Ramn Vega Vzquez.

Ing. Gentica
Plsmido.
Es una unidad de ADN extracromosmico de
tamao variable (1 >100 kb aprox.) que se replica
de forma autnoma y autorregulada, y que puede
ser movilizado entre diferentes clulas bacterianas
a travs de un proceso denominado conjugacin.
Desplazamiento de la cadena.
Los plsmidos que utilizan este mecanismo son
los elementos promiscuos asociados a la familia
IncQ:
RSF1010 de E. coli
pTC-F14 de Acidithiobacillus caldus
Desplazamiento de la cadena.
Son capaces de replicarse
en una gran variedad de
bacterias Gram positivas y
Gram negativas, adems
de transferirse de manera
eficiente.
Desplazamiento de la cadena.
Los miembros de esta familia requieren para su
replicacin de tres protenas codificadas por el plsmido.



Estas protenas promueven el inicio de la replicacin, en
el origen del plsmido, mediante la apertura de las
cadenas de ADN en una regin rica en A+T y la sntesis de
oligonucletidos de ARN como iniciadores de la
replicacin.
El origen de replicacin incluye:
Tres iterones idnticos de 20 pb.
Una regin rica en G+C de 28 pb
Un segmento rico en A+T de 31 pb.
Sitios ssiA y ssiB (son repetidos invertidos
localizados en cadenas opuestas)
Los iterones y la regin rica en A+T facilitan la apertura de la
doble cadena, mientras que los sitios ssiA y ssiB favorecen
la formacin de estructuras de tallo y asa, las cuales son
especficamente reconocidas por la primasa (RepB),
codificada por el plsmido, que sintetiza el oligonucletido
iniciador.
Tambin se requieren la ADN polimerasa III y las protenas
de unin a ADN de cadena sencilla (SSB).
Sitios ssi
La primera etapa involucra
la unin de RepC a los
iterones del origen de
replicacin.
Posteriormente RepA, que
muestra actividad de
helicasa, se une a la regin
rica en A+T con lo cual se
separan las cadenas de
ADN activando los sitios
ssi.
Se ha observado que
una replicacin
continua en ambos
sitios ssi en direcciones
opuestas origina una
estructura de ADN de
doble cadena
semejante a la formada
en la replicacin tipo
theta.
Puede ocurrir la sntesis desacoplada de ambas cadenas,
lo cual permitira la generacin de molculas de ADN
superenrrollado de doble cadena y de intermediarios de
ADNcs. Estas molculas de cadena sencilla pueden
corresponder a cualquiera de las cadenas y por lo tanto
podran contener las secuencias ssiA o ssiB.
La replicacin de estos monmeros se inicia en el origen
ssi expuesto, con lo que se sintetiza la cadena
complementaria y los monmeros son convertidos a ADN
de doble cadena. Debido a las actividades de las tres
protenas Rep codificadas por el plsmido, su replicacin
es independiente de los factores del hospedero que
participan en las primeras etapas del proceso, como la
ARN polimerasa y las protenas DnaA, DnaB y DnaC, entre
otras
Se ha establecido que los plsmidos de la familia IncQ y otros relacionados,
muestran similitud en las secuencias de los iterones, con lo cual se han formado
grupos de incompatibilidad
Conclusin:
Tienen una disminucin en el nmero de copias o la
segregacin o curacin de los plsmidos que tienen
elementos de su maquinaria de replicacin en comn, y
representa un inconveniente para el uso de estos
plsmidos en el diseo de vectores de clonacin.