz tambien contiene diversas copias
identicas del genoma de DNA mitocondrial, ribosomas mitocondriales especiales, tRNA y varias enzimas requeridas
para la expresion de los genes mitocondriales.
2. Membrana interna: La membrana interna se encuentra replegada en numerosas crestas, que aumentan conside-
rablemente su supercie total. Contiene protenas con tres tipos de funciones:
Aquellas que realizan las reacciones de oxidacion de la cadena respiratoria. (Cadena transportadora de elec-
trones)
Un complejo enzimatico llamado ATP sintasa que produce ATP en la matriz.
Protenas de transporte especcas que regulan el paso de metabolitos dentro y fuera de la matriz.
Dado que se establece un gradiente electroqumico a traves de esta membrana por la cadena impulsada por la ATP
sintasa, es importante que la membrana interna sea impermeable a la mayora de iones.
3. Membrana Externa: Gracias a que esta contiene una gran protena formadora de canales (denominada porina),
la membrana externa es permeable a todas las moleculas con peso molecular inferior a 5000 daltons. Otras protenas
de esta membrana son las enzimas implicadas en la sntesis mitocondrial de lpidos y las enzimas que transforman
en la matriz los substratos lipdicos en formas metabolizables. Ademas posee la maquinaria necesaria para la sion
y fusion mitocondrial.
4. Espacio Intermembrana: Este espacio contiene varias enzimas que utilizan la salida de ATP de la matriz para
fosforilar otro nucleotidos.
92
56. Teora Endosimbiotica:
De acuerdo con la hipotesis endosimbiotica, las celulas ecuariontes aparecieron en una forma de organismos anaerobicos
sin mitocondrias ni cloroplastos, y luego establecieron una relacion endosimbiotica estable con un tipo de bacterias,
utilizando su sitema de fosforilacion oxidativa. El proceso de endocitosis que condujo al desarrollo de las mitocondrias se
produjo cuando el oxgeno aparecio en la atmosfera. Al parecer los cloroplastos de las plantas y de las algas han derivado
posteriormente a partir de un suceso endoctico que implico a una bacteria fotonsitetica productora de oxgeno.
Dado que la mayora de los genes que codican las protenas actuales se hallan en el n ucleo celular, es probable que durante
la evolucion eucarionte se produjera una extensa transferencia de genes desde el organelo al DNA nuclear. Esto explicara
por que algunos de los genes del n ucleo que codican protenas mitocondriales se parecen a los genes bacterianos.
Esquema de la teora endosimbiotica y transferencia nuclear que permite la codicacion de proteans mitocondriales.
Orgenes de las protenas y RNA mitocondriales: Las protenas importadas del citosol desempe nan una impor-
tante funcion en el sistema genetico de la mitocondria y constituyen la mayor parte de las protenas del organelo. La
mitocondria solo contribuye a su sistema genetico con los mRNA, los rRNA y los tRNA.
57. Importacion de Protenas la mitocondria.
Al igual que en el transporte nuclear, existe una se nal peptdica especca para la importacion mitocondrial. El
peptido se nal amino terminal del precursor proteico es reconocido por receptor que existen en la membrana externa de
la mitocondria. Se cree que la protena es translocada a traves de ambas membranas mitocondriales, a traves de lugares
especiales de contacto. Este transporte esta impulsado inicialmente por el gradiente electroqumico existence a traves de
la membrana interna y despues por la hidrolisis de ATP. en la matriz mitocondrial, el peptido se nal es eliminado por una
peptidasa de se nal formandose una protena madura.
Importacion de protenas por mitocondrias
Es importante recalcar que tambien hay distintos tipos de traslocacion de protenas mitocondrialas, unas pueden quedar
en la membrana interna o incluso estar activas en el espacio intermembrana. Se cree que en el espacio intermembrana
tambien existen chaperonas que ayudan al plegamiento proteico.
93
58. Sntesis de ATP:
El ADN es tambien precursor de la sntesis de DNA y RNA. Por s misma es la moneda de cambio energetico celula.
La mitocondria altera el equilibrio de la reaccion de hidrolisis de ATP, hacia la sntesis de ATP por 10
10
veces.
En condiciones normales la reacci on esta altamente favorecida en la direccion de la hidr olisis de ATP.
Para sintetizar ATP, se debe pasar por un proceso llamado respiracion celular y en eucariontes tenemos tres partes
identicables:
Glicolisis. (Solo se generan 2 moleculas de ATP y 2 NADH)
Ciclo ctrico o de Krebs.
Cadena Transportadora de Electrones.
EN las celulas eucariontes, a partir de los az ucares y grasas se produce acetyl CoA que tiene 2 carbonos(reaccion
intermedia). El acetil-CoA entra al ciclo de krebs. (esto es en la matriz mitocondrial). A partir de Acetil-coA comienza
la oxidacion completa para la obtencion de substratos reducidos como el NADH+H y el FADH
2
. Cada ciclo produce 3
NADH, un GTP y un FADH
2
y se eliminan dos moleculas de CO
2
.
Ciclo del acido ctrico
58.1. Fosforilacion oxidativa y cadena transportadora de electrones
Aunque el ciclo del acido ctrico forma parte del metabolismo aerobico, ninguna de las reacciones que llevan a la
produccion de NADH y FADH
2
, reaccionan con el oxgeno molecular a traves de la cadena respiratoria. Para describir
estas ultimas reacciones se utiliza el termino de fosforilacion oxidativa ya que la gran cantidad de energa que se libera
de ellas es utilizada por las enzimas de la membrana interna de la mitocondria para impulsar la transformacion del ADP
en ATP.
Fosforilacion oxidativa: La membrana mitocondrial interna act ua como una maquina de interconversion energetica,
transformando parte de la energa de oxidacion del NADH y del FADH
2
en energa de enlace fosfato del ATP.
94
Hipotesis Quimiosmotica: Seg un esta hipotesis, los intermediarios qumicos de alta energa son substituidos por una
conexion entre los procesos qumicos y los procesos de transporte. Cuando los electrones de alta energa de los hidrogenos
del NADH y del FADH
2
son transferidos a lo largo de la cadena respiratoria de la membrana mitocondrial interna,
la energa que se libera cada vez que pasan de una molecula transportadora a la siguiente es utilizada para bombear
protones a traves de la membrana interna, desde la matriz mitocondrial hasta el espacio intermembranoso. Esto genera
un gradiente electroqumico de protones a traves de la membrana mitocondrial interna, y el ujo de H
+
a favor de
este gradiente es utilizado mediante una enzima ligada a la membrana, la ATP sintasa, para impulsar la conversion de
ADP en ATP, completando la fosforilacion oxidativa.
Resumen del metabolismo energetico mitocondrial y la cadena transportadora de electrones
Acoplamiento quimiosmotico para generar el potencial necesario para la sntesis de ATP
58.2. Detalles de la cadena transportadora y el acoplamiento quimiosm otico
La cadena respiratoria contiene tres grandes complejos enzimaticos incluidos en la membrana interna:
1. Complejo NADH deshidrogenasa: es el mayor de los complejos enzimaticos respiratorios, con una masa ade
aproximadamente de 800000 daltons y mas de 22 cadenas polipeptdicas. Acepta electrones del NADH y los transere
a la ubiquinona (coenzima q), que transere sus electrones a un segundo complejo enzimatico respiratorio, el
complejo b-c
1
.
2. Complejo citocromo b-c
1
contiene por lo menos 8 cadenas polipeptdicas diferentes y parece que se presenta
en forma de dmero de unos 500 000 daltons. El complejo acepta electrones de la ubiquinona y los transere al
citocromo c, que transporta su electron hasta el complejo de la citocromo oxidasa.
3. Complejo de la citocromo oxidasa: Esta formado por, al menos, 9 cadenas polipeptdicas diferentes y se aisla
como un dmero de unos 300.000 daltons. El complejo acepta electrones del citocromo c y los cede al oxgeno. Y
esta es la unica funcion del oxgeno molecular en la vida
95
Paso de los electrones a traves de los tres complejos enzimaticos respiratorios.
58.2.1. Potencial Redox asociado a la cadena transportadora de electrones:
Los electrones uyen a traves de un complejo enzimatico pasando de manera secuencial a los cuatro o mas transpor-
tadores de electrones de cada complejo. Parte de la variacion favorable de energa libre es utilizada por cada complejo
enzimatico para bombear protones a traves de la membrana mitocondrial interna. No se conoce con exactitud el n umero
de protones bombeados por electron; se estima que la NAD deshidrogenasa y los complejos bc
1
bombean dos H
+
por
electron, mientras que el complejo de la citocromo c oxidasa solo bombea uno. En la siguiente imagen solo se ilustra el
potencial redox asociado a la deshidrogenacion del NADH.
Cambios del potencial redox a traves de la cadena transportadora de electrones
58.2.2. La ATP Sintasa:
La ATP sintasa se ubica en la membrana interna de la mitocondria y es la encargada nal de producir ATP a partir
del ADP + P
i
. La ATP sintasa se puede imaginar como un motor molecular que produce una gran cantidad de ATP
cuando los protones uyen a traves de ella.
La sntesis de ATP se realiza cuando el rotor cambia conformacionalmente a las unidades beta del complejo
ATP-sintasa
Subunidades y funcion de la ATP Sintasa
96
Parte XVI
Matriz extracelular y moleculas de ahesion celular
Los tejidos no estan formados unicamente por celulas. Una buena parte de su volumen lo constituye el espacio
extracelular, el cual esta ocupado por una intrincada red macromolecular que constituye la Matriz extracelular. Esta
matriz se compone de polisacaridos y protenas muy diversas, secretadas localmente y ensamblados en una red compleja
en ntima asociacion con la supercie celular. La matriz esta formada por tejido conectivo.
Las variaciones en cuanto a la participacion relativa de las distintas macromoleculas de la matriz as como los patrones
de organizacion dan lugar a una larga diversidad de formas, cada una de las cuales esta altamente adaptada a los
requerimientos funcionales de cada tejido en particular. La matriz puede calcicarse y formar estructuras oseas o puede
se transparente como en el caso de la cornea, etc.... Entre el tejido epiteliar y el tejido conjuntivo, la matriz forma una
lamina basal, que juega un papel importante en el control del comportamiento celular (tejidos epiteliares). Podemos,
ademas, encontrar ECM en el tejido nervioso (que gua el comportamiento y largo del axon.
59. Fibroblastos y componentes de la ECM:
Las macromoleculas que constituyen la ECM proceden de una secrecion celular de caracter local. En la mayor parte
de los diferentes tipos de tejido conectivo, estas macromoleculas son secretadas fundamentalmente por broblastos. Sin
embargo, en algunos tejidos conectivos especializados tales como el cartlago y el hueso, la ECM es secretada por celulas
relacionadas con nombres especcos como condroblastos y osteoblastos (cartlago y hueso respectivamente). La
ECM se compone de :
1. Protenas brilares.
2. Protenas no brilares.
3. Proteoglicanes.
59.1. Protenas Fibrilares:
59.1.1. Colageno:
Las protenas colagenas constituyen una gran familia de protenas brosas que se encuentran en todos los animales
pluricelulares. Son secretadas por las celulas del tejido conectivo. Son los componentes mas abundantes de la piel y de los
huesos. El rasgo mas caracterstico de las moleculas de colageno es su longitud, rigidez y estructura helicoidal de
tres hebras. La red de colageno es la encargada de otorgar rigidez a la ECM.
Estructura de una molecula de colageno: Cada -helice esta constituida por secuencias de prolina(x) e hidroxiprolina
(y). La glicina es el unico aminoacido peque no que puede ocupar el eje de la triple helice.
Las bras de colageno son sintetizadas por los broblastos y se organizan en haces perpendiculares:
97
Organizacion celular del colageno en la ECM.
Hasta el momento, se han identicado unas 25 cadenas de -helice, cada una codicada por un gen diferente. En los
diferentes tejidos se expresan diversas combinaciones de estos genes. La bra de colageno, nalmente, se compone de la
union 3 cadenas. Hasta el momento se han identicado 15 moleculas distintas de colageno.
Colageno tipo IV: Es tambien denominado colageno formador de redes. Estas moleculas se unen en una especie de
lamina o red que constituye la mayor parte de la lamina basal madura.
59.1.2. Elastina:
Muchos tejidos de los vertebrados, como la piel o los vasos sanguneos han de ser elasticos y resistentes a la tension
para ser funcionales. Una red de bras elasticas en la ECM de estos tejidos les conere la capacidad de recobrar su
conformacion inicial despues de una deformacion transitoria. Intercaladas con las bras elasticas, se encuentran largas
bras de colageno (inelastico), que limitan la capacidad de extension, evitando el desgarro tisular.
Al contrario del colageno, la elastina es una estructura hidrofobica que tiene una forma globular, unida entre s por
puentes disulfuro.
Las moleculas de elastina estan unidas entre s mediante enlaces covalentes dando lugar a una red entrecruzada. El
modelo muestra como cada molecula de elastina puede expandirse y contraerse como una espiral al azar, de modo que el
conjunto de la red tambien puede hacerlo.
La elastina esta constituida en su mayor parte por dos tipos de segmentos cortos que alternan a lo largo de la cadena
polipeptdica:
segmentos hidrofobicos que son responsables de las propiedades elasticas de la molecula.
segmentos de -helice ricos en alanina y lisina que forman puentes cruzados entre moleculas adyacentes.
98
59.2. Protenas no Fibrilares:
59.2.1. Fibronectina:
La ECM contiene varias protenas adhesivas diferentes del colageno que tpicamente presentan varios dominios, cada
uno de los cuales tiene lugares especcos de union para otras macromeculas de la matriz y para receptores de la supercie
celular. De esta forma estas protenas facilitan tanto la organizacion de la matriz como el anclaje de las celulas a la
matriz. La bronectina es una glucoprotena organizada en un dmero compuesto por dos subunidades muy largas
unidas mediante un par de enlaces disulfuro situados cerca del extremo carboxilo terminal. Cada subunidad esta plegada
en una serie de dominios semejantes a un rodillo, funcionalmente distintos, separados por regiones exibles de la cadena
polipeptdica.
modelo, micrografa y estructura de la bronectina. En la segunda imagen se ilusta un sitio de union a una bra de
colageno y la interaccion de anclaje con la celula.
Integrinas: Familia de protenas con subunidad alfa y beta .De cada subunidad hay distintos genes que codican para las
integrinas. Se forma un dmero con dominio extracelular que reconoce las moleculas de matriz, y el dominio intracelular
hace contacto con elementos del citoesqueleto como lamentos de actina.
59.2.2. Laminina:
La laminina es un gran complejo exible formado por tres cadenas polipeptdicas, dispuestas en forma de cruz y unidas
mediante enlaces disulfuro. Como muchas otras protenas de la matriz extracelular, tambien presenta varios dominios
funcionales: uno de union al colageno IV, otro al heparan sulfato, otro a la entactina y dos o mas a los receptores de la
laminina situados en la supercie celular.
La encactina, se une a cada molecula de laminina en el lugar donde los brazos cortos se unen con los largos. La entactina
tambien se une al colageno IV, por lo que se cree que act ua como un puente adicional entre el colageno IV y la red de
laminina de la lamina basal.
Laminina
59.3. Proteoglicanes:
Estan formados por una protena central y de manera covalente de glicosaminoglicanos o GAGs. Se unen de forma
covalente a un protena Core o nuclear. Hay proteoglicanos que son exclusivos de ECM o proteoglicanes cuyo core es una
protena de transmembrana. Tambien hay proteoglicanos con una modicacion lipdica cuyo core se ancla a la membrana
celular. Aparte de ser una molecula de matriz, son reservorios para factores de crecimiento. (Inducen proliferacion celular).
En general, los proteoglicanes se diferencian facilmente de otras glucoprotenas por la naturaleza, cantidad y organi-
zaci on de sus cadenas laterales de gl ucidos: por denicion, por lo menos una de las cadenas sencillas de az ucares de un
proteoglicano ha de ser un GAG (glucosaminoglucanos). Normalmente la protena central de los proteoglucanos es una
glucoprotena.
99
Estructura de un proteoglicano basico
59.4. Laminas Basales:
Lamina Basal: separa el epitelio del tejido conectivo. La lamina basal es ECM pero esta organizada de tal forma que
es una lamina que separa los tejidos. Es relevante en m usculo, epitelio y en los glomerulos. La lamina basal esta formada
por interacciones especicas entre las protenas de colageno IV, la laminina, entactina y el proteoglucano perlecano.
Modelo actual de la estructura molecular de una lamina basal.
La l amina basal tiene diversas funciones como:
Regular el paso de macromoleculas a traves de ellas (ri non).
Actuar como una barrera selectiva para el desplazamiento de las celulas.
Participar en la regeneracion tisular.
60. Moleculas de Adhesion. Interacci on celula-celula y celula-matriz:
En el tejido conjuntivo la matriz extracelular es muy abundante, mientras que las celulas se encuentran en menor
n umero. La matriz como vimos anteriormente, es rica en polmeros, principalmente en colageno utilizada como respuesta
a las tensiones a las que que esta sujeta el tejido. Las celulas, que se encuentran unidas a diferentes componentes de la
matriz, pueden ejercer sobre esta diversas fuerzas, mientras que la contribucion de las uniones intercelulares es escasa. Por
el contrario, en tejidos epiteliales las celulas se encuentran estrechamente unidas formado laminas (epitelio). La ECM es
escasa en estos tejidos y esta constituida principalmente por la l amina basal que esta en la base de las celulas. Las capas
de celulas epiteliales tapizan todas las cavidades y supercies libes del organismo y, mediante uniones dotan aquellas
de propiedades de barrera que restringen el movimiento de agua, solutos y celulas entre los diversos compartimientos del
organismo:
100
La primera imagen muestra las diversas interacciones entre celula-celula y celula-ECM. La segunda muestra un esquema
de un epitelio que forma una monocapa que esta interconectada por plasmodesmos a traves lamentos intermedios. Bajo
el epitelio esta la lamina basal que separa el epitelio del tejido conectivo.
Sobre la lamina basal, el epitelio sobre esta, puede organizarse de 5 formas diferentes:
Organizacion del epitelio
61. Uniones Celulares:
Las uniones celulares pueden clasicarse en tres grupos funcionales:
1. Uniones ocluyentes (uniones estrechas).
2. Uniones de anclaje:
Demosomas.
Hemidesmosomas.
Uniones adherentes.
Contactos focales.
3. Uniones de comunicacion:
Uniones en hendidura (gap junctions).
Sinapsis qumica.
Esquema de tipos de uniones celulares
101
61.1. Uniones estrechas:
A pesar de las grandes diferencias estructurales y bioqumicas entre los tipos de epitelios, todos tienen, como mnimo,
una importante funcion com un: constituir barreras selectivas de permeabilidad, separando uidos de diferente com-
posicion. Las uniones estrechas juegan un importante doble papel en el mantenimiento de esta funcion de barrera
selectiva; el ejemplo mas clasico es el epitelio instestinal de los mamferos (separando la region apical de la basolateral).
Modelo actual de las uniones estrechas: Se postla que las hebras de sellado que mantienen unidas las membranas
plasmaticas estan constituidas por hebras continuas de protenas transmembrana, las cuales establecen contacto a traves
del espacio intercelular, dando lugar a su sellado. Esta union continua esta establecida por accion de protenas ocludinas
y claudinas.
Las uniones estrechas forman un cinturon de hebras entrecruzadas que rodea la membrana de cada celula.
61.2. Anclaje celular:
Las uniones de anclaje estan ampliamente distribuidas en los tejidos animales. Capacitan a determinados grupos
celulares, como los epitelios, para constituirse como unidades estructurales resistentes, conectando los elementos citoes-
queleticos de una celula a los esqueletos de sus vecinas, o la ECM. Son especialmente abundantes en tejidos que
estan sometidos a tensiones mecanicas.
61.2.1. Uniones adherentes.
Las uniones adherentes intercelulares, en los epitelios, forman una banda de adhesion continua, situada alrededor
de cada celula epitelial, bajo las uniones estrechas. La union de estas bandas esta dada principalmente por protenas
transmembrana denominadas cadherinas. Importante es destacar que una diferencia notable con los desmosomas es
que las uniones adherentes ligan uniones de actina y no de lamentos intermedios.
En cada celula puede observarse un haz de bras de actina, contractil, que se encuentra adyacente a la banda de
adhesion, que corre paralelo a la membrana plasmatica. Los haces de actina se encuentran interconectados a traves de
las cadherinas y protenas de union, formando una extensa red transcelular. Se cree que la contraccion de esta red, que
depende de protenas motoras como la miosina, puede ser mediadora en la morfogenesis animal:
Uniones adherentes celula-celula
102
61.2.2. Desmosomas:
Los desmosomas (que ya hicieron su primera aparicion en la materia pasada) son contactos intercelulares puntifor-
mes que mantienen unidas a las celulas. En el interior de las celulas act uan como lugares de anclaje para lamentos
intermedios, los cuales forman una red estructural en el citoplasma proporcionando una cierta rigidez. Mediante estas
uniones los lamentos intermedios de las celulas adyacentas estan indirectamente conectados formando una red continua
que se extiende a todo el tejido. El tipo especco de lamentos intermedios anclados a los desmosomas depende del tipo
celular. La queratina en la mayora de las celulas epiteliales y desmina en las bras musculares cardiacas:
Desmosomas :D
61.2.3. Hemidesmosomas:
Los hemidesmosomas, semejantes morfologicamente a los desmosomas, dieren tanto a nivel funcional como bioqumi-
co. En lugar de unir las membranas de celulas adyacentes, unen el dominio basal de las celulas y la lamina
basal.
Hemidesmosomas
61.2.4. Adhesiones focales:
Las adhesiones focales son tambien uniones entre la celula y la ECM, constituido por protenas integrinas asociadas. El
dominio extracelular de estas integrinas se ja a protenas de la matriz mientras que el dominio citosolico interact ua con
protenas adaptadoras, mediando el comportamiento de las bras de F-actina asociadas a estas protenas transmembranas.
Las adhesiones focales se unen principalmente a la bronectina de la ECM.
61.3. Uniones de comunicaci on (Gap junctions):
Las uniones tipo gap median la comunicacion intercelular al permitir el paso de iones inorganicos y otras peque nas
moleculas hidrosolubles entre los respectivos citoplasmas, acoplando las celulas tanto electrica como metabolicamente.
Este acoplamiento celular tiene importantes implicaciones funcionales.
Las uniones tipo gap estan organizadas en base a protenas transmembrana, que forman estructuras denominadas
conexones. Cuando los conexones de las membranas plasmaticas de 2 celulas estan alineados, forman un canal acuoso
continuo que conecta ambos citoplasmas. Los conexones entran en contacto de tal manera que las membranas plasmaticas
implicadas se encuentran separadas por una hendidura. Estos conexones estan compuestos por un anillo de 6 subunidades
proteicas denominadas conexinas. Las uniones tipo hendidura permiten el paso de moleculas peque nas entre
celulas adyacentes.
103
Gap Junctions. Dos conexonesunidos a traves del espacio intercelular dan lugar a la formacion de un canal acuoso
continuo entre ambas celulas.
Imagen resumen de los distintos tipos de interacciones celula-celula y celula ECM
104
Parte XVII
Tarea 1: Por que el ADN contiene Timina en vez
de Uracilo?
A. Desaminaci on de la Citosina y correcci on en el ADN mediante enzimas
En la mayora de las especies animales las pirimidinas son degradadas a amoniaco y urea. Pueden ser tambien utilizadas
como precursores de la biosntesis de -alanina, y por tanto de la coenzima A. La principal ruta de degradacion de la
citosina y del uracilo se muestra de la siguiente manera:
Degradacion de una base pirimidnica (Citosina) mediante un proceso cataltico
Desaminacion de la citosina.
La citosina del DNA a diferencia del nucleotido libre, se desanima espontaneamente para formar uracilo, la desaminacion
de la citosina es potencialmente mutagenica porque el uracilo se empareja con la adenina y as una de las hebras hijas
contendra la pareja AU en vez de la copia original.
Esta mutacion puede evitarse por un sistema de reparacion que reconoce al uracilo como una base extra na al DNA. En
primer lugar, una uracilo-DNA glicosidasa hidroliza el enlace glicosdico entre el uracilo y la desoxirribosa y se genera
un hueco debido a la falta del uracilo denominado lugar AP porque es apurnico (libre de A o G) o apirimidico (libre de
C o T). Posteriormente una endonucleasa AP reconoce este defecto y corta una de las hebras justo al lado de la base
que falta.
Posteriormente la DNA polimerasa 1 corta el fragmento de desoxirribosa fosfato residual e inserta citosina. Por ultimo
la hebra reparada se cierra por accion de la DNA ligasa.
105
Reparacion debido a la desaminacion de la citosina en el ADN
B. Por que el ADN utiliza una base metilada (timina) y no lo hace en el
ARN?
El uracilo no es un componente natural del DNA. En su lugar, el DNA contiene timina, el analogo metilado del uracilo.
El toque nal en la formacion de timina tiene lugar a nivel del desoxirribonucleosido monofosfato:
El desoxiuridilato (dUMP), se metila a desoxitimidilato (dTMP) por medio de una enzima llamada timidilato
sintasa. Sin embargo, falta el compuesto clave, el denominado dador de metilos. que se explica claramente en la siguiente
imagen:
Sntesis de dTMP a partir de dUMP
La regeneracion del tetrahidrofolato (para poder formar otra timina) a partir del dihidrofolato necesita de la accion en-
zim atica de la hidrofolato reductasa que utiliza NADPH como agente reductor, haciendo este proceso extremadamente
costoso.
Dihidrofolato + NADPH + H
+
Tetrahidrofolato + NADP
+
La uracilo-DNA glicosidasa no elimina la timina del DNA. As pues, el grupo metilo de la timina constituye una
etiqueta que la distingue de la citosina desaminada. Si esta etiqueta faltase, sera imposible distinguir el uracilo
real del uracilo formado por desaminacion lo que evidentemente generara mutaciones incorregibles. Esta mutacion, se
evita por un sistema reparador que localiza el uracilo y deja solo a la timina. La timina se utiliza en vez del uracilo
en el DNA para asegurar la delidad del mensaje genetico. Por el contrario, el ARN no se repara y por eso
utiliza uracilo, porque es un componente menos costoso.
106