VALIDACIN DE

MTODOS ANALTICOS
Anlisis Espectrofotomtrico



ELABORADO POR:

Domnguez Prez Julio Csar
Miranda Arreola Pedro de Jess
Miranda Rivera Jorge Izhak
Moran Torres Adriana
Muiz Morales Edith
Prez Garca Gabriela Ivonne
3 DE ABRIL DEL 2014

Catedrtico: Alejandra Tovar Corona

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NDICE

Objetivo ----------------------------------------------------------------------------------- 2
Introduccin ------------------------------------------------------------------------------ 2
Por qu es necesaria la validacin de un mtodo?-------------------------- 3
Terminologa ---------------------------------------------------------------------------- 4
Normatividad de la validacin ------------------------------------------------------- 6
Parmetros de validacin de mtodos analticos ------------------------------ 8
Selectividad ------------------------------------------------------------------------------ 8
Exactitud ---------------------------------------------------------------------------------- 8
Precisin --------------------------------------------------------------------------------- 9
Sensibilidad ----------------------------------------------------------------------------- 9
Linealidad y margen de error (rango) -------------------------------------------- 10
Lmite de deteccin-------------------------------------------------------------------- 10
Lmite de deteccin LOD------------------------------------------------------------- 11
Lmite de deteccin LOQ------------------------------------------------------------- 11
Robustez ----------------------------------------------------------------------------------11
Curva de calibracin--------------------------------------------------------------------12
Qu hay acerca del costo?----------------------------------------------------------13
Manejo de datos y errores experimentales--------------------------------------- 14
Conclusin --------------------------------------------------------------------------------15
Bibliografa --------------------------------------------------------------------------------15

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OBJETIVOS

Dar a conocer la funcin de la validacin en la garanta de calidad y las buenas
prcticas de laboratorio.
Definir la validacin de un mtodo y su importancia.
Cmo se lleva a cabo la validacin?
Manejo de datos.

INTRODUCCIN

La validacin de mtodo es el proceso de documentar o probar que un
mtodo analtico proporciona datos analticos experimentales aceptables para su
uso determinado. Estas son pruebas normalizadas que darn acreditacin y
confiabilidad al laboratorio que las lleve a cabo.
Las buenas prcticas de laboratorio han sido establecidas por los
organismos mundiales como la Organizacin para la Cooperacin y Desarrollo
Econmico (OCDE) y la Organizacin Internacional de Estandarizacin (ISO).
En el mundo cientfico se toman como base las GLPs que se puede definir
como un conjunto de normas, procedimientos operativos y prcticas establecidas
por una organizacin determinada que se considera obligatoria con el fin de
garantizar la calidad y la exactitud de los resultados producido por un laboratorio.
Todos ellos contienen dos elementos comunes: los procedimientos normalizados
de trabajo (SOP) y una unidad de control de calidad (QAU). Estos procedimientos
operativos estndar proporcionan descripciones detalladas de actividades llevadas
a cabo por el laboratorio.
Aunque todas estas normas son lo ms cercano a la validacin, en este
documento se ver que esta unidad de garanta de calidad es en general
independiente del laboratorio y responde al gerente de la organizacin de ste

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POR QU ES NECESARIA LA VALIDACIN DE UN MTODO?
1.- Por la importancia de las mediciones analticas
En algn momento, la sociedad est apoyada por mediciones analticas
como una forma de evaluar la salud, verificar la calidad de agua para
consumos humano etc.
El costo de realizar estas mediciones es levado y surgen costos adicionales
tomadas en base a los resultados. Por ejemplo, las pruebas que muestran
que algn alimento no es adecuado para su consumo pueden resultar en
demandas de compensacin, ocasionar multas o encarcelamiento.
Claramente es importante determinar el resultado correcto y ser capaz de
demostrar lo que es.
2.- Por el deber profesional del qumico analtico.
El cliente espera poder confiar en los resultados informados ya que el
laboratorio tiene un nivel de conocimiento experto. Puede cuestionar
cuando aparece alguna controversia (aqu el analista tiene la
responsabilidad de demostrar que la informacin que ha proporcionado es
correcta por la parte analtica del problema). La validacin del mtodo
permite demostrar que el mtodo es adecuado para su propsito. Esto
lleva implcito que las pruebas realizadas son apropiadas por la parte
analtica del problema que el cliente desea resolver y que el informe final
presente los datos analticos de tal manera que el cliente pueda entenderlos
fcilmente.
El resultado analtico debe ser lo suficientemente confiable para que cualquier
decisin basada en este pueda tomarse con confianza. As el desempeo del
mtodo debe validarse y debe estimarse la incertidumbre del resultado aun nivel
de confianza dado.



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TERMINOLOGA

Adecuacin al propsito: Es la adaptacin de un mtodo para un fin previsto.
Analito: Sustancia buscada o determinada en una muestra, que debe ser
recuperada, detectada o cuantificada por el mtodo.
Aplicabilidad: Los analitos, matrices y concentraciones para los cuales puede
utilizarse satisfactoriamente un mtodo.
Blanco matriz: Matriz que no contiene el analito de inters u objetivo para el
mtodo seleccionado.
Componente de la Incertidumbre: Cada una de las contribuciones a la
incertidumbre.
Criterios de aceptabilidad: Exigencias de una caracterstica de funcionamiento o
comportamiento en funcin de las cuales se puede determinar que un mtodo
analtico es adecuado para la finalidad perseguida y ofrece resultados confiables.
Ensayo: Operacin tcnica realizada de acuerdo a un procedimiento especfico,
que consiste en la determinacin cualitativa y/o cuantificacin de una o ms
caractersticas en un determinado producto, proceso o servicio.
Error aleatorio: Es aquel error inevitable que se produce por eventos nicos
imposibles de controlar durante el proceso de medicin. Se contrapone al
concepto de error sistemtico.
Error Sistemtico: Es aquel que se produce de igual modo en todas las
mediciones que se realizan de una magnitud. El error sistemtico est
condicionado por algn factor distinto al azar.
Idoneidad para el fin previsto: La medida en que los datos obtenidos en un
proceso de medicin permiten al usuario adoptar decisiones correctas, tanto

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desde el punto de vista tcnico como administrativo, para alcanzar un fin
establecido.
Incertidumbre: Parmetro asociado al resultado de una medicin que caracteriza
la dispersin de los valores que podran razonablemente ser atribuidos al
mensurando.
Intervalo de trabajo: Es el intervalo entre el nivel ms bajo y ms alto de
concentracin que ha sido demostrado que puede ser determinado con la
precisin y exactitud requeridas para una determinada matriz.
Lmite mximo permitido LMP: Nivel mximo o tolerancia establecida para un
analito en una reglamentacin.
Matriz: Es el tipo de sustancia compuesta que puede o no contener al analito de
inters
Mtodo de ensayo validado: Mtodo de ensayo aceptado para el que se han
llevado a cabo estudios de validacin con el fin de determinar su precisin y
fiabilidad para un propsito especfico.
Requerimiento del mtodo: Corresponde a aquellas caractersticas del mtodo
que son esenciales para poder aplicarlo para el fin previsto. Cuando no estn
establecidas por el cliente o usuario, debe definirlas el responsable del ensayo de
manera confiable y cientfica.








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NORMATIVIDAD DE LA VALIDACIN
Las normas de validacin se regirn dependiendo del tipo de mtodo del que
se hable, para lo cual se dividirn en dos clasificaciones:
Mtodos no establecidos
Estos mtodos sern aquellos que desarrollados por el laboratorio o mtodo
nuevos (ejemplo: publicado en revista cientfica), o bien, a mtodos que
tradicionalmente se han utilizado en el laboratorio pero que no estn
normalizados.
Mtodo normalizado
Estos mtodos que ya estn estandarizados tienen alguna modificacin
significativa hecha por l laboratorio.
Debe tomarse en cuenta que dentro de los mtodos no establecidos se
encuentran aquellos que ha marcado el laboratorio como viables pero que no han
sido acreditados.
Las Normas de Calidad
Las Normas de calidad son aquellas que dan la pauta a seguir para que el
laboratorio en cuestin se mantenga en ptimas condiciones de calidad. Se debe
tomar en cuenta que al momento de poner en marcha un laboratorio de anlisis
clnicos se debe contar por default con la Norma Oficial Mexicana NOM-007-
SSA3-2011, para la organizacin y funcionamiento de los laboratorios clnicos,
publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 27 de febrero de 2012 (la cual
dej sin efectos la Norma Oficial Mexicana NOM-166-SSA1-1997 para el mismo
fin), esta norma rige los lineamientos mnimos para los laboratorios de anlisis
clnicos.

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Cuando un laboratorio busca demostrar la calidad de su sistema debe ser
acreditado (en Mxico) por la Entidad Mexicana de Acreditacin (EMA) la cual se
rige por la Norma NMX-EC-15189-IMNC-2008 / ISO 15189:2007, sta norma tiene
las especificaciones que debe cumplir el laboratorio que busca la acreditacin. En
el apartado 5.3 Equipo de laboratorio ser evaluado el equipo mediante la
calidad de la maquinaria utilizada para fines clnicos, as como en el apartado 5.5
Procedimientos de examen se verificar que los mtodos utilizados para cada
examen llevado a cabo en ese laboratorio estn perfectamente validados.
Los laboratorios que pasen esta evaluacin aceptablemente, tendrn el
certificado ISO 15189:2007 proporcionado por la EMA.
















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PARMETROS DE VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS
Proceso de validacin
La necesidad de validar un mtodo y el procedimiento a seguir son cuestiones de
criterio profesional, el gobierno y los organismos internacionales han emitido
directrices para la validacin de mtodos apropiados, en particular para los
mtodos de presentacin de registro (resultados).
Generalmente, incluyen estudios sobre:
Selectividad Linealidad Exactitud
Precisin Sensibilidad Rango
Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Robustez
Selectividad
Describe la habilidad de un procedimiento analtico para diferenciar entre
varias sustancias en la muestra y es aplicable a mtodos en los que dos o ms
componentes son separados y cuantificados en una matriz compleja.
Linealidad
Un estudio de linealidad verifica que los resultados son linealmente
proporcionales a la concentracin del analito en el rango de concentracin de las
soluciones de muestras. El estudio se debe realizar usando soluciones estndar a
cinco niveles de concentracin, en el intervalo de 50 a 150% de los niveles de
concentracin del analito diana.
Exactitud (Veracidad)
Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor
convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un

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valor de referencia aceptado (material de referencia certificado o estndar de una
farmacopea) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el
procedimiento de anlisis un cierto nmero de veces.

Precisin
Expresa la cercana de coincidencia (grado de dispersin) entre una serie de
mediciones obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea
bajo condiciones establecidas. Puede considerarse a tres niveles: repetibilidad,
precisin intermedia y reproducibilidad. Debe determinarse utilizando muestras
originales y homogneas. Sin embargo, si no es posible obtener una muestra
homognea puede ser determinada usando muestras preparadas o una
disolucin de la muestra.
Repetibilidad
Precisin obtenida bajo las mismas condiciones de operacin en un intervalo corto
de tiempo (mismo da), por un mismo analista, en la misma muestra homognea y
en el mismo equipo.
Precisin intermedia
Precisin obtenida dentro del laboratorio por diferentes analistas, diferentes
equipos, das distintos con la misma muestra homognea.
Reproducibilidad
Expresa la precisin entre laboratorios como resultado de estudios
interlaboratoriales diseados para estandarizar la metodologa.
Sensibilidad
La sensibilidad es la capacidad de distinguir dos concentraciones diferentes
y se determina por la pendiente de la curva de calibracin. Usted puede medir las
muestras de pendiente o medida de concentracin muy relacionada a
concentraciones altas, intermedias y bajas. La sensibilidad y la precisin regirn

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cuntas cifras significativas deben declararse en una medicin. No informan
11,25% cuando el mtodo es la suerte de distinguir 0,1% Diferencias (1%
Diferencias relativas).

Linealidad y margen de error (rango)
Tradicionalmente se considera que un mtodo es lineal cuando existe una
relacin directa- mente proporcional entre la respuesta obtenida cuando se aplica
el mtodo y la concentracin del analito en la matriz dentro del rango de
concentraciones del analito buscado (rango de trabajo). El rango de trabajo viene
definido por la finalidad del mtodo y puede representar slo una parte de la
totalidad de la lnea recta. Habitualmente los criterios de aceptacin implican una
prueba de la bondad de ajuste. Frecuentemente se utiliza como criterio de la
linealidad un coeficiente de correlacin (r) elevado, del 0,99. Sin embargo, este
criterio no basta para demostrar que existe una relacin lineal, por lo que cabe
considerar que se puede utilizar un mtodo que no permita establecer un
coeficiente de correlacin tan alto como el 0,99 pero permita cumplir los fines
previstos. Estos parmetros no son aplicables a los mtodos cualitativos salvo si
se establece un umbral de concentracin para reflejar resultados.
Lmite de deteccin
Se trata de la concentracin mnima de analito que puede ser detectada e
identificada con un determinado grado de certidumbre. El lmite de deteccin se
define tambin como la concentracin mnima que puede distinguirse del ruido de
fondo con un determinado grado de confianza. Para estimar el lmite de deteccin
pueden utilizarse varios mtodos, todos los cuales dependen del anlisis de
especmenes en blanco y el examen de la relacin entre la seal y el ruido. Por lo
general se acepta un requisito mnimo de relacin seal/ruido de 3/1. El lmite de
deteccin no es un parmetro robusto y puede resultar afectado por cambios
menores del sistema analtico (por ejemplo, temperatura, pureza de los reactivos,
efectos de matriz, condiciones instrumentales). Por tanto, es importante que este

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parmetro sea siempre verificado por laboratorios que hayan adoptado mtodos
previamente validados.


Lmite de deteccin LOD
Es la concentracin ms baja del analito que se puede detectar pero no
necesariamente cuantificar. En general, es el punto al que la seal del analito es
igual a tres veces el ruido de la medida.Para algunos espectrofotmetros se puede
establecer que el LOD es, aproximadamente, tres veces la desviacin estndar.
Lmite de deteccin LOQ
El LOQ es la concentracin ms baja del analito que se puede determinar
con una precisin y exactitud aceptables. Para calcular el LOQ se deben de definir
por tanto los lmites aceptables de precisin y exactitud. Se puede aproximar a la
relacin entre la precisin de la medida analtica y la sensibilidad del mtodo.
Robustez
La robustez es una medida de la capacidad de un procedimiento analtico
de no ser afectado por variaciones pequeas pero deliberadas de los parmetros
del mtodo; proporciona una indicacin de la fiabilidad del procedimiento en un
uso normal. En este sentido el objetivo de la prueba de robustez es optimizar el
mtodo analtico desarrollado o implementado por el laboratorio, y describir bajo
qu condiciones analticas (incluidas sus tolerancias), se pueden obtener a travs
de estos resultados confiables.
Un mtodo de ensayo es ms robusto entre menos se vean afectados sus
resultados frente a una modificacin de las condiciones analticas.
Entre las condiciones analticas que podran afectar a un mtodo se encuentran:
Analistas
Equipos

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Reactivos
pH
Temperatura.
Tiempo de reaccin.
Estabilidad de la muestra.
CURVA DE CALIBRACIN

Una curva de calibracin es la representacin grfica de una seal que se
mide en funcin de la concentracin de un analito. La calibracin incluye la
seleccin de un modelo para estimar
los parmetros que permitan
determinar la linealidad de esa curva y,
en consecuencia, la capacidad de un
mtodo analtico para obtener
resultados que sean directamente
proporcionales a la concentracin de
un compuesto en una muestra, dentro
de un determinado intervalo de
trabajos
Las curvas de calibracin estn
regidas por el mtodo de mnimos
cuadrados ya que la mayora de las veces se trabaja en una regin en la que la
curva de calibrado es recta. ste mtodo nos permitir presentar la mejor lnea
recta que se ajusta a los datos experimentales.
Mtodo de los mnimos cuadrados
Este mtodo es explicado por la ecuacin de la recta:

Dnde:

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m es la pendiente y b es la ordenada al origen

A partir de la curva de calibracin y a fin de asegurar que la recta
encontrada con los puntos experimentales se ajuste correctamente al modelo
matemtico de la ecuacin se calculan los valores de la ordenada al origen, la
pendiente y el coeficiente de determinacin (r
2
).
La linealidad de la curva de calibracin (habilidad para asegurar que los
resultados obtenidos directamente o por medio de una transformacin matemtica
definida) es un requerimiento fundamental en la prctica del anlisis qumico
cuando se realizan curvas de calibracin.
Por medio de las curvas de calibracin se puede detectar la sensibilidad de
mtodos analticos, ya que la mayor linealidad en los resultados generar una
mayor confiabilidad en los datos y la precisin del sistema o mtodo analtico
utilizado.
La finalidad de crear una curva de calibrado es conocer la concentracin de
una muestra problema, para ello se deber hacer disoluciones con una muestra
estndar o conocida, la cual nos indicar por medio de nuestra regresin lineal
(mtodo de mnimos cuadrados) la concentracin de esa muestra problema.
Mtodo de adicin de patrn
Consiste en aadir una cantidad conocida de analito a la muestra desconocida
y as aumentar la concentracin del analito en una sustancia desconocida.
Patrn interno
Es una cantidad conocida de un compuesto diferente del analito que se aade
al problema. La seal del analito se compara con la del patrn interno para hallar
el analito presente en el problema.

Qu hay acerca del costo?

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Con la calidad asegurada, esto no es garanta de obtener datos exactos, es
por eso que es necesario tener documentacin razonable de que es la exactitud e
identificar reas que contribuyan significativamente a que inexactitudes puedan
ocurrir y tomar acciones para minimizarlas. Esto por supuesto no ocurre sin un
costo. Implementar un programa que asegure la calidad involucra una inversin
inicial substanciosa, tanto en tiempo como en costo. Estudios han demostrado
que implementar un programa que garantice la calidad incrementa de 20 a 30%
los gastos del laboratorio. Es por eso que es importante que el protocolo
implementado sea tan eficiente como sea posible y debe ser tomado con seriedad
por el personal del laboratorio. Sin embargo estar acreditado por estas
validaciones aumentar las ganancias a largo plazo y sern constantes mientras la
calidad se mantenga.

MANEJO DE DATOS Y ERRORES EXPERIMENTALES
Al momento de hacer anlisis experimentales los datos obtenidos llevan
ciertos errores, que pueden ser determinados e indeterminados. Los errores
determinados se pueden atribuir a 3 diferentes razones: errores instrumentales,
operativos y de metodologa; mientras que los indeterminados no pueden ser
predichos o estimados puesto que representan la incertidumbre experimental de
cada medicin.
Los errores determinados pueden ser reducidos calibrando el equipo, un
mejor manejo manual o una mejor metodologa, por otro lado los errores
indeterminados no pueden ser evitados, sin embargo, estos errores siguen una
distribucin Gaussiana. Se dice que los datos experimentales siguen este tipo de
distribucin porque al replicar mediciones estos se agrupan en forma de campana
alrededor de la medicin media, a la proximidad de estos datos a la media se le
denomina desviacin estndar. Esta representacin de errores indeterminados
tiene una relacin directa con el control de calidad porque muestra la proximidad
de los datos obtenidos con el valor esperado.

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CONCLUSIN
Con el empleo de tcnicas que nos permitan validar diversos mtodos analticos
nos es posible determinar si dichos mtodos nos resultan efectivos en el trabajo
de laboratorio as como evaluar la calidad de resultados que son emitidos,
basndonos en los lineamientos de las normas establecidas nacionales e
internacionales que rigen a un laboratorio y al trabajo de un Qumico en General.

BIBLIOGRAFIA
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Duffau B., Rojas F. col, Validacin De Mtodos y Determinacin De La
Incertidumbre De La Medicin: Aspectos Generales Sobre La Valoracin De
Mtodos, Ed. Instituto de salud pblica de Chile, Santiago,Dicimbre 2010.
Grupo Eurochem, Gua de laboratorio para la validacin de mtodos y
temas relacionados, Ed.Centro Nacional de Metrologa, Segunda edicin,
1998.
Aguirre L. Validacin de mtodos analticos, Asociacin espaola de
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16
Merino L. Diseo experimental del estudio de la validacin de mtodos
analticos, Swedish National food administration, Research & Development
Department, 2007.
Quality Assurance: The Route to Efficiency and Competitiveness, 3 ed., L.
Stebbing, Ellis Horwood (1993).
Comunidad Europea, Guideline Criteria for Reference Methods, BNL
SP/Lab/div (92) 5 (1992).
Organizacin Internacional de Normalizacin, ISO 9001:2008. Quality
management systems Requirements.

Se pueden visitar estos sitios web para ms informacin
UNODC http://www.unodc.org/
SWGDRUG http://www.swgdrug.org/
ISO http://www.iso.org/iso/home.htm
EURACHEM http://www.eurachem.org/