B IOQUÍMICA

GUÍA DE TRABAJOS
PRÁCTICOS

AÑO 2008
 TRABAJO PRÁCTICO Nº 1
HIDRATOS DE CARBONO

PARTE A. SOLUBILIDAD
Reactivos:
-Glucosa -H2O
-Sacarosa -Etanol
-Almidón -Eter Etílico o sulfúrico

Método:

Tomar 3 tubos de ensayo por cada muestra y colocar 0,5 cm de azúcar, aproximadamente, en
cada tubo. Al tubo 1 añadir 1 ml de agua; al tubo 2 añadir 1ml de etanol; al tubo 3 1 ml de Eter
etílico, de cada azúcar. Mezclar bien todos los tubos y observar la solubilidad.

PARTE B. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO

1. Azúcares reductores
Reactivos:
- NaOH 10%
- CuSO4 1%

Método:
En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de la solución de azúcar e igual volumen de NaOH 10%.
Luego de agitar, se agrega gota a gota la disolución de CuSO4. Se calienta a ebullición, siendo
la reacción positiva cuando se observa la aparición de un precipitado amarillo (CuOH) y luego
rojo (Cu2O).

2. Prueba de Molisch:
El ácido sulfúrico concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan
luego con a-naftol sulfonato originando un complejo púrpura. Esta reacción es general para los
hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido
sulfúrico concentrado.

Reactivos:
- H2SO4 (c)
- α-naftol (50 g/l en etanol, preparar fresco)

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Método:
Agregue dos gotas de la solución de α-naftol a 2 ml de la sustancia problema. Añada
cuidadosamente por las paredes del tubo aproximadamente 2 ml de H 2SO4 (c) hasta que se
formen dos capas. Observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase de los
dos líquidos.

3. Prueba de Benedict:

Reactivos:
- Reactivo de Benedict: Disuelva 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio en
aproximadamente 800 ml de agua caliente. Filtre a través de papel de filtro en una probeta de
1000 ml y complete con agua hasta 850 ml. Mientras tanto, disuelva 17,3 g de sulfato de cobre
en aproximadamente 100 ml de agua y complete hasta 150 ml. Vierta la primera solución en un
vaso de precipitados de 2 litros y añada lentamente la solución de sulfato de cobre agitando
continuamente.

Método:
Agregue cinco gotas de la solución problema a 2 ml del reactivo de Benedict y coloque en un
baño de agua hirviendo por 5 minutos.

4. Prueba de Bial para las pentosas:

Cuando se calientan pentosas con HCl (c) se forma furfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones férricos para dar un color verde azul. La reacción no es absolutamente
específica para las pentosas, ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce
hidroximetil furfural que también reacciona con orcinol dando complejos coloreados.

Reactivos:
- Reactivo de Bial: Disuelva 1,5 g de orcinol en 500 ml de HCl (c) y añada 20 gotas de solución
de FeCl3 100 g/l.

Método:
En un tubo de ensayo agregue aproximadamente 1 ml de la muestra a 2,5 ml de reactivo y
caliente hasta que empiece a hervir. La aparición de una coloración azul verdosa indica
resultados positivos. Enfríe el tubo, luego agregue 2 – 3 ml de alcohol amílico y agite.

5. Prueba de Seliwanoff para las cetosas:

Las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados de furfural que
se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se esta estudiando.

Reactivos:
- Reactivo de Seliwanoff: Resorcinol 0,5 g/l en HCl 3 M)

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Método:
A 2 ml del reactivo de Seliwanoff agregue dos gotas de solución de carbohidrato y caliente
durante 3 minutos en un baño de agua hirviendo. Observe la aparición de un color rojo intenso.

6. Prueba para sacarosas:

Reactivos:
- HCl (c)
- NaOH 5 M
Método:
A 5 ml de solución de sacarosa agregue cinco gotas de HCl (c), caliente durante 5 minutos en
un baño de agua hirviendo, enfríe y agregue NaOH hasta que la solución sea neutra o
débilmente alcalina. Con la solución hidrolizada realice las pruebas para azúcares reductores y
la de Seliwanoff.

7. Prueba del yodo:

Reactivos:
- Solución de lugol (5 mmol/l en KI (30 g/l)
- Celulosa, glucógeno, almidón (10 g/l)

Método:
Acidifique la muestra con HCl diluido, agregue luego dos gotas de yodo y compare los colores
obtenidos con los de yodo en agua.

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 TRABAJO PRÁCTICO Nº 2
LÍPIDOS

PARTE A: SOLUBILIDAD

Reactivos:

-H2O
-Aceite
-Detergente
-NaOH 10 %
-Etanol
-Butanol

Método:

Tomar 5 tubos de ensayo (en todos los tubos debe haber aproximadamente 1 ml de aceite): al
tubo 1 añadir 1 ml de agua; al tubo 2 añadir 1ml solución de detergente; al tubo 3 1 ml de
NaOH 10%; al tubo 4 1 ml de etanol; al tubo 5 1 ml de butanol. Mezclar bien todos los tubos y
observar solubilidad.

PARTE B: IDENTIFICACIÓN
1. REACCIÓN CON EL SUDAN III

Reactivos:
- Sudán lll: Disolución al 0,2%: a 200 mg de Sudán lll se añaden a 100 ml de etanol 70%
calentado en un baño María, se mezcla y se deja en reposo durante 24 hs por lo
menos.
- Aceites vegetales

- H2O
- Solución de azúcar

Método:
Se aplica 1 ml (aprox) de cada aceite en un tubo de ensayos, se añade una gota de Sudán lll y
se mezcla. Se observa la aparición de una interfase y la aparición de miscelas.
Realizar un control negativo con agua y alguna solución de azúcar.

2. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE COLESTEROL:

Se parte de 3 gr de cerebro desmenuzado y se mezclan con 6 gr de yeso en un mortero hasta
formar una pasta uniforme. Se pasa a una placa de vidrio y se espera a que se seque (si es
necesario se lleva a estufa a 37º C). En forma cuidadosa, si es posible asegurándose con un
embudo, se pasa el material obtenido a un tubo de ensayos y se adicionan 6 ml de cloroformo
mezclando con vortex para luego filtrar por algodón. Sobre el filtrado se realizan las siguientes
reacciones:

3.1 Reacción de Schiff:

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Tomar 1 ml del extracto obtenido y agregar 1 ml de H2SO4 (c) por la pared del tubo.
Observar en la interfase la formación de un anillo rojo.

3.2 Reacción de Liebermann - Burkhardt:

A 2 ml del extracto agregar 10 gotas de anhídrido acético y 2 gotas de H2SO4 (c). Mezclar y
observar la variación de colores: rojo  violeta  azul  verde

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 TRABAJO PRÁCTICO Nº 3
PROTEÍNAS

Objetivo: extraer proteínas a partir de alimentos y realizar reconocimiento.

PARTE A. HARINA
Procedimiento:
• Pesar aproximadamente 20 g de harina y colocarla en el centro de un trozo de tela de
algodón.
• Tomar el lienzo por las puntas, encerrando la harina y mojarlo con agua de la canilla
para arrastrar el almidón contenido en la harina.
• Abrir la bolsita y juntar el residuo de gluten (proteína) con ayuda de una espátula.
• Pasar el residuo a un tubo de ensayo y agregar agua hasta 1 cm de altura.

PARTE B. GELATINA
Procedimiento:
• Preparar gelatina sin sabor (seguir las instrucciones del envase).
• Dejar enfriar.
• Una vez solidificada pasar una porción de la gelatina a un tubo de ensayo.
• Agregar agua hasta cubrirla y deshacerlo con una varilla.

PARTE C. HUEVO
Procedimiento:
• Abrir un huevo y separar la clara de la yema.
• Diluir la clara con 50 mL de agua destilada.
• Transferir 1 mL de solución de clara a un tubo de ensayo.

PARTE D. ENSAYO DE BIURET

Procedimiento:
A cada tubo que contiene proteína (de las obtenidas en la las partes A, B y C) y a un
tubo con 1 mL de agua destilada agregar 1 mL de solución de biuret.

Materiales y reactivos:
Tela de algodón.
Harina de trigo.
Tubos de ensayo.
Gelatina sin sabor.
Varilla de vidrio.
Huevo.
Solución de biuret.

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 Observaciones:
Alimento Proteína principal Coloración con Biuret
Harina
Gelatina
Clara de huevo
Agua

Complejo azul violáceo

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 TRABAJO PRÁCTICO Nº 4
CATALIZADORES

PARTE A. DESCOMPOSICIÓN DE H2O2 CON CATALIZADOR

BIOLÓGICO. MODIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR LA
TEMPERATURA

Procedimiento:
- Cortar daditos pequeños de papa (de unos 0.5 cm de lado).
- Hervir algunos de ellos (NO TODOS!!!).
- En un tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa cruda.

- En otro tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa hervida.

OBSERVACIONES
PAPA CRUDA
PAPA HERVIDA

PARTE B. MODIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA SEGÚN LA

ACIDEZ DEL MEDIO

Procedimiento:
- Triturar un trocito de zanahoria junto con 5 mL de solución reguladora de pH 7 para
extraer la enzima del tejido vegetal.
- Filtrar y recoger el líquido obtenido.
- Tomar 3 tubos de ensayo y colocar:
TUBO
1 1 mL de filtrado + 1 mL de NaOH 0.1 M
2 1 mL de filtrado + 1 mL de HCl 0.1 M
3 2 mL de filtrado

- Luego agregar a cada uno de los tubos 3 mL de H2O2.

TUBO OBSERVACIONES
1
2
3

Solución reguladora pH 7:
50 mL de KH2PO4 0.1 M (13 g/L) + 29 mL de NaOH 0.1 M

PARTE C. ENZIMAS EN EL JABÓN PARA LAVAR LA ROPA

1) Gelatina

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Proteasas – Técnica:
- Preparar gelatina como indica el fabricante. Dejar que solidifique.
- Tomar una porción de la misma y agregar 10 mL de agua.
- Agregar 5g de jabón en polvo.
- Incubar 1 hora a temperatura ambiente.

2) Postre
Amilasas – Técnica:
- Tomar una porción de aproximadamente 50 g de un postre.
- Agregar una cucharada de jabón en polvo.
- Mezclar muy bien e incubar unas horas a temperatura ambiente.

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 TRABAJO PRÁCTICO Nº 5
ÓSMOSIS

Materiales y reactivos:
• Sal de mesa
• Huevos crudos

• Solución de HCl 1:1

• Vasos de precipitados
• Agua destilada

Procedimiento:
- Sumergir los huevos en la solución de HCl 1:1 para extraer la cáscara sin dañar el
resto. Dejar actuar hasta que se desprenda la cáscara.
- Una vez que queda la membrana sin cáscara, colocar un huevo en un vaso que
contenga agua destilada de manera que lo cubra totalmente.
- Realizar lo mismo con otro huevo, en un vaso que contenga salmuera.
- Dejarlo hasta el final de la clase y observar.

CaCO3 + 2 HCl  CaCl2 + CO2 + H2O

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