Este documento presenta la práctica número 1 de la carrera de bioquímica clínica en la Universidad Central del Ecuador. La práctica cubre la flebotomía, frotis sanguíneo y morfología sanguínea. Incluye los objetivos, marco teórico, materiales y procedimiento para realizar una flebotomía, preparar un frotis sanguíneo usando tinción de Wright y observar las células sanguíneas al microscopio para identificar eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
Este documento presenta la práctica número 1 de la carrera de bioquímica clínica en la Universidad Central del Ecuador. La práctica cubre la flebotomía, frotis sanguíneo y morfología sanguínea. Incluye los objetivos, marco teórico, materiales y procedimiento para realizar una flebotomía, preparar un frotis sanguíneo usando tinción de Wright y observar las células sanguíneas al microscopio para identificar eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
Este documento presenta la práctica número 1 de la carrera de bioquímica clínica en la Universidad Central del Ecuador. La práctica cubre la flebotomía, frotis sanguíneo y morfología sanguínea. Incluye los objetivos, marco teórico, materiales y procedimiento para realizar una flebotomía, preparar un frotis sanguíneo usando tinción de Wright y observar las células sanguíneas al microscopio para identificar eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
1. TEMA: Flebotoma, frotis sanguneo y morfologa sangunea
2. OBJETIVO DE LA PRCTICA:
2.1. General:
Aplicar los conocimientos previos de la anatoma del sistema circulatorio, para efectuar una flebotoma y sus respectivos anlisis 2.2. Objetivos especficos
Obtener una muestra de sangre venosa Aprender a realizar un frotis sanguneo y proceder a colorear con Wright y proceder a observarlo al microscopio Conocer los parmetros que nos permitan identificar las clulas sanguneas
3. MARCO TEORICO: 3.1. FLEBOTOMIA La flebotomaes la primera y principal tcnica realizada en la biometra hemtica (BH), es utilizada para diagnosticar una enfermada de la sangre del paciente y tambin es hecha en pacientes para disminuir el exceso de hierro ya que este puede provocar en fechas futuras algunos sntomas como lo es la hemocromatosis. El trmino "flebotoma" es utilizado para describir una incisin practicada en la vena por motivos diversos. El procedimiento quirrgico insertado de un catter en una vena perifrica, sea para la administracin de frmacos en un paciente de difcil acceso venoso (dificultaden puncionar venas), sea para la insercin de catter unido al corazn, para monitorizacin de la presin venosa central en pacientes graves. La flebotoma constituye una de las etapas ms importantesen el trabajo del laboratorio clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto de vista de la muestra sangunea, la enorme importancia queconlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte, constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe de los exmenes a realizar. (Prez Pardo)
3.2. FROTIS SANGUNEO Una extensin o frotis sanguneo consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota de sangre, de tal manera que las clulas de sta se dispongan formando una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automticamente. PARTES DE UNA EXTENSIN. CABEZA. Es la zona inicial de la extensin. Es la regin ms gruesa. En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman aglomerados CUERPO. Es la zona media del frotis. Su espesor es el apropiado. En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos. Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que limita con la cola. COLA. Es la zona final de la extensin. Suele tener un aspecto redondeado. Es la regin ms fina. En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y adems. los hemates estn deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. BORDES. Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes. Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar deformadas o destruidas
DEFECTOS DE UNA EXTENSIN. Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud y excesivo grosor. Esto se debe a un inadecuado tamao de la gota de sangre o/y a un error en la velocidad o/y a un fallo en el ngulo de extensin de la misma. Presencia de escalones o estras. Esto est ocasionado por una falta de uniformidad en el deslizamiento de la gota. Existencia de abundantes zonas redondeadas que carecen de sangre. Esto se produce por la presencia de restos de grasa o de suciedad en el porta. Extremo final excesivamente dentado. (Suardiaz, J. 2004)
3.3. MORFOLOGA DE LA CLULAS SANGUNEAS La sangre Estn constituidas por los tres grupos celulares: eritrocitos, leucocitos y plaquetas, las cuales se producen en la mdula sea, a partir de clulas madre que se multiplican a gran velocidad. Los eritrocitos o glbulos rojos: son clulas anucleadas (sin ncleo) con forma de disco bicncavo, en su interior llevan una sustancia llamada hemoglobina (protena que contiene hierro), lo que le confiere el color a la sangre, especializados en el transporte de oxgeno (O2) y dixido de carbono (CO2) entre los tejidos y la circulacin pulmonar.
Los leucocitos contienen ncleo y mitocondrias, y pueden moverse de una manera ameboide. Debido a su capacidad de movimiento ameboide, los leucocitos pueden pasar a travs de poros en las paredes de los capilares, y moverse hacia un sitio de infeccin, mientras que los eritrocitos por lo general permanecen confinados dentro de los vasos sanguneos.
Los leucocitos son casi invisibles bajo el microscopio a menos que se coloreen; por ende, se clasifican de acuerdo con sus propiedades de tincin. Los leucocitos que tienen grnulos en su citoplasma se llaman leucocitos granulares; aquellos sin grnulos claramente visibles son conocidos como leucocitos agranulares. Los leucocitos granulares con grnulos que se tien de color rosado se llaman eosinfilos, y aquellos con grnulos que se colorean de azul se denominan basfilos. Aquellos con grnulos que tienen poca afinidad por una u otra tincin son neutrfilos. Los neutrfilos son el tipo de leucocito ms abundante. Hay dos tipos de leucocitos granulares: linfocitos y monocitos. Los linfocitos por lo general son el segundo tipo de leucocito ms numeroso; son clulas pequeas con ncleo redondo y poco citoplasma. En contraste, los monocitos son los leucocitos de mayor tamao y por lo general tienen ncleo en forma de rin o de herradura
Los Trombocitos o plaquetas, son los componentes celulares ms pequeos de la sangre. Son clulas anucleadas encargadas de la primera fase de la coagulacin, por lo que sus funciones estn limitadas al torrente sanguneo (Prieto V 2006)
4. MATERIALES
Agujas: de 0.9 mm a 1.1 mm de dimetro ( 20G 19G ) Jeringuillas Adaptador para tubos-Vacutainer Torniquete Alcohol Etlico Algodn Gasa Guantes Bata Cubre boca tubo Vacutainer de 4 ml con anticoagulante E.D.T.A 2 portaobjetos Microscopio Aceite de inmersin
5. PROCEDIMIENTO
5.1 FLEBLOTOMIA Se revisa y prepara el material, se rotulan los tubos, colocar la aguja en la funda y el tubo sin perforar el tapn. Colocar torniquete localizar vena y desinfectar el rea. Puncionar vena, estabilizar aguja y funda y con el dedo pulgar en el tubo,ndice y medio en aletas presionar para perforar el tapn del tubo Comprobar que fluya la sangre en el tubo Retirar el torniqute Retirar el tubo cuando se llene. Colocar torunda y retirar aguja y funda. Doblar el brazo suavemente y llevar a sentar al donador.
5.2 FRONTIS SANGUINEO Y COLORACION DE WRIGHT
Recoger una pequea gota de sangre y depositarla a 1cm del extremo de un porta objetos totalmente limpio. Extender mediante otro portaobjetos de la manera siguiente: poner el portaobjetos en contacto con la gota, que en principio se alargar en una lnea en la zona de contacto de los dos portas. Hacer deslizar el portaobjetos esmerilado sobre el porta soporte en direccin opuesta a la de la gota de sangre; sta, por tensin superficial, se extiende formando una lmina muy delgada. De esta manera, la gota es atrada por el portaobjetos esmerilado y no empujada. Dejar secar al aire.
Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tincin con la sangre hacia arriba. Cubrir completamente el portaobjetos con el colorante de Wright gota a gota Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glbulos sanguneos. El colorante deber cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deber agregarse una cantidad adicional si ste se comienza a evaporar. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloracin dbil. Esperar la formacin de brillo metlico. Puede usarse de igual manera agua destilada. Dejar actuar de 10-15 minutos. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensin presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. Secar al aire
5.3 MORFOLOGIA SANGUNEA Con el frotis seco colocar una gota de aceite de inmersin Observar al microscopio con el objetivo de inmersin. Diferenciar cada celula sangunea
6. GRAFICO DE LAS CELULAS
FROTIS SANGUINEO
7. OBSERVACIONES - Despus de realizar un frotis sanguneo se observ la presencia de glbulos rojos y glbulos blancos. - Los glbulos blancos o leucocitos que identificamos fueron monocitos, linfocitos, neutrfilos, basfilos, eosinofilos. - Se observ gran cantidad de glbulos rojos ya que es el segundo componente ms abundante de la sangre. - Los ncleos de los linfocitos y neutrfilos se observan de color prpura oscuro. Los ncleos de los monocitos de color prpura algo ms claros - Los grnulos de los eosinfilos se observan de color rojo-anaranjado intenso. Los grnulos de los basfilos prpura azulado muy oscuro. Los grnulos de los neutrfilos se aprecian de color lila, bastante finos. - Los eritrocitos se observarn de color naranja o rosado
8. CONCLUSIONES
- Se logr efectuar una flebotoma en base a la aplicacin los conocimientos previos de la anatoma del sistema circulatorio y sin mayores percances. - Se pudo obtener una muestra de sangre venosa al practicar una flebotoma entre los compaeros de laboratorio. - Se pudo realizar un frotis sanguneo con la sangre extrada en la flebotoma y colorear con Wright para poder observarlo al microscopio - Se identific los parmetros para poder identificar las clulas sanguneas.
PLAQUETAS EOSINOFILOS S MONOCITO BASOFILO LINFOCITO
EOSINOFILOS NEUTROFILO
9. CUESTIONARIO Anomalas morfolgicas de los glbulos rojos. - Tamao
MACROCITOS: Son eritrocitos con dimetro superior a 8.5 micras. Su aparicin puede estar asociada a: Deficiencia de vitamina B12 y/o cido flico.
MICROCITOS: Recibe este nombre el glbulo rojo que presenta un dimetro inferior a 6.0 micras. Se observan microcitos en entidades que cursan anemias por deficiencia de hierro y las talasemias.
MEGALOCITOSIS: Consiste en la existencia de unos hemates con un dimetro longitudinal superior a 11 micras. Se produce en las anemias megaloblsticas.hemates de gran tamao
- Forma
ACANTOCITO: Se presenta como un eritrocito con espculas y proyecciones cortas espaciadas
EQUINOCITOS: Tambin llamados estereocitos o astrocitos, consiste en la existencia de unos hemates con espculas cortas y distribuidas regularmente a lo largo de toda su superficie. Se produce en la uremia y en las hepatopatas neonatales.
ESTOMATOCITOSIS: Consiste en la existencia de hemates con una invaginacin central en forma de boca. Se produce en el alcoholismo y en las hepatopatas crnicas.
EXCENTROCITOSIS Consiste en la existencia de unos hemates cuya Hb est concentrada en uno de sus polos
- Color
ANISOCROMA Consiste en una falta de uniformidad en la coloracin entre unos hemates y otros
HIPERCROMA Consiste en la existencia de unos hemates intensamente coloreados
- Inclusiones intraeritrocitarias
CUERPO DE HOWELL-JOLLY: Es un pequeo residuo nuclear
CUERPO DE PAPENHEIMER: Son acmulos de hemosiderina unida a protenas.
ANILLOS DE CABOT: Estn formados por restos de la membrana nuclear o de microtbulos
Bibliografa Prez Pardo, E. (2005). Prcticas de Laboratorio de Qumica Orgnica. La Habana: Science. Prieto Valtuea, J. (2006). La clnica y el laboratorio (20 ed.). Barcelona, Espaa: Elsevier. Suardiaz, J. (2004). Laboratorio clnico. La Habana, Cuba: Ciencias Mdicas.
Tesis Grupo I (Administracion) - Fomentar El Uso de Epp Del Personal Obrero en La Sección Taller Que Permitan La Prevención de Accidentes en La Empresa Comol S.A.C.