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Luego de la fase exponencial, donde se tiene el
mximo valor de biomasa, se da una fase
estacionaria durante la cual algunas clulas se
dividen mientras otras mueren, para finalmente
llegar a la fase de muerte. En general todo el
comportamiento podr definirse en funcin de
la velocidad especfica de crecimiento y la
velocidad de lisis o metabolismo endgeno
(Nielsen 2003; Ribreau 2006). Cinetica de
crecimiento de la levadura.
II. RESULTADOS
Se prepar el medio de cultivo, para ello se
elaboraron 2 soluciones que contenan NH3,
MgSO4*7H2O, CaCl2*2H2O, K2HPO4 y
glucosa con una concentracin de 15 gL
-1
, una
vez obtenida las soluciones (medio de cultivo)
se esterilizaron sometindolos a una
temperatura de 121C y 15 psia de presin por
15 minutos, esto para destruir o remover
cualquier microorganismo, este procedimiento
se basa en el tiempo de penetracin y el de la
muerte trmica para un determinado
microrganismo
[1]
.
La inoculacin se llev a cabo agregando
un microorganismo (levadura) a las
muestras, activando en bao de maria 38C
por 20 minutos, este medio de cultivo se
dej en fermentacin por 3 das
aproximadamente 79,45 hor
III. RESULTADOS
Se prepar el medio de cultivo, para ello se elaboraron 2 soluciones que contenan NH3,
MgSO4*7H2O, CaCl2*2H2O, K2HPO4 y glucosa con una concentracin de 15 gL
-1
, una vez obtenida
las soluciones (medio de cultivo) se esterilizaron sometindolos a una temperatura de 121C y 15 psia
de presin por 15 minutos, esto para destruir o remover cualquier microorganismo, este
procedimiento se basa en el tiempo de penetracin y el de la muerte trmica para un determinado
microrganismo
[1]
.
La inoculacin se llev a cabo agregando un microorganismo (levadura) a las muestras, activando en
bao de maria 38C por 20 minutos, este medio de cultivo se dej en fermentacin por 3 das
aproximadamente 79,45 horas.
Los productos principales de la fermentacin son el alcohol etlico y el anhdrido carbnico y se
originan de la fermentacin alcohlica.
C6H12O6 + LEVADURA 2 CO2 + 2 C2H6O
A continuacin se muestran las cantidades iniciales y finales del cultivo, para poder realizar el balance
de materia.
Muestra Masa
C6H12O6 (g)
Masa
levadura (g)
Masa
CO2 (g)
Masa
C2H6O (g)
A 0,075 0,25
B 0,075 0,26
Para determinar la masa inicial de la glucosa
Partiendo del mecanismo de reaccin para la produccin de etanol, el rendimiento terico se defini
segn la Ecuacin.
Tabla 1. Datos iniciales y finales para balance de materia
En la tabla 2 se muestran las cantidades en volumen de glucosa, agua, tartrato mixto de sodio y potasio
y DNS necesarias para la elaboracin de las soluciones de trabajo y el blanco
Solucin
(gL
-1
)
Volumen
C6H12O6 (mL)
Volumen H2O
(mL)
Volumen
DNS (mL)
V.sal de
Rochelle (mL)
0 0 3 3 1
5 1 2 3 1
10 2 1 3 1
12 2,4 0,6 3 1
15 3 0 3 1
Cada grupo realizo una solucin de las anteriormente descritas en la tabla 2 con triplicado, para la
construccin de la curva de calibracin, para la cual se necesita conocer las concentraciones de glucosa
despus de haber hecho la disolucin con agua destilada, ya que se tom 1 mL de la solucin en este
caso la de concentracin 10 gL
-1
y se diluyo en 10 mL de H2O, dicha concentracin se puede hallar con
la ecuacin que rige las disoluciones:
De esta ecuacin se despeja C2 que es la concentracin de glucosa despus de la disolucin, y se
determinan las concentraciones de las 4 soluciones y el blanco, se midi la absorbancia de cada solucin
con un espectrofotmetro a 575 nm, por triplicado para luego sacar un promedio, los datos obtenidos
fueron registrados en la tabla 3.
Concentracin
(gmL
-1
)
Concentracin
final (gmL
-1
)
Absorbancia
0 0 0,000
5 0,45454545 0,301
10 0,90909091 0,598
12 1,09090909 0,667
15 1,36363636 0,765
Partiendo de estos datos se construy la curva de calibracin
y = 0.5752x + 0.0269
R = 0.9859
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 0.5 1 1.5
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Concentracion
Tabla 2. Datos preparacin de soluciones de trabajo
(Ecuacin 5)
Tabla 3. Resultados de absorbancia estndares de trabajo
Figura 1. Curva de calibracin.
Para el caso de las muestras se llev a cabo el mismo procedimiento de determinacin de glucosa
mediante DNS, tomando una alcuota de cada muestra, se realiz por duplicado, utilizando el mismo
blanco, se midi la absorbancia de cada muestra, los datos estn consignados en la tabla 4.
Muestra Absorbancia
A1 0,015
A2 0,026
B1 0,020
B2 0,007
Para calcular la concentracin de glucosa presente en la muestra, se interpolo en la ecuacin de la recta
(Figura 1), y se obtiene el valor de la concentracin:
Despejando x (concentracin de glucosa) de la Ecuacin 6,
Donde y es la absorbancia de la muestra problema, se reemplaza y se obtiene la concentracin de
glucosa presente es las muestras, los resultados obtenidos estn consignados en la tabla 5.
Muestra Concentracin
A1 -0,0206
A2 -0,00156
B1 -0,01199
B2 -0,03459
Como anteriormente se mencion el medio de cultivo se dej en fermentacin por 79,45 horas, pasado
dicho tiempo se pes el medio de cultivo, para poder calcular la produccin de CO2, mediante la
prdida de peso, pues el dixido de carbono sale en forma de gas, la diferencia entre el peso inicial y
final indica la cantidad de CO2 desprendido por la levadura.
Muestra Peso inicial (g) Peso final (g) CO2 (g)
A 180,22 179,97 0,25
B 180,07 179,81 0,26
Para la determinacin de la biomasa se tomaron 10 mL de las muestras, se
colocaron en un tubo falcn (figura 2) que se pes previamente y
posteriormente se pas a centrifugar a 600 rpm por 8 minutos, se descart el
sobrenadante y se volvi a pesar el tubo, con esta informacin se obtiene el
Tabla 4. Resultados de absorbancia muestras
(Ecuacin 6)
Tabla 5. Resultados concentracin
Tabla 6. Determinacin CO2
peso de la biomasa en base hmeda, la informacin descrita se encuentra en la tabla 6.
Muestra P. inicial
(g)
P. final
(g)
Biomasa
(g)
A 7,1715 7,2765 0,105
B 7,3809 7,4657 0,0848
La biomasa obtenida en peso hmedo, se pasa a peso seco:
(
)
Dnde:
Huh %: humedad en tantos por ciento sobre base hmeda
Ph : peso de la muestra hmeda
Ps : peso de la muestra seca
Despejando Ps de la ecuacin 3:
(
)
Para A:
(
)
Para B:
(
)
El estudio cintico de la prctica, incluye un sistema de mecanismos, que deben evaluarse desde el
sistema metablico de las levaduras. Para ello se siguen modelos cinticos que evalen el crecimiento de
microorganismos, para lo cual se busca relacinar entre la variacin en el concentracin de sustrato, y
su tasa de consumo, asumiendo que a una mayor tasa de consumo inicial de sustrato, el sistema
desarrollara una mejor velocidad de reaccin, que repercutira en tiempo ms cortos del proceso
general, siguiendo la reaccin de la fermentacin alcohlica, el mecanismo de la velocidad de consumo
de sustrato lo define como la relacin entre la variacin de la concentracin del sustrato en el tiempo, lo
que a su vez se puede expresar a travs de una constante de velocidad y la concentracin de sustrato,
Tabla 6. Determinacin biomasa.
(Ecuacin 3)
IV. ANALISIS DE RESULTADOS
http://esalvucci.wordpress.com/crecimiento-microbiano/
V. CONCLUSIONES
VI. BIBLIOGRAFIA
[1] http://www.ms.gba.gov.ar/sitios/laboratorio/files/2012/08/ESTERILIZACI%C3%93N-DE-MEDIOS-DE-
CULTIVO.pdf
Base
http://www.academia.edu/4403544/DETERMINACION_DE_AZUCARES_REDUCTORES_ME
TODO_DNS
http://www.elnuevodia.com.co/nuevodia/sociales/la-columna-del-
chef/166937-fermentacion#sthash.Ta4jBXFK.dpuf
http://www.unavarra.es/genmic/micind-2-4.htm
http://web.udl.es/usuaris/r5213847/Cin%C3%A9tica.pdf