Foto Color I Me Tria

Universidad nacional del callao
Facultad de Ing. Pesquera y Alimentos

Esc. Profesional de Ing. De alimentos

2012
Curso: Bioqumica General

Profesora: Blga. Ms. C.
Alicia Decheco Egsquiza

Integrantes:

Alata Sihues Isabel
Evelyn
Camacho Rodrguez
Jhudit Magaly
Candela Manzanares
Walter Sixto
Juyo Rodrguez
Darwin Guillermo
Lozano Castillo
Andrs Leonardo

Practica N 2: Manejo y uso del
fotocolormetro del Merk SQ 118
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
Facultad De Ingeniera Pesquera Y De Alimentos
Escuela Profesional De Ingeniera De Alimentos

BIOQUIMICA GENERAL
2
INDICE
Pg.
INTRODUCCION. 3
OBJETIVOS. 4
REVISIN LITERARIA 5
ESPECTROFOTOMETRIA 5
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTMETRO 7
TIPOS DE APARATOS 8
LAS UTILIDADES CON MAYOR AUGE EN LA
ESPECTROFOTOMETRA 9
ABSORBENCIA, TRANSMITANCIA 12
EQUIPOS Y MATERIALES 15
PROCEDIMIENTO 15
BOTONES DEL FOTOMETRO MERK SQ 118 17
INTERIOR DEL FOTOMETRO MERK SQ 118 19
RESULTADOS 20
CONCLUSIONESY RECOMENDACIONES 23
CUESTIONARIO. 24


BIOQUIMICA GENERAL
3
INTRODUCCION
La colorimetra y fotocolorimetra son procedimientos de anlisis qumico basado en la
intensidad de color de las disoluciones. En realidad no son tcnicas distintas, la diferencia
estriba en el tipo de instrumental empleando, de forma que se denomina colormetro a
aquel aparato en el que la longitud de onda con la que se va a trabajar se selecciona por
medio de filtros pticos y en el fotocolormetro o espectrofotmetro la longitud de onda
se selecciona mediante dispositivos mono-cromadores.
Por lo tanto las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de
radiacin en la zona visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra
que deseamos determinar no posee color por s misma; en tal caso, es preciso llevar a
cabo un desarrollo de color empleando reactivos que den lugar a sustancias coloreadas
con la muestra que interesa estudiar.
Para que la concentracin de una sustancia pueda ser determinada con base en su
propiedad de absorber energa radiante, debe existir una correspondencia lineal entre su
concentracin y la magnitud de su absorcin, en alguna regin del espectro
electromagntico.
Los espectros de absorcin son muchas veces tiles para identificar elementos por
ejemplo, averiguar si una muestra de gaseosa contiene el elemento plomo.
El espectro de un elemento determinado es absolutamente caracterstico de ese
elemento. Sin embargo, existen elementos distintos que producen en ocasiones lneas
que estn muy juntas, lo que lleva a posibles errores. Por tanto, la comparacin del
espectro completo de un elemento con un espectro conocido simplifica su identificacin.


BIOQUIMICA GENERAL
4
OBJETIVO
Aprender a calibrar y manejar el fotocolormetro de MERK sq-118.
Determinar el espectro de absorcin.


BIOQUIMICA GENERAL
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REVISIN LITERARIA

La fotometra proporciona una medida directa del flujo de energa recibido de los objetos
celestes en un intervalo de longitud de onda.

Mucho menos exigente en tiempo de observacin que la espectroscopia ya que se integra
el flujo en una banda. Con los datos de magnitudes y colores en diferentes bandas
fotomtricas obtenemos informacin muy valiosa de los objetos observados.

Por ejemplo:
Permite clasificar las estrellas usando un diagrama color-color.
El anlisis de curvas de luz (variacin temporal de su magnitud) informa
sobre la naturaleza de las estrellas variables y sobre parmetros de las
binarias.
Sirve para determinar distancias y tamaos.

Espectrofotometra
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones
biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de
soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro
visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura
de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa
radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la
luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de
onda no absorbida.


BIOQUIMICA GENERAL
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Espectrofotmetro

Lmpara halgeno
Rendija1
Colimado1
Rendija2
Cubeta
Rendija2
Colimado
Fototubo .Filtro de interferencia
Fotodiodo de silicio


BIOQUIMICA GENERAL
7

Se distinguen dos tipos de aparatos:

o Fotmetro o Colormetro: se caracterizan porque utilizan filtros que solo
permiten el paso de una determinada longitud de onda.

o Espectrofotmetros: utilizan cromadores. Con ellos se obtiene un haz de luz
monocromtico cuya longitud de onda se vara a voluntad. Los
monocromadores pueden ser de dos tipos: prismas y redes de difraccin.

o
Componentes del espectrofotmetro
1. Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no visible.
Tipos de lmparas:

Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del
espectro visible y el ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro continuo de
energa radiante entre 360-950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor duracin y emiten
energa radiante de mayor intensidad.
Lmparas de Hidrgeno y Deuterio: producen un espectro continuo en la regin
ultravioleta entre 220-360 nm.
Lmparas de vapores de Mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro de
lneas que se utilizan para calibracin de longitudes de onda, se emplean solo para
espectrofotmetros y cromatografa HPLC.
.
2. Rendija de entrada: Tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y evitar que la
luz dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.
3. Monocromadores. Pueden ser:

Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que permite el paso de la
luz. Ej. De vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para trabajar en el
ultravioleta lejano.

Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas situadas a distancias
iguales entre s y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie metlica. Cada una
de estas hendiduras se comporta como un pequeo prisma.

BIOQUIMICA GENERAL
8
4. Rendija de salida: Tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese la cubeta de
la muestra, que provocara desviaciones a la Ley de Beer.

5. Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin. Pueden ser de
distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares, redondas). Se obtienen mejores
resultados usando cubetas de bordes paralelos. Si se utilizan cubetas redondas se deben
marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posicin. Suelen estar fabricadas
en vidrio o en plstico.
6. Detector. Puede ser de dos tipos:
Fotoclulas o clulas fotovoltaicas: Es una lmina de Cobre sobre la que se
extiende una capa de Selenio o de xido de Cobre. A esto se le conoce como
semiconductor. Sobre el semiconductor hay una capa de metal transparente que
sirve de electrodo. La luz incide sobre el Selenio y ste desprende electrones, que
pasan a la placa de Cobre originando una diferencia de potencial por existir carga
negativa sobre el Cobre y positiva sobre el Selenio. El conjunto se conecta a un
ampermetro que seala el paso de corriente.

Caractersticas: son resistentes; econmicas; sensibles desde el ultravioleta hasta
los 1.000 nm de longitud de onda; no se requiere batera externa, ni vaco,...; la
corriente producida es directamente proporcional a la Energa que llega y tienen
efecto fatiga, es decir, que presentan una subida inicial de corriente, que luego
decrece progresivamente hasta el equilibrio. Por eso hay que esperar entre 30-60
segundos entre una lectura y otra.

Fototubos multiplicadores: Un fototubo multiplicador es un tubo que contiene un
ctodo que emite electrones de forma proporcional a la Energa que incide sobre
l. Tiene un nodo que recoge los electrones y la corriente se multiplica varias
veces al chocar los electrones sobre sucesivos nodos que van teniendo un
voltaje superior al precedente. La seal se amplifica en cientos o miles de veces.
Caractersticas: el tiempo de respuesta es muy rpido, no tienen efecto fatiga tan
altos como la anterior y son muy sensibles.
7. Medidor: son sistemas de lectura de la Energa elctrica que recoge el detector y que
puede ser lectura directa (se utiliza una clula fotovoltaica) o puede ser amplificadores de
seal como en el caso del fototubo multiplicador. Los actuales aparatos incorporan lectura
digital y clculos automticos de concentraciones con relacin a las curvas de calibracin.

TIPOS DE APARATOS

Espectrofotmetro de Haz simple: es igual que la descripcin dada para el
espectrofotmetro en general. Consta de los mismos elementos


BIOQUIMICA GENERAL
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Espectrofotmetro de doble Haz en el espacio: todos los componentes estn
duplicados, menos la lmpara y el medidor. Dos haces de luz pasan al mismo
tiempo por los distintos componentes separados en el espacio. Esto compensa las
variaciones de intensidad de luz y de absorbancia.

LAS UTILIDADES CON MAYOR AUGE EN LA ESPECTROFOTOMETRA
Los espectrofotmetros son tiles debido a la relacin de la intensidad del
color en una muestra y su relacin a la cantidad de soluto dentro de la
muestra. Por ejemplo, si usted utiliza una solucin del colorante rojo del
alimento en agua, y mida la cantidad de luz azul absorbida cuando pasa a
travs de la solucin, una fluctuacin mensurable del voltaje puede ser
inducida en una fotoclula en el lado opuesto.
Si ahora la solucin del tinte rojo es diluida por la adicin del agua el color
ser menos intenso. As, hay una relacin entre el voltaje y la cantidad de
tinte en la muestra.
El espectrofotmetro tiene la capacidad de proyectar un haz de
luz monocromtica (de una longitud de onda particular) a travs de una
muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.
Esto le permite al experimentador realizar dos funciones:
1. Nos da informacin sobre la naturaleza de la sustancia
en la muestra. Esto podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a
distintos largos de onda (l) y graficar estos valores en funcin del
largo de onda, formando un espectrograma. Como cada sustancia
tiene unas propiedades espectrales nicas, distintas sustancias
producen distintos espectrogramas. Esto se debe a que cada
sustancia tiene un arreglo de tomos tridimensional particular que
hace que cada sustancia tenga caractersticas nicas.
2.-Al ser expuestos a la luz del espectrofotmetro, algunos
electrones de los tomos que forman las molculas absorben energa
entrando a un estado alterado. Al recuperar su estado original, la

BIOQUIMICA GENERAL
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energa absorbida es emitida en forma de fotones. Esa emisin de
fotones es distinta para cada sustancia, generando un patrn
particular, que vara con el largo de onda usado. Dependiendo del
largo de onda, ser la cantidad de energa absorbida por una
sustancia, lo que logra generar un espectro particular al graficar Abs
vs l. 2.
Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa est
presente en la muestra. La concentracin es proporcional a la
absorbancia, segn la Ley Beer-Lambert: a mayor cantidad de molculas
presentes en la muestra, mayor ser la cantidad de energa absorbida por
sus electrones.
Abs =K C L Abs: absorbancia
K: coeficiente de extincin molar
C: concentracin
L: distancia que viaja la luz a travs de la muestra.
(normalmente es de 1 cm)
La cubeta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones
internas de un centmetro (L). La ecuacin describe una lnea recta,
donde el origen es cero. Si L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor
de K, podemos calcular C en base a Abs:
Abs / K L =C
El espectrofotmetro mide la absorbancia de una muestra en los
espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda
es determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al
largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que determina
la intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a un tubo
fotogrfico, donde es medido.
La cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%)
de transmitancia. Podemos usar esta unidad o cambiarla a absorbancia
usando la siguiente ecuacin.
%T =- Log Abs.

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El espectrofotmetro nos puede dar ambos valores a la misma
vez, ahorrando la necesidad de hacer los clculos. (Tramitancia= cantidad
de luz que atraviesa la mezcla).
Una caracterstica del instrumento es la necesidad de
blanquear el aparato antes de cada lectura. Esto se hace colocando
una cubeta con una solucin control que tenga todos los componentes de la
reaccin menos la sustancia que va a ser medida en el instrumento y
ajustando la lectura a cero absorbancia.
El propsito de esto es eliminar el registro de absorbancia (background) que
puedan presentar los dems componentes de la reaccin a ese largo de
onda particular. Todas las molculas presentan absorbancia porque todas
interfieren con el paso de la luz. Slo que la absorbancia ser ptima a un
largo de onda de luz especfico para cada tipo de sustancia.


BIOQUIMICA GENERAL
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Transmitancia
En la Figura se representa un haz de radiacin paralela, antes y
despus de haber atravesado una capa de solucin de una especie
absorbente de concentracin c, de b cm. de grosor. A causa de la
interaccin entre los fotones y las partculas absorbentes, la potencia
del haz se atena de P0 hasta P. La transmitancia T de la solucin es,
por tanto, la fraccin de radiacin incidente transmitida por-la solucin

A menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje o
%T = (P/ P
0
) x 100
Absorbencia
La absorbancia A de una solucin viene definida por la ecuacin:
A = -log
10
T = log (P/P
o
)
Obsrvese que a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una
solucin aumenta cuanto mayor es la atenuacin del haz.

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FIGURA. Atenuacin de un haz de radiacin por una solucin absorbente.

Colores de la luz Visible


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Un espectrofotmetro es un dispositivo que posee una fuente de radiacin
que se puede dirigir hacia una muestra que se espera absorba parte de esa
radiacin, la cual se puede detectar mediante un circuito que produzca una
seal reproducible.

Una muestra puede presentar una absorbancia de cero, es decir que no
absorbe nada la radiacin incidente y por lo tanto transmite el 100% de esa
radiacin. La situacin opuesta se tiene con un cuerpo opaco a un rango
determinado del espectro electromagntico, en este caso la transmisin es
nula y la absorcin es completa. En estos valores extremos la seal que se
encuentra como respuesta no es fiable y por lo tanto las determinaciones
espectrofotomtricas se deben aplicar a intervalos adecuados en donde se
pueda confiar en la relacin biunvoca entre la seal del instrumento y la
cantidad de especie responsable de la absorcin.
Rayos
gamma
Rayos
X
Ultravioleta Luz
visible
Infrarrojo Microondas
0,1 nm 1 nm 180 nm 390
nm
750 nm 40010
3
nm

BIOQUIMICA GENERAL
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La determinacin cuantitativa de una especie, con base en observaciones
que dependan de la cantidad de radiacin absorbida dependen de la
comparacin entre el valor de la absorcin de un patrn de referencia y la
absorcin de la muestra. Los espectrofotmetros deben permitir efectuar la
comparacin entre la seal obtenida por una mezcla que no contiene el
analito y otra que si lo tiene para poder tener la seal de esa diferencia.
Se logra Mayor comodidad en la recoleccin de los datos con un
espectrofotmetro de doble canal en el cual se ha diseado un dispositivo
que realiza las lecturas alternas de la muestra y la solucin de comparacin,
para presentar directamente la diferencia entre esas dos seales.

EQUIPOS Y MATERIALES
A. Equipos:
Fotocolormetro
B. Materiales:
Bagueta
Piscentas
Tubos de ensayo
Gradilla
Probeta
C. Reactivos:
Muestras
Gaseosa
Cerveza
PROCEDIMIENTO
Manejo del equipo fotomtrico Merk SQ 118
A. Caractersticas del equipo:
1. Tiene una lmpara de luz halgena.

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2. Monocromador.
3. Detector tipo fotdico de silicio.
4. Lecturas desde 340 nm hasta 820 nm.
5. Mide concentraciones, absorbancia y tramitancia.
6. Realiza 253 mtodos diferentes, de los cuales 234 mtodos para medir
concentraciones de sustancias especifica, 12 mtodos para medir
absorbancia y 12 mtodos para medir tramitancia a diferentes longitudes
de onda.
7. Los porta muestra son cubetas de 10, 20, 5 nm para medir 1, 2, 5 ml de
muestras respectivas.
8. Rango de temperatura de lectura ptima es de 10 a 50 C.
9. Capacidad para trabajar con mtodos estndar.
10. Calendario de reloj incorporado.
11. Sus medidas son 20 cm de largo, 23 cm de alto y pesa 3.5 kg.

B. Forma de operar
1. Se enciende y se escoge el mtodo de acuerdo a la sustancia que se desea
cuantificar, absorbancia, tramitancia, etc.
2. Para tarar a cero se coloca una cubeta de 10nm para el blanco (muestra
ptima).
3. Luego se realiza la lectura de las muestras escogida,
Posee 28 funciones y son:

1. Impresin del resultado
2. Indicador del resultado
3. Resultados al ordenador
4. Nmero al ordenador
5. Lista de mtodos
6. Lista de funciones
7. Adelantar pgina
8. Lista de parmetros
9. Tiempo de lectura 9 segundos
10. Fecha

BIOQUIMICA GENERAL
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11. Hora
12. Idioma
13. Medicin automtica dada 10 segundos
14. Medicin automtica conectar
15. Conexin ordenador Baudrate 9600 SI
16. Conexin ordenador Bito datos 8 SI
17. Conexin ordenador Bito stop 1 SI
18. Conexin ordenador Bito paritv BDD SI
19. Conexin ordenador rotador 0.040 ms.
20. Test ordenador
21. Test teclado
22. Test lectura
23. Test impresin
24. Test rotor de filtro
25. Test filtro
26. Test fotmetro 1
27. Test fotmetro 2 umbral 1
28. Test aparato.


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BOTONES DEL FOTOMETRO MERK SQ 118

.
METODO:
.
PARAMETRO:
.
FUNCION:
o TARA:

CAMBIAR:

EJECUTAR

BIOQUIMICA GENERAL
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INTERIOR:

1. Lmpara Halogenada.
2. Rendija 1.
3. Colineador 1.
4. Monocromador.
5. Rendija 2.
6. Cubeta (para muestra).
7. Rendija 3.
8. Colineador 2.
9. Fototubo.
10. Fotdico de Silicio.


BIOQUIMICA GENERAL
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RESULTADOS

METODO
CRUSH VINO BRAHMA INKA
KOLA
PILSEN KOLA
INGLESA
B M B M B M B M B M B M
CROMO 0 0.01 0 -0.1 0 0.06 0 0.01 0 -0.1 0 0.04
DQO 0 -0.1 0 +150 0 -0.1 0 -0.1 0 15 0 -10
ALUMINIO 0 -0.2 0 ---- 0 0 ---- ---- 0 -0.2 ---- ----
NITRATO 0 -2 0 -2 0 0.6 0 -2 0 -0.2 0 1.5
SILICIO 0 -0.1 0 -0.1 0 0 0 0 0 -0.1 0 0.02
PLOMO 0 -0.1 0 -0.1 0 0.11 0 0.01 0 -0.1 0 0.13
ARSENICO 0 -0.05 0 -0.05 0 0.047 0 -0.05 0 -0.05 0 0.063
MERCURIO 0 -
0.025
0 -
0.025
0 0.009 0 -
0.025
0 -
0.025
0 0.017


BIOQUIMICA GENERAL
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PARMETROS

METODO PARAMETROS

125 UREA
Nombre del mtodo: Urea
Numero de artculo: 14544
Margen de medicin: 0.5 - 25.00
Unidad: mg/L
Tiempo de reaccin: 5 + 5 min.
Cubeta SI: 16 mm redonda
Longitud de Onda: 690 nm
Calibracin con SI: factor.
Evaluacin con SI: lineal.
Factor: 18

METODO PARAMETROS

005 AMONIACO
NH
4

Nombre del mtodo: Amonio NH
4

Margen de medicin: 0.010-0.800
Unidad: mg/L
Cubeta SI: 50 mm rectangular
Factor: 0,317

METODO PARAMETROS

115 Cadmio
Nombre del mtodo: TC Cadmio Cd
Unidad: mg/L Cd

BIOQUIMICA GENERAL
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Factor: 0,54

METODO PARAMETROS

164 ARSENICO
Nombre del mtodo: Arsnico As
Numero de artculo: ------
Margen de medicin: 0.050 0.600
Unidad: mg/L
Cubeta SI: 200 mm
rectangular
Factor: 0,96

METODO PARAMETROS

049 NIQUEL
Nombre del mtodo: Nquel (Ni)
Unidad: mg/L
Factor: 0,962


BIOQUIMICA GENERAL
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CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos se puede concluir:
En los productos analizados en un supermercado como las gaseosa y cerveza no
hubieron ningn cambia de concentracin de acuerdo a la funciones de fotocolormetro.

En los productos de dudosa procedencia pudimos observar de acuerdo a los
parmetros del fotocolormetro los 10 mtodos existen alteraciones como : el cromo
,plomo ,nitrato ,silicio, arsnico, aluminio, mercurio, urea, nquel y demanda qumica de
oxigeno

Se observa que al utilizan el mtodo del aluminio solo se utiliza para las gaseosa y
cerveza en lata.

RECOMENDACIONES
Las muestras tomadas deben ser puestas en un tubo de ensayo de acuerdo
al espectrofotmetro ya que algunos tubos de ensayos son ms gruesos
que otros.
Los parmetros dados por el espectrofotmetro de cada elemento deben
ser elegidos de acuerdo a su longitud de onda.


BIOQUIMICA GENERAL
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CUESTIONARIO

1. Explique los mtodos espectro analticos

Un mtodo analtico, depende del sistema qumico observado y de la
calidad de los instrumentos utilizados para observarlo.

La cantidad de ruido presente en un sistema qumico y/o instrumental
determina la concentracin de analito ms pequea que puede medirse
con exactitud, y tambin fija la precisin de la medida a concentraciones
ms grandes. Conforme las concentraciones disminuyen hacia el nivel de
traza o las fuentes de seales se tornan dbiles, el problema de distinguir
las seales respecto al ruido se hace cada vez ms difcil, ocasionando
una disminucin en la exactitud y la precisin de las medidas. La
capacidad de un sistema instrumental para discriminar entre seales y
ruido se expresa, usualmente como la relacin seal-ruido:
S/N = amplitud media de la seal / amplitud media del ruido
Varios parmetros permiten caracterizar una medida o un mtodo analtico:

1. El lmite de deteccin mnimo

2. El lmite de deteccin mnimo (LD) la concentracin mnima detectable es
un parmetro estadstico que ha sido muy controvertido.

3. El lmite de deteccin mximo:

4. Lmite de cuantificacin:

5. La precisin de una medida o de un mtodo analtico tambin se determina
por un parmetro estadstico que indique la dispersin de las medidas con
relacin al valor medio la mediana o la moda de la medida realizada

6. El error fotomtrico o instrumental que indica la repetibilidad de las lecturas
en un espectrofotmetro es comn tomarlo como:
D T = 2S T- T promedio / n , el doble de la sumatoria de las desviaciones de
las lecturas de T con respecto a la transmitancia promedio T , en valor
absoluto, dividido entre el nmero de datos, n.


BIOQUIMICA GENERAL
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2. Explique las leyes de absorcin de energa radiante

Los mtodos de absorcin se basan en la disminucin de la intensidad de
un haz de Radiacin electromagntica cuando este interacciona con un
analito.

La absorcin de la luz por una solucin est relacionada a la cantidad de
energa luminosa (radiante) gastada en la excitacin de los electrones de
las molculas que contiene. A mayor facilidad de excitacin de los
electrones, la energa gastada en este proceso ser menor. Entre los
compuestos inorgnicos, las sustancias coloreadas son principalmente
aquellas que contienen elementos de los subgrupos secundarios con los
orbitales electrnicos incompletos (Fe, Cr, Co). Entre las sustancias
orgnicas, el requisito principal para que ocurra absorcin es la presencia
de dobles ligaduras conjugadas. L l y la intensidad de la absorcin se
modifican por la presencia de sustituyentes donadores de electrones (-NH2,
-OH, etc.), aceptores de electrones (-NO2, -SO3H, etc.) Y algunos otros
grupos funcionales. En los primeros experimentos se intent hallar la
correlacin entre la intensidad del color con : El espesor de la capa de la
solucin. Esto dio lugar a la ley de Bouguer- Lambert: Las capas de
espesores iguales de una misma sustancia, bajo las 7 Mismas condiciones,
siempre absorben fracciones iguales de un flujo luminoso Incidente.

La concentracin, lo que dio lugar a la ley de Beer: En condiciones iguales,
la Cantidad de luz absorbida por una solucin es directamente proporcional
a la concentracin de la sustancia absorbente. Generalizando, la cantidad
de luz absorbida es directamente proporcional al nmero de molculas
absorbentes que se encuentran en el trayecto del flujo luminoso. De qu
factores depende este nmero?:del espesor de la capa de la solucin: a
mayor espesor, habr mayor nmero de molculas. De la concentracin: a
mayor concentracin tambin habr mayor nmero de molculas. A partir
de aqu se obtiene la ley de Bouguer, Lambert y Beer, que relaciona los
cambios de absorbancia debidos a los cambios en el espesor de la capa
absorbente y la concentracin. A = abc. Dnde: A = Absorbancia. a =
Absortividad. Es una constante que depende de la longitud de onda de la
luz incidente, la naturaleza de la sustancia absorbente y la temperatura de
la solucin. b = Longitud del trayecto del flujo luminoso a travs de la
muestra (cm).c = Concentracin. Si la concentracin se expresa en g-mol /
L, nos queda: A = ebc. Donde e se llama coeficiente de extincin molar


BIOQUIMICA GENERAL
26
3. Como procede cuando la muestra es incolora?
Si la muestra es incolora se hace una reaccin para formar un compuesto
coloreado (si la medicin es en el visible).
4. Que mayores posibilidades ofrece el uso de un espectrofotmetro
respecto al fotocolormetro?
LOS ESPECTROFOTMETROS.- Utilizan como fundamento los
fenmenos que le ocurren al a luz una vez que interacta con la muestra,
tales como la absorcin, reflexin, difraccin, etc.
LOS ESPECTROFOTMETROS.- Utilizan dispositivos como detectores,
monocromadores, polarizadores de luz, condensadores y otros
aditamentos, mientras que los COLORMETROS usan el criterio humano
como referencia, lo cual los hace altamente inexactos.
5. Definir:
Lmite de deteccin mximo:
Se define como la mxima concentracin de un analito que se puede
analizar. Generalmente, lo que ocurre, es que las soluciones se hacen tan
concentradas, que en el caso de los mtodos espectrofotomtricos, toda la
luz es atrapada por el analito y tenemos una situacin equivalente al ajuste
del 0 % de transmitancia. En este caso, el detector no diferencia dos
soluciones de concentraciones altas. La determinacin queda limitada a
concentraciones menores del valor de lmite de deteccin mximo, pero en
este caso, a diferencia del lmite de deteccin mnimo, el problema se
soluciona fcilmente mediante una dilucin adecuada. En el caso del lmite
de deteccin mnimo, las soluciones son concentrar la muestra o usar otra
tcnica con lmite de deteccin menor. El lmite de deteccin mximo, se
puede obtener de la parte superior de la curva de Ringbom, como se ver
ms adelante.

Tubos fotoemisores:

Los tubos fotoemisores de vaco son combinaciones simples de fotoctodo
nodo alojado en una cubierta con vaco. El fototubo de vaco de un solo
paso contiene un ctodo sensible a la radiacin y un nodo delgado situado
en el eje del cilindro rodeado por el ctodo. El fotoctodo opera segn el
principio de que se emiten electrones desde algunos materiales en

BIOQUIMICA GENERAL
27
proporcin directa al nmero de fotones que incide en su superficie. Para
una eficiencia ptima, la superficie del fotoctodo debe tener el mximo
coeficiente de absorcin posible para la radiacin incidente. El material que
recubre la superficie tambin deber tener baja la funcin de trabajo con
objeto de extender su cobertura espectral hacia mayores longitudes de
onda.

La radiacin infrarroja :

Es un tipo de radiacin electromagntica y trmica, de mayor longitud de
onda que la luz visible, pero menor que la de las microondas.
Consecuentemente, tiene menor frecuencia que la luz visible y mayor que
las microondas. Su rango de longitudes de onda va desde unos 0,7 hasta
los 100 micrmetros. La radiacin infrarroja es emitida por cualquier cuerpo
cuya temperatura sea mayor que 0 Kelvin, es decir, 273,15 grados Celsius
(cero absoluto).

Los infrarrojos son clasificados, de acuerdo a su longitud de onda, de este
modo:
Infrarrojo cercano (de 800 nm a 2500 nm)
Infrarrojo medio (de 2.5 m a 50 m)
Infrarrojo lejano (de 50 m a 1000 m)

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