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Los canales de comunicacin sensorial TRPs

como dianas farmacolgicas
ANTONIO FERRER MONTIEL
RESUMEN
Los canales TRP (Receptores de Potencial Transitorio) constituyen una ex-
tensa familia subdividida en 8 subfamilias, a saber, TRPC, TRPM, TRPV, TRPA,
TRPP, TRPML, la familia TRPN presente en invertebrados, y la distante TRPY
expresada en levaduras. Estos receptores juegan un papel fundamental en la
transduccin de las distintas modalidades somatosensoriales en mamferos, in-
cluyendo la termosensacin, la recepcin de feromonas, la regulacin del tono
vascular, la nocicepcin y el dolor. Cada vez es ms claro que los canales TRP
son cardinales en la fisiologa sensorial y que su alteracin funcional, bien me-
diante mutaciones o por estmulos nocivos o factores pro-inflamatorios, condu-
ce a estados patolgicos en humanos. Por tanto, los canales TRP han sido vali-
dados como dianas teraputicas para intervencin farmacolgica. El desarrollo
de compuestos que reviertan o controlen su actividad patolgica es, por tanto,
un objetivo fundamental de la neurofarmacologa.
Palabras clave: Canales inicos. Nocicepcin. Neurobiologa sensorial.
Sinpatognesis. Termosensacin.
ABSTRACT
TRP channels of sensory communication as pharmacological targets
TRP channels (Transient Receptor Potential) encompass a large family
which is subclassified in 8 distinct subfamilies, namely TRPC, TRPM, TRPV,
TRPA, TRPP, TRPML, the TRPN subfamily found in invertebrates and the dis-
49
tant TRPY subfamily present in yeast. These receptors play a pivotal role in the
transduction of the different somatosensory modalities in mammals, including
thermosensation, pheromone reception, regulation of the vascular tone, noci-
ception and pain. Cumulative evidence is substantiating the tenet that these chan-
nels are central in sensorial physiology and that their dysfunction, either because
of mutation or by their interaction with noxious stimuli and pro-inflammatory
agents, results in human pathologies. Thus, these TRP channels are being vali-
dated as therapeutic targets for drug intervention. The development of com-
pounds that reverse or abrogate their pathological activity is, therefore, a cen-
tral goal of current neuropharmacology.
Keywords: Ion channels. Nociception. Sensory neurobiology. Synaptoge-
nesis. Thermosensation.
INTRODUCCIN
La capacidad de explorar el entorno mediante los sentidos supone una clara
ventaja evolutiva que permite una adaptacin idnea salvaguardando la integridad
del organismo. Esta habilidad es el resultado de un sistema nervioso altamente es-
pecializado, capaz de reconocer, integrar, interpretar y responder a las distintas
modalidades sensoriales. El sistema nervioso perifrico (SNP) esta constituido por
fibras nerviosas que transducen la informacin sensorial en actividad elctrica que
es transmitida desde las terminales perifricas al cerebro. La comunicacin desde
la periferia al cerebro es realizada por fibras nerviosas que reciben el nombre de
aferentes, mientras que la respuesta desde el sistema nervioso central al perifri-
co es conducida por fibras eferentes (1). Las fibras aferentes constituidas por neu-
ronas de conduccin rpida, altamente mielinizadas, se ocupan, principalmente,
de transducir fenmenos proprioceptivos y mecnicos; mientras que, las fibras for-
madas por neuronas de conduccin media y lenta son responsables de interpretar
y responder a estmulos potencialmente nocivos actuando, por tanto, como noci-
ceptores (1). Las neuronas nociceptivas reconocen estmulos mecnicos, trmicos
y qumicos que pueden ser dainos para el organismo. Por ello, los nociceptores
son considerados como guardianes de la integridad tisular y la nocicepcin como
un mecanismo de seguridad esencial para la vida.
A nivel molecular, los nociceptores poseen en sus terminales un conjunto
de receptores proteicos preparados para reconocer y transducir los estmulos no-
civos de tipo fsico (mecnicos, osmticos, y trmicos) y qumicos. En este sen-
tido, disponemos de los receptores capaces de reconocer el espectro de tempe-
raturas desde muy fras (17C) a muy calientes (50C) (1-7). Una propiedad
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50
similar es esperable en los mecanoreceptores, aunque su identidad molecular es
todava ignota. No obstante, a pesar de esta propiedad esencial de los termore-
ceptores y, probablemente de los mecanoreceptores, es importante sealar que
la transduccin nociceptiva por parte de los nociceptores es el balance de la ac-
tivacin e inhibicin de ms de un receptor y/o canal proteico presente en su
membrana (1). Por ello, intentar reducir la especificidad nociceptora a la pre-
sencia de un determinado sensor molecular es, cuando menos, una simplifica-
cin excesiva de la transduccin somatosensorial (1).
LA FAMILIA DE LOS CANALES TRP
La neurobiologa sensorial ha sufrido un notable avance desde el reconoci-
miento que la familia de receptores TRP (por Transient Receptor Potential;), ori-
ginalmente descubierta en Drosophila melanogaster (2), juega un papel funda-
mental en la transduccin de las distintas modalidades somatosensoriales en
mamferos, incluyendo la termosensacin, la recepcin de feromonas, la regula-
cin del tono vascular, nocicepcin y el dolor. Los canales TRP se expresan en
una gran variedad de organismos multicelulares que comprende las levaduras, los
gusanos, la mosca de la fruta, el pez cebra, y los mamferos. Sorprendentemente,
todava no se han descrito ortlogos en los procariotas. Desde su descubrimiento,
la familia de receptores TRP ha ido creciendo estando en la actualidad formada
por 28 miembros agrupados en 7 subfamilias (TRPC1-7, TRPM1-8, TRPV1-6,
TRPA1, TRPP1-3, y TRPML1-3) y, la subfamilia TRPN presente nicamente en
invertebrados (Figura 1) (2). Existe un familia adicional (TRPY) evolutivamente
ms distanciada de las anteriores y que se expresa en levaduras (2). La diversi-
dad de la familia es incrementada por el descubrimiento de nuevas isoformas que
aparecen por procesamiento posttranscripcional (2). Estas variantes normalmente
poseen una funcin moduladora de la actividad de las protenas silvestres.
Todos los receptores TRP son canales catinicos que permiten el flujo de
Ca
2+
y Na
+
, aunque segn la isoforma, la permeabilidad y la selectividad para
cationes mono o divalentes vara sustancialmente de 100:1 a 0.05:1. Su patrn
de distribucin tisular es muy amplio, apareciendo expresado en prcticamente
todos los tejidos, especialmente en los sistemas nerviosos central y perifrico,
en los que juegan un papel crucial en la transduccin sensorial convirtiendo los
estmulos ambientales en cambios de excitabilidad de la membrana neuronal (2).
Adems, su permeabilidad al catin Ca
2+
implica la activacin de seales de
transduccin celular que tambin contribuyen a la transmisin sensorial. Estu-
dios de asociacin gentica han relacionado mutaciones en estos receptores con
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LOS CANALES DE COMUNICACIN SENSORIAL TRPS COMO DIANAS FARMACOLGICAS
enfermedades humanas (Tabla I). As, mutaciones en la familia TRPP produce
la enfermedad autosmica dominante conocida como policistitis renal, la muta-
cin de TRPML conduce a la mucolipidosis tipo IV, la alteracin de TRPC6
produce glomeruloesclerosis segmental, una condicion autosmica dominante,
y la mutacin de TRPM6 causa hipomagnesemia e hipocalcemia (2, 4).
Estructuralmente, los canales TRP son homo o hetoroligmeros formados
por la asociacin de cuatro subunidades alrededor de un eje de simetra central
que coincide con el poro inico. Cada subunidad est formada por 6 segmentos
transmembrana (S1-S6), un lazo hidroflico entre el quinto y sexto segmento
transmembrana que estructura el poro inico y dos dominios intracelulares en
los extremos N- y C-terminales (2) (Figura 2). La regin N-terminal puede con-
tener dominios de unin a anquirinas que juegan un papel clave en la interac-
ANTONIO FERRER MONTIEL
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FIGURA 1. rbol filogentico de la familia de receptores TRP. Se muestran las subfamilias de
los canales TRP, con cada uno de los miembros identificados en mamferos. De las familias TRPN
y TRPY no existen todava miembros en mamferos. Modificada de la referencia (20).
cin de estos receptores con protenas citoslicas construyendo complejos pro-
teicos esenciales para su funcin (2, 8, 9). El dominio C-terminal contiene una
regin importante para la asociacin de las subunidades y zonas de interaccin
con fosfoinostidos y protenas reguladoras (2, 8). Algunos miembros de la fa-
milia TRPM tienen la singularidad de contener actividad enzimtica en su ex-
tremo C-terminal por lo que reciben el nombre de canalzimas (2).
TABLA I. Enfermedades asociadas a canales TRPs
Canal Enfermedad Sntomas
TRPC3 Degeneracin retiniana Muerte fotoreceptores
TRPC6 Glomeruloesclerosis focal y segmental Prdida renal
TRPM2 Estrs oxidativo y neurodegeneracin Neurodegeneracin
TRPM6 Hipomagnesemia con hipocalcemia Prdida renal
secundaria
TRPM7 Estrs oxidativo y neurodegeneracin Neurodegeneracin
TRPP2/TRPP1 Policistitis renal autosmica dominante Fallo renal, quistes renales
TRPML1 Mucolipidosis tipo IV Retraso mental, neurodegeneracin,
degeneracin retiniana
TRPV1 Dolor inflamatorio y neuroptico Inflamacin y dolor
Informacin tomada de referencias (2) y (4).
LAS SUBFAMILIAS TRPV, TRPM Y TRPA EN TERMOSENSACIN
Dentro de la familia de los canales TRP destacan las subfamilias de TRPV,
TRPM y TRPA1 por ser receptores ionotrpicos que responden a estmulos tr-
micos que comprenden desde temperaturas nocivas fras a calientes (Tabla II).
El primer grupo (TRPV) contiene los llamados termo-TRPs que se activan por
calor, transformando la energa trmica en excitabilidad neuronal. La familia
TRPV en mamferos esta formada por 6 miembros divididos en 2 grupos segn
el grado de homologa, a saber, TRPV1-4 y TRPV5-6. Los receptores que re-
conocen estmulos trmicos son TRPV1-4, y entre ellos destaca el receptor
TRPV1 por ser un sensor molecular del umbral de temperaturas nocivas para el
organismo (10). Aunque ya se sospechaba de su existencia desde haca mucho
tiempo debido a la observacin de que las neuronas sensoriales eran excitadas
por la capsaicina, un vanilloide presente en los chiles, su clonacin no se pro-
dujo hasta el ao 1997 por el grupo del Prof. David Julius de la Universidad de
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LOS CANALES DE COMUNICACIN SENSORIAL TRPS COMO DIANAS FARMACOLGICAS
California en San Francisco (10). Utilizando una estrategia de expresin-clona-
cin en clulas HEK293 este equipo identific la protena de membrana que res-
ponda a la capsaicina incrementando el flujo de iones Ca
2+
al interior celular.
La racionalidad de utilizar la capsaicina como ligando especfico del receptor
TRPV1 (originalmente llamado VR1) fue la sensacin de quemadura que se
siente tanto al ingerir una comida picante como con la aplicacin tpica del va-
nilloide (3, 6, 7, 10). Por tanto, no result sorprendente que el receptor clona-
do tambin era activable por calor de intensidad quemante, concretamente con
temperaturas que sobrepasan los 42C, convirtindolo en una especie de term-
metro molecular. Adems, este receptor es activado por pH cido extracelular
y, recientemente se ha descrito su respuesta a alicina, componente activo del ajo
(2, 3, 6, 7). Por tanto, el canal TRPV1 es un receptor polimodal que transduce
estmulos fsicos y qumicos. La clonacin de TRPV1 fue un hito que impuls
notablemente el avance de la neurobiologa sensorial.
ANTONIO FERRER MONTIEL
54
FIGURA 2. Topologa molecular de una subunidad del receptor TRPV1. En azul se ilustran los
segmentos transmembrana. Se indican los diversos sitios de modulacin identificados por
diferentes rutas de sealizacin intracelular. La asociacin de cuatro de estas subunidades
alrededor de un eje de simetra central producira un receptor funcional. Entre la T704 y el sexto
segmento transmembrana se localiza el dominio de asociacin TRP.
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LOS CANALES DE COMUNICACIN SENSORIAL TRPS COMO DIANAS FARMACOLGICAS
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Tras la clonacin de TRPV1, se identificaron otros receptores que respon-
dan a estmulos trmicos. As, destaca la clonacin de TRPV2 (inicialmente
nombrado VRL-1) que se activa con estmulos de calor intenso, activndose
cuando la temperatura supera los 52C (2, 3, 6, 7). Por otro lado, se identific
el receptor TRPV3 que responde a temperaturas templadas alrededor de 33C.
Recientemente se ha descrito que es tambin el receptor del sustancias pungen-
tes presentes en el organo y los clavos, as como el alcanfor (2, 6, 7). Un um-
bral de activacin similar posee el receptor TRPV4 que originalmente se cata-
log como un receptor activado por estmulos osmosensibles y, posteriormente,
se ha observado que tambin transduce estmulos trmicos moderados entre 25-
37C (2, 3, 7).
Los receptores capaces de responder a estmulos fros no tardaron mu-
cho en ser identificados. De nuevo, el grupo de David Julius, mediante una
estrategia de expresin-clonacin utilizando como ligando especfico el men-
tol, identific un receptor neuronal que se activaba por esta sustancia al que
se le acu el nombre de CMR1 (de Cold Menthol Receptor I) (5). Al igual
que con TRPV1, el fundamento de utilizar mentol fue la sensacin de fres-
cor que produce este compuesto en la boca o en la piel, sugiriendo una rela-
cin con la nocicepcin al fro. Efectivamente, el receptor CMR1 era activa-
do por temperaturas inferiores a 25C (Tabla II). Sorprendentemente, el
anlisis de la secuencia amino acdica de CMR1 en las bases de datos reve-
l que era idntica a la de la protena TRPM8, un polipptido que se sobre-
expresaba en cncer de prstata y cuya funcin se desconoca (2, 3, 5, 7).
Otro miembro de la familia TRPM implicado en termosensacin es TRPM5
(Tabla II) (3, 7). Sin embargo, este receptor es ms conocido por su partici-
pacin sensorial al gusto, mediando la respuesta a sabores amargos, dulces y
a amino cidos (2, 3).
La sospecha de que poda haber un receptor que respondiera a temperatu-
ras fras nocivas, condujo a la identificacin de TRPA1 (originalmente
ANKTM1). Este receptor se activa a temperaturas inferiores a 17C (2, 6, 7),
aunque existe cierta controversia sobre la activacin por fro de este receptor en
nociceptores (1, 2, 7). Trabajos recientes han demostrado que este receptor es
activado por compuestos psicoactivos de la marihuana, as como sustancias irri-
tantes y agentes pungentes, incluyendo acrolein, aceites de mostaza y canela y
la alicina (Tabla II) (2, 6, 7). Por la particular estructura de su dominio N-ter-
minal, compuesto por un gran nmero de dominios de anquirina, se pens que
este receptor podra tambin transducir estmulos mecnicos, pero los datos exis-
tentes en ratones carentes del canal TRPA1 cuestionan dicho papel (1, 2, 7).
57
LOS CANALES DE COMUNICACIN SENSORIAL TRPS COMO DIANAS FARMACOLGICAS
TRPV1 UNA DIANA TERAPUTICA PARA EL TRATAMIENTO
DEL DOLOR
De entre los canales TRP, el receptor TRPV1 se ha erigido como una
diana crucial para en la transduccin de seales dolorosas, especialmente
en la etiologa del dolor inflamatorio (2, 4, 8, 9). Su extensa distribucin
tisular y celular (Tabla III), junto a la potenciacin de su actividad de ca-
nal inico por mediadores pro-inflamatorios liberados durante un dao ti-
sular, han situado a este receptor como un mediador crtico de la sensibili-
zacin inflamatoria de los nociceptores que resulta en la manifestacin de
hipersensibilidad en la zona daada (1, 8, 11). Un cmulo de resultados in-
dica que TRPV1 participa en el inicio y mantenimiento de la inflamacin
neurognica que suele acompaar a una injuria tisular. En este sentido la
eliminacin gentica o farmacolgica del receptor en animales produce una
reduccin del proceso inflamatorio que se traduce en una atenuacin de la
hiperalgesia trmica (2, 8, 10, 11).
A nivel celular, el receptor TRPV1 esta en una encrucijada de distintas
rutas de sealizacin que son activadas por factores pro-algsicos produ-
ciendo la potenciacin de su funcionalidad que, en ltimo trmino, resulta
en un incremento de la excitabilidad de los nociceptores (Figura 3). La sen-
sibilizacin de TRPV1 puede deberse bien a activacin directa de metabo-
litos que actan como endovanilloides o a la potenciacin de la funcin. La
activacin directa ha sido documentada para los compuestos anandamida,
N-araquidonoil-dopamina (NADA), N-oleoildopamina y el cido 12-hidro-
peroxieicosatetraenoico (12-HPETE) que actan como agonistas incremen-
tando la entrada de calcio al citosol neuronal (12, 13). Adems, el pH ci-
do que se desarrolla en la zona inflamada tambin activa el receptor
contribuyendo a incrementar ms los niveles de Ca
2+
intracelular y a des-
polarizar la membrana de los nociceptores. El Ca
2+
a su vez ejerce de se-
gundo mensajero activando rutas de sealizacin como la protena quinasa
C (PKC) y la quinasa dependiente de calmodulina (CAMKII) que fosfori-
lan al receptor alterando su funcionalidad. Hay que destacar la mayora de
estos agonistas reducen el umbral de activacin trmica del receptor desde
42C a 35C, lo que se traduce en la activacin del receptor a temperatura
corporal produciendo hiperalgesia (8, 9, 11, 12). Este fenmeno es el que
media la hipersensibilidad de una piel quemada por el sol a una ducha de
agua templada.
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Complementariamente, los agentes pro-inflamatorios (neurotrofinas, inter-
leuquinas, histamina, triptasa, bradiquinina, ATP, etc), actuando a travs de sus
receptores (Figura 3), activan rutas de sealizacin intracelular que convergen
en el receptor TRPV1 modificando su funcionalidad y/o incrementando su ex-
presin superficial. As, los factores pro-algsicos estimulan rutas que involu-
cran a la PKC, la protena quinasa A (PKA), la fosfoinositol 3 quinasa (PI3K),
la fosfolipasa C (PLC), y la quinasa de residuos de tirosina Src (2, 8, 11) (Fi-
guras 2 y 3). La accin de estas quinasas sobre el receptor se traduce en un in-
cremento de su actividad de canal inico, resultante de una reduccin de la tem-
peratura de activacin y una facilitacin de la cintica de apertura del canal (8,
11). En paralelo, algunas de estas rutas, como la mediada por la PKC, tambin
puede favorecer la movilizacin rpida a la superficie neuronal de una pobla-
cin vesicular de receptores TRPV1 residente cerca de la membrana plasmti-
ca (14, 15, 16). Por tanto, la mayor actividad y expresin del receptor TRPV1
en tejidos inflamados es una de las causas principales de la hiperexcitabilidad
de los nociceptores que conduce a la manifestacin de los dos sntomas carac-
tersticos de la inflamacin, a saber, la hiperalgesia y la alodinia. Consecuente-
mente, el control farmacolgico de la actividad y/o expresin superficial de
TRPV1 emergen como dos estrategias teraputicas para el control de la infla-
macin y del dolor que la acompaa.
ANTONIO FERRER MONTIEL
62
FIGURA 3. Rutas de sealizacin activadas por los agentes pro-inflamatorios que convergen en
el receptor TRPV1, bien modificando su actividad o aumentando su expresin superficial y que
conducen a la sensibilizacin de los nociceptores.
FARMACOLOGA DEL RECEPTOR TRPV1
La validacin como diana teraputica de TRPV1, y su implicacin en una
pltora de patologas, desde el dolor inflamatorio al oncolgico (Tabla III), han
propiciado el desarrollo de gran nmero de activadores e inhibidores del recep-
tor para su uso como anti-inflamatorios y analgsicos. Entre los agonistas ms
populares y de mayor aplicacin se encuentra la capsaicina (IC
50
=10 nM), que
se ha venido utilizando en aplicaciones tpicas para el tratamiento de distintas
afecciones (Tabla IV) (9, 12, 17). El fundamento de utilizar activadores de la
actividad del receptor radica en que estos compuestos en presencia de Ca
2+
ex-
tracelular promueven la desensibilizacin de TRPV1, un estado inactivo del re-
ceptor y altamente refractario a la reactivacin. Por este motivo, se han esta-
blecido programas de descubrimientos de frmacos dirigidos a obtener agonistas
ms potentes que induzcan un estado desensibilizado ms persistente. Entre es-
tos agonistas cabe destacar el resiniferatoxina, una toxina aislada de Euphorbia
resinifera, que inhibe la actividad de TRPV1 mucho ms potentemente que cap-
saicina (IC
50
=10 pM). Este compuesto ha mostrado una buena eficacia en mo-
delos animales de incontinencia urinaria y dolor asociado a la neuropata dia-
btica (12, 17). A pesar del potencial teraputico mostrado por estos agonistas,
su biodisponibilidad oral es muy limitada, y est en parte restringido debido a
la sensacin de quemazn que acompaa su administracin tpica. Es ms, el
hecho que la resiniferatoxina posea un esqueleto de ster de forbol ha levanta-
do preocupacin por su posible tumorigeneicidad (12, 17). Todo ello ha incita-
do a las compaas farmacuticas a desarrollar compuestos con biodisponibili-
dad oral, desprovistos de los efectos secundarios mencionados. Sin embargo, y
a pesar de los esfuerzos realizados, los ligandos de nueva generacin no han
conseguido eliminar los efectos pungentes de la capsaicina. Como consecuen-
cia, los ltimos avances realizados en este campo han sido el uso de nuevas for-
mulaciones galnicas de capsaicina como la transaicina (originalmente NGX-
4010, NeurogesX) en parches drmicos y ALGRX 4975 (Anesiva, originalmente
de AlgoRx) para inyecciones localizadas (Tabla IV) (9, 17).
Una alternativa a los agonistas de TRPV1 ha sido el desarrollo de antago-
nistas que induzcan la inhibicin del receptor. El primero de los antagonistas
caracterizado fue la capsacepina, un anlogo restringido de la capsaicina que
contiene un grupo tiourea. La capsacepina acta como antagonista competitivo
por cuanto que se une al sitio de unin de la capsaicina (12, 17). A pesar de
comportarse con un antagonista potente in vitro, su aplicacin en modelos ani-
males ha rendido resultados contradictorios. As, el compuesto no ha mostrado
actividad analgsica ni antiinflamatoria en ratas, pero si ha atenuado la hiperal-
63
LOS CANALES DE COMUNICACIN SENSORIAL TRPS COMO DIANAS FARMACOLGICAS
gesia trmica en cobayas. Otro de los compuestos desarrollado y ensayado ha
sido la 5-yodo-resiniferatoxina, un derivado halogenado del agonista que lo con-
vierte en un antagonista muy potente (12, 17). Este compuesto muestra una ac-
tividad analgsica in vitro ms constante y reproducible por lo que se est con-
siderando su desarrollo clnico para el tratamiento de la incontinencia urinaria.
No obstante, al igual que para la resiniferatoxina, su biodisponibilidad oral es
nula, y contiene el ster de forbol que posee un potencial tumorignico. Ade-
ms, la sntesis qumica del compuesto es notablemente elevada, implicando ms
de 45 etapas de reaccin (12).
En un intento de desarrollar antagonistas competitivos con biodisponibili-
dad oral, las empresas farmacuticas han usado ensayos de alto rendimiento para
rastrear quimiotecas compuestas por miles a millones de compuestos qumicos.
Como resultado, se han aislado y caracterizado una abundancia de molculas
con una buena actividad antagonista in vitro y en modelos animales. La opti-
mizacin estructural y funcional de los mejores candidatos ha rendido inhibi-
dores orales de TRPV1 con un aparente buen perfil teraputico (9, 12, 17). En-
tre estos cabe destacar los compuestos SB-705498, NGD-8243, AMG-517, y
GRC-621, que estn en estos momentos en distintas fases de desarrollo clnico
(Tabla IV).
Una segunda familia de inhibidores de TRPV1 que se ha estado explorando
la constituyen los antagonistas no competitivos y acompetitivos, que se unen al re-
ceptor en sitios de unin distintos al de la capsaicina (12, 13). Entre estos com-
puestos destaca el rojo de rutenio y los pptidos ricos en residuos de arginina que
actan como potentes bloqueantes pero sin valor teraputico debido a su excesiva
toxicidad. El uso de una aproximacin de qumica combinatoria identific a las
molculas DD161515 y DD191515 como potenciales antagonistas no competiti-
vos con actividad analgsica y anti-inflamatoria in vivo (12, 13, 17). Estas propie-
dades farmacolgicas fueron mejoradas con la obtencin del compuesto DD01050,
un anlogo 10 veces ms potente in vitro e in vivo. Sin embargo, el buen perfil te-
raputico de DD01050 qued enmascarado por su todava elevada toxicidad que
ha frenado su desarrollo clnico (12). No obstante, estos estudios han identificado
los principios qumicos y farmacolgicos requeridos para poder obtener antago-
nistas acompetitivos con mejores propiedades y baja toxicidad. Un ejemplo de esta
nueva generacin de molculas lo representa la identificacin de la methoctrami-
na (9, 12). Este compuesto bloquea a TRPV1 en cultivos primarios de nocicepto-
res con un mecanismo dependiente del voltaje, siendo la inhibicin mayor a po-
tenciales de membrana negativos que ha positivos. No obstante, la actividad
anti-inflamatoria y analgsica de este compuesto no se ha descrito todava.
ANTONIO FERRER MONTIEL
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Resulta muy notable que, aun despus del enorme esfuerzo cientfico y eco-
nmico realizado en los ltimos aos en la bsqueda y desarrollo de antagonis-
tas de TRPV1, el nmero de estos compuestos que han progresado a ensayos cl-
nicos en humanos es marcadamente pobre (Tabla IV). La base de datos de ensayos
clnicos del NIH registra nicamente tres ensayos clnicos en fase II para el com-
puesto SB-705498 de GlaxoSmithKline, a saber, NCT-00269022 en el que el
compuesto se esta ensayando para migraa; NCT-00281684 en que se esta tes-
tando en dolor dental tras ciruga; y, NCT-00461682 para dolor rectal (9, 17).
Adems, otras compaas como Amgen (AMG-517) Glenmark (GCR-6211) y
Neurogen/Merck (NGD-8243) han declarado la realizacin de ensayos clnicos
en fase I con sus compuestos. El ensayo realizado por Amgen tuvo que ser abor-
tado al observar que el compuesto AMG-517 produca una marcada hipertermia
en los voluntarios del estudio. Un posterior anlisis en modelos animales revel
que, efectivamente, el bloqueo potente de TRPV1 aumentaba la temperatura cor-
poral entre 1-3C (18). Este resultado sugiere que TRPV1 esta tnicamente acti-
vo en condiciones fisiolgicas y que esta actividad es fundamental para la regu-
lacin de la temperatura corporal (18). En apoyo de esta hiptesis se ha descrito
que TRPV1 contribuye a la generacin de la fiebre polifsica inducida por el pi-
rgeno bacteriano liposacarido (LPS) (19). Conjuntamente, todos estos estudios
sugieren que el bloqueo indiscriminado del receptor TRPV1 con potentes anta-
gonistas puede conllevar a efectos secundarios intolerables teraputicamente. No
es de extraar, por tanto, que muchas compaas farmacuticas hayan abortado
los ensayos clnicos iniciados. No obstante, aunque el uso sistmico de estos com-
puestos sea inaceptable, su aplicacin tpica es todava una opcin vlida que se
est explorando.
LOS COMPLEJOS PROTEICOS DE TRPV1 COMO DIANAS
TERAPUTICAS
Al igual que otros canales TRP, el receptor TRPV1 no se encuentra en la
membrana celular como una entidad aislada, sino que est formado parte de
complejos proteicos que constituyen redes de sealizacin celular. Estos en-
samblados proteicos controlan desde el transporte del receptor a la membrana
neuronal hasta su funcionalidad una vez incorporado en la superficie de la c-
lula. En los ltimos aos se ha producido un avance notable en la identificacin
de los componentes moleculares que forman parte de estos macrocomplejos (8,
11). As, el rastreo de genotecas derivadas de mRNA neuronal mediante la tc-
nica del doble-hbrido en levaduras, ha identificado protenas que interaccionan
ANTONIO FERRER MONTIEL
66
con los dominios intracelulares de TRPV1, algunas de ellas modulan la activi-
dad de canal inico (8). Uno de estos rastreos identific las protenas vesicula-
res, sinaptotagmina IX y snapin, que estn implicadas en la exocitosis neuronal
dependiente de Ca
2+
y mediada por el llamado complejo SNARE (14). A dife-
rencia de la exocitosis constitutiva, la fusin vesicular mediada por protenas
SNARE se produce en respuesta a una seal extracelular que aumenta la con-
centracin del in Ca
2+
en el citosol celular. La exocitosis regulada juega un pa-
pel clave en muchos procesos neuronales, incluyendo la sinpatognesis y la po-
tenciacin de larga duracin, un fenmeno sinptico implicado en la memoria
y aprendizaje. Por tanto, la interaccin de TRPV1 con protenas del complejo
SNARE inmediatamente sugiri que las neuronas podran modular la actividad
del receptor regulando sus niveles de expresin superficial en respuesta a est-
mulos ambientales (14). En este sentido, la activacin de la PKC directamente
con steres de forbol, o mediante la exposicin celular a las neurotrofinas NGF
e IGF-1, dos agentes pro-inflamatorios, aumentaba notable y rpidamente la ex-
presin superficial de TRPV1 en las membranas (14-16). Este incremento era
prevenido en gran medida por el tratamiento de la toxina botulnica, un blo-
queante especfico de la exocitosis neuronal (14). Estos estudios claramente su-
girieron que la sensibilizacin inflamatoria de los nociceptores implicaba un in-
cremento en la expresin superficial del receptor TRPV1, y que el bloqueo de
este aumento podra tener una relevancia teraputica importante. De hecho, es-
tudios recientes de nuestro grupo en nociceptores en cultivo han demostrado que
la inhibicin de la exocitosis neuronal regulada mediante pptidos que interfie-
ren con el complejo SNARE, elimina la sensibilizacin inflamatoria de TRPV1
y de los nociceptores, sin alterar la actividad del canal. Resultados preliminares
en modelos animales muestran que estos pptidos poseen actividad anti-infla-
matoria y analgsica.
CONCLUSIONES Y PANORMICA
Cada vez es ms claro que los canales TRP son cardinales en la fisiologa
sensorial y que su alteracin funcional, bien mediante mutaciones o por est-
mulos nocivos o factores pro-inflamatorios, conduce a estados patolgicos in-
dicando que estos dispositivos moleculares son dianas teraputicas. El desarro-
llo de compuestos que controlen su actividad patolgica es, por tanto, un objetivo
fundamental en neurofarmacologa. De experiencias y resultados previos hemos
de aprender que la inhibicin indiscriminada de estos receptores (fisiolgicos y
patolgicos) conduce a efectos secundarios que enmascaran su beneficio tera-
67
LOS CANALES DE COMUNICACIN SENSORIAL TRPS COMO DIANAS FARMACOLGICAS
putico. Por ello, es esencial el diseo de compuestos que interaccionen prefe-
rentemente sobre los receptores patolgicamente activados. Los antagonistas
acompetitivos que acten como bloqueadores de canal abierto son una alterna-
tiva vlida, por cuanto estos compuestos se unirn mayoritariamente a aquellos
canales que estn hiperactivados (abiertos). Una estrategia alternativa es actuar
sobre los complejos multiproteicos que contienen estos canales y que contribu-
yen crucialmente a la sealizacin celular y a la patologa. La identificacin de
los componentes moleculares de estas redes proteicas pavimenta el camino para
la validacin de nuevas dianas teraputicas tiles para el tratamiento de las al-
teraciones patolgicas que implican los canales TRP. El futuro nos demostrar
si estas aproximaciones rinden compuestos con ndices teraputicos superiores
que, especialmente, tengan eliminados, o al menos, marcadamente disminuidos
los efectos secundarios de los productos actuales.
AGRADECIMIENTOS
Agradezco la contribucin de todos los miembros de mi grupo de investi-
gacin, y a mis colaboradores G. Fernndez, R. Planells, C. Belmonte, A. Mes-
seguer, E. Prez, F. Viana, A. Gomis, A. Fernndez, M. Caprini, F. Albericio y
C. Carreo, responsables de gran parte del progreso realizado en los ltimos
aos. Los proyectos han sido financiados por el Ministerio de Ciencia e Inno-
vacin, La Generalitat Valenciana, La Fundacin Ramn Areces, La Fundaci
la Marat de TV3, y DiverDrugs, SL.
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