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ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA
AMILASA





























Ao de la Promocin de la Industria
Responsable y del Compromiso Climtico


Tema:

ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA


Alumno:

BRAVO ZAPATA, LUCA MARIBEL


Curso:

BIOQUMICA Y TOXICOLOGA



Profesora:

GELDRES VIGIL, MARA HELENA







UPN- Trujillo






05 de setiembre del 2014

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ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA AMILASA
1. OBJETIVOS
1.1 Determinar cualitativamente la actividad enzimtica de la Amilasa que
cataliza la hidrlisis del almidn a maltosa (disacrido reductor)

2. INTRODUCCION
Las enzimas son biocatalizadores especficos de naturaleza Qumica proteica. Aceleran
las reacciones especificas experimentando cambios fsicos durante ellas, pero recuperan
su estado original cuando la reaccin ha terminado.
A continuacin se presenta la reaccin qumica enzimtica:
SUSTRATO + ENZIMA --------- PRODUCTO + ENZIMA
Las protenas y los lpidos ingeridos con los alimentos no hidrolizan apreciablemente
y por lo tanto no podrn ser asimilados, permanecen sin modificacin como la maizena
y la mantequilla en el supermercado.
La concentracin de una determinada enzima en un ser vivo depende de la velocidad de
sntesis y de la velocidad de su degradacin. Generalmente ambas velocidades se
encuentran desequilibradas, de modo que la concentracin de la enzima se mantiene
ms o menos constante.
Muchas enzimas requieren de un cofactor para actuar catalticamente. El cofactor en la
mayora de las enzimas que lo requieren es una coenzima, esto es, una molcula
orgnica termoestable, de bajo peso molecular y por lo tanto dializable. La coenzima
esta unida covalentemente o no covalentemente a la protena. En algunos casos un ion
inorgnico forma parte de la coenzima. Cuando la coenzima esta unida covalentemente
se le denomina grupo prosttico. Algunas enzimas tienen como cofactor solamente a
un ion inorgnico.
La velocidad de una reaccin qumica catalizada por una enzima est influenciada por
factores fsicos y qumicos. Los factores qumicos son las concentraciones del sustrato,
la enzima, del cofactor, pH de la solucin en la que se encuentra el sistema enzimtico y
la presencia de molculas o iones activadores o inhibidores. Los factores fsicos son
principalmente el tiempo y la temperatura.
Las enzimas son molculas relativamente frgiles y fcilmente se desnaturalizan bajo
condiciones inapropiadas. Los tratamientos relativamente violentos con cidos fuertes,
altas temperaturas, etc. Frecuentemente empleados en qumica orgnica, rpidamente
desnaturalizan a las enzimas causando su inactivacin. Los factores fsicos y qumicos
que influyen en la reaccin enzimtica deben ser ptimas para la enzima en estudio.

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Para detectar y medir la actividad de una enzima, es decir, para detectar y medir la
velocidad de transformacin del sustrato en productos existen dos mtodos generales:
1. Detectar y medir los productos formados
2. Detectar y medir el sustrato transformado (sustrato inicial sustrato residual o
final)

3. MATERIAL METODOS
3.1 Material Biolgico :
Amilasa

3.2 Materiales:
Pipetas
Tubos de ensayos
Bao mara
Cocina elctrica
Balanza

3.3 reactivos
Solucin de almidn al 1% en buffer fosfato 0.1 M pH 6.9 conteniendo NaCl
0.01 M
Solucin de enzima al 1%
HCl 0.05 M
Solucin cprico alcalino yodada
Sol. Cprico alcalino
Sol. Fosfanolibdica

4. PROCEDIMIENTO:

4.1. OBTENCION DE ENZIMA AMILASA
En un matraz colocar saliva aproximadamente 20 -30 mL
Mezclar a la misma proporcin con agua destilada
Con una gasa o algodn proceder a filtrar la mezcla
El filtrado corresponde a la enzima





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4.2. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD AMILASICA
Se proceder de acuerdo al sgte. Sistema de incubacin enzimtica:
COMPONENTES T1 (testigo) T2 (problema)
Solucin de almidn al 1% (mL) 2.5 2.5
Agua destilada (mL) 2.5 2.5
Colocar en bao mara a 37C por 5 minutos
Enzima al 1% (mL) ------ 0.5
Colocar en bao mara a 37C por 10 minutos

4.3 CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR SUSTRATO RESIDUAL
Simultneamente con el proceso de incubacin de 10 minutos colocar
HCl en dos tubos adicionales y continuar de acuerdo al sgte. Esquema
COMPONENTES T1 (testigo) T2 (problema)
HCl 0.05 M (mL) 5 5
De los tubos que fueron trabajados
en la etapa A (mL)
0.5 0.5
Sol. Yodada (mL) 0.5 0.5
MEZCLAR
OBSERVAR EL COLOR RESULANTE EN CADA TUBO Y ANALIZARLO
EXPLICANDO SI SE DEMUESTRA ACTIVIDAD ENZIMATICA O MO

4.4 CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR PRODUCTOS
FORMADOS (azcares reductores)
Simultneamente con el proceso de incubacin de 10 minutos, en el
tercer par de tubos, procedes de acuerdo al sgte esquema. Mediante el
mtodo de FOLIN-WU
COMPONENTES Blanco T1
(testigo)
T2
(problema)

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Agua destilada 1 0.5 0.5
T1 de la parte A ----- 0.5 -----
T2 de la parte A ----- ---- 0.5
Sl. Cprica alcalina 1 1 1
Mezclar y colocar en bao de agua hirviendo por 8 minutos. Al termino
de este tiempo enfriar en agua corriente
Sol. Fosfomolibdica 1 1 1
Mezclar enrgicamente y dejar reposar 3 minutos
Agua destilada 7 7 7
Mezclar por inversin y dejar en reposo durante 10 minutos. Evaluar los
resultados de manera cualitativa.

5. RESULTADOS

5.1 Control de la Actividad Enzimtica por SUSTRATO RESIDUAL
INDICADOR T1 (testigo) T2 (problema)
Color resultante Amarillo Amarillo
Presencia de almidn residual
(abundante, moderado, escaso, ausente)
Abundante Abundante
Diferencia entre testigo y problema
(SI,NO)
NO NO
Actividad amilsica (presente o ausente) Presente Presente

5.2 Control de la Actividad Enzimtica por PRODUCTOS FORMADOS
INDICADOR T1 (testigo) T2 (problema)
Color resultante Transparente Azulado
Precipitado (presencia y color) Ausencia Poca presencia
Presencia de azucares reductores NO SI
Diferencia entre testigo y problema
(SI,NO)
SI SI

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Actividad amilsica (presente o ausente) AUSENTE PRESENTE

6. DISCUSIN
Analizando los siguientes resultados:
Se deduce que hubo presencia de sustrato residual a causa de la elevada presencia
de color (amarillo) en las muestras (cuadro 5.1). Tambin, se comprob al
comparar el tubo testigo y el tubo problema, que en el testigo hubo ausencia de
precipitado por lo tanto no hay presencia de azucares reductores, en cambio en el
tubo problema se visualiz que se tio azulado pero se apreci poca presencia de
precipitado consecuencia a esto hubo escasez de producto formado (cuadro 5.2)
Entonces, haciendo un anlisis se infiere que al ver una elevada concentracin de
sustrato residual y poca presencia de productos formados, existe actividad
enzimtica.
Ya que si se hubiese encontrado elevada concentracin de sustrato residual y
elevada presencia de productos formados, no iba a existir actividad enzimtica por
que la enzima se iba a saturar.

7. CONCLUSIONES
Se determin de forma cualitativa la actividad enzimtica que surgi de
la Amilasa.
Se logr el reconocimiento de ciertas soluciones que fueron
empleadas en la prctica para poder analizar de manera asertiva
nuestras muestras.

8. BIBLIOGRAFA
Alves, Vzquez & Chevarra. (s.f). Determinacin del efecto de la
inmovilizacin sobre la actividad enzimtica de amilasa [en lnea].
Recuperado el 05 de septiembre de 2014, de
http://www.edutecne.utn.edu.ar/cytal_frvm/CyTAL_2012/TF/TF02
8.pdf

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Mera, Hoyos, Carrera, F & V. (2003). Caracterizacin enzimtica de
alfa-amilasa y glucoamilasa en la hidrlisis de almidn de yuca [En
lnea]. Recuperado el 05 de septiembre de 2014, desde
http://www.unicauca.edu.co/biotecnologia/ediciones/vol1/Art23.p
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