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INDICE
I. INTRODUCCIN ...................................................................................................................... 3
II. OBJETIVO .................................................................................................................................. 4
2.1. OBJETIVO GENERAL ...................................................................................................... 4
2.2. OBJETIVOS ESPECFICO ................................................................................................ 4
III. MARCO TEORICO ................................................................................................................ 4
3.1. DE LOS EQUIPOS Y MATERIALES ............................................................................... 4
3.1.1. MECHERO BUNSEN O DE ALCOHOL .................................................................. 4
3.1.2. ASA DE SIEMBRA O AGUJA ENMANGADA ....................................................... 4
3.1.3. PORTAOBJETOS ....................................................................................................... 5
3.1.4. GOTEROS .................................................................................................................. 5
3.1.5. PLACAS PETRI ........................................................................................................ 6
3.1.6. TUBOS DE ENSAYO ................................................................................................ 6
3.1.7. AGUA DESTILADA .................................................................................................. 7
3.1.8. ACEITE DE INMERSIN ......................................................................................... 7
3.1.9. SOLUCIN DE CRISTAL VIOLETA ...................................................................... 8
3.1.10. SOLUCIN DE SAFRANINA................................................................................... 8
3.1.11. LUGOL ....................................................................................................................... 9
3.1.12. ALCOHOL ACETONA .............................................................................................. 9
3.1.13. AGAR VIOLETA ROJO BILIS .............................................................................. 10
3.1.14. MICROSCOPIOS ..................................................................................................... 11
3.1.15. EL AUTOCLAVE ..................................................................................................... 12
3.1.16. LA ESTUFA ............................................................................................................. 13
3.1.17. AGITADOR CON CALENTADOR MAGNTICO ................................................ 14
3.2. DE LA MUESTRA ........................................................................................................... 14
3.2.1. INOCUIDAD DE LOS ALIMENTOS ..................................................................... 14
3.2.2. QUESO ..................................................................................................................... 15
3.2.3. MORFOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS ................................................. 15
IV. MATERIALES Y METODOS ............................................................................................. 16
4.1. MATERIALES ................................................................................................................. 16
4.2. EQUIPOS .......................................................................................................................... 17
4.3. REACTIVOS .................................................................................................................... 17

2

4.4. METODOLOGIA ............................................................................................................. 17
4.4.1. CONTEO DE MICROORGANISMOS POR DILUCION SUCESIVA ................. 17
4.4.2. MTODO PARA EL RECUENTRO ....................................................................... 18
V. PROCEDIMIENTOS ................................................................................................................ 18
5.1. PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO ............................................................... 18
5.2. ESTERILIZACION DE LOS MATERIALES Y DEL MEDIO DEL CULTIVO ........... 20
5.3. PREPARAR LAS DILUCIONES SUCESIVAS .............................................................. 21
5.4. INOCULACIN DEL MEDIO DE CULTIVO ............................................................... 22
5.5. INCUBACION DE LOS MICROORGANISMOS .......................................................... 22
5.6. CONTEO DE MICROORGANISMOS ............................................................................ 22
5.7. IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS ............................................................ 25
VI. RESULTADOS ..................................................................................................................... 28
6.1. CONTEO DE MICROORGANISMOS ............................................................................ 28
6.2. IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS ............................................................ 28
VII. DISCUCIONES .................................................................................................................... 29
VIII. CONCLUSIONES ................................................................................................................ 29
IX. CUESTIONARIO ................................................................................................................. 30
9.1. INDICAR LOS MICROORGANISMOS QUE PERTENECEN A LOS GRUPOS DE : 30
9.1.1. COLIFORMES.......................................................................................................... 30
9.1.2. COLIFECALES ........................................................................................................ 30
9.1.3. ECHERICHIA COLI ................................................................................................ 30
X. BIBLIOGRAFIA ....................................................................................................................... 30










3


NUMERACIN DE BACTERIAS COLIFORMES POR EL MTODO
DE RECUENTO EN PLACAS
I. INTRODUCCIN
Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en muestras
lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el recuento directo por
microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados en diluciones en serie,
haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos, como el
recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimacin por el mtodo
del Nmero Ms Probable (NMP).
El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue
siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el
nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado
que tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y
anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es
aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para
bacterias aerobias como anaerobias.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por
Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran
casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan
mejor la presencia de contaminacin fecal.
El grupo coliforme es constante, abundante y casi exclusivo de la materia fecal, sin embargo,
las caractersticas de sobrevivencia y la capacidad para multiplicarse fuera del intestino tambin
se observan en aguas potables, por lo que el grupo coliforme se utiliza como indicador de
contaminacin fecal en agua; conforme mayor sea el nmero de coliformes en agua, mayor ser
la probabilidad de estar frente a una contaminacin reciente.
Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no slo sobreviven, sino que se multiplican, por
lo que en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado distinto al que recibe en el
agua. En productos alimenticios que han recibido un tratamiento trmico (pasteurizacin,
horneado, coccin, etc.), se utilizan como indicadores de malas prcticas sanitarias.
Los microorganismos coliformes constituyen un grupo heterogneo con hbitat
primordialmente intestinal para la mayora de las especies que involucra.

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II. OBJETIVO
2.1. OBJETIVO GENERAL
Conocer las tcnicas e interpretar los resultados sobre la presencia de microorganismos
de los alimentos.
2.2. OBJETIVOS ESPECFICO
Conocer el proceso de evaluacin microbiolgica de los alimentos.
Conocer las operaciones a seguir en la ejecucin de las pruebas microbiolgicas
utilizadas en el anlisis microbiolgico de los alimentos.
Realizar el recuento de colonias presentes en las diferentes muestras.
III. MARCO TEORICO
3.1. DE LOS EQUIPOS Y MATERIALES
3.1.1. MECHERO BUNSEN O DE ALCOHOL
Un mechero o quemador Bunsen es un instrumento utilizado en laboratorios
cientficos para calentar o esterilizar muestras o reactivos qumicos.

Fig. 1: Mechero de alcohol
3.1.2. ASA DE SIEMBRA O AGUJA ENMANGADA
El asa bacteriolgica o asa de platino es un instrumento de laboratorio tipo pinza
que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un
filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino que termina o en un arito
de 5 mm o en punta.

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Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen que
contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo tambin
llamada solucin madre al medio de cultivo, sirve para la realizacin de frotis.

Fig. 2: Asa de Siembra
3.1.3. PORTAOBJETOS
Un portaobjetos es una fina placa de cristal sobre el cual se disponen objetos para
su examen microscpico. Sus dimensiones tpicas son de 75 mm x 25 mm. El
objeto a observar suele disponerse sobre este artefacto para despus situarse en el
microscopio y ser observado. En ocasiones puede cubrirse la muestra con un
cubreobjetos, una hoja de cristal.

Fig. 3: Portaobjetos
3.1.4. GOTEROS
Un cuentagotas o gotero es un tubo hueco terminado en su parte inferior en forma
cnica y cerrada por la parte superior por una perilla o dedal de goma.
Se utiliza para trasvasar pequeas cantidades de lquido vertindolo gota a gota.

6

En los laboratorios en los que se utilizan productos qumicos son muy utilizados
para aadir reactivos, lquidos indicadores o pequeas cantidades de producto.


Fig. 4: Goteros
3.1.5. PLACAS PETRI
Las placas Petri pueden ser de vidrio o de plstico y a su vez puede ser descartables
o reutilizables. Se disearon para contener medios de cultivo slidos y permitir el
intercambio gaseoso con el ambiente exterior, pues no cierran hermticamente
debido a la presencia de irreguladores en el borde del plato (en el caso de las palcas
de vidrio) o de la tapa (en el caso de las placas de plstico).

Fig. 5: Placas Petri
3.1.6. TUBOS DE ENSAYO
El tubo de ensayo es parte del material de vidrio de un laboratorio de qumica.
Consiste en un pequeo tubo cilndrico de vidrio con un extremo abierto (que puede

7

poseer una tapa) y el otro cerrado y redondeado, que se utiliza en los laboratorios
para contener pequeas muestras lquidas o slidas.

Fig. 6: Tubos de ensayo
3.1.7. AGUA DESTILADA
El agua destilada es aquella sustancia cuya composicin se basa en la unidad de
molculas de H2O. Es aquella a la que se le han eliminado los iones e impurezas
mediante destilacin. La destilacin es un mtodo en desuso para la produccin de
agua pura a nivel industrial. Esta consiste en separar los componentes lquidos de
una mezcla.

Fig. 7: Agua destilada
3.1.8. ACEITE DE INMERSIN
El aceite de inmersin para microscopia tiene aproximadamente el mismo ndice de
refraccin que el vidrio. Mediante el aceite del mismo ndice de refraccin que el

8

vidrio. Mediante el aceite de inmersiones elimina casi completamente la desviacin
de los rayos de luz y se aumenta considerablemente la eficacia de los objetivos de
los microscopios.

Fig. 8: Aceite de inmersin
3.1.9. SOLUCIN DE CRISTAL VIOLETA
El violeta de metilo, comnmente denominado cristal violeta o violeta de genciana,
es el nombre dado a un grupo de compuestos qumicos empleados como
indicadores de pH y colorantes.

Fig. 9: Cristal violeta
3.1.10. SOLUCIN DE SAFRANINA
La safranina, es un colorante biolgico, de contraste que se utiliza en la Tincin de
Gram para proporcionar un color violeta ms intenso a las bacterias Gram+ y tie
de rosa a las bacterias G- ; en histologa y en citologa. La safranina se usa como

9

lquido de contraste en algunos protocolos de tincin, coloreando el ncleo celular
de rojo. Tambin para detectar cartlago, mucina y grnulos de mastocitos.

Fig. 10: Solucin de Safranina
3.1.11. LUGOL
En microbiologa se emplea en la tincin de Gram para retener el colorante cristal
violeta. El I2 entra en las clulas y forma con el colorante cristal violeta un
complejo insoluble en agua.

Fig. 11: Solucin de Lugol
3.1.12. ALCOHOL ACETONA

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La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya
que en la misma es soluble el complejo I
2
(cristal violeta). Los organismos Gram
positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen.

Fig. 12: Acetona
3.1.13. AGAR VIOLETA ROJO BILIS
Agar Violeta Rojo Bilis es un medio selectivo utilizado para el aislamiento,
deteccin y enumeracin de bacterias coli-aerogenes en agua, leche, otros productos
alimenticios lcteos y tambin a partir de muestras clnicas

a) I nstrucciones
Suspender 41,53 gramos en 1000 ml de agua destilada. El calor con agitacin a
ebullicin para disolver el medio completamente. No Autoclave. Enfriar a 45 C y
se vierte en placas de Petri estriles que contienen el inculo. Si se desea, el medio
se puede esterilizar en autoclave a presin de 15 libras a 15 libras de presin (121
C) durante 15 minutos.

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b) Respuesta del cultivo
Caractersticas observadas despus de una incubacin a 35-37 C durante 18-24
horas.

3.1.14. MICROSCOPIOS
El microscopio es un aparato de aumento para observar cuerpos transparentes o
translucidos, de extraordinaria utilidad en la microbiologa. El ms comnmente
utilizado es el microscopio ptico que viene de micro = pequeo; scopio = mirar;
ptico porque se usa la luz visible y compuesto porque est formado por varias
lentes, a diferencia de una lupa que sera microscopio sencillo.
Se distingue dos partes mecnica y ptica:
La parte mecnica sirve de soporte de la parte ptica y consta de las siguientes
partes:
Tubo: Cilindro hueco en cuyos extremos se encuentran situados el objetivo
y el ocular.
Brazo: Columna lateral en la que se apoyan los distintos elementos.
Platina: Placa sobre la que se coloca la preparacin. Estos microscopios
poseen una platina cuadrad que apoya una platina circular, giratoria, con
dos pinzas para ejecutar la preparacin.
Mandos de enfoque o tornillos de enfoque: Son dos tornillos con los que se
mueve la platina, alejndola o acercndola al objeto, el tornillo
micromtrico provoca un movimiento amplio y sirve para un enfoque
aproximado. El tornillo micromtrico provoca un movimiento muy corto y
sirve para un enfoque fino. En algunos microscopios es que se mueve es el
tubo, no la platina.
Pie: Base pesado para mantener la estabilidad del microscopio.
La parte ptica, la esencial consta de:

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Ocular: Juego de lentes de la parte superior del tubo. Lleva marcado el
nmero de aumentos que posee (5x, 10x, 12.5x).
Objetivos: Lentes de la parte inferior del tubo. Suele haber ms de uno (3,
4, 5). Estn sujetos a una pieza llamada revolver, porque gira y permite
cambiar de objetivo fcilmente. Cada uno lleva dos cifras, una que indica el
dimetro y otra, ms importante, que indica el aumento que produce (es la
que est nmeros de mayor tamao: 10, 25, 50, 100).
Condensador: Sistema de lentes situados baja la platina que concentra la luz
en el objetivo observado.
Diafragma: situado bajo el condensador, regula la cantidad de luz en el
objeto observado.
Sistema de iluminacin: En nuestro caso es elctrico, con una lmpara, un
interruptor y un reosato que regula la intensidad.

Fig. 13: Partes del Microscopio
3.1.15. EL AUTOCLAVE
Elemento indispensable en el laboratorio de Microbiologa. Produce una
esterilizacin por calor hmedo. Se necesita menos tiempo y temperatura qu en una
estufa. El autoclave es un sistema similar a una olla presin domstica y consta de
una cuba o recipiente de tamao variable con una resistencia en el fondo, de un
sistema de cierre hermtico, de diversas vlvulas y de manmetro y termmetro
para control de la presin y temperatura en el interior de la cuba. Usos:
esterilizacin de material y soluciones siempre que se trate de sustancias

13

termorresistentes (material de vidrio y metlico, soluciones y reactivos, medios de
cultivo, etc.).

Fig. 14: Autoclave del Laboratorio
3.1.16. LA ESTUFA
Recipiente termostatizado, con cierre hermtico y aislamiento del exterior. La
temperatura del aire del interior puede ajustarse y mantenerse. Los hay de diversos
tipos segn el rango de temperaturas que pueden alcanzar. Usos: incubacin de
cultivos microbiolgicos, secado de medios empleados en electroforesis, secado de
material de vidrio, etc.


Fig. 15: Estufa

14

3.1.17. AGITADOR CON CALENTADOR MAGNTICO
Los agitadores magnticos con calefaccin constituyen soluciones de laboratorio
ampliamente usadas en cada laboratorio biolgico y qumico para usos
diversificados, apropiadas para varias capacidades de volmenes de agitacin y
equipadas de los estndares de seguridad ms elevados.

Fig. 16: Cocinilla con Agitador magntico
3.2. DE LA MUESTRA
3.2.1. INOCUIDAD DE LOS ALIMENTOS
Es la condicin de los alimentos que garantiza que no causaran dao al consumidor
cuando se preparen y /o consuman de acuerdo con el uso al que se destinan.
La inocuidad es uno de los cuatro grupos bsicos de caractersticas que junto con
las nutricionales, las organolpticas, y las comerciales componen la calidad de los
alimentos.
El enfoque de la FAO abarca la cadena alimentaria y se basa en la respuesta
estratgica a un complejo conjunto de problemas y necesidades de todos los
sectores relacionados con los alimentos.
Esta estrategia incluye: la adopcin universal de un enfoque basado en los riesgos;
el nfasis en la prevencin de la contaminacin de los alimentos en su origen, y la
adopcin de un enfoque integral relativo a la inocuidad de los alimentos que
abarque toda la cadena alimentaria, desde la granja y el mar hasta la mesa.
Los alimentos son la fuente principal de exposicin a agentes patgenos, tanto
qumicos como biolgicos (virus, parsitos y bacterias), a los cuales nadie es
inmune, ni en pases en desarrollo ni desarrollados. Cuando los alimentos se

15

contaminan en niveles inadmisibles de agentes patgenos y contaminantes
qumicos, o con otras caractersticas peligrosas, conllevan riesgos sustanciales para
la salud de los consumidores, y representan grandes cargas econmicas para las
diversas comunidades y naciones
3.2.2. QUESO
Producto elaborado con la cuajada de leche estandarizada y pasteurizada de vaca o de
otras especies animales, con o sin adicin de crema, obtenida por la coagulacin de la
casena con cuajo, cultivos lcticos o enzimticos, cidos orgnicos comestibles con o
sin tratamiento trmico, drenada, prensada o no, con o sin adicin de fermentos de
maduracin, mohos especiales, sales e ingredientes comestibles opcionales.Por su
proceso se da lugar a diferentes variedades de queso:fresco, maduro y procesado.
Tabla 1. Caractersticas microbiolgicas

3.2.3. MORFOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS
Bsicamente, se diferencian segn sus formas en cocos (esfricas u ovaladas),
bacilos (cilndrica o de bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral); dentro de
estas ltimas se encuentran:
Treponema, Borrelia y Leptospira (ver ilustracin 1). Los espirilos varan en el
nmero de vueltas, desde pocas (Borrelia) a muchas (Treponema). Las bacterias
pueden mantenerse unidas unas con otras despus de la divisin celular, pero
conservando siempre la independencia celular. Si el plano de divisin es nico,
podemos encontrar diplococos o cocos en cadena (microorganismos del gnero
Streptococcus). Si los planos de divisin son muchos, los cocos pueden agruparse

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en ttradas o en racimos (Staphylococcus). Los bacilos pueden ser muy cortos
(cocobacilos) o muy largos. Sus extremos pueden ser redondeados o rectos; pueden
estar aislados, en cadenas, en filamentos o formando letras chinas
(Corynebacterium). Los bacilos curvos pueden tener forma de coma (Vibrio
cholerae).


Fig. 17: 1. Cocos; 2.diplococo; 3. Cocos en cadenas;4. Cocos en racimos; 5. Cocos entetradas; 6.
Cocobacilos; 7. Bacilos; 8. Bacilos bordes redondeados; 9. Bacilos bordes rectos; 10. Bacilos
fusiformes; 11, 12. Bacilos curvos; 13 al 15. Espiroquetas.
IV. MATERIALES Y METODOS
4.1. MATERIALES
Mechero Bunsen o de Alcohol
Asa de Siembra o aguja enmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestra de jugo
Matraz Erlenmeyer
Goteros
Algodn
Placas Petri

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Pipetas de 1 y 10 mL
Tubos de ensayos
Gasas y algodn
Papel aluminio y craft
4.2. EQUIPOS
Estufa
Autoclave
Calentador con agitador magntico
Balanza analtica
Microscopio
4.3. REACTIVOS
Agar violeta rojo bilis
Agua destilada
Aceite de inmersin
Solucin de cristal Violeta
Solucin de safranina
Etanol 95%
Lugol
4.4. METODOLOGIA
4.4.1. CONTEO DE MICROORGANISMOS POR DILUCION SUCESIVA
a) Para muestras liquidas
Se requiere una dilucin sucesiva.
Realizar un buen agitado.
Las muestras pueden ser gaseosas, licores, jugos de fruta, leche y todos los
lquidos que quiera analizar.
b) Para muestras solidas
Realizar una dilucin fisiolgica liquida a razn de 0.g muestra por 1 mL
de dilucin, homogeniza por tres minutos.

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Medir la cantidad necesaria para tener la solucin madre.
4.4.2. MTODO PARA EL RECUENTRO
Preparar la muestar por el procedimiento recomendado en la practica sobre
preapracion y dilucion de la muestra.
Esterilizar el medio de cultivo y los materiales a utilizar.
Transferir 1 mL de cada dilucion de la muestra a la placa petri esteril.
Adicionar a cada placa petri 10 a 15 mL de Agar violeta rojo bilis, atemperado a
44 o 46 C.
Mezclar cuidadosamente el contenido de cada placa con movimiento de vaiven
y rotacion, dejar solidificar la mezcla ( 5 min ), luego distribuir un adicional de
10 mL de medio de cultivo como doble capa , cubriendocompletamente la
superficie del medio solidificado el que inhbira la formacion de colonias en la
superficie.
Invertir e incubar las placas durante 24 horas a 35-37C. Unicamente las
colonias roja oscura que midan 0.5mm a mas de diametro en placas que
contengan entre 20 a 200 colonias, se considera como bacterias coliformes si es
posible seleccionar para el recuento solamente auqellas placas con no mas de
150 de estas colonias. Multiplicar el numero de colonias por la dilucion
correspondiente para obtener el numero de bacterias coliformes por gramo o mL
de muestra.
Realizar la coloracion Gram de las diferentes clases de colonias identificando la
morfologia .
Siga el mismo procedimiento aire para diagnosticar las bacterias de la
respiracion del personal con la diferencia de realizar un sople sobre la placa con
agar.
V. PROCEDIMIENTOS
5.1. PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO
La elaboracin del medio del cultivo se realiz con el agar Agar violeta rojo bilis se
pes 4.153g y se disolvi en matraz con 100mL de agua destilada.
Esta formulacin sale del siguiente clculo:


19


4.153g se usara para 100 mL

Despus de haber disuelto el agar con el agua lo llevamos al calentador con agitador
magntico donde se termin de disolver por completo hasta que llegue al punto de
ebullicin.

Fig. 18: Pesado del Agar Plate Count

Fig. 19: Disolucin del Agar en Agua destilada

20


Fig. 20: Solucin de Agar con agua destilada llevada al calentador
5.2. ESTERILIZACION DE LOS MATERIALES Y DEL MEDIO DEL
CULTIVO
Las placas Petri utilizadas en esta prctica fueron lavadas con agua destilada, cada una fue
envuelta en papel manteca y asegurada con pabilo para as ser llevadas a la autoclave para
ser esterilizadas y as evitar la contaminacin de nuestro medio de cultivo.
Las placas Petri y otros materiales se llevaron al autoclave para proceder con la
esterilizacin; pero antes se introdujo agua destilada hasta cubrir la resistencia del autoclave
para evitar el calentamiento de este; se introdujeron las placas y solucin de Agar en la
canastilla y se cerr el autoclave hasta que este alcance los 0.0025MPa despus de ello dejar
enfriar los materiales y la solucin hasta que puedan ser manipulados.

Fig. 21: Lavado de las placas Petri con agua destilada

21


Fig. 22: Placas Petri envueltas con papel manteca y aseguradas con pabilo


Fig. 23: Autoclave alcanzando los 0.0025 MPa
5.3. PREPARAR LAS DILUCIONES SUCESIVAS
Las diluciones se isieron de la muestar de nectar de fruta se diluyo 0.5 mL de este en 4.5
mL de agua destilada y asi sucesivamente hasta la quinta dilucion.

Fig. 24: Diluciones de la muestra de nctar de fruta.

22

5.4. INOCULACIN DEL MEDIO DE CULTIVO
Una vez enfriados los materiales los desenvolvemos del papel manteca y cuidadosamente
vertimos 15mL del medio de cultivo liquido por cada placa Petri, esperamos a que estas se
gelifiquen para as poder hacer la inoculacin de las diferentes diluciones de nuestra
muestra en cada placa Petri correspondiente, luego aadiremos aproximadamente 5 mL del
medio de cultivo para forma una capa selladora.

Fig. 25: Inoculacin de las diluciones
5.5. INCUBACION DE LOS MICROORGANISMOS
Las 4 placas Petri donde se inocularon las diluciones de nuestra muestra fueron llevadas a la
estufa para ser incubadas a una temperatura de 25 30C por 1-2 das.
5.6. CONTEO DE MICROORGANISMOS
El conteo de microorganismos se hizo de manera manual ya que la mayor cantidad de
colonias que se formaron en las placas fue de dos de esta manera no cumplimos con los
requerimientos para hacer un recuento en placa sobre la bacterias coliformes.




23



Fig. 26: Muestra madre


Fig. 27: Muestra 10
-1


24



Fig. 28: Muestra 10
-2


Fig. 29: Muestra 10
-3


25


5.7. IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS
Para la identificacin de microorganismos seguimos los siguientes pasos:
Colocar una gota de agua destilada o solucin salina sobre el portaobjetos y luego
esterilizar el asa bacteriolgica.

Fig. 30: Esterilizacin de la asa de siembra
Tomar una pequea muestra de cepa y diluirla en el portaobjetos. Posteriormente
esterilizar el asa.

Fig. 31: Dilucin de la muestra
Fijar la muestra al calor flamendola en el mechero, cuidando no quemar la
muestra. Colocar el portaobjetos sobre un soporte.

26


Fig. 32: Fijacin de la muestra
Cubrir la muestra con cristal violeta. Esperar que transcurra un minuto, escurrir y
enjuagar.

Fig. 33: Cristal violeta sobre la muestra
Cubrir la muestra con solucin de lugol y esperar que transcurra un minuto.
Escurrir enjuagar.

Fig. 34: Fijando el Lugol en la Muestra

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Cubrir la muestra con alcohol cetona. Esperar que transcurra cinco segundos.
Escurrir y enjuagar.

Fig. 35: Limpiando con acetona la muestra
Cubrir la muestra con safranina y esperar que transcurra un minuto escurrir y
enjuagar.

Fig. 36: Aplicando la safranina a la muestra
Agregar una gota de aceite de inmersin y observar en el microscopio.

Fig. 37: Colocando aceite de inmersin para poder ver mejor la muestra en el microscopio

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VI. RESULTADOS
6.1. CONTEO DE MICROORGANISMOS
Despus de haber sacado las placas Petri de la incubacin se obtuvieron los siguientes
datos:
Tabla 2: Recuento de microorganismo
Muestras diluidas Lectura de
microorganismos
Cantidad de
UFC/cm
2

10
-1

3

-

10
-2
2

-

10
-3
0

-
10
-4
1

-


6.2. IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
En las placas Petri se presenciaron enterobacter aerogenes por la semejanza que se presenta
con la descripcin de posibles microorganismos que se podra presentar con el uso del agar
Agar violeta rojo bilis.

Fig. 38: Muestra Diluida a la 10
-3
Enterobacter
aeraerogenes

29

Los microorganismos observados a simple vista en las placas Petri parecan ser Bacilos y
Cocos, para la mejor determinacin e identificacin se escogi la colonia que
aparentemente perteneca a los cocos para llevarlas al microscopio.


Fig. 39: Muestra llevada al microscopio
En el microscopio se pudo precisar que los microorganismos que se cultivaron en las placas
pertenecas a los Gram negativos , por lo que afirma la presencia de Enterobacter aeraerogenes.
VII. DISCUCIONES
En las muestra que se analiz se encontr Enterobacter aeraerogenes, pero en una presencia
mnima de dos colonias como mximo en las placas, de esta manera podramos decir que la
presencia de esas colonias se debio a la manipulacin de los materiales y no a la presencia
de microorganismos en muestra analizada (queso).
VIII. CONCLUSIONES
Se entiendo cual es el procedimiento por el que deben pasar algunos alimentos para ser
analizados microbiolgicamente para as mantener su inocuidad y no perjudicar a la
salud de las personas.
Todas las operaciones que se asieron necesitan ser realizadas con sumo cuidado para
evitar la contaminacin de nuestras muestras y de nuestros materiales.

30

La cantidad de colonias que pudimos encontrar en las muestras nopudieron ser contadas
por la minima presencia de colonias la cual solo se la identificacin de los
microorganismos econtrados.
IX. CUESTIONARIO
9.1. INDICAR LOS MICROORGANISMOS QUE PERTENECEN A LOS
GRUPOS DE :
9.1.1. COLIFORMES
9.1.2. COLIFECALES
9.1.3. ECHERICHIA COLI
X. BIBLIOGRAFIA
Bermejo, M. J. (2006). Auxiliares de Laboratorio Grupo Iv Temario Y Test de la Xunta de
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