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- RMN
ASPECTOS GENERALES
TEMA 4.
TEMA 4.
-
-
RMN
RMN
ASPECTOS ASPECTOS
GENERALES
GENERALES
DETERMINACI DETERMINACI N ESTRUCTURAL N ESTRUCTURAL
Departamento de Qumica Orgnica
M M Selma Arias M Selma Arias M Luisa Izquierdo Luisa Izquierdo
(NMR: Nuclear Magnetic Resonance)
Introduccin
Las primeras seales de RMN se observaron en 1946,
independientemente, por dos grupos de investigacin:
Bloch, Hansen y Packard (Universidad de Stanford)
Purcell, Torrey y Pound (Universidad de Harvard)
en 1952, Bloch y Purcell recibieron el Premio Nobel de Fsica por sus
descubrimientos en este campo.
Desde esas fechas, las tcnicas de RMN se han desarrollado muy
rpidamente. En 1953, se fabric el primer espectrmetro comercial de RMN que
trabajaba en onda continua (CW: continuous wave). En 1970 se introdujo en el
mercado el primer espectrmetro comercial con transformada de Fourier (FT:
Fourier Transformation)". Actualmente, los espectrmetros RMN son una parte
esencial en cualquier laboratorio moderno de qumica.
La RMN se ha convertido por si sola en una disciplina con un gran cuerpo
de conocimientos que estn en continuo desarrollo y en los ltimos aos, el hablar
de RMN se ha hecho popular debido a las aplicaciones en medicina.
La RMN es la tcnica que mas utilidad presenta en la determinacin
estructural de los compuestos orgnicos y por tanto es a la que
dedicaremos mas tiempo en este curso.
Teora Bsica de RMN
La RMN es otro tipo de Espectroscopa de Absorcin
Base de la RMN: Absorcin de energa por un ncleo atmico que provoca
transiciones entre niveles de energa nucleares (o entre
distintos estados del espn nuclear)
Los niveles energticos se deben a: Las distintas orientaciones de los espines
nucleares dentro de un campo magntico H
o
La diferencia de energa entre los distintos niveles es de tal magnitud que:
La frecuencia de absorcin cae en el campo de las radiofrecuencias
La E asociada a las transiciones es del orden de 10
-6
Kcal/mol
Momento angular y momento magntico
Los ncleos de algunos istopos poseen
momento angular (o espn mecnico) p
h : cte. de Planck = 6,6 x 10
-34
J.seg
p
2
h
=
I (I+1)
I : n cuntico del momento angular, denominado
comnmente espn nuclear
I : 0, 1/2, 1, 3/2, 2, 5/2, 3, .....
El momento angular lleva asociado un momento magntico
Los ncleos al girar se comportan como imanes diminutos
: constante giromagntica ( o magnetogrica) caracterstica de cada tipo de
ncleo
= p
2
h
I (I+1)
=
Ncleos con: I = 0 = 0 y p = 0, no interaccionan con un campo magntico H
o
no experimentan el fenmeno de la RMN
PARA QUE UN ISOTOPO SE OBSERVE EN RMN : I 0
Valor de I para un istopo X de masa atmica A y nmero atmico Z
A
Par
Par
Impar
Impar
Z
Par
Impar
Impar
Par
I
Cero
Entero (1,2..)
Semientero
(1/2, 3/2, 5/2..)
A
X
Z
12
C
6
,
16
O
8
2
H
1
,
14
N
7
1
1
H
1
,
13
C
6
,
15
N
7 ,
19
F
9
,
31
P
15
1/2
7
Li
3
,
17
O
8
3/2
Istopo
Abundancia
natural (%)
Espn
nuclear
( I )
Momento
magntico
( )
Constante
giromagntica
( ,10
7
radT
-1
s
-1
)
Sensibilidad
relativa
Frecuencia de
resonancia
(
o
, MHz)
a
1
H 99.9844 1/2 2.7927 26.753 1.00 100.00
2
H 0.0156 1 0.8574 4,107 9.65. 10
-3
15.35
11
B 81.17 3/2 2.6880 -- 0.17 32.08
12
C 98.9 0
13
C 1.108 1/2 0.7022 6,728 1.59. 10
-2
25.14
16
O 99.96 0
17
O 0.037 5/2 -1.8930 -3,628 2.91. 10
-2
13.56
19
F 100.0 1/2 2.6273 25,179 0.83 94.08
29
Si 4.700 1/2 -0.5555 -5,319 7.84. 10
-3
19.87
31
P 100.0 1/2 1.1305 10,840 6.63. 10
-2
40.48
Propiedades de algunos ncleos
a
H
o
= 2.349 T
Ncleos con I = 0 = 0 No dan lugar al fenmeno RMN
Los ncleos que mejor se observan en RMN son aquellos en que I = 1/2 (
1
H,
13
C)
Los ncleos con I > 1/2 presentan momento cuadrupolar que dificulta su
observacin y las seales salen ensanchadas
Los ncleos mas fciles de observar adems presentan:
Abundancia natural elevada (
1
H, 99.985%)
elevada ( e / 2m de masa pequea,
1
H)
p y solo pueden adoptar ciertas orientaciones con respecto a una
direccin determinada.
As, cuando un ncleo se sita en un campo magntico uniforme H
o
(eje z),
El valor de la componente z,
z
,viene dado por:
m
I
n cuntico magntico, indica el n de orientaciones que
puede adoptar el de un istopo en un campo magntico
m
I
: -I, -I+1, -I+2,.........+I
n de valores que puede tener m
I
es: 2I + 1
Ej.:
1
H y
13
C tienen I = 2 x + 1 = 2 orientaciones que puede adoptar el de
dichos istopos con respecto a H
o
(a favor del campo + y en contra del campo -)
2
h
m
I
z
=
x
y
z
x
y
z
L
H
o
Ncleos en un campo magntico esttico
Un ncleo con I 0 ( posee p y ) se somete a la accin de un campo
magntico externo uniforme H
o
Se produce un movimiento de rotacin (o precesin) alrededor de H
o
. La
frecuencia de la precesin
L
(frecuencia de Larmor del ncleo considerado) es
proporcional a H
o
:
La energa correspondiente a la interaccin de con el campo magntico H
o
viene dada por el producto escalar:
E =
H
o
=
z
H
o
De acuerdo con la mecnica cuntica, el momento magntico de un ncleo con I 0
puede adoptar 2I + 1 orientaciones con respecto a H
o
Para
1
H y
13
C , I = dos orientaciones posibles (m
I
= y m
I
= )
dos valores de cuyas componentes en el eje z
adquirirn los siguientes valores:
h
2
h
4
h
2
h
4
Z
= m
I
= ( - )
-
Z
= m
I
= ( + ) m
I
= 1/2
m
I
= - 1/2
Representacin en un sistema vectorial, orientando el campo H
o
en la direccin
del eje z:
Estas dos orientaciones hacen que existan dos niveles de energa:
h
4
( E )
h
4
( E )
( + )
( - ) E = -
Z
H
o
= + H
o
estado
estado
E = -
Z
H
o
= -
H
o
-
+
x
y
z
H
o
En un diagrama de niveles de energa:
( E )
( E )
E
estado
estado
m
I
= + 1/2
m
I
= - 1/2
( + )
( - )
En contra de H
o
A favor de H
o
La diferencia de energa E entre los dos niveles vendr dada por:
E = E
- E
h
4
h
4
h
4
h
4
h
2
E = E
- E
= H
o
- ( -
H
o
) = H
o
+ H
o
= H
o
4
E =
h
2
H
o
I II I En ausencia de H
o
E = 0 E
- E
= 0 E
= E
(niveles degenerados)
I II I La E entre los niveles de E creados por un campo magntico H
o
es tanto mayor
cuanto mas intenso sea dicho campo ( > el valor de H
o
)
I Las transiciones entre estos niveles energticos suponen cambiar la orientacin
de los espines nucleares respecto a H
o
.
m
I
= +1/2 ( ) E
Para producir transiciones entre dos estados energticos ( y en nuestro caso)
: E = h
o
(siendo
o
la frecuencia de Larmor del ncleo considerado
L
y por tanto:
2
H
o
o
=
L
=
E = h
o
o
=
E
h
o
es proporcional a H
o
o
es proporcional a (diferente para cada tipo de ncleo)
Poblacin de los niveles de energa
De acuerdo con la estadstica de Boltzman:
En el equilibrio, para ncleos con I = (
1
H y
13
C por ejemplo), la relacin
entre los ncleos que se encuentran en el nivel mas alto de energa (N
) y los que
se encuentran en el nivel mas bajo (N
) viene dada por:
h
2
H
o
K
B
T
N
N
= e
E / K
B
T
K
B
T
= 1 -
E
= 1 -
El valor de E / K
B
T es muy pequeo (aunque H
o
sea muy grande)
N
/ N
1
es decir, que ambos niveles estn casi igualmente poblados con un ligero exceso de
ncleos en el estado de E ( ) ( 1 en 10
5
para el
1
H con H
o
= 1.41 T 14000 gauss).
E en RMN es pequea lo que explica la baja sensibilidad de esta tcnica
Un aumento de H
o
provoca un aumento en el valor de E y por tanto un aumento
de sensibilidad.
Condicin de resonancia
Para producir transiciones entre ambos niveles energticos se precisa :
Un campo magntico alternante secundario H
1
(
1
)
Su vector magntico debe girar en el plano de
precesin xy ( a H
o
)
H
1
: debe proporcionar la E necesaria para la
transicin E = h
1
1
= E / h
y como
L
= E / h
Condicin de resonancia : la radiofrecuencia
1
(del H
1
secundario) ha de ser igual
a la
L
(frecuencia de Larmor) del ncleo considerado
As, con radiacin electromagntica de frecuencia adecuada, se producen trnsitos
entre niveles energticos:
Ambos procesos: absorcin y emisin son, en principio posibles e igualmente
probables; sin embargo, como N
> N
la absorcin es el fenmeno predominante
I II I La intensidad neta de la seal de absorcin es proporcional al n total de espines
en la muestra (cantidad de muestra), a N
- N
y a H
1
: (N
- N
).H
1
2
I II I Si N
= N
los procesos de emisin se cancelan con los de absorcin y la
intensidad neta de la seal es cero (SATURACIN). Esto limita el valor del campo de
radiofrecuencias H
1
(
1
).
I II I La restauracin de las poblaciones de equilibrio se produce a travs de procesos
de relajacin (emisin estimulada y pueden producirse por diferentes mecanismos)
L
=
1
= H
o
/ 2
h
1
E = h
1
absorcin
emisin
Magnetizacin macroscpica
Una muestra constituida por un conjunto de ncleos del mismo tipo un sistema
de espines, caracterizado por MAGNETIZACION MACROSCOPICA ( M ) que es la
suma de todos los momentos magnticos, , de los espines individuales con dos
posibles orientaciones respecto a la direccin de H
o
En el equilibrio
N
> N
El movimiento de precesin de los
se produce de forma aleatoria
alrededor de H
o
(eje z) el valor de
la magnetizacin en el plano xy se
compensa: M
x
= M
y
= 0
La magnetizacin macroscpica
solo tiene una componente en el
eje z (misma direccin que H
o
) y su
valor es mximo: M
z
= M
o
Al aplicar el campo alternante H
1
(
1
en el plano xy) se perturba el sistema
En el momento de la resonancia
1
=
o
(
L
)
Se produce absorcin y transiciones
El vector magntico del campo aplicado H
1
interacciona con los dipolos magnticos
nucleares
los espines cambian su orientacin
respecto a H
o
M deja de ser paralela a H
o
aparecen tres componentes de M:
M
z
< M
o
M
x
y M
y
0
M =
Cuando se elimina la radiofrecuencia (H
1
,
1
), el sistema ha de
Volver al equilibrio (Relajarse)
a) M
x
0 y M
y
0 lo cual requiere un cierto
tiempo T
2
: tiempo de relajacin transversal o
de espn-espn.
La relajacin transversal supone un intercambio
de energa entre espines.
b) M
z
M
o
tambin requiere un cierto tiempo
T
1
: tiempo de relajacin longitudinal espn-
retculo.
La relajacin longitudinal supone una cesin de
energa a los alrededores
En la mayora de los casos T
2
< T
1
El movimiento del vector magnetizacin durante la aplicacin de la
radiofrecuencia y en los procesos de relajacin fue estudiado por Bloch que dedujo
que los procesos de relajacin siguen cinticas de primer orden y pueden
describirse por dos tiempos de relajacin diferentes T
1
y T
2
. Bloch dedujo una serie
de ecuaciones complejas que describen la variacin de M
x
, M
y
y M
z
con el tiempo.
Simplificacin
cuando se pasa de un sistema de coordenadas fijo x,y,z a un sistema de coordenadas
en rotacin x',y',z en el cual, el plano x'y' rota con la misma frecuencia
1
del campo
alternante H
1
:
N
N
Excitacin
Relajacin
+ E
- E
H
1
queda fijo en el eje x' ( campo esttico)
En el equilibrio, M solo tiene componente en z (su valor ser mximo: M
o
)
Al aplicar H
1
(momento de la resonancia), M efectuar un movimiento de
precesin alrededor de H
1
(eje x') en el plano y'z con una frecuencia :
Si H
1
se aplica durante un tiempo
p
(seg), M gira un cierto ngulo y las
componentes de M sern:
M
x'
= 0 M
y'
= M.sen M
z
= M.cos
En los aparatos de RMN, el detector se coloca en el eje y' y por tanto, lo que se
observa es la componente M
y'
de la magnetizacin.
1
= H
o
/ 2 =
o
ESPECTRO RMN consta de una serie de picos debidos a los distintos tipos de
ncleos que constituyen la molcula objeto de estudio. La
a la que aparecen los picos es funcin de y de H
o
Espectro hipottico del CDHClF a H
o
=21150 gauss (2.1 T):
Con H
o
mayor, por ejemplo 42300 gauss, el espectro cubrira un rango mayor y
todos los ncleos resonaran a doble:
La instrumentacin actual permite observar partes mas pequeas del
espectro y distinguir entre ncleos de una misma especie: RMN de alta
resolucin. A H
o
rango resolucin.
Ejemplo para
1
H RMN:
= 5.4MHz
(MHz)
8.82
1
H
19
F
13
C
35
Cl
37
Cl
2
H
7.34 13.7
22.6 84.6 90
1
H
19
F
180MHz
169.2Mz
= 10.8 MHz
H
o
MAYOR SEPARACION
H
o
(T) Rango (Hz)
1.41 60.000.600-60.000.000 600
2.11 90.000.900-90.000.000 900
Apantallamiento
La frecuencia de resonancia
o
de cada tipo de ncleo es distinta ( ) :
E =
h
2
H
o H
o
o
=
2
Adems los distintos tipos de
1
H (
13
C,
19
F,....) de una molcula presentan
distintas frecuencias de resonancia en funcin del entorno atmico. El factor
fundamental es la circulacin electrnica alrededor del ncleo inducida por el campo
magntico externo H
o
.
Esta circulacin de electrones genera
a su vez un campo magntico inducido h
L
(campo local) que en la regin del ncleo se
opone a H
o
.
la intensidad de campo neto que acta
sobre cada tipo de ncleo (cada tipo de H
en
1
H-RMN, cada tipo de C en
13
C-RMN,...) es
diferente :
H
neto
= H
o
- h
L
y permite diferenciarlos.
Se dice que: el ncleo est apantallado de H
o
( protegido de H
o
) por su nube
electrnica. El campo local h
L
es proporcional a H
o
y a
i
: constante de
apantallamiento magntico del ncleo i. Al aumentar la densidad electrnica alrededor
del ncleo, aumenta
i
.
h
L
= H
o
i
H
neto
= H
o
- h
L
= H
o
- H
o
i
= H
o
(1 -
i
)
o
=
2
2
H
neto
=
H
o
(1 -
i
)
Espectrmetro RMN de onda continua (CW)
Los primeros espectrmetros de RMN datan del ao 1953 y se denominan
Espectrmetros de RMN de onda continua. De forma esquemtica podemos decir que
constan de:
Imn (b) que genera el campo magntico H
o
(en el eje z)
Transmisor de radiofrecuencia (e) que suministra el campo magntico secundario H
1
que proporciona la frecuencia de resonancia
1
=
L
(eje x)
Receptor (d) detecta la seal de resonancia (en el eje y)
En la muestra contenida en el tubo de resonancia (a) (disolucin), se inducen
transiciones cuando se satisface la condicin de resonancia :
L
=
1
= H
o
/ 2 .
Como cada ncleo tiene una
L
caracterstica, para satisfacer la condicin de
resonancia para cada tipo de ncleo presente en la muestra se pueden hacer dos
cosas:
Trabajar a H
o
contante y variar
1
Barrido de frecuencias
Trabajar a
1
constante y variar H
o
(con unas bobinas conectadas al imn)
Barrido de Campo
Cuando se alcanza la condicin de resonancia, se induce una seal en el receptor
(d) que despus de amplificarse se observa en un osciloscopio o se registra en un papel.
Por cualquiera de los dos procedimientos (barrido de campo o de frecuencias) el
espectro se registra punto por punto mientras va variando lenta y continuamente H
o
(
1
) por eso se denomina e ste mtodo Mtodo de Onda Continua (CW).
El espectro RMN es un registro de intensidades de absorcin en funcin de
frecuencias.
Los espectrmetros RMN son caros, pues debido a la baja sensibilidad de la
tcnica (N
/N
1
. Son sistemas multinucleares que permiten variar
1
y obtener los espectros
de los distintos ncleos :
1
H,
13
C,
31
P, ......
Receptor: donde llega la respuesta del sistema de espines M
y
Ordenador: todo el espectrmetro se maneja a travs del ordenador. El adquirir
la informacin lleva poco tiempo cuando el ncleo tiene elevada abundancia
natural (
1
H) y la cantidad de muestra es adecuada. Procesar la informacin
adquirida es lo que requiere en estos casos mas tiempo.
p
t
a
detector
Int
tiempo
+ +
+ +
Impresora
Desacoplador
Shim
Canal del
lock
Amplificador
Conmutador
Transmisor
RF
Preamplificador Receptor
CAD
Oscilador
local
Ordenador
Imn
Programador
de pulsos
Espectrmetros de RMN- FT
Imn
Consola
Ordenador
900 MHz IMAGEN
En el ordenador, entre otras cosas :
Se realiza la seleccin del ncleo a observar (
1
)
Se selecciona la secuencia de pulsos adecuada a la experiencia que se desea
realizar
Se ajusta la homogeneidad
Se almacenan y suman las FIDs
Se digitaliza la FID
Se hace la FT ( en tan solo unos segundos)
Se realiza el tratamiento de los datos obtenidos: ajuste de intensidad de seales,
integral, ampliaciones de zonas seleccionas de los espectros, etc. ...
Adems:
La FID es una seal analgica y antes de hacer la FT hay que transformarla en una
seal digital mediante un convertidor analgico-digital (ADC)
Para algunas experiencias se necesita un campo magntico de radiofrecuencias
adicional que lo proporciona lo que en el esquema est indicado como desacoplador.
El control de la homogeneidad del campo H
o
es un factor muy importante. Los
equipos emplean para detectar pequeas variaciones de H
o
, y as poder corregirlas, la
seal de resonancia del deuterio D (
2
H) seal de lock y procede de lo que se
denomina canal de lock. Por esta razn se trabaja con disolventes deuterados, la
seal de D en
1
H y
13
C no se registra (
L
) y se emplea para controlar la
homogeneidad.
Preparacin de muestras en RMN
Se pueden realizar espectros de lquidos y de slidos. La RMN de slidos es una
tcnica mas problemtica y lo mas habitual es emplear disoluciones que deben ser
homogneas. La cantidad de compuesto que se necesita
depende de muchos factores, entre otros: del tipo de ncleo (
1
H,
13
C, ...) que se quiere investigar y del equipo utilizado. La
cantidad de disolvente es del orden de 0.5 mL. En los espectros
se debe indicar el disolvente utilizado y la concentracin.
Disolventes: no deben contener tomos que puedan absorber en la zona de RMN de
inters para evitar interferencias. Como ya se ha dicho generalmente son
disolventes deuterados que suelen dar seales residuales (debido a
molculas no deuteradas o parcialmente deuteradas en
1
H-RMN). Cuando
estas seales residuales no interfieren con las del producto investigado, se
pueden emplear como referencia.
Disolvente P.E. C
1
H RMN
seal residual ( , ppm)
13
C RMN
seal ( , ppm)
Acetona-d
6
55.5 2.05 206 , 29.8
Acetonitrilo-d
3
80.7 1.95 118 , 1.3
Benceno-d
6
79.1 7.16 128
Cloroformo-d 60.9 7.27 77.0
Ciclohexano-d
12
78.0 1.38 26.4
Diclorometano-d
2
40.0 5.32 53.8
Dimetilsulfoxido-d
6
190 2.50 39.5
Nitrometano-d
3
100 4.33 62.8
Piridina-d
5
114 7.19, 7.55 , 8.71 150, 135.5 , 123.5
tetrahidrofurano-d
8
65.0 1.73 , 3.58 67.4 , 25.2
Metanol-d
4
65.4 3.30 49.0
Agua-d
2
100 4.80 --
Otras sustancias de referencia. TMS.
Despus de preparar cuidadosamente la disolucin, se filtra a travs de lana de
vidrio con ayuda de una pipeta y se transvasa a un tubo de RMN (5-10 mm de interno
y 18 cm de longitud). El tubo de RMN con la muestra se inserta dentro de la sonda.
Para asegurar que todas las molculas ocupan la misma posicin promedio dentro
del campo magntico, la mayora de los espectros se realizan haciendo girar
rpidamente a la muestra alrededor del eje z mediante una turbina de aire (
homogeneidad en toda la muestra).
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