Informe de Práctica Profesional

INFORME DE PRCTICA PROFESIONAL
VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DEL BRIX INVERTIDO EN

BEBIDAS GASEOSAS MEDIANTE EL USO DEL EQUIPO SOFT DRINK ANALYZER M.

LUIS ALBERTO PJARO VILLALOBOS
C.C. 1.069464904

ASESORES:
MARA ISABEL MEJA CORREA
WILMAR ALEXANDER MEJA OSPINA

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE INGENIERA
DEPARTAMENTO DE INGENIERA QUMICA
MEDELLN
2

Gracias a Dios por todas las bendiciones recibidas.
A todo el equipo del Laboratorio Central de Postobn S. A. por la
oportunidad brindada.
A mis padres Elsy y Luis Roberto por todos los sacrificios realizados para
alcanzar este sueo.
A Dionys por todo el apoyo y la comprensin manifestado todo este
tiempo.
Y a todas aquellas personas involucradas en este proyecto.

3

Tabla de contenido

1. RESUMEN ................................................................................................................................. 11
2. INTRODUCCIN .................................................................................................................... 12
3. OBJETIVOS .............................................................................................................................. 14
3.1. GENERAL ......................................................................................................................... 14
3.2. ESPECFICOS................................................................................................................... 14
4. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ...................................................................................... 15
5. MARCO TERICO ................................................................................................................. 16
5.1. VALIDACIN DE MTODOS ........................................................................................ 16
5.1.1. Definicin e importancia del proceso de validacin ............................... 16
5.1.2. Necesidad de un proceso de validacin..................................................... 17
5.2. CLASIFICACIN DE LOS MTODOS ANALTICOS .................................................. 19
5.2.1. Segn la normalizacin y estado de desarrollo del mtodo.................. 19
5.2.1.1. Mtodos normalizados o estndar ......................................................... 19
5.2.1.2. Mtodos no normalizados (modificacin de un mtodo
normalizado) ..................................................................................................................... 20
5.2.1.3. Mtodos desarrollados por el laboratorio ............................................ 21
5.2.2. Parmetros a validar segn la normalizacin y estado de desarrollo
del mtodo ............................................................................................................................ 21
5.2.3. Segn la categora del mtodo [1] ................................................................ 22
5.2.3.1. Categora I ..................................................................................................... 22
5.2.3.2. Categora II .................................................................................................... 22
5.2.3.3. Categora III ................................................................................................... 22
5.2.4. Parmetros a validar segn la categora del mtodo .............................. 22
5.3. PARMETROS DE RENDIMIENTO Y CARACTERIZACIN DEL MTODO ............. 23
5.3.1. Linealidad ............................................................................................................... 23
5.3.1.1. Evaluacin estadstica de linealidad [1] ............................................... 25
5.3.1.2. Anlisis de la varianza (ANOVA) ............................................................. 28
5.3.1.2.1. Homogeneidad de las varianzas ............................................................. 28
5.3.1.2.2. Prueba de normalidad o distribucin normal de los residuales ..... 29
4

5.3.1.2.2.1. Prueba verificacin de la pendiente ......................................... 31
5.3.1.2.2.2. Prueba verificacin del intercepto ............................................. 32
5.3.1.3. Pasos generales para evaluar la linealidad y el rango de trabajo
32
5.3.2. Rango ...................................................................................................................... 33
5.3.3. Robustez .................................................................................................................. 33
5.3.3.1. Procedimiento para el clculo de robustez ........................................ 34
5.3.3.2. Diseo y ejecucin de experimentos .................................................... 35
5.3.4. Selectividad [9] ..................................................................................................... 36
5.3.4.1. Determinacin de la selectividad [2] ..................................................... 37
5.3.5. Estabilidad .............................................................................................................. 38
5.3.6. Exactitud [9] ........................................................................................................... 38
5.3.6.1. Veracidad ...................................................................................................... 39
5.3.7. Precisin .................................................................................................................. 42
5.3.7.1. Repetibilidad ................................................................................................. 43
5.3.7.1.1. Repetibilidad del instrumento.................................................................... 44
5.3.7.1.2. Repetibilidad del mtodo ........................................................................... 45
5.3.7.2. Precisin intermedia .................................................................................... 45
5.3.7.3. Reproducibilidad .......................................................................................... 46
5.4. EQUIPO Y PRINCIPIO DE MEDICIN ......................................................................... 47
5.4.1. Especificaciones del equipo ............................................................................ 47
5.4.1.1. Mtodos predeterminados ........................................................................ 48
5.4.2. Principio de medicin [12] ................................................................................ 52
5.4.2.1. Definicin de densidad y gravedad especfica. ................................ 52
5.4.2.2. Mtodo oscilatorio del tubo en U ............................................................ 52
5.4.2.3. Anlisis de velocidad del sonido ............................................................ 53
5.4.2.4. El nmero de densidad (d) ....................................................................... 54
5.4.2.5. El nmero de sonido (s) .............................................................................. 54
5.4.3. Calibracin ............................................................................................................ 55
5.4.3.1. Clculo de la densidad del aire .............................................................. 55
5.4.3.2. Densidad del agua ...................................................................................... 56
5

5.4.4. Conversin a grados Brix (Bx)......................................................................... 56
5.5. EL AZCAR ...................................................................................................................... 58
5.5.1. Definicin ................................................................................................................ 58
5.5.2. Composicin ......................................................................................................... 58
5.5.3. Propiedades qumicas y fsicas. ...................................................................... 59
5.5.4. Proceso de inversin del azcar ..................................................................... 60
5.5.4.1. Definicin ........................................................................................................ 60
5.5.4.2. El fenmeno de inversin .......................................................................... 62
5.6. BRIX .................................................................................................................................. 62
5.6.1. El concepto de Brix ............................................................................................. 62
5.6.2. Importancia de la medicin del Brix en la industria alimenticia ........... 64
6. DESARROLLO DEL PROYECTO ............................................................................................. 65
6.1. VALIDACIN DEL EQUIPO SOFT DRINK ANALYZER M PARA LA MEDICIN DE
LA DENSIDAD Y BRIX INVERTIDO DE UNA MUESTRA GASEOSA. .................................... 65
6.1.1. Equipos usados en la validacin ..................................................................... 65
6.1.1.1. Estacin de desgasificacin ..................................................................... 65
6.1.1.2. Bao mara ..................................................................................................... 66
6.1.1.3. Balanza ........................................................................................................... 66
6.1.1.4. Reactivos ........................................................................................................ 66
6.1.1.5. Otros recursos ............................................................................................... 66
6.1.2. Parmetros a validar y valores estimados para su aceptacin ............ 67
6.1.3. Muestras y patrones de referencia ................................................................. 68
6.1.3.1. Muestra control ............................................................................................. 69
6.1.3.2. Patrn de referencia ................................................................................... 70
6.1.4. Condiciones ambientales ................................................................................. 70
6.2. METODOLOGA DE VALIDACIN ............................................................................. 71
6.2.1. Verificacin de las lecturas. Comparacin entre tabla NBS y el
ICUMSA 71
6.2.2. Comparacin entre los equipos DMA-58 y SDA-M.................................... 71
6.2.3. Validacin del equipo Soft Drink Analyzer M .............................................. 71
6.2.3.1. Linealidad ....................................................................................................... 72
6

6.2.3.2. Rango .............................................................................................................. 72
6.2.3.3. Robustez .......................................................................................................... 73
6.2.3.4. Selectividad ................................................................................................... 73
6.2.3.5. Estabilidad ...................................................................................................... 75
6.2.3.6. Exactitud ......................................................................................................... 75
6.2.3.7. Precisin .......................................................................................................... 76
6.2.3.7.1. Repetibilidad .................................................................................................. 77
6.2.3.7.1.1. Repetibilidad del instrumento ...................................................... 77
6.2.3.7.1.2. Repetibilidad del mtodo.............................................................. 77
6.2.3.7.2. Precisin intermedia ..................................................................................... 77
7. RESULTADOS Y ANLISIS ..................................................................................................... 78
7.1. VERIFICACIN DE LAS LECTURAS. COMPARACIN ENTRE TABLA NBS Y EL
ICUMSA ....................................................................................................................................... 78
7.2. COMPARACIN ENTRE LOS EQUIPOS DMA-58 Y SDA-M ................................... 88
7.3. Validacin del equipo Soft Drink Analyzer M ...................................................... 89
7.3.1. Comparacin entre las lecturas con el procedimiento normal de
inversin y las lecturas sin inversin ............................................................................... 89
7.3.2. Linealidad ............................................................................................................... 93
7.3.3. Rango ...................................................................................................................... 99
7.3.4. Robustez ................................................................................................................ 100
7.3.4.1. Anlisis de estabilidad de la muestra .................................................. 100
7.3.4.2. Tiempo de desgasificacin ..................................................................... 104
7.3.5. Selectividad ....................................................................................................... 107
7.3.6. Estabilidad .......................................................................................................... 108
7.3.7. Exactitud ............................................................................................................. 108
7.3.8. Precisin .............................................................................................................. 110
7.3.8.1. Repetibilidad del mtodo ......................................................................... 110
7.3.8.2. Precisin intermedia ................................................................................... 111
8. CONCLUSIONES .................................................................................................................. 113
9. BIBLIOGRAFA ...................................................................................................................... 115

7

LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Parmetros a evaluar segn la normalizacin y estado de desarrollo del mtodo
........................................................................................................................................................... 21
Tabla 2. Parmetros a evaluar segn su categora ................................................................... 22
Tabla 3. Ecuaciones necesarias para el clculo de la varianza en una regresin lineal. .... 30
Tabla 4. Procedimiento para evaluar la linealidad. ................................................................... 32
Tabla 5. Clculo de robustez. ........................................................................................................ 36
Tabla 6. Procedimiento general para clculo de exactitud. ................................................... 41
Tabla 7. Factores influyentes en la precisin. .............................................................................. 47
Tabla 8. Datos tcnicos del equipo. ............................................................................................. 48
Tabla 9. Mtodos predeterminados por el equipo. ................................................................... 49
Tabla 10. Composicin del aire seco en (v/v). ........................................................................... 56
Tabla 11. Condiciones promedio del Laboratorio Central y clculo de la densidad de aire.
........................................................................................................................................................... 56
Tabla 12. Propiedades fsicas y qumicas de la sacarosa. ......................................................... 60
Tabla 13. Descripcin de las muestras en el desarrollo del proyecto. ..................................... 69
Tabla 14. Condiciones ambientales promedio en el Laboratorio Central. ............................. 70
Tabla 15. Valores tericos de las soluciones de Brix dto y su correspondiente valor en Brix
inv. ..................................................................................................................................................... 72
Tabla 16. Rango de Brix invertido en bebidas gaseosas. .......................................................... 72
Tabla 17. Rango de trabajo para evaluacin de los Bx. .......................................................... 73
Tabla 18. Tiempos de desgasificacin de las bebidas. ............................................................. 73
Tabla 19.Componentes seleccionados para el anlisis de especificidad. ............................ 74
Tabla 20. Diseo de experimentos para especificidad. ............................................................ 74
Tabla 21. Evaluacin de estabilidad. ........................................................................................... 75
Tabla 22. Patrn utilizado para el clculo de exactitud. ........................................................... 76
Tabla 23. Estndares utilizados en el clculo de exactitud....................................................... 76
Tabla 24. Diseo de experimentos para precisin intermedia. ................................................ 77
Tabla 25. Resultados de la verificacin de las lecturas Bx inv terico: 6,316. ....................... 78
Tabla 29. Resultados de la verificacin de las lecturas Bx inv terico: 10,526. ..................... 79
Tabla 34. Diferencia entre las lecturas obtenidas por los polinomios ICUMSA. ...................... 81
Tabla 35. Intervalo del Bx inv., en el que se mantiene constante la densidad. .................... 82
8

Tabla 45. Diferencia entre las lecturas obtenidas por el polinomio ICUMSA (Sac/Pura) y la
tabla NBS .......................................................................................................................................... 86
Tabla 46. Intervalo del Bx inv., en el que se mantiene constante la densidad. .................... 87
Tabla 47. Prueba de las varianzas. ............................................................................................... 88
Tabla 48. Prueba de las medias. ................................................................................................... 88
Tabla 49. Anlisis estadstico para la comparacin entre las lecturas de los densmetros
basados en densidad. ................................................................................................................... 88
basados en Bx inv. ......................................................................................................................... 89
basados en Bx inv. ......................................................................................................................... 90
basados en Bx inv. ......................................................................................................................... 91
Tabla 55. Clculo del contenido volumtrico de las diferentes muestras de mercado. ...... 93
Tabla 56. Resultados para el estudio de linealidad en el SDA-M en Bx directo. ................... 93
Tabla 57. Resultados para estudio de linealidad en el SDA-M en Bx invertido. .................... 94
Tabla 58. Parmetros de regresin lineal en el estudio de linealidad. .................................... 94
Tabla 59. Resultados de la homogeneidad de las varianzas. .................................................. 96
Tabla 60. Resultados obtenidos en el anlisis de ANOVA. ........................................................ 96
Tabla 61. Normalidad de los residuos. .......................................................................................... 97
Tabla 62. Test de verificacin de la pendiente. .......................................................................... 97
Tabla 63. Test de verificacin trmino independiente. .............................................................. 98
Tabla 64. Porcentaje de recuperacin (%R) para los datos utilizados en el estudio de
linealidad. ........................................................................................................................................ 99
Tabla 65. Sesgo del Bx para los datos utilizados en el estudio de linealidad. ....................... 99
Tabla 66. Resultados prueba de estabilidad de las muestras gaseosas. .............................. 100
Tabla 67. Prueba de normalidad para la estabilidad de las muestras gaseosas. ............... 103
Tabla 68. Normalidad de la prueba de Tiempo de desgasificacin. .................................... 104
Tabla 69. Normalidad eliminando datos extraos o dudosos. ............................................... 105
Tabla 70. Datos obtenidos de la prueba de robustez.............................................................. 106
Tabla 71. Preparacin de las soluciones con datos reales para anlisis de selectividad. . 107
Tabla 72. Respuesta en trminos de Bx para las soluciones en el anlisis de selectividad.
......................................................................................................................................................... 107
Tabla 73. Sensibilidades parciales para los componentes presentes en las distintas
soluciones. ...................................................................................................................................... 108
Tabla 74. Clculo de especificidades. ....................................................................................... 108
Tabla 75. Resultados de exactitud para calibracin con agua ultra pura........................... 109
Tabla 76. Verificacin de los patrones en trminos de densidad. ......................................... 109
9

Tabla 77. Verificacin de los patrones en trminos de Bx. ..................................................... 109
Tabla 78. Resultados de la repetibilidad del mtodo en el SDA-M. ....................................... 110
Tabla 79. Intervalos de confianza para el anlisis de repetibilidad. ...................................... 111
Tabla 80. Datos para el estudio de similitud de varianzas. ...................................................... 111
Tabla 81. Resultados del estudio de similitud de las varianzas de los analistas. ................... 111
Tabla 82. Comparacin de los coeficientes de variacin. ..................................................... 112

10

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Grfico de la funcin respuesta. .................................................................................. 24
Figura 2. Distribucin normal......................................................................................................... 30
Figura 3. Algoritmo para evaluar la robustez de un mtodo analtico. .................................. 34
Figura 4. Verificacin de exactitud. ............................................................................................. 39
Figura 5. Procedimiento para el clculo de la exactitud. ......................................................... 41
Figura 6. Precisin. ........................................................................................................................... 43
Figura 7. Equipo Soft Drink Analyzer M. ........................................................................................ 47
Figura 8. Esquema del proceso de medicin en un densmetro. ............................................. 53
Figura 9. Relacin entre la densidad y la velocidad del sonido. ............................................. 57
Figura 10. Estructura qumica de la sacarosa. ............................................................................ 59
Figura 11. Reaccin de inversin de azcar por hidrlisis cida. ............................................. 61
Figura 12. Condiciones ambientales en el laboratorio. ............................................................. 70
Figura 13. Regresin lineal para la densidad respecto a Bx dto. ............................................ 95
Figura 14. Regresin lineal para la densidad respecto al Bx inv. ............................................ 95
Figura 15. Estabilidad de la Colombiana Nacional a travs del tiempo. ............................. 101
Figura 16. Estabilidad de la Manzana Interior a travs del tiempo. ....................................... 102
Figura 17. Estabilidad de la Seven Up a travs del tiempo. .................................................... 102

11

1. RESUMEN

En este trabajo se evalu la capacidad del equipo Soft Drink Analyzer M
(SDA-M) de la casa fabricante Anton Paar GmbH para determinar el Brix
invertido de una muestra de gaseosa, sin llevar a cabo el proceso
fisicoqumico de inversin. Para ello se realizaron diferentes validaciones
siguiendo las normas nacionales e internacionales, con el fin de que el
equipo adquirido por el Laboratorio Central de Postobn S.A. fuera
utilizado en la evaluacin mensual de la calidad de los productos, en
reemplazo del equipo DMA-58 de la misma casa fabricante. En el trabajo
se evalu el rendimiento del SDA-M y se analizaron los resultados obtenidos
para los parmetros de validacin que incluyen: linealidad, rango,
precisin, exactitud, robustez, entre otros.

Basado en el tratamiento estadstico, el anlisis y la interpretacin de los
datos, los resultados indican que no existe una diferencia significativa entre
los equipos comparados (el DMA-58 y el SDA-M) para el rango de Brix que
normalmente poseen las bebidas gaseosas de la compaa (entre 6,000 y
15,000 Bx). Por lo que se puede concluir que el SDA-M puede sustituir al
DMA-58 como equipo en el anlisis cotidiano de Bx de las muestras
gaseosas que se llevan a cabo en el Laboratorio Central, mostrando una
mayor eficiencia en trminos de tiempo de anlisis de la muestra ya que
ste tarda entre 4 a 5 minutos, mientras que el DMA-58 tarda entre unos 9 a
12 minutos.

12

2. INTRODUCCIN

Gaseosas Posada-Tobn (POSTOBN S.A.), es una empresa lder en el pas
que por 107 aos se ha enfocado al desarrollo, la innovacin, produccin,
comercializacin y distribucin de una gran variedad de bebidas no
alcohlicas y refrescantes, entre las que se encuentran: Gaseosas, Jugos,
Aguas, Hidratantes, Bebidas de t y Energizantes.

Una de las reas ms importantes de la compaa es la Divisin Nacional
de Gestin Calidad, que durante mucho tiempo ha mantenido un
compromiso integral con el aseguramiento de la calidad de todas las
marcas del portafolio de productos, al igual que las materias primas
utilizadas en el proceso de produccin, brindando con ello un soporte
tcnico y legal, ante cualquier eventualidad.

El Laboratorio Central de POSTOBN S.A. es uno de los pilares
fundamentales para el fortalecimiento de todo el proceso de gestin de
calidad. En l se realizan anlisis fisicoqumicos, microbiolgicos y
sensoriales, adems de seguimientos a materias primas y empaques; todo
con el objetivo de que los productos que el consumidor recibe, siempre se
encuentren dentro los parmetros de calidad establecidos por la
compaa para satisfacer sus gustos y necesidades, superando en todo
momento sus expectativas; esto se logra haciendo evaluaciones
mensuales de calidad del portafolio de productos, de los diferentes centros
productores que se encuentran distribuidos en todo el territorio nacional.

Dentro de los anlisis fisicoqumicos que se realizan en el Laboratorio
Central, se encuentran: Determinacin de grados Brix, pH, Acidez Titulable
y Porcentaje de Acidez, as como el Volumen de Carbonatacin, entre
otros. Los resultados de estos anlisis son precisos y de alta confiabilidad, y
cumplen con los lineamientos establecidos en las normas nacionales e
internacionales.

Uno de los parmetros de gran importancia para la compaa es el grado
Brix (Bx), que puede definirse bsicamente como el porcentaje en peso
de azcar presente en la bebida, jarabe o jugo, ya que es ste
precisamente el componente que se encuentra en mayor proporcin, en
comparacin a los dems componentes que son utilizados en la
fabricacin de la bebida como lo son: el acidulante, el saborizante, el
colorante, entre otros.
13

El azcar, que es esencialmente sacarosa (un disacrido), sufre un proceso
de inversin bajo condiciones cidas y cambiantes de temperatura en el
producto terminado, aumentando el porcentaje de slidos disueltos en la
muestra y haciendo compleja la medicin del Brix en forma directa en el
Laboratorio Central, ya que se desconoce el grado de inversin que tiene
la bebida desde su fabricacin hasta el momento del anlisis.

Por esta razn, para poder determinar el Brix en el Laboratorio Central, es
necesario llevar a cabo un procedimiento de inversin total en las
muestras, en el cual se favorece la reaccin de descomposicin de la
sacarosa y se alcanza el 100% en el grado de inversin, lo que evita
interferencias e incertidumbres en el dato medido.

En este proyecto se evalu la capacidad del equipo Soft Drink Analyzer M
(densmetro distribuido por la casa fabricante Anton Paar GmbH) para
determinar el Brix invertido en una muestra de bebida gaseosa sin tener
que llevar a cabo el proceso fisicoqumico de inversin total, proceso que
toma entre 2 y 3 horas, desde el momento del precalentamiento en el
bao Mara hasta la medicin y adquisicin de los datos. Esto implica una
mejora en los procedimientos internos del laboratorio, ya que se logra un
ahorro en el tiempo de anlisis y reporte de datos, mostrando con ello una
optimizacin en la medicin de dicha variable en comparacin con el
densmetro DMA 58 del mismo fabricante y que actualmente se utiliza en el
Laboratorio Central.

14

3. OBJETIVOS

3.1. GENERAL

Validar la capacidad de un Soft Drink Analyzer M para determinar
el Brix invertido de una bebida gaseosa sin llevar a cabo el
proceso fisicoqumico de inversin empleado en el Laboratorio
Central de Postobn S.A.

3.2. ESPECFICOS

Elaborar un instructivo prctico de calibracin y operacin del
equipo Soft Drink Analyzer M para el buen uso de ste, de forma
tal que se eviten errores en la lectura del Brix.

Evaluar la confiabilidad de una lectura de Brix invertido tomada
por el Soft Drink Analyzer M frente a una medicin realizada con
el procedimiento convencional de inversin forzada, en trminos
de exactitud y precisin.

Estandarizar e implementar el procedimiento de medicin de Brix
invertido en bebidas gaseosas para tenerlo en cuenta en la
evaluacin mensual de calidad del Laboratorio Central.

15

4. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Dentro de la Divisin Nacional de Gestin Calidad de Postobn S.A. se
cuenta con el Laboratorio Central, en l se realizan numerosos anlisis
fisicoqumicos que van encaminados al aseguramiento de la calidad de
toda la gama de productos de la compaa.

El Laboratorio Central de Postobn S.A., juega un papel fundamental a la
hora de cumplir este objetivo puesto que en l se realiza mensualmente
una evaluacin de producto terminado elaborados por los 19 centros
productores distribuidos a lo largo del territorio colombiano; esto con el fin
de que el producto que recibe el cliente cumpla con los lineamientos
establecidos por la compaa.

Este proyecto busca evaluar la capacidad del equipo Soft Drink Analyzer
M (SDA-M) para medir la densidad y por medio de relaciones matemticas
determinar el Brix invertido (Bx inv) de una muestra de gaseosa, sin llevar a
cabo el proceso fisicoqumico de inversin, y de esta forma poder incluirlo
en la evaluacin mensual de calidad en sustitucin del equipo DMA-58 en
el que se hace necesaria la inversin, procedimiento que tarda entre 3 y 4
horas antes de que la muestra sea analizada y que ha venido
desempeando este papel durante los ltimos aos.

Teniendo en cuenta el volumen de muestras que se analizan en este
laboratorio, el SDA-M ofrece una gran ventaja a la hora de obtener los
mismos resultados, puesto que no se hace necesario la inversin de las
muestras lo que conlleva a un ahorro de tiempo y dinero (compra y
utilizacin de reactivos).

En este trabajo se llev a cabo la validacin de un mtodo analtico, ms
exactamente la modificacin de un mtodo analtico normalizado, ya que
incluye el cambio de un equipo. Esta validacin evala si la modificacin
realizada, es decir, el cambio de equipo, influye en los resultados obtenidos
en el anlisis de manera significativa.

16

5. MARCO TERICO

5.1. VALIDACIN DE MTODOS

5.1.1. Definicin e importancia del proceso de validacin

La validacin de un mtodo analtico es un paso fundamental para
asegurar que los resultados entregados por dicho mtodo son confiables.
Cuando se realiza la validacin de un mtodo por parte del laboratorio, lo
que se busca es poder determinar con fundamento estadstico que el
mtodo es adecuado para los fines previstos.

En este sentido, es importante que para el proceso de validacin se asigne
a un responsable de realizar dicha tarea. De manera que, la validacin se
efecte en forma metdica, ordenada, trazable y confiable.

Otras definiciones sobre el proceso de validacin son:

Establecimiento de evidencia documental de que un procedimiento
analtico conducir con un alto grado de seguridad, a la obtencin
de resultados precisos y exactos, dentro de las especificaciones y
atributos de calidad previamente establecidos. [1]
Segn la Norma Tcnica Colombiana NTC 17025 de 2005, la
validacin es la confirmacin a travs del examen y el aporte de
evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos particulares para
un uso especfico. [2]
Otra definicin la define como el establecimiento de una base de
datos experimental que certifica el rendimiento de un mtodo
analtico teniendo en cuenta su objetivo de diseo. [3]
Por otra parte, la validacin es una confirmacin por medio de una
evaluacin, que suministra la evidencia necesaria para ratificar que
los objetivos de diseo del mtodo bajo especificaciones
particulares se cumplen en su totalidad. [3]

En todo proceso de validacin existen dos objetivos fundamentales, el
establecimiento de un mtodo de anlisis y la confirmacin de su
desempeo a travs de tratamientos estadsticos que proporcionan los
criterios de aceptacin, rechazo o reanlisis de las lecturas hechas en
dicho proceso; en otras palabras, el objetivo primordial de la validacin es
17

probar la aptitud del mtodo utilizado, as como la capacidad del
laboratorio y su personal, con base en los parmetros estadsticos utilizados
en el procedimiento.

5.1.2. Necesidad de un proceso de validacin

La asociacin europea de laboratorios enfocada al mejoramiento y la
estandarizacin de mtodos de anlisis qumico, Eurachem, propone
algunas pautas para promover la buena prctica en las mediciones de
anlisis qumico, ests son: [4]

Las mediciones analticas deben hacerse para satisfacer un objetivo
definido.
Los analistas encargados de los anlisis deben estar calificados y
deben ser competentes con las tareas asignadas, adems deben
mostrar que pueden realizar los anlisis de forma adecuada.
Debe existir un aseguramiento peridico e independiente del
desempeo de las tcnicas de laboratorio.
Las mediciones analticas deben hacerse usando mtodos y equipos
evaluados, con el fin de asegurar que stos son adecuados para su
propsito. En este ltimo tem en el que de forma implcita se
menciona la validacin, se puede ver que hace parte fundamental
de las buenas prcticas para las mediciones de anlisis fisicoqumico
realizadas en un laboratorio.

Tambin se pueden mencionar algunas otras razones que avalan o
justifican la validacin de los mtodos analticos, por mencionar algunos se
tienen:

Demostrar que los mtodos son adecuados para los anlisis
propuestos en las condiciones descritas. La validacin es una
herramienta que permite obtener pruebas documentales al
respecto.
Trabajar con mtodos que ofrezcan confianza y seguridad en los
resultados, lo cual a su vez minimizar el nmero de fallos y
repeticiones, permitiendo un importante ahorro en costes.
Trabajar con mtodos validados permite no slo el conocimiento del
mtodo analtico, sino tambin cumplir con las exigencias de las
18

normas legales NTC-ISO-IEC 17025, como tambin de las buenas
prcticas de laboratorio, con el fin de asegurar la calidad.
Segn la norma NTC-ISO-IEC 17025 versin 2005, el laboratorio debe
validar los mtodos no-normalizados, los mtodos
diseados/desarrollados por el laboratorio, los mtodos normalizados
empleados por fuera del alcance propuesto, ampliaciones y
modificaciones de mtodos normalizados; a fin de confirmar que los
mtodos sean los apropiados para el uso propuesto.
La validacin debe ser tan extensiva como sea necesario para
cumplir con todas las necesidades de la aplicacin o campo de
aplicacin determinados. El laboratorio debe registrar los resultados
obtenidos, el procedimiento empleado para la validacin, y un
informe en cuanto a la afinidad del mtodo. [2]

La validacin hace parte de un proceso continuo de mejoramiento de
calidad de los laboratorios, es por ello que un proceso de validacin debe
realizarse cuando:

Se desarrolla un nuevo mtodo para un problema en particular
(primera validacin).
Cambio o actualizacin de equipos de anlisis.
Obsolescencia y correspondiente actualizacin del mtodo.
Se renueva el principio activo o se realizan correcciones al
procedimiento debido a condiciones de logstica o de diseo.
Se establece un mtodo usado en otro laboratorio o con diferentes
analistas.
Cuando el control de calidad indica que el mtodo establecido
reporta valores que varan con el tiempo.
Cuando existen alteraciones de fondo en la matriz de anlisis.
Se desea demostrar la equivalencia de dos mtodos, comparacin
entre un mtodo alternativo y uno normalizado.

Estos factores no son excluyentes y por lo tanto pueden efectuarse varios a
la vez. Se recomienda, entonces, cuando sea necesaria una re-
validacin, realizar la mayor cantidad de cambios previstos a futuro, y de
esta forma no ser necesario ejecutar validaciones de manera seguida; es
decir, si por algn motivo se realiza una correccin en el procedimiento y
es necesaria la validacin, se debe realizar una bsqueda bibliogrfica de
la tcnicas actuales para el mtodo en cuestin y evaluar si en ese
momento existen mejores tcnicas para dicho anlisis y si es apropiada su
aplicacin.

19

El proceso de validacin est limitado por el alcance que se requiere, es
importante definir bien los objetivos iniciales y el alcance que tendr, para
de esta forma optimizar los ensayos. Es de anotar, que en una re-validacin
no es necesario realizar todo el proceso de validacin, en ocasiones solo es
necesario realizar el correspondiente anlisis de robustez y precisin. [3]

5.2. CLASIFICACIN DE LOS MTODOS ANALTICOS

Los mtodos analticos se pueden clasificar segn:

La normalizacin y estado de desarrollo del mtodo.
La categora del mtodo.

5.2.1. Segn la normalizacin y estado de desarrollo del mtodo

Estos pueden ser de tres tipos:

Mtodos normalizados.
Mtodos no normalizados.
Mtodos desarrollados por el laboratorio.

5.2.1.1. Mtodos normalizados o estndar

Los mtodos estndar son aquellos publicados por organizaciones
internacionales, regionales o nacionales; por organizaciones tcnicas
respetables; referencias legales; mtodos publicados por la FDA (Food and
Drug Administration) y que se ejecutan tal como se describen en la norma.
Estos mtodos incluyen aquellos publicados por:

United States Pharmacopeia (USP).
National Formulary (NF).
Homeopathic Pharmacopeia of the United States.
Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical
Chemists (AOAC).
American Public Health Association (APHA).
Pesticide Analytical Manual (PAM).
Food Additives Analytical Manual.
Food Chemicals Codex.
FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM).
20

FDA Macroanalytical Procedures Manual (MPM).
ORA Laboratory Information Bulletins (LIBs).

Se prefiere usar los mtodos estndar, sin embargo es necesaria la
verificacin de la capacidad analtica dentro de los laboratorios en los
cuales es usado. Un mtodo estndar puede estar complementado con
detalles adicionales sobre como los laboratorios deben proceder para
asegurar una aplicacin consistente.

Aquellos mtodos especificados por fabricantes de equipos de anlisis
tambin son considerados como mtodos estndar, por ejemplo los
suministrados por HACH en el Handbook de anlisis de agua por mtodos
espectrofotomtricos.

El laboratorio que va a utilizar un mtodo normalizado debe verificarlo
contra sus especificaciones de validacin, atendiendo los requisitos para el
aseguramiento de la calidad, y no necesita validarlo. Esta verificacin
permite demostrar que el laboratorio domina el ensayo y lo utiliza
correctamente. [2, 3]

5.2.1.2. Mtodos no normalizados (modificacin de un mtodo
normalizado)

Los mtodos no normalizados son aquellos que no han sido publicados por
fuentes autorizadas y/o validadas. Es muy probable que los mtodos sin
normalizacin no dispongan de datos de validacin o estudios
colaborativos fiables o suficientes, por esto se recomienda realizar una
validacin en cuanto sea posible. Si el mtodo sufre cambios, se requerir
una revalidacin del mtodo.

El laboratorio que va a modificar un mtodo normalizado debe revalidarlo
para demostrar que las especificaciones del mtodo original no se ven
afectadas por la modificacin introducida. El nivel de revalidacin
requerido aumenta conforme a la magnitud de los cambios realizados.

Se consideran cambios menores, por ejemplo, la modificacin del tamao
de la muestra y sustitucin de reactivos. Se considera cambios mayores,
21

por ejemplo, el cambio de procedimiento o equipo, y cambios en el
alcance (aplicacin a matrices que no se especifiquen). [5]

5.2.1.3. Mtodos desarrollados por el laboratorio

Cuando sea el caso, el laboratorio debe demostrar que tiene un plan en el
que se incluye la evaluacin de su capacidad en cuanto a personal,
equipo y dems recursos que le permitan desarrollar mtodos propios.

Los mtodos desarrollados por el laboratorio deben estar adecuadamente
validados, documentados y autorizados antes de su uso. Cuando sea
posible, se debe emplear material de referencia con una matriz
equivalente a la muestra, o bien debe utilizarse un mtodo de ensayo
normalizado alterno, preferiblemente de diferente principio de medicin,
para comparar los resultados. Estos mtodos deben cumplir al menos los
mismos requisitos de documentacin, indicados para los mtodos no
normalizados. [2]

5.2.2. Parmetros a validar segn la normalizacin y estado de
desarrollo del mtodo

Los parmetros a evaluar en una validacin cuando se utiliza una norma
(mtodo normalizado), una norma modificada (mtodo no normalizado) o
un mtodo desarrollado por el laboratorio, se describen en la tabla 1.

Tabla 1. Parmetros a evaluar segn la normalizacin y estado de desarrollo del mtodo
Tipo de mtodo A comprobar Determinar Control
Mtodo
normalizado.
- Exactitud.
- Repetibilidad.
- Incertidumbre.
- Lmite de
deteccin (si la
norma lo indica).
- Rango.
- Linealidad.
- Recuperacin.
- Robustez.
- Selectividad.
- Estabilidad (resistencia).
- Reproducibilidad.
- Realizar protocolo de
control de calidad.
- Controles
intralaboratorio.
- Participar de
interlaboratorios.
Modificacin de
un mtodo
normalizado.
- Exactitud.
- Repetibilidad.
- Reproducibilidad.

- Linealidad.
- Rango.
- Robustez.
- Selectividad.
control de calidad.
- Controles
intralaboratorio.
- Participar de
interlaboratorios.
22

Mtodo
desarrollado por el
laboratorio.
- Exactitud.
- Repetibilidad.
- Reproducibilidad.
- Selectividad/especificidad.
- Linealidad.
- Exactitud.
- Rango.
- Repetibilidad.
- Reproducibilidad.
- Lmite de deteccin.
- Lmite de cuantificacin.
- Recuperacin.
- Robustez.
- Sensibilidad.
- Incertidumbre.
control de calidad.
- Controles
intralaboratorio.
- Participar de
interlaboratorios.

5.2.3. Segn la categora del mtodo [1]

Los mtodos analticos tambin pueden clasificarse segn el fin con el que
va a ser utilizado y pueden agruparse en las siguientes tres categoras:

5.2.3.1. Categora I
Para la cuantificacin de materia prima o principio activo en producto
terminado.

5.2.3.2. Categora II
Para determinar impurezas en materia prima o compuestos de
degradacin en producto terminado; o para anlisis de residuos en
material biolgico o alimentos.

5.2.3.3. Categora III

Para determinar las caractersticas de funcionamiento como disolucin o
liberacin de droga en el organismo.

5.2.4. Parmetros a validar segn la categora del mtodo

Los parmetros que se evalan segn la categora del mtodo se muestran
en la tabla 2.

Tabla 2. Parmetros a evaluar segn su categora
Parmetro Categora I Categora II Categora III
Selectividad. Si Si Si
Sensibilidad. * * *
Linealidad. Si Si *
Rango. Si Si *
Exactitud. Si Si *
Precisin. Si Si Si
Lmite de deteccin. No Si *
Lmite de cuantificacin. No Si *
23

Estudio comparativo
(interlaboratorios).
* * *
Robustez. Si Si Si
Incertidumbre. * Si Si
* Se deja a criterio del laboratorio, realizar siempre y cuando sea posible su determinacin
segn las restricciones del mtodo.

5.3. PARMETROS DE RENDIMIENTO Y CARACTERIZACIN DEL MTODO

Los parmetros que ayudan a la caracterizacin de un mtodo y que se
consideraron para este proyecto son:

Linealidad.
Rango.
Robustez.
Selectividad.
Estabilidad (resistencia).
Exactitud.
Precisin: Repetibilidad, Reproducibilidad y Precisin intermedia.

5.3.1. Linealidad

La linealidad es la capacidad de un mtodo de anlisis, dentro de un
determinado intervalo, de dar una respuesta o resultado instrumental que
sea proporcional a la cantidad de analito que se habr de determinar en
la muestra de laboratorio.

Con el fin de determinar el rango lineal, se puede realizar un grfico de
concentracin versus respuesta, que se conoce como Funcin Respuesta
(normalmente llamada recta de calibracin Figura 1). sta se establece
cada da con una cierta cantidad de valores formados por un blanco y los
patrones de trabajo limpios, de valor terico conocido, que cubran el
intervalo de trabajo.

24

Figura 1. Grfico de la funcin respuesta.

Para los mtodos cuantitativos es necesario determinar el rango de
concentracin del analito donde el mtodo debe ser aplicado. La
linealidad y rango son dos parmetros muy relacionados; sin embargo, el
rango se distingue de la linealidad en que ste toma en cuenta adems la
precisin y la exactitud de los valores obtenidos, y por lo tanto se trabaja
como un parmetro distinto. Sin embargo ambos se obtienen a partir del
mismo grupo de ensayos.

La evaluacin de la linealidad es muy til para determinar qu tipo de
calibracin es requerido en el uso rutinario del mtodo, este nos puede
definir si la curva de calibracin requiere solo un punto o requiere de
muchos puntos, para obtener una regresin adecuada. Se recomienda
aproximadamente 6 puntos de calibracin, aunque esto depende en
mayor medida del mtodo y del instrumento a usar [4].

La relacin entre la respuesta del mtodo y la concentracin no debe ser
necesariamente lineal, en caso de ser curva esta debera ser repetible en
el transcurso del tiempo.

Existen dos formas de realizar un diagnstico de linealidad, ambas tiles
bajo ciertas condiciones:

25

Los puntos de la curva se realizan a partir de soluciones preparadas
con pesadas independientes, sin realizar sucesivas diluciones. Esto
porque cuando se realiza una dilucin, si el analito alcanza su lmite
de solubilidad, parte de este no estar disuelto y por lo tanto formar
una respuesta no lineal. Sin embargo, este procedimiento no es muy
recomendable cuando se preparan soluciones de baja
concentracin, ya que el error al pesar ser relativamente mayor a
bajas concentraciones. Esta metodologa debe realizarse cuando
las concentraciones son suficientemente altas.
La otra forma de realizar la aproximacin lineal es preparando
soluciones a partir de alcuotas de una solucin stock o estndar, as,
es posible obtener concentraciones bajas en caso de ser necesarias
en el anlisis.

Para la evaluacin de la linealidad existen algunos criterios mnimos para
llevar a cabo dicha finalidad, entre ellos se tienen:

Dentro del rango establecido se recomienda estudiar al menos 5
niveles de concentracin y analizarlas por triplicado (K=5, nmero de
rplicas ni=3), para un total de 15 determinaciones (n=15).
Las muestras a analizar pueden prepararse a partir de los estndares
del analito de concentracin conocida, o bien a partir de un lote de
concentracin conocida. De esta ltima forma, el estudio de
linealidad puede servir tambin para evaluar la recuperacin y con
ella la exactitud del mtodo.
Para realizar los anlisis se debe hacer pesadas independientes,
siempre que sea posible (por ejemplo 15 pesadas), ya que as se
elimina el posible error sistemtico en el que se podra incurrir
partiendo de una sola preparacin y realizando disoluciones.

5.3.1.1. Evaluacin estadstica de linealidad [1]

Para llevar a cabo una evaluacin estadstica de la linealidad y
aleatoriedad de los resultados obtenidos, se recurre a las siguientes
frmulas y criterios:

26

Clculo de la regresin lineal

Ecuacin de la recta:

Valor estimado para una concentracin terica

Valor residual:

Trmino independiente:

Donde:

Pendiente:

Coeficiente de correlacin:

27

Clculo de la varianza residual:

Clculo de la varianza de la pendiente:

Clculo de varianza del trmino independiente:

Para el anlisis de linealidad se define:

Es la concentracin terica.
La respuesta del equipo.
El valor de la pendiente.
La interseccin con el eje o el trmino independiente.

Coeficiente de correlacin y coeficiente de determinacin

En la prctica, el coeficiente de correlacin indica una correlacin
entre la concentracin y la respuesta con una probabilidad elevada. Es
recomendable que el coeficiente de correlacin obtenido sea mayor o
igual a 0.999, aunque para el caso de trazas se admite un valor igual o
mayor que 0.990.

La informacin obtenida mediante el clculo de es limitada y no
justifica por s sola la linealidad. Mientras que el coeficiente de
determinacin
aporta una mayor significancia estadstica, puesto que

expresa la proporcin de la variacin total de explicada por el modelo.

28

5.3.1.2. Anlisis de la varianza (ANOVA)

Para llevar a cabo el anlisis de varianza (ANOVA) se deben cumplir los
siguientes requerimientos:

Homogeneidad de las varianzas.
Normalidad de los residuales.

5.3.1.2.1. Homogeneidad de las varianzas

La homogeneidad de la varianzas se puede comprobar aplicando, por
ejemplo un prueba de Cochran que indicar si el factor de concentracin
tiene alguna influencia en la variabilidad de los resultados.

Estadsticamente sera ms correcto normalizar previamente las respuestas,
ya que de lo contrario se compararn coeficientes de variacin que
corresponden a medias de concentraciones diferentes entre s. Sin
embargo, es habitual efectuar una prueba sin cumplir este requisito
cuando el intervalo de concentraciones no es excesivamente amplio.

El valor de
se calcula como:

Donde:

Varianza de cada grupo K.
Varianza mxima de los K grupos.

Si
significa que las varianzas de las concentraciones son

homogneas, es decir que el factor concentracin no influye en la
variabilidad de los resultados.

29

El
se estima como:

Donde:

Es el nmero de grupos de datos (grupo de rplicas).
El grado de libertad definido como
, donde
es el
mayor valor de los tamaos de muestra.
Es el nivel de significancia.

Las varianzas no deben ser estadsticamente diferentes entre s para el
grado de significacin escogido, generalmente (5%).

En caso de que la homogeneidad de las varianzas no se cumpla, caben
dos posibilidades:

Si se debe a la mayor variabilidad de uno de los extremos del rango,
este se puede acortar siempre y cuando los mrgenes especificados
lo permitan.
Puede plantearse el anlisis a otro nivel de concentraciones, tal que
las variaciones no sean significativas.

5.3.1.2.2. Prueba de normalidad o distribucin normal de los residuales

Distribucin continua conocida tambin como distribucin Gaussiana, la
distribucin de una variable normal est completamente determinada por
dos parmetros, su media y su desviacin estndar . La distribucin
normal se caracteriza por tener una nica moda, que coincide con su
media y su mediana. Su expresin grfica (figura 2) es una curva normal,
cuya forma es similar a los histogramas con forma de campana. Es
conocida como campana de gauss que es simtrica respecto a su media
y asinttica al eje de abscisas, esto hace que cualquier valor entre y es
tericamente posible. El rea total bajo la curva es, por tanto, igual a 1.
Para este tipo de variables existe una probabilidad de un 50% de observar
un dato mayor que la media, y un 50% de observar un dato menor.

30

Figura 2. Distribucin normal.

Las pruebas de normalidad ms utilizadas son:

Test de Shapiro-Wilk.
Test de Kolmogorov-Smirnov.

El test de Shapiro-Wilk fue diseado para tamaos de muestra moderados
y puede detectar desviaciones de la normalidad por asimetra o curtosis.
Mientras que la prueba de Kolmogorov-Smirnov compara la funcin de
distribucin de los datos con la distribucin normal, y mide la mxima
distancia entre ambas curvas.

Una vez comprobada la homogeneidad de las varianzas y la normalidad
de los residuales, se procede con el clculo de la ANOVA, mediante el
siguiente procedimiento matemtico mostrado en la tabla 3:

Tabla 3. Ecuaciones necesarias para el clculo de la varianza en una regresin lineal.
Suma de cuadrados
Grados de
libertad
Varianza Estadstico
Regresin

Residual

Falta de ajuste

Error
experimental

31

Total

Donde:
Nmero del grupo.
Nmero de la serie.
Nmero total de lecturas.
Nmero de rplicas en un grupo.

Nmero de grupos o concentraciones.
Suma de cuadrados debido a la regresin.
Varianza de la regresin.
Variacin residual debida al error experimental dentro de los grupos

ms la variacin debida a la falta de ajuste.
Variacin residual.
Clculo del error experimental (suma de cuadrados debido a las

rplicas dentro de las mismas series).
Varianza del error experimental.
Clculo del error de regresin o de falta de ajuste (se debe a la

dispersin de resultados entre los valores de la recta de regresin y las
medias de cada grupo).
Suma de los cuadrados total.

Existen relaciones entre las sumas de cuadrado.

Una vez comprobados los supuestos y calculados los estadsticos
se
procede a verificar las siguientes hiptesis:

Demuestra la existencia de una pendiente distinta a 0.
Demuestra la linealidad entre los resultados obtenidos.

5.3.1.2.2.1. Prueba verificacin de la pendiente

Con este test se busca corroborar la significancia estadstica de la
pendiente, esto se logra calculando el intervalo de confianza para la
pendiente segn la frmula:

32

En la cual:

Es el valor de la distribucin de Student para un grado de libertad ,
con un nivel de significancia de .

El intervalo no incluye el valor de cero para considerar la pendiente
significativa.

5.3.1.2.2.2. Prueba verificacin del intercepto

De igual forma se verifica la significancia estadstica del intercepto, en este
caso se tiene que:

Se concluye entonces que la ordenada es estadsticamente significativa si
el rango incluye el valor de cero.

Cuando no se cumpla el test de verificacin del intercepto, es necesario
llevar a cabo una interpolacin de los resultados obtenidos de cualquier
muestra de por lo menos dos estndares (inferior y superior). De manera tal
que se obvia el sesgo del mtodo.

5.3.1.3. Pasos generales para evaluar la linealidad y el rango de
trabajo

Para tener una idea ms ordenada sobre la toma de datos para evaluar
el rango de trabajo y la linealidad, se resumen los pasos en la tabla 4.

Tabla 4. Procedimiento para evaluar la linealidad.
Anlisis
Nmero de
repeticiones
Clculo
Blanco y materiales de referencia,
o blancos fortificados a varias
concentraciones.

Se necesita al menos 6 puntos
distintos.
3 por cada punto.
Graficar los resultados de la medida
versus la concentracin
preparada .

Examinar de forma visual el rango de
trabajo.
Materiales de referencia o
blancos fortificados en al menos
10 puntos distintos.
3 por cada punto.
Graficar los resultados de la medida
versus la concentracin
preparada .

Examinar de forma visual los puntos
atpicos que no deberan estar
presentes en la regresin.

Se debe calcular el coeficiente de
regresin apropiado. Se calculan y
grafican los valores residuales
33

(diferencia entre el valor actual y el
valor predicho por la ecuacin de la
recta para cada valor de ).

Distribucin aleatoria alrededor de la
lnea, confirma linealidad. Tendencias
sistemticas indica no linealidad.

5.3.2. Rango

Se define como el intervalo entre la concentracin inferior y superior para
las cuales se ha demostrado la correcta precisin, exactitud y linealidad
del mtodo.

5.3.3. Robustez

Una medida de que tan efectivo es un mtodo analtico es saber la
fiabilidad de los resultados obtenidos cuando no es ejecutado de forma
ideal. En cualquier mtodo siempre habr etapas que no son efectuadas
de manera cuidadosa, estas variaciones podran traer efectos negativos
en su rendimiento y es posible que el mtodo no cumpla su objetivo. Estas
etapas deben ser identificadas y si es posible, tambin se debe evaluar la
influencia sobre el rendimiento del mtodo, valorndose a travs de
pruebas de robustez, tambin llamado algunas veces rigidez.

En el mtodo, se realizan variaciones de forma deliberada para investigar
los efectos subsecuentes en el rendimiento. Con estos resultados es posible
identificar que variables afectan de manera significativa y por lo tanto,
asegurar que cuando se haga uso de l, estas sean controladas de forma
eficiente.

La AOAC International define la robustez como la habilidad de un
procedimiento analtico para tolerar pequeas variaciones de las
condiciones del procedimiento, especialmente en variables como:
volumen, temperatura, concentracin, pH, tiempo de extraccin y
configuracin del instrumento analtico. [6] Generalmente la robustez es
usada para estudiar el efecto de ciertas variables sobre la precisin y/o
exactitud.

34

5.3.3.1. Procedimiento para el clculo de robustez

Para el clculo de robustez se debe seguir los siguientes pasos:

Identificar los factores de variacin.
Establecer los niveles de influencia.
Seleccionar el diseo experimental.
Definir el protocolo de experimentos.
Ejecutar los experimentos y determinaciones.
Calcular los efectos.
Realizar anlisis de varianza o prueba t para cuantificar la
significancia del factor sobre la respuesta del mtodo.

En la figura 3 se expone el algoritmo a seguir para la evaluacin de la
robustez de un mtodo.

Figura 3. Algoritmo para evaluar la robustez de un mtodo analtico.

35

5.3.3.2. Diseo y ejecucin de experimentos

El diseo de experimentos establece la metodologa estadstica sistemtica
para investigar la relacin entrada-respuesta en alguno de los siguientes
objetivos:

Identificar variables o factores de diseo importantes.
Optimizar produccin o mtodos de anlisis.
Realizar prueba de robustez.
El ltimo objetivo es el de mayor importancia para este estudio en
especfico. En la investigacin se tienen gran cantidad de tipos de diseo
de experimentos, existen de tipo rudimentario como los anlisis factoriales
completos o aquellos que hacen uso de recursos computacionales para
anlisis de gran cantidad de datos.

Diseo factorial completo: se recomienda este tipo de anlisis
factoriales para una cantidad baja de factores relevantes, entre 2, 3
4 factores que requieren 4, 8 y 16 ensayos respectivamente. Este
tipo de diseo tiene en cuenta las interacciones entre los factores y
su cuantificacin, pero tiene la gran desventaja que a mayor
cantidad de factores el nmero de ensayos se eleva de manera
exponencial.

Diseo factorial fraccional: un diseo factorial fraccional es un
experimento donde slo se escoge una fraccin adecuada de todo
el conjunto de combinaciones requeridas para un diseo factorial
completo.

Existen otros tipos de diseo que son optimizaciones de los anteriores, los
ms conocidos y recomendados para validacin de mtodos analticos
son los propuestos por Plackett-Burman y Youden-Staider [7].

Diseo univariable: en los anlisis univariable, cada factor es
evaluado individualmente y luego por anlisis de varianza u otras
pruebas estadsticas se determina su significancia. Este anlisis
tambin es recomendado por la AOAC y IUPAC [8], adems son
altamente efectivos cuando las interacciones entre factores son casi
36

nulas. En este caso se realizan n+1 ensayos, donde el experimento
adicional es el mtodo efectuado al 100 %.

Para llevar a cabo el diseo de experimentos, se deben usar alcuotas o
estndares de una misma solucin y con una concentracin conocida. Se
recomienda realizar los experimentos de manera aleatoria o por bloques
aleatorios, que consiste en analizar porciones del total de muestra
peridicamente, con esto adems se verifica el efecto del tiempo; sin
embargo, cuando son muchas las variables la logstica experimental
puede resultar imposible, an ms cuando el equipo con el cual se valida
tiene un tiempo de uso limitado. El tiempo es un factor determinante
cuando ciertos accesorios del instrumento sufren cambios significativos, por
ejemplo las columnas en un cromatgrafo.

En la tabla 5 se muestra un procedimiento general de evaluacin de la
robustez.
Tabla 5. Clculo de robustez.
Anlisis Repeticiones Clculo Comentarios
Identificar las variables que
pueden afectar
significativamente y realizar
diseo de experimentos.

Usar materiales de referencia
o muestras de composicin
conocida (estndares).
Mnimo 9 medidas
por cada
experimento.

Un mnimo de tres
factores.
Determinar el efecto
(E) sobre la media
para cada factor.

Realizar Anlisis de
varianza y/o t contra
un ensayo realizado al
100 % o contra el valor
verdadero.
Se recomienda el
uso de diseo
univariable.

5.3.4. Selectividad [9]

La selectividad es el grado en que un mtodo puede cuantificar o
cualificar al analito en presencia de interferentes. Estos interferentes
frecuentemente se encuentran en la matriz de inters. En otras palabras, la
selectividad es la capacidad de un mtodo analtico para medir y/o
identificar simultnea o separadamente los analitos de inters, de forma
inequvoca, en presencia de otras sustancias qumicas que puedan estar
presentes en la muestra.

Existe un trmino el cual es confundido con la selectividad, este trmino es
la especificidad la cual sugiere que ningn compuesto, excepto el analito,
contribuye al resultado.
37

Para realizar una prueba de selectividad, Klaus Danzer [10] propuso una
novedosa forma cuantitativa de medir la selectividad/especifidad para
mtodos multicomponentes y monocomponentes, mediante la realizacin
varios ensayos usando distintas concentraciones del compuesto de inters
y de las interferencias.

5.3.4.1. Determinacin de la selectividad [2]

En un mtodo que opere de forma selectiva, la respuesta del ensayo debe
ser slo funcin de la especie a la cual se le est realizando la
cuantificacin, esto se puede expresar en forma de una funcin de la
siguiente manera:

Donde
es la seal o respuesta obtenida en el momento de cuantificar

el compuesto A, y
es la concentracin del compuesto A en la muestra

analizada; pero en realidad, la respuesta o seal obtenida se debe a la
interferencia de varios componentes presentes en la muestra, de sta
forma la funcin queda definida como:

Asumiendo que las influencias son lineales, se obtiene la siguiente ecuacin
para determinaciones monocomponentes:

Para mtodos de determinacin multicomponentes, se puede expresar de
la siguiente forma:

Donde los coeficientes
representan la sensibilidad parcial de la

respuesta para el componente respecto al componente .

38

Debido a que el mtodo a validar segn este trabajo es para
determinaciones monocomponentes, la selectividad o especifidad se
puede obtener de la siguiente manera:

(

En ocasiones las sensibilidades parciales pueden ser negativas, es decir,
tienen un efecto negativo en la respuesta, por lo tanto en el clculo de la
especifidad se usan los valores absolutos de estas sensibilidades parciales.
Un valor de indica especifidad suficiente. De la misma forma
valores de muestran poca especifidad del mtodo.

Las sensibilidades parciales se calculan resolviendo el sistema de
ecuaciones lineales obtenido al aplicar la ecuacin , para cada
experimento realizado en base al diseo de experimentos que se desee
seguir.

5.3.5. Estabilidad

Se debe determinar el tiempo mximo, para el cual una muestra
preparada para anlisis conserva todas sus caractersticas, de tal manera
que los datos que se obtienen de ella sean confiables. El tiempo que
transcurre desde el momento en que se destapa la muestra y su anlisis es
de 3 horas aproximadamente, la estabilidad de las muestras se evala a
condiciones ambientales controladas. Las muestras se dejaban libres al
ambiente como ocurre en la operacin de la planta.

5.3.6. Exactitud [9]

Se define la exactitud como el grado de concordancia entre el resultado
de un ensayo y el valor de referencia. El trmino exactitud, esta
aplicado a un conjunto de resultados de un ensayo, y supone una
combinacin de componentes aleatorios y un componente comn de
error sistemtico o sesgo.

Cuando se aplica a un mtodo de ensayo, el trmino exactitud se refiere
a una combinacin de veracidad y precisin. En el siguiente esquema de
Tiro al Blanco, ampliamente utilizado para ejemplificar esto, los punto u
orificios equivaldran a los resultados analticos y el crculo rojo al centro,
39

indica el rango en el cual se espera est el valor de referencia (o
verdadero), en la figura 4 se muestra esquemticamente la exactitud.

Figura 4. Verificacin de exactitud.

Como se puede observar entre ms veraz y preciso sea un resultado
analtico, es ms exacto.

5.3.6.1. Veracidad

Determina el grado de coincidencia existente entre el valor medio
obtenido de una serie de resultados y un valor de referencia aceptado.
La veracidad puede ser determinada por sesgo o recuperacin.

Sesgo (s): Es la diferencia entre la expectativa relativa a los
resultados de un ensayo o una medicin y el valor verdadero. En la
prctica el valor convencional de cantidad puede sustituir el valor
verdadero. El sesgo es el error sistemtico total en contraposicin al
error aleatorio.

40

Porcentaje de recuperacin (%R): Es la fraccin de la sustancia
agregada a la muestra (muestra fortificada) antes del anlisis. Su
valor se obtiene al ser analizadas muestras fortificadas y sin fortificar.
La recuperacin permite ver el rendimiento de un mtodo analtico
en cuanto al proceso de extraccin y a la cantidad del analito
existente en la muestra original.
La recuperacin esta intrnsecamente relacionada a las
caractersticas de la matriz de la muestra. Se recomienda realizar a lo
menos 6 mediciones de cada uno, en lo posible en tres niveles.

(
)

Donde:
Es el valor promedio de los datos para esa concentracin.

Es el valor aceptado como verdadero.

Existen dos procedimientos en general para determinar la exactitud de un
mtodo. El primero y ms comn es realizar la comparacin contra un
material de referencia, que puede ser un estndar trazable, un placebo o
una muestra con una cantidad de analito conocida. El segundo mtodo
es comparar los resultados con otra tcnica an ms exacta o que por
consenso comn es referencia. Este caso se usa cuando no existen
materiales de referencia certificados o trazables. En la figura 5 se puede
observar la anterior clasificacin en forma de diagrama.
41

Figura 5. Procedimiento para el clculo de la exactitud.

El uso de materiales de referencia o estndares est dado segn los
siguientes criterios:

Material de referencia o patrones certificados: se usan para
validacin de mtodos a largo plazo. Su uso no es extensivo.
Estndares: utilizados en los clculos de exactitud a corto plazo,
verificaciones y estudios no crticos.

Por ltimo los clculos de regresin lineal se realizan de igual forma como
se trabajaron en el clculo de linealidad. En la tabla 6 se ilustra un
procedimiento general que permite evaluar la exactitud del mtodo. [3]

Tabla 6. Procedimiento general para clculo de exactitud.
Anlisis Repeticiones Clculo Comentarios
Analizar la
muestra/referencia
por el mtodo a
validar.
Un mnimo de 3
veces por nivel, y 9
determinaciones en
total como mnimo.
Promedio y desviacin
estndar por nivel de
concentracin.
Si hay suficientes datos
realizar una prueba de
hiptesis para la media.
Comparacin por
recuperacin y
diferencia.
El criterio de aceptacin
depende mucho del tipo
de anlisis y uso que se le
d, en general se acepta
una recuperacin de 100
3 %, cuando se realizan
con materiales de
referencia y 100 5 %
con estndares.
42

Analizar la
muestra/referencia
por el mtodo a
validar y un mtodo
independiente
preferiblemente
validado o primario.
Un mnimo de 10
veces por nivel.
Promedio y desviacin
estndar por nivel de
concentracin.
Comparacin por
recuperacin y
diferencia. Y anlisis de
regresin si hay
suficientes datos
Dar una medida
relativa de la
parcialidad del
mtodo.
Mtodos independientes
tienen parcialidades por
su propia cuenta, por lo
tanto esta exactitud es
relativa y no absoluta.
Los mtodos primarios
idealmente no tienen
parcialidad, por lo que
son mejores para realizar
las medidas de exactitud.
Se tiene un criterio de
aceptacin de 100 5 %.

5.3.7. Precisin

La precisin de un procedimiento analtico expresa el nivel de
concordancia o grado de dispersin entre una serie de mediciones
obtenidas de mltiples muestras homogneas bajo condiciones prescritas.
Se evala mediante anlisis de rplicas, anlisis repetidos de un estndar
estable o anlisis de adiciones conocidas sobre las muestras. [11]

El objetivo de la precisin es dar a conocer la variabilidad el ms
menos del mtodo de ensayo. Dicha variabilidad se debe a errores
aleatorios inherentes del mtodo de ensayo. Como resultado de estos
errores, los datos obtenidos no sern idnticos a pesar de que los anlisis
sean efectuados sobre la misma muestra. Los factores que pueden influir
en los resultados de un ensayo son: el analista, el equipo de medicin, los
reactivos, etc. De ah la importancia del estudio de la precisin.

La precisin puede organizarse como se muestra en la figura 6:
43

Figura 6. Precisin.

De la figura se puede apreciar los diferentes estudios de precisin como lo
son:
Repetibilidad.
Precisin intermedia.
Reproducibilidad.

5.3.7.1. Repetibilidad

Es la precisin bajo las condiciones de repetibilidad, es decir, condiciones
donde los resultados de anlisis independientes se obtienen con el mismo
mtodo, en tems de anlisis idnticos en el mismo laboratorio por el mismo
operador utilizando el mismo equipamiento dentro de intervalos cortos de
tiempo.
Se puede determinar registrando a lo menos 6 mediciones bajo las mismas
condiciones (mismo operador, mismo aparato, mismo laboratorio y en
corto intervalo de tiempo) de un analito en un material de referencia.
Calcular la desviacin estndar y el porcentaje de coeficiente de
variacin .

44

El coeficiente de variacin se puede calcular como:

(
)

Se calcula tambin el intervalo de confianza como:

(
)

Donde:
Es el estadstico de Student con grados de libertad y .

En la repetibilidad se pueden analizar los siguientes factores:

Repetibilidad del instrumento.
Repetibilidad del mtodo.

5.3.7.1.1. Repetibilidad del instrumento

Se calcula a partir de mediciones repetidas realizadas a una muestra
homognea que ha pasado por todo el proceso del mtodo, es decir,
realizar mediciones a la misma muestra como tal y no rplicas de ella. El
nmero de mediciones en este ensayo est condicionado por la cantidad
de muestra que destruye el equipo en su determinacin. Se recomienda
de 6 a 10 veces.

45

5.3.7.1.2. Repetibilidad del mtodo

A diferencia del ensayo anterior, en este caso se parte de alcuotas de una
misma muestra homognea y se les realiza todo el procedimiento indicado
de forma individual; se analizan de forma independiente como si fueran
rplicas de una misma muestra y con un mismo analista. Tal como lo
propone la ICH se recomiendan mnimo 9 mediciones para un total de 3
niveles de concentracin (3 mediciones por nivel).

La repetibilidad del mtodo debe ser mayor a la repetibilidad del
instrumento, su relacin terica est dada por la ecuacin propuesta por
Carporal-Gautier [2]:

5.3.7.2. Precisin intermedia

Expresa la variacin dentro de un mismo laboratorio:

Diferentes das de anlisis.
Distintos analistas.
Distintos equipos, etc.

Se recomienda un diseo matricial y aleatorio, para muestras preparadas
de forma independiente, mnimo por triplicado para cada factor y un
mnimo de 9 determinaciones en total. La precisin intermedia se calcula
entonces como el coeficiente de variacin global de todas las respuestas
obtenidas o la respectiva desviacin estndar.

El criterio de aceptacin de la precisin intermedia est dado por:

Antes de analizar los datos para calcular la precisin intermedia, se verifica
que los analistas tengan varianzas similares, esto se logra realizando una
prueba F o ANOVA, de la misma forma como se hizo en la prueba de
robustez.
46

Las hiptesis a confirmar:
Las varianzas de los analistas son iguales,
Las varianzas son distintas,

Teniendo las varianzas de dos conjuntos de datos se calcula:

La hiptesis nula se acepta si:
)

(
)

Donde
(
)

(
)
se leen de la tabla estadstica de la distribucin F con
grados de libertad y un nivel de significancia de 5%.

5.3.7.3. Reproducibilidad

Es la precisin de los valores obtenidos en los ensayos bajo las condiciones
de reproducibilidad, es decir, condiciones donde los resultados de los
anlisis se obtienen con el mismo mtodo de anlisis, en condiciones
diferentes ya sea de laboratorio, diferentes operadores, usando distintos
equipos, entre otros.

Para determinar la precisin de la reproducibilidad intralaboratorio (es
decir, la precisin dentro de un laboratorio), se sugiere realizar 3
mediciones de un material de referencia o material control una vez por
cada semana o el comportamiento de la curva de calibracin en 3 das
distintos.

Tambin, se puede determinar registrando por lo menos 10 mediciones en
das distintos, o en un mismo da cambiando a lo menos una condicin
analtica (ejemplo: operador, aparato, reactivos y largo intervalo de
tiempo) de un analito en un Material de Referencia. Con los datos, se
calcula la desviacin estndar y el porcentaje de coeficiente de
variacin .

47

Cuando se desea determinar la reproducibilidad interlaboratorios para
fines de validacin de un mtodo, deben participar diferentes laboratorios,
se debe tener en consideracin que estos utilicen el mismo mtodo y
misma muestra, en un intervalo de tiempo preferentemente establecido, se
determina de este modo la desviacin estndar de los resultados
obtenidos por los diferentes laboratorios. [9]

En la tabla 7 se mencionan algunos factores que pueden incidir en los
estudios de repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad. [2]

Tabla 7. Factores influyentes en la precisin.
Factor Repetibilidad
Precisin
intermedia
Reproducibilidad
Laboratorio Igual Diferente Diferente
Analista Igual Diferente Diferente
Equipo Igual Diferente Diferente
Tiempos de anlisis Igual Diferente Diferente
Otros factores (reactivos, condiciones
ambientales, etc.)
Igual Igual Diferente

5.4. EQUIPO Y PRINCIPIO DE MEDICIN

5.4.1. Especificaciones del equipo

El densmetro Soft Drink Analyzer M (SDA-M) de la casa fabricante Anton
Paar y mostrado en la Figura 7, posee las especificaciones [12] indicadas
en la tabla 8.

Figura 7. Equipo Soft Drink Analyzer M.
48

Tabla 8. Datos tcnicos del equipo.
Rango de medicin.
Densidad. 0 a 3 g/cm
3
Temperatura. 20 C (68F)
Bx actual/fresco/invertido. 0 a 80 Bx
Grado de inversin. 0 a 100%
Desviacin estndar de la repetibilidad.
Densidad. 0,000001 g/cm
3

Bx actual. 0,01 Bx
Bx fresco/invertido. 0,02 Bx
Grado de inversin. 1%
Sensor temperatura 0,001C
Rango de presin.
Llenado con jeringa.
Llenado con bomba peristltica.
Trampa de burbuja.
0 a 3 bar

0 a 1 bar
Ms informacin.
Tiempo por medicin de muestra. 5 minutos por medicin
Requerimiento de muestra para
medicin.
20 ml de bebida desgasificada.
40 ml para jarabe.
Sensor de presin de aire. Si
Automuestreador. Xsample 122
Deteccin de burbuja automtico. Si
Visualizacin de la celda de medicin de
densidad.
Si, por medio de cmara
Interfaces. 2 x S-BUS, RS-232, 4 x USB, CAN, VGA, Ethernet
Display.
Display TFT de 6,5 pulgadas, con iluminacin clara y
pantalla tctil (640 x 480 px), con diseo ajustable del
display
Piezas en contacto con las muestras.
PTFE, vidrio borosilicato, acero inoxidable DIN
1,4539/UNS N08904 & DIN 1. 1,4571/SS 316Ti, silicona,
tygon
Dimensiones (inclusive el Xsample 122). 482 x 710 x 360 mm
Peso (inclusive el Xsample 122). 28,5 kg

5.4.1.1. Mtodos predeterminados

El equipo Soft Drink Analyzer M trae consigo 10 mtodos predefinidos que
cubren las aplicaciones ms comunes, las cuales se pueden modificar
para adaptarse a las necesidades del laboratorio o tambin pueden
crearse nuevos mtodos (se pueden crear hasta 50 mtodos). Cabe
anotar que todas las mediciones se ajustan a una temperatura controlada
de 20C.

49

Los mtodos predeterminados se muestran en la tabla 9:

Tabla 9. Mtodos predeterminados por el equipo.

Soft Drink fresh

Determina: Concentracin de azcar,
concentracin de azcar fresco, grado de inversin,
densidad, temperatura de lectura, condicin
principal, visor del tubo en U.
Mtodo de uso general.

Density & Sound

Determina: Densidad, velocidad del sonido,
temperatura de lectura, condicin principal, visor
del tubo en U.


Density (not visc.-corr.) & Sound

Determina: Densidad (no visc. Corr), Velocidad del
sonido, temperatura de lectura, condicin principal,
visor del tubo en U.

Mtodo de uso general, para la comparacin con
instrumentos antiguos sin correccin por viscosidad.

Soft Drink Invert

concentracin de azcar invertido, grado de
inversin, densidad, temperatura de lectura,
condicin principal, visor del tubo en U.

Para medicin de la glucosa y la concentracin de
fructosa de los refrescos en inversin completa.
50

Sound

Determina: Velocidad del sonido, nmero de sonido
(s), temperatura de lectura, condicin principal, visor
del tubo en U.


Density Only

Determina: Densidad, gravedad especfica,
Temperatura de lectura, condicin principal, visor
del tubo en U.


HFCS-42

Determina: Densidad, HFCS-42 (azcar
completamente invertida, que contiene 42% de
fructosa), temperatura de lectura, condicin


HFCS-55

Determina: Densidad, HFCS-55 (azcar
completamente invertida, que contiene 55% de
fructosa), temperatura de lectura, condicin

51

Syrup Invert

concentracin de azcar invertido, grado de
inversin, densidad, temperatura de lectura,
condicin principal, visor del tubo en U.

Medicin de glucosa y fructosa en jarabes con
completa inversin.

Syrup Fresh

Concentracin de azcar fresco, grado de inversin,
densidad, temperatura de lectura, condicin
principal, visor de tubo en U.

Para la medicin de la sacarosa original en jarabes.

Para cada mtodo, se puede establecer cmo se finalizar la medicin.

Finalizar la medicin por predeterminacin o temperatura de
equilibrio (Temperatura de medicin en la celda = Ajuste de
temperatura): Si se selecciona predeterminacin, el instrumento
termina la medicin antes de que la temperatura de equilibrio se
alcance y se calcula la densidad a la temperatura establecida, esto
ahorra tiempo en la medicin pero disminuye la precisin del
resultado.
Si se selecciona equilibrio, la medicin finaliza cuando la
temperatura de equilibrio se establezca. Se puede elegir entre:
equilibrio rpido, equilibrio medio y equilibrio lento. Cuanto ms lento
el equilibrio ms preciso son los resultados.

Finalizar la medicin por tiempo de espera: Si la medicin no se
termina despus de un tiempo de espera especificado, la medicin
es abortada. Dicho conteo empieza cuando la temperatura de
equilibrio ha sido alcanzada.
52

Es importante resaltar que antes de realizar las mediciones de bebidas
gaseosas en el equipo, se debe desgasificar dichas muestras, ya que la
presencia de CO2 induce al error en la medicin del Brix.

5.4.2. Principio de medicin [12]

El Soft Drink Analyzer M (SDA-M), determina simultneamente dos
propiedades fsicas independientes de una sola muestra. El instrumento
est equipado con una celda de densidad (tubo oscilante en forma de U)
y otra de velocidad del sonido, que al combinarlos se obtienen mediciones
con alta precisin. Posee adems un control de temperatura para las
celdas de medicin conformado por un termostato incorporado (un
Peltier).

5.4.2.1. Definicin de densidad y gravedad especfica.

La densidad de una muestra est definida como la masa dividida por el
volumen:

La gravedad especfica se calcula dividiendo la densidad de la
muestra sobre la densidad del agua pura a 20C:

5.4.2.2. Mtodo oscilatorio del tubo en U

La muestra se introduce en un tubo de vidrio de borosilicato en forma de U
el cual es excitado para que vibre a su frecuencia caracterstica por
medios electrnicos. La frecuencia caracterstica cambia dependiendo
de la densidad de la muestra.

A travs de una determinacin precisa de la frecuencia caracterstica, un
apropiado ajuste, la densidad de una muestra es determinada por:

53

Donde:

Constante del equipo.
Cociente del periodo de oscilacin del tubo en U dividido por el
periodo de oscilacin del oscilador de referencia.
Trminos de correccin por temperatura, viscosidad y no linealidad.

El esquema general de la medicin de un densmetro se muestra en la
figura 8.

Figura 8. Esquema del proceso de medicin en un densmetro.

5.4.2.3. Anlisis de velocidad del sonido

La muestra es introducida en la celda de medicin de velocidad del
sonido que est bordeada por un transmisor ultrasnico en un lado y un
receptor por el otro. El transmisor enva ondas de sonido de periodo
conocido a travs de la muestra. Por determinacin del periodo de las
ondas sonoras recibidas y bajo consideracin de la distancia entre el
transmisor y el receptor se puede calcular la velocidad del sonido
como:

54

Donde:

Longitud original de la onda sonora (de fbrica
).
Desviacin de temperatura a 20C.
Periodo de oscilacin de las ondas sonoras recibidas.

512.
Constante del equipo para velocidad del sonido.
Correccin por temperatura.

Debido a la alta dependencia de la densidad y la velocidad del sonido
con la temperatura, las celdas de medicin deben estar termostatizadas.

5.4.2.4. El nmero de densidad (d)

Es igual a la desviacin relativa de la densidad de una muestra de agua:

El nmero de densidad (d) de una muestra de agua ultrapura
desgacificada debe ser igual a 0 0,00010.

5.4.2.5. El nmero de sonido (s)

Es igual a la desviacin relativa de la velocidad del sonido de una muestra
de agua:

55

El nmero de sonido (s) de una muestra de agua ultrapura desgasificada
debe ser igual a 0 0,00010.
Las mediciones se realizan a 20C usando un termostato incorporado, la
concentracin actual de azcar se calcula basndose en la correccin de
viscosidad y la densidad usando la tabla NBS 113 (Anexo 1).

5.4.3. Calibracin

La calibracin del equipo la cual sirve para determinar las constantes
, debe ser efectuada con aire deshumidificado y agua ultrapura. Se
realiza adems una verificacin con estndar de 12.00 Bx directo.

El proceso de calibracin se realiza segn lo descrito en el manual
simplificado adjunto a este trabajo (Anexo 2).

5.4.3.1. Clculo de la densidad del aire

A una temperatura en [C] y una presin en [mbar] o [hPa] la
densidad del aire en [g/cm
3
] es calculada usando la frmula para una
humedad del aire de 50%:

[

]

Los nmeros son vlidos para un contenido de CO2 en el aire de 0.03% en
volumen, los nmeros cambian por (
) para cada cambio en el

contenido de CO2 de volumen 0,0001.

La composicin del aire seco se presenta en la tabla 10.

56

Tabla 10. Composicin del aire seco en (v/v).
N2 O2 Ar CO2 Ne
% en Volumen 78,110 20,938 0,916 0,033 0,002

El Laboratorio Central cuenta con condiciones ambientales promedio que
se muestran en la tabla 11:

Tabla 11. Condiciones promedio del Laboratorio Central y clculo de la densidad de aire.
Variables Valor
Presin en [mbar] 850,00
Temperatura en[C] 20,00
Densidad en [g/cm
3
] 0,001005

5.4.3.2. Densidad del agua

La densidad del agua tiene gran dependencia con la temperatura a la
que es leda. Como el equipo est equipado con un Peltier, ste logra
controlar la temperatura a un valor de 20,00 0,01C, puesto que a estas
condiciones la densidad del agua tiene un valor de:

Los valores de densidad del agua y densidad del aire tienen una tolerancia
de 0.00005 g/cm
3
.

5.4.4. Conversin a grados Brix (Bx)

Los densmetros, tanto el DMA-58 como el SDA-M reportan valores de
densidad, los cuales se relacionan con los grados Brix (Bx) a partir de
tablas de sacarosa estndar como las reportadas por la National Bureau of
Standards (NBS) o por la ICUMSA; adems se pueden obtener por medio
de ecuaciones desarrolladas a partir de dichas tablas o por normativas
internas disponibles en POSTOBN S.A. [13] para este caso, el equipo trae
consigo un software que puede llevar a cabo dicha conversin,
basndose en la tabla NBS.

El valor de Brix actual, est basado en la medicin de la densidad que el
equipo reporta en el momento del anlisis, los valores de Brix fresco, Brix
57

invertido y el grado de inversin se basan en la densidad medida y la
velocidad del sonido. La forma en que se relacionan la densidad y la
velocidad del sonido son el know how de la casa fabricante Anton Paar,
infortunadamente para el alcance de este proyecto no se cuenta esta
informacin. Sin embargo, en la figura 9 se puede observar como las dos
celdas de medicin se combinan para obtener los respectivos valores de
densidad y as relacionarlos con los valores de Brix para cada caso: fresco,
actual o invertido.

Figura 9. Relacin entre la densidad y la velocidad del sonido.

Esta relacin es anloga a la regla de la palanca, en la cual hay una
correlacin lineal de la forma:

Donde:
Es el valor de la densidad.
El valor de la velocidad del sonido de la muestra.
Valor de la pendiente que relaciona la densidad y la velocidad del
sonido.

Para obtener los datos de Brix fresco e invertido, se parte de la densidad
medida que se encuentra entre las dos lneas que dictamina el rango de
58

inversin entre 0% y 100%. Existe una compensacin por no inversin e
inversin total, la cual se traduce en el valor de la pendiente () que
permite asociar la velocidad del sonido y la densidad. Como se mencion
anteriormente, no se contaba con las expresiones matemticas para hallar
dicha relacin de forma exacta, sin embargo se pudieron establecer
ecuaciones aproximadas para obtener valores muy cercanos a los
reportados por el equipo, estas ecuaciones son:

5.5. EL AZCAR

5.5.1. Definicin

El azcar es un endulzante natural, conocido normalmente en forma de
cristales solidificados de sacarosa, y puede ser producido utilizando dos
diferentes materias primas: la caa de azcar (Saccharum officinarum) o la
remolacha azucarera (Beta vulgaris) [14].

Se cree que la caa de azcar contiene entre el 11% y 17% de sacarosa,
mientras que el azcar de remolacha entre 14% y 17%, no obstante en
Colombia todo el azcar que se produce es de caa de azcar [15].

5.5.2. Composicin

La sacarosa es el tipo de azcar ms importante en la industria,
qumicamente es un tipo de carbohidrato, y como tal, est formado por
tomos de carbono (C), hidrgeno (H) y oxgeno (O). La sacarosa se
clasifica como un carbohidrato doble o disacrido, porque est
compuesta por la unin de dos molculas de monosacridos o glcidos.
59

Los monosacridos que forman la sacarosa (ver figura 10) son glucosa
(dextrosa) y fructosa (levulosa).

Figura 10. Estructura qumica de la sacarosa.

La glucosa es un monosacrido dextrorrotatorio (gira a la derecha la luz
polarizada), mientras que la fructosa es un monosacrido levorrotatorio
(gira a la izquierda la luz polarizada). La sacarosa por su parte, es un
compuesto dextrorrotatorio, ya que gira a la derecha +66,5 el plano de la
luz polarizada. Si se calienta en un medio cido o por la accin de una
enzima llamada invertasa, la sacarosa (C12H22O11) se descompone para
formar glucosa (C6H12O6) y fructosa (C6H12O6), la mezcla generada tiene
mayor dulzura, (alrededor de 1,74% ms que la sacarosa) y gira a la
izquierda -20,0 el plano de la luz polarizada (levgira o levorrotatoria); es
por ello que se llama azcar invertido [16].

5.5.3. Propiedades qumicas y fsicas.

La sacarosa es estable al aire pero en polvo se torna higroscpica, y
puede absorber hasta el 1% de humedad. Se fermenta a concentraciones
altas (aproximadamente un 17% en peso), pero es capaz de resistir la
descomposicin bacteriana.

Se utiliza como preservante, excipiente, agente granulador, tensoactivo
para jabones, antioxidante, algunos productos de belleza, entre otras.

Algunas de las propiedades fsicas y qumicas son mencionadas en la tabla
12.
60

Tabla 12. Propiedades fsicas y qumicas de la sacarosa.
Masa molar 342,3 g
Forma Polvo cristalino
Color Blanco
Olor Inodoro
Cambio de estado
Punto de fusin/campo de fusin:

Punto de ebullicin/campo de ebullicin:

185 187 C

Indeterminado
Punto de inflamacin No aplica
Inflamabilidad (slido, gaseiforme) La sustancia no es inflamable
Peligro de explosin La sustancia no es explosiva
Densidad a 20C 1,587 g/cm
3

Densidad a granel a 20C 0,94 kg/m
3

Solubilidad en/miscibilidad con agua a 20C 600 g/l
Descomposicin trmica/condiciones que deben
evitarse
No se descompone al emplearse
adecuadamente
Reacciones peligrosas No se conocen reacciones peligrosas
Productos de descomposicin peligrosos Monxido de carbono, dixido de carbono

5.5.4. Proceso de inversin del azcar

5.5.4.1. Definicin

El propsito de la inversin es dividir la molcula de sacarosa y formar una
molcula de glucosa y otra de fructosa, esto se logra mediante una
hidrlisis, en este proceso qumico una molcula de agua rompe el enlace
de la sacarosa y se une a las molculas derivadas. Para una solucin de
sacarosa, la hidrlisis requiere un medio cido y calentamiento, entre ms
bajo sea el pH se acelerar ms la reaccin. La reaccin que se presenta
bajo las condiciones antes mencionadas es [17]:

Durante este proceso, la molcula de agua se divide en sus componentes
hidrgeno (H
+
) e hidrxido (OH
-
), los cuales rompen el enlace de oxgeno
que une a los dos monosacridos, de tal forma que: el hidrgeno se
combina con el oxgeno para formar glucosa, mientras que el hidrxido se
combina con el tomo de carbono libre para formar la fructosa (ver figura
11).

61

Figura 11. Reaccin de inversin de azcar por hidrlisis cida.

Si se expresa la reaccin de inversin en trminos de pesos moleculares, es
decir; 342,30 g de sacarosa reaccionan con 18,00 g de agua para formar
180,60 g de glucosa y 180,60 g de fructosa, esto significa que si se parte de
una cantidad conocida de 342,30 g de sacarosa en solucin, al invertir se
obtiene un peso extra de 18,00 g de sacarosa pero esta vez en forma de
los dos monosacridos: glucosa y fructosa.

Si la reaccin anterior toma lugar en una cantidad X g de solucin total
(sacarosa + agua), esto significa que despus de la reaccin habrn 18 g
ms de slidos disueltos en la misma cantidad X g de solucin. El
incremento de slidos puede ser expresado como un factor de

en otras palabras, se puede esperar que el Brix
despus de la inversin aumente en 5,26 % los slidos disueltos, respecto a
su lectura en Brix directo, segn la siguiente expresin:

(

)
62

5.5.4.2. El fenmeno de inversin

Las soluciones de azcar tienen la propiedad de rotar el plano de la luz
polarizada en sentido horario (derecha) anti-horario (izquierda), la
glucosa por ejemplo rota la luz en sentido horario y se define como
dextrgiro, si el giro es hacia la izquierda, como pasa con la fructosa, se
denomina levgira. La reaccin de inversin se expone a continuacin
con los respectivos ngulos de rotacin de los azcares involucrados para
aclarar este fenmeno:

El ngulo de rotacin o rotacin especfica es el ngulo formado por el
plano de la luz polarizada sobre la horizontal y es caracterstico de cada
azcar, si el ngulo es levgiro se denota por un signo menos (-).

La reaccin muestra pues que la sacarosa y la glucosa son azcares
dextrgiras, mientras la fructosa es levgira, despus de la inversin la
glucosa y fructosa quedan en relacin 50/50 %, la mezcla entonces tiene
un ngulo de rotacin que debera ser la suma de los efectos de cada
monosacrido. Como la rotacin levgira de la fructosa es mayor que la
aportada por la glucosa, la solucin final tendr una rotacin levgira.

En conclusin el trmino "invertido" se deriva del cambio de la direccin de
la rotacin de la luz polarizada que ocurre despus de invertir el azcar.
Por lo tanto el azcar invertido no es ms que una mezcla glucosa/fructosa
producto de la inversin de la sacarosa [3].

5.6. BRIX

5.6.1. El concepto de Brix

El Brix es uno de los parmetros fundamentales en la industria de refrescos.
Generalmente el Brix indica la cantidad de slidos disueltos en una
solucin. En la industria de refrescos se utiliza especficamente para
cuantificar el azcar en una bebida, jarabe o jugo.
63

La escala de medicin de Brix fue creada por un qumico alemn del siglo
XIX, el profesor A.F.W. Brix, en cuyo honor lleva el nombre el sistema. l
encontr que al sumergir un hidrmetro en un jugo de fruta, se poda
conocer, a partir de su densidad, el porcentaje muy aproximado de
azcar presente en el jugo.

De forma terica, el Brix se define como el porcentaje de azcar disuelto
en una solucin de agua en base peso a peso y se expresa en grado Brix
(Bx), as por ejemplo; una solucin de 12,00 Bx significa que hay 12,00 g
de azcar disuelto en 100 g de solucin. Se debe tener en cuenta que en
un refresco o cualquier otra bebida azucarada hay adems del azcar,
otros slidos disueltos, los cuales al estar en menor cantidad comparadas
con el azcar, y se consideran como azcar ya que su aporte a la
medicin de Bx es muy bajo.

El error que se puede introducir individualmente por una variedad de
ingredientes disueltos en diversas formulaciones es tan pequeo que se
acepta sobre una base universal y se ignora en la mayora de casos. As
entonces, en la industria de bebidas, todos los productos: bebidas, jarabes,
jugos, etc., se consideran como soluciones puras de azcar. [18]

Existen dos conceptos relacionados con el Brix, estos son: Brix fresco, Brix
invertido. El Brix fresco es el valor de un producto (jarabe o bebida) en el
momento de su preparacin; es el valor de Brix obtenido en el ensayo
inmediatamente despus de la preparacin general, de acuerdo con el
valor terico calculado a partir del contenido total de slidos disueltos en
el producto. El Brix fresco, por lo tanto implica que no haya inversin en el
producto.

El Brix invertido, por su parte, es el valor de Brix de un producto en el que se
invirti todo el contenido de sacarosa en glucosa y fructosa. Si el proceso
de inversin se ha iniciado en una solucin de azcar pero no se ha
llevado completamente, entonces se puede hablar de un producto
parcialmente invertido.

Las bebidas gaseosas producidas en las diferentes plantas de produccin
de Postobn S.A. poseen un rango de Brix tpico entre 7 y 13 Bx, pero se
debe tener en cuenta que para su preparacin es necesario el uso de
64

soluciones concentradas denominadas jarabes. En la preparacin de una
bebida gaseosa se hace una distincin entre lo que es el jarabe simple y el
jarabe terminado. El jarabe simple es la solucin que slo posee agua y
azcar las cual reporta un Brix de aproximadamente 61Bx, el jarabe
terminado se obtiene mediante una disolucin del jarabe simple y la
inclusin del resto de componentes propios de cada producto con
excepcin del gas carbnico (CO2), este jarabe posee un Brix que puede
estar entre los 35 y 60Bx.

5.6.2. Importancia de la medicin del Brix en la industria alimenticia

En las bebidas no alcohlicas, que para el caso de Postobn S.A. son los
refrescos, adems del agua componente que se encuentra en mayor
proporcin, el azcar es parte fundamental del proceso y puede aportar
aproximadamente el 13% del contenido de la bebida, dando a sta su
nivel caracterstico de dulzura.

Interactuando con los otros componentes, el dulzor determina el perfil
caracterstico aceptado por el consumidor, cualquier desviacin
importante del contenido de azcar, podra tener como consecuencia la
prdida de aceptacin por parte del consumidor y por lo tanto, colocara
en serios apuros a la compaa.

Como se ha mencionado anteriormente el Brix es una medida del
contenido de azcar en una bebida y es un estndar fundamental del
proceso y de control del producto; por lo que necesita ser monitoreado
continuamente en la lnea de produccin con gran precisin para obtener
una desviacin de concentracin mnima en el producto. Adems, los
procesos de produccin de cualquier gaseosa implica grandes cantidades
de jarabe y llenadoras del alta velocidad que empaquetan cientos de
botellas de vidrio, botellas plsticas (PET, PBR) y latas por minuto segn sea
el caso; una desviacin en la concentracin de azcares, afectar la
calidad del producto, disminuyendo el rendimiento de produccin y a su
vez, afectando negativamente los costos totales de produccin.

65

6. DESARROLLO DEL PROYECTO

6.1. VALIDACIN DEL EQUIPO SOFT DRINK ANALYZER M PARA LA
MEDICIN DE LA DENSIDAD Y BRIX INVERTIDO DE UNA MUESTRA GASEOSA.

Como se mencion anteriormente el objetivo de esta validacin es
demostrar la aptitud o competencia del SDA-M para la determinacin del
Bx inv en bebidas gaseosas sin llevar a cabo la inversin de la muestra.

6.1.1. Equipos usados en la validacin

Para la validacin se utilizaron algunos equipos y recursos del laboratorio
que facilitaron dicho procedimiento, estos son:

6.1.1.1. Estacin de desgasificacin

Este equipo se usa para la desgasificacin previa de bebidas gaseosas,
posee 10 puestos de desgasificacin por medio de burbujeo con aire y
durante un tiempo determinado a flujo y presin constante. El
desgasificador est conformado por:

Filtro de aire en lnea.
Trampa de aceite.
Trampa de NaOH con fenolftalena para absorcin de CO2.
Trampa de humedad.
Fuente de aire.
Vlvula.
Manmetro y medidor de flujo.
Tubo de insercin o difusor.

Condiciones de operacin:

Todos los puestos de desgasificacin deben ser usados. Para desgasificar
menos de 10 muestras, completar los puestos con recipientes llenos de
agua.

Presin: 7,5 psi.
Flujo de aire: 5,5 LPM O2.
Volumen de muestra: 250 ml.
66

6.1.1.2. Bao mara

Bao mara Memmert AUM-500PD con control de temperatura en un rango
de 25 a 100 C. Para inversin de las muestras.

6.1.1.3. Balanza

Marca: Mettler-Toledo.
Modelo: PM4800.
Clase de exactitud: clase 2.
Precisin: 0,2 g.
Rango: 0 4000 g.

6.1.1.4. Reactivos

Sacarosa grado reactivo.
HCl 2,5 N.
Agua destilada.
Aire a presin constante.

6.1.1.5. Otros recursos

Tubos de ensayo de 30 ml con tapa rosca.
Gradillas metlicas para calentamiento.
Viales para el automuestreador del densmetro.
Beaker de 250 ml.
Vasos desechables de 500 ml para la estacin de desgasificacin de
bebidas.

Para la determinacin del grado Brix se lleva a cabo el siguiente
procedimiento:

Para Brix directo

La preparacin de las muestras para las lecturas de Brix directo (Bx
dto) deben garantizar su homogeneidad, es decir, ausencia de
burbujas de aire o CO2.

67

Para Brix invertido

La preparacin de las muestras de Brix invertido (Bx inv) deben
garantizar su homogeneidad.
Verter en un tubo de ensayo aproximadamente 30 ml de la muestra
y adicionar 2 gotas de HCl a 2,5 N.
Calentar durante 50 min a una temperatura de 94C en bao mara,
para inversin.
Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Una vez realizada la adecuacin de las muestras se procede a la
lectura de densidad y Bx inv en el densmetro, segn el siguiente
procedimiento:
Se debe realizar una verificacin con agua y un estndar de
sacarosa de 12,63 Bx inv para el equipo DMA-58 y 12,00BX dto
para el equipo SDA-M, aceptar una diferencia en el valor terico
reportado por el agua de 0,00005 g/cm
3
usando agua destilada,
si no es aceptable la diferencia, se debe calibrar el equipo.
Se sirven las muestras en los viales, los cuales deben ser purgados
previamente con la muestra y se procede a su lectura.

Para establecer el rango de trabajo en el cual se harn las mediciones, se
tiene en cuenta que las bebidas gaseosas son elaboradas para que las
lecturas de Brix directo abarquen un rango entre 6 y 14 Bx dto, para el
caso de Brix invertido este rango aumenta ligeramente del orden de 5,26%
el Bx dto.

6.1.2. Parmetros a validar y valores estimados para su aceptacin

Como se mencion anteriormente los parmetros a validar teniendo en
cuenta las sugerencias descritas en la tabla 1 son:

Linealidad.
Rango.
Robustez.
Selectividad.
Estabilidad (resistencia).
Exactitud.
68

Precisin:
o Repetibilidad.
o Reproducibilidad.
o Precisin intermedia.

Los valores estimados de aceptacin para los parmetros a validar son: [3]

Linealidad: Como primer criterio de aceptacin se tiene el
coeficiente de correlacin que ser 0,999; adems deber superar
la prueba ANOVA de regresin lineal y la significancia de la
pendiente y el intercepto.
Robustez: Este parmetro tendr una desviacin estndar de 0,03 Bx
como valor mximo de variabilidad significativa.
Selectividad: Se debe obtener para las muestras preparadas una
especificidad mayor a 0,90.
Exactitud: El Laboratorio Central de Postobn S.A. acepta un sesgo
0,03Bx.
Precisin.
o Repetibilidad: Debe ser menor a 0,02 Bx para todas las
concentraciones medidas, el criterio fue estimado a partir de
la experiencia en el laboratorio.
o Precisin intermedia: El valor establecido debe tener como
mximo un valor de 0,03 Bx para precisin intermedia o
reproducibilidad. Se debe verificar adems que la precisin
intermedia sea menor a 2 veces la repetitividad del mtodo en
trminos del coeficiente de variacin.

6.1.3. Muestras y patrones de referencia

Como se ha mencionado anteriormente, el rango de trabajo real se
determin por las muestras que tpicamente se analizan de forma rutinaria
en el Laboratorio Central que para el producto terminado corresponde a
un valor entre 6 y 14 Bx.
Las muestras a analizar durante el desarrollo del proyecto fueron tomadas
en la planta de Postobn Bello, siguiendo los lineamientos establecidos
para la toma de muestra:

69

No tomar muestras al comienzo o terminacin de un lote de
produccin.
Se debe esperar un tiempo de al menos 5 minutos en el cual las
muestras sean producidas de manera estable sin que sus
propiedades cambien abruptamente, especialmente los grados Brix
y el volumen de CO2.
Clasificar por altura de llenado y sellado.

En la tabla 13 se presentan las muestras utilizadas para el desarrollo del
trabajo.
Tabla 13. Descripcin de las muestras en el desarrollo del proyecto.
Producto Presentacin Codificacin Fecha de Produccin
Colombiana Nacional 1250 ml
28FEB13 13:02
L1B0001708672
11 de octubre 2012
Manzana Interior 1250 ml
28FEB13 09:28
L1B0001708671
11 de octubre 2012
Seven Up 1250 ml
02MAR13 06:48
L1B0001709779
13 de octubre 2012

Dentro del conjunto de bebidas gaseosas que la compaa maneja, estos
son los productos ms representativos de la marca y que abarcan el rango
de Brix trabajado normalmente en el laboratorio.

6.1.3.1. Muestra control

En este proceso de validacin se utilizan dos tipos de muestras control que
tienen objetivos diferentes, ests pueden ser llamadas: muestra control
general y muestra control para robustez.

Muestra control general: La muestra que se eligi como muestra
control general es el agua destilada ya que se usa tanto en las
verificaciones como en las calibraciones de los equipos, tiene la gran
ventaja de no degradarse o contaminarse fcilmente, y es por ello
que su anlisis garantiza la validez de posteriores determinaciones. El
agua destilada debe ser analizada al inicio de cualquier ensayo,
grupo de lectura o medicin que se desea realizar, hay que tener en
cuenta que los resultados obtenidos por el agua no sern reportados
ya que sta slo acta como verificador del estado del equipo.

70

Muestra control para robustez: Para el ensayo de robustez se define
un ensayo control, el cual corresponde a la medicin de la muestra
sin hacer una modificacin deliberada, esta muestra permitir
evaluar el efecto que acarrea las modificaciones hechas de forma
consciente.

6.1.3.2. Patrn de referencia

El patrn de referencia utilizado para ambos densmetros fue el agua ultra
pura, orden No: 244214, Anton Paar GmbH. El valor reportado para la
densidad del agua es 0,99820 0,00002 g/cm
3
a 20C (95%). (Certificado
agua ultra pura (ver Anexo 3).

6.1.4. Condiciones ambientales

Las condiciones ambientales promedio del Laboratorio Central en el que
se realizaron las pruebas pueden verse en la tabla 14 y figura 12:

Tabla 14. Condiciones ambientales promedio en el Laboratorio Central.
Parmetros Intervalo (95% de confianza)
Temperatura (C) 21,18 1,64 C
Humedad relativa (%HR) 61,51 8,11

Figura 12. Condiciones ambientales en el laboratorio.
71

El proceso de validacin se llev a cabo desde el da 03 de julio de 2012
hasta el da 30 de octubre de 2012. Los datos relacionados con las
condiciones ambientales pueden verse en el Anexo 4.

6.2. METODOLOGA DE VALIDACIN

6.2.1. Verificacin de las lecturas. Comparacin entre tabla NBS y el
ICUMSA

Los dos equipos que estn involucrados en la validacin por diseo de
fbrica, incluyen las tablas NBS para la determinacin del grado Brix a
partir de la densidad de la muestra evaluada.

El Laboratorio Central de Postobn S.A., se rige para cualquier anlisis de
azcar en el ICUMSA (Comisin Internacional de Mtodos Uniformes para
el Anlisis del Azcar, por sus siglas en ingls), el cual es un organismo
internacional de normalizacin que publica procedimientos detallados de
laboratorio para el anlisis de azcar, cuenta con dos polinomios que
permiten el clculo de la densidad: el polinomio ICUMSA de sacarosa pura
y el polinomio ICUMSA de azcares invertida (ver Anexo 5), se debe
establecer si hay diferencia entre estos dos polinomios, luego se compara
la tabla NBS con el ICUMSA para saber si hay discrepancia entre las dos
formas de calcular la densidad. Para ello se realiz una serie de lecturas a
diferentes concentraciones.
Una vez realizada esta verificacin se comparan los equipos involucrados.
6.2.2. Comparacin entre los equipos DMA-58 y SDA-M

Para observar si hay discrepancia entre los dos equipos, se realizaron
preparaciones de solucin de sacarosa a diferentes concentraciones (6,00
a 14,00 Bx) y a partir de una misma preparacin se hicieron las lecturas por
triplicado para ambos equipos.

6.2.3. Validacin del equipo Soft Drink Analyzer M

Basndose en los procedimientos descritos en la seccin de marco terico
que hace referencia a la validacin, se designan los siguientes
experimentos.

72

6.2.3.1. Linealidad

El anlisis de linealidad en el densmetro SDA-M, se realiza en ambas
escalas de medicin de grado Brix; es decir, en la escala de Brix directo y
en la escala de Brix invertido. Los anlisis se realizaron para 9
concentraciones por triplicado, los resultados obtenidos de las mediciones
estn expresados como densidad (g/cm
3
). Los rangos evaluados fueron:

Densmetro:
Rango directo: 6,00 a 14,00 Bx dto (9 concentraciones).
Rango invertido: 6,32 a 14,74 Bx inv (9 concentraciones).

Las soluciones preparadas se detallan en la tabla 15.

Tabla 15. Valores tericos de las soluciones de Brix dto y su correspondiente valor en Brix inv.
Valor terico de las soluciones
Brix directo (Bx dto) Brix invertido (Bx inv)
6,000 6,316
7,000 7,368
8,000 8,421
9,000 9,473
10,000 10,526
11,000 11,579
12,000 12,631
13,000 13,684
14,000 14,736

6.2.3.2. Rango

En la tabla 16, se reporta el valor de Brix invertido para las bebidas
gaseosas que normalmente son evaluadas de forma cotidiana en el
Laboratorio Central.

Tabla 16. Rango de Brix invertido en bebidas gaseosas.
Valor mnimo Valor mximo
Brix invertido 10,25 12,36

Teniendo en cuenta que se realizar un anlisis de linealidad, el rango de
trabajo se amplia de manera que abarque los valores de Brix directo y Brix
73

invertido, por lo que se define el siguiente intervalo de trabajo (ver tabla
17).

Tabla 17. Rango de trabajo para evaluacin de los Bx.
Valor mnimo Valor mximo
Rango de lectura de Brix 6,00 14,74

6.2.3.3. Robustez

Para la evaluacin de robustez se pudo identificar slo una variable que
puede incidir de manera importante en el clculo de densidad de la
muestra, este factor es:

Tiempo de desgasificacin de la muestra.

En esta prueba se evaluarn cuatro tiempos de desgasificacin sin invertir
la muestra, y se compararn con el procedimiento normal de preparacin
de la muestra para la lectura del Brix invertido. En la tabla 18 se muestran
los tiempos de la prueba.

Tabla 18. Tiempos de desgasificacin de las bebidas.
Tiempo de desgasificacin (min)
8
10
12
14

El tiempo de referencia establecido en el estudio de desgasificacin
realizado en el Laboratorio Central de Postobn S.A. es de 12 min.

6.2.3.4. Selectividad

Como es sabido, las bebidas gaseosas adems de contener azcar y
agua, poseen otros componentes que se encuentran en menor cantidad
respecto a los dos mencionados anteriormente.

El azcar contribuye con ms del 95% de los slidos disueltos en este tipo
de bebidas, pero este porcentaje est sujeto a cambios debidos a las
especificaciones de cada producto. Es importante resaltar que el
concepto de grado Brix considera a este tipo de bebidas como una
74

solucin de agua y sacarosa, es por ello que se hace necesario el estudio
del efecto que los otros componentes aportan al valor de Brix reportado
por el equipo.

Teniendo en cuenta que no todos los componentes pueden alterar de
forma significativa la lectura de Brix, slo se tendrn en cuenta algunos que
estn en mayor proporcin. Estos componentes se muestran en la tabla 19.
[3].

Tabla 19.Componentes seleccionados para el anlisis de especificidad.
Componentes Estado Variable Rango (g/100g)
Azcar Slido
7 13
cido dbil Slido
0 0,5
cido fuerte (Sol. 85%) Lquido
0 0,05
Benzoato de potasio Slido
0 0,045
Emulsin naranja Emulsin
0 0,15
Enturbiante Emulsin
0 0,45

La variable
corresponde a la concentracin expresada en gramos

presentes por cada 100 gramos de muestra.

El anlisis de especificidad se realiza tanto para Brix directo como invertido,
preparando 12 soluciones de 100 gramos cada una, con la respectiva
cantidad de componentes especificada en la tabla 20.

Tabla 20. Diseo de experimentos para especificidad.
Solucin
Agua (g) Total (g)

1 7,000 0,000 0,000 0,045 0,150 0,000 92,805 100
2 7,000 0,000 0,050 0,045 0,150 0,000 92,755 100
3 7,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,450 92,550 100
4 7,000 0,500 0,050 0,045 0,000 0,000 92,405 100
5 7,000 0,500 0,050 0,000 0,150 0,000 92,300 100
6 7,000 0,500 0,000 0,000 0,000 0,450 92,050 100
7 13,000 0,000 0,050 0,000 0,000 0,000 86,950 100
8 13,000 0,000 0,050 0,045 0,000 0,450 86,455 100
9 13,000 0,000 0,000 0,000 0,150 0,450 86,400 100
10 13,000 0,500 0,050 0,000 0,150 0,450 85,850 100
11 13,000 0,500 0,000 0,045 0,000 0,450 86,005 100
12 13,000 0,500 0,000 0,045 0,150 0,000 86,305 100

75

6.2.3.5. Estabilidad

La estabilidad de la muestra se evalu en condiciones ambientales
controladas, una vez desgasificada la muestra se hicieron mediciones a
diferentes horas el mismo da (ver tabla 21), esto con el fin de demostrar si
el dejar una muestra a condiciones ambientales y de forma descuidada
incide de manera significativa en el valor de Brix reportado.

Tabla 21. Evaluacin de estabilidad.
Muestra Colombiana Nacional Manzana Interior Seven Up
Tiempos de lecturas - - -
Inmediatamente 8 8 8
1 Hora 8 8 8
2 Horas 8 8 8
3 Horas 8 8 8
Nmero de lecturas 96

6.2.3.6. Exactitud

El parmetro de exactitud se puede evaluar respecto a dos valores de
referencia: patrones y estndares.

Exactitud con patrones: Es sabido que las soluciones patrn son
costosas y vienen en volmenes pequeos que permiten realizar una
cantidad limitada de lecturas, generalmente 3 mediciones. Con el
agua ultra pura patrn de referencia para el densmetro, se realiza
una calibracin e inmediatamente se leen varios estndares. Con
estos datos se establece el sesgo y la recuperacin.

Exactitud con estndares: el clculo de exactitud con estndares se
puede realizar con los datos obtenidos en la evaluacin de
linealidad. Estos resultados estarn expresados en trminos de Bx,
determinando la exactitud en el rango de trabajo a diferentes
concentraciones, se debe tener en cuenta que los anlisis se
realizaron por triplicado y no es posible realizar una prueba de
hiptesis concluyente. Los clculos y resultados obtenidos para este
caso son idnticos a los expuestos en el anlisis del rango.

76

Como se mencion anteriormente la exactitud es evaluada de dos
formas usando el mismo patrn de referencia (agua ultra pura):

Calibracin con agua destilada: La calibracin se hace de forma
rutinaria utilizando agua destilada obtenida en el laboratorio. Se
verifica el sesgo en funcin de la densidad con respecto al patrn
de referencia despus de una debida calibracin (ver tabla 22).

Tabla 22. Patrn utilizado para el clculo de exactitud.
Patrn de referencia T (C) Densidad terica (g/cm
3
)
Agua ultra pura 20 0,99820 0,00002

Calibracin con patrn de referencia: Esta calibracin
comprende la misma metodologa que la anterior, slo que esta
vez en lugar de utilizar agua destilada se usa el patrn de
referencia y se analizan los estndares distintos preparados en el
laboratorio (ver tabla 23). El procedimiento permite evaluar el
sesgo en funcin de la densidad y el Bx.

Tabla 23. Estndares utilizados en el clculo de exactitud.
Estndares Valor terico (Bx)
Agua destilada 0,000
8,00 Bx 8,000
10,00 Bx 10,000
12,00 Bx 12,000

6.2.3.7. Precisin

La precisin engloba diferentes tipos de estudios: repetibilidad instrumental,
repetibilidad del mtodo, precisin intermedia y reproducibilidad.

Este trabajo incluye clculos de repetibilidad instrumental, de mtodo y la
precisin intermedia. Por otra parte los clculos correspondientes a la
reproducibilidad involucran a otros laboratorios que posean un nivel de
anlisis similar o superior al que se tiene en el Laboratorio Central, este
estudio sobrepasa los lmites de este proyecto y se deja propuesto para
futuros estudios en la empresa.

77

6.2.3.7.1. Repetibilidad

6.2.3.7.1.1. Repetibilidad del instrumento

La repetibilidad instrumental del equipo SDA-M no aplica para este
instrumento debido a que el densmetro lleva a cabo las lecturas de forma
parcialmente destructiva, esto se debe a que al momento de realizar la
lectura de una muestra se regresa parte de sta al vial con la muestra
original llegando a contaminarla. Adems, el equipo no permite realizar
ms de dos mediciones de la misma muestra, ya que gasta gran parte de
la muestra enjuagando la celda de medicin por tanto no se pueden
obtener datos concordantes; lo que conlleva a la obtencin de
desviaciones estndar mayores a las que se pueden obtener en la
repetibilidad del mtodo y esto por supuesto es improbable.

6.2.3.7.1.2. Repetibilidad del mtodo

El ensayo de repetibilidad del mtodo se efectu sobre 10 alcuotas de
una misma muestra homognea, que se analiza a travs de 3 niveles de
concentracin 7, 10, 13 Bx, por el mismo instrumento y el mismo analista.

6.2.3.7.2. Precisin intermedia

Para el clculo de la precisin intermedia, cada analista realiz tres anlisis
por da en el instrumento, los factores a evaluar incluyen el da, el analista,
el instrumento, etc. El diseo de experimento se observa en la tabla 24.

Tabla 24. Diseo de experimentos para precisin intermedia.
Densmetro SDA-M
Da 1 Da 2 Da 3 Total analista
Analista H 3 3 3 9
Analista W 3 3 3 9
Total de anlisis en el equipo 18

78

7. RESULTADOS Y ANLISIS

En esta seccin se mostrarn los resultados ms significativos obtenidos en
el estudio de validacin, para obtener ms informacin sobre el
procedimiento, los clculos y los resultados parciales, se sugiere ver los
anexo 6.

7.1. VERIFICACIN DE LAS LECTURAS. COMPARACIN ENTRE TABLA NBS Y
EL ICUMSA

Para esta verificacin se realizaron preparaciones de sacarosa a diferentes
concentraciones que abarcan desde 6,00 a 14,00 Bx dto. Se realiz el
proceso de inversin y las muestras fueron ledas en el equipo DMA-58, los
datos obtenidos por el equipo fueron comparados con los valores
obtenidos por ambos polinomios ICUMSA (Sac/pura y Azuc/inv); los
resultados se muestran en las tablas 25 a 33.

Tabla 25. Resultados de la verificacin de las lecturas Bx inv terico: 6,316.
Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx - Bx Densida
d
Bx Densidad Bx Densidad
Bx
dto
6,000 1 6,337 1,02318 6,337 1,02317 6,337 1,02319
Bx
inv
6,316 2 6,331 1,02315 6,331 1,02314 6,331 1,02316
3 6,344 1,02321 6,344 1,02319 6,344 1,02321
Promedio 6,337 1,02318 6,337 1,02317 6,337 1,02319
Desv. Est.
(S)
0,00651 0,00003 0,00651 0,00003 0,00651 0,00003

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx - Bx Densidad Bx Densidad Bx Densidad
Bx
dto
7,002 1 7,378 1,02739 7,378 1,02737 7,378 1,02739
Bx
inv
7,370 2 7,385 1,02741 7,385 1,02740 7,385 1,02742
3 7,381 1,02740 7,381 1,02739 7,381 1,02740
Promedio 7,381 1,02740 7,381 1,02739 7,381 1,02740
Desv. Est.
(S)
0,00351 0,00001 0,00351 0,00002 0,00351 0,00002

79

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx
dto
8,000 1 8,427 1,03165 8,427 1,03165 8,427 1,03165
Bx
inv
8,421 2 8,424 1,03164 8,424 1,03164 8,424 1,03164
3 8,427 1,03165 8,427 1,03165 8,427 1,03165
Promedio 8,426 1,03165 8,426 1,03165 8,426 1,03165
Desv. Est.
(S)
0,00173 0,00001 0,00173 0,00001 0,00173 0,00001

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx
dto
9,000 1 9,474 1,03595 9,474 1,03594 9,474 1,03594
Bx
inv
9,473 2 9,472 1,03594 9,472 1,03594 9,472 1,03593
3 9,472 1,03594 9,472 1,03594 9,472 1,03593
Promedio 9,473 1,03594 9,473 1,03594 9,473 1,03593
Desv. Est.
(S)
0,00115 0,00001 0,00115 0,00000 0,00115 0,00001

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx
dto
10,000 1 10,518 1,04026 10,518 1,04026 10,518 1,04025
Bx
inv
10,526 2 10,521 1,04027 10,521 1,04027 10,521 1,04026
3 10,520 1,04026 10,520 1,04027 10,520 1,04025
Promedio 10,520 1,04026 10,520 1,04027 10,520 1,04025
Desv. Est.
(S)
0,00153 0,00001 0,00153 0,00001 0,00153 0,00001

80

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx
dto
11,000 1 11,566 1,04462 11,566 1,04463 11,566 1,04460
Bx
inv
11,579 2 11,579 1,04467 11,579 1,04468 11,579 1,04465
3 11,566 1,04462 11,566 1,04463 11,566 1,04460
Promedio 11,570 1,04464 11,570 1,04465 11,570 1,04462
Desv. Est.
(S)
0,00751 0,00003 0,00751 0,00003 0,00751 0,00003

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx
dto
12,000 1 12,604 1,04897 12,604 1,04898 12,604 1,04894
Bx
inv
12,631 2 12,608 1,04899 12,608 1,04900 12,608 1,04895
3 12,608 1,04899 12,608 1,04900 12,608 1,04895
Promedio 12,607 1,04898 12,607 1,04899 12,607 1,04895
Desv. Est.
(S)
0,00231 0,00001 0,00231 0,00001 0,00231 0,00001

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx
dto
12,999 1 13,650 1,05339 13,650 1,05341 13,650 1,05334
Bx
inv
13,683 2 13,650 1,05339 13,650 1,05341 13,650 1,05334
3 13,652 1,05340 13,652 1,05341 13,652 1,05335
Promedio 13,651 1,05339 13,651 1,05341 13,651 1,05334
Desv. Est.
(S)
0,00115 0,00001 0,00115 0,00000 0,00115 0,00001

81

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
Bx - Bx inv Densidad Bx Densidad Bx Densidad
Bx
dto
13,999 1 14,695 1,05783 14,695 1,05786 14,695 1,05777
Bx
inv
14,735 2 14,684 1,05779 14,684 1,05781 14,684 1,05772
3 14,694 1,05783 14,694 1,05785 14,694 1,05776
Promedio 14,691 1,05782 14,691 1,05784 14,691 1,05775
Desv. Est.
(S)
0,00608 0,00002 0,00608 0,00003 0,00608 0,00003

A continuacin se muestran las diferencias entre los valores obtenidos por
el polinomio ICUMSA (Sac/Pura) y el polinomio ICUMSA (Azc/Inv), con el
fin de establecer si existe una diferencia significativa entre las dos formas
de obtencin del valor de densidad (ver tabla 34).

Tabla 34. Diferencia entre las lecturas obtenidas por los polinomios ICUMSA.
Valor del Bx inv
Valores de densidad [g/cm
3
]
Diferencia
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
6,337 1,02317 1,02319 -0,00002
6,331 1,02314 1,02316 -0,00002
6,344 1,02319 1,02321 -0,00002
7,378 1,02737 1,02739 -0,00002
7,385 1,02740 1,02742 -0,00002
7,381 1,02739 1,02740 -0,00001
8,427 1,03165 1,03165 0,00000
8,424 1,03164 1,03164 0,00000
8,427 1,03165 1,03165 0,00000
9,474 1,03594 1,03594 0,00000
9,472 1,03594 1,03593 0,00001
9,472 1,03594 1,03593 0,00001
10,518 1,04026 1,04025 0,00001
10,521 1,04027 1,04026 0,00001
10,520 1,04027 1,04025 0,00002
11,566 1,04463 1,04460 0,00003
11,579 1,04468 1,04465 0,00003
11,566 1,04463 1,04460 0,00003
12,604 1,04898 1,04894 0,00004
12,608 1,04900 1,04895 0,00005
12,608 1,04900 1,04895 0,00005
82

13,650 1,05341 1,05334 0,00007
13,650 1,05341 1,05334 0,00007
13,652 1,05341 1,05335 0,00006
14,695 1,05786 1,05777 0,00009
14,684 1,05781 1,05772 0,00009
14,694 1,05785 1,05776 0,00009

De lo anterior se observa que se presenta una mayor diferencia a medida
que el valor de densidad va en aumento, por lo que esta diferencia afecta
el valor reportado de Bx invertido.

Para saber el grado de influencia que tiene la variacin de la densidad
con respecto al Bx invertido, en la tabla 35 se establece un valor de
densidad para un Bx invertido determinado; el objetivo fue encontrar el
intervalo del Bx invertido en el que el valor de la densidad permanece
constante.
Tabla 35. Intervalo del Bx inv., en el que se mantiene constante la densidad.
Densidad referencia lectura del equipo
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Polinomio ICUMSA
(Azc/Inv)
1,02318
6,340 6,335
6,341 6,336
- -
1,02740
7,384 7,380
7,385 7,381
- -
1,03165
8,427 8,425
8,428 8,426
- 8,427
1,03594
9,472 9,473
9,473 9,474
9,474 -
1,04026
10,517 10,521
10,518 10,522
10,519 -
1,04464
11,569 11,576
11,570 11,577
- -
1,04898
12,603 12,614
12,604 12,615
- -
1,05339
13,646 13,661
13,647 13,662
- 13,663
1,05782
14,686 14,706
14,687 14,707
- 14,708

83

De las tablas anteriores se puede observar que para una diferencia
mxima de 0,00009 g/cm
3
en el valor de la densidad, el Brix invertido se
modifica en un valor de 0,022 aunque este valor se encuentra un poco
por encima de la incertidumbre reportada por el fabricante cuyo valor es
de 0,020; la incertidumbre en la medicin que puede ser tolerada en el
Laboratorio Central, sin que se afecte de manera significativa los resultados
de los anlisis es de un valor igual a 0,030. Por lo tanto, se puede concluir
que la medicin del Brix invertido no es afectada de manera significativa,
esto significa que no hay diferencia entre reportar el valor del Brix invertido
con el polinomio ICUMSA (Sac/Pura) o el polinomio ICUMSA (Azc/Inv).

De igual forma se hace la comparacin entre el polinomio ICUMSA
(Sac/Pura) y la Tabla NBS (ver tablas de 36 a 44).

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
6,000 1 6,337 1,02318 6,337 1,02317 6,337 1,02318
Bx
inv
6,316 2 6,331 1,02315 6,331 1,02314 6,331 1,02316
3 6,344 1,02321 6,344 1,02319 6,344 1,02321
Promedio 6,337 1,02318 6,337 1,02317 6,337 1,02318
Desv. Est.
(S)
0,00651 0,00003 0,00651 0,00003 0,00651 0,00003

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
7,002 1 7,378 1,02739 7,378 1,02737 7,378 1,02739
Bx
inv
7,370 2 7,385 1,02741 7,385 1,02740 7,385 1,02742
3 7,381 1,02740 7,381 1,02739 7,381 1,02740
Promedio 7,381 1,02740 7,381 1,02739 7,381 1,02740
Desv. Est.
(S)
0,00351 0,00001 0,00351 0,00002 0,00351 0,00002

84

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
8,000 1 8,427 1,03165 8,427 1,03165 8,427 1,03166
Bx
inv
8,421 2 8,424 1,03164 8,424 1,03164 8,424 1,03164
3 8,427 1,03165 8,427 1,03165 8,427 1,03166
Promedio 8,426 1,03165 8,426 1,03165 8,426 1,03165
Desv. Est.
(S)
0,00173 0,00001 0,00173 0,00001 0,00173 0,00001

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
9,000 1 9,474 1,03595 9,474 1,03594 9,474 1,03595
Bx
inv
9,473 2 9,472 1,03594 9,472 1,03594 9,472 1,03594
3 9,472 1,03594 9,472 1,03594 9,472 1,03594
Promedio 9,473 1,03594 9,473 1,03594 9,473 1,03594
Desv. Est.
(S)
0,00115 0,00001 0,00115 0,00000 0,00115 0,00001

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
10,000 1 10,518 1,04026 10,518 1,04026 10,518 1,04026
Bx
inv
10,526 2 10,521 1,04027 10,521 1,04027 10,521 1,04027
3 10,520 1,04026 10,520 1,04027 10,520 1,04026
Promedio 10,520 1,04026 10,520 1,04027 10,520 1,04026
Desv. Est.
(S)
0,00153 0,00001 0,00153 0,00001 0,00153 0,00001

85

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
11,000 1 11,566 1,04462 11,566 1,04463 11,566 1,04462
Bx
inv
11,579 2 11,579 1,04467 11,579 1,04468 11,579 1,04466
3 11,566 1,04462 11,566 1,04463 11,566 1,04462
Promedio 11,570 1,04464 11,570 1,04465 11,570 1,04463
Desv. Est.
(S)
0,00751 0,00003 0,00751 0,00003 0,00751 0,00002

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
12,000 1 12,604 1,04897 12,604 1,04898 12,604 1,04897
Bx
inv
12,631 2 12,608 1,04899 12,608 1,04900 12,608 1,04899
3 12,608 1,04899 12,608 1,04900 12,608 1,04899
Promedio 12,607 1,04898 12,607 1,04899 12,607 1,04898
Desv. Est.
(S)
0,00231 0,00001 0,00231 0,00001 0,00231 0,00001

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx
dto
12,999 1 13,650 1,05339 13,650 1,05341 13,650 1,05339
Bx
inv
13,683 2 13,650 1,05339 13,650 1,05341 13,650 1,05339
3 13,652 1,05340 13,652 1,05341 13,652 1,05340
Promedio 13,651 1,05339 13,651 1,05341 13,651 1,05339
Desv. Est.
(S)
0,00115 0,00001 0,00115 0,00000 0,00115 0,00001

86

Datos
Tericos
#
Muestras
Lectura de Bx en
DMA 58
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
Bx - Bx inv Densidad Bx Densidad Bx Densidad
Bx
dto
13,999 1 14,695 1,05783 14,695 1,05786 14,695 1,05784
Bx
inv
14,735 2 14,684 1,05779 14,684 1,05781 14,684 1,05779
3 14,694 1,05783 14,694 1,05785 14,694 1,05783
Promedio 14,691 1,05782 14,691 1,05784 14,691 1,05782
Desv. Est.
(S)
0,00608 0,00002 0,00608 0,00003 0,00608 0,00003

En la tabla 45 se muestran las diferencias entre los valores obtenidos por
ambos mtodos, en la tabla 46 se muestra una densidad de referencia y el
Bx correspondiente.

Tabla 45. Diferencia entre las lecturas obtenidas por el polinomio ICUMSA (Sac/Pura) y la tabla NBS
Valor del Bx inv
Valores de densidad [g/cm
3
]
Diferencia
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
6,337 1,02317 1,02318 -0,00001
6,331 1,02314 1,02316 -0,00002
6,344 1,02319 1,02321 -0,00002
7,378 1,02737 1,02739 -0,00002
7,385 1,02740 1,02742 -0,00002
7,381 1,02739 1,02740 -0,00001
8,427 1,03165 1,03166 -0,00001
8,424 1,03164 1,03164 0,00000
8,427 1,03165 1,03166 -0,00001
9,474 1,03594 1,03595 -0,00001
9,472 1,03594 1,03594 0,00000
9,472 1,03594 1,03594 0,00000
10,518 1,04026 1,04026 0,00000
10,521 1,04027 1,04027 0,00000
10,520 1,04027 1,04026 0,00001
11,566 1,04463 1,04462 0,00001
11,579 1,04468 1,04466 0,00002
11,566 1,04463 1,04462 0,00001
12,604 1,04898 1,04897 0,00001
12,608 1,04900 1,04899 0,00001
12,608 1,04900 1,04899 0,00001
87

13,650 1,05341 1,05339 0,00002
13,650 1,05341 1,05339 0,00002
13,652 1,05341 1,05340 0,00001
14,695 1,05786 1,05784 0,00002
14,684 1,05781 1,05779 0,00002
14,694 1,05785 1,05783 0,00002

Tabla 46. Intervalo del Bx inv., en el que se mantiene constante la densidad.
Lectura del equipo a la densidad de referencia
Polinomio ICUMSA
(Sac/Pura)
Tabla NBS
1,02318
6,340 6,336
6,341 6,337
- 6,338
1,02740
7,384 7,381
7,385 7,382
- -
1,03165
8,427 8,425
8,428 8,426
- -
1,03594
9,472 9,471
9,473 9,472
9,474 9,473
1,04026
10,517 10,517
10,518 10,518
10,519 10,519
1,04464
11,569 11,570
11,570 11,571
- -
1,04898
12,603 12,605
12,604 12,606
- -
1,05339
13,646 13,649
13,647 13,650
- 13,651
1,05782
14,686 14,691
14,687 14,692
- -

Por los resultados mostrados en las tablas previas, se puede deducir que no
existe una diferencia notoria que conlleve a errores significativos si se lee
con la Tabla NBS o con el polinomio ICUMSA (Sac/Pura). Esto se da,
porque con una diferencia mxima de 0,00002 g/cm
3
en el valor de
densidad, el Bx inv se modifica en una cantidad igual a 0,006. Este valor
se encuentra muy por debajo de la incertidumbre que reporta el
fabricante del equipo cuyo valor es de 0,02.

88

7.2. COMPARACIN ENTRE LOS EQUIPOS DMA-58 Y SDA-M

Los resultados del estudio de comparacin entre los dos equipos se
muestran en las tablas 47 a 48. Para la prueba de las varianzas se formulan
las siguientes hiptesis:

Tabla 47. Prueba de las varianzas.
Hiptesis nula H0 Sa = Sb Las varianzas son iguales
Hiptesis alterna H1 Sa Sb Las varianzas son diferentes

La prueba se har con un nivel de significancia de 5%.
Se procede entonces con la prueba de las medias de los valores de
densidad reportados por ambos equipos, para esto se formula la siguiente
hiptesis:

Tabla 48. Prueba de las medias.
Hiptesis nula H0 a = b Las medias son iguales
Hiptesis alterna H1 a b Las medias son diferentes

De igual forma se realiz la prueba con un grado de significancia del 5%
(ver tabla 49 - 50).

Tabla 49. Anlisis estadstico para la comparacin entre las lecturas de los densmetros basados en
densidad.
Clculos basados en la densidad
Equipo DMA-58 Equipo SDA-M
Media (a) 1,04040 Media (b) 1,04035
Desviacin Estndar (Sa) 0,01141 Desviacin Estndar (Sb) 0,01140
Varianza (Sa) 0,00013 Varianza (Sb) 0,00013
Nmero de datos (na) 27 Nmero de datos (nb) 27

Test de F
Fexp 1,00099
Grado Libertad (a) 26
Grado Libertad (b) 26
Niv. Signif. () 0,050
Ftabla 1,92921

Como Fexp<Ftabla significa que ambos mtodos tiene varianzas estimadas iguales y por tanto,
precisiones semejantes.

89

Test de t
s 0,00013
texp 0,01775
Grado Libertad 52
Niv. Signif. (/2) 0,050
ttabla 2,00665

Como texp<ttabla significa que no hay diferencia entre las dos medidas.

Bx inv.
Clculos basados en Bx inv.
Equipo DMA-58 Equipo SDA-M
Media (a) 10,52696 Media (b) 10,51430

Test de F
Fexp 1,00140
Ftabla 1,92921


Test de t
s 7,56444
texp 0,01692
Grado Libertad 52
Niv. Signif. (/2) 0,05
ttabla 2,00665


En ambos casos se acepta la hiptesis nula; es decir, no hay diferencias
significativas entre las lecturas que reportan los densmetros DMA-58 y SDA-
M con relacin a la densidad y el Brix.

7.3. Validacin del equipo Soft Drink Analyzer M

7.3.1. Comparacin entre las lecturas con el procedimiento normal
de inversin y las lecturas sin inversin

Para esta prueba se utilizaron tanto las soluciones de sacarosa a diferentes
concentraciones como las muestras de mercado, que para este caso son:
90

Colombiana nacional, Manzana interior y Seven up, ya que son los sabores
ms representativos de la marca. Los datos obtenidos se muestran en las
tablas 51 a 54.

densidad.
Muestra: Sacarosa
Muestra con inversin Muestra sin inversin
Media (a) 1,04035 Media (b) 1,038202

Test de F
Fexp 1,09766
Ftabla 1,92921


Test de t
s 0,00012
texp 0,70678
Grado Libertad 52
Niv. Signif. (/2) 0,050
ttabla 2,00665


Tabla 52. Anlisis estadstico para la comparacin entre las lecturas de los densmetros basados en Bx inv.
Muestra: Sacarosa
Media (a) 10,514 Media (b) 10,523

Test de F
Fexp 0,98471
Ftabla 1,92921


91

Test de t
s 7,61785
texp 0,01144
Grado Libertad 52
ttabla 2,00665


densidad.
Muestra: Colombiana nacional, Manzana interior; Seven up
Media (a) 1,042183 Media (b) 1,040350
Varianza (Sa) 2,470E-06 Varianza (Sb) 1,871E-06

Test de F
Fexp 1,32034
Ftabla 1,92921


Test de t
s 2,17E-06
texp 4,57078
Grado Libertad 52
Niv. Signif. (/2) 0,050
ttabla 2,00665

Como texp>ttabla significa que existe diferencia entre las dos medidas.

Tabla 54. Anlisis estadstico para la comparacin entre las lecturas de los densmetros basados en Bx inv.
Muestra: Colombiana nacional, Manzana interior; Seven up
Media (a) 10,994 Media (b) 10,992
92

Test de F
Fexp 0,97258
Ftabla 1,92921


Test de t
s 0,13760
texp 0,02476
Grado Libertad 52
ttabla 2,00665


El resultado obtenido en el anlisis de las bebidas gaseosas basado en la
densidad, muestra que hay diferencia entre las medidas, esto se debe a
que cuando el proceso de inversin es llevado a cabo, los slidos se
aumentan en un 5,26% dando valores mayores en densidad. Por el
contrario, las lecturas realizadas sin el proceso de inversin reportan un
valor de densidad menor, ya que la muestra en el momento del anlisis no
est completamente invertida, sino que tienen cierto grado de inversin
(menor cantidad de slidos).

Como la densidad es utilizada para calcular el contenido volumtrico de
una muestra, se hace necesario saber en qu medida se ve afectado
dicho clculo cuando se reportan los valores de densidad con y sin
inversin. Para ello se emplea la siguiente expresin:

Los resultados del estudio se muestran en la tabla 55.

93

Tabla 55. Clculo del contenido volumtrico de las diferentes muestras de mercado.
Variables
Muestras con el procedimiento de
inversin y desgasificacin de 12 min.
Muestras sin inversin y desgasificacin
12 min.
Colombiana
nacional
Manzana
interior
Seven up
Colombiana
nacional
Manzana
interior
Seven up
Tipo de
muestra
Litrn
(1250mL)
Litrn
(1250mL)
Litrn
(1250mL)
Litrn
(1250mL)
Litrn
(1250mL)
Litrn
(1250mL)
Peso lleno
(g)
2215,7 2242,7 2238,5 2215,7 2242,7 2238,5
Peso vaco
(g)
931,2 930,8 927,3 931,2 930,8 927,3
Densidad
(g/mL)
1,04026 1,04227 1,04402 1,03870 1,04037 1,04198
Contenido
(mL)
1235 1259 1256 1237 1261 1258

Los resultados obtenidos muestran una pequea diferencia en el
contenido entre las muestras con y sin inversin, esta diferencia de 2mL
causada por la discrepancia de densidad no es significativa, si se tiene en
cuenta que la altura de llenado, as como el peso vaco de la botella de
vidrio o PET afectan mayormente el clculo de contenido.

7.3.2. Linealidad

Los datos obtenidos en el anlisis de linealidad se muestran a continuacin:

En Bx directo

Tabla 56. Resultados para el estudio de linealidad en el SDA-M en Bx directo.
Bx dto
terico
Lectura de densidad (g/cm
3
) Promedio
(g/cm
3
)
Lectura Bx dto Promedio
Bx dto 1 2 3 1 2 3
6,003 1,02179 1,02179 1,02180 1,02179 5,994 5,995 5,995 5,995
7,003 1,02583 1,02583 1,02583 1,02583 6,997 6,997 6,997 6,997
8,000 1,02988 1,02987 1,02989 1,02988 7,994 7,992 7,996 7,994
9,000 1,03396 1,03397 1,03398 1,03397 8,992 8,994 8,995 8,994
10,004 1,03812 1,03812 1,03812 1,03812 10,001 10,002 10,003 10,002
11,003 1,04226 1,04226 1,04226 1,04226 11,000 11,001 11,001 11,001
12,000 1,04643 1,04644 1,04643 1,04643 11,998 12,000 12,000 11,999
13,000 1,05065 1,05065 1,05065 1,05065 13,002 13,002 13,003 13,002
14,003 1,05488 1,05488 1,05489 1,05488 14,002 14,002 14,003 14,002

94

En Bx invertido

Tabla 57. Resultados para estudio de linealidad en el SDA-M en Bx invertido.
Bx dto
terico
Bx inv
terico
Lectura de densidad
(g/cm
3
)
Promedio
(g/cm
3
)
Lectura Bx inv Promedio
Bx inv
1 2 3 1 2 3
6,003 6,319 1,02314 1,02314 1,02315 1,02314 6,329 6,330 6,336 6,332
7,003 7,371 1,02738 1,02737 1,02737 1,02737 7,378 7,376 7,377 7,377
8,000 8,421 1,03163 1,03163 1,03163 1,03163 8,423 8,422 8,423 8,423
9,000 9,473 1,03591 1,03591 1,03591 1,03591 9,466 9,467 9,466 9,466
10,004 10,530 1,04028 1,04028 1,04030 1,04028 10,523 10,523 10,528 10,525
11,003 11,582 1,04462 1,04462 1,04463 1,04463 11,567 11,567 11,570 11,568
12,000 12,631 1,04896 1,04897 1,04897 1,04897 12,602 12,604 12,604 12,603
13,000 13,684 1,05339 1,05338 1,05340 1,05339 13,649 13,648 13,652 13,650
14,003 14,740 1,05780 1,05779 1,05780 1,05780 14,686 14,684 14,686 14,685

Con estos valores, se calcula los parmetros de regresin lineal evaluados
en la linealidad para cada ensayo. Los datos obtenidos se presentan en la
tabla 58.
Tabla 58. Parmetros de regresin lineal en el estudio de linealidad.
SDA-M
Mtodos
Parmetros Bx dto Bx inv
Intercepto (a) 0,99682 0,99699
Pendiente (b) 0,00414 0,00412
r 0,99997 0,99998
r 0,99994 0,99995
Sb 4,312E-11 3,114E-11
Sa 4,601E-09 3,681E-09

Existen en la literatura diversos polinomios que pueden convertir la
densidad a grados Brix, los cuales tiene un orden de 3, 4 o incluso 5 que
cubren un amplio rango de trabajo. Sin embargo, se puede observar que
cuando se evalan rangos estrechos para este caso 6,000 a 14,735 Bx, la
linealidad es elevada y puede corroborarse por las grficas y los
coeficientes de correlacin (mayores a 0,999).

Las grficas que soportan la afirmacin anterior se muestran a
continuacin (figuras 13 y 14).

95

En Bx directo

Figura 13. Regresin lineal para la densidad respecto a Bx dto.

En Bx invertido

Figura 14. Regresin lineal para la densidad respecto al Bx inv.

Para completar el estudio de linealidad, se realiza la prueba llamada
ANOVA y la verificacin de los supuestos en linealidad. Los resultados de
estos anlisis se muestran a continuacin.

Homogeneidad de las varianzas: Se realiz mediante el test de
Cochran, los resultados se muestran en la tabla 59.

96

Tabla 59. Resultados de la homogeneidad de las varianzas.

Como Gexp < Gtabla significa que las varianzas de las concentraciones son
homogneas, es decir, que el factor de concentracin no influye en la
variabilidad de los resultados.

Prueba ANOVA: los resultados de esta prueba se muestran a
continuacin (ver tabla 60).

Tabla 60. Resultados obtenidos en el anlisis de ANOVA.
Parmetros Densmetro SDA-M
Bx dto Bx inv
SCREG 0,00308041 0,0033814
SCRES 1,9400E-07 1,5523E-07
SCFA 1,9362E-07 1,5444E-07
SCEXP 4,0133E-10 7,873E-10
GLREG 1 1
GLRES 25 25
GLFA 7 7
GLEXP 18 18
GLTOTAL 26 26
VREG 0,00308041 0,0033814
VRES 7,7609E-09 6,2093E-09
VFA 2,7662E-08 2,2063E-08
VEXP 2,2301E-11 4,374 E-11
F1;Exp 3,969E+05 5,446E+05
F1;Tabla 4,242 4,242
Pendiente 0? Si Si
F2;Exp 1240,57 504,41
F2;Tabla 2,577 2,577
Linealidad? No No
Los resultados muestran lo siguiente:

F1; Exp> F1; Tabla; demuestra la existencia de una pendiente distinta de cero.
F2; Exp> F2; Tabla; demuestra que no hay linealidad en los resultados obtenidos.

Test de Cochran
Parmetros Bx dto Bx inv
Gexp 0,4532 0,2924
Niv. Signif. () 0,05 0,05
# Muest. (ni) 3 3
# Total Exp. (n) 27 27
# Exp. (k) 9 9
Gtabla 0,4775 0,4775
97

Normalidad de los residuos: La normalidad de los residuos fue
analizada por el mtodo de Shapiro-Wilk, los resultados se
muestran en la tabla 61.

Tabla 61. Normalidad de los residuos.
Test de Shapiro - Wilk
Densmetro SDA-M
Bx dto Bx inv
# Muestras 27 27
Promedio 0,00333 0,01357
Suma de cuadrados (SC) 3,120E-04 1,115E-02
b 0,0171707 1,015E-01
W 0,945 0,924
Wtabla 0,923 0,923
Normalidad? Si Si

En los resultados se muestra que W>Wtabla, indicando que hay normalidad
en los datos obtenidos.

Significancia de pendiente e intercepto: Permiten evaluar si la
recta pasa por el origen de coordenadas, determinando si la
variable independiente es significativamente distinta de cero. Los
resultados de este test se observan en las tablas 62 a 63.

Tabla 62. Test de verificacin de la pendiente.
Test de verificacin de la pendiente o de linealidad
Bx dto Bx inv
Syx 7,761E-09 6,209E-09
Sb 4,312E-11 3,114E-11
Sb 6,567E-06 5,580E-06
Test de t
texp 630,02 737,95
) 0,05 0,05
ttabla 2,060 2,060
Intervalo (b) Mayor 0,00415 0,00413
Menor 0,00412 0,00411
b0? Si Si

Los resultados muestran que se cumple con el Test de t de la pendiente ya
que texp>ttabla.

98

Tabla 63. Test de verificacin trmino independiente.
Test de verificacin de la variable independiente o de proporcionalidad
Bx dto Bx inv
Syx 7,761E-09 6,209E-09
Sa 4,601E-09 3,681E-09
Sa 6,783E-05 6,068E-05
Test de t
texp 14695,06 16431,61747
0,05 0,05
ttabla 2,060 2,060
Intervalo (a) Mayor 0,99696 0,99712
Menor 0,99668 0,99687
a=0? No No

Los resultados muestran que:

No se cumple con el Test de t de la variable independiente ya que
texp>ttabla. En este caso, se sugiere que antes de cualquier medicin con el
equipo SDA-M se debe leer dos muestras estndares, uno en un punto
inferior y otro en un punto superior. Se recomienda utilizar agua destilada
como verificador del punto inferior y una solucin de sacarosa de 12,00Bx
dto como verificador del punto superior.

Los resultados obtenidos por el densmetro SDA-M hablan de un coeficiente
de correlacin muy satisfactorio en ambas escalas de medicin (Bx dto y
Bx inv).

Se observa tambin que en el anlisis de ANOVA, el equipo falla en la
comprobacin de la linealidad por regresin, esto se debe
fundamentalmente a que el SDA-M cuenta con una muy buena
repetibilidad en cada serie de datos; es decir, la desviacin de los datos
obtenidos es numricamente baja lo que causa un aumento significativo
en el valor de F2; Exp. Pese a esto, se corrobor que la pendiente es
estadsticamente diferente de cero, hecho comprobado en el anlisis de
ANOVA as como en la prueba t de significancia.

Con relacin al intercepto de la regresin lineal, se obtiene un valor
diferente de cero, ya que el valor de densidad obtenido para el valor
mnimo de Brix; es decir, cero, es de 0,99820 g/cm
3
cuando se analiza el
agua destilada.

99

Como se ha visto anteriormente, se confirma la no linealidad entre la
densidad y los grados Brix de las soluciones. Pero si se tiene como nico
criterio el coeficiente de correlacin, es posible asumir con un alto grado
de confiabilidad que existe linealidad en el rango trabajado de 6,000 a
14,735 Bx.

7.3.3. Rango

A partir de los datos que se obtienen en el anlisis de linealidad se puede
obtener la recuperacin y el sesgo de las diferentes concentraciones
preparadas. Con estos valores, se puede establecer el rango de trabajo
permitido, los datos fueron tabulados en las tablas 64 y 65.

Tabla 64. Porcentaje de recuperacin (%R) para los datos utilizados en el estudio de linealidad.
Concentraciones Densmetro SDA-M % de Recuperacin
Bx dto
terico
Bx inv
terico
Valor promedio en Bx
dto
inv
En Bx
dto
En Bx
inv
6,003 6,319 5,995 6,332 99,87 100,21
7,003 7,371 6,997 7,377 99,91 100,08
8,000 8,421 7,994 8,423 99,93 100,02
9,000 9,473 8,994 9,466 99,93 99,93
10,004 10,530 10,002 10,525 99,98 99,95
11,003 11,582 11,001 11,568 99,98 99,88
12,000 12,631 11,999 12,603 99,99 99,78
13,000 13,684 13,002 13,65 100,02 99,75
14,003 14,740 14,002 14,685 99,99 99,63

Tabla 65. Sesgo del Bx para los datos utilizados en el estudio de linealidad.
Concentraciones Densmetro SDA-M Sesgo de la
medicin
Bx dto
terico
Bx inv
terico
dto
inv
En Bx
dto
En Bx
inv
6,003 6,319 5,995 6,332 -0,008 0,013
7,003 7,371 6,997 7,377 -0,006 0,006
8,000 8,421 7,994 8,423 -0,006 0,002
9,000 9,473 8,994 9,466 -0,006 -0,007
10,004 10,530 10,002 10,525 -0,002 -0,005
11,003 11,582 11,001 11,568 -0,002 -0,014
12,000 12,631 11,999 12,603 -0,001 -0,028
13,000 13,684 13,002 13,65 0,002 -0,034
14,003 14,740 14,002 14,685 -0,001 -0,055

Como puede notarse, ambas escalas de medicin tiene una muy buena
recuperacin en las distintas concentraciones evaluadas. Cabe resaltar
que el sesgo en las lecturas de Bx inv son elevadas a concentraciones
altas si se comparan con las obtenidas en las concentraciones bajas. Las
100

posibles causas de este comportamiento es que no hubo una completa
inversin de la muestra al momento de preparar la solucin los
recipientes pudiesen estar contaminados con trazas de otros compuestos o
incluso por polvo.

7.3.4. Robustez
El anlisis de robustez comprende los siguientes anlisis:

7.3.4.1. Anlisis de estabilidad de la muestra

La prueba de estabilidad de las muestras implicadas se estudi en
condiciones ambientales controladas. Las muestras se desgasificaron en el
tiempo establecido por el estudio de desgasificacin de 12 minutos. El
estudio buscaba demostrar si la evaluacin de la muestra a diferentes
tiempos de anlisis (2, 4, 6, 8 horas), exponindolas a las condiciones
ambientales del laboratorio y de forma desatendida, afectaban
significativamente los resultados obtenidos. Los resultados obtenidos de
dicho estudio se muestran en la tabla 66.

Tabla 66. Resultados prueba de estabilidad de las muestras gaseosas.
Muestras Datos basados en el Brix (Como azcar invertida)
Muestras comerciales sin invertir
Colombiana Nacional
2 Horas 4 Horas 6 Horas 8 Horas
Promedio 10,542 10,551 10,558 10,573
Desv. Est. (s) 9,910E-04 2,673E-03 8,345E-04 2,532E-03
Varia. (s) 9,821E-07 7,143E-06 6,964E-07 6,411E-06
Muestras (n) 8 8 8 8
Ex. 0,000000 0,008875 0,016000 0,031000
SE (s=0,03) 0,015000 0,015000 0,015000 0,015000
t 0,591667 1,066667 2,066667
Niv. Signif. () 0,05 0,05 0,05
Grado Libertad 14 14 14
ttabla 2,1448 2,1448 2,1448
Efecto Significativo? No No No
Manzana Interior
Promedio 11,015 11,026 11,029 11,042
Desv. Est. (s) 7,440E-04 1,923E-03 4,121E-03 2,669E-03
Varia. (s) 5,536E-07 3,696E-06 1,698E-05 7,125E-06
Ex. 0,000000 0,011750 0,014250 0,027000
SE (s=0,03) 0,015000 0,015000 0,015000 0,015000
t 0,783333 0,950000 1,800000
Niv. Signif. () 0,05 0,05 0,05
101

ttabla 2,1448 2,1448 2,1448
Seven Up
Promedio 11,419 11,438 11,445 11,457
Desv. Est. (s) 4,440E-03 1,847E-03 1,753E-03 2,712E-03
Varia. (s) 1,971E-05 3,411E-06 3,071E-06 7,357E-06
Ex. 0,000000 0,019375 0,025750 0,037750
SE (s=0,03) 0,015000 0,015000 0,015000 0,015000
t 1,291667 1,716667 2,516667
Niv. Signif. () 0,05 0,05 0,05
ttabla 2,1448 2,1448 2,1448

A continuacin se muestran las grficas que dan soporte al anlisis anterior
(figuras 15, 16 y 17):

Figura 15. Estabilidad de la Colombiana Nacional a travs del tiempo.

102

Figura 16. Estabilidad de la Manzana Interior a travs del tiempo.

Figura 17. Estabilidad de la Seven Up a travs del tiempo.

Se puede observar la poca estabilidad de las muestras si se dejan
expuestas a las condiciones ambientales del laboratorio. En el tiempo
estudiado claramente se v un aumento en el valor reportado de Brix, esto
puede deberse a que al pasar las horas, el agua contenida en la bebida
puede volatilizarse de manera lenta, con lo que se aumenta levemente el
valor de los grados Brix.

103

Aunque segn el anlisis este aumento en el valor del grado Brix no es
significativo, se recomienda leer las muestras antes de que hayan
transcurrido 8 horas despues de abierta la muestra. Se debe tener en
cuenta que en el densmetro las muestras son servidas en un
automuestreador y que el anlisis de 20 muestras pueden demorarse entre
de 1 hora y media a 2 horas.

Test de normalidad para la estabilidad

Se hace necesario el test de normalidad para los datos obtenidos, este test
se realiz mediante la prueba de Shapiro Wilk, los resultados se muestran
a continuacin (tabla 67).

Tabla 67. Prueba de normalidad para la estabilidad de las muestras gaseosas.
Datos basados en el Brix (Como azcar invertida)
Colombiana Nacional
2 Hora 4 Hora 6 Hora 8 Hora
# Muestras 8 8 8 8
Promedio 10,542 10,551 10,558 10,573
S.C. 6,875E-06 5,088E-05 4,875E-06 4,487E-05
b 0,002448 0,006570 0,002017 0,006341
W 0,871951 0,848528 0,834935 0,896091
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818
Normalidad? Si Si Si Si
Manzana Interior
# Muestras 8 8 8 8
Promedio 11,015 11,026 11,029 11,042
S.C. 3,500E-06 2,587E-05 1,189E-04 4,988E-05
b 0,001701 0,004929 0,010689 0,006690
W 0,826783 0,938939 0,961133 0,897339
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818
Seven Up
# Muestras 8 8 8 8
Promedio 11,419 11,438 11,445 11,457
104

S.C. 1,380E-04 2,388E-05 2,150E-05 5,150E-05
b 0,011212 0,004640 0,004265 0,006516
W 0,910918 0,901841 0,846216 0,824331
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818

Los resultados muestran que hay normalidad en los datos estudiados.

7.3.4.2. Tiempo de desgasificacin

Inicialmente se realiz un test de normalidad en la evaluacin del tiempo
de desgasificacin estos resultados se muestran en la tabla 68.

Tabla 68. Normalidad de la prueba de Tiempo de desgasificacin.
Colombiana Nacional
8 min 10 min 12 min 14 min
# Muestras 8 8 8 8
Promedio 10,532 10,546 10,532 10,531
S.C. 1,009E-04 3,088E-05 6,888E-05 1,519E-04
b 0,008070 0,005420 0,007694 0,010285
W 0,646 0,951 0,859 0,697
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818
Normalidad? No Si Si No
Manzana Interior
# Muestras 8 8 8 8
Promedio 11,013 11,041 11,017 11,010
S.C. 7,150E-05 2,489E-04 1,309E-04 6,687E-05
b 0,007808 0,015384 0,009679 0,008095
W 0,853 0,951 0,716 0,980
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818
Normalidad? Si Si No Si
Seven Up
# Muestras 8 8 8 8
Promedio 11,495 11,425 11,427 11,433
S.C. 4,706E-03 1,795E-04 6,139E-04 3,890E-03
b 0,055215 0,013082 0,024325 0,052747
105

W 0,648 0,953 0,964 0,715
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818
Normalidad? No Si Si No

Esta variable es de suma imoprtancia debido a que si el tiempo de
descarbonatacin es muy bajo, puede haber presencia de CO2 en la
muestra, con lo cual se altera el resultado de la densidad y por ende el Bx.
Por otra parte, si el tiempo de descarbonatacin es muy prolongado, la
inyeccin de aire puede provocar la evaporacin del agua presente en la
muestra gaseosa lo que puede ocacionar errores en la lectura.

Como puede observase, los resultados de la normalidad muestran que en
algunos conjuntos de datos no hay normalidad, por lo tanto se plantea un
mtodo descrito en la lietratura que permite tratar datos dudosos y fuera
de rango [19]. Este mtodo, consiste en eliminar los datos que
posiblemente fueron alterados (datos dudosos o extraos) y realizar
nuevamente el test de Shapiro-Wilk. Los resultados obtenidos luego de este
procedimiento (ver tabla 69) se muestran a continuacin.

Tabla 69. Normalidad eliminando datos extraos o dudosos.
Colombiana Nacional Manzana Interior Seven Up
8 min 14 min 12 min 8 min 14 min
# Muestras 6 6 6 6 6
Promedio 10,533 10,533 11,019 11,506 11,420
S.C. 2,833E-06 2,833E-06 2,833E-06 1,320E-04 1,080E-04
b 0,001567 0,001567 0,001567 0,011418 0,009576
W 0,866 0,866 0,866 0,988 0,849
Wtabla 0,818 0,818 0,818 0,818 0,818
Normalidad? Si Si Si Si Si

De esta forma se comprueba la normalidad de los datos obtenidos en el
estudio de desgasificacin. Los resultados del anlisis de a diferentes
tiempos de desgasificacin se muestran en la tabla 70.

106

Tabla 70. Datos obtenidos de la prueba de robustez.
Muestras
Colombiana Nacional
Promedio 10,532 10,546 10,532 10,531
Desv. Est. (s) 3,796E-03 2,100E-03 3,137E-03 4,658E-03
Varia. (s) 1,441E-05 4,411E-06 9,839E-06 2,170E-05
Ex. 0,000000 0,014000 0,000000 -0,001500
SE (s=0,03) 0,0150 0,0150 0,0150 0,0150
t 0,000 0,933 0,100
Niv. Signif. () 0,05 0,05 0,05
ttabla 2,145 2,145 2,145
Manzana Interior
Promedio 11,013 11,041 11,017 11,010
Desv. Est. (s) 3,196E-03 5,963E-03 4,324E-03 3,091E-03
Varia. (s) 1,021E-05 3,555E-05 1,870E-05 9,554E-06
Ex. -0,003625 0,024000 0,000000 -0,006750
SE (s=0,03) 0,0150 0,0150 0,0150 0,0150
t 0,242 1,600 0,450
Niv. Signif. () 0,05 0,05 0,05
ttabla 2,145 2,145 2,145
Seven Up
Promedio 11,495 11,425 11,427 11,433
Desv. Est. (s) 2,593E-02 5,064E-03 9,365E-03 2,357E-02
Varia. (s) 6,722E-04 2,564E-05 8,770E-05 5,557E-04
Ex. 0,068625 -0,001375 0,000000 0,005875
SE (s=0,03) 0,0150 0,0150 0,0150 0,0150
t 4,575 0,092 0,392
Niv. Signif. () 0,05 0,05 0,05
ttabla 2,145 2,145 2,145
Efecto Significativo? Si No No

Como puede observarse, la mayora de los datos analizados no presenta
un efecto significativo variando el tiempo de desgasificacin. Sin embargo,
el ensayo del producto Seven Up a los 8 minutos mostr que a este tiempo
la desgasificacin es insuficiente, esto puede deberse a que hay presencia
de CO2 en la muestra, lo que conlleva a un error significativo en la lectura.
Por esta razn, se necesita de un tiempo mnimo de 10 minutos para llevar
a cabo esta operacin, en donde se presenta valores muy cercanos al
valor de referencia.
107

7.3.5. Selectividad

Siguiendo las recomendaciones para la preparacin de las soluciones
expuestas en las tablas 19 y 20, las preparaciones y las respuestas
obtenidas en trminos de Brix directo y brix invertido se muestran en la
tabla 71 y tabla 72 respectivamente.

Tabla 71. Preparacin de las soluciones con datos reales para anlisis de selectividad.
Solucin
Agua (g) Total (g)

1 7,0151 0,0000 0,0000 0,0465 0,1488 0,0000 92,7896 100,0000
2 7,0016 0,0000 0,0505 0,0458 0,1512 0,0000 92,7509 100,0000
3 6,9851 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,4874 92,5275 100,0000
4 6,9938 0,5218 0,0484 0,0472 0,0000 0,0000 92,3888 100,0000
5 7,0255 0,5570 0,0541 0,0000 0,1484 0,0000 92,2150 100,0000
6 7,0547 0,4765 0,0000 0,0000 0,0000 0,4532 92,0156 100,0000
7 13,0750 0,0000 0,0490 0,0000 0,0000 0,0000 86,8760 100,0000
8 13,0180 0,0000 0,0513 0,0449 0,0000 0,4561 86,4297 100,0000
9 13,0560 0,0000 0,0000 0,0000 0,1496 0,4467 86,3477 100,0000
10 12,9940 0,4962 0,0522 0,0000 0,1497 0,4523 85,8556 100,0000
11 13,0630 0,5106 0,0000 0,0452 0,0000 0,4512 85,9300 100,0000
12 12,9860 0,4978 0,0000 0,0449 0,1498 0,0000 86,3215 100,0000
Total 120,2678 3,0599 0,3055 0,2745 0,8975 2,7469 1072,4479 -

Tabla 72. Respuesta en trminos de Bx para las soluciones en el anlisis de selectividad.
Instrumento Densmetro
Solucin Respuesta en Brix dto Respuesta en Brix inv
1 7,024 7,500
2 7,226 7,605
3 7,119 7,491
4 7,475 7,866
5 7,594 7,995
6 7,121 7,803
7 13,101 13,792
8 13,276 13,886
9 13,054 13,731
10 13,394 14,117
11 13,414 14,125
12 13,307 14,005

Realizando una regresin mltiple por el mtodo de mnimos cuadrados, se
determinan las sensibilidades parciales y se reportan en la tabla 73.

108

Tabla 73. Sensibilidades parciales para los componentes presentes en las distintas soluciones.
Parmetros S11 S12 S13 S14 S15 S16 y0 r
2
Densmetro
Directo 1,0002 1.0851 1,3986 0,7235 0,1239 0,3877 -0,0038 0,99996
Invertido 1,0532 1,0399 1,2001 0,7270 -0,0301 0,3599 0,0812 0,9998

Las especificidades de cada una de las soluciones se pueden apreciar en
la tabla 74.
Tabla 74. Clculo de especificidades.
Equipo Densmetro
Solucin Spec (Adto) Spec (Ainv)
1 0,9926 0,9960
2 0,9828 0,9880
3 0,9737 0,9767
4 0,9128 0,9206
5 0,9096 0,9204
6 0,9106 0,9186
7 0,9948 0,9958
8 0,9789 0,9815
9 0,9855 0,9888
10 0,9417 0,9489
11 0,9449 0,9499
12 0,9565 0,9616

A partir de los clculos obtenidos en este estudio se observa claramente
que las especificidades calculadas para cada una de las soluciones
analizadas son mayores a 0,900; esto confirma una adecuada especifidad
del mtodo en la matriz de bebida gaseosa preparada.

El valor terico del factor de inversin total es de 1,0526. Las soluciones
invertidas aqu analizadas presentan una sensibilidad parcial respecto a la
sacarosa de 1,04428, desviandose ligeramente del valor terico (0,00832).

7.3.6. Estabilidad

El estudio de estabilidad de la muestra se hizo previamente en el estudio
de robustez.

7.3.7. Exactitud

La exactitud fue evaluada por medio de los datos obtenidos en el estudio
de linealidad y por los patrones de referencia. Los datos obtenidos de este
anlisis se muestran a continuacin.

109

Exactitud por datos de linealidad: Este anlisis est basado en los
datos obtenidos en el ensayo de linealidad. Ver tablas 62 y 63.
Exactitud debido a patrones: La calibracin del equipo se realiz
con agua ultra pura (ver Anexo 1, Anexo 7).

Los resultados de exactitud se observan en la tabla 75:

Tabla 75. Resultados de exactitud para calibracin con agua ultra pura.
Patrn T (C)
Densidad terica
(g/cm
3
)
# de
lecturas
Densidad
promedio (g/cm
3
)
Sesgo
(g/cm
3
)
Agua Ultra pura 20.000 0,998203 15 0,998205 0,000002

La verificacin se realiza mediante agua destilada y soluciones de
sacarosa (tablas 76 y 77)arrojando los siguientes resultados.

Tabla 76. Verificacin de los patrones en trminos de densidad.
Patrones T (C) Densidad
terica
(g/cm
3
)
# de lecturas Densidad
promedio
(g/cm
3
)
Sesgo (g/cm
3
)
Agua 20,000 0,998203 3 0,998183 -0,000020
7,000 Bx 20,000 1,025856 3 1,025833 -0,000023
10,000 Bx 20,000 1,038117 3 1,038119 0,000002
13,000 Bx 20,000 1,050641 3 1,050650 0,000009

Tabla 77. Verificacin de los patrones en trminos de Bx.
Patrones T (C) Bx terico # de
lecturas
Bx
promedio
% R Sesgo (Bx)
Agua 20,000 - 3 - - -
7,000 Bx 20,000 7,000 3 6,997 99,957 -0,003
10,000 Bx 20,000 10,000 3 10,002 100,020 0,002
13,000 Bx 20,000 13,000 3 13,002 100,018 0,002

Se puede decir en trminos generales que el SDA-M posee una exactitud
satisfactoria teniendo en cuenta que la incertidumbre reportada por el
fabricante es de 0,02 Bx en el rango de trabajo. Sin embargo, aunque en
algunos de los anlisis anteriores se obtuvieron valores por encima de esta
incertidumbre, eran cobijados por la incertidumbre de las mediciones
aceptadas por el Laboratorio Central de 0,03.

110

7.3.8. Precisin

7.3.8.1. Repetibilidad del mtodo

Los resultados que se tuvieron en el anlisis de repetibilidad del mtodo se
muestran en la tabla 78.

Tabla 78. Resultados de la repetibilidad del mtodo en el SDA-M.
Soft Drink Analyzer M
Brix directo Brix invertido
Concentracin (Bx) 7,003 10,004 13,000 7,371 10,530 14.736
Nmero de datos (n) 9 9 9 9 9 9
Promedio (Bx) 6,997 10,002 13,002 7,379 10,522 14,725
Desviacin estndar 0,00060 0,00100 0,00127 0,003240 0,002789 0,003644
Coeficiente de
variacin (%CV)
0,0086 0,0100 0,0098 0,0439 0,0265 0,0247

Puede notarse que las desviaciones estndares de las diferentes
mediciones en el anlisis de repetibilidad del mtodo no superan el criterio
establecido por el fabricante de 0,02 en Bx y mucho menos el
establecido en el laboratorio de 0,03 en Bx para este tipo de anlisis.

Por lo tanto, se puede concluir que el equipo no muestra desviaciones
significativas entre el valor reportado y el valor terico, al analizar varias
muestras de la misma concentracin.

Intervalo de confianza para el anlisis de la repetibilidad: El intervalo
de confianza puede calcularse mediante la siguiente expresin:

(

Los resultados se muestran a continuacin (tabla 79).

111

Tabla 79. Intervalos de confianza para el anlisis de repetibilidad.
Concentracin terica (Bx dto) Soft Drink Analyzer M
Instrumental Mtodo
7,003 N/A 6,997 0,000345
10,004 N/A 10,002 0,001029
13,000 N/A 13,002 0,001244
Concentracin terica (Bx inv) Soft Drink Analyzer M
Instrumental Mtodo
7,371 N/A 7,379 0,002825
10,530 N/A 10,522 0,002897
13,684 N/A 13,650 0,001384

para unos grados de libertad de 6 (G.L.=6).

7.3.8.2. Precisin intermedia

Los resultados obtenidos a partir del estudio de similitud de las varianzas se
muestran a continuacin (tabla 80 y tabla 81).

Tabla 80. Datos para el estudio de similitud de varianzas.
Analista 1 Analista 2
Concentracin (Bx inv) 7,368 14,736 7,368 14,736
Muestras - - - -
1 7,369 14,739 7,368 14,736
2 7,365 14,738 7,367 14,735
3 7,366 14,740 7,367 14,738
4 7,366 14,737 7,364 14,722
5 7,366 14,737 7,364 14,722
6 7,368 14,738 7,366 14,723
7 7,364 14,735 7,363 14,722
8 7,366 14,735 7,364 14,723
9 7,367 14,734 7,362 14,722
Promedio 7,366 14,737 7,365 14,727
Desviacin estndar 0,00150 0,00200 0,00206 0,00705
Varianza 2,250E-06 4,000E-06 4,250E-06 4,975E-05

Tabla 81. Resultados del estudio de similitud de las varianzas de los analistas.
Concentracin (Bx inv) 7,368 14,736
# de muestras por analista 9 9
Fexp 0,72761 0,28355248
4,43326 4,43326
F[1- 0,22557 0,22557
Grados de libertad 8 8
Varianzas iguales Si Si

112

Como Fexp<F(/2) significa que ambos mtodos tiene varianzas estimadas
iguales y por tanto, precisiones semejantes.

Por ltimo, el anlisis de precisin intermedia se completa comparando los
coeficientes de variacin obtenidos en las pruebas realizadas por cada
uno de los analistas. Estos resultados se muestran en la tabla 82.

Tabla 82. Comparacin de los coeficientes de variacin.
Criterio de comparacin del coeficiente de variacin (C.V. %)
Concentracin (Bx inv) 7,368 14,736
Analista 1 0,02143 0,01357
Analista 2 0,02862 0,04789
Total 0,02608 0,04884
2*C.V. (%) del mtodo 0,08280 0,04949
Cumple Si Si

Se puede observar que los coeficientes de variacin de cada uno de los
analistas implicados en el ensayo no superan el criterio de aceptacin
[2*C.V. (%) del mtodo]. Sin embargo, cabe resaltar que las desviaciones
estndar obtenidas por los analistas en cada ensayo son menores a los
valores establecidos de 0,02 y 0,03 en Bx, por tal motivo se puede asumir
que tanto la repetibilidad del mtodo as como la precisin intermedia
guardan similitud.

113

8. CONCLUSIONES

El estudio de validacin realizado en este trabajo muestra que el equipo
Soft Drink Analyzer-M (SDA-M) puede sustituir al densmetro DMA-58 en el
anlisis de Brix para las bebidas gaseosas y ser incluido en la evaluacin
mensual de calidad, los resultados estadsticos realizados con el test de
Fisher y el test de t-student, demostraron que entre los dos equipos no existe
una diferencia significativa de las lecturas reportadas para los grados Brix y
la densidad, en otras palabras, el SDA-M puede efectuar el anlisis de
grados Brix para las bebidas gaseosas sin llevar a cabo el proceso de
inversin total obteniendo los mismos resultados confiables y precisos que
los mostrados por el DMA-58 con el procedimiento normal de inversin, lo
que se traduce en un ahorro de tiempo a la hora de reportar los valores de
una variable fundamental como lo es el Brix, para mantener los estndares
de calidad de la compaa.

Se pudo comprobar tambin, que ambos equipo reportan el valor de Brix
basndose en la Tabla NBS y no en el ICUMSA como se crea
anteriormente. Este estudio mostr que para el rango de Brix trabajado,
ambas Tablas no poseen diferencias significativas que afectaran el valor
reportado de dicha variable, por lo que no hay inconveniente en reportar
el Brix con una u otra Tabla.

En trminos generales, los valores arrojados en esta validacin mostraron
que se cumplieron los criterios de aceptacin establecidos inicialmente, en
el anlisis de Robustez basado en el tiempo de desgasificacin se ratific
que el tiempo ptimo para esta operacin est entre 10 a 14 minutos,
tiempos menores como por ejemplo 8 minutos, conllevan a errores en las
lecturas de Brix para bebidas gaseosas con un nivel de carbonatacin alto
(Pepsi, Seven Up, entre otras). En trminos de estabilidad de la muestra, se
sugiere que los anlisis de Brix no superen las 8 horas luego de que las
muestras sean destapadas, esto con el fin de evitar datos errneos en las
lecturas, ya que se observ un cambio a razn de 0,01Bx cada 2 horas,
aunque este efecto no es significativo hay que tenerlo en cuenta por que
puede llevar a que una muestra quede por fuera del rango establecido
para cada producto.

114

Otro de los tems evaluados como lo es la Selectividad mostr que aunque
una bebida gaseosa posee otros componentes lo que se mide
principalmente es azcar (sacarosa), esto se debe a que los otros
componentes (acidulantes, enturbiante, colorante, etc.) se encuentran en
proporciones bajas en relacin al compuesto de inters (el azcar) y su
participacin en la lectura es mnima.

En relacin a la Linealidad se encontr que no se cumpla de forma
general, esto se debe a que el SDA-M cuenta con una muy buena
repetibilidad que se traduce en desviaciones numricamente bajas, lo que
implica valores altos en la prueba de Fisher. Con relacin al intercepto se
pudo observar que era diferente de cero, por lo que se incumpla con otro
criterio de linealidad, sin embargo, para el rango trabajado se muestra una
tendencia lineal, que es soportado por los coeficientes de correlacin y
de distribucin
los cuales presentan valores mayores a 0,999.

Por ltimo para la evaluacin de la Precisin del equipo basado en la
repetibilidad del mtodo y la precisin intermedia se encontr que los
valores de los coeficientes de variacin son inferiores al criterio de
repetibilidad establecido por el fabricante cuyo valor es de 0,02 y es
mucho menor al establecido por el Laboratorio Central De Postobn S.A.
para el anlisis del Brix cuyo valor es de 0,03.

Teniendo en cuenta los criterios aqu expuestos y los resultados obtenidos
en cada uno de ellos, dejan en consideracin la posibilidad de que el
equipo SDA-M pueda ser incluido en la evaluacin mensual de calidad
realizada en el Laboratorio Central De Postobn S.A. como sustituto del
densmetro DMA-58.

115

9. BIBLIOGRAFA

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Procedimiento de Validacin de Mtodos de Anlisis Fisicoqumicos
utilizados en el Laboratorio Central de Postobn S.A.; Universidad de
Antioquia; 2008.

[3] BEDOYA LORA, Franky Esteban; Homologacin de mtodos de anlisis
fisicoqumicos empleados en Postobn S.A. para materias primas y
producto terminado, y validacin del mtodo para la determinacin de los
grados Brix.; Universidad de Antioquia; 2009.

[4] EURACHEM; The Fitness for Purpose of Analytical Methods: A Laboratory
Guide to Method Validation and Related Topics; Primera Edicin; United
Kingdom; 1998. [Citado el 26 de septiembre de 2012].
Disponible en internet: http://www.eurachem.org

[5] Oficina de acreditacin Guatemala, C.A.; Poltica de seleccin y
validacin de mtodos de ensayos; [Citado el 27 de septiembre de 2012].
Disponible en internet:
http://www.mineco.gob.gt/mineco/calidad/acreditacion/ogagec016.pdf

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Edicin; United States of America; 2006.

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1975.

[8] IUPAC, ISO, AOAC INTERNATIONAL; Harmonized Guidelines for
Singlelaboratory Validation of Methods of Analysis; Pure Appl. Chem., Vol.
74; Budapest; 1999.

[9] Instituto de Salud Pblica. Validacin de mtodos y determinacin de
la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales sobre la validacin
de mtodos.; Primera edicin; Santiago de Chile, 2010.

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General Considerations and Attempt of a Definition and Quantification;
Fresenius J Anal Chem 2001; Springer-Verlag 2001.

[11] CHUNG CHOW Chan; HERMAN Lam; LEE Y. C.; XUE-MING Zhang;
Analytical method validation and instrument performance verification;
Editores John Wiley & Song, Inc; New Jersey, 2004.

[12] ANTON PAAR, Instruction manual: Soft Drink Analyzer M; Anton Paar
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[13] POSTOBN S.A., Normas Internas para Produccin y Anlisis
Fisicoqumicos de Postobn S.A.

[14] BOLVAR RUIZ, Mario; El Libro Blanco del Azcar, una historia de
proteccionismo; RIL Editores; Santiago de Chile 2005.

[15] MARTNEZ COVALEDA, Hctor J.; Agroindustria y Competitividad:
estructura y dinmica en Colombia 1992-2005; A.C. Graficolor; Bogot,
Abril de 2006.

[16] PERAFAN, Felipe; Azcar de Caa; Abril de 2005 [citado el 7 de
agosto de 2012].
Disponible en Internet: www.perafan.com/ea02azuc.html

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[18] MEJA OSPINA, Wilmar Alexander; Determinacin de los parmetros
de Brix invertido en refresco de fruta para la evaluacin de calidad de
Postobn S.A.; Universidad de Antioquia, 2008.

[19] DAZ, Abel; Diseo Estadstico de Experimentos; Editorial Universidad
de Antioquia; Primera edicin; Medelln; 1999.

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INFORME DE PRCTICA PROFESIONAL

VALIDACIN DEL MTODO PARA LA DETERMINACIN DEL BRIX INVERTIDO EN

aporta una mayor significancia estadstica, puesto que

Varianza de cada grupo K.

Varianza mxima de los K grupos.

significa que las varianzas de las concentraciones son

Nmero de rplicas en un grupo.

Suma de cuadrados debido a la regresin.

Variacin residual debida al error experimental dentro de los grupos

Clculo del error experimental (suma de cuadrados debido a las

Varianza del error experimental.

Clculo del error de regresin o de falta de ajuste (se debe a la

Suma de los cuadrados total.

Demuestra la existencia de una pendiente distinta a 0.

Demuestra la linealidad entre los resultados obtenidos.

es la seal o respuesta obtenida en el momento de cuantificar

es la concentracin del compuesto A en la muestra

representan la sensibilidad parcial de la

Es el valor promedio de los datos para esa concentracin.

Las varianzas de los analistas son iguales,

Las varianzas son distintas,

grados de libertad y un nivel de significancia de 5%.

Trminos de correccin por temperatura, viscosidad y no linealidad.

Periodo de oscilacin de las ondas sonoras recibidas.

Correccin por temperatura.

) para cada cambio en el

corresponde a la concentracin expresada en gramos

Agua (g) Total (g)

Agua (g) Total (g)

los cuales presentan valores mayores a 0,999.

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