UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCION

FAULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA











ESTERILIZACION Y PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVOS

MARIANA MARTINEZ












SAN LORENZO CIUDAD UNIVERSITARIA PARAGUAY

2014




Trabajo Presentado a la Catedra de Micologa
Alumna de la Carrera de Biologa
Profesora de la Catedra: Lic. Lorena Martnez
Encargado de Laboratorio: Lic. Edgar Galeano





INTRODUCCION

Esterilizacin significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o
material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo,
filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos qumicos u otra
va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que resulte solamente
en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier
tipo.

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy pocos exigentes que crecen
bien en medios de laboratorios normales y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para
crecer. He aqu la importancia de la esterilizacin cuando se har un preparado
de cultivo, pues as se evita que cualquier otro microorganismo ajeno a la que
se desea inocular, prolifere.


































OBJETIVOS

Conocer los principios generales de las tcnicas de esterilizacin de materiales
de vidrio y medios de cultivo de uso comn en Micologa, as como de observar
el efecto y la importancia de las condiciones aspticas en el control de la
contaminacin microbiana.


MATERIALES

Matraces
Erlemeyer
Probeta
Vaso precipitado 25-250 ml.
Tubos de ensayo
Varilla de cristal
Gradillas
Pinzas
Caja de Petri

REACTIVOS
Agar sabouraud
Agar PAPA
Agua destilada

EQUIPOS
Calentadores
Autoclave
Esterilizador
Balanza

METODOLOGIA

Primera Parte: Esterilizacin de materiales

1- Encender el esterilizador.
2- Lavar con detergente y escobilla los materiales a ser utilizados.
3- Escurrir el agua y enjuagar con agua destilada. Secar con papel
absorbente.
4- Una vez secos, se forro con papel madera e hilo. En el caso de los
matraces y tubos, se coloc el tapn de gasa y algodn en la boca de
manera que el tapn quede holgado. Luego se coloc sobre estos papel
de madera sujeto con un hilo.
5- Las cajas de Petri, los tubos y los matraces envueltos debern ser
esterilizados en horno a 150 aproximadamente durante 1 hora 30
minutos.



Segunda Parte

1- Se pes medio de cultivo Agar Sabouraud segn indicacin del frasco.
Se coloc en un Erlenmeyer estril, se agrega agua destilada (150 ml).
Se llev al calentador y se revolvi constantemente con una varilla de
vidrio, sosteniendo el matraz con una franela.
2- Se procedi de la misma manera para la preparacin de Agar Papa.
3- Se revis que el nivel de agua del autoclave se encuentre en
condiciones.
4- Se coloc los cultivos preparados en el autoclave. Se tap el autoclave
ajustando las manijas en forma enfrentada. Se puso en funcionamiento y
esperar que el vapor salga por la vlvula de seguridad. Luego se cerr.
5- Se esterilizo en el autoclave por 30 minutos y bajo presin de 121 por 1
atm.
6- Se abri con cuidado el autoclave, teniendo en cuenta que se encuentre
en 0 el indicador de temperatura y presin.
7- En caliente se distribuy 20 ml de los medios de cultivo a cada placa de
Petri estril. Se tap rpidamente las placas.
8- Se enfri las placas, se sell con cinta de papel parafilm, se rotulo y se
conserv en la heladera.

































ANALISIS

El agar Sabouraud es un tipo de agar que contiene peptona. Es un medio de Cultivo
selectivo y diferencial para el aislamiento de hongos y levaduras. Este medio tiene un
alto contenido de glucosa, cloranfenicol y PH acido, favoreciendo el crecimiento de
hongos por sobre el de las bacterias, adems de un medio de cultivo puede
agregrsele agentes selectivos para el crecimiento.

El agar Papa dextrosa es el medio ms utilizado para el crecimiento de hongos y
bacterias que atacan a las plantas vivas o materia vegetal muerta en descomposicin.
Es una solucin de agar compuesta de infusin de papa, dextrosa (azcar) y agar
simple, es de color amarillo semi-oscuro y es el medio de cultivo predilecto utilizado
para el cultivo in vitro de hongos y levaduras.









































CONCLUSION

Gracias a esta prctica, se logr nuevamente a fijar los conceptos
fundamentales de esterilizacin, y de la importancia de la misma a la hora de
preparar medios de cultivos.


BIBLIOGRAFIA

Echando, E. 1976. Fitopatologia General. 1era Edicin. Editorial Orton
Memorial. 60pp.

Solomon, V. 1989. Biologa. 2da Edicin. Editorial McGrawHill. Espaa
1789pp.

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Paniagua, R. 2007. Histologa Vegetal. 4 Edicin. Editorial. McGraw-
Hill. Espaa.