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Qumica de los Alimentos

Volumen 95, Nmero 2 , marzo 2006, pginas 319-327


Actividades antioxidantes y antiproliferativos de pitaya roja
Li-chen Wu
,
, Hsiu-Wen Hsu ,Yun-Chen Chen ,Chih-Chung Chiu ,Yu-En Lin ,Ja-un Ho Annie
,

DOI: 10.1016 / j.foodchem.2005.01.002
Obtener los derechos y contenidos

Resumen
La pitaya rojo, rico en micronutrientes, ha generado recientemente una gran cantidad de inters de
los consumidores, por lo tanto, este documento fue diseado para estudiar el contenido fenlico
total, la actividad antioxidante y actividad antiproliferativa de pitaya roja en las clulas del
melanoma y para determinar si es una valiosa fuente de antioxidantes y un agente
anticancergeno. El contenido de fenoles totales de carne (42,4 0,04 mg de equivalentes de cido
glico (GAE) / 100 g de carne de peso fresco) y la cscara (39.7 5.39 mg de GAE / 100 g de
cscara de peso fresco) fueron similares. El contenido de flavonoides de la carne y la piel de no
varan mucho (7,21 0,02 mg vs 8.33 0.11 mg de equivalentes de catequina / 100 g de materia
de carne y cscara). Las concentraciones de betacianinas expresadas como betanina equivalentes
por 100 g de carne fresca y la cscara fueron 10,3 0,22 y 13,8 0,85 mg, respectivamente. La
actividad antioxidante, medida por el DPPH mtodo en el CE 50 , fue de 22,4 0,29 y 4,12 118
mu mol de vitamina C equivalentes / g de carne y extracto de piel seca; los valores de CE 50 ,
determinadas por el ABTS
+
enfoque, fueron 28,3 0,83 y 175 15.7 mmol de equivalentes Trolox
capacidad antioxidante (TEAC) / g de carne y extracto de cscara seca, respectivamente. El
estudio antiproliferativo sobre las clulas del melanoma B16F10 revel que la cscara (CE 50 25,0 g
de la materia cscara) componente fue un inhibidor ms fuerte del crecimiento de clulas de
cncer de melanoma B16F10 que la carne. Los resultados indicaron que la carne y la cscara son
ricos en polifenoles y eran una buena fuente de antioxidantes. La cscara de pitaya roja cumpli su
promesa de inhibir el crecimiento de las clulas del melanoma.
Abreviaturas
GAE , equivalentes cido glico ;
TEAC , capacidad antioxidante equivalente Trolox ;
CHD , enfermedad cardiaca coronaria ;
MTT , 3 (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio
Palabras clave
Compuestos fenlicos ;
Pitaya roja ;
Los polifenoles ;
La actividad antioxidante ;
DPPH , ABTS
+
;
Clulas de melanoma B16F10

1. Introduccin
Las principales causas de muerte en los Estados Unidos son las enfermedades cardiovasculares y
el cncer. Del mismo modo, en Taiwn, en torno al 27% de las muertes son por cncer y el 18% de
las muertes son por enfermedades cardiovasculares y del corazn ( Departamento de Salud Web,
2004 ). Se estim porWillet (1994) que aproximadamente el 32% (rango de 20% -42%) de las
muertes por cncer podra evitarse mediante modificacin de la dieta. Los estudios
epidemiolgicos han sugerido fuertemente que la dieta juega un papel importante en la prevencin
de las enfermedades crnicas ( Bauman, 2004 , Parillo y Riccardi, 2004 y Willet,
1995 ). Polifenoles, tioles, carotenoides, tocoferoles, y glucosinolatos se encuentran comnmente
en frutas, verduras y granos, proporcionar efectos quimioprotectores para combatir el estrs
oxidativo en el cuerpo y mantener el equilibrio entre oxidantes y antioxidantes para mejorar la salud
humana ( Adom y Liu, 2002 , Dragsted et al ., 1993 , Jia et al., 1999 y Wolfe et al., 2003 ). Un
desequilibrio causado por el exceso de oxidantes conduce al estrs oxidativo, lo que podra daar
el ADN y la protena y un mayor riesgo de enfermedades degenerativas como el cncer ( Farombi
et al., 2004 , Llpiz et al., 2004 , , Moller y Loft 2004 ,Sander et al., 2004 y van Meeteren et al.,
2004 ).
El consumo de frutas y verduras frescas, as como cereales, se ha asociado con un menor riesgo
de enfermedad cardiaca coronaria (CHD) ( Bazzano et al., 2003 , Joshipura et al., 2001 , Polidori,
2003 y Srinath Reddy y Katan, 2004 ), accidente cerebrovascular ( Gillman et al., 1995 y Voko et
al., 2003 ), los sntomas de la enfermedad pulmonar obstructiva crnica ( Fabricius y Lange,
2003 y Liu et al., 2004 ), y diferentes tipos de cncer, incluyendo cncer de mama y de ovario
cncer ( Duncan, 2004 , Hakimuddin et al., 2004 , Khanzode et al., 2004 y Larsson et al., 2004 ) y
cncer de colon ( Frydoonfar et al., 2003 y McCullough et al., 2003 ). Los compuestos
polifenlicos, ampliamente distribuidos en las plantas superiores, se han encontrado que tienen
potenciales beneficios para la salud que se cree que surgen principalmente de su actividad
antioxidante ( Liu, 2003 ). Existe un considerable inters cientfico y pblico en el importante papel
que los antioxidantes pueden desempear en la atencin de la salud, como por ejemplo, actuando
como quimiopreventivo del cncer y agentes anti-inflamatorios y por la reduccin del riesgo de
mortalidad cardiovascular ( Cos et al., 2004 y Siddiqui et al. , 2004 ). Numerosos estudios han
informado de la antioxidante y actividades antiproliferativas de diferente fresco produce, tales como
manzanas ( Wolfe et al., 2003 ), semillas de uva ( Calliste et al., 2001 y Chidambara Murthy et al.,
2002 ), las fresas ( Meyers, Watkins , Pritts, y Liu, 2003 ), las verduras comunes ( Chu, Sun, Wu, y
Liu, 2002 ), frutos de arndano ( Gunes, Liu, y Watkins, 2002 ), y las frambuesas ( Liu et al.,
2002 ). Sin embargo, la actividad antioxidante de algunos alimentos de origen vegetal no ha sido
bien estudiado. Por lo tanto, de inters la investigacin de sus caractersticas antirradicales es,
principalmente para descubrir nuevas fuentes prometedoras de antioxidantes naturales, alimentos
funcionales, y nutracuticos.
Los frutos de Hylocereus cactus, conocida como pitaya roja o pitahaya, han llamado recientemente
la atencin de los productores en todo el mundo, no slo por su color rojo-prpura y valor
econmico como productos alimenticios, sino tambin por su actividad antioxidante de los
contenidos betacianina (Wybraniec y Mizrahi, 2002 ). El Hylocereus gnero consiste en la escalada
o epfitas cactus de Amrica tropical con angular tallos y en su mayora blancos, que florece de
noche, flores fragantes. La pitaya, fruto de algunas cepas de esta familia de los cactus, que es
nativa de las regiones de bosques tropicales de Mxico y Amrica Central y del Sur ( Mizrahi Nerd,
y Nobel, 1997 ) y se menciona como una fruta azteca popular en documentos histricos, tiene un
largo linaje en el hemisferio occidental. La piel est cubierta por brcteas, o "escalas" - de ah el
nombre de la fruta de dragn. Ellos estn siendo cultivadas actualmente en el comercio en Taiwn,
Nicaragua, Colombia, Vietnam, Israel, Australia y los EE.UU..
En cactus, los pigmentos de frutas ms importantes son los betacianinas y betaxantinas
( Wybraniec et al., 2001 ). Betalanas, compuestos por betacianina rojo-violeta y betaxantinas
amarillas, son pigmentos solubles en agua que proporcionan los colores de las flores y los
frutos. El conocido betacianina pigmentos de Hylocereus polyrhizus carne se betanina, phyllocactin
(6'- O -malonylbetanin), y un betacianina, hylocerenin recientemente descubierta (de 5 O - [6'- O -
(3 "hidroxilo-3" -metil- glutaril) -- D -glucopiranosido) ( Wybraniec y Mizrahi, 2002 y Wybraniec et
al., 2001 ). Betacianina, con 5- O -glicsidos (betanina) o 6 O -glicsidos, se detecta comnmente
en las plantas. Ms complicado-esterificacin de 5- O -glicsidos con cidos tales como
hidrocinmico ferlico o p cidos -coumaric ( Strack, Steglich, y betalanas, 1993 ) y cido malnico
( Kobayashi et al., 2000 y Minale et al., 1996 tienen) tambin han estudiado.
Se ha informado de que betalainas de Amaranthus ( Cai, Sun, y Corke, 2003 ) y las races de
remolacha (Escribano, Pedreo, Garca-Carmona, y Muoz, 1998 ) demostraron actividad
antirradical y antioxidante.Betanina, a partir de remolacha roja, inhibe eficazmente la peroxidacin
lipdica y la descomposicin del hemo, lo que sugiere que estos pigmentos pueden proporcionar
cierta proteccin contra la oxidacin trastornos relacionados con el estrs ( Kanner, Harel, y Granit,
2001 ). Polifenoles, por otro lado, juegan un papel importante en la actividad antioxidante ( Wu,
Chen, Ho, y Yang, 2003 ). Ellos han demostrado evidentemente actividad antiproliferativa o
citotoxicidad para las clulas humanas de cncer orales (Seeram, Adams, Hardy, y Heber, 2004 ),
clulas de melanoma ( Rodrguez et al., 2002 ), y metstasis de pulmn inducida por clulas de
melanoma B16F10 ( Menon, Kuttan, y Kuttan, 1995 ).
Se han hecho esfuerzos para estudiar la qumica de betalanas en H. polyrhizus ( Stintzing FC et
al, 2004. ,Wybraniec et al, 2001. y Wybraniec y Mizrahi, 2002 ); Sin embargo, hay poca
informacin disponible sobre su contenido fenlico, actividad antioxidante, y la actividad
antitumoral. Los objetivos de este estudio fueron evaluar la calidad nutricional de la carne roja
componente pitaya y la cscara. Contenido fenlico total, capacidad antioxidante y efecto
antiproliferativo sobre las clulas del melanoma B16F10 se cuantificaron y compararon con
aquellas caractersticas de la betanina en relacin a la misma clula de cncer. Adems, tambin
se pudo determinar si la cscara de pitaya roja, el producto de desecho de la fabricacin de jugos,
podra ser utilizado como una alternativa potencial para diversas fuentes de nutrientes o
antioxidantes para mejorar la salud humana.
2. Materiales y mtodos
2.1. Productos Qumicos
Reactivo de Folin-Ciocalteu, nitrito de sodio, catequina, cido glico, Sephadex G-25, MTT (3 [4,5-
dimetiltiazol-2-il] -2,5-difeniltetrazolio), y todos los dems productos qumicos y disolventes
orgnicos se comprado a Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). LH-20 se obtuvo de Amersham
Biosciences (Uppsala, Suecia). Papel de filtro Whatman No. 1 fue comprado de Fisher Scientific
(Fair Lawn, Nueva York).Acetonitrilo de grado HPLC y cido actico procedan de Merck
(Darmstadt, Alemania). Las clulas de melanoma B16F10 se obtuvieron de la Coleccin Americana
de Cultivos Tipo (ATCC) (Rockville, MD). Suero bovino fetal (FBS) se adquiri de Gibco Life
Technologies (Grand Island, NY), y el estndar betanina se obtuvo de TCI (Tokio, Japn).
2.2. Preparacin de la muestra
Red pitaya, H. polyrhizus , utilizada en este estudio se obtuvo a nivel local a partir de cuatro
porciones de frutas (Puli, Nantou, Taiwan), que se lavaron y se almacenan a -20 C antes del
anlisis. La fruta se pel antes del anlisis. El contenido fenlico, de los diferentes componentes de
pitaya rojo, se determin mediante la extraccin de 50 g de los componentes de carne y cscara
con 200 g de solucin enfriada acetona 80% en un mezclador Waring durante 10 min ( Wolfe et al.,
2003 ). La suspensin se filtr a travs de papel de filtro Whatman N 1 en un embudo Buchner
bajo vaco. Los slidos se volvieron a extraer con 150 g de acetona al 80% y se homogeneizaron
de nuevo por un adicional de 5 min antes de refiltrando.Despus, el filtrado se evapor usando un
evaporador rotorary a 45 C hasta menos de 10% del volumen inicial se mantuvo. El extracto se
sec por congelacin y se congelaron a -70 C antes del anlisis.
2.3. Determinacin del contenido total de fenlicos
El contenido total de fenlicos de muestras de carne y piel de pitaya roja se determinaron usando
un mtodo de Folin-Ciocalteu modificado ( Wolfe et al., 2003 ). Una parte alcuota de 125 l de una
dilucin conocida del extracto se aadi al tubo de ensayo y se combin con 0,5 ml de reactivo de
Folin-Ciocalteu. Los tubos se agitaron con vrtex durante 15 s y luego se dej reposar durante 6
min a 20 C. Acerca de 1,25 ml de solucin de carbonato sdico al 7%, entonces se aadi a los
tubos de ensayo, y la mezcla se diluy con 3 ml con agua destilada, desionizada. Color
desarrollado durante 90 min, y la absorbancia se midi a 760 nm usando el Hewlett Packard
espectrofotmetro UV-Vis (Palo Alto, CA). La medicin se compara con una curva estndar de
soluciones de cido glico preparados y se expresa como equivalentes de cido glico en
miligramos. Determinaciones por triplicado se realizaron en cada muestra; datos que se muestran
ms adelante representan las medias de tres mediciones.
2.4. Determinacin del contenido de flavonoides (ensayo de la vainillina-HCl)
La cantidad de flavonoides (taninos condensados) se midi por el ensayo de la vainillina ( Price,
van Scoyoc, y Butler, 1978 ). Alcuotas de un mililitro de extractos de cscara y carne fueron
dispensadas en tubos de ensayo. Los tubos se incubaron en el bao de agua a 30 C. Se
aadieron cinco mililitros del reactivo de vainillina (1% de vainillina en metanol) a intervalos de 1,0
min para un conjunto de muestras, y se aadieron 5,0 ml de la solucin de HCl 4% a intervalos de
1,0 min para el segundo conjunto de muestras.Despus de 20 min de incubacin, se extrajeron las
muestras y la absorbancia a 500 nm se ley. El contenido de taninos condensados (flavonoide) se
expres como equivalentes de catequina en miligramos.Determinaciones por triplicado se
realizaron en cada muestra; datos que se muestran ms adelante representan las medias de tres
mediciones.
2.5. La cuantificacin de betacianinas
Red contenido de pigmento pitaya se midi de una manera similar a la descrita por Wybraniec y
Mizrahi (Wybraniec y Mizrahi, 2002 ). El contenido betacianina de extractos secos, determinado por
el mtodo espectrofotomtrico, se calcula y se expresa como betanina equivalentes (mg / 100 g de
materiales frescos) por las siguientes frmulas: concentracin de betacianinas (mg / g de peso
extractos secos) = A 538 ( MW)V (DF) 100 / LW . A 538 es la absorbancia a 538 nm
( max ); L (longitud del camino) = 1,0 cm; DF es el factor de dilucin; V es el volumen de la solucin
de pigmento (ml); W es el peso pigmento seco (g). Para betanina, (coeficiente de extincin molar)
= 65.000 y PM = 550. contenido de pigmento individuales fue expresado como el porcentaje de
rea del pico determinado por HPLC.
2.6. Determinacin del contenido de antocianina
Se midi el contenido de antocianina monomrica de componentes de carne pitaya y cscara roja
utilizando un protocolo de diferencial de pH espectrofotomtrico ( Boyles y Wrolstad, 1993 ). Los
extractos de cscara de pitaya y carne roja se mezclaron a fondo con cloruro de potasio 0,025 M
(pH 1,0) en una dilucin conocida. La absorbancia de la mezcla se midi a 515 y 700 nm utilizando
agua destilada a cero el espectrofotmetro. Los extractos de cscara de pitaya y carne roja se
combinaron despus con 0,4 M de tampn de acetato de sodio (pH 4,5), y las absorbancias se
midieron a las mismas longitudes de onda. La absorbancia de la muestra diluida ( A ) era como
sigue: A = ( A 515 - A 700 ) pH 1,0 - ( A 515 - A 700 ) pH 4,5.El contenido de antocianina se calcul
como el total de pigmento antocianina monomrica (mg / litro) = ( A MW 1000 DF) / ( 1),
donde A es la absorbancia de la muestra diluida y DF es el factor de dilucin.MW y en esta
frmula se corresponden con la antocianina predominante en la muestra. Dado que la composicin
de la muestra era desconocido, se calcul el contenido de pigmentos como cianidina-3-glucsido,
donde MW = 449,2 y = 26.900.
2.7. Determinacin cromatogrfica de betanina
Betanina estndar, que contiene betanina y isobetanin, se obtuvo comercialmente y se prepar en
un procedimiento de dos etapas antes del anlisis HPLC ( Wybraniec y Mizrahi,
2002 ). Brevemente, los extractos se separaron primero por filtracin en gel en una columna
Sephadex G-25 (40 x 2,2 cm) pre-equilibrada con cido actico al 1%. Las fracciones de cido
actico al 1%, eluyeron a un caudal de 1,0 ml / min, se recogieron y examinaron
espectrofotomtricamente a 538 nm para la presencia de betanina. Las fracciones con absorbancia
538 nm se recogieron y se liofilizaron para una purificacin adicional. El residuo se volvi a disolver
en agua y posteriormente se purific en una columna LH-20 (40 x 2,2 cm) con agua como
eluyente. Las fracciones que mostraban 538 nm de absorbancia se recogieron y se liofilizaron para
anlisis por HPLC.
Un mtodo de cromatografa lquida de alto rendimiento fue empleado para analizar el contenido
betanina de cscara y carne componentes de pitaya roja ( Wybraniec y Mizrahi, 2002 ). Un sistema
Agilent 1100 de cromatografa de lquidos (Palo Alto, CA), equipado con un detector de matriz de
fotodiodos y un Rheodyne (Cotati, CA) modelo 7125 con un inyector de bucle de muestra de 20 l,
se utiliz, junto con un Agilent ChemStation para LC. Integracin de la seal final se realiz con la
Agilent ChemStation para LC se ejecuta en un ordenador Pentium-4. Un Hypersil ODS (Supelco
Inc., Bellefonte, PA), 5 m, la columna de ID 250 4,6 mm se utiliz para determinar el contenido de
betanina, y el programa de elucin consisti en un 35 min de elucin isocrtica de 90% de
disolvente A (0,5% acuosa de TFA en agua) con 10% de disolvente B (acetonitrilo) con un flujo de
0,5 ml / min. Para cada anlisis, 15 l de los extractos filtrados se inyect directamente en la
columna cromatogrfica. Las identidades de los diferentes picos cromatogrficos fueron
confirmadas por sus caractersticas espectrales visibles en comparacin con los estndares y
tiempos de retencin.
2.8. DPPH la actividad de captacin de radicales
Una alcuota de 0,1 ml del extracto de acetona preparada anteriormente se mezcl con 3,9 ml de
un 80% etanlica 0,6 mM DPPHsolucin. Los tubos se agitaron con vrtex durante 15 s y se
dejaron reposar durante 180 min, como se describe por Cai et al. (2003) , despus de lo cual se
midi la absorbancia de la mezcla a 515 nm utilizando el Hewlett Packard espectrofotmetro UV-
Vis (Palo Alto, CA). Los compuestos ms probados deben hacerse reaccionar completamente
dentro de 180 min en esta condicin ( Cai et al., 2003 ) y el tiempo de reaccin para la vitamina C
es de menos de 1 min debido a su rpida oxidacin. Etanol (80%) se utiliz como una solucin en
blanco y DPPH solucin sin muestras de ensayo (3,9 ml de DPPH + 0,1 ml de etanol al 80%) sirvi
como el control. Todas las pruebas se realizaron por triplicado. La actividad antioxidante de las
muestras de ensayo se expres como (i) la concentracin efectiva media para la actividad de
captacin de radicales (CE 50 ): fenoles totales (mg) de antioxidante (muestra de ensayo)
necesarios para una disminucin del 50% en absorbancia de DPPH radicales, y (ii) la inhibicin
(%) de DPPH= absorbancia ( A de control - A prueba ) x 100 / A de control . Una parcela de absorbancia de
DPPHse hizo vs.concentration de antioxidante para establecer las curvas estndar (curvas de
dosis-respuesta) y para calcular CE 50 . Una de control es la absorbancia del control (DPPHsolucin sin
la muestra de ensayo), yuna prueba es la absorbancia de la muestra de ensayo (DPPHsolucin ms
0,1 ml de compuesto de ensayo 5 M). La vitamina C sirve como un estndar, y los resultados del
ensayo se expresaron en relacin a la vitamina C equivalente.
2.9. ABTS
+
ensayo
Para ABTS
+
generacin de la sal ABTS, 2,45 mM de persulfato de potasio (K 2 S 2 O 8 ) se hizo
reaccionar con la sal 7 mM de ABTS en 0,01 M de solucin salina tamponada con fosfato, pH 7,4,
durante 16 h a temperatura ambiente en la oscuridad. El ABTS resultante
+
catin radical se diluy
con 0,01 M de solucin salina tamponada con fosfato, pH 7,4, para dar una absorbancia de
alrededor de 0,70 a 734 nm. El patrn y los extractos de cscara pitaya roja y carne de muestra se
diluyeron 100 X con el ABTS
+
solucin a un volumen total de 1 ml y se dej reaccionar durante 3
min ( Re et al., 1999 ). La absorbancia se midi espectrofotomtricamente a diferentes intervalos
de tiempo. Control (sin un estndar o muestra) se utiliz como blanco y 990 l de PBS se aadieron
a estas muestras de control en su lugar. Trolox, el -tocoferol soluble en agua (vitamina E)
analgicos, sirvi como un estndar, y los resultados del ensayo se expresa en relacin con Trolox
en trminos de TEAC (Trolox capacidad antioxidante equivalente).
2.10. Determinacin de la inhibicin de la proliferacin de clulas de melanoma B16F10
Los extractos de las muestras de carne y piel de pitaya roja se utilizaron para medir su capacidad
para inhibir la proliferacin de clulas de melanoma B16F10 ( Nakano et al., 1998 ). Los cultivos
celulares se expusieron a diversas concentraciones de los extractos durante un perodo de
crecimiento de 48 h. La proliferacin celular se mide por la capacidad de clulas viables para
reducir 3 (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT) en formazn, cuya absorbancia puede
ser analizado espectrofotomtricamente a 570 nm. Todas las mediciones se realizaron por
triplicado. La absorbancia se midi usando el Hewlett Packard espectrofotmetro UV-Vis (Palo Alto,
CA). La dosis efectiva media (CE 50 ) se determin y se expres como miligramos de carne pitaya
roja y muestras de cscara SD.
2.11. El anlisis estadstico
Los resultados se expresan como la media desviacin estndar de tres repeticiones. De
Student t test fue utilizado para el anlisis estadstico de la diferencia observada.
3. Resultados y discusin
3.1. Contenido de compuestos fenlicos
El contenido total de fenlicos de la carne y piel de la pitaya roja se midieron de acuerdo con el
mtodo de Folin-Ciocalteu. El reactivo de Folin-Ciocalteu determina fenoles totales (y otras
sustancias fcilmente oxidables), produciendo un color azul mediante la reduccin de aniones
amarillo heteropolyphosphomolybdate-tungstato. Este mtodo proporciona una medida general de
contenido fenlico, ya que no es completamente especfica para compuestos fenlicos y no todos
los compuestos fenlicos presentan el mismo nivel de actividad en el ensayo. Los fenlicos se
extrajeron de carne pitaya roja o la cscara con un 80% de acetona. El contenido total de fenlicos
extrables fueron 42,4 0,04 y 39,7 5,39 mg de GAE / 100 g de carne y la cscara,
respectivamente. Las cantidades de fenoles totales por cada 100 g de carne o pieles fueron
similares, mientras que las cantidades de fenoles totales por gramo de extracto de carne y la
cscara fueron 4,55 0,03 y 25,4 2,10 mg de GAE, respectivamente. Aunque el contenido
fenlico total por gramo de extracto en la cscara fue de alrededor de seis veces ms que en la
carne, el rendimiento de los extractos del mismo peso de las materias primas (9,91 y 1,56 g de 100
g de materias primas) disminuy las diferencias en total compuestos fenlicos. Es probable que
algunos de los compuestos fenlicos no fueron co-extrados de carne, la cual bulked el extracto.
Betacianinas, los pigmentos que se encuentran en Hylocereus cactus, tambin contribuyeron a los
fenoles totales, debido a una estructura de fenol en la molcula. Las concentraciones de
betacianinas, expresados como equivalentes de betanina en carne y la cscara, fueron 10,3 0,22
y 13,8 0,85 mg / 100 g de carne y la cscara, respectivamente. El cromatograma HPLC de
betacianinas de carne de la fruta y la cscara despus de la purificacin se fij en 538 nm en la
figura. 1 . Al menos cuatro tipos diferentes de betacianinas se separaron por el C 18 columna y
detectados por el fotodiodo detector de matriz del sistema de HPLC.Mediante la comparacin con
estndares obtenidos comercialmente betanina, picos 1 y 1 'se betanina y isobetanin con tiempos
de retencin de 6,5 y 8,3 min, respectivamente. Era probable que el pico 2 es una contribucin de
phyllocactin ( t R = 15.7 min) si se compara con los resultados de Wybraniec y Mizrahi (Wybraniec
y Mizrahi, 2002 ), lo que represent el ms abundante clase de betacianina en la carne y la
cscara (51% y 58%, respectivamente). El porcentaje de isobetanins (1,3%) en Peel fue menor que
en la carne (4,4%).

Higo. 1.
Cromatgrafos HPLC de betacianinas de carne de H. polyrhizus (a) y la cscara (b). Pico 1 representa
betanina (tiempo de retencin: 6,5 min); Pico 1 'se isobetanin (tiempo de retencin: 8,3 min).
Opciones Figura
El contenido de flavonoides de carne y la cscara fueron 7,21 0,02 y 8,33 0,11 mg de
equivalentes de catequina / 100 g de carne y la cscara, respectivamente. El contenido de
flavonoides por gramo de extracto en la cscara eran aproximadamente cinco veces mayor que los
de carne (5,33 0,31 frente a 0,77 0,02 mg equivalentes de catequina), que fue similar a los
resultados de medir el contenido fenlico total. Sin embargo, no se detectaron antocianinas. El
nivel no detectable de antocianinas en pitaya roja podra ser debido a la ausencia de antocianina
monomrica en pitaya roja. El color rojo-violeta de pitaya roja podra ser atribuido a betacianinas,
pero no a anthrocyanin. Betacianinas son una clase de pigmentos solubles en agua que
proporcionan los colores en una amplia variedad de flores y frutas ( Strack, Vogt, y Schliemann,
2003 ).Ellos no se pueden encontrar en las plantas que contienen pigmentos de antocianina, y
estructuralmente no estn relacionados. Poco se sabe sobre el papel de betacianina, y la ganancia
y la prdida de antocianinas y betalainas durante la evolucin de plantas siguen siendo un misterio
( Clemente y Mabry, 1996 ).
3.2. Evaluacin de la actividad antioxidante
De los varios mtodos para la medicin de la actividad antioxidante que podran haber sido
utilizados, tales como DPPH ( Cai et al., 2003 ), TEAC ( Miller, Rice-Evans, Davies, Gopinathan, y
Milner, 1993 ), TOSC (Winston, Regoli, Dugas, Fong, y Blanchard, 1998 ), ORAC ( Cao, Alessio, y
Cutler, 1993 ), FRAP ( Pulido, Bravo, y Saura-Calixto, 2000 ), y TRAP ( Ghiselli, Serafini, Maiani,
Azzini, y Ferroluzzi, 1995 ), el DPPH enfoque y ABTS
+
ensayo de captacin de radicales fueron
escogidos para este estudio. El DPPH enfoque es simple y ampliamente aplicado para la medicin
de la actividad antioxidante de los polifenoles y colorantes ( Cai et al., 2003 y Shi y Le Maguer,
2000 ). El ABTS
+
ensayo de captacin de radicales, que emplea una absorbancia especfica a una
distancia de longitud de onda de la regin visible y requiere un tiempo de reaccin corto ( Lee, Kim,
Lee, & Lee, 2003 ), puede ser utilizado tanto en sistemas de disolventes orgnicos y acuosos. Se
sugiere que el ABTS
+
enfoque es mejor para la evaluacin de la actividad antioxidante de
fitoqumicos fenlicos que el DPPH ensayo antioxidante con ( Awika, Rooney, Wu, Prior, y
Cisneros-Zevallos, 2003 ).
La relacin entre el contenido fenlico y la capacidad antioxidante de la carne y la cscara de
pitaya se muestra en la fig. 2 . Patrones similares se encontraron en la actividad antioxidante
medida por ABTS
+
ensayo. Las concentraciones eficaces (CE 50 ) determinado por la actividad de
radicales DPPH de captacin para la carne y la cscara fueron 22,4 0,29 y 4,12 118 mu mol
equivalentes de vitamina C / g de extracto seco, respectivamente, y los valores de CE 50 para el
enfoque ABTS fueron 28,3 0,83 y 175 15.7 mmol TEAC / g de extracto seco,
respectivamente. Extracto de piel fue un mejor antioxidante que la carne debido a su ligeramente
mayor contenido de polifenoles. Se encontr que el aumento en el contenido fenlico de los dos
extractos de carne y la cscara que se correlaciona linealmente con la capacidad antioxidante. En
el DPPH ensayo, como los compuestos fenlicos totales aumentaron 0,7 a 3,5 mg de equivalentes
de cido glico de carne y 0,12 a 0,6 mg equivalentes de cido glico de la cscara, el porcentaje
de actividad de los radicales de captacin de ambos aument linealmente aproximadamente 4,8
veces ( R
2
= 0,99 ).

Higo. 2.
La actividad antioxidante de Hylocereus cactus determinada por DPPH . (A) carne; (B) la cscara.
Opciones Figura
Los fenlicos tambin influyen en la medicin antioxidante-actividad. Interfieren con el proceso de
oxidacin por reaccin con radicales libres, quelantes de metales catalticos, y barrido de
oxgeno. El efecto de la carne y la cscara sobre la actividad antioxidante podra ser el resultado
de los tipos de polifenoles que contenan. Un aumento en el nmero de grupos hidroxilo (-OH) u
otros grupos donadores de hidrgeno ( NH, SH) en la estructura molecular condujo a una mayor
actividad antioxidante ( Cai et al., 2003 ). Betanins contienen grupos imino y grupos hidroxilo y
contribuiran actividad antioxidante, lo que podra explicar, en parte, que la cscara es un mejor
antioxidante debido al mayor nivel de betanina en la cscara.
3.3. Efecto inhibidor de los extractos sobre la proliferacin de clulas de melanoma
B16F10
Ensayo de MTT se utiliz para estudiar la actividad antiproliferativa de pitaya roja. MTT se reduce a
un formazn prpura insoluble por deshidrogenasa mitocondrial. La actividad proliferativa celular
se midi por comparacin de la formacin de color prpura. Las clulas muertas, por otro lado, no
forman el formazn prpura debido a su falta de la enzima. El efecto de la carne pitaya roja y
cscara en el crecimiento de las clulas B16F10 in vitro se muestra en la fig. 3 (a). Las clulas se
cultivaron durante 48 h con varios niveles de extractos de carne o cscara. Las curvas muestran
que el crecimiento de clulas cancerosas de melanoma se inhibi de una manera dependiente de
la dosis. El valor de CE 50 de la actividad antiproliferativa del extracto de piel era 10,0 g de GAE
(25,0 mg de materia cscara), mientras que la CE 50valor de la carne no puede ser calculado a
partir de la curva de dosis-respuesta. La diferencia puede atribuirse a los diferentes tipos de
polifenoles presentes en las muestras. La evidencia indica que los flavonoides hidroxilados sin el
doble enlace C2-C3 no podan inhibir el crecimiento de lneas celulares de melanoma, tales como
B16F10, mientras que la presencia de al menos tres grupos metoxilo adyacentes conferira un
efecto antiproliferativo ms potente ( Rodrguez et al., 2002 ). Adems, los flavonoides, tales como
miricetina, baicalena, y cido glico inhibieron significativamente el crecimiento de B16F10
despus de 72 h de exposicin. Se ha sugerido que la presencia de un doble enlace-C2 C3 y tres
grupos hidroxilo adyacentes en la A-flavonoide o B-anillos confiere mayor actividad antiproliferativa
a la flavonoide ( Martnez et al., 2003 ). Betanina tambin tendra una influencia en el efecto
antiproliferativo. Como la fig. 3 (b) indica, con el aumento de la concentracin de betanina, se
observ mayor efecto inhibitorio. Esto podra ser debido a los efectos estructurales moleculares
similares a los observados en flavonoides.

Higo. 3.
La inhibicin de la proliferacin de las clulas del melanoma B16F10 por los extractos fitoqumicos
de Hylocereus cactus carne () y la cscara () (a) y betanina (b). El crecimiento de las clulas de los
grupos tratados se estandarizaron con el grupo control sin tratar como A / A 0 (%), donde A es el valor
de A 570 generado a una concentracin dada de extractos o betanina mediante el ensayo de MTT, y un 0 es
del grupo control no tratado .
Opciones Figura
En resumen, se encontraron cantidades considerables de compuestos fenlicos en carne pitaya
roja y cscara. Para nuestro conocimiento, esta es la primera vez que se han medido el contenido
fenlico total y la actividad antioxidante de carne pitaya roja y la cscara. Nuestros resultados
mostraron que, adems de las semillas de la uva, la cscara de pitaya roja, un producto de
desecho no comestibles de fabricacin de jugo, podra ser otra buena fuente de antioxidantes y un
agente antimelanoma. Residuos pitaya cscara debe ser considerado como un producto valioso y
tiene potencial como un ingrediente de valor aadido econmico que pueden ayudar en la
prevencin de enfermedades crnicas.
Agradecimientos
Los autores agradecen el apoyo financiero del Consejo Nacional de Ciencia de Taiwn, NSC el
Programa Comn de Investigacin Taichung General de Veteranos de la Universidad Hospital
Nacional Chi Nan-bajo 92-2113-M-260-012 y Grant TCVGH-NCNU-92-79- 06.
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