Trabajo Prctico N 1

Fisiologa de las Membranas Biolgicas y Potencial de Accin

Contenidos
Mecanismos de transporte a travs de las membranas biolgicas (transporte pasivo y
activo). Conceptos de smosis y tonicidad.
Fenmenos bioelctricos: ecuacin de Nernst, potencial electroqumico y equilibrio de
Gibbs-Donnan.
Diferencias entre los potenciales de accin de los distintos msculos.
Clculo de potenciales y flujos inicos.

Objetivos
El alumno deber ser capaz de:
Conocer y definir las caractersticas de los distintos tipos y subtipos de mecanismos de
transporte a travs de las membranas biolgicas.
Identificar el potencial de accin que corresponde a los distintos tipos musculares.
Diferenciar mediante la interpretacin de experimentos simples los conceptos de osmo-
laridad y tonicidad.
Predecir el movimiento de un soluto a travs de la membrana biolgica, teniendo en
cuenta su carga elctrica y la diferencia de concentracin entre ambos lados.

Gua de Estudio
1- Cules son las caractersticas del transporte pasivo? Qu tipo de sustancias son trans-
portadas por difusin simple, difusin facilitada y difusin por canales?
2- Cules son las caractersticas del transporte activo? Distinga entre transporte activo
primario y secundario.
3- Qu caractersticas tiene el transporte de membrana a travs de canales?
4- Enumerar los tipos de canales segn su mecanismo de activacin, y explicar en qu si-
tuaciones se activa cada uno de ellos: Dependientes de voltaje, de rectificacin interna,
operados por ligando, controlados por segundos mensajeros, operados mecnicamente,
regulados a nivel de la expresin en la membrana
5- Cules son las caractersticas de los transportes de tipo especializado, es decir, aquellos
que utilizan transportadores de membrana?
6- Defina smosis. Defina y diferencie los conceptos de osmolaridad y tonicidad.
7- Defina el concepto de fragilidad osmtica del eritrocito.
8- Qu es la diferencia de potencial electroqumico a travs de la membrana para una
determinada sustancia?
9- Qu es y cmo se calcula el potencial de equilibrio para un in? Qu sucede cuando,
para un determinado in, este potencial de equilibrio se iguala con la diferencia de po-
tencial elctrico de la membrana?
10- Qu significa que un in haya alcanzado el equilibrio termodinmico? Qu sucede
con el in en estas circunstancias?
11- Explique el concepto de potencial de reposo de la membrana. Cules son los principa-
les iones que determinan su valor?
12- Todos los tipos musculares comparten un nico potencial de accin? Comente las dife-
rencias encontradas entre los mismos.

Bibliografa
Fisiologa Humana. Cingolani-Houssay. 2000 (7 edicin)
Fisiologa. Tresguerres. 2005 (3 edicin)
Tratado de Fisiologa Mdica. Guyton- Hall. 2006 (11 edicin) Elsevier Espaa
Biologa Celular y Molecular. Lodish-Darnell y col. 2006 (5 edicin)

Actividades para el seminario

1- Potencial de membrana en reposo

a) Considerando el potencial qumico y el elctrico para cada in, obtenga la ecuacin de
Nerst. Qu informacin nos brinda esta ecuacin? Qu condiciones tuvo que plantear
para llegar a esta conclusin?

b) El valor del potencial de membrana en reposo, se encuentra ms cerca del potencial de
equilibrio del sodio o del potasio? Por qu? Cmo se alterara este potencial de reposo al
modificar las concentraciones intra o extracelulares de dichos iones? Cmo influencia al
potencial de membrana en reposo el gradiente electroqumico del in cloruro?

2- Se establecen dos compartimientos separados por una membrana semipermeable como
se muestra en la siguiente figura:

Pr- = Proteinato
















a) Cules son los iones difusibles?
b) Cules son los iones no difusibles?
c) Describa el movimiento de los iones hasta alcanzar el estado de equilibrio
I II I II
TIEMPO CERO EQUILIBRIO
Pr-
Pr-
Pr-
Pr-
K
+

K
+

K
+

K
+

K
+

K
+

K
+

K
+

Cl
-

Cl
-

Cl
-

Cl
-

K
+

K
+

K
+

K
+

K
+

K
+

Pr-
Pr-
Pr-
Pr-
Cl
-

Cl
-

K
+

K
+

Cl
-

Cl
-

d) Cmo se denomina a dicho estado de equilibrio?
e) Cmo es en el equilibrio la concentracin total de solutos en el compartimiento I?
(MAYOR, MENOR o IGUAL)
f) Si la membrana es permeable al agua, se produce flujo osmtico? en qu sentido?
g) Relacione lo explicado en la figura con lo que ocurre en la clula. Qu mecanismo
contrarresta la tendencia al flujo osmtico hacia las clulas?
h) Con respecto a lo explicado en g, qu ocurre si se produce deplecin de los pooles
celulares de ATP?
i) En qu situaciones fisiolgicas se tiende a alcanzar este estado de equilibrio?

3- Esquematice los potenciales de accin de los distintos tipos musculares, marcando las
diferencias observadas en cada caso.

Actividades para el trabajo prctico
1- Explicar los efectos sobre la clula, y las funciones de cada uno de los siguientes tipos de
canales (qu suceder con el potencial de membrana de una clula al abrirse los canales?):
I. Acuaporinas
II. De potasio (dependientes de voltaje, dependientes de calcio, de rectificacin inter-
na, operados por ligando, sensibles al ATP)
III. De sodio (dependientes de voltaje, epiteliales (ENaC))
IV. Catinicos inespecficos
V. De calcio (dependientes de voltaje, operados por ligando (receptores para el ATP),
sensibles al estiramiento)
VI. De cloruro (dependientes de voltaje (ClC-1), operados por ligandos (receptores
para GABA glicina), controlado por AMPc (CFTR))

2- Teniendo en cuenta que el potencial de membrana en reposo para una clula muscular es
de 90 mV:

a) Calcule el potencial electroqumico para el Na
+
, el K
+
y el Cl
-
.
b) Establezca una relacin entre la magnitud del potencial y la fuerza del movimiento.
c) Ahora, conociendo los valores de potencial electroqumico para el Na
+
y el K
+
; y sabien-
do que el flujo pasivo para el Na
+
es 8.3 10
-12
mol/ cm
2
seg y el de K
+
6.2 10
-12
mol/ cm
2

seg; explique a qu se debe la semejanza de los flujos.
d) A qu se debe que las concentraciones inicas son estables en el tiempo si los flujos
pasivos netos de estos iones son distintos de cero?

3- Osmolaridad y Tonicidad. Efecto de soluciones hipo e hipertnicas sobre el volu-
men celular
a) Defina y diferencie los conceptos de osmolaridad y tonicidad.
b) En base a lo anterior explique lo que suceder cuando un eritrocito es suspendido en so-
luciones de NaCl 0,45%, 0,9% y 1,2%. Indique para cada una de las soluciones si es hiper,
iso o hipoosmolar y si es hiper, iso o hipotnica.
c) Del punto anterior usted puede haber establecido una relacin entre la osmolaridad y la
tonicidad de una solucin que no es correcto generalizar, ya que slo se cumple para algu-
nas sustancias como por ejemplo el NaCl. D ejemplos de sustancias cuyas soluciones no
cumplan con esa relacin.

Parte Prctica
Para demostrar los conceptos recin analizados se realizar el siguiente experimento:
Con anterioridad, se obtuvo sangre con anticoagulante de una rata anestesiada. Por centrifu-
gacin, se separ el plasma del paquete globular. Este ltimo se resuspendi en solucin
fisiolgica y posteriormente se centrifug y separ. Este procedimiento se realiz 2 veces
ms. Se obtuvo entonces, un paquete de glbulos rojos lavados.

PARTE A) En tres tubos de ensayo colocar 0,5 ml de estos glbulos rojos. A uno de ellos
agregar 0,5 ml de solucin de NaCl 0,9% (TUBO A); al segundo 0,5 ml de solucin de
NaCl 0,6% (TUBO B) y al tercero el mismo volumen de solucin de NaCl 1,2% (TUBO
C). A cada una de las suspensiones preparadas, determinar el valor de hematocrito mediante
centrifugacin utilizando capilares heparinizados (microhematocrito).

TCNICA:

- Llenado
Al llenar los tubos capilares hay que tener en cuenta que el extremo opuesto al orificio de
llenado de estos permanezca seco. Para determinar el hematocrito se llenarn los tubos ca-
pilares hasta un 75 % aprox. de su capacidad.

- Cierre
Hay que cerrar el extremo seco de los tubos capilares con plastilina. Para ello, los tubos
capilares deben pincharse en la plastilina de manera vertical hasta que el borde de los tubos
capilares toque el fondo de la placa de plastilina. Incline ligeramente los tubos capilares
hacia un lado y squelos de la plastilina.

- Centrifugado
Colquelos con el extremo cerrado hacia afuera en el rotor de hematocrito y ponga la tapa
del rotor. Centrifugue durante 10 minutos.

- Lectura del valor de hematocrito
Determine el valor de hematocrito mediante un baco.

1) Defina hematocrito.
2) Indique a qu tubo pertenece cada microhematocrito realizado.

PARTE B) Se prepar una batera de tubos conteniendo cada uno 1 ml de las soluciones
indicadas en el siguiente cuadro y luego se les agreg dos gotas de glbulos rojos. Luego de
analizar los resultados obtenidos y teniendo en cuenta la permeabilidad de la membrana a
los diferentes solutos utilizados, completar el cuadro, clasificando a cada una de las solu-
ciones segn su osmolaridad y tonicidad y correlacione ambos conceptos con el efecto ob-
servado.
Qu ocurrira si luego del agregado de los glbulos rojos se agrega 1 ml de NaCl 0.9 % al
Tubo 8?
LOS RESULTADOS DE ESTOS EXPERIMENTOS SE ENCUENTRAN EN LA
CARPETA CORRESPONDIENTE A ESTE TP, QUE POSEEN LOS AYUDANTES

4- Prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos o determinacin de la resistencia
globular osmtica

Se emplearon 9 diluciones decrecientes de solucin cloruro de sodio 0.9 a 0% p/v (0.9%,
0.79%, 0.7%, 0.62%, 0.54%, 0.48%, 0.36%, 0.3%, 0%). Despus de prepararlas, se les aa-
di 1 ml de sangre a cada tubo, se mezclaron por inversin y se dejaron a temperatura am-
biente por 30 minutos para completar la hemlisis. El sobrenadante se transfiri a cubetas y
se realiz la lectura en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 550 nm. El tubo n-
mero 1, el cual contena la mayor concentracin de cloruro de sodio, no produjo hemlisis y
se emple como blanco. El tubo 9, el cual no contena cloruro de sodio represent el 100%
de la hemlisis. Con los datos obtenidos se procedi al clculo del % de hemlisis en cada
tubo estudiado.

Clculo del % de hemlisis:


Densidad ptica del sobrenadante

Densidad ptica del sobrenadante del tubo 9


1) Por qu la lectura en el espectrofotmetro se realiza a 550 nm?
2) Definir y determinar la resistencia globular mnima y resistencia globular mxima.
3) Cmo esperara encontrar la prueba de fragilidad osmtica del eritrocito en un in-
dividuo con esferocitosis hereditaria? Grafique en un mismo par de ejes la curva que
se obtiene en un individuo normal y la que se obtendra en un individuo con esta pa-
tologa.

Tubo Solucin Osmolaridad Tonicidad Efecto
1 NaCl 0,9%
2 NaCl 0,45%
3 NaCl 1,2%
4 Etilenglicol (ETG) 1,86%
5 Urea 1,8%
6 Glucosa 5,4%
7 Urea 3,6%
8 ter
9 NaCl 0,9% + ETG 1,86%
% Hemlisis =
X 100
LOS RESULTADOS DE ESTE EXPERIMENTO SE ENCUENTRAN EN LA CARPETA
CORRESPONDIENTE A ESTE TP, QUE POSEEN LOS AYUDANTES

5- Cuando por cualquier circunstancia patolgica disminuye la concentracin de protenas
en el plasma (hipoproteinemia), existe una alteracin en el flujo del agua, provocando lo
que se denomina edema.

a) Explique el mecanismo por el cual se produce la extravasacin de lquido intravas-
cular hacia los tejidos.
b) Qu entiende por efecto Donnan extracelular?