Biologia Celular

Ana Cristina Ribeiro Gomes
Biologia Celular (2009-2010) Ana Cristina Ribeiro Gomes

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Clulas Procariticas e Eucariticas
Clula e Teoria Celular
Todos os seres vivos so constitudos por clulas que constituem a unidade bsica da
vida, podendo apresentar vrios nveis de complexidade.
Para o estudo da clula necessrio o recurso a instrumentos que a aumentem, tal
como microscpios.
Desenvolvimento da teoria celular:
Robert Hooke (1665) primeira observao de clulas (membranas
plasmticas e no clulas vivas) com um microscpio composto;
Robert Brown (1831) observao do ncleo;
Matias Schleiden (1838) tecidos vegetais so constitudos por clulas;
Theodor Schwann (1839) estende a observao anterior a tecidos animais;
Rudolf Virchow (1858) todas as clulas tm origem em clulas pr-existentes,
por diviso (omnis cellula e cellula todas as clulas vm de clulas).
Teoria celular qualquer organismo animal ou vegetal constitudo, inteiramente, por
clulas. Assim, a unidade fundamental da vida, na medida em que todos os organismos vivos
so compostos por uma ou mais clulas.
Todas as clulas tm origem em clulas pr-existentes;
As clulas possuem todas as caractersticas fundamentais da vida, como a
homeostasia, produo de energia e reproduo;
As clulas contm toda a informao hereditria dos organismos que
passada da clula me para as clulas-filhas. Esta transferncia de informao
que ocorre fiel e equitativa, excepto quando ocorrem erros de diviso.

Caractersticas Comuns a Todas as Clulas
Membrana (cito)plasmtica membrana constituda por lpidos e protenas que limita
a clula (plasmalema designao inicial desta estrutura).
Citoplasma contedo celular, delimitado pela membrana citoplasmtica, excluindo o
ncleo. onde se encontram todas as estruturas celulares, tambm delimitadas por
membranas, e que se incluem numa matriz de origem aquosa, o citosol. no citosol que, em
soluo aquosa, se encontram enzimas, ATP, e outras substncias variadas.
a informao hereditria armazenada em molculas de DNA que codifica a sntese de
RNA e protenas.
Diviso celular capacidade de se reproduzirem.

Domnios das Clulas
As clulas esto divididas em 3 domnios que provm de um precursor comum.
EUBACTERIA (Thermatoga; Borrelia burgdorferi; B. subtilus; Green sulfur
bacteria; Flavobacteria; E. coli)
ARCHAEABACTERIA (Sulfolobus; Thermococcus; Methanococcus jannaschii;
Methanobacterium; Halococcus; Halobacterium)
EUKARYOTA (Diplomonadas; Microsporida; Euglenida; Ciliados; Fungos;
Plantas; Animais)
Presume-se que exista um progenitor comum a todas as espcies existentes, bem
como, um progenitor comum aos seres dos domnios ARCHAEBACTERIA e EUCARYOTA.
Seres
Procariontes
Seres
Eucariontes
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Planos Bsicos de Organizao Celular
Podem encontrar-se 2 padres de organizao celular: estruturas mais simples,
presentes nas clulas procariticas, e estruturas mais complexas, presente nas clulas
eucariticas.
Clulas procariticas:
Maioria das clulas sem compartimentos membranares internos, ou seja,
possui apenas a membrana citoplasmtica na sua estrutura;
DNA localizado no citoplasma, sob a forma de uma molcula circular
(nucleide regio semelhante ao ncleo), geralmente no associada a
protenas, no entanto pode existir algumas, que so muito diferentes dos
histonas (eucariontes), designadas protenas semelhantes aos histonas;
O citosol possui redes fibrosas do citoesqueleto, no entanto as protenas que
as constituem so diferentes.
Clulas eucariticas:
Caractersticas dos grupos Protista, Plantae, Fungi e Animalia;
DNA constitudo por vrias molculas lineares associadas a protenas
(histonas), localizado num ncleo bem delimitado por um invlucro;
Possui vrios compartimentos membranares intracelulares;
No citosol encontram-se redes de estruturas filamentosas, de origem proteica,
que do e mantm a forma da clula, constituindo o citoesqueleto.

A Clula Procaritica
Estas clulas possuem uma grande diversidade de formas e tamanhos, possuem a
capacidade de viverem isoladas ou em colnias, enquanto organismos unicelulares.
No geral, uma clula procaritica constituda por cpsula, parede celular, membrana
citoplasmtica, citoplasma e nucleide.
Parede celular estrutura exterior membrana citoplasmtica, que confere forma
clula, bem como proteco fsica e osmtica. A rigidez desta camada deve-se presena de
peptidoglicanos, que so os constituintes essenciais da parede celular e os nicos constituintes
capazes de se juntarem a uma membrana exterior.
Bactria Gram positivo bactria que apenas possui peptidoglicanos, numa
camada grossa, formando a parede celular. Pode ser corada.
Bactria Gram negativo bactria que possui uma fina camada de
peptidoglicanos e uma membrana exterior a formar a parede celular. No
pode ser corada.
Cianobactria seres procariontes com estruturas e caractersticas prprias que os
aproximam das clulas eucariticas. Realiza uma fotossntese semelhante das plantas
superiores, com libertao de oxignio (ao contrrio das restantes bactrias). Possuem
membranas fotossintticas no citoplasma, sob a forma de membranas livres. As colnias de
cianobactrias podem iniciar a diferenciao de clulas, formando heterocistos (locais de
fixao de azoto). A capacidade de libertar hidrognio deve-se actuao de 2 hidrogenases
diferentes (assimilao e bidireccional), presentes no seu metabolismo, estando, assim,
envolvidas no metabolismo do hidrognio e das respectivas reaces que catalisa.
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A Clula Eucaritica
Animal ncleo, retculo endoplasmtico rugoso/liso, dictiossoma, membrana
citoplasmtica, mitocndria. As clulas diferenciadas podem ser do tipo: epiteliais, nervosas,
sanguneas, musculares, sensoriais, germinativas e conectivas.
Vegetal ncleo, cloroplasto, membrana citoplasmtica, mitocndria, parede celular,
retculo endoplasmtico rugoso/liso, dictiossoma. As clulas diferenciadas podem ser do tipo:
drmico, vascular e apical.
Parede celular estrutura externa membrana citoplasmtica constituda por
celulose, hemicelulose e pectinas, o que confere uma grande rigidez s clulas
vegetais e prpria planta, protegendo-as e sendo responsvel pela sua
adeso. Apesar de ser bastante rgida possui plasmodsmios (interrupes na
parede) que permitem a comunicao entre as clulas dos tecidos vegetais;
Vacolos ocupa o centro e grande parte do volume da clula. uma
estrutura de armazenamento de substncias como ies, metabolitos
secundrios, pigmentos e substncias de reserva. O tonoplasto a membrana
que rodeia esta estrutura. As clulas jovens apenas possuem pequenos
vacolos, mas quando a clula se comea a diferenciar, esses vacolos
fundem-se e formam o vacolo que ocupa grande rea da clula.

Procariontes Eucariontes
Organismos Eubacteria e Archaebacteria Protistas, fungos, plantas e animais
Tamanho das clulas 1-10 m 10-100 m
Metabolismo Aerbico ou anaerbico Aerbico
Organelos Sem organelos Variados
DNA Molcula de DNA circular, no citoplasma Molculas lineares longas de DNA com zonas no codificantes
RNA e protenas Sintetizados no mesmo compartimento RNA sintetizado no ncleo e protenas no citoplasma
Diviso celular Diviso binria Mitose ou meiose
Organizao celular Unicelular Uni e multicelular com diferenciao de muitos tipos de clulas

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Microscopia ptica e Electrnica
Microscopia ptica
Salvino DArmato (1285) lentes de vidro.
Zaccharias Jansen (1590) primeiro microscpio composto.
Foi a partir da descoberta das lentes de vidro que as teorias foram evoluindo e
permitiram o desenvolvimento de microscpios compostos e a observao de clulas.

Microscpio ptico de Campo Claro

Lentes do condensador condensa a luz da lmpada e direcciona-a para a preparao,
ou seja, foca um cone de luz em cada ponto da preparao.
Lentes das objectivas recolhe todos os raios luminosos dos pontos que incidiram na
preparao, para criar uma imagem.
na objectiva que se origina a primeira imagem real e invertida da preparao. Na
ocular, origina-se a imagem final que virtual, ampliada e invertida.

Resoluo (poder resolvente) capacidade de distinguir pontos muito prximos, ou
seja, a capacidade que o aparelho tem de revelar pormenores do objecto observado,
visualizando pontos que estejam muito perto um do outro. Um microscpio, para alm de
ampliar a imagem, deve ter um bom poder resolvente.

Limite de resoluo distncia mnima entre 2 objectos para que sejam distinguveis,
ou seja, a distncia mnima entre 2 pontos, que possvel observar.
Quanto maior a resoluo de um microscpio, menor o seu limite de resoluo.
Abertura numrica da objectiva determinada pelo ngulo formado pelo cone de luz
com as lentes das objectivas. ; N ndice de
refraco do meio entre o objecto e a objectiva

; semi-
ngulo de abertura da objectiva.
Para se obterem valores de resoluo cada vez menores, necessita-se de um aumento
da abertura numrica da objectiva ou a utilizao de um leo de imerso.
leo de imerso aumenta a abertura numrica da objectiva, diminuindo o limite de
resoluo e aumentando a resoluo do microscpio, ou seja, direcciona toda a luz,
directamente, para a preparao, sem deixar que a luz se disperse.
Limite de resoluo mximo do microscpio ptico 0,2 m.
A luz ao atravessar um material com ndice de refraco diferente do ar sofre um
desvio e um atraso de onda ( )
Quando 2 ondas luminosas combinam-se em fase, a amplitude da onda
resultante maior e brilhante, assim, de ondas na mesma fase resultam
imagens mais brilhantes;
Quando 2 ondas luminosas esto fora da mesma fase, cancelam-se
mutuamente e produzem uma onda onde a amplitude e o brilho so menores,
assim, ondas desfasadas interferem uma com a outra e anulam-se,
visualizando-se um objecto mais escuro.
Estruturas de maior contraste interferem com a luz que as atravessa, surgindo imagens
escuras, enquanto que, de estruturas de pouco contraste surgem imagens mais claras.
possvel observar estruturas de diferentes espessuras, devido ao desfasamento das
ondas que origina atrasos de luz.
Lentes da
Ocular
Prisma
Lentes das
Objectivas
Preparao
Lentes do
Condensador
Lmpada
LUZ (400-700 nm)
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Certas vezes, para se observarem diferentes estruturas, necessrio proceder a um
tratamento do material, de modo a provocar desfasamento de ondas e diferenas de
contraste, para que sejam distinguveis. Este tratamento pode basear-se numa fixao,
desidratao, impregnao (parafina) ou incluso.

Microscpio ptico de Campo Escuro

A luz passa pelas laterais do diafragma anular em raios directos. Na preparao
origina-se uma luz directa, que difractada para as lentes oculares.
O contraste, revela o objecto da preparao brilhante, num fundo escuro. A utilizao
do diafragma permite que a luz s incida no objecto e tudo o resto permanea escuro.

Microscpio de Contraste de Fase

possvel observar os pormenores de clulas no coradas. A passagem da luz por
diferentes espessuras provoca o atraso das ondas luminosas e faz com que estas atinjam a
imagem em diferentes fases. Assim, observam-se pormenores de estruturas celulares sem
qualquer tipo de tratamento, devido aos atrasos que a luz sofre.

Microscpio de Interferncia Diferencial de Nomarski

O polarizador faz com que a luz passe a propagar-se numa nica direco. A luz
polarizada dividida em 2 raios, pelo prisma, que atravessa a preparao em 2 pontos muito
prximos, obtendo-se 2 imagens. Estes raios juntam-se, novamente, no prisma principal.
A imagem originada nas oculares possui um pseudo-relevo, como se fosse uma
imagem tridimensional, devido juno das duas imagens provenientes dos 2 pontos muito
prximos. Apesar de tudo, continua a ser uma imagem plana e bidimensional.

Microscpio de Fluorescncia

Primeiro filtro selecciona apenas uma gama de intensidade luminosa para
prosseguir, ou seja, selecciona o comprimento de onda de excitao das molculas da
preparao que se pretende observar.
Lentes da
Ocular
Lentes das
Objectivas
Preparao
Lentes do
Condensador
Diafragma Anular Lmpada
Lentes da
Ocular
Prato de Fase
Lentes das
Objectivas
Preparao
Lentes do
Condensador
Diafragma Anular (anel
menos espesso)
Lmpada
Lentes da
Ocular
Analizador
Prisma Principal
de Nomarski
Lentes das
Objectivas
Preparao
Lentes do
Condensador
Prisma Auxiliar de
Nomarski
Plano
Polarizador da
luz
Diafragma
(com um
orifcio)
Lmpada
Molculas Fluorescentes
Absoro de luz com
comprimento de onda
especfico [ de excitao ]
Emisso de luz com um
comprimento de onda superior
[ de emisso ]
Lentes da
Ocular
Segundo
Filtro
Espelho
Inclinado
Preparao
Lentes das
Objectivas
Espelho
Inclinado
Primeiro
Filtro
Lmpada
LUZ
LUZ
LUZ
LUZ
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Espelho inclinado reflecte luz abaixo de uma determinada intensidade e transmite a
luz acima dessa mesma intensidade.
Segundo filtro corta sinais fluorescentes indesejados, deixando atravessar-se pela
fluorescncia especfica e dentro de determinada gama de intensidade.
Esta tcnica utiliza as propriedades das substncias fluorescentes. Cada substncia
possui um comprimento de onda de absoro caracterstico, e um de emisso, que superior.
Assim, devido presena dos filtros, o objecto absorve o comprimento de onda de excitao e
emite o de emisso, que ao chegar ocular reproduz a imagem da preparao.
Fluorescncia primria (autofluorescncia) fluorescncia natural das substncias,
presentes nos tecidos.
Fluorescncia secundria (induzida) fluorescncia resultante da utilizao de
corantes fluorescentes especficos (fluorocromos).
Imunofluorescncia anticorpos especficos para determinadas protenas
associados a corantes fluorescentes. Utilizam-se anticorpos que se ligam,
especificamente, substncia que se pretende marcar, e de seguida, marca-se
o anticorpo com os fluorocromos. Assim, o anticorpo que, ligado protena
especfica, que se revela, no microscpio de fluorescncia, por estar marcada;
Brometo de etdio liga-se ao DNA e emite uma fluorescncia avermelhada;
DiOC6 incorporado pelas mitocndrias e emite uma fluorescncia verde. As
zonas ricas em DNA mitocondrial fluorescem em amarelo.
Hibridao in situ (FISH) DNA corado com iodeto de propdeo que fluoresce
de vermelho. Quando hibrida com uma sequncia de DNA ligada a biotina
(marcada com fluorescena), as zonas hibridadas fluorescem em amarelo.

Microscpio Confocal

Utiliza um sistema ptico semelhante ao do microscpio ptico, onde a luz reduzida
a uma imagem pontual (fica condensada num ponto), e faz o varrimento de cada ponto do
plano de foco. A imagem construda num computador, por meio de um espelho oscilatrio
deflector (percorre a imagem toda nesse ponto dando uma imagem total do objecto) entre o
espelho e a objectiva. A fonte de raios laser. Trata-se de um mtodo no invasivo, onde os
espcimes esto fixados ou vivos.
Este sistema permite o seccionamento ptico do objecto. da sobreposio da
imagem de vrios planos de foco consecutivos que possvel a construo da imagem
tridimensional das clulas. A imagem construda pela luz emitida no plano do objecto em
foco, observando-se uma imagem mais ntida dos pormenores do espcime.

Microscopia Electrnica
Lois de Broglie electres em movimento possuem uma onda associada com
comprimento de onda .
Bush possibilidade de focar electres em movimento num campo magntico.
Hamilton analogia hamiltoniana, que refere que em electres em movimento num
campo magntico podem aplicar-se as leis das radiaes pticas.
Knoll e Ruska construo do primeiro microscpio electrnico.

Lentes da
Ocular
Abertura
Confocal
Espelho
Deflector
Oscilatrio
Lentes da
Objectiva
Plano de Foco Preparao
Lmpada (vertical
e lateral)
LUZ
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Este microscpio desenvolve-se devido necessidade de observar objectos com mais
pormenor, conseguindo-se com diminuio do comprimento de onda.

Para que se obtenha radiaes com um comprimento de onda menor que o do
microscpio ptico necessrio aumentar a diferena de potencial. Sabe-se que o
comprimento de onda do feixe de electres inferior ao comprimento de onda da luz.
A acelerao dos electres deve-se diferena de potencial, que vai originar um feixe
de determinado , que tanto maior quanto menor for a diferena de potencial.
A imagem forma-se atravs dos electres que atravessam o objecto. No entanto, esta
imagem electrnica no visvel, sendo necessria a sua projeco para a base.
Os valores de limite de resoluo so apenas tericos pois existem defeitos que
tornam esses valores complicados de se atingir, na prtica. No entanto, permite a observao
da ultra-estrutura da clula, pois a resoluo que se consegue obter (1 ) duas mil vezes
superior do microscpio ptico.

Microscpio Electrnico de Transmisso

Pode-se dizer que possui um sistema semelhante ao microscpio ptico mas invertido.
Em vez de se observar a imagem directamente, observa-se a imagem que projectada num
ecr fluorescente ou imprimida numa pelcula fotogrfica. A primeira imagem da preparao
formada nas objectivas, no meio da coluna, e a imagem final ocorre aps a passagem na lente
projectora. Existem uns binculos incorporados que ampliam a imagem.
Os electres danificam o material biolgico, assim, aps algum tempo no possvel
voltar a observar, a mesma preparao.
As lentes utilizadas so diferentes das lentes do microscpio ptico.
Lente electrosttica (Canho de electres) filamento de tungstnio
aquecido incandescncia e liberta electres (efeito de Edison / termoinico),
passa pelo filamento rodeado pelo anel de Wehnelt (ctodo), e o feixe
acelerado dirige-se para o nodo, originando um feixe acelerado por diferena
potencial, estabelecida entre (-) e (+).
Lentes electromagnticas (lente da objectiva e de projeco) cilindros ocos,
de ferro, rodeados por um enrolamento elctrico, onde se lana a corrente
que gera um campo magntico. Ocorrem deflexes (desvios) nos electres.
necessria a existncia de um sistema de gua a correr na coluna, de modo a que as
lentes se mantenham na temperatura normal, impedindo o seu sobreaquecimento, pois a sua
utilizao aquece-as imenso.
Para alm disto, a coluna do microscpio encontra-se em vcuo elevado, pois se a
coluna possui-se ar os electres no eram propagados a distncia necessria para a
observao da imagem, sendo um factor que condiciona as condies do material biolgico.
A formao de imagens s possvel devido existncia de regies com diferentes
densidades, devido existncia de feixes que sofrem disperso elstica e inelstica.
Disperso inelstica electres perdem energia e varia o , ficando desfasados em
relao aos que no sofrem disperso (contraste de fase). Ocorre quando o feixe de electres
atravessa a preparao junto nuvem electrnica.
Lentes de
Projeco
Prisma Lentes das Objectivas Preparao
Lentes do
Condensador
h constante de Planck
m massa dos electres
v velocidade dos electres
V diferena de potencial
que imprime aos electres a
velocidade v.
Electres
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Disperso elstica electres mudam de trajectria e praticamente no atingem o
ecr (contraste de amplitude). Ocorre quando o feixe de electres atravessa a preparao
junto ao ncleo. Estes feixes so absorvidos pela estrutura das lentes objectivas e pelo
diafragma que intercepta o maior nmero de electres, os quais no chegam s lentes de
projeco como os feixes provenientes da disperso inelstica.
O aumento do contraste realizado pelo diafragma de contraste da objectiva que d
contrastao ao material biolgico.
, N
0
nmero de electres que incidem sobre o
objecto por unidade de superfcies; N nmero de electres que atingem o ecr.
O material biolgico colocado numa grelha / rede circular que tem cerca de 4 mm de
dimetro. As grelhas podem ser formada por vrios materiais e constituda por rede e por
uma bordadura que serve se agarrar na preparao, com uma pina.
Os cortes necessitam de ser ultra-finos para que os electres consigam atravessar o
material sem fazerem ricochete (o feixe s atravessa determinadas espessuras de material).
O material biolgico necessita de ser preparado antes da sua observao, pois no
pode conter nenhuma gua (esta evaporava, com as elevadas temperaturas, e destrua o
vcuo da coluna), assim no possvel observar clulas vivas e este material necessita de ser
fixado e desidratado, antes da observao.
Aps o corte do material biolgico em pequenos cubos, prossegue-se sua fixao, de
modo a preservar a estrutura celular, impedir a actividade enzimtica, preparar os tecidos para
tratamentos subsequentes e conferir caractersticas que permitam suportar o efeito do feixe
de electres.
Contrastantes (corantes) molculas que se ligam especificamente e permite a
observao de materiais que em condies normais, no se observariam.
Numa fixao qumica o fixador pode actuar directamente sobre os tecidos ou ser
aplicado por perfuso.
Soluo fixadora fixador (aditivos que estabilizam a ligao das molculas) com uma
soluo tampo (estabilizar o pH de modo a no destruir o vcuo existente). A temperatura, o
tempo e a concentrao est dependente do material biolgico que se observa.
Tetrxido de smio alm de fixador actua, tambm, como contrastante
(tomos com elevada densidade electrnica). Todas as membranas aparecem
como linhas negras pois so constitudos por fosfolpidos, que so facilmente
ligados ao smio.
Aldedos penetram rapidamente nos tecidos fazendo com que a actividade
enzimtica permanea inalterada. As membranas aparecem a branco pois a
negro esto representadas as estruturas que possuem protenas.
o Glutaraldedo fixador de protenas que estabelece ligaes
covalentes entre grupos amina de molculas proteicas. Reage com
alguns fosfolpidos e hidratos de carbono;
o Formaldedo utilizado para reaces de citoqumica enzimtica e
imunocitoqumica.
Permanganato de potssio bom fixador de biomembranas,
preferencialmente de fosfolpidos.
A penetrao do smio nas clulas mais rpida que a do aldedo. Normalmente, usa-
se uma dupla fixao (glutaraldedo + smio) que serve para observar a estrutura toda da
clula, tanto as membranas (devido ao smio) como as protenas (devido ao glutaraldedo).
Desidratao retirar a gua livre existente nas clulas. So utilizadas solues de
concentrao crescente de desidratante (soluto orgnico como a acetona e etanol), ou seja,
vai-se aumentando a concentrao da substncia que est a desidratar, at se chegar pura.
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Impregnao substituio do desidratante pelo meio de incluso, ou seja, o material
biolgico em misturas, progressivamente, mais concentradas do meio de incluso e do
desidratante, para no danificar as clulas. O principal meio de incluso plstico (resinas
epoxi).
Incluso em resina pura. Faz-se a polimerizao da resina para se obter um bloco
rgido, facilmente manusevel para a execuo de cortes ultra-finos.
Contraste positivo solues de metais pesados absorvidos pelas estruturas celulares,
ou seja, usam-se solues de contrastante formado por metais, que se ligam especificamente
s estruturas para as quais tm afinidade, contrastando-a. Assim, os electres so desviados
quando incidem nesses elementos metais. O contraste feito sobre o material biolgico que j
est na grelha (acetato de uranilo, citrato de chumbo).
Contraste negativo contrastante depositado volta da estrutura, originando um
fundo negro que rodeia a estrutura clara, ou seja, o material biolgico no fica contrastado
pois este deposita-se ao seu redor. O contraste entre o material e o fundo negro permite a
observao correcta das estruturas celulares, apesar destas no estarem contrastadas. Utiliza-
se para o estudo de partculas ou objectos isolados e complexos macromoleculares, ou seja, s
se aplica, esta tcnica, a estruturas isoladas. A substncia utilizada deve: possuir uma
densidade electrnica elevada e um elevado peso molecular, ser solvel e no produzir cristais
quando passa ao estado slido (cido fosfotngstico, acetato de uranilo).

Crio-Gravao

Processo fsico de rpida congelao das clulas. Para tal, o material mergulhado
num lquido que o congela, rapidamente, ficando fixado por congelao.
Coloca-se o material numa campnula, que possui baixa temperatura, sob uma mesa.
Esta campnula possui um brao metlico, com uma ponta afiada, que bate no material
congelado e quebra-o, dando origem a uma fractura irregular.
Seguidamente, d-se a evaporao do gelo superficial, colocando-se sob a superfcie
de fractura, um metal que copia toda essa superfcie. Esta cpia isolada e colocada numa
grelha de observao.
Assim, o material biolgico s utilizado para se retirar um molde sua superfcie
fracturada, para que esta cpia seja observada, e no o material biolgico.
A vantagem desta tcnica que possibilita a observao da parte externa e interna da
clula / estrutura, pois a fractura pode dividir estruturas da clula em duas vendo-se o interior
nalguns casos, e o exterior noutros. Assemelhasse a uma imagem com relevo, mas no deixa
de ser uma imagem apenas da superfcie da fractura, e no uma imagem tridimensional.

Microscopia Electrnica de Campo Escura
Utiliza-se um diafragma anular, que faz com que os electres passem perifericamente,
transformando-se o feixe de electres num cone oco que atinge o objecto com uma certa
inclinao, uniforme a toda a volta.
Os electres desviados continuam o seu percurso, s se observando a imagem
brilhante, num fundo preto.
Material
Biolgico
Congelao
rpida
Campnula
com brao
metlico
Fractura de
uma
superfcie
irregular
Evaporao
do gelo da
superfcie
Cpia com
um metal
Observao
da cpia
metlica
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Microscpio Electrnico de Muito Alta Voltagem
Neste microscpio, aumenta-se o poder de penetrao dos electres, permitindo a
observao de cortes mais espessos que os cortes ultra-finos (espessura semelhante utilizada
em microscpios pticos). Para isso, so necessrios aceleradores mais potentes, que os que
so utilizados no microscpio electrnico normal.
Na prtica, no trazem grandes vantagens excepto a possibilidade de utilizao de
cortes mais espessos para a observao.

Microscpio Electrnico de Varrimento

Este microscpio capaz de revelar uma estrutura tridimensional do material
biolgico. No se efectuam cortes, para a observao, pois colocam-se as estruturas inteiras.
O feixe de electres (electres primrios) reduzido a uma imagem brilhante e
pontual, que bate na superfcie do material biolgico, originando electres secundrios, que
so recolhidos por um detector e projectados num ecr.
Para que tal acontea, necessrio desidratar, fixar o material biolgico, e cobrir a sua
superfcie com um metal condutor, de modo a libertar electres, quando o feixe de electres
primrios o atinge.

Microscpio Electrnico de Varrimento de Presso Varivel
Permite a observao de material biolgico vivo, mas apenas algumas horas, pois a
incidncia dos electres provoca a destruio dessas clulas vivas.
Esta observao deve-se ao facto de a presso variar ao longo da coluna do
microscpio, assim quando atinge o material, possui uma presso mnima. Para alm disso, o
material e a zona so arrefecidos, de modo a no se dar qualquer evaporao de gua que
possa destruir o vcuo.

Micro-Anlise Elemental
Trata-se de uma tcnica que faz a anlise qualitativa e quantitativa de elementos
qumicos, utilizando-se um raio-X.
Existe uma sonda que detecta o raio-X libertado aps o impacto dos electres do feixe
com os tomos do material biolgico. Como cada elemento, quando liberta electres, possui
um comprimento de onda (energia do raio-X) caracterstico. Atravs da avaliao desta
energia, conseguem-se detectar os elementos qumicos e proceder sua anlise.
Projeco
num ecr
Detector
Material
Biolgico
Prisma
Lentes das
Objectivas
Anel deflector
Lentes do
Condensador
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Tcnicas de Citoqumica e Imunocitoqumica
Citoqumica
Os avanos do microscpio electrnico e do microscpio ptico permitiram o estudo
citoqumico das clulas. Estas tcnicas permitem localizar e identificar compostos qumicos
especficos, nas clulas.
Para uma tcnica citoqumica ser considerada vlida, necessrio que:
O composto a ser estudado esteja mobilizado;
O produto da reaco seja insolvel;
O mtodo seja especfico para uma substncia ou grupo qumico.

Reaces de Citoqumica para Microscopia ptica
Reaco de Feulgen permite a identificao de DNA. A hidrlise cida extrai as
purinas e deixa os grupos aldedos livres, para que reajam com a leucofucsina (reagente de
Schiff) dando uma cor prpura. Aps a reaco de Feulgen os locais de DNA observados
apresentam uma cor magenta.
Reaco de PAS permite a identificao de polissacardios em microscopia ptica.
Tratamento dos materiais com cido peridico, que vai ionizar as ligaes e libertar grupos
aldedo, ou seja, ocorre uma oxidao dos grupos glicosdicos-1,2 pelo cido peridico. O
reagente de Shiff (soluo aquosa de fucsina bsica descorada pelo anidrido sulfuroso) reage
com os polissacardios (glicognio) e transmite uma cor vermelha.
Reaco com Negro de Sudo permite a identificao de lpidos (depsitos) que
aparecem com uma cor azul negra. Trata-se de uma colorao fsica, pois o corante no
estabelece relaes qumicas com os lpidos, ou seja, s atravessa a clula e surge a colorao
com o contacto da substncia.

Reaces de Citoqumica para Microscopia Electrnica
Existem mtodos de extraco com enzimas (processo menos utilizado, actualmente) e
tcnicas de contrastao especfica de protenas (cido fosfotngstico), hidratos de carbono
(mtodo de Thiry) e cidos nucleicos (acetato de uranilo).
Citoqumica enzimtica ocorre um fornecimento de molculas de substrato. O
produto da reaco transforma-se num produto insolvel por reaco com outra substncia
presente no meio, e o local de ligao de actividade identificado pelo depsito de produto
insolvel. Forma imagens pouco ntidas, pois aparecem pouco contrastadas.
Fosfatase cida catalisa a hidrlise de mono-steres do cido fosfrico com
libertao de fosfato inorgnico (Pi), o qual permite a localizao do produto
insolvel. A fixao feita apenas com aldedo pois a utilizao do smio iria
inactivar as enzimas.

Peroxidases catalisam a reduo do perxido de hidrognio a gua
(
) que forma um substrato. As peroxidases so

elementos sem cor que reagem com certas substncias e produzem cor.
Adenilciclase;
Citocromo oxidase.
Glicerofosfato de
sdio
Glicerado de
sdio + Pi
Fosfato de
Chumbo
Sulfureto de
Chumbo
Sulfureto
de Amnio
12

Imunohistoqumica e Imunocitoqumica
So tcnicas que permitem a localizao de anticorpos que se ligam especificamente a
essas molculas. Baseia-se na capacidade do sistema imunolgico de detectar substncias
imprprias ao organismo (antignios), com os quais reage produzindo anticorpos.
Antignio toda a substncia que estranha a um organismo.
Tcnica directa utilizao de um anticorpo primrio que reconhece e se liga ao
antignio que se pretende localizar. Isola-se e purifica-se a protena determinada e injecta-se
noutro ser, que reconhece essa protena como um antignio, pois estranho ao organismo,
produzindo, assim, anticorpos. Extraindo-se a soluo desses anticorpos, e colocando-se na
preparao onde se quer localizar a protena, o anticorpo (que possui um marcador) ligar-se-
a essa protena e a sua localizao torna-se possvel.
Tcnica indirecta utilizao de um anticorpo primrio que reconhece e se liga ao
antignio que se pretende localizar, e de um anticorpo secundrio que reconhece e se liga ao
anticorpo primrio. Isola-se a protena que se pretende localizar e injecta-se noutro ser, que
reconhece como um antignio, induzindo a produo de anticorpos primrios. Esses
anticorpos (primrios) injectam-se noutro animal, que o reconhece como antignio e produz
anticorpos (secundrios). A soluo com os anticorpos colocada na preparao e numa
primeira reaco, o anticorpo primrio liga-se protena pretendida, seguindo-se a ligao do
anticorpo secundrio (marcado) ao anticorpo primrio, localizando-o.
Os marcadores dos anticorpos podem ser de vrios compostos:
Enzimas localizao por tcnicas de citoqumica enzimtica (peroxidase);
Compostos radioactivos localizao por tcnicas de autorradiografia (
125
I);
Fluorocromos utilizao do microscpio de fluorescncia (ptica);
Ouro coloidal partculas de ouro coloidais (microscopia electrnica).
complicado obter um conjunto de anticorpos especficos para esta reaco, pois
mesmo que se extraiam as solues dos anticorpos necessrio que haja, com total sucesso, a
ligao dos anticorpos-antignios respectivos. Esta tcnica indirecta torna-se mais especfica
que a tcnica directa.

Fraccionamento Celular
Fraccionamento celular tcnica que provoca a ruptura dos tecidos e das clulas,
permitindo a separao de diferentes componentes celulares para posterior anlise
bioqumica. Assim sendo, possvel isolar os vrios organelos, devido ruptura de tecidos e
clulas, de modo a que cada estrutura permanea intacta e viva, para posterior utilizao.
Engloba duas fases: homogeneizao (rompe as clulas) e separao dos componentes
celulares (permite isolar as estruturas pretendidas).
Homogeneizao dos tecidos triturao dos tecidos at sua ruptura. necessrio
que o meio de homogeneizao possua certas condies: presena de uma soluo tampo
para que no haja qualquer alterao na clula e sacarose que funciona como um protector
osmtico (concentraes osmticas inalteradas).

Coeficiente de sedimentao (expresso em unidades Svedberg, S) parmetro que
traduz a velocidade com que se movem partculas sujeitas a um campo gravitacional.

Tecido ou
clulas em
suspenso
Ruptura das
clulas
atravs de
sons de alta
frequncia
Utilizao de
detergente
para fazer
buracos na
membrana
plasmtica
Utilizando
alta presso,
fora-se as
clulas a
passarem por
um buraco
pequeno
Triturar as
clulas
A homogeneizao
deixa os organelos
intactos e fora da sua
estrutura celular
13

Centrifugao a amostra est contida em tubos que so inseridos num anel com
buracos cilndricos. A rpida rotao do rotor, gera enormes foras centrfugas que
sedimentam as partculas da amostra (originam sedimentos). O vcuo reduz a frico e previne
a sobreaquecimento. Este processo permite a seleco dos organelos que se apresentam
misturados, pois essas substncias misturadas deslocam-se a diferentes velocidades conforme
a respectiva densidade.
Separao dos componentes celulares:
Centrifugao diferencial / fraccionada separa uma mistura de partculas que
diferem em massa ou densidade. As partculas mais densas renem-se no
fundo do tubo e as menos densas permanecem no lquido subrenatante (que
pode ser transferido para outro tubo). Nesta tcnica, a centrifugao
seguida, a velocidades, gradualmente, crescentes, de modo a que as
substncias, cada vez menores, se separem at restar apenas citosol.

Centrifugao em gradiente de densidade / contra-gradiente separa
partculas ou molculas que diferem em massa mas que podem ser
semelhantes na forma e densidade. Utiliza-se uma soluo de um composto
que cria, ao longo da centrifugao, diferentes concentraes. Desta forma, as
substncias permanecem num local com concentrao semelhante sua.
Utiliza-se para separar substncias que surgiram do mesmo sedimento, numa
centrifugao diferencial. No h vrias velocidades, mas apenas uma.

Ncleo
Mitocndrias,
cloroplastos,
lisossomas
Membrana
plasmtica e
polirribossomas
Subunidades
ribossomais
Citoplasma
Formao de um
gradiente de
densidade
Colocar a soluo Centrifugar
Recolher as
amostras
14

Ncleo e Ciclo Celular
Ncleo
O ncleo possui grande parte do genoma da clula (para alm das mitocndrias e dos
cloroplastos), chegando a ocupar 10% do volume celular total.
Ncleo compartimento rodeado por 2 membranas, uma interna e outra externa, com
constituies proteicas diferentes, e perfurado por poros. o organelo que controla toda a
actividade celular.
O ncleo, normalmente, possui no seu interior cromatina dispersa, no entanto quando
est em diviso os cromossomas condensam-se at ao seu estado mximo.
A membrana externa que tem continuidade com o reticulo endoplasmtico possui
ribossomas associados.
O espao perinuclear (espao entre as duas membranas) possui uma continuidade com
o lmen do retculo endoplasmtico. Este espao possui laminas nucleares, que so
constitudas por filamentos (lamina) e formam uma rede de suporte.
A existncia de ncleo, nas clulas eucariticas, explicada por uma teoria: a
existncia de um citoesqueleto muito denso poderia romper o DNA, assim o material gentico
est protegido pelo ncleo, como se fosse uma proteco mecnica.
A lmina nuclear mais densa que as laminas (filamentos intermdios), e ambos do
forma e estabilidade ao invlucro pois ligam-se a nucleoporinas e a protenas ntegras da
membrana interna, interagindo, tambm, com a cromatina. Desta forma, o ncleo mantm um
suporte interior e intermdio.
Aquando a mitose o invlucro nuclear desagrega-se, pois h despolimerizao da
lmina nuclear e a fosforilao da laminas (as cnases esto dependentes das ciclinas).

Invlucro Nuclear
Tanto a membrana externa como a interna possuem poros, que dependem da
actividade celular, ou seja, quanto mais activa a transcrio maior o nmero de poros.
Poros nucleares protenas com um centro aquoso. No interior e no exterior existem
microtbulos que se estendem do transportador.
O transporte de pequenas molculas solveis em gua, atravs do invlucro nuclear,
d-se com a passagem pelos poros nucleares atravs de uma difuso passiva, enquanto
molculas maiores so transportadas atravs de mecanismos selectivos que implicam gasto de
energia biolgica sob a forma de GTP. Este tipo de transporte activo pode dilatar o poro.
Assim as molculas pequenas so capazes de passar, rapidamente, atravs de canais
abertos no complexo do poro nuclear, por difuso passiva, enquanto as macromolculas so
transportadas por um mecanismo selectivo dependente de energia, que importa protenas
para o ncleo e exporta RNA para o citoplasma.
As protenas seleccionadas so importantes para a constituio do ncleo, sendo
necessrio um sinal, em cada estrutura, capaz de a identificar (processo selectivo).
Sinal pequenas sequncias de aminocidos com carga positiva. Este sinal pode no
ser nico numa protena e est na sua superfcie, de modo a ser reconhecida, por receptores
nucleares. Podem estar presentes em qualquer local da protena desde que seja superfcie.
Receptores protenas citoslicas solveis que se ligam ao sinal e s nucleoporinas ou
recorrendo a adaptadores (indirectamente). Estes so codificados por uma famlia de genes,
onde cada gene codifica um receptor, que reconhece um determinado tipo de protenas.
Os adaptadores esto, estruturalmente, relacionados importao nuclear e
reconhecem localizaes de sinais nucleares a cargo de protenas. Contm, tambm, uma
localizao de sinal nuclear que a direcciona para um receptor de importao.
Quando o sinal reconhecido e h a ligao, a protena encaminha-se para os poros
nucleares, onde percorre as fibrilas que reconhece, e entram no ncleo.
15

O transporte de molculas de maiores dimenses de, e para, o ncleo implica gastos
de energia provenientes da hidrlise de GTP (GTPase Ran) que possui duas conformaes: GDP
Ran (desfosforilada) que predomina no citosol, e GTP Ran (fosforilada) que predomina no
ncleo. As suas concentraes asseguram que o movimento de troca de substncias seja
unidireccional.
O transporte de protenas para o ncleo diferente do transporte para os outros
organelos pois:
Atravessam os poros que possuem um canal aquoso, permitindo que as
protenas passem com a sua conformao final, sem necessitarem de se
transformar noutra substncia;
O sinal no removido pois as protenas tm de ser importadas
repetidamente devido diviso celular.
Estas diferenas devem-se ao facto de ser necessria rapidez quando h restituio do
material, aps a desagregao do DNA, na diviso nuclear.

Nuclolo
Nuclolo agregado de macromolculas, onde se forma o RNA. Local onde so
processados os rRNAs e montados os ribossomas. Local onde os RNA no codificante
processado e ligado a protenas, formando uma grande variedade de complexos
ribonucleoproteicos.
Possui um organizador nucleolar (conjunto de genes que codificam rRNA), onde h
uma rpida transcrio de genes, pela polimerase I que, juntamente, com protenas
constituem os ribossomas
constitudo por centros fibrilares, componente fibrilar densa, e uma componente
granular (partculas precursoras dos ribossomas). Pensa-se que a transcrio de DNA ocorra
entre o centro fibrilar e a componente fibrilar densa. Este processo possui continuidade fora
do nuclolo.
O tamanho desta estrutura reflecte a actividade da clula, ou seja, depende da
quantidade de RNA a ser transcrito e do nmero de ribossomas que est a produzir.
Aquando a diviso o nuclolo, tambm, se desagrega. Pode ter diferentes formas e
configuraes: compacto; em anel; reticulado / com nucleolonema.
As subunidades dos ribossomas so exportadas para o citoplasma, onde se tornam
funcionais, apenas.
Existem outras estruturas sub-nucleares, envolvidos no processamento do RNA, sendo
estruturas muito dinmicas que intervm na sntese, montagem e armazenamento de
macromolculas envolvidas na expresso de genes. Estas estruturas quando no so
necessrias desagregam-se.
Corpos de Cajal / corpos espiralados;
GEMS processamento de snRNA e snoRNA e ligao a protenas;
Grnulos intracromatnicos armazenamento de snRNP funcionais envolvidas
na exciso de intres do mRNA.
Nos procariontes, o DNA em contacto com o citoplasma provoca a simultaneidade da
sntese de RNA e da sntese de protenas, existindo poucas possibilidades do transcrito ser
alterado, por outro lado, nos eucariontes, o facto do DNA permanecer no ncleo, faz com que
a sntese de RNA seja separada espacial e temporalmente da sntese de protenas, pelo que o
transcrito pode sofrer modificaes e 1 gene pode codificar vrias protenas.
16

Cromossomas
Nos procariontes, o cromossoma circular, enquanto nos eucariontes, cada molcula
de DNA corresponde a 1 cromossoma diferente, estando toda a informao gentica de um
organismo no seu genoma.
No h relao directa entre a quantidade de DNA e a complexidade do organismo.
Cromossomas possuem centrmeros e telmeros. So distinguidos pelas sequncias
especficas de DNA que possuem e pela posio dos centrmeros, relativamente aos
telmeros. Existem vrios tipos de cromossomas:
Acrocntrico o centrmero encontra-se numa das extremidades;
Telocntrico o centrmero encontra-se perto das extremidades que
possuem satlites;
Sub-metacntrico o centrmero encontra-se mais perto de uma das
extremidades;
Metacntrico o centrmero encontra-se no centro do cromossoma.
As vrias sequncias de nucletidos especficos do origem a diferentes funes. A
origem da replicao o local onde se inicia a replicao do DNA, que pode ser em vrios
locais, em clulas eucariticas, e num nico local, em clulas procariticas.
Centrmero controla a ligao dos 2 cromossomas aps a replicao e a sua
distribuio pelas clulas filhas. o local onde se vai ligar um complexo proteico (cinetocoro),
que liga o cromossoma ao fuso acromtico.
Telmeros regies terminais do cromossoma, que formam uma espcie de cpsula,
porque contm sequncias especficas repetitivas (ricas em guanina). So importantes para
determinar a vida da clula, pois decide quantas vezes a clula se replica.
Na replicao, pequenas sequncias terminais dos telmeros no so replicados,
perdendo-se. Nas clulas germinais, a telomerase (adiciona nucletidos extremidade dos
telmeros, no originando cpias de DNA de menor tamanho que a molcula inicial) est
activa pelo que os telmeros se mantm com o mesmo comprimento (sequncias restitudas
com pequenos fragmentos de RNA). Tambm est activa, em clulas tumorais, motivo pela
qual as clulas possuem uma grande capacidade para se dividirem indefinidamente, possuindo
os telmeros anormalmente longos. Nas clulas somticas a telomerase no est activa, pelo
que os telmeros vo diminuindo at a clula morrer.
Quando os telmeros esto demasiado curtos para a replicao, a clula entra em
morte celular programada (apoptose).
Genes regio da molcula de DNA que produz um RNA funcional. Possuem exes
(regies codificantes), intres (regies no codificantes) e sequncias reguladoras.
A molcula de RNA quando transcrita alterada e processada, originando a molcula
de mRNA que vai migrar para o citoplasma.

Cromatina
O DNA muito grande mas no ncleo, estas molculas aparecem muito condensadas
em cromossomas. Esta condensao feita com o auxlio de protenas, que se enrolam e
dobram o DNA em diferentes nveis de organizao, possuindo uma condensao mxima, na
mitose.
Cromatina DNA com protenas.
Nos eucariontes as protenas que se ligam ao DNA podem ser histonas (exclusivas
destes seres) ou no-histonas.

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As histonas ligam-se ao DNA, com carga negativa, pois a grande percentagem de
aminocidos confere s histonas carga positiva. Para alm desta ligao, tambm existem
ligaes feitas atravs do hidrognio (pontes de hidrognio). Devido a estas ligaes a
interface entre o DNA e as histonas extensa.
Histonas nucleossomais protenas pequenas e muito conservadas (H2A, H2B,
H3, H4). Possuem longas caudas N-terminais que se prolongam para o exterior
do nucleossoma e podem sofrer modificaes;
Histonas H1 sequncias maiores e menos conservadas. Possuem um centro
globular que se liga ao nucleossoma e duas extenses (braos) que interagem
com as outras histonas H1.
Nucleossomas unidade bsica da estrutura de um cromossoma eucaritico. O DNA
enrola-se volta de um ncleo de 8 histonas nucleossomais (2 H2A, 2 H2B, 2 H3, 2 H4) com
uma poro de DNA que o liga ao nucletido seguinte. A histona H1 suporta estes
nucleossomas na sua estrutura.
Os nucleossomas repetem-se a cada cerca de 200 nucletidos. So uma estrutura
altamente dinmica.
Devido aos prolongamentos das histonas nucleossomais e histona H1, a
compactao da cromatina forma uma fibra, onde a interaco das suas caudas contribuem
para a sua organizao. Nesta condensao as guaninas e citocinas orientam-se,
preferencialmente, para o exterior enquanto a adenina e a timina orientam-se para o interior.
As modificaes nas caudas das histonas controlam a condensao e funo da cromatina
(acetilao, metilao, fosforilao e ubiquitinao).
Acetilao a carga positiva neutralizada e a cromatina aparece menos
condensada;
Metilao inibe a acetilao, continuando a manuteno da carga positiva;
Fosforilao introduo de cargas negativas;
Ubiquitinao degradao no proteossoma.
Os nucleossomas so estruturas dinmicas que se podem enrolar e desenrolar
espontaneamente, ou que podem ser remodeladas, por complexos remodeladores da
cromatina dependentes da hidrlise de ATP, para tal efeito.
O posicionamento dos nucleossomas determinado pela flexibilidade do DNA e pela
presena de protenas ligadas ao DNA. Este arranjo extremamente dinmico e muda
conforma as necessidades da clula.
Na cromatina, existem regies sem nucleossomas, apenas com outras protenas que se
ligam ao DNA.
Dentro do ncleo existe a eucromatina (cromatina dispersa) e a heterocromatina
(cromatina condensada).
A cromatina, na interfase, uma estrutura dinmica que expe, num determinado
momento, determinadas sequncias de DNA que so transcritas conforme as necessidades da
clula.
Na maior parte dos casos, os cromossomas s so visveis durante a diviso celular,
pois quando esto muito condensados. Esta grande condensao impede o acesso da RNA
polimerase. Para atingir a sua mxima condensao, a fibra formada pelo DNA, nucleossomas
e histonas H1, vai, ainda, ser dobrada e enrolada.
Existem outras protenas que no so histonas, mas so cruciais para a estrutura do
cromossoma (protenas SMC e factores de transcrio)
Cromatina activa no est condensada e est a ser, activamente, transcrita. Ou seja,
a cromatina menos condensada nas zonas que so activamente transcritas. Esta
bioquimicamente distinta.
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Dependendo da posio, na fibra cromatnica, determinado gene pode ser,
activamente, transcrito ou silenciado, consoante as necessidades de cada clula especfica.

Caritipo
Caritipo conjunto total de todos os cromossomas de um indivduo. O nmero,
tamanho e forma dos cromossomas distinto para uma determinada espcie. Geralmente, o
caritipo humano constitudo por 44 autossomas e 2 cromossomas sexuais.
Os cromossomas possuem um padro de bandas caractersticas que ajudam a
distinguir cromossomas semelhantes, sendo possvel a deteco de anomalias cromossmicas.
Bandas G cromossomas sujeitos a aquecimento moderado ou breve protelise e
corados com Giemsa. Formam barras escuras ricas em adenina-timina.
Bandas R cromossomas tratados com soluo alcalina a quente e coradas com
Giemsa. Formam barras claras ricas em guanina-citosina.
Chromosome painting hibridao com sondas de DNA ligadas a fluorocromos. Estes
fluorocromos so especficos para determinadas sequncias, podendo, desta forma, permitir a
observao de anomalias cromossmicas, devido presena de uma cor indesejada na anlise.

Mutaes / Anomalias
Alteraes quantitativas (nmero) e qualitativas (estrutura) dos cromossomas:
Poliploidia duplicao dos cromossomas sem subsequente diviso nuclear.
Pode ocorrer devido a uma deficincia na anafase ou a uma endomitose.
Origina clulas multinucleadas.
o Autopoliploidia todas as guarnies cromossmicas so iguais;
o Alopoliploidia nenhum cromossoma tem homlogo. Ocorre de um
cruzamento entre seres de espcies diferentes.
Euploidia caritipo com n cromossomas ou mltiplos de n cromossomas;
Aneuploidia caritipo com cromossomas a mais ou a menos.
o Monossomia perda de um cromossoma;
o Nulissomia perda de um par de cromossomas homlogos;
o Trissomia um cromossoma extra.
No homem as alteraes cromossmicas podem afectar os autossomas ou os
cromossomas sexuais.
Trissomia 21 desenvolvimento anormal do sistema nervoso entre outras
deformaes;
Sndrome de Klinefelter 47 cromossomas (44 autossomas + XXY), origina
alteraes fenotpicas e atrasos mentais mais ou menos acentuados;
Sndrome de Turner 45 cromossomas (44 autossomas + X), origina um
fentipo feminino, pequena estatura e rgo sexuais infantis.
Molcula de DNA
juntamente com histonas,
forma um vato nmero
de nucleossomas
Nucleossomas
formam uma fibra
da estrutura do DNA
Nucleossomas juntam-se
em crculos que so
enrolados noutros crculos
maiores, produzindo fibras
de cromatina condensadas
Crculos enrolam-se
para formar laadas
Laada enrolam-se
ainda mais
formando um
cromossoma
19

Mutaes cromossmicas:
Deleco exciso de uma poro de um cromossoma, ou seja, perda no
material cromossmico. Esto associadas a grandes incapacidades;
Duplicao duplicao de uma poro de um cromossoma, ou seja, h uma
repetio de uma poro de cromossoma. So muito importantes sob o ponto
de vista da evoluo, porque fornecem informao gentica complementar,
potencialmente capaz de assumir novas funes;
Inverso inverso de uma poro de um cromossoma, ou seja, h uma
rotao, de um segmento cromossmico, em relao posio normal sem
alterar a sua localizao no cromossoma;
Insero insero de uma poro de um cromossoma, noutro cromossoma;
Translocao troca de uma poro de um cromossoma por outra poro de
outro cromossoma. Pode ser simples (troca em apenas 1 cromossoma) ou
recproca (troca de segmentos entre 2 cromossomas no homlogos).
Mutaes genmicas mutaes pontuais que atingem apenas alguns nucletidos:
Deleco / Insero exciso / insero de uma base de nucletidos. Altera
completamente a sequncia pois altera todos os codes existentes;
Translocao troca de alguns nucletidos de uma sequncia por alguns
nucletidos de outra sequncia;
Substituio troca de um nucletido, numa sequncia, por outro diferente.
Pode no ter consequncia devido redundncia do cdigo gentico;
Inverso inverso da sequncia de alguns nucletidos.
Este tipo de mutaes, ao nvel dos genes, pode no possuir efeitos mas quando os
produz pode ser prejudicial ou benfico, ao nvel da sobrevivncia e evoluo.

Ciclo Celular
Os cromossomas so, geralmente, visveis ao microscpio ptico, em metfase, mas h
casos em que so visveis mesmo em interfase, como o caso dos cromossomas:
Plumosos, dos ocitos de anfbios muito activos na sntese de RNA. Quando
a laada est exposta, significa que est a ocorrer a sua transcrio. Estes
cromossomas so revestidos por complexos de RNA e protenas;
Politnicos, das glndulas da Drosophila cada cromossoma est fortemente
ligado ao homlogo e o DNA replicado diversas vezes, excepto no
centrmero e telmero. As bandas existentes so diferentes das dos humanos
pois no necessitam de qualquer tipo de colorao para a sua observao,
correspondem, na realidade, a regies mais condensadas (escuras) e mais
laxas de cromatina (clara).
O ciclo de vida de uma clula constitudo por uma interfase e por uma fase M. Esta
ltima breve, em comparao com o tempo no qual a clula se encontra em interfase.
Interfase a clula cresce, aumenta de tamanho e o DNA replicado:
Fase S sntese de DNA, ocorre a duplicao dos cromossomas e a produo
de histonas;
Fase G1 e G2 intervalos de tempo nos quais a clula cresce, produzindo
protenas, RNA e diversos organelos.
Fase M:
Mitose ocorre a segregao dos cromossomas e diviso nuclear (no
ocorrendo sntese de RNA);
Citocinese diviso citoplasmtica.
20

A progresso do ciclo de vida da clula, depende de factores externos e internos. Em
condies desfavorveis a clula entra numa fase de dormncia (G0). Em condies favorveis,
existem pontos a partir dos quais, mesmo que as condies mudem, a diviso tem de
prosseguir, pois j no pode parar. Quando h perda do controlo deste ciclo, ocorre a diviso
descontrolada da clula.

Mecanismos de Controlo do Ciclo Celular
Existem vrios pontos de controlo do ciclo celular, que so semelhantes na maior parte
dos eucariontes. Este sistema pode parar em checkpoints para verificao celular de erros.
Os pontos de controlo so feitos de modo a verificar se o DNA est replicado
correctamente, se o ambiente favorvel diviso, se os cromossomas esto correctamente
ligados ao fuso mittico,
Ciclinas so sintetizadas e degradadas em cada ciclo celular (G1, G1/S, S, M).
Adicionam fosfatos a certos estratos (fosforilam).
Cnases (Cdks) dependentes das ciclinas. Possuem nveis constantes no mesmo ciclo
celular.
O controlo do sistema do ciclo celular consiste numa srie de complexos ciclinas-Cdk. A
actividade de cada complexo , tambm, influenciado por vrios mecanismos inibidores que
fornecem informao sobre o ambiente extracelular, os danos celulares e se os eventos do
ciclo foram devidamente completos (mecanismo presente em apenas alguns tipos de clulas).
necessrio que uma determinada ciclina se ligue respectiva cnase para formar o
complexo, pois separadas no possuem qualquer tipo de aco. Todas as clulas eucariticas
exigem 3 ciclinas.

Ciclina G1-S determina o incio do ciclo
celular, pelo que decresce na fase S.
Ciclina S relacionada com a duplicao
do DNA.
Ciclina M estimula o incio da mitose.

Quando se chega a um ponto de controlo a clula s prossegue o seu ciclo se a
concentrao do complexo correspondente estiver superior a todos os outros. Apesar disso,
necessita de ser activado. Assim, as cinases possuem um local de ligao para um fosfato de
activao.
H cnases que possuem outros locais de ligaes de cnases, inibindo assim, esse
complexo. Assim, a actividade das Cdk pode ser inibida por fosforilao do complexo ou por
protenas inibidoras, que se liguem ao mesmo.
Factor promotor da fase S (S-Cdk) na fase G1 ligam-se as protenas iniciadoras da
replicao do DNA (complexo iniciador e helicase). Na fase S, o incio da replicao s ocorre
quando a S-Cdk se liga ao complexo e provoca a degradao do fosfato, do inibidor e da
ligao do complexo pr-iniciador, iniciando-se assim a replicao.

Complexo Ciclina-Cdk Ciclina Cdk
G1-Cdk Ciclina D Cdk4, Cdk6
G1/S-Cdk Ciclina E Cdk2
S-Cdk Ciclina A Cdk2
M-Cdk Ciclina B Cdk1
21

Factor promotor da fase M (M-Cdk) a Cdk1 liga-se ciclina M, originando um
complexo inactivado. Quando so se liga uma cnase activadora e uma inibidora, o complexo
possui 2 fosfatos, estando inactivado. S quando uma fosfatase interfere com o complexo,
que 1 fosfato retirado, originando o complexo M-Cdk activo. Este complexo pode realizar um
feedback positivo para estimular a presena de uma cnase inibidora, impedindo a continuao
do ciclo, ou estimular a presena da fosfatase, que promove a continuidade do ciclo. Este
complexo controla a condensao da cromatina, a fragmentao do invlucro nuclear, do
complexo de Golgi e do retculo endoplasmtico e a formao do fuso acromtico.
Desorganizao do invlucro nuclear fosforilao leva desorganizao da
lmina densa e, consequentemente, desorganizao do invlucro. Aps a
diviso nuclear, as fosfatasses removem as cnases e permitem o
reagrupamento do invlucro volta dos novos ncleos;
Condensao da cromatina as condensinas promovem o enrolamento da
sequncia de DNA, enquanto as coesinas promovem o enrolamento para a
formao dos cromatdios condensados.
Factor promotor da anafase /ciclossoma (APC/C) a activao do APC leva
ubiquitinao e destruio das securinas, que, normalmente, mantm a separase num
estado inactivo. A destruio das securinas permite separase quebrar as subunidades do
complexo das coesinas, mantendo os cromatdios juntos. As foras do fuso mittico puxam os
cromatdios para lados opostos. A fosforilao mediada pela cnase nos plos e fornecem um
controlo adicional no momento de transio da metfase-anafase.
p53 suspende o ciclo at o dano ser reparado. Quando est perante um dano
irreparvel, a clula entra em apoptose. Quando o DNA danificado, as protenas cnases que
fosforilam o p53 so activadas. Mdm2 liga-se p53 e promove a ubiquitinao e destruio
nos proteossomas. p53 acumula-se em nveis altos e estimula a transcrio do gene que
codifica a protena p21 (liga-se aos complexos G1/S-Cdk e S-Cdk, inactivando-os),
permanecendo a clula em G1.

Fase M
constituda por uma fase de mitose (profase, prometafase, metafase, anafase,
telofase), onde ocorre a diviso nuclear, e por uma citocinese, onde ocorre a diviso
citoplasmtica. Esta citocinese inicia-se na anafase.
A segregao dos cromossomas pelas clulas-filhas tem de ser muito precisa pois a
perca ou ganho de um cromossoma pode ser letal ou causar problemas graves.
Centrossoma aglomerado de matria amorfa, com anis de tubulina na sua
superfcie e um conjunto de 2 centrolos no seu interior. Constitui, na clula animal, o principal
organizador dos microtbulos. A extremidade menos (-) dos microtbulos est embebida no
centrossoma, enquanto a extremidade mais (+) est voltada para o citoplasma.
Os centrossomas, na interfase, duplicam para formarem os 2 plos do fuso mittico.
Os centrossomas afastam-se formando sters que se deslocam no fuso mittico. Aps a
diviso, cada centrossoma, permanece em cada uma das clulas-filhas.
A ligao dos cromossomas aos microtbulos do fuso mittico feita atravs do
cinetocoro (complexo multiproteco na zona do centrmero).
A extremidade (+) dos microtbulos inserida na superfcie de cada cinetocoro,
estendendo-se, cada microtbulo, at um dos dois plos da clula. Na anafase, os cromatdios
separam-se e os cromossomas so puxados para plos opostos da clula, pelos microtbulos,
ligados ao cinetocoro.
Os cromatdios esto unidos por protenas (coesinas). A sua separao, no incio da
mitose, implica a fosforilao das coesinas. Ao nvel do centrmero, a fosforilao das coesinas
s ocorre na transio da metfase para a anafase.

22

Fuso mittico possui 3 classes de microtbulos, que so estruturas extremamente
dinmicas. Existem vrios tipos de microtbulos: microtbulos do ster (no se ligam a
nenhuma estrutura), microtbulos do cinetocoro (ligam-se aos cinetocoros dos centrmeros) e
microtbulos polares (ligam-se s protenas que mantm os cromossomas nas placa
equatorial).

Fases da Mitose
Profase incio da condensao dos cromossomas. As coesinas so degradadas
excepto na regio centromrica. O ncleo desorganiza-se e a sntese proteica pra. Fora do
ncleo, a rede de microtbulos que existia em interfase substituda pelo fuso mittico.
Prometafase ruptura abrupta do invlucro nuclear, com o desaparecimento da
lmina nuclear (fosforilao das laminas). Os cromossomas ligam-se aos microtbulos do fuso
atravs do cinetocoro. Continuao da condensao dos cromossomas.
Metafase cromossomas alinham-se no centro da clula, formando a placa equatorial.
o momento onde h a condensao mxima dos cromossomas, e onde cada um dos
cromatdios se liga a microtbulos do cinetocoro de plos opostos do fuso. Nesta fase existem
foras bipolares equilibradas que mantm os cromossomas na placa equatorial.
Anafase activao do complexo promotor da anafase, com a destruio das coesinas,
podendo ser separados os cromatdios e arrastados para os plos. No fim desta fase inicia-se a
citocinese.
Anafase A encurtamento dos microtbulos do cinetocoro e movimento dos
cromatdios para os plos;
Anafase B afastamento dos plos provocada pelo alongamento dos
microtbulos polares.
Telofase invlucro nuclear reorganiza-se e os cromossomas comeam a
descondensar-se.

Citocinese
Clulas animais a partir do fim da anafase e durante a telofase, forma-se um anel
contrctil, constitudo por filamentos de actina e de miosina II. Este anel est ligado
membrana citoplasmtica e vai dividir a clula em duas.
Clulas vegetais ocorre durante os mesmos momentos que nas clulas animais, mas
em vez de se formar um anel, so as vesculas do complexo de Golgi que se vo fundir, de
forma a constiturem uma nova parede celular.
Durante a citocinese os organelos tm de ser distribudos equitativamente pelas
clulas-filhas.

Meiose
A meiose um tipo de diviso nuclear, na qual as clulas germinativas so produzidas.
Esta diviso envolve uma reduo da quantidade de material gentico.
constituda por duas divises nucleares sucessivas com apenas uma cadeia da
replicao do DNA. Em cada diviso podem ser distinguidos 4 estdios principais.
Uma clula-me produz 4 clulas-filhas, que possuem metade do nmero de
cromossomas encontrados na clula original e com crossing-over, sendo geneticamente iguais,
mas com algumas diferenas devido a esta troca de genes entre cromossomas homlogos.
A mitose difere da meiose, pois nesta ltima formam-se 4 clulas haplides, enquanto
na primeira formam-se apenas duas clulas diplides.
O emparelhamento dos cromossomas homlogos (sinapse) ocorre atravs da
formao do complexo sinaptonmico (complexo de origem proteica que liga um cromossoma
ao seu homlogo).

23

Enzimas de recombinao responsveis pela ruptura da molcula de DNA e pela
troca do material gentico entre molculas, apenas entre cromatdios de cromossomas
homlogos, que se encontram emparelhados (crossing-over). Estes pontos de recombinao
so evidenciados pelos pontos de quiasmata.
Os complexos de recombinao actuam antes da actuao do complexo
sinaptonmico.
Crossing-over originam-se 4 molculas, de 2 cromossomas iniciais que possuam 2
cromatdios cada, todos de constituio gentica ligeiramente diferente, que originaram, no
fim da meiose, 4 gmetas todos diferentes.

Diviso I Diviso II
Diviso reducional - origina dois ncleos com
metade do nmero de cromossomas do ncleo da
clula inicial
Divises equacionais a partir dos dois ncleos,
originam-se 4, cada um com o mesmo nmero de
cromossomas do ncleo que lhes deu origem

Fases da Meiose
Profase I:
Leptteno cromossomas duplicados comeam a condensar-se;
Zigteno incio da sinapse;
Paquteno sinapse completa e ocorre o crossing-over;
Diplteno desaparecimento do complexo sinaptonmico. Os pontos de
quiasmata so visveis;
Diacinese bivalentes prontos para a metafase.
Metafase I cromossomas homlogos alinham-se na placa equatorial, atravs dos
pontos de quiasmata.
Anafase I pares homlogos separam-se com os cromatdios ainda juntos. Ou seja,
migram 2 cromatdios (1 cromossoma), com constituies diferentes, para cada plo.
Telofase I formam-se duas clulas-filhas, cada uma contendo 1 cromossoma do par
de homlogos.
Profase II no h replicao do DNA. uma fase que pode no ocorrer no existirem
grandes gastos de energia. Recondensao dos cromossomas.
Metafase II cromossomas alinham-se na placa equatorial, atravs dos centrmeros.
O cinetocoro de cada par de cromatdios alinha-se na placa equatorial, de cada clula.
Anafase II dividem-se os centrmeros e cada cromatdio, do mesmo cromossoma,
migra separadamente para cada plo. Os cromatdios so separados, originando clulas com
arranjos genticos diferentes devido ao crossing-over ocorrido na profase I.
Telofase II diviso da clula completa. Originam-se 4 clulas-filhas. Existe a
organizao nuclear de cada clula, originando-se 4 clulas com um ncleo que possui um
nmero haplide de cromossomas.
Nalguns casos, na parte final da diviso I ocorre uma citocinese, formando-se duas
clulas haplides. Na maioria dos casos os ncleos do incio da telofase I passam,
directamente, para a metafase II, de modo a poupar energia clula.

Caractersticas Mitose Meiose
Funo Crescimento / Regenerao Gmetas / Esporos
Nmero de divises 1 2
Nmero de ncleos formados 2 4
Emparelhamento de cromossomas homlogos No ocorre Ocorre
Nmero de cromossomas das clulas-filhas em relao com o n da clula inicial Igual Metade
Fenmenos de crossing-over No ocorre Ocorre

24

Biomembranas: Estrutura e Transporte Transmembranar
Biomembranas
Para alm da clula, existem diferentes estruturas (mitocndria, cloroplasto,
lisossoma, peroxissoma, aparelho de Golgi, ncleo, retculo endoplasmtico, vesculas)
rodeadas por membranas, assim, h uma variedade de membranas que rodeiam diferentes
estruturas, em clulas eucariticas, e que esto especializadas em diferentes funes. O resto
da clula excluindo todos estes organelos, constitui o citosol e onde ocorrem a maioria das
actividades vitais da clula.
As membranas so constitudas por uma dupla membrana. A membrana
citoplasmtica possui uma face interna, voltada para o citosol (face citoplasmtica) e outra
face externa, voltada para o meio extra-celular (face exoplasmtica / no-citoslica).
Os organelos podem possuir uma bicamada (lisossomas, peroxissoma) ou 2 bicamadas
(plastdios, mitocndria, ncleo).

Modelos de Arquitectura Molecular de Biomembranas
1. Membrana de lpidos camada de lpidos que s permitia a passagem de
substncias no-polares;
2. Monocamada fosfolipdica camada de fosfolpidos que rodeia as estruturas;
3. Bicamada fosfolipdica 2 camadas de fosfolpidos onde a face polar est voltada
para o exterior (face externa e interna da membrana) e a face no-polar est
voltada para o interior, da membrana;
Estes modelos de membranas s com lpidos no explicavam propriedades, tais como,
tenso superficial, permeabilidade ou resistncia elctrica, por isso surgiram outros modelos.
4. Bicamada fosfolipdica com protenas associadas 2 camadas de fosfolpidos
rodeadas por 1 camada de protenas, na face interna e na face externa;
5. Unit Membrane 2 camadas de fosfolpidos rodeadas por uma camada de
protenas que se dispem de uma forma irregular;
Este modelo muda devido concluso de que a espessura da face externa era superior
espessura da face interna.
6. Unit Membrana modificado 3 camadas de fosfolpidos rodeados na face
interna por uma camada de protenas e, na face externa, rodeados por uma
camada de mucopolissacardeos;
S atravs de estudos experimentais com lipases e proteases, foi revelado que os
lpidos eram mais facilmente degradados que as protenas, at que se conseguiu, atravs de
crio-gravao, constatar a verdadeira estrutura das membranas.
7. Modelo em mosaico fludo os lpidos e as protenas esto encaixados como um
mosaico e possuem movimento (no esttico), tornando-se fluidos. Assim sendo,
as protenas esto, mais ou menos, distribudas, penetrando, mais ou menos, na
bicamada fosfolipdica, no estando apenas a rode-la.
A estrutura das membranas quimicamente assimtrica, mas electricamente simtrica

Fosfolpidos
Fosfolpidos / Glicerofosfolpidos lpidos com um grupo fosfato na sua constituio. A
cabea polar hidroflica e a cauda apolar hidrofbica, sendo anfiptica. Tm um grupo polar
seguido de um fosfato e de glicerol, na cauda tm 2 filamentos de cidos gordos. A presena
de hidrocarbonetos insaturados aumenta a fluidez da membrana.
25

Tipos de movimentos dos fosfolpidos:
Flexo afastamento ou aproximao das cadeias de cidos gordos;
Difuso lateral troca lateral de fosfolpidos, da mesma camada;
Rotao rotao dos fosfolpidos, sobre o seu prprio eixo;
flip-flop / inverso troca de fosfolpidos de uma camada para a outra.
Acontecimento raro, excepto nas membranas do retculo endoplasmtico
(movimento rpido) devido presena de enzimas translocadoras, que
equilibram as 2 membranas (local de sntese de novos fosfolpidos).
Principais fosfolpidos da membrana citoplasmtica dos mamferos:
Fosfatidil-etanolamina fosfoglicerdio derivado do glicerol. A cabea possui
um grupo etanol;
Fosfatidil-serina fosfoglicerdio derivado do glicerol. A cabea possui um
grupo serina;
Fosfatidil-colina fosfoglicerdio derivado do glicerol. A cabea possui um
grupo colina;
Esfingomielina esfingomielina derivado da esfingosina;
Esfingosina.
Os fosfolpidos podem ter carga neutra (cargas dos tomos semelhantes, com cargas
positivas e negativas em igual quantidade) ou ento podem ter uma carga negativa / positiva
(consoante a carga em maior quantidade, na molcula).

Colesterol
O colesterol, tambm, uma molcula anfiptica e localiza-se entre os fosfolpidos,
com uma regio apolar para o interior e uma regio polar para o exterior. So formados por
uma cabea com um grupo polar, seguido de uma estrutura rgida em anel, de esterides e de
uma cauda de hidrocarbonetos apolares.
Assim, as molculas de colesterol interagem com os fosfolpidos de cada monocamada
da bicamada fosfolipdica. Tem como objectivo reforar a permeabilidade selectiva das
membranas, conferir rigidez, imobilizando a cabea dos fosfolpidos e parcialmente a cadeia de
hidrocarbonetos e impedir a ligao das caudas dos fosfolpidos que se encontram lado a lado.

Glicolpidos
Glicolpidos possuem uma fraco glicossacardica (acares).
Galactocerebrosidio glicolpidos neutros pois o aucar que forma a sua
cabea um grupo sem carga;
Gangliosidio contm uma ou mais cargas negativas com resduos de cido
silico.

Sinalizao Mediada por Fosfolpidos
O sinal extracelular activa o receptor proteico, na membrana, que activa uma
fosfolipase, sendo fosforilado por uma cnase que se liga a um fosfolpido e activa uma
protena intracelular, a presena de fragmentos do sinal utilizada para retrair o sinal.
Esta sinalizao relaciona-se com fenmenos de apoptose. Se algo se encontra fora do
normal, a fosfatidil-serina passa do folheto interno para o folheto externo. Esta passagem faz
com que os macrfagos reconheam esses sinais na superfcie dessa clula como antignios e
fagocitem essa clula, destruindo-a.
26

Protenas Membranares
Associao de protenas ao folheto bimolecular lipdico:
Protenas perifricas / extrnsecas localizam-se ao redor da membrana. Esto
superfcie podendo ser facilmente isoladas da membrana, pois encontram-se
associadas por ligaes electrostticas fracas s partes hidroflicas dos lpidos
ou de protenas integradas. Podem ligar-se a cadeias de fosfatos (ligaes em
ncora), aos fosfolpidos ou a protenas integrais;
Protenas integrais / intrnsecas localizam-se no meio da membrana, ligadas
em mosaico com os fosfolpidos. Esto fortemente ligadas s zonas
hidrofbicas dos lpidos, podendo mesmo atravessar a membrana de um lado
ao outro (protenas transmembranares). Podem ligar-se no meio da
membrana em: hlice, folha ou curva.
As protenas podem sofrer movimentos de rotao ou difuso lateral. As integrais da
membrana interactuam, extensivamente, com a regio de hidrocarbonetos da bicamada. As
perifricas da membrana podem-se ligar superfcie das protenas integrais e algumas podem,
ainda, interagir com a cabea polar de alguns grupos de lpidos.
As protenas intrnsecas so difceis de isolar pois tem de se destruir toda a estrutura
da membrana para que tal seja possvel. Os oligossacardeos s se associam zona da protena
que se encontra voltada para o exterior.
Apesar de todos os movimentos das protenas, este est restrito a certos domnios, ou
seja, existem controlos nas membranas que impedem que haja a difuso de protenas
transmembranares de uns domnios para outros (de umas clulas para as outras), sendo assim,
s existe este movimento dentro da mesma bicamada fosfolipdica.
As protenas imobilizadas no se podem distribuir ao acaso, na membrana da clula.
Imobilizao das protenas nas membranas:
Podem associar-se em agregados maiores de modo a impedir a sua associao
com macromolculas;
Fora ou dentro da clula podem impedir o movimento das protenas para
outro domnio;
Podem interagir com protenas da superfcie de outra clula impedindo a
difuso de uma para a outra.

Domnios Transmembranares
A topologia de uma protena intrnseca pode ser prevista a partir da respectiva
sequncia: a presena de uma sequncia contnua de mais de 20 aminocidos hidrofbicos ,
normalmente, tomado como evidncia de um domnio transmembranar.
ndice de hidropatia atravs da sequncia de aminocidos consegue-se prever a
forma que a protena tomar na camada fosfolipdica.
Funes das protenas da membrana citoplasmtica:
Transporte;
Ligao;
Receptores;
Enzimas.
Microdomnios (rafts) predomina colesterol e esfingolpidos com ligaes em
ncora (GPT). A caveolina est associada a processos de invaginao da membrana.

Membranas Citoplasmticas
Todas as clulas encontram-se envolvidas por uma estrutura membranar, que mantm
a integridade celular e delimita a fronteira entre o meio intracelular e o meio extracelular.
Membrana citoplasmtica estrutura responsvel pela troca de substncias entre o
meio intracelular e o meio extracelular.
27

Glicoclice oligossacardios que formam uma camada, apenas no exterior da
membrana citoplasmtica, que possui vrias funes, principalmente, a do reconhecimento
entre clulas (mecanismos de reconhecimento). Esta estrutura est associada com o
reconhecimento de antignios por parte das clulas do organismo de um ser vivo (grupo
sanguneo).
A membrana citoplasmtica possui uma estrutura em mosaico fludo (bicamada
fosfolipdica), com colesterol, protenas integrais e perifricas e glicoprotenas associadas.
Permeabilidade Selectiva das Biomembranas
A permeabilidade relativa da bicamada fosfolipdica diferente para tipos diferentes
de molculas. Assim, quanto menor a molcula e maior a sua importncia, menos fortes so as
associaes com a gua e mais rpida a difuso por entre a bicamada.
Molculas hidrofbicas (O
2
, CO
2
, N
2
, esterides, hormonas) passam
livremente pela bicamada;
Pequenas molculas polares sem carga (H
2
O, ureia, glicerol) dependendo da
concentrao podem passar, ou no;
Grandes molculas polares sem carga (glucose, sacarose) dependendo das
necessidades das clulas podem passar, ou no;
Ies (H
+
, Na
+
, HCO
3
-
, K
+
, Ca
2+
, Cl
-
, Mg
2+
) impedidos de atravessar.
O transporte pode, ento, ser controlado por protenas transportadoras:
Protenas carregadoras / transportadoras alterna entre 2 conformaes para
que a ligao ao soluto esteja, sequencialmente, acessvel num lado e no outro
da bicamada. Intervm no transporte passivo ou activo;
Protenas tipo canal forma poros abertos, preenchidos por gua ao longo da
bicamada, pelo qual solutos especficos, com molculas de tamanho
apropriado, podem-se difundir. Intervm no transporte passivo. Quando estas
protenas adquirem uma conformao fechada, o fluxo de ies bloqueado
por um porto. A abertura do porto permite o fluxo rpido de ies atravs do
canal. O canal contm poros que restringe a passagem de ies apenas de
tamanho e carga apropriados.

Transporte Passivo e Activo
Transporte passivo a favor de um gradiente.
Osmose passagem de gua do meio hipotnico para o meio hipertnico;
Difuso simples ocorre espontaneamente atravs da bicamada fosfolipdica;
Mediada por protenas tipo canal ocorre atravs de difuso facilitada;
Mediada por protenas transportadoras ocorre atravs de difuso facilitada e
implica a alterao da conformao da protena.
Transporte activo contra um gradiente (requer energia). Necessita de uma fonte de
energia metablica e sempre mediada por carregadores que fixam energia para bombear o
soluto, contra o gradiente electroqumico.

Transporte Passivo
Difuso simples movimentao das molculas, do meio onde a sua concentrao
maior para o meio onde menor. Quando se atinge um equilbrio de concentraes o nmero
de molculas que atravessam a membrana nos dois sentidos so idnticos e no ocorre
nenhuma alterao nas concentraes. Ocorre devido agitao trmica das molculas, pelo
que se d uma movimentao de pequenas molculas apolares e alguns ies.
A velocidade do transporte atravs de protenas transportadoras (difuso facilitada)
superior velocidade do transporte por difuso simples.
Na difuso simples, a concentrao de molcula transportadora proporcional
velocidade de transporte. Na difuso facilitada, a velocidade de transporte cresce bastante
28

para baixos valores de concentrao da molcula transportadora, at a um valor mximo, a
partir do qual se mantm, praticamente, inalterado.
Assim, a velocidade est limitada aos locais de ligao existentes na protena. O grfico
que traduz uma curva onde atingido um ponto mximo a partir do qual se mantm, uma
curva tpica da velocidade de reaco do complexo enzima-substrato.
O transporte de L-glucose e D-glucose para o interior dos eritrcitos feito por uma
difuso facilitada. Num menor tempo, o transporte de D-glucose superior ao transporte de L-
glucose, no entanto, para um maior tempo, o transporte de L-glucose cresce
exponencialmente, pelo que o seu transporte ser superior ao transporte de D-glucose.
Regulao do transporte da glucose pela insulina a insulina promove a fixao de
transportadores s membranas que recebem molculas de glucose.

Protenas AE (anion Exchange) transporte de HCO
3
-
e Cl
-
por difuso facilitada.
Trocas tecidos que realizam respirao eritrcitos: (reaco que ocorre
dentro dos eritrcitos:
)

Trocas pulmes eritrcitos: (reaco que ocorre dentro dos eritrcitos:
)

As clulas necessitam de conter iguais quantidades de cargas negativas e positivas, ou
seja, necessitam de estar, electricamente, neutras.

Transporte Activo
Transporte activo movimento de substncias contra um gradiente de concentrao,
atravs de protenas transportadoras. As mudanas de forma na protena transportadora
ocorrem graas energia resultante da hidrlise do ATP, comportando-se como enzimas e
designando-se por ATPases.
Trs formas condutoras de transporte activo:
Transportador aos pares;
Bomba condutora de ATP;
Bomba condutora de luz.

Insulina fixa-se a
um receptor de
insulina,
presente na
membrana
citoplasmtica
Transportadores
de glucose esto
armazenados
em membranas
de vesculas,
dentro da clula
Quando a
insulina interage
com o receptor,
as vesculas
movem-se para
a superfcie e
fundem-se com
a membrana
citoplasmtica,
aumentando o
nmero de
transportadores
de glucose, na
membrana
Transporte
contnuo de
glucose para o
interior da clula
Quando os
nveis de
insulina
diminuem, os
transportadores
de glucose so
removidos da
membrana por
endocitose,
formando
vesculas
pequenas
Vesculas
pequenas
fundem-se com
endossomas
maiores
Endossomas
enriquecidos
com os
transportadores
de glucose
formando
pequenas
vesculas,
prontas para
irem para a
superfcie
quando os
nveis de
insulina
aumentarem de
novo
Dixido de carbono
produzido pelos tecidos por
catabolismo entra nos
eritrcitos
Dentro dos eritrcitos d-se
a reaco qumica de
decomposio de dixido
de carbono
Atravs de uma protena
transportadora, permitida
a sada de HCO
3
-
e a entrada
de Cl
-
, por difuso facilitada
Bicarbonato
dissolve-se no
plasma do
sangue
Bicarbonato presente no
plasma do sangue, entra
nos eritrcitos
Atravs de uma protena
transportadora,
permitida a entrada de
HCO
3
-
e a sada de Cl
-
, por
difuso facilitada
Dentro dos eritrcitos d-
se a reaco qumica de
combinao de dixido
de carbono
Dixido de carbono deixa
os eritrcitos e entra nos
pulmes para ser exalado
29

Transporte Activo Primrio
Transporte activo primrio bomba de sdio e potssio (Na
+
- K
+
) com a utilizao de
ATPase. Devido s diferenas de concentrao entre o citosol e o fludo extracelular (citosol:
[K+] = 140 mM; [Na+] = 12 mM; Fludo: [K+] = 4 mM; [Na+] = 145 mM) a bomba permite, que
por molcula de ATP, entrem 2 molculas de potssio e saiam 3 molculas de sdio, do citosol.
A protena carregadora activa, bombeia o sdio e o potssio para a clula contra o seu
gradiente electroqumico.
As bombas consistem numa sequncia de processos de fosforilao e desfosforilao,
que permitem a alterao da conformao da protena.
Ubaina inibidor especfico que compete com o potssio pelo mesmo local de ligao
no lado extracelular da bomba.
Transportadores dependentes do ATP:
Bombas de classe-P a protena transportadora autofosforila-se e
autodesfosforila-se. Presente em: Membrana citoplasmtica plantas, fungos,
bactria (bomba H
+
); Membrana citoplasmtica de eucariontes superiores
(bomba Na
+
/K
+
), apical do estmago de mamferos (bomba H
+
/K
+
), e de todas
as clulas eucariticas (bomba Ca
2+
); membrana do reticulo sarcoplasmtico
em clulas musculares (bomba Ca
2+
);
Bomba de protes de classe-V utiliza o transporte de protes para a
fosforilao da protena. Presente em: membranas dos vacolos em plantas e
fungos, de endossoma e lisossoma em clulas animais; membrana
citoplasmtica de algumas clulas;
Bombas de protes de classe-F utilizam o transporte de protes para
sintetizar ATP (ATP sintase). Presente em: membrana citoplasmtica de
bactrias, mitocondrial interna, e dos tilacides de cloroplastos;
ABC (ATP Binding Cassette) transporte de vrias substncias excepto ies e
protes. A utilizao de energia fosforila a protena e altera a sua
conformao. Presente em: membrana citoplasmtica de bactrias
(aminocidos, acar e transportadiores de potidos) e de mamferos
(transportadores de fosfolpidos, pequenos frmacos lipoflicos; colesterol e
outras pequenas molculas).
Fibrose qustica mutao do gene de um transportador ABC.
Nas membranas dos vacolos esto presentes 2 tipos de bombas de protes: bomba
de classe-V ATPase de H
+
e uma bomba de protes, hidrolisadores de pirofosfato.
Tipos de transporte:
Uniporte transporte de uma molcula apenas;
Simporte transporte de uma molcula e de um io co-transportador em
simultneo, no mesmo sentido;
Antiporte transporte de uma molcula e de um io co-transportador em
simultneo, segundo sentidos opostos.

Transporte Activo Secundrio
Transporte activo secundrio nica forma pela qual a glucose pode ser guiada por
um gradiente Na
+
.
A protena carregadora oscila entre dois estados alternados. No primeiro estado, a
protena aberta ao espao extracelular e no segundo estado, aberta para o citosol. A
ligao de Na
+
e glucose cooperativa, ou seja, a ligao de ambos os ligandos induz uma
mudana na conformao que aumenta a afinidade das protenas para outros ligandos.
Desde que a concentrao de Na
+
seja muito maior no espao extracelular que no
citosol, a glucose possui mais afinidade para se ligar ao carregador, no primeiro estado. Assim,
30

Na
+
e glucose entram em maior quantidade na clula (devido transio entre os estados) do
que aquela que deixa a clula (na transio para o primeiro estado).
Desta forma, assegura-se uma rede de transporte de Na
+
e glucose para dentro da
clula. No entanto, devido ao facto de a ligao ser cooperativa, se um dos solutos falhar, o
outro falha a ligao ao carregador que s alterna a conformao apenas se ambos os solutos
estiverem presentes ou se nenhum estiver.
O transporte transcelular de glucose atravs das clulas epiteliais do intestino depende
de uma distribuio de protenas transportadoras na membrana citoplasmtica. A glucose
bombeada para a clula atravs do domnio apical da membrana por um simporte da molcula
de Na
+
. A glucose passa para fora da clula por transporte passivo segundo uma carregador
diferente de glucose nos domnios basal e lateral, da membrana.
O gradiente de Na
+
conduz a glicose, mantendo uma concentrao interna de Na
+

baixa.

Transporte por Protenas do Tipo Canal (Canais Inicos)
Transporte de lactose em E. coli o transportador de lactose do tipo canal deixa entrar
a lactose dentro da clula atravs de ligaes a protes H
+
. Esses protes sero,
posteriormente, expulsos por uma bomba de protes que pode ser inibida por CN
-
.
Uma protena tipo canal tpica, alterna entre uma conformao aberta e uma fechada.
A protena canal forma, na seco central, um poro hidroflico atravs da bicamada
fosfolipdica, estando aberta. Este poro aquoso possui uma funo de filtro seleccionador.
Selectividade do canal de sdio: um poro estreito permite a passagem de Na
+
ligado a
uma nica molcula de gua, mas impede a passagem de K
+
e outros tipos de ies, mesmo
estando ligados a uma molcula de gua.
Estimulaes abertura dos canais inicos:
Potencial elctrico a diminuio de carga em redor da protena tipo canal
provoca a abertura do canal inico;
Ligao qumica a ligao de um ligando extracelular / intracelular muda a
conformao da protena tipo canal, provocando a sua abertura.
Abertura mecnica estmulos fsicos da clula provocam a abertura mecnica
da protena tipo canal.

Movimentao de gua nas Clulas (Mecanismos de Controlo do Volume Celular)
Meio hipertnico o exterior da clula possui uma maior concentrao de sais, logo a
clula deixar sair gua de forma a equilibrar os meio intracelular e extracelular. A clula
encolhe devido grande perda de gua e fica plasmolizada.
Meio isotnico o meio extracelular e intracelular possui uma concentrao de sais
equivalente, logo no h movimentao de gua. A clula permanece no seu estado normal.
Meio hipotnico o meio intracelular possui uma maior concentrao de sais que o
meio extracelular, logo a clula deixar entrar gua para equilibrar os meios. A clula incha e,
nas clulas animais, pode ocorrer a lise celular, mas nas vegetais no ocorre devido presena
de parede celular.
Aquaporinas protenas que controlam o transporte de gua nas membranas, entre as
diversas estruturas. Existem vrios tipos de aquaporinas nas clulas eucariticas (AQP-1; AQP-
2; AQP-3; AQP-4; AQP-5; AQP-6; AQP-7; AQP-8; AQP-9; TIP; PIP; AQY).
31

Ionforos
Ionforo constitudo por uma protena canal e um carregador de ies mvel. O
transporte pode ser de vrias formas, mas em qualquer uma delas, a rede de ies ocorre
apenas segundo um gradiente electroqumico.
Transportadores mveis (valinomicina);
Formadores de canais (gramicidina A).

Tipos de Transporte Transcelular
Difuso simples passagem de compostos apolares apenas segundo um gradiente de
concentrao.
Difuso facilitada passagem de solutos, segundo um gradiente de concentrao.
Transporte activo primrio passagem de solutos contra um gradiente electroqumico,
com gastos de energia biolgica, na forma de ATP.
Transporte activo secundrio passagem de solutos contra um gradiente
electroqumico, a soluo conduzida por ies que se movem segundo o seu gradiente.
Canais de ies passagem de substncias ligadas a ligandos ou ies, segundo um
gradiente electroqumico.
Transporte mediado por ionforos passagem de electres, segundo um gradiente
electroqumico.

Transporte em Quantidade
A clula pode importar materiais do meio externo atravs da sua captura em vesculas
que saem da membrana citoplasmtica. No fim, as vesculas fundem-se com lisossomas onde
ocorre a digesto intracelular.
Atravs de processos de converso, a clula exporta materiais que sintetizaram em
compartimentos intracelulares. Estes materiais so armazenados em vesculas intracelulares e
so libertadas para o exterior quando as vesculas se fundem com a membrana citoplasmtica.
Endocitose transporte de substncias para o interior da clula;
o Pinocitose transporte de substncias lquidas;
o Fagocitose transporte de substncias slidas;

o Mediada por receptores (LDL low density lipoprtotein) transporte
de substncias auxiliado por receptores membranares. Em clulas
normais a clavelina forma vesculas com as substncias desejadas. Em
clulas mutantes a clavelina forma vesculas apenas com citosol no seu
interior, no havendo a exciso de substncias nocivas e provocando a
morte celular.
Hipercolesterolemia ausncia dos receptores dos LDL.
Exocitose transporte de substncias para fora da clula. As vesculas so
revestidas por clatrina ou por caveolina.

Substncia entra
em contacto com
a clula
Estimula a
extenso de
pseudpodes
que englobam a
substncia
Fuso dos 2
pseudpodes
para a formao
de uma vescula
intracelular
(fagossoma)
Fagossoma
funde-se com
lisossomas
formando um
fagolisossoma
Digesto da
substncia
ingerida
Fixao de
clatrina e seleco
das substncias
Formao de uma
dilatao na
membrana
Formao da
vescula rodeada
por clatrina
Desagregao de
clatrina da
vescula
Vescula
transportadora
32

Transduo e Conservao de Energia: Fotossntese (Cloroplastos)
Clula Eucaritica Vegetal
A clula vegetal possui diversos organelos: ncleo, cloroplasto, membrana
citoplasmtica, mitocndria, parede celular, retculo endoplasmtico liso e rugoso,
dictiossomas (Golgi). Estas diferem das clulas animais devido presena de parede celular,
vacolos e plastdios e ausncia de centrossomas e lisossomas.

Parede Celular
A parede celular rgida e determina o tamanho e forma da clula, a textura do tecido
e a forma final dos rgos vegetais. Esta estrutura impede a clula vegetal de rebentar (ao
contrrio das clulas animais) em meio hipotnico e permite o desenvolvimento de uma
presso hidrosttica interna (presso de turgescncia), entrando gua para o interior da clula
at a presso hidrosttica contra a parede contrabalanar a diferena de concentrao.
O desenvolvimento da presso de turgescncia a responsvel pelo suporte e rigidez
mecnica nas plantas herbceas (no lenhosas). As clulas trgidas aparecem quando as
plantas encontram-se em solo hmido, deixando a planta erecta, as clulas plasmolisadas
aparecem quando a planta se encontra em solo seco, deixando a planta murcha.
Parede celular compsito constitudo por fibras de celulose que conferem resistncia
traco, embebidas numa matriz de hemiceluloses (glicanos com ligaes cruzadas), pectinas
e protenas estruturais, que confere resistncia compresso.

Celulose da Parede Celular
Celulose constitui o principal esqueleto da parede celular e um polissacardio
constitudo por microfibrilas resultantes da associao de cadeias lineares de molculas de
glucose ligadas por ligaes glicosdicas -1,4.
Microfibrilas de celulose possuem cadeias com arranjo paralelo e domnios
cristalinos em que as diferentes cadeias formam um arranjo ordenado devido ao
estabelecimento de pontes de hidrognio. Estas so sintetizadas pela celulose sintase
(complexo enzimtico que se move na membrana medida que sintetiza a microfibrila) com
orientao determinada pelos microtbulos. Localizam-se na face citoplasmtica da
membrana e associam-se em grupos de 6 que podem, tambm, associar-se em grupos de 6,
formando uma roseta.
A celulose sintases codificada por uma famlia de genes chamada CesA (celulose
sintase A). Esta transfere uma molcula de glucose de um nucletido dador para a cadeia de
crescimento. O conjunto de 6 celulose sintase formam a subunidade da roseta e 6 dessas
subunidades formam a roseta.
Os complexos de celulose sintase da membrana plasmtica esto organizados por
associao funcional com os microtbulos corticais. A localizao e movimento das rosetas de
CESA apresentam uma associao estreita, espacial e temporal com os microtbulos.

Matriz da Parede Celular
Hemiceluloses polissacardios que estabelecem pontes de hidrognio com as
microfibrilas de celulose. Tm a capacidade de forrar as microfibrilas, ligando-as umas s
outras para formar uma rede. constitudo por 2 grupos principais: xiloglucanos e
glucuronoarabinoxilanos.
Pectinas mistura de polissacardios heterogneos ramificados, altamente hidratados
e ricos em cido galacturnico. Ligam-se entre si atravs de ies clcio para formar um gel
poroso (determinam a porosidade da parede), sendo responsveis pela adeso entre clulas
na lamela mediana.
33

A parede celular possui vrias classes de glicoprotenas estruturais que podero ter
funes de reconhecimento e sinalizao (extensina, protenas arabinogalactnicas).
As macromolculas da matriz da parede celular so segregadas na parede, por
vesculas provenientes do aparelho de Golgi.

Fragmoplasto (Parede Celular e Citocinese)
Ao contrrio do que acontece nas clulas animais (formao de anel contrctil), na
clula vegetal, forma-se um organelo responsvel pela construo de uma nova parede entre
as duas clulas, o fragmoplasto (constitudo por actina, miosina e microtbulos).
Fragmoplasto forma-se no centro e cresce para a periferia formando um anel.
Armazena vesculas com polissacardios e protenas de parede que se fundem para formar a
placa celular que cresce at formar uma nova parede celular, revestida por membrana
citoplasmtica.
Plasmodsmios canais de ligao atravessados por canalculos de retculo
endoplasmtico que aparecem devido ao facto da separao entre as 2 clulas no ser
contnua.

Crescimento de Clulas Vegetais
A libertao do stress (stress relaxation) da parede celular permite a expanso e
crescimento da clula vegetal. O stress longitudinal causado pela presso de turgescncia.
Presso de turgescncia principal fora impulsionadora da expanso celular durante
o crescimento das clulas vegetais, sendo a orientao das microfibrilas de celulose a
determinadora da direco de expanso da clula. Esta presso induz o afastamento e
deslizamento das fibras da parede, quando as ligaes entre estas so atenuadas por enzimas
especficas, conduzindo ao crescimento da clula.
Protoplasto forma a sua parede celular do interior para o exterior, pelo que a parede
mais recente est na poro interior.
Parede primria primeiras camadas de parede depositadas durante o
crescimento da clula;
Lamela mediana regio, rica em pectinas, de unio das paredes primrias de
clulas adjacentes;
Parede secundria camadas adicionais de parede celular que as clulas
depositam quando o crescimento termina. Pode possuir 3 camadas com
orientao diferente das fibrilas de celulose.
As paredes secundrias no possuem pectinas e os espaos entre as microfibrilas de
celulose, que so mais abundantes do que na parede primria, esto preenchidos por lenhina,
cutina ou suberina (muito rgidas).

Vacolos
Vacolo permite o crescimento das clulas vegetais e pode continuar mesmo em
condies adversas. Uma clula pode ter mais do que um tipo de vacolos. um organelo
multifuncional:
Formao da presso de turgescncia (suporte e expanso celular);
Funo ltica / digesto (funo dos lisossomas animais);
Homeostasia inica e de pH;
Defesa contra microrganismos patognicos e herbvoros (acumulao de
metabolitos txicos);
Sequestro de xenobiticos fito-remediao;
Cor de flores e frutos (pigmentos antocinicos) comunicao.
34

Para a defesa da clula, os vacolos utilizam os metabolitos que podem ser:
Primrios molculas presentes em todas clulas (metabolismo essencial
vida);
Secundrios molculas com distribuio restrita a certas espcies. No
possuem funo directa no desenvolvimento nem na reproduo das clulas e
organismos em que ocorrem. So tpicos das plantas e importante para a
sobrevivncia e propagao das espcies em que ocorrem, para tal imitem
sinais qumicos de resposta ao ambiente, interagindo com outros organismos,
defendem e protegem da radiao. Engloba 3 grupos:
o Terpenos;
o Compostos fenlicos;
o Alcalides.

Plastdios
Proplastdios plastdios na sua forma mais simples que, consoante o tecido, se
diferenciam em estruturas especficas. Estruturas ovides com invlucro e estroma. De
proplastdios podem-se originar:
Amiloplastos aparecem em clulas diferenciadas da raiz e em tecidos de
reserva. So estruturas de armazenamento de amido de reserva, que podem
possuir vrios gros de amido ou apenas um gro que ocupe todo o
amiloplasto. Para alm disso o amido de reserva possui forma e composio,
geneticamente, determinada, formando amiloplastos diversos;
Proteinoplastos estruturas que armazenam protenas;
Oleoplastos estruturas que armazenam lpidos. Aparecem em clulas
epidrmicas de Liliaceae, Amaryllidaceae e Orchidaceae;
Cromoplastos estruturas que acumulam carotenides. Podem ser a causa da
cor amarelada, alaranjada ou vermelha de alguns frutos, ptalas ou razes, no
entanto, a cor das plantas, na sua maioria, devida a pigmentos armazenados
em vacolos e no em cromoplastos (colorao rara);
Estioplastos so diferentes dos cloroplastos pois possuem um corpo
prolamelar. Deve-se permanncia da clula em obscuridade, que faz com
que as clorofilas presentes nas membranas do estroma se acumulam nestas
estruturas, pois perdem a sua funo;
Cloroplastos apesar da diversidade de plastdios, estas estruturas so as mais
importantes, pois o local onde ocorre a fotossntese.
Em condies de obscuridade (durante longos perodos de tempo) desenvolvem-se
estioplastos em vez de cloroplastos, pois as membranas perdem a sua funo. Se a clula
voltar a expor-se luz, durante um longo perodo de tempo, transformam-se em cloroplastos
pois as membranas desagregam-se do corpo prolamelar e readquirem a sua funo.
Em estioplastos as membranas organizam-se no corpo prolamelar por no existir um
verdadeiro desenvolvimento de clorofila que necessita de luz para se desenvolver. Sem luz, a
ltima fase de formao de cloroplastos no ocorre, permanecendo, assim, protoclorofildio.
No entanto se voltar a exposio luz, a protena activada e inicia-se, de novo, o
desenvolvimento de clorofila.
a substncia (clorofila / protoclorofildio) em excesso que determina se o organelo
forma cloroplasto ou estioplasto. Os processos s ocorrem em longos perodos de exposio e
no do dia para a noite.
35

Cloroplastos
Cloroplastos organelo que armazena os pigmentos responsveis pela fotossntese.
Estes organelos fotossintticos contm 3 membranas distintas: a membrana externa,
interna e dos tilacides, que definem 2 compartimentos internos distintos: o espao
intermembranar, o estroma e o espao tilacoidal.
Tilacides sistema membranoso dos cloroplastos, que se encontra, totalmente,
interligado. nestas estruturas que esto as clorofilas e os pigmentos responsveis pela
fotossntese. Os tilacides individuais encontram-se interligados e tendem a empilhar-se em
granum, que no seu conjunto formam grana. As interligaes entre granum fazem-se por
intergrana (estromticos).

Como o cloroplasto possui grande capacidade para a sntese lipdica, no estroma
encontram-se acumulaes de lpidos que se podem associar, temporariamente, em
plastoglbulos.
Os grnulos de amido que esto presentes, nos cloroplastos, so amidos de
assimilao (resultante da fotossntese) e no amido de reserva. Este amido de assimilao ,
temporariamente, armazenado nos cloroplastos e utilizado pela clula, posteriormente.
Nos cloroplastos, semelhana das mitocndrias, existem ribossomas e DNA. As
fibrilas de DNA existem no estroma sob a forma de molculas circulares. Em todo o cloroplasto
existem mltiplas cpias de DNA circular, com cerca de 120 genes (tRNA, rRNA e protenas),
estando estas molculas j totalmente sequenciadas.
Devido aos ribossomas, os cloroplastos so capazes de sintetizar algumas das suas
protenas.
Rubisco complexo proteico constitudo por duas subunidades, apenas estando
funcional se essas subunidades estiverem ligadas. Constitui a substncia que est presente em
maior quantidade, nos tilacides.
Subunidade maior 56kDa (8cpias). Formadas por DNA cloroplastidial,
encontra-se codificada a partir do genoma do cloroplasto e,
consequentemente, sintetizadas nos cloroplastos;
Subunidade menor 14 kDa (8 cpias). Formada por DNA nuclear, encontra-se
codificada no genoma do ncleo e, consequentemente, sintetizada no
ncleo, tendo de migrar, posteriormente, no citoplasma at entrarem nos
cloroplastos e se fixarem s subunidades maiores.
Ao contrrio das restantes membranas da clula e seus organelos, as membranas dos
cloroplastos, so pobres em fosfolpidos.
As protenas destinadas aos cloroplastos possuem sequncias sinais que so
reconhecidas por protenas transportadoras prprias, permitindo a chegada dessas protenas,
aos locais correspondentes, no interior dos cloroplastos.

Proplastdio
Da membrana
interna surgem
invaginaes
Invaginaes
diferenciam-se e
isolam-se (vesculas
de tilacide)
Fragmentos acumulam-se e
dispem-se de forma
especfica (sistema de
empilhamentos ligados uns
aos outros atravs de
membranas isoladas)
Cloroplasto
(com sistema
membranar
prprio)
Protena com
sequncia de
importe estromal
(sinal) e com um
precursor
Sinal reconhecido
pelos complexos
Toc (membrana
externa) e Tic
(membrana
interna)
Protena entra no
estroma sendo
retirada a
sequncia
Precursor reconhecido
por receptores SRP do
cloroplasto ou
receptores simples, na
membrana dos
tilacides
Protenas no lmen
dos tilacides sem o
precursor
36

Cloroplastos nos Diferentes Organismos
Os cloroplastos de algas possuem estruturas membranares diferentes e diferente
arranjo. Para alm das clulas eucariontes vegetais, as cianobactrias e as bactrias, tambm,
realizam fotossntese. Nestes seres procariontes, no h diferenciao de cloroplastos,
estando os pigmentos fotossintticos na membrana citoplasmtica.

Origem dos Cloroplastos
As plantas superiores descendem de proclorfitas (ancestral) e as algas descendem de
cianobactrias e bactrias fotossintticas.

Fotossntese
Fotossntese permite planta sintetizar hidratos de carbono.
Equao geral:
.
Bactrias fotossintticas:
.
Na equao no aparecem as molculas de NADPH e ATP, que tambm so produtos,
pois estes so reutilizados, na outra reaco de fotossntese, ou seja, no aparecem, pois esto
constantemente a ser sintetizados e degradados.
As clulas eucariticas vegetais (plantas, algas) e cianobactrias realizam fotossntese
fotognica, pois libertam oxignio, as bactrias fotossintticas realizam fotossntese sulfurosa,
pois libertam enxofre.
As cianobactrias tm um processo fotossinttico muito semelhante ao das plantas
superiores, ou seja, o dador de electres a gua e o produto final oxignio.

Reaces de luz custa de fotes de luz a gua degradada, libertando-se
oxignio. Passam por uma srie de reaces que originam NADPH e ATP.
Ocorre ao nvel dos tilacides, e constitui a fase dependente da luz
(plastoquinona, ferrodoxina);
Reaces de assimilao do carbono o CO
2
utilizado para a produo de
hidratos de carbono.
Reaco de Hill:
.
O trabalho de Hill foi completado por Ochoa, que verificou o O
2
como sendo um
produto:
.
Os pigmentos fotossintticos esto localizados nas membranas, sendo as clorofilas, o
pigmento principal.
Clorofila constituda por fitol (cadeia de hidrocarbonetos que permite a sua
insero na membrana dos tilacides) e por um grupo heme (semelhante ao
dos citocromos, mas com magnsio em vez de ferro);
Ficobilinas pigmento caracterstico de cianobactrias e algas vermelhas.
constituda por unidades de ficocianobilna que esto ligados atravs de
ligaes insaturadas;
Carotenos;
Lutena.

Clula ancestral
Endocitose de bactrias capazes de
realizar fotossntese
Clula autotrfica
Luz Reaces de Luz Reaces de Assimilao de carbono

Hidrato de
Carbono
37

Fotossistema
Os pigmentos fotossintticos esto organizados em fotossistemas, localizados nas
membranas dos tilacides, nos cloroplastos.
Fotossistema centro de reaco constitudo por um complexo de antenas, onde se
encontram pigmentos fotossintticos que absorvem a luz e a transmitem a um par especial de
clorofilas (centro de reaco do fotossistema). Cada fotossistema constitudo por:
Conjunto de pigmentos antena;
Centro de reaco que apresenta um par de molculas clorofila a.
Complexo antena colector de energia luminosa, na forma de electres excitados.
Esta energia de electres excitados transmitida, atravs de uma srie de transportadores de
energia, para um par especial de molculas de clorofila II (PSI, P700, e PSII, P680), no centro de
reaco fotoqumico. produzido um electro de alta energia que pode ser passado,
rapidamente, para a cadeia transportadora de electres, na membrana tilacoidal.
Quando um foto atinge um tomo, um dos electres salta para um nvel de energia
superior, ficando num estado excitado. Quando os pigmentos fotossintticos absorvem luz, os
seus electres passam para nveis de energia superiores. Os electres excitados podem
regressar ao nvel energtico inicial (estado fundamental), libertando a energia sob a forma de
calor ou de luz, fluorescncia.
Os pigmentos passam entre si a energia do foto at chegar ao par do centro, levando
a que um dos fotes da clorofila seja excitado e ejectado para fora deste fotossistema, e o
electro transferido, por outros transportadores especficos.
Os electres excitados podem ser cedidos a outras molculas vizinhas (aceptores)
conduzindo a uma reaco fotoqumica em que a molcula que perde os electres fica oxidada
e a aceptora fica reduzida (reaco oxidao-reduo).
Aps a excitao do foto o centro fica, momentaneamente, com carga positiva, de
forma a ter capacidade para aceitar outro electro (carga negativa).
Quando se usam cloroplastos intactos, os electres excitados so captados por outras
molculas aceptoras de electres, que se encontram prximas da clorofila, no se verificando
qualquer fluorescncia.

Fluxo Linear (No Cclico) de Electres na Cadeia Fotossinttica
Inicia-se no fotossistema II (P680). Como h perda de electres, estes tero de ser
repostos de modo a que se consiga manter a fotossntese. Ora perto dos tilacides existe um
complexo que envolve a produo de O
2
, pois promove a fotlise / degradao da gua,
libertando-se oxignio, protes e electres que sero cedidos ao P680, fazendo com que o
ciclo se mantenha.
A energia luminosa captada pelos pigmentos fotossintticos sendo transferida para a
clorofila A dos centros de reaco, que transfere os electres para uma molcula aceptora,
ficando a clorofila A oxidada e a molcula aceptora reduzida. Os electres captados so
transferidos ao longo de uma cadeia transportadora de electres, at serem captados pelo
NADP
+
, provocando a sua reduo a NADPH.
A clorofila A do fotossistema II transfere os electres para uma molcula aceptora de
electres ficando a clorofila a oxidada e a molcula aceptora reduzida. Os electres captados
vo percorrer uma cadeia transportadora de electres, ao longo do qual o nvel de energia vai
diminuindo, sendo captados pela clorofila A do fotossistema I que readquire os electres
perdidos devido excitao pela luz.
Ao longo da cadeia transportadora de electres, verificam-se reaces de oxidao-
reduo, que conduzem libertao de energia, utilizada para a fosforilao do ADP,
formando-se ATP:
.
Clorofila A do fotossistema II, que ficou oxidada, readquire os seus electres atravs da
fotlise da gua:
.
38

Fotofosforilao presena de ATP sintase para a fosforilao. Esta ATPase idntica
das mitocndrias, no entanto o processo de fosforilao do ADP (ADP + P
i
= ATP) feito na
presena de luz (Fotofosforilao) e no recorre a O
2
.

Fluxo Cclico de Electres na Cadeia Fotossinttica
Ocorre para formar glicose, rapidamente, pois produz mais ATPs por unidade de
segundo.
Os pigmentos do fotossistema I captam a energia luminosa que transferida para a
clorofila A do centro de reaco. Quando excitada transfere os seus electres para um aceptor.
Os electres percorrem uma cadeia transportadora, ocorrendo um conjunto de reaces de
oxidao-reduo que conduzem libertao de energia para formar ATP.
No final da cadeia, os electres voltam ao centro de reaco do fotossistema I, sendo
assim um fluxo cclico de electres.
Inibidores do transporte de electres possvel inibir a fotofosforilao, atravs da
inibio da fotossntese (DCMU, inibe o P680; DBMIB, inibe a chegada do electro ao
complexo; Paraquato faz com que o electro no P700 seja desviado directamente para o
oxignio e no se produza NADPH).
Os tilacides organizam-se para formar os grana e os intergrana do cloroplasto, no
sendo, a distribuio dos fotossistemas, ao nvel do cloroplasto, uniforme. Nos intergrana
predominam os componentes do fotossistema I, enquanto no grana predominam os
componentes do fotossistema II.
Localizao da ATP sintase:
Mitocndrias membrana interna mitocondrial. O H
+
passa para o espao
intermembranar e volta a reentrar na matriz atravs da ATP sintase;
Cloroplastos membrana externa dos tilacides. O H
+
entra para o lmen dos
tilacides e volta a sair para o estroma dos cloroplastos atravs da ATP sintase;
Bactria membrana citoplasmtica interna. O H
+
passa para o espao
intermembranar (periplasma) e volta a entrar no citosol atravs de uma ATP
sintase.

Ciclo Fotossinttico de Fixao do Carbono / Ciclo de Calvin
O Ciclo de Calvin apresenta 3 fases: fixao do CO
2
; produo de compostos orgnicos;
regenerao da ribulose difosfato. Ocorre ao nvel do estroma dos cloroplastos e uma fase
que no depende da luz.
3 molculas de CO
2
vo combinar com 3 molculas de ribulose 1,5-difosfato,
originando 6 molculas de 3-fosfoglicerato + 3 carbonos (para ser mais estvel).
Este fosfoglicerado vai ser fosforilado, ou seja, usam-se 6 molculas de ATP, que
cedem 1 fosfato ao fosfoglicerato, originando 6 molculas de ADP e 6 molculas de 1,3
difosfoglicerato + 3 carbonos.
Com o uso de NADPH a 1,3 difosfoglicerato ser desfosforilada (NADPH NADP
+
+ H
+
)
formando-se 6 molculas de glicerato 3-fosfato + 3 carbono. Esta triose seguir 2 trajectos.
A enzima que origina o ciclo de Calvin designa-se rubisco (ribulose 1,5 difosfato
carboxilase / oxigenase). A reaco na qual o dixido de carbono convertido num carbono
orgnico, catalisada no estroma devido abundncia da enzima rubisco.
Fosforila-
o da
gua (e
-
)
Excita-
o pela
luz no
P680
e
-
no
estado
excitado
Plasto-
quinona
Comple-
xo
(criao
de um
gradiente
de
protes)
Plasto-
cianina
P700
(excita-
o pela
luz)
e
-
no
estado
excitado
Filoqui-
nona
NADP
+
oxidore-
ductase
NADP
+
NADPH
39

Primeiro trajecto da triose ir para o citosol, de modo a produzir-se sacarose. Esta
passagem da triose implica a presena, ao nvel do citoplasma, de um fosfato inorgnico e de
uma protena de antiporte, na membrana do cloroplasto. O que determina a partio entre a
sntese de amido e de sacarose a concentrao deste fosfato inorgnico:
Concentrao elevada passa para o citoplasma e produz-se sacarose;
Concentrao baixa mantm-se no estroma e produz-se amido.
Segundo trajecto da triose continua o ciclo de Calvin para o manter, formando-se, de
novo, 3 molculas de ribulose 1,5 difosfato (rubisco).

Fotossntese C
4

Clulas do mesofilo clulas com cloroplasto. Tpicas das folhas permitem uma grande
eficincia fotossinttica.
Clulas da bainera perivascular certas plantas possuem clulas ou outras estruturas,
alm das clulas do mesofilo, que aumentam ainda mais o nmero da fotossntese.
Fotossntese C
4
(Ciclo do fosfoenolpiruvato) tpica das plantas com clulas de bainera
perivascular. Em vez de serem fixadas 3 molculas de CO
2
e estarem associados 3 carbonos,
esto associados 4 carbonos.
Ocorre em plantas que vivem em locais de muita luz e temperatura, evitando que os
estomas abram tanto e, portanto, no h tantos gastos de energia.

Fotossntese CAM
Metabolismo cido das Crassulacea (CAM) adaptao evolucionria fotossntese
num ambiente rido.
Fotossistema CAM existem outras plantas (associadas s plantas da famlia
Crassulssea) que realizam uma fotossntese semelhante fotossntese C
4
. Neste tipo de
fotossntese, o ciclo de Calvin realiza-se durante o dia e o CAM durante a noite, isto porque de
dia a temperatura to elevada que se a CAM se realizasse perdia-se imensa energia.
noite, as plantas CAM abrem os seus estomas, permitindo a entrada do CO
2
. A
carboxilase PEP incorpora este CO
2
num cido oxaloactico orgnico C
4
, que reduzir a malato
(armazenado nos vacolos), pela malato desidrogenase.
Durante o dia, as plantas CAM fecham os seus estomas, prevenindo perdas de gua. O
malato descarboxilado pela enzima malic-NADP
+
e o CO
2
resultante convertido em hidratos
de carbono, via ciclo de Calvin.
Assim, durante a noite, como as temperaturas so mais baixas, realiza-se o CAM e
durante o dia mantm os estomas fechados para no haver perdas de gua e energia.

Fotorespirao
Neste processo, realizado por peroxissomas, o rubisco fixa O
2
(em vez de CO
2
)
originando 3-fosfoglicerato + fosfoglicolase, que sofrem reduo da gua (libertando-se P
i
) e
originam 2 glicolase.
A glicolase liberta dixido de carbono e fosforilada por ATP (libertando ADP)
originando 3-fosfoglicerato.
Esta substncia pode ento migrar para o citosol para formar a sacarose.
As mitocndrias (respirao), peroxissomas (fotorespirao) e cloroplastos
(fotossntese) podem encontrar-se associados, constituindo a via da gliclise, onde os
produtos de cada processo servem de produtos iniciais no processo da estrutura seguinte.

40

Transduo e Conservao de Energia: Respirao (Mitocndrias)
Mitocndria
Mitocndria organelo envolvido em processos de obteno de energia por parte da
clula, e que possui uma colorao vital, o verde Janus B (citocromo oxidase mantm o
corante na forma oxidada), constituda por vrias estruturas:
Matriz contm uma mistura concentrada de vrias enzimas, incluindo as
necessrias para a oxidao do piruvato, de cidos gordos e para o ciclo de
Krebs. Tambm contm cpias idnticas de DNA genmico mitocondrial,
ribossomas mitocondriais especficos, tRNAs e vrias enzimas necessrias para
a expresso de genes mitocondriais;
Membrana mitocondrial Interna preenchida com numerosos cristas que
aumentam a sua rea total de superfcie. Contm protenas com funes
transportadoras das reaces de oxidao da cadeia respiratria,
sintetizadoras de ATP na matriz (ATP sintase) e de transportador proteico
especfico que regula a passagens de metabolitos para dentro / fora da matriz;
Membrana mitocondrial externa como contm porinas (grandes protenas
tipo canal), esta estrutura permevel a vrias molculas. Outras protenas
existentes incluem enzimas que esto envolvidas na sntese de lpidos
mitocondriais e enzimas que convertem substratos lipdicos em formas,
subsequentemente, metabolizadas na matriz;
Espao intermembranar contm vrias enzimas que usam a passagem de
ATP para fora da matriz para fosforilar outros nucletidos.

Invlucro Mitocondrial
O invlucro mitocondrial constitudo por 2 membranas: a membrana externa e a
membrana interna. Estas 2 membranas possuem uma composio lipdica e composio de
protenas diferente, conferindo-lhe diferentes capacidades de permeabilidade.
Membrana externa possui porinas que apenas permitem a passagem de molculas
ou ies relativamente pequenos, incluindo pequenas protenas, ou seja as porinas (protenas
tipo canal) formam poros aquosos na sua estrutura que permitem a rpida e fcil passagem de
molculas e ies.
Membrana interna altamente impermevel, possuindo uma elevada quantidade de
cardiolipina que torna a membrana, especialmente, impermevel a ies. um componente da
cadeia respiratria e da ATP sintase.
A membrana interna bastante maior que a membrana externa pois forma
invaginaes (cristas mitocondriais) que se dispem na matriz mitocondrial. a este nvel que
se encontram as enzimas responsveis respirao e sntese de ATP.
Composio das membranas do invlucro mitocondrial:
Membrana interna essencialmente cardiolipina (20% lpidos);
Membrana externa essencialmente fosfatidilinositol e colesterol.
As cristas mitocondriais, principalmente em clulas vegetais, aparecem dilatadas.

Genomas Mitocondriais
O genoma mitocondrial possui semelhanas com o genoma dos procariontes, pois o
DNA aparece em cadeia dupla sem histonas associados, e acumula-se junto das cristas
mitocondriais.
Cada mitocndria contm, tipicamente, 2-10 cpias de molculas de DNA em hlice
dupla, circular. Este genoma pode possuir diversos tamanhos.
O DNA mitocondrial de humanos e alguns animais, na actualidade, j se encontra
sequenciado em genes.
41

Doenas mitocondriais devido a mutaes no DNA mitocondrial, tambm podem
ocorrer vrias doenas (apesar de tambm serem devido a mutaes de genes nucleares)
como Alzheimer, neuropatia ptica hereditria de Leber, Diabetes, Distonia, Sndrome Kearns-
Sayre, Sndrome de Leigh, oftalmoplegia externa crnica progressiva, encefalomiopatia
mitocondrial, epilepsia, miopatia mitocondrial, enfraquecimento neurogentico dos msculos,
sndrome de Pearson,
Semi-autonomia gentica das mitocndrias as protenas descodificadas no ncleo e
importadas do citosol tm uma maior importncia na criao do sistema gentico
mitocondrial. As protenas adicionais do ncleo regulam a expresso individual de genes
mitocondriais em nveis de ps-transcrio. Assim, a mitocndria contribui apenas com mRNA,
rRNA e tRNA para o seu sistema gentico.

Transporte de Protenas para as Mitocndrias
Protenas Tom (Translocon of the outer membrane) transportador da membrana
externa.
Protenas Tim (Translocon of the inner membrane) transportador da membrana
interna.

Diviso das Mitocndrias
Estes processos envolvem ambas as membranas do invlucro mitocondrial. Durante a
fuso e fisso, os compartimentos da matriz e do espao intermembranar so mantidos.
Na fisso a mitocndria dividida por uma diviso binria, na fuso duas mitocndrias
fundem-se numa s.

Origem das Mitocndrias
Teoria epissmica admite que a clula eucaritica ter surgido a partir de organismos
procariontes, por invaginaes sucessivas de pores de membrana plasmtica seguidas de
especializao.
Teoria endossimbitica - admite que uma clula procaritica ter captado outras
clulas procariticas que permaneceram no interior da clula hospedeira, resistindo
digesto. As clulas capturadas estabeleceram com a clula hospedeira relaes de simbiose, e
essa cooperao foi to eficaz que se tornaram dependentes uns dos outros e passaram a
constituir organismos estveis e singulares. As clulas hspedes constituram assim os
organelos da clula eucaritica.

Clula Procaritica
Anaerbica
Formao do
ncleo originando
uma clula
eucaritica
anaerbica
Clula eucaritica
engloba uma
clula procarionte
aerbica, por
endossiose
Transferncia de
alguns genes
procariticos para
o ncleo
Clula eucaritica
aerbica (com
mitocndria)
42

Bioenergtica e Metabolismo
Metabolismo celular conjunto das reaces qumicas essenciais vida que as clulas
de todos os seres vivos realizam. Vias metablicas:
Anabolismo formao de macromolculas atravs de precursores
moleculares, utilizando energia qumica sob a forma de ATP, NADH, NADPH e
FADH
2
, so, assim, reaces metablicas onde ocorre formao de molculas
mais complexas a partir de molculas mais simples com consumo de energia
(fotossntese);
Catabolismo formao de energia e produtos finais no energticos atravs
de nutrientes energticos. Formao de energia qumica sob a forma de ATP,
NADH, NADPH e FADH
2
, so, assim, reaces metablicas onde os compostos
orgnicos so degradados em molculas mais simples, ocorrendo libertao de
energia (respirao e fermentao).
Nutrientes energticos convergem todos no sentido da acetil-CoA, no catabolismo, no
entanto, divergem da mesma, para macromolculas, atravs de anabolismo.
A glucose ocupa uma posio chave no metabolismo celular, pois na existncia de
glucose este pode ser armazenado, oxidado via gliclise para a formao de piruvato ou
oxidado via pentose fosfato para a formao de ribulose 5-fosfato.
Metabolismo energtico da glicose:
Respirao aerbia com participao de oxignio;
Fermentao sem participao de oxignio.

Respirao aerbia Fermentao
Gliclise 4 4
Ciclo de Krebs 2 0
Cadeia respiratria de electres (CTE) 32 / 34 0
Energia de activao para iniciar a degradao da glicose 2 2
Rendimento energtico 36 /38 2
Aceptor final de electres Oxignio cido pirvico
Subprodutos do processo CO
2
e H
2
O cido lctico / Etanol e CO
2

Gliclise
Gliclise reaces de decomposio at formao de piruvato. H a formao de
ATP por fosforilao de nvel de substrato. Este processo ocorre no citoplasma.
Este processo engloba:
Fase de activao: a glicose fosforilada por 2 ATP, formando-se frutose-
difosfato. A frutose-difosfato desdobra-se em 2 molculas de aldedo
fosfoglicrico (PGAL);
Fase de rendimento: o PGAL oxidado, perdendo 2 hidrognio os quais so
utilizados para reduzir a molcula de NAD
+
, formando-se NADH + H. Formam-
se 4 molculas de ATP.
Aps estas reaces, forma-se cido pirvico uma molcula que contm uma elevada
quantidade de energia qumica, que migra para as mitocndrias. No final restam: 2 molculas
de NADH, 2 molculas de cido pirvico e 2 molculas de ATP.
Nalgumas clulas em condies de hipoxia ou cancerosas com poucas mitocndrias, a
gliclise a nica via de produo de ATP.
43

Fermentao
Fermentao degradao anaerbica da glucose. Ocorre a reduo do piruvato.
Alcolica o cido pirvico resultante da gliclise descarboxilado originando
aldedo actico. Este composto reduzido pelo NADH, formando-se etanol.
Assim, a degradao da glucose origina etanol. (
)
Lctea o cido pirvico resultante da gliclise reduzido pelo NADH,
originando cido lctico. Assim, a degradao da glucose origina cido lcteo.
(
)

Respirao Celular

O piruvato oxidado com a perda do grupo carbonilo, formando-se acetil coenzima A
(acetil CoA). A respirao consiste na oxidao do piruvato, originando gua (H
2
O) e dixido de
carbono (CO
2
).
A descarboxilao oxidativa do piruvato catalisada pelo complexo piruvato
desidrogenase. Este um complexo enzimtico que est presente nas mitocndrias e no
citosol dos procariontes. constitudo por 3 unidades: E1 (piruvato desidrogenase), E2
(Desidrolipoil transcetilase) e E3 (desidrolipoil dehidrogenase).
A enzima acetil CoA entra num ciclo de reaces, o ciclo do cido ctrico (ciclo dos
cidos tricarboxlicos / ciclo de Krebs), que ocorre na matriz mitocondrial.
Ciclo de Krebs conjunto de reaces metablicas que conduz oxidao completa da
glicose. Ocorre na matriz mitocondrial. Inicia-se com a combinao do grupo acetil da aceil-
coezima A com o cido oxaloactico. Seguem-se:
4 reaces de oxidao-reduo. So removidos 8 hidrognios: 6 vo reduzir 3
molculas de NAD
+
, formando-se 3 NADH; e 2 so utilizados para reduzir o
FAD, originando FADH;
2 descarboxilaes, que conduzem libertao de 2 molculas de CO
2
;
1 fosforilao, que conduz formao de 1 molcula de ATP.
A reaco de acetil CoA com oxaloacetato inicia o ciclo produzindo cido ctrico. Em
cada volta do ciclo so produzidas 2 molculas de CO
2
, 3 molculas de NADH, 1 molcula de
GTP (1 ATP) e 1 molcula de FADH
2
.

Reaco Molculas de CO2 produzidas Molculas de ATP produzidas Molculas de NAD
+
reduzidas a NADH Molculas de FAD reduzidas a FADH2
1 molcula de glucose a 2
molculas de piruvato
0 2 ATP 2 0
2 molculas de piruvato a
2 molculas de acetil CoA
2 0 2 0
2 molculas de acetil CoA
a 4 molculas de CO2
4 2 GTP 6 2
Total 6 4 ATP 10 2

Respirao Celular Transportadores de Electres (Coenzimas)
Cadeia transportadora de electres e fosforilao oxidativa - as molculas de NADH e
FADH
2
transportam electres que vo percorrer uma srie de protenas, at serem captadas
por um aceptor final o oxignio. Estas protenas aceptoras de electres constituem a cadeia
transportadora de electres e encontram-se ordenadas na membrana interna das
mitocndrias, de acordo com a sua afinidade para os electres. Ocorre nas cristas
mitocondriais da membrana interna.
D-se: cedncia dos electres do NADH e do FADH, a uma cadeia transportadora de
electres, ordenados de acordo com os seus potenciais redox; produo de ATP, por
fosforilao oxidativa; e formao de H
2
O, por aceitao dos electres e dos protes, pelo
oxignio (aceptor).
44

NAD dinucleotdio de nicotinamida e adenina (
). Surge da combinao de 2 nucleotdios que possuem 1 acar, 1 base

azotada e 1 grupo fosfato, cada.
Este transportador de electres aceita apenas 1 par de electres, no entanto a reduo
a NADH envolve a transferncia de 2 electres simultaneamente, pelo que, na presena de 2
protes (H
+
) h formao de NADH e de um proto H
+
, que segue em soluo.
NADP tem uma estrutura idntica ao NAD excepto na presena de um grupo fosfato
adicional (2 grupos fosfato), apesar de participarem em diferentes momentos das reaces
catalisadas, enzimaticamente.
O anel de nicotinamida do NAD derivado da vitamina niacina (cido nicotnico)
sintetizada a partir do triptofano (a sua deficincia causa pelagra).
FAD dinucleotdio de flavina e adenina (
). Ao contrrio
do NAD, este transportador aceita os 2 protes de hidrognio, formando FADH
2
ao ser
reduzido.
Fosforilao de nvel de substrato a produo de ATP resulta de uma fosforilao de
substrato, atravs da presena de GTP. ( ).

Respirao Celular Vias Anfiblicas do Ciclo de Krebs
Vias anfiblicas do ciclo de Krebs reaces que utilizam como precursor vrios
intermdios do ciclo de Krebs, ou seja, certas substncias que se formam no ciclo de Krebs
servem de iniciadores de outras reaces metablicas da clula.
A clula no pode gastar todas essas substncias nas vias anfiblicas, pois necessita de
assegurar a continuidade e sucesso da cadeia respiratria, logo existem processos que repem
esses diferentes intermedirios.
Reaces anaplerticas reaces que repem as substncias intermdias do ciclo de
Krebs, que so utilizados em vias anfiblias.

Respirao Celular Cadeia Respiratria / Cadeia Transportadora de Electres
Na membrana mitocondrial interna existem transportadores que constituem a cadeia
de fosforilao que vai transferir electres at um aceitador final de electres. Os passos deste
processo induzem uma grande produo de energia, com gastos de oxignio (O
2
).
Existem vrios transportadores de electres: citocromos, protenas de Fe-S e
Ubiquinona / Coenzima Q.
Citocromos protenas com grupo prosttico heme. Estes transportadores aceitam
electres devido presena de ferro no seu interior (
). As mitocndrias
possuem 3 classes de citocromos (a, b, c).
Protenas de Fe-S constitudos por 2Fe + 2S ou por 4Fe + 4S. So transportadores que
transferem, apenas, 1 electro de cada vez. Apesar de conterem mltiplos tomos de ferro,
cada centro ferro-enxofre apenas pode transportar 1 electro de cada vez. Existem vrios tipos
de centros ferro-enxofre na cadeia respiratria.
Ubiquinona / Coenzima Q transportador de electres que facilmente se movimenta
na membrana, devido presena de uma cauda hidrofbica de ligao. Capta 1 proto por
cada electro que transporta.
Estes transportadores organizam-se, nas membranas, em vrios complexos (I, II, III, IV),
sendo por esta ordem que eles recebem os electres.

O
2
(aceitador final
de electres com
produo de H
2
O)
Complexo IV Citocromo c Complexo III
Ubiquinona /
Coenzima Q
Complexo I
Complexo II
45

Complexo I NADH desidrogenase (NADH-CoQ oxidoreductase). o maior complexo
enzimtico respiratrio que aceita electres do NADH (directamente da matriz) e transfere-os
atravs de uma flavina e vrios centros ferro-enxofre para a ubiquinona / coenzima Q.
bombeia 4 H
+
e inibido pela rotenona.
Complexo II succinato desidrogenase (succinato-CoQ reductase). Complexo
respiratrio mais pequeno que aceita electres do succinato (presente no FADH
2
) e transfere-
os atravs do FAD (3 centros ferro-enxofre) para a ubiquinona / coenzima Q. inibido pelo
malonato.
Complexo III citocromo b-c
1
(citocromo-c reductase). Dmero com polipeptdios
diferentes, onde cada monmero contm 3 hemes e 1 centro ferro-enxofre. Este recebe
electres da ubiquinona e passa-os ao citocromo c. Juntamente com a ubiquinona transporta 4
H
+
atravs da membrana, por cada 2 electres transportados. inibido pela antimicina.
Complexo IV citocromo oxidase. Dmero com polipeptdeos diferentes onde cada
monmero contm 2 hemes tipo A e 2 centros de cobre. Recebe electres do citocromo c e
passa 4 electres de uma vez ao O
2
(aceitador final de electres), produzindo gua. Bombeia
2H
+
e inibido pelo cianeto e pelo monxido de carbono.

Teoria Quimiosmtica
Os protes quando passam para o espao intermembranar (atravs da cadeia
transportadora de electres) ficam impedidos de entrar na matriz mitocondrial, formando-se
um gradiente electroqumico de protes utilizado pela mitocndria para produzir ATP, atravs
de uma ATP sintase (repe os protes na matriz mitocondrial e produz ATP).
Os electres provenientes do NADH e do FADH
2
ao serem aceites pela cadeia
transportadora de electres, libertam energia que utilizada para bombear H
+
, da matriz para
o espao intermembranar (4H
+
pelo complexo I e II, e 2H
+
pelo complexo IV). Desta forma, no
espao intermembranar forma-se um gradiente electroqumico de protes. A deslocao de
protes faz-se, ento, a favor do gradiente passando na ATP sintase, que, ao juntar-se a ADP +
Pi, origina ATP atravs de uma fosforilao oxidativa.

Funcionamento da ATPase:
.
ATP sintase / complexo F
o
F
1
:
F
o
unidade membranar constituda por 3 tipos de polipeptdios a, b e c, que
inclui um canal transmembranar por onde fluem protes;
F
1
unidade com 5 tipos de polipeptdios
3
3
y. Cada subunidade possui
locais de ligao para ATP, ADP e Pi .
O fluxo de protes que passa pelo complexo ATP sintase, no est directamente
relacionado com a produo de ATP.
A molcula de ATP possui uma grande afinidade com o complexo ATP sintase. O proto
de H
+
provoca uma alterao na forma das unidades , permitindo a libertao de ATP, pois
sem esta alterao o ATP continuaria com afinidade para o complexo e no se libertaria.
Assim, o H
+
apenas intervm na libertao de ATP do complexo e no na sua sntese.
Existem outros transportadores, na membrana mitocondrial, que permitem a
libertao de ATP para o exterior e a reposio de H
+
na matriz (protenas de simporte e
antiporte, e por difuso, directamente, na prpria membrana).
Electres (transportados pelo NADH e o
FADH
2
) entram nos complexos
transportadores de electres da
membrana mitocondrial interna, que
vo bombear protes (H
+
) da matriz
para o espao intermembranar
O bombeamento de protes cria uma
diferena de cargas entre o espao
intermembranar e a matriz (gradiente
electroqumico de protes)
Devido ao gradiente electroqumico de
protes, os protes regressam matriz
atravs da ATP sintase, na membrana
mitocondrial interna. Este relaxamento
de prtes contrabalanado com a
formao de ATP, tambm pelo
complexo ATP sintase
46

Funcionamento da ATPase em Bactrias
Procariontes aerbios cadeia respiratria e ATP sintase, na membrana
citoplasmtica. Os H
+
so utilizados para o transporte de nutrientes para o citoplasma atravs
do transporte activo secundrio. A cadeia respiratria permite o transporte de electres
atravs das vrias protenas, bombeando H
+
para o exterior da clula.
Procariontes anaerbicos ATP sintase, na membrana citoplasmtica, que permite a
sada de H
+
, provocando a passagem de nutrientes para a clula. No existe cadeia respiratria
funcional.
O gradiente electroqumico de protes gerado ao longo da membrana
citoplasmtica, bombeando nutrientes para a clula e expelindo Na
+
.
Existem inibidores do transporte de electres, que inibem a sntese de ATP.

Desassociadores do transporte de electres da sntese de ATP impedem a produo
de ATP, mas no impedem a aceitao de electres pelo oxignio, ou seja, impedem apenas o
processo de fosforilao de ATP, destruindo o gradiente electroqumico de protes. So
transportadores que repem, directamente, H
+
na clula no se formando gradiente que possa
ser utilizado pela ATPase.
Tecido adiposo castanho (termogenina) possui uma protena que permite a
passagem de H
+
para a matriz, mas sem a produo de ATP. Assim, a energia no utilizada
para produzir ATP, no entanto libertada sob a forma de calor, mantendo a temperatura dos
organismos constante. Desta forma, sem a produo de ATP a energia livre dissipa-se sob a
forma de calor. Este tipo de estruturas est presente nas mitocndrias dos recm-nascidos e
dos mamferos que hibernam.

Cadeia Transportadora de Electres em Mitocndrias de Plantas
Nas membranas mitocondriais das clulas vegetais existem os mesmos complexos e o
processo de respirao idntico, no entanto possuem cadeias alternativas a esse processo
como: a NADH desidrogenase externa, a NADH desidrogenase insensvel rotenona e a
oxidase alternativa resistente ao cianeto.
Estes processos alternativos so vantajosos pois os NADH produzidos no citoplasma
atravessam mais facilmente a membrana mitocondrial externa, inserindo os electres na
cadeia transportadora de electres.
O complexo IV perante elevados valores de cianeto, no inibido, assim o cianeto
(inibidor) pode ser produzido nestas clulas de modo a que existam grandes concentraes
desta substncia, no seu interior, suficientes para que ocorra o processo, normalmente.
As plantas da famlia Araceae inibem esta via resistente ao cianeto, fazendo com que
no haja produo de ATP, o que aumenta a temperatura, sendo do calor libertado que se
originam os cheiros atractivos para os insectos, nas suas espdices. Assim, as espdices destas
plantas conseguem atingir valores de temperatura 20 C acima da temperatura ambiente.
NADH
Oxidoreductase
NADH-Q
QH
2
Citocromo c
1
Citocromo c
Citocromo c
oxidase
O
2
Cadeia Respiratria (gradiente
electroqumico de protes no
espao intermembranar) H
+
ATP sintase Termogenina Calor (dissipa-se na matriz)
Rotenona e Amytal Antimicina A CN
-
, N3
-
e CO
47

Retculo Endoplasmtico
Compartimentos Intracelulares
Uma clula eucaritica muito maior que uma bactria, logo a relao rea / volume
demasiado pequena, por isso existem diversos compartimentos delimitados por membranas
(organelos) que constituem um complexo sistema de transporte entre os vrios
compartimentos.
Cada organelo representado por um conjunto caracterstico de enzimas e outras
molculas especializadas. O citosol o compartimento que ocupa maior volume na clula, mas
a clula tambm preenchida por lisossomas, aparelho de Golgi, mitocndria, retculo
endoplasmtico, ncleo, membrana citoplasmtica, polirribossomas, peroxissoma e
endossomas.
O retculo representa um compartimento com uma rede complexa que se estende por
todo o citosol, tendo uma rea superficial muito maior que a da membrana citoplasmtica. J
o aparelho de Golgi constitudo por cisternas individualizadas, geralmente perto do ncleo.
A localizao de qualquer um dos organelos est dependente de microtbulos, pois se
forem utilizadas drogas para os despolimerizar, os organelos fragmentam-se, dispersam-se ou
at chegam a colapsar.
Cada organelo tem um conjunto distinto de protenas que lhe conferem as suas
caractersticas estruturais e funcionais, assim cada protena sintetizada de novo tem que ir do
ribossoma para o seu local de destino atravs de vias especficas guiados por pptidos sinais
(pequena sequncia de aminocidos). As protenas citoslicas no possuem esse sinal e por
isso ficam no citosol. As protenas podem ser transportadas por poros, membranas ou
vesculas.

Retculo Endoplasmtico
O retculo endoplasmtico est presente em todas as clulas eucariticas e constitu
mais de metade das membranas da clula. um nico compartimento que forma uma rede
contnua com a membrana externa do ncleo (cisterna perinuclear em continuidade com o
lmen do retculo endoplasmtico).
Constitui um conjunto de cisternas achatadas, tbulos e vesculas esfricas, formando
um sistema contnuo entre a membrana plasmtica e o invlucro nuclear.
Rugoso possui ribossomas ligados face externa das suas membranas. a
maior regio de sntese proteica da clula;
Liso encontra-se envolvido na sntese de fosfolpidos e na elaborao de
novas membranas.
O retculo endoplasmtico abundante em clulas secretoras. Para se dividirem, estas
estruturas fragmentam-se e, em cada clula-filha desenvolvem-se a partir de pores
existentes.
Atravs do fraccionamento celular podem-se individualizar os retculos. Ao proceder-
se a um fraccionamento do retculo, obtm-se microssomas lisos e rugosos que so
constitudos por enzimas e protenas diferentes.
Os elementos do retculos endoplasmtico rugoso so mais pesados que os elementos
do retculo endoplasmtico liso, pois o rugoso possui ribossomas associados.
Retculo endoplasmtico rugoso intervm na sntese e glicolizao de protenas.
Divide-se em regies distintas altamente especializadas,
Retculo endoplasmtico liso intervm na sntese de lpidos e desintoxicao celular.
abundante em clulas relacionadas com o metabolismo de lpidos.
Retculo sarcoplsmico retculo endoplasmtico liso que interioriza Ca
2+

(bomba de Ca
2+
-ATPase) nos msculos, como resposta a estmulos. Assim,
quando entra clcio o msculo fica relaxada e quanto sai, o msculo contrai.
48

Polirribossomas vrios ribossomas ligados a uma molcula de m-RNA. Existem 2
populaes de ribossomas, dentro da clula: os ribossomas livres e os ribossomas ligados ao
retculo endoplasmtico. Estes ribossomas so estrutural e funcionalmente semelhantes,
apenas diferem pelo tipo de protena que esto a sintetizar.
As protenas passam do citosol para o retculo endoplasmtico medida que esto a
ser sintetizados (processo co-traduo). Esta interiorizao de ribossomas no retculo
endoplasmtico d-se durante a traduo, ou seja, medida que a traduo ocorre, os
ribossomas fixam-se ao retculo. No entanto, existe uma pequena percentagem de ribossomas
que dependem de outras protenas para se fixarem, no retculo.

Teoria do Pptido Sinal
Quando a sequncia sinal do retculo endoplasmtico emerge do ribossoma faz com
que este seja direccionado para um translocador na membrana do retculo, que forma um
poro, atravs do qual o polipeptdio translocado.
O pptido sinal est associado com o translocador e liga-se sequncia sinal durante a
translao, fazendo com que a protena madura seja libertada, imediatamente, no lmen do
retculo, aps a sntese.
O translocador permanece prximo at o ribossoma ficar ligado, para que, assim, a
permeabilidade da barreira da membrana do retculo seja mantida sempre.
A SRP (partcula reconhecedora do sinal) dirige as sequncias sinal para um receptor
existente na membrana do retculo endoplasmtico rugoso.
Partcula reconhecedora do sinal SRP possui uma cavidade hidrofbica que acomoda
a sequncia sinal (aminocidos no polares), impedindo, tambm, a sntese, temporariamente.
Translocador cadeia polipeptdica passa atravs de um poro aquoso no centro do
translocador que abre, temporariamente.

A SRP reconhece o sinal e acomoda-o na sua cavidade hidrofbica, que tem a
capacidade de se moldar, ligeiramente.
O complexo liga-se ao receptor transmembranar e a sequncia (que continua a ser
traduzida a partir desse momento) fixa-se no translocador fazendo com que o ribossoma
permanea associado.
A sequncia sinal liga-se ao poro e serve como um sinal de transferncia. Existe uma
peptidase que corta a sequncia sinal que sai do poro (abertura lateral do translocador).
Existem algumas protenas que tambm entram no retculo aps traduo, de um
modo semelhante ao que acontece s protenas destinadas s mitocndrias e aos cloroplastos.
As protenas transmembranares, para alm do pptido sinal, possuem um sinal de
paragem, que provoca a permanncia das protenas na membrana do retculo endoplasmtico.
O sinal de paragem faz com, o translocador, ao reconhecer o sinal, pare a passagem da
protena e ela fique fixa nesse ponto.
As protenas que s passam uma vez pela membrana apenas possuem um sinal de
paragem, no entanto, protenas com a capacidade de atravessarem a membrana em vrios
pontos possuem vrios sinais de paragem.
Devido aos diferentes domnios das protenas, a membrana do retculo possui uma
grande assimetria. Muitas das protenas do retculo so protenas em trnsito e outras so
protenas residentes do lmen (possuem um sinal de reteno BiP e dissulfito isomerase).
Protenas BiP (binding proteins) detectam conformaes erradas. Ligam-se a
sequncias incorrectamente formadas e impedem a sua sada do retculo endoplasmtico.
O pptido sinal N-
terminal liga-se
SRP
Pausa na
traduo
Ligao SRP fixa o
ribossoma ao
receptor SRP na
membrana do
retculo
endoplasmtico
Traduo
continua e a
translocao
comea
SRP e receptor SRP
so libertados e
reciclados
49

Dissulfito isomerase estabelece pontes de dissulfito: forma ou rearranja as pontes de
dissulfito.

Glicolizao das Protenas
A maior parte das protenas sintetizadas no retculo endoplasmtico rugoso so
glicosiladas (em contraste com as sintetizadas no citosol) por adio de um oligossacardio N-
ligado.
Oligossacardio precursor 14 resduos (2 N-acetilglucosaminas, 9 manoses, 3
glucoses) adicionados (inteiro) ao N-terminal da asparagina, ou seja, o oligossacardio
transferido, na sua totalidade, para um resduo de asparagina por uma oligosacaril transferase
(local activo do retculo voltado para o lmen). Assim, [oligossacardio + 2 fosfatos + dolicol (na
membrana)] adiciona-se ao resduo de asparagina com a ajuda de uma oligosacaril transferase.
Os acares so, inicialmente, activados no citosol e so ligados ao dolicol numa
ordem especfica.

Os oligossacardios funcionam como marcadores de estado conformacional da
protena.
Colnexina e Calreticulina ligam-se aos oligossacardios de protenas sem
conformao final correcta e fazem a sua reteno no retculo endoplasmtico, pois a partir do
momento em que o terceiro resduo de glucose seja removido a protena pode deixar o
retculo.
Quando uma protena sem a conformao correcta retro-translocada para o citosol,
uma N-glicanase remove o oligossacardio em bloco e, ao polipeptdio liga-se uma ubiquitina
(sinal de degradao no proteossoma).
Ainda no retculo endoplasmtico, algumas protenas destinadas membrana
citoplasmtica adquirem ncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI). Na membrana citoplasmtica
ficam voltadas para o exterior e podem, ento, ser libertadas como resposta a estmulos.

Sntese de Fosfolpidos no Retculo Endoplasmtico
A membrana do retculo endoplasmtico o local de sntese das principais classes de
lpidos, pois possui enzimas com local activo voltadas para o citosol. Os principais fosfolpidos
formam-se no folheto citoslico do retculo, onde tambm se produz colesterol e ceramida.
Fosfatidilcolina 2 cidos gordos + glicerol-fosfato + colina, sintetizada em 3 passos no
folheto voltado para o citoplasma. So necessrias enzimas que reconheam, selectivamente,
a cabea do fosfolpido.
A fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina e fosfatidilinositol so sintetizadas de modo
semelhante.
Nas membranas do retculo endoplasmtico o flip-flop abundante, de modo a
equilibrar os fosfolpidos das duas membranas, pois se tal no acontecesse, um dos folhetos
ficaria com mais fosfolpidos e acabava por ocorrer a desagregao da membrana.
Assim, os movimentos flip-flop so muito mais rpidos pois possuem scramblase que
equilibra, rapidamente, os fosfolpidos sintetizados no folheto citoplasmtico.
Na membrana citoplasmtica as flipases mantm a assimetria e a scramblase
regulada para situaes de morte celular programada, quando a fosfatidilserina exposta,
fazendo com que a clula seja fagocitada.
Inicia-se a
formao do
oligossacardio
Flip-flop
Formao
completa-se
Tranfere-se para
a protena
Passam por um
controlo de
qualidade
Remoo de 3
glucoses e 1
manose
50

O retculo endoplasmtico comunica com o Golgi, endossomas, lisossomas e
membrana citoplasmtica por meio de vesculas, no entanto as mitocndrias precisam de
outros mecanismos para esta comunicao, atravs de protenas que transportam fosfolpidos
do retculo para estas estruturas e tambm para os plastdios.
Por vezes, o retculo encontra-se em contacto, quase directo, com o invlucro
mitocondrial, supondo-se que tambm possam ocorrer trocas directas entre estas 2 estruturas

Endocitose e Exocitose
O transporte atravs de vesculas altamente selectivo e dirigido.
Existem vesculas revestidas por clatrina, COPI e COPII. Nestas vesculas, antes de se
fundirem com a membrana alvo, o revestimento sai e ento as 2 membranas fundem-se.
Entre a membrana e a clatrina existem protenas adaptadoras que aprisionam
protenas transmembranares, que por sua vez seleccionam a carga.
Para alm de protenas de revestimento existem vrias protenas adaptadoras e
pequenas molculas de ligao ao GTP que so necessrias para a formao de vesculas
(hidrlise de GTP faz o revestimento desagregar-se). As GTPases monomricas controlam a
formao e desagregao do revestimento.
Pensava-se que as protenas no necessitavam de qualquer sinal para passarem do
retculo endoplasmtico para o Golgi e que qualquer protena que entrava para o retculo era,
automaticamente, transportada para o aparelho de Golgi, e da para o exterior da clula,
excepto se possusse um sinal que a encaminhasse para outro compartimento celular, s
tendo que estar correctamente formada (controlo de qualidade), no entanto agora sabe-se
que este processo mais selectivo e, tambm, mediado por sinais.
Transporte entre o retculo endoplasmtico e o Golgi h fuso homotpica (entre
membranas iguais) mediada por protenas transmembranares (SNARES). Existem, tambm,
elementos tubulares que se movem ao longo de microtbulos para o Golgi. So os marcadores
de superfcies que vo mediar a fuso de membranas e o trfico vesicular.
As protenas residentes no retculo endoplasmtico (sinal KDEL) passam para o Golgi
onde so detectadas (essencialmente na parte cis) e voltam ao retculo atravs de vesculas.

51

Aparelho de Golgi
Aparelho de Golgi
Aparelho de Golgi conjunto de dictiossomas de uma clula. Os dictiossomas
organizam-se em 2 faces que constituem os meios de comunicao do aparelho com o resto
dos organelos celulares:
Face cis face de entrada, voltada para o retculo endoplasmtico;
Face trans face de sada, voltada para a membrana citoplasmtica;
Cisternas cis, trans e medianas encontram-se entre a rede trans e a cis.
Todas estas cisternas e redes encontram-se ligadas, por elementos, entre si.
Dictiossoma conjunto de compartimentos muito estruturados e variveis, em geral,
4-6 cisternas. Cada dictiossoma composto por conjuntos de sculos / cisternas achatadas e
empilhadas de forma regular, na periferia das quais existe uma srie de vesculas.
Esta estrutura localiza-se na regio central da clula, junto ao ncleo, e est
sustentada por microtbulos. Cada uma das cisternas possui um contedo distinto.
O aparelho de Golgi varia a sua forma consoante o tipo de clula onde se encontra:
Clulas animais compartimento nico com diversos elementos de ligao
entre as vrias cisternas;
Clulas vegetais estrutura mais distinta e proeminente, sendo assim mais
fcil de separar das outras membranas intracelulares.
Funes do aparelho de Golgi:
Sntese de hidratos de carbono, como pectina e hemicelulose, nas plantas, e
hidratos de carbono da matriz extracelular, em animais;
Separao, processamento e distribuio de produtos provenientes do retculo
endoplasmtico funciona como um controlo de qualidade das protenas
formadas no retculo endoplasmtico.
O lmen do retculo endoplasmtico est cheio de protenas solveis, enquanto a
maior parte das enzimas do Golgi so protenas membranares.

Sinalizao de Protenas
Existem duas classes principais de oligossacardios que se encontram nas
glicoprotenas das clulas dos mamferos: manose e cido silico (por vezes tambm fucose).
As protenas destinadas aos lisossomas so marcadas, especificamente, por manose.
No Golgi, ento, so retirados resduos de manose e adicionadas outras molculas de
manose e cido silico. Nos oligossacardios ricos em manose no lhes so adicionados novos
resduos no Golgi.
As duas principais classes de oligossacardios de ligao asparagina (N-ligados),
encontrados em glicoprotenas maduras so o cido silico e a manose. Ambos os complexos
partilham uma regio bsica comum derivada do oligossacardio N-ligado original, adicionado
no retculo endoplasmtico e contm, tipicamente, 2 N-acetilglucosamina (GlcNAc) e 3
manoses (Man).
cido silico cada complexo de oligossacardios consiste numa regio bsica, ligada a
uma regio terminal que contm um nmero varivel de cpias de uma unidade especial de
trissacardio (cido N-acetilglucosamina-galactose-silico) ligadas s manoses.
Frequentemente, a regio terminal est fechada por GlcNAc + galactose ou apenas GlcNAc.
Para alm disso, pode-se adicionar um resduo de fucose para se ligar asparagina. Apesar do
processo de formao e a subsequente adio de acar serem mecanismos muito
controlados, o complexo de oligossacardios pode ser heterogneo.
Manose oligossacardios que contm resduos adicionais de manose.
A glicosilao N-ligada tpica nos eucariontes, no entanto, tambm, existem
glicosilao O-ligada.
52

Glicosilao
Glicosilao no retculo endoplasmtico o oligossacardio est fixo num dolicol (na
membrana do retculo) atravs de 2 fosfatos.

Os oligossacardios N-ligados de glicoprotenas transportadas do retculo
endoplasmtico so modificados por uma sequncia de reaces controladas no Golgi.
Glicosilao no Golgi formao de oligossacardios de tipo complexo.
cido silico:

Manose:

As protenas destinadas incorporao em lisossomas so reconhecidas,
especificamente, e modificadas pela adio de 1 grupo fosfato posio 6 dos resduos de
manose.
A ceramina proveniente do retculo endoplasmtico, quando entra no Golgi, pode
formar esfingomielina (fosfolpidos) ou glicolpidos.
Os resduos de acares das glicoprotenas tm uma orientao especfica. No retculo
endoplasmtico e no Golgi, os oligossacardios esto voltados para o lmen, enquanto na
membrana citoplasmtica esto voltados para o exterior.
A glicosilao de protenas pode originar oligossacardios:
N-ligados grupo NH
2
da asparagina;
O-ligados grupo OH da serina, da treonina ou da hidroxilisina que podem
originar mucina e proteoglicanos.
A glicosilao tem um papel importante na diversidade, pois resistente aco de
proteases, e importante no reconhecimento, adeso e sinalizao celular, entre outros.

Compartimentao Bioqumica
As vrias zonas do aparelho de Golgi possuem funes e composies especficas:
Rede cis fosforilao de oligossacardios cujas protenas esto destinadas aos
lisossomas;
Cisterna cis remoo da manose;
Cisterna medial remoo da manose e adio da N-acetilglucosamina;
Cisterna trans adio da galactose e do cido silico;
Rede trans sulfatao da tirosina e hidratos de carbono.
A localizao de cada um destes processos foi determinado por uma combinao de
vrias tcnicas, no entanto a localizao de muitos outros processos ainda no foi
determinada.
Apesar de apenas 3 cisternas tenham sido demonstradas, por vezes, em cada um dos
tipos, existem vrias cisternas a realizar a mesma funo. importante saber que cada enzima
no est, completamente, restrita a uma cisterna em particular.
A histoqumica demonstra a compartimentao do Golgi atravs de vrias tcnicas
(com contraste, smio reduzido nas cisternas cis, enzimas especficas trans, fosfatase cida da
rede trans).
Oligossacardios so transferidos de um dolicol
(transportador lipdico) para a cadeia de polipeptdios,
durante a sua translocao ao longo da membrana do
retculo endoplasmtico
3 resduos de glucose
so removidos por 2
enzimas separadas
1 manose
removido
3 resduos de
manose so
removidos
N-
acetilglucosamina
adicionada
2 resduos de
manose
adicionais so
removidos
Resduos de fucose
e 2 N-
acetilglucosamina
so adicionados
3 resduos de
galactose so
adicionados
3 resduos de
cido silico
so
adicionados
cido silico
com carga
negativa
UDP com N-
acetilglucosamina
forma UMP
1 fosfato e 1 N-
acetilglucosamina so
adicionados
1 N-acetilglucosamina
libertada
Adio de 1 grupo
fosfato marca protenas
destinadas aos
lisossomas
Manose
53

Transporte
Existem 2 teorias para explicar o transporte de substncias ao longo do Golgi:
Movimento atravs de vesculas vescula transportada de cisterna em
cisterna. Este movimento ocorre em ambos os sentidos. Desta forma, as
cisternas aparecem como elementos estticos que possuem enzimas
residentes. A passagem das molculas ao longo do Golgi acompanhada por
movimentos de vesculas transportadoras que saem de uma cisterna e se
fundem com a seguinte, na direco cis trans;
Progresso / maturao das cisternas as cisternas vo-se fundindo ao longo
do Golgi conseguindo progredir e transportando a vescula. Assim, fundem-se
nas cisternas da fase cis e com a formao de novas cisternas na fase cis,
desagregam-se as cisternas mais antigas na fase trans, dando-se um
movimento das vesculas.
A arquitectura nica do complexo de Golgi depende de microtbulos e de protenas da
matriz que se ligam s cisternas fazendo com que o complexo permanea junto / agregado.
Quando a clula est em diviso as protenas so fosforiladas e h fragmentao do Golgi que
distribudo, uniformemente, pelas clulas filhas.
partida (provavelmente), estas duas teorias coexistem na clula.

Via Secretora da Sntese Proteica
O complexo de Golgi abundante em clulas secretoras.
As protenas provenientes da sntese ribossmica, que possuem uma sequncia sinal
do retculo endoplasmtico, ficam ligadas a esta estrutura. medida que essa ligao
completada, no retculo endoplasmtico, a cadeia de polipeptdios inserida na membrana do
retculo endoplasmtico ou permanece no lmen.
Algumas protenas permanecem residentes no retculo endoplasmtico, no entanto, as
restantes so transportadas para vesculas transportadoras que se fundem para formar novas
vesculas cis do Golgi.
Cada uma das cisternas cis que possui um contedo proteico move-se fisicamente da
face cis para a face trans. medida que esta progresso ocorre muitas das protenas do lmen
e da membrana sofrem modificaes. Algumas protenas permanecem nas cisternas trans do
Golgi, enquanto outras movem-se atravs de pequenas vesculas para a superfcie da clula ou
para lisossomas.
A partir deste ponto, podem ocorrer movimentos retrgrados, ou seja, estas protenas
que migraram do retculo, podem regressar ao mesmo, pelo transporte atravs de vesculas
que saem da face trans. Assim, existem 3 classes de protenas que tm de ser separadas antes
de deixar o Golgi: as que vo para o exterior da clula, para componentes da membrana ou
para lisossomas.
Existem duas vias secretoras que divergem na rede trans do Golgi:
Constitutiva processo que est sempre a ocorrer em todas as clulas. Muitas
protenas solveis so continuamente segregadas pela clula atravs desta via
secretora que tambm abastece a membrana citoplasmtica com novos lpidos
e protenas sintetizados. A fuso da vescula com a membrana citoplasmtica
, ento, desregulada (protenas do fgado, da matriz extracelular);
Regulada s ocorre como resposta a estmulos externos. Ocorre em clulas
secretoras especializadas, onde protenas seleccionadas na face trans so
dirigidas para vesculas secretoras, que tem protenas concentradas e
armazenadas at que um sinal extracelular (hormona / neutransmissor)
estimule a sua secreo. Para esta libertao necessrio que ocorra uma
fuso das vesculas com a membrana citoplasmtica (hormonas, enzimas
digestivas e protenas do leite).
54

Lisossomas, Peroxissomas, Glioxissomas, Esferossomas
Lisossomas
Lisossoma principal local de digesto intracelular das clulas. Estas estruturas
possuem pH (cido) e componentes membranares diferentes das restantes estruturas. Podem
realizar fagocitose (englobamento de seres mais pequenos, apenas em clulas especializadas),
endocitose (englobamento de substncias extracelulares), autofagia (destruio de organelos)
e exocitose (libertao de substncias intracelulares, existindo fuso com a membrana
citoplasmtica).
O pH dos lisossomas mais cido que o pH da clula. O pH existente dentro das clulas
consegue ser constante devido existncia de bombas de ATPase, que atravs da
desfosforilao do ATP e a criao do gradiente de H
+
, faz com que o pH no se altere e
permite, tambm, a passagem de determinadas substncias.
Os lisossomas podem ter aspectos muito distintos entre clulas, ou inclusive, dentro
da prpria clula.
Os vacolos esto relacionados, na sua estrutura e funo, com os lisossomas, mas os
vacolos acabam por ser mais versteis que os lisossomas, pois possuem uma srie de
determinadas substncias especializadas sua funo, que essencialmente armazenamento,
digesto, o controlo do tamanho da clula e manuteno do pH.

Transporte de Substncias
Endocitose transporte de macromolculas para o interior da clula, por invaginao
da membrana plasmtica, ou seja, o transporte de substncias para o interior da clula.
Existem 3 tipos de endocitose:
Fagocitose transporte de partculas de grandes dimenses e microrganismos,
para o interior da clula. As membranas destas clulas necessitam de ser
muito elsticas de modo a realizarem a fagocitose. A clula emite
pseudpodes que englobam a partcula (slida), formando uma vescula
fagoctica que se destaca da membrana para o interior do citoplasma. Este
constitui o processo digestivo de muitos organismos unicelulares e de algumas
clulas animais;
Pinocitose transporte de substncias lquidas para o interior da clula. Trata-
se de um processo constitutivo que se inicia com a formao de vesculas
revestidas por clatrina (nem todas, tambm podem ser revestidas por
caveolinas onde os lpidos tm um papel importante). Quando perdem o
revestimento fundem-se com endossomas. Semelhante fagocitose mas com
substncias lquidas, formando uma vescula de menores dimenses.
Endocitose mediada por receptores processo de endocitose em que as
macromolculas entram na clula, ligadas membrana das vesculas de
endocitose. um transporte de substncias para o interior da clula. Estas
substncias ligam-se a receptores membranares por possurem sequncias
sinal nas suas prprias membranas. Uma deficincia nestes receptores faz com
que a clula fique com uma tendncia para a arterioesclerose.
Os receptores atraem o LDL (mau colesterol) para dentro da clula onde dirigido em
compostos que so utilizados para o metabolismo celular. Este mecanismo funcional at
determinado momento pois se existir mais LDL que os receptores membranares que esto no
organismo, o processo deixa de ser eficiente e pode originar, ento, arterosesclerose, sendo
necessrio um tratamento especfico.
Para alm disso, se existir uma deficincia gentica a nvel destes receptores, o LDL
estar alto, apesar de no existir um excesso de ingesto.
55

Exocitose processo no qual as clulas libertam para o meio extracelular substncias
armazenadas em vesculas. No processo, as vesculas de secreo fundem-se com a membrana
citoplasmtica libertando o seu contedo para o meio extracelular. A exocitose fundamental
para que a clula remova os resduos de digesto intracelular, sendo assim excretadas.
Autofagia digesto de material celular, ou seja, digesto de organelos da prpria
clula permitindo uma auto renovao da clula atravs da reciclagem dos materiais que a
constituem.
Heterofagia digesto de material externo clula, ou seja, digesto de substncias
captadas por endocitose, graas a enzimas hidrolticas provenientes do lisossoma (fagocitose
realizada por macrfagos).

Hidrolases Lisossomais
As hidrolases lisossomais so sintetizadas no retculo endoplasmtico e migram para o
Golgi, estando direccionadas para os lisossomas.
As hidrolases glicoproteicas possuem um marcador exclusivo, a manose-6-fosfato. Esta
adio de fosfato s hidrolases lisossomais ocorre na rede cis do Golgi, sendo, posteriormente,
a manose-6-fosfato reconhecida por um receptor (protena transmembranar) na rede trans.
Os precursores das hidrolases lisossomais so modificados pela adio de grupos
manose-6-fosfato, na rede cis do Golgi. Ento, podem segregar outros tipos de protenas na
rede trans do Golgi devido a adaptaes no revestimento de clatrina que cobre os receptores
de manose-6-fosfato , as quais cobrem as hidrolases lisossomais modificadas.
Estas vesculas revestidas com clatrina saem da rede trans e fundem-se com
endossomas maduros. Perante o pH baixo do endossoma, as hidrolases dissociam-se dos
receptores manose-6-fosfato os quais voltam (vazios) para o Golgi para transportes seguintes.
No endossoma secundrio, o fosfato removido do acar manose ligado hidrolase,
assegurando que, posteriormente, as hidrolases no regressam ao aparelho de Golgi com o
receptor.

A sntese de manose-6-fosfato ocorre em 2 etapas:
GlcNAc fosfotransferase transfere GlcNAc-P para a posio 6 de vrias
manoses em oligossacardios N-ligados das hidrolases lisossomais;
Fosfoglicosidase quebra a GlcNAc criando a manose-6-fosfato.
A primeira enzima , especificamente, activada por um sinal presente em hidrolases
lisossomais, enquanto a fosfoglicosidase uma enzima no-especfica. Esta modificao de
resduos de manose seleccionados na rede cis do Golgi protege-os da remoo por
manosidases que vo ser libertadas dos compartimentos mdios do Golgi.
N-acetilglucoseamina fosfotransferase (+ N-acetilglucoseamina fosfato)
origina-se na rede cis do Golgi;
N-acetilglucoseamina glicosidase (- N-acetilglucoseamina) origina-se na rede
trans do Golgi.
Hidrolase
lisossomal
na rede cis
do Golgi
Transformaes
ocorrem no
Golgi
Hidrolase liga-
se ao receptor
de manose-6-
fosfato que
est ligado ao
revestimento
de clatrina,
numa vescula
Vescula
deixa o
Golgi pela
rede trans
Clatrina
desassocia-
se da
vescula
Vescula
funde-se
com um
endossoma
secundrio
Dissociao
da
hidrolase
com o
receptor
Hidrolase
desfosforilada
Receptores
regressam
ao
aparelho
de Golgi
56

Doenas Lisossomais
Doenas associadas a leses da membrana certas partculas provocam a ruptura da
membrana dos lisossomas, libertando as hidrolases. Ocorre a lise dos macrfagos com
produo de colagnio, cuja fibrose afecta a respirao:
Pneumoconioses provocadas por inalao de p de carvo, slica, estanho ou
zinco;
Doena de Chadiak-Streinbrink-Higashi alteraes de origem gentica.
Doenas de sobrecarga / armazenamento ausncia ou inactividade de enzima
lisossomais. A acumulao de substratos no digeridos nos lisossomas provoca patologias
variadas e, por vezes, muito graves.
Doena de Pompe ausncia de glicosidase que provoca a acumulao de
glicognio;
Doena de Tay-Sachs deficincia de hexosaminidase que provoca a
acumulao de gangliosdios;
Doena de Fabry deficincia de -galactosidase que provoca acumulao de
ceramida trihexose;
Doenas genticas que afectam as enzimas envolvidas na degradao
acumulao de lpidos;
Doena das clulas I ocorre um defeito num nico gene que recessivo (s
se manifesta quando ambas as cpias so deficientes). Normalmente, as
hidrolases esto ausentes dos lisossomas dos fibrolases e presentes no sangue
o que provoca a acumulao de produtos no digeridos nos lisossomas. Nos
hepatcitos destes doentes as hidrolases nos lisossomas tomam uma via
alternativa, independente da manose-6-fosfato, para alm disso as protenas
destinadas membrana dos lisossomas tambm no tm manose-6-fosfato.

Peroxissomas
Peroxissomas microcorpos delimitados por apenas uma membrana que importa
selectivamente a maior parte das protenas do citoplasma (dentro de toda a clula). um
processo que est dependente da degradao de ATP, pois contm enzimas oxidativas com
locais de utilizao do O
2
.
Esta estrutura encontra-se presente em todas as clulas eucaritica. E caracteriza-se
por possuir uma incluso cristalina, na sua estrutura.
Como principal funo tem a degradao de molculas de cidos gordos ( oxidao),
que nos mamferos realizada, tambm, pelas mitocndrias, mas nas plantas e leveduras
exclusivo destes organelos.
Para alm disso, os peroxissomas, nas folhas das plantas, esto relacionados com a
fotorrespirao e com o ciclo do glioxilato estando, por isso, normalmente, 1 peroxissoma
associado a 1 cloroplasto e a 1 mitocndria. Intervm no catabolismo das purinas.
A membrana dos peroxissomas contm receptores proteicos importadores. As
protenas peroxisomais, incluindo novas cpias do receptor importador, so sintetizadas por
ribossomas citoslicos e, depois, importados at aos respectivos organelos.
Presumivelmente, os lpidos necessrios para formar novas membranas dos
peroxissomas so, tambm, importados. No modelo aceite, actualmente, os peroxissomas
formam-se de peroxissomas pr existente por processos de crescimento e fisso.
As protenas destinadas aos peroxissomas possuem uma curta sequncia de 3
aminocidos que formam um sinal de importao. Pelo menos 23 protenas (peroxinas) esto
envolvidas no processo de transporte, dependente da hidrlise de ATP.
Sndrome de Zellweger no h importe de protenas para os peroxissomas estando
vazios. Esta caracterstica afecta as funes do crebro, do fgado e dos rins levando a uma
morte pouco depois do nascimento.
57

Sequncias sinais:
PTS1 presente na maioria das protena;
PTS2 presente em algumas das protenas.
A importao de protenas solveis feita atravs de um receptor solvel (Pex5), de
uma protena transmembranar (Pex14) ou por um translocador multimrico da membrana
(Pex2 / Pex10 / Pex12). Uma mutao num destes receptores pode causar uma das formas da
sndrome de Zellweger.
Existe, tambm, uma protena que necessria para que se d a diviso dos
peroxissomas (Pex11).
Nas clulas vegetais, existem dois tipos de peroxissomas:
Peroxissomas presentes nas folhas que realizam fotorrespirao;
Glioxissomas presentes nas sementes em germinao e que realizam o ciclo do
glioxilato.

Glioxissomas
Glioxissomas presentes nas clulas vegetais, nomeadamente, das sementes, que
realizam o ciclo do glioxilato. Este ciclo ocorre devido necessidade que as plantas tm de
converter gorduras em acares, de modo a possurem uma fonte de carbono e energia
(quando germinam).
A isocitrato liase e o malato sintetase so enzimas especficas dos glioxissomas que
tm a capacidade de converter cidos gordos em acar.

Esferossomas
Esferossomas (oleossomas / corpos lipdicos) apenas existem em clulas vegetais e
so estruturas essenciais nutrio do embrio. As substncias que possui armazenadas so
sintetizadas no retculo endoplasmtico, e incorporadas nos vacolos para alimentarem o
embrio que se est a formar. So estruturas rodeadas por uma hemi-membrana.
Oleosinas protenas presentes em alguns esferossomas, mas que no se encontram
em mais nenhum local da clula.

Retculo
endoplasmtico
sintetiza proteinas
e cidos gordos
Acumulao destes
produtos num
esferossoma
Migrao do
esferossoma no
citosol
Fuso do
esferossoma com o
vacolo
58

Citoesqueleto e Estruturas de Ligao Intercelular
Citoesqueleto
O citoesqueleto ocupa toda a clula atravs de filamentos proteicos em rede. Estes
filamentos surgem, normalmente, no centro da clula e orientam-se para a sua periferia.
caracterstico de clulas eucariticas.
O citoesqueleto confere forma e movimento clula e o responsvel pelo suporte da
membrana citoplasmtica e pelo reposicionamento de organelos (entre outras funes).
Esta estrutura engloba 3 tipos de filamentos:
Microfilamentos / filamentos de actina constitudos por actina (filamentos
mais pequenos). So principais intervenientes na forma e movimento da
clula, que aparecem em projeces das clulas e microvilosidades;
Microtbulos constitudos por tubulina e tm como principal funo a
posio de organelos e o transporte intracelular. Aparecem no fuso mittico,
em clios e flagelos;
Filamentos intermdios constitudos por vrios tipos de protenas que tm
como principal funo o suporte mecnico e a resistncia celular. Aparecem
em clulas epiteliais e axnios.
Os filamentos de actina e tubulina so estruturas muito conservadas em todas as
clulas eucariticas. Estas protenas do citoesqueleto interagem com uma grande variedade de
protenas acessrias.
Os filamentos proteicos do citoesqueleto so formados por pequenas subunidades que
se agregam e desagregam atravs de ligaes no covalentes (fracas). Esta capacidade para se
agregarem e desagregarem em subunidades faz com que sejam estruturas muito dinmicas.
A forma como os filamentos se agregam e dispem na clula, confere-lhes polaridade.
Consoante o tipo de filamento, a capacidade de deformao diferente.
Microtbulos deformam facilmente mas depois quebram;
Filamentos de actina so mais rgidos que os microtbulos mas quebram
facilmente;
Filamentos intermdios deformam facilmente e quando esto sujeitos a
stress mantm a integridade.

Microtbulos
Microtbulos estruturas que tm como subunidade um heterodmero de tubulina
que se organizam em subunidades globulares ( e -tubulina). Estas subunidades formam um
cilindro oco com 13 protofilamentos, em paralelo. Cada protofilamento consiste em diversas
subunidades juntas com a mesma orientao.
Os monmeros de e -tubulina esto fortemente ligados para que consigam manter
os heterodmeros, em cada protofilamento.
A extremidade positiva (+) a extremidade -tubulina, enquanto a extremidade
negativa (-) a extremidade -tubulina.
Cada uma das fases possui um local de ligao de GTP. Na fase -tubulina o GTP nunca
hidrolisado, podendo ser considerado uma protena integral da estrutura pois est
fortemente ligada a esta, no entanto na fase -tubulina o GTP pode ter formas hidrolisadas ou
no hidrolisadas, pois as ligaes so fracas. So importantes no dinamismo do filamento.
Os microtbulos so estruturas dinmicas mas instveis, pois podem alternar entre
perodos de crescimento lento e de rpida despolimerizao. A causa de tal caracterstica a
molcula de GTP que est ligada -tubulina (pode sofrer hidrlise). Ou seja, quando o GTP
est ligado a esta extremidade o microtbulo apresenta-se muito estvel e em crescimento, no
entanto, quando h hidrlise do GTP, a despolimerizao favorecida e, consequentemente,
os microtbulos perdem a estabilidade, desagregando-se.
59

Esta instabilidade dinmica no permanente, pois a ligao e hidrlise de GTP est
sempre a ocorrer, estando o microtbulo em permanente crescimento e desagregao. A
estabilidade / instabilidade no est relacionada, propriamente, com a quantidade de
molculas de GTP presente, mas com a sua concentrao, que pode ser baixa ou elevada.
Se a adio de GTP rpida, o microtbulo cresce porque provvel que seja
adicionada uma nova subunidade antes que ocorra a hidrlise do GTP.
Devido polaridade estrutural o alongamento (e tambm a despolimerizao) do
microtbulo maior na extremidade (+) (subunidades ).
Fluxo microtubular crescimento na extremidade (+) e perda de subunidades na
extremidade (-). Existe, tambm, instabilidade dinmica na extremidade (+).
A nucleao (juno de subunidades de monmios) um passo limitativo da formao
de microtbulos. Este processo lento, no entanto o alongamento j um processo rpido. A
velocidade atinge o seu mximo na desagregao dos microtbulos, ocorrendo a catstrofe.
Os microtbulos simples possuem 13 protofilamentos, no entanto dupletos e tripletos
possuem um inicial com 13 protofilamentos e os restantes, ligados a este, possuem apenas 10
protofilamentos.
Agentes estabilizadores e despolimerazes:
Faloidina quando presente, estabiliza os filamentos de actina, ou seja,
impede a instabilidade dinmica. Este inibidor aparece em cogumelos que
tambm possuem um potente inibidor da RNA polimerase II (fatal);
Colquicina liga-se s subunidades de tubulina e impede a polimerizao dos
microtbulos;
Taxol quando presente, estabiliza os microtbulos. Este tratamento em
certos tipos de cancro, causa, preferencialmente, a morte de clulas em
diviso. Possui efeitos secundrios nas clulas da medula ssea, intestino e
folculos capilares, que esto em constante diviso. J possvel a sua sntese.
O principal centro de organizao dos microtbulos o centrossoma na clula animal,
em clulas vegetais existem outro tipo de centros organizadores. O centrossoma localiza-se no
citoplasma perto do ncleo e consiste numa matriz amorfa de protenas que contm anis
complexos de g-tubulina para promover o crescimento dos microtbulos. A matriz
organizada por um par de centrolos.
Um centrossoma com microtbulos associados possui a extremidade () embebida no
centrossoma, enquanto a extremidade (+) emitida e est livre no citoplasma.
O processamento da tubulina, constituinte dos microtbulos, feito atravs da
acetilao das lisinas da -tubulina e pela remoo de resduos de tirosina da extremidade C-
terminal da -tubulina. Atravs da anlise destes resduos consegue-se determinar a idade
dos microtbulos.

Protenas Associadas aos Microtbulos
O espaamento dos microtbulos depende do comprimento das projeces das
protenas que lhe esto associadas.
As protenas que se ligam aos microtbulos podem influenciar a estabilizao, a
despolarizao ou o posicionamento dos microtbulos.
MAP protena que distribui os microtbulos uniformemente, para que estes possuam
o mesmo espaamento uns dos outros. Estabiliza os microtbulos para que fiquem mais
compridos e menos dinmicos. Promove o seu crescimento.
Catastrofina aumenta a ocorrncia de catstrofes (desagregao). Promove a
desagregao dos microtbulos, tornando-os mais pequenos e mais dinmicos.
60

Protenas motoras protenas que se movimentam ao longo do microtbulo. Diferem
em relao ao tipo de filamento ao qual se ligam, na direco em que se movimentam e na
carga que carregam. Podem apresentar diversas formas que dependem do seu cargo. Estas
protenas so constitudas por 2 cadeias pesadas idnticas (formam regies globulares que
ligam a protena ao microtbulo, com hidrlise de ATP) e por vrias cadeias pequenas e leves.
Cinesinas movimentam-se da extremidade (-) para a extremidade (+). A
cinesina que est presente no microtbulo possui um receptor de cinesina
ligado, o qual se liga ao organelo especfico;
Dinenas movimentam-se da extremidade (+) para a extremidade (-). A
dinena necessita da presena de um nmero variado de protenas acessrias
para se fixar membrana dos organelos. Existem elementos que formam
ligaes fracas com os microtbulos (ligam-se dinena) e componentes que
formam um pequeno filamento de actina (ligam-se aos organelos).
As protenas motoras tm, assim, um papel importante no posicionamento dos
organelos.
O conjunto de microtbulos tem a extremidade (+) voltada para a periferia da clula,
partindo da regio perto do Golgi. As cinesinas, com movimento autgrafo, transportam
mitocndrias, lisossomas e vrias vesculas membranares para o retculo endoplasmtico ou
para a periferia da clula. As Dinenas, com movimento retrgrado, transportam elementos do
retculo endoplasmtico, endossomas secundrios e lisossomas para o centro da clula.

Clios e Flagelos
Clios e flagelos estruturas mveis constitudas por microtbulos e protenas.
Clios possuem um movimento tipo chicote;
Flagelos possuem um movimento tipo onda.
Axonema tem um arranjo 9 + 2, ou seja, so constitudos por 9 dupletos e 2
microtbulos individuais no centro.
Corpo basal possui um arranjo 9 + 0, ou seja, so constitudos por 9 tripletos apenas.
Existem, nos flagelos / clios, uma srie de outras protenas que mantm os
microtbulos com determinado arranjo e ligados uns aos outros.
Se os microtbulos no possussem estas protenas e fossem isolados, um deles iria
subir em relao ao outro devido hidrlise do ATP e sua polaridade. Na conformao
normal devido grande presena de protenas, com a hidrlise de ATP o microtbulo curva,
permitindo o seu movimento.
Os clios / flagelos formam-se a partir dos corpos basais, ou seja, o corpo basal
funciona como um centro organizados de microtbulos.

Microfilamentos / Filamentos de Actina
Nas clulas animais existe uma rede densa de filamentos de actina e protenas
associadas, por baixo da membrana citoplasmtica que intervm na forma e movimentos, mas
tambm, possui um papel importante em algumas estruturas (microvilosidades).
As actinas so muito semelhantes umas s outras, no entanto, diferentes filamentos
tm funes diferentes.
Os filamentos de actina so monmeros dispostos em hlice (2 protofilamentos), onde
todas as subunidades globulares tm a mesma orientao e polaridade bem definida. Os
monmeros de actina possuem um nucletido, o ATP, ligado no centro da molcula. Aps a
ligao do ATP, este pode sofrer hidrlise.
A nucleao (incio) desta estrutura lenta, mas o crescimento (alongamento)
rpido. O equilbrio depende da concentrao de monmeros livres na clula (quando se
atinge a concentrao crtica).
61

Com a existncia de ATP a molcula tende a polimerizar, ou seja, tende a estabilizar e
crescer, no entanto, com a hidrlise de ATP a molcula tende a despolimerizar, ou seja,
provoca alteraes na protena, desagregando-a. O facto da polimerizao da actina estar
dependente da presena de ATP e a sua ausncia provocar alterao da molcula faz com que
exista um equilbrio dinmico entre filamentos de actina e a actina no polimerizada.
Profilina promove o alongamento, pois estabiliza as molculas de actina.
Timosina impede o alongamento, pois tende a despolimerizar as molculas de actina.
Um monmero de actina pode estar ligada profilina para alongar o filamento, no
entanto a profilina e timosina no podem estar ligados ao mesmo tempo a um nico
monmero de actina.
Numa clula onde a maior parte dos monmeros de actina esto ligados a timosina, a
activao de uma pequena quantidade de profilina pode conduzir rpida produo de
filamentos.
Complexo ARP faz com que se formem estruturas bem organizadas de filamentos
ligadas umas s outras.
Rede de actina formao desta estrutura na superfcie da membrana, que confere,
aos eritrcitos, a rigidez e elasticidade necessrios sua funo.
A actina estabelece ligaes com uma grande variedade de protenas nas clulas
eucariticas: actina (formao de filamentos), tropomiosina (fora entre de filamentos),
fimbrina e -actinina (ligao de filamentos), filamina (filamentos cruzados), gelsolina
(fragmentos de filamentos), miosina II (deslizamento de filamentos), miosina I (movimento de
vesculas nos filamentos), espectrina (ligao de filamentos membrana citoplasmtica),
timosina (monmeros de actina).
Os filamentos de actina formam uma rede 3D com vrias protenas em ligao.

Filamentos Intermdios
Filamentos intermdios preenchem o dimetro que resta entre os filamentos de
actina e os microtbulos. Formam-se a partir de uma molcula, que se liga a outra molcula,
de uma forma mais ou menos helicoidal, formando-se um dmero e ,sequencialmente, at se
formar um aglomerado 8 tetrmeros com muita resistncia.
constitudo por protenas fibrosas como a queratina, vimetina, protenas dos
neurofilamentos e lamina. Esta estrutura tem, assim, uma funo de suporte mecnico sendo
muito estveis e insolveis.
Um dos factores que parece controlar a despolimerizao / polimerizao dos
filamentos intermdios a fosforilao / desfosforilao de determinados resduos.

Lmina Nuclear
A lmina nuclear est associada membrana interna do invlucro nuclear e
cromatina. Esta estrutura tambm se estende do ncleo para a periferia, interagindo com
microtbulos, filamentos de actina e com a membrana citoplasmtica.
Nos mamferos existem laminas A, B e C.
Durante a diviso nuclear ocorre a fosforilao de resduos de serina dando-se uma
desintegrao desta lmina.

Elementos do Citoesqueleto em Bactrias
As bactrias e as archaebactrias possuem protenas homlogas tubulina FtsZ que
podem polimerizar filamentos ou anis no local onde se forma o septo de diviso celular (nos
eucariontes o anel contrctil da citocinese possui filamentos de actina que intervm,
activamente).
62

A protena ParM tambm homloga da actina. Quando o plasmdio se divide a ParM
associa-se aos 2 plasmdios e o crescimento dos filamentos faz com que , cada uma das cpias,
seja empurrada para os extremos da clula, funcionando, mais ou menos, como um fuso
mittico.
Recentemente, tambm foi encontrado um homlogo de um filamento intermdio,
numa bactria.
Assim, contrariamente ao que se supunha inicialmente, todos os elementos de
citoesqueleto conhecidos para clulas eucariticas esto, tambm, presentes em bactrias,
sob a forma de homlogos com diferentes funes e muito menos complexos, onde possuem
funes vitais, em muitos aspectos, para a fisiologia desta clula.

Ligaes entre Clulas ou Clula - Matriz
Existem 3 tipos de junes funcionais:
Ocluso fixam 2 clulas, uma outra, e no deixam passar nem pequenas
molculas. Impedem que os transportadores percorram toda a clula, ou seja,
permitem que apenas se movimentem em determinados locais. Aparecem em
clulas como as epiteliais intestinais;
Adeso / desmissomas / hemidesmossomas ligam as clulas umas s outras
ou matriz;
Comunicao / Hiato (clulas animais) / plasmodsmios (clulas vegetais)
sinais qumicos ou elctricos. So constitudos por protenas membranares que
formam, no seu interior, um canal fechado, apenas respondendo a estmulos
qumicos ou elctricos, quando necessrio.
As clulas epiteliais do intestino possuem vrios tipos de junes: junes de ocluso,
junes de adeso entre filamentos de actina em duas clulas, conectores desmossomais que
ligam filamentos intermdios entre as clulas, junes de hiato que permitem a passagem de
molculas solveis em gua entre clulas, hemidesmossomas que fixam filamentos
intermdios entre a clula e a matriz extracelular e junes de adeso entre os filamentos de
actina e a matriz extracelular.

Junes de Ocluso
So junes que impedem a passagem de molculas e tambm a difuso de protenas
transportadoras (lateral e basal). H uma selagem apesar de, nem sempre, ser total. Esta
juno pode ser alterada pelas prprias clulas.
Nas clulas epiteliais do intestino existem junes de ocluso fazendo com que os
transportadores apenas se movimentem ao longo das microvilosidades e no ao redor de toda
a clula.
Nestas junes participam os folhetos externos das membranas e cordes de protenas
transmembranares, conseguindo, assim, obstruir o espao intercelular.
Juno
Protenas transmembranares Elementos do Citoesqueleto
Protena Transmembranar
de adeso
Ligao extracelular
Ligao intracelular do
citoesqueleto
Protenas intracelular
Clula - Clula
Juno de adeso Caderina Caderina na vizinhana da clula Filamentos de actina
e cateninas, vinculina, -
actinina e placoglobina
Desmossoma Caderina
Desmogleinas e desmocolinas na
vizinhana da clula
Filamentos intermdios Desmoplakinas, plakoglobinas
Clula - Matriz
Adeso de ocluso Integrina Protenas da matriz extracelular Filamentos de actina
Talina, vinculina, -actinina,
filamina
Hemidesmossoma Integrina Protenas da matriz extracelular Filamentos intermdios plectina
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Junes de Adeso
As junes propriamente ditas so constitudas por filamentos de actina, no entanto os
desmossomas e os hemidesmossomas so constitudos por filamentos intermdios.
Ocorre entre clulas ou entre uma clula e a matriz. So formadas por filamentos de
citoesqueleto associados a protenas intracelulares e transmembranares.
A formao de um contacto focal ocorre quando a ligao de glicoprotenas da matriz,
parte exterior da clula, provoca a ligao de molculas integrais na zona de contacto.
A rede de filamentos de queratina de clulas adjacentes esto indirectamente ligadas
umas s outras, atravs de desmossomas, e a uma lamina basal, atravs de hemidesmossomas
Placas densas citoplasmticas protenas que ligam filamentos de citoesqueleto (nem
sempre queratina) s protenas transmembranares (caderinas, integrinas).

Junes de Hiato
Junes constitudas por protenas transmembranares, nomeadamente, as conexinas,
que formam um canal aquoso. Este canal abre e fecha em resposta a estmulos (concentrao
de clcio e alteraes de pH).
As protenas so constitudas por 6 subunidades, de tal forma que uma pequena
rotao de cada subunidade fecha o canal.
Os canais atravessam as 2 membranas citoplasmticas que esto separadas por um
intervalo extracelular pequeno.

Plasmodsmios
Estruturas presentes em clulas vegetais que permitem a troca de substncias entre
clulas vizinhas. Tais como as junes de hiato pe em contacto directo os citoplasmas de
clulas adjacente.
Estes plasmodsmios formam-se na membrana citoplasmtica, ligando o citoplasma
entre duas clulas vizinhas, onde canais atravessam a parede celular. So extenses do retculo
endoplasmtico.
Estas estruturas formam-se na diviso celular quando se forma a parede celular, no
ficando esta, totalmente, contnua. Devido a estas ligaes os retculos endoplasmticos de
cada clula esto em contacto devido presena de desmotbulos.

64

Biosinalizao: Mecanismos de Comunicao entre Clulas
Sinalizao em Clulas Eucariticas
So vrios os sinais (estmulos fsicos ou qumicos externos) aos quais as clulas
respondem.
Exemplos de estmulos: luminosos (antignios), mecnicos (glicoprotenas na
superfcie da clula), neurotransmissores (oligossacardios na superfcie da clula), nutrio
(sinais desenvolvidos), odores (componentes da matriz extracelular), ferormonas (factores de
crescimento) e modificaes (hormonais).
Estes sinais no entram nas clulas receptoras, vo-se apenas ligar a receptores nas
suas membranas citoplasmticas, no folheto externo. O sinal tem de ser convertido numa
informao, para ser processado pela clula.

Transduco de Sinais
Transduco processo comum a todos os tipos de sinais. A molcula sinal externa
liga-se ao receptor proteico (embebido, normalmente, no folheto externo da membrana
citoplasmtica), provocando a alterao da forma da protena receptora que vai activar uma
via sinalizadora intracelular, mediada por uma srie de protenas sinais. Finalmente, um ou
mais desses sinais proteicos intracelulares interage com a protena efectiva, o que altera a sua
funo, de modo a que o comportamento da clula seja modificado, segundo o sinal recebido.

A maioria das molculas so hidroflicas e por isso impedidas de passar na membrana
citoplasmtica, directamente. Em vez disso, ligam-se ao domnio externo de receptores, que
por sua vez geram mais sinais dentro da clula receptora, permitindo a transmisso do sinal.

No entanto, algumas molculas sinais atravessam a membrana citoplasmtica e ligam-
se a domnios internos de receptores, tanto no citosol como no ncleo. Muitos destes sinais
so molculas hidrofbicas e parcialmente insolveis em soluo aquosa. Estes sinais so
rapidamente transmitidos, processando-se facilmente a sua resposta.

Vias de Sinalizao Intercelular
Via dependente do contacto o sinal fica na membrana citoplasmtica da clula que a
sintetizou, numa protena transmembranar. , ento, por contacto que o receptor na
membrana citoplasmtica da outra clula recebe e transmite o sinal. Assim, necessrio um
contacto directo entre as membranas citoplasmticas das duas clulas.
Molcula sinal
extracelular
Receptor proteico na
membrana
citoplasmtica
Ligao do
sinal ao
receptor
Activao de
protenas sinais
intracelulares
Activao de
protenas
efectivas
Enzimas
metablicas
Alterao do
metabolismo
Protenas
reguladora de
genes
Alterao da
expresso
gnica
Protena do
citoesqueleto
Alterao da
forma e
movimento
da clula
Molcula sinal hidroflico Receptor proteico na superfcie da clula
Protena
Transportadora com
molcula sinal
Pequena molcula
sinal hidrofbico
Entrada na clula
Receptor proteico
intracelular
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Via paracrina o sinal sintetizado por uma clula que o liberta para se ir ligar s
clulas na vizinhana. Assim, esta via depende do sinal que libertado no espao extracelular e
que actua, localmente, nas clulas vizinhas.
Via sinptica sinal (elctrico) produzido no corpo celular, percorre grandes distncias
pelo citoplasma do axnio e quando chega ao fim emite o sinal sob a forma do
neurotransmissores, para outra clula. assim, realizado por neurnios que transmitem sinais
elctricos ao longo dos seus axnios e libertam os neurotransmissores nas sinapses que esto
distantes do corpo celular.
Via endcrina clulas endcrinas libertam molculas sinais (hormonas) que entram
na corrente sangunea e atingem clulas muito distantes. Depende de clulas endcrinas que
segregam hormonas na corrente sangunea para serem distribudas ao longo do corpo.
Muitos tipos de molculas sinais so usadas tanto na via paracrina, sinptica e
endcrina, a diferena crucial habita na velocidade e selectividade com que os sinais so
entregues s clulas efectivas.

Vida Celular e Sinais Extracelulares
O tempo que a transduco (transmisso e efeito) demora a ocorrer depende dos
processos pelo qual passa no domnio intracelular. Assim, quando o sinal altera a funo de
uma protena j existente a transduo rpida, no entanto quando o sinal implica a alterao
da transcrio genica, a transduco lenta.
A vida das clulas depende de vrios sinais extracelulares. A clula recebe sinais para
se dividir, para crescer, para se diferenciar e para morrer (morte celular programada /
apoptose).
Cada tipo de clula dispe de uma srie de receptores que permitem a sua resposta a
molculas sinais de outras clulas. Estas molculas sinais combinam-se para regularem o
comportamento das clulas.
A clula recebe, normalmente, uma srie de sinais que a mantm viva. Para alm
desses sinais, ela pode receber sinais especficos que permitam o seu crescimento e diviso, e
outras que permitam a sua diferenciao. Quando a clula deixa de receber qualquer tipo de
sinal, entra em apoptose.

Tipos de Receptores da Membrana Celular
Canais inicos (protenas tipo canal) a ligao do sinal ao domnio externo do canal
permite a sua abertura e a passagem de ies que vo induzir alteraes e, consequentemente,
a transmisso do sinal.
a m a sua diferenciao. Quando a clula deixa de receber qualquer tipo de



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Activao das cnases A (PKA) constituda por 2 subunidades modeladoras. Quando o
sinal e a subunidade catalstica (com funo enzimtica) se ligam s subunidades a cnase fica
activa e est, ento, pronta para fosforilar estratos. A ligao de cAMP s subunidades
reguladoras induz uma mudana na conformao, fazendo com que as subunidades se
dissociem. As subunidades catalsticas ficam, ento, activas. A libertao das subunidades
catalsticas necessita da ligao de mais de 2 molculas cAMP s subunidades reguladoras, no
tetrmero.
Quando as subunidades catalsticas esto livre e activas podem migrar para o ncleo,
onde vo fosforilar protenas reguladoras de genes, enquanto as subunidades reguladoras
permanecem no citoplasma.
As clulas dos mamferos possuem, pelo menos, 2 tipos de PKA:
Tipo I maioritariamente, no citosol;
Tipo II est ligado atravs das suas subunidades reguladoras membrana
citoplasmtica, invlucro nuclear, membrana externa mitocondrial e
microtbulos.

cAMP e metabolismo do glicognio o metabolismo do glicognio regulado por uma
hormona que induz a activao de uma pKA.

cAMP e regulao da transcrio PKA fosforila a protena CREB que regula a
actividade gnica. A ligao de uma molcula sinal extracelular ao receptor da protena G leva
activao da adenilil ciclase, a um aumento da concentrao de cAMP, que activa a PKA no
citosol, e libertao das subunidades catalsticas que migram para o ncleo onde fosforilam a
protena CREB reguladora dos genes.
Uma vez fosforiladas, CREB recruta um co-activador CBP que estimula a transcrio
gnica. Esta via sinalizadora controla muitos processos provenientes da sntese hormonal
(clulas endcrinas) para a produo de protenas necessrias memria cerebral.

Ca
2+
- mensageiro intracelular.
Bombeamento do citosol para o exterior da clula atravs de canais na
membrana citoplasmtica ou atravs de bombas de ATP sintase;
Bombeamento do retculo endoplasmtico e de outros organelos para o
citosol atravs de bombas de ATP sintase e canais para transportadores de
molculas de clcio.
PKA inactiva (subunidade
reguladora + subunidade
catalstica)
Fixao de cAMP no
complexo
Complexo de cAMP e
subunidades reguladoras +
Subunidades catalsticas activas
Epinefrina
liga-se ao
receptor
Receptor
activa as
subunida-
des da
protena G
Adenilil
ciclase
activa e
produz
cAMP
atravs de
ATP
Inactiva-
o da
sntese de
glicognio,
impedindo
o armaze-
namento
de glucose
Activao
da
protena
cnase A
Activao
da cnase
fosforilase
Activao
da
fosforilase
glicogni-
ca,
libertando
as
molculas
de glucose
armaze-
nadas
Glicognio
reduzido a
glucose 1-
fosfato
Glucose
Libertao
de glucose
para o
exterior da
clula
Molcula
sinal activa o
receptor da
protena G
Activao da
protena G
Activao da
adenilil
ciclase
Activao
PKA
Migrao
das
subunidades
catalsticas
para o
ncleo
Activao do
CREB
Activao
CBP
Activao da
transcrio
gnica
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H vrias molculas sinal que regulam as concentraes de clcio:
Entrada de clcio presente nos fluidos extracelulares, nos terminais nervosos
atravs de canais, quando a membrana terminal nervosa despolarizada por
um potencial de aco;
A ligao de molculas sinais extracelulares a receptores da superfcie da
clula forma inositol trifosfato que estimula a libertao de clcio do retculo
endoplasmtico.
semelhana do verificado com as PKA, as cnases C (PKC) podem, tambm, regular a
expresso de genes especficos. A activao de receptores estimula a ligao da enzima
fosfolipase C-b membrana citoplasmtica pela protena G. Dependendo da forma da enzima,
poder ser activada a subunidade Gq pelo complexo bg de outra protena G, ou por ambos.
Dois mensageiros intracelulares so produzidos quando PIP22 hidrolisada pela
fosfolipase activa. A inositol 1,4,5-trifosfato difunde-se atravs do citosol e liberta clcio para o
retculo endoplasmtico, ligando-se a um canal de libertao de clcio na sua membrana.
O gradiente electroqumico de clcio atravs da membrana provoca a sada de clcio
para o citosol. Diacilglicerol permanece na membrana citoplasmtica e em conjunto com a
fosfatidilserina e clcio activam a protena enzimtica cnase C, que provm do citosol.

Sinalizao nas Plantas
Nas plantas existe uma gama de sinais que respondem s suas necessidades
especficas. Estes sinais tambm so transmitidos s clulas e entre clulas de modo a serem
processadas respostas especficas.
Os estmulos ambientais podem ser: gravidade, luz, temperatura, humidade, vento,
herbvoros patognicos, parasitas patognicos, molculas txicas, estado de gua, minerais,
oxignio, dixido de carbono e glicose.
Os sinais das plantas so similares aos sinais presentes nos animais: jasmonate
(semelhante prostaglandina E dos animais), ndole-3-acetato (semelhante serotonina dos
animais) e brassinolide (semelhante aos estradiol dos animais).
Molcula sinal
activa o receptor
Activao da
protena Gq
Activao da
fosfolipase c-
Activao do
inositol 1,4,5-
trifosfato ligado
a PI bifosfato
Inositol liga-se
aos canais de
clcio do retculo
que juntamente
com a
diacilglicerol,
activa a cnase C
69

Biologia da Clula Tumoral
Clulas Tumorais
Quando a clula escapa aos controlos celulares pode-se dividir descontroladamente,
formando-se uma clula tumoral.
A formao de uma clula tumoral est acompanhada por uma mudana na forma
celular, sendo fcil a distino entre clulas normais e tumorais.
Um tumor benigno e um maligno so estruturalmente distintos, pelo que existem
vrias formas possveis de os tumores serem formados.
Tumor benigno (adenona) encontra-se rodeado por uma cpsula (tecido fibroso).
um tumor no invasivo porque permanece no tecido onde se originou. facilmente removido
atravs de cirurgia, pois as clulas mantm-se juntas numa massa de clulas.
Tumor maligno (adenocarcinoma) clulas tumorais invasivas que migram e vo
invadir tecidos que no lhes pertencem. Originam, normalmente, cancro pois invadem tecidos
vizinhos.
A formao de tumores depende da proliferao celular ou de uma deficiente morte
celular. Normalmente, em situaes de homeostasia (equilbrio) h um controlo entre a
proliferao celular e a apoptose. No entanto, quando existe o aumento da diviso celular e
uma diminuio da apoptose, pode-se formar um tumor.
Metstase tumor secundrio resultante da fixao de clulas tumorais aps a sua
deslocao a partir do foco tumoral primitivo.
Formao de metstases h um crescimento de clulas tumorais em determinado
tecido, que a certo momento ir invadir a corrente sangunea. As clulas so transportadas por
essa via, invadindo e alojando-se noutros tecidos, onde formaro ncleos que vo proliferar e
originar tumores secundrios (derivados do tumor inicial).

Oncogenes e Genes Supressores Tumorais
Proto-oncogenes genes normais implicados na regulao da proliferao e da
diferenciao celular. Genes com capacidade para estimular a diviso celular, mas que esto
inactivos em clulas que no se dividem. Devido aos agentes mutagnicos, estes genes podem
alterar-se e passam a oncogenes (estimulando permanentemente a diviso celular).
Assim, os proto-oncogenes, quando activados, originam oncogenes susceptveis de
formar um tumor. Este mecanismo consiste num ganho de funo, ou seja, quando uma clula
normal sofre uma mutao pode, eventualmente, activar a transcrio de um oncogene que
ao criar a respectiva protena vai promover a transformao e diviso celular.
Qualquer via de alterao dos proto-oncogenes pode formar oncogenes e activar os
genes tumorais que vo levar sntese de protenas especficas.

Genes supressores tumorais genes envolvidos em actividades vitais das clulas.
Participam na regulao da proliferao celular contrabalanando o estmulo proliferativo dos
proto-oncogenes, atravs de uma aco inibidora. Quando esto activos bloqueiam a diviso
celular, no entanto quando alterados, por agentes mutagnicos, permitem a continuao da
diviso celular.
Clula epitelial
normal
Crescimento
celular devido a
um tumor
benigno no
epitlio
Clula torna-se
invasiva e entra
nos capilares
Adeso das
clulas s
paredes dos
vasos sanguneos
Sada das clulas
dos vasos
sanguneos
formando
micrometstases
Colonizao do
tecido formando
metstases
irrigadas pelo
sangue
Clula normal Mutao cria oncogene
Mutao activa permite
ao oncogene promover a
neoformao celular
70

Os genes onco-supressores originam genes supressores tumorais atravs de uma
perda de funo gnica. Quando uma clula normal sofre uma mutao pode, eventualmente,
inactivar um gene onco-supressor de um alelo, no surtindo qualquer tipo de efeito. No
entanto, perante uma segunda mutao no outro alelo, que inactive a segunda cpia do gene,
faz com que haja a inactivao da funcionalidade supressora tumoral, promovendo a
transformao da clula. necessria uma mutao em ambos os alelos por tratar-se de um
gene recessivo.
devido inactivao dos 2 genes supressores tumorais, ou a uma deficincia nas
protenas que so produzidas, que leva alterao / neoformao de uma clula.

Para alm das causas genticas e de mutaes existem carcinomas que esto
associados presena de vrus: DNA vrus (papiloma vrus, hepadnavirus, hepatite, herpes) ou
RNA vrus (retrovrus, leucemia, imunodeficincia).

Retrovrus e Sarcoma de Rous
O retrovrus, atravs da transcriptase reversa, consegue produzir uma molcula de
DNA tendo como molde uma molcula de RNA.
Esse DNA vai incorporar o genoma da clula e pode no ter expresso momentnea.
No entanto, a determinada altura, e devido a agentes mutagnicos, esse DNA pode expressar-
se, originando novas partculas vricas que vo infectar outras clulas, propagando o vrus.
Neste processo de expresso viral, podem-se juntar genes oncolgicos, tambm,
expressos e, consequentemente, vo originar clulas tumorais nas clulas que os novos vrus
infectarem.

Vrus com DNA
Neste tipo de vrus o genoma viral introduz-se no ncleo, onde permanece como
plasmdio, sem qualquer influncia na clula. No entanto, quando determinados
acontecimentos fazem com que fragmentos desse plasmdio sejam incorporados no genoma
nuclear original da clula, h uma transformao da mesma. As protenas desreguladas
produzem protenas de replicao viral, interferindo com o controlo de diviso celular,
ajudando formao de cancro.

Clula normal
Mutao inactiva
um gene onco-
supressor
Sem efeito numa
cpia do gene
Segunda mutao
inactiva segunda
cpia do gene
2 mutaes
eliminam a funo
dos genes
supressores
tumorais
promovendo a
neoformao
celular
Clula normal
infectada
com o
retrovrus
Clula
hospedeira
possui
genoma
retroviral
incorporado
no seu
genoma,
prximo de
um proto-
oncogene
Expresso
vrica
Formao de
novos vrus
em cpsulas
(proto-
oncogene +
genoma viral)
Ocorre o
ciclo
infeccioso
Mutao cria
um oncogene
Retrovrus
com o
oncogene
invade uma
clula normal
Clula
transformada
produz
protenas
reguladoras
com erros
Genoma viral
permanece no
ncleo como
plasmdio
Protenas virais,
no ncleo,
controlam a
replicao
normal do vrus
Integrao
acidental do
fragmento viral
no cromossoma
hospedeiro
Produo
desregulada de
protenas virais
leva
proliferao da
clula
71

Vrus de Converso de Proto-Oncogenes em Oncogenes

Translocao
A clula possui mecanismos de controlo e alterao de erros, no entanto a clula pode
no conseguir corrigir esses mesmos erros e proliferar, descontroladamente.
Translocao troca recproca de fragmentos de cromossomas vizinhos, no
homlogos (leucemia, linfoma Burkitt).
A translocao de partes de cromossomas pode activar oncogenes que, no
cromossoma inicial, se encontrava inactivo.

Crescimento e Proliferao Celular
A induo de clulas tumorais pode estar relacionada com alteraes de protenas que
controlam o crescimento e proliferao celular.

Cnases Oncognicas
Os filamentos de actina mantm a forma da clula.
Quando um oncogene activado pode ser sintetizadas cnases. Estas cnases
oncognicas (p60src) vo fosforilar a vinculina (localizada nas placas de adeso que ligam os
filamentos e actina s membranas da clula), fazendo com que haja uma desagregao /
desorganizao dos filamentos de actina, do citoesqueleto, e tambm, das membranas de
alguns organelos. Desta fosforilao resulta a alterao da forma da clula.
Protena ErbB (oncogene erbB) verso alterada do receptor do factor de crescimento
epidrmico.
Normalmente, para a clula se dividir tem de receber um sinal que se liga a um
receptor enzimtico (com domnio interno), activando as protenas da diviso, dividindo-se. No
entanto, quando a protena ErbB produzida na clula, leva proliferao descontrolada, da
mesma, pois esta protena possui uma semelhana com o domnio interno do receptor,
colocando-se na membrana.
Apesar dessa semelhana, a protena no possui domnio externo. Logo a clula vai-se
dividir descontroladamente, pois o domnio interno estar, continuamente, a mandar sinais de
diviso, mesmo sem a clula ser estimulada para tal.
Proto-Oncogene
Mutao / Deleco
Deleco ou
mutao individual
na sequncia
Protena hiperactiva
feita em
quantidades
normais
Mutao reguladora
Protena normal
muito
sobreproduzida
Amplificao
Amplificao gnica
Protena normal
muito
sobreproduzida
Rearranjo
Rearranjo
cromossmico
Separao da
sequncia de DNA
causa a
sobreproduo da
protena normal
Fuso de transcrio
activa causa uma
sobreproduo da
protena fundida
Membrana
citoplasmtica
com
receptores de
sinais que
activam os
vrus
armazenados
Mol-
culas
sinais
ligam-
se ao
recep-
tor
Efecto-
res
intrace-
lulares
activam
trans-
ductores
intrace-
lulares
Activa-
o de
mensa-
geiros
secund-
rios
Ligao
aos
recep-
tores
intrace-
lulares,
no
ncleo
Esti-
mulao
de
factores
de
transcri-
o
Prote-
nas repa-
ram a
sequn-
cia de
DNA
formada
Trans-
crio
Prote-
nas
contro-
ladoras
do ciclo
celular
RNA mRNA
Pro-
tenas
apop-
tticas
Morte
celular
72

Genes Supressores Tumorais
Uma clula que possua defeito apenas num alelo dos genes supressores tumorais,
normalmente, tem um comportamento normal de clula saudvel. No entanto, quando a
alterao se d em ambos os alelos, h alterao na sequncia de DNA, silenciando-se o gene
supressor, o que permite a formao de tumor.
Protena Rb (retinoblastoma) protena importante no controlo do ciclo celular pois
regula a entrada da clula na fase S (fase de duplicao do DNA). Quando entra nessa fase, o
complexo promotor da fase S, que fosforila a Rb, activa a transcrio do gene para a entrada
da clula na fase S. Tanto a p16 como a Rb so onco-supressores.
Clula no proliferativa:

Clula proliferativa:

Protena p53 associada protena Rb que fica activa quando se detectam erros no
DNA, levando transcrio de uma protena que inibe a fase S.
As protenas vricas ligam-se Rb e ao p53 inactivando as protenas para que a clula
se divida, descontroladamente.
Proliferao celular bloqueada:

Proliferao celular activada por vrus de DNA:

Genes supressores tumorais: APC, BRCA1, BRCA2, DPC4, NK4, MADR2, NF2, PTC, PTEN,
Rb, VHL, WT1.
Os produtos de oncogenes e genes supressores tumorais ocorrem pelas mesmas vias.
Teoricamente, a inibio da transcrio dos proto-oncogenes impede a formao de
oncogenes, por inibio da diviso celular.

p16 activa
Ligao
subunidade Cdk4
da cnase
Inactivao da
cnase e
desagregao da
ciclina D
Rb activa cobre a
protena E2F
E2F inactiva
p16 inactiva /
ausente
Cnase activa
com a
subunidade
Cdk4 d e a
ciclina D
Fosforilao
da protena
Rb que fica
inactiva
Rb inactiva
liberta a
protena E2F
E2F activa
Expresso dos
genes da fase
S activada
Rb activa liga-se ao
factor de proliferao
celular (protena
reguladora do gene)
Factor inactivo
p53 activa capaz de
parar a proliferao
celular
p21 transcrito
Protena viral
liga-se protena
Rb
Factor de
proliferao
celular activo
Ciclina e
transcrio
Protena vira E6
liga-se p53
p53 inactiva
5-
Fluorouracila
bloqueia a
sntese de
nucletidios
Etoposide
bloqueia a
replicao e
transcrio
do DNA
Arabinocito-
sina bloqueia
a replicao
do DNA
Transcrio
(Adriamicina
bloqueia a
trancrio e
sntese de
protenas)
mRNA Traduo
Vincristina e
Taxol
bloqueia o
fuso
acromtico
de
microtbulos
Protena de
diviso
celular

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Ana Cristina Ribeiro Gomes

Biologia Celular (2009-2010) Ana Cristina Ribeiro Gomes

) que forma um substrato. As peroxidases so

). Surge da combinao de 2 nucleotdios que possuem 1 acar, 1 base

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