E.A. P. INGENIERIA AGROINDUSTRIAL ASIGNATURA: BIOQUIMICA SEMESTRE 2014-I Mg. MARIA ROSARIO CALIXTO COTOS
PRACTICA 6
ESTUDIO DEL FRACCIONAMIENTO DE LIPIDOS EN ALIMENTOS
I. OBJETIVO Fraccionar e identificar los lpidos cerebrales
ii. INTRODUCCIN TEORICA El cerebro presenta en su composicin, casi todos los lipidos conocidos El colesterol presente en nuestro organismo proviene de dos fuentes, el exgeno de la dieta y el endgeno que es sintetizado a partir de AcetilCoA, siendo el rgano ms importante de procesos de sntesis el hgado, aunque otros tejido pueden sintetizarlo (ID, glndulas suprarrenales, piel, aorta, etc). La velocidad de sntesis est influenciada por la tasa de colesterol corporal.
Fundamento de la reaccin de Salkowski El mtodo se basa en la deshidratacin de la molcula de colesterol por la accin del cido sulfrico concentrado con la formacin de colesterileno de color rojo.
Fosfatidilcolina. Es un fosfolpido que, junto con las sales biliares, ayuda a la emulsificacion de las grasas.. Es el componente ms abundante de la fraccin fosfatidica que puede extraerse tanto de yema de huevo), como de gramos de soja mediante extraccin mecnica, o qumica usando hexano. Es uno de los principales constituyentes de las bicapas lipidicas de las membranas celulares. El cerebro y el sistema nerviso presenta una serie de fosfolpidos. Estos fosfolpidos se caracterizan por su solubilidad en solventes orgnicos como el ter, alcohol, etc y por su insolubilidad en la acetona. FOSFATIDILCOLINA Elaborado: Rosario Calixto Cotos
III. PARTE EXPERIMENTAL
.1. MATERIALES Y REACTIVOS
HNO3 conc, H2SO4 50%, H2SO4 conc., NaOH 40 %, Molibdato de amonio10 % , Acetona 40%, lugol, cocina elctrica, embudos, centrifuga, tubos de centrifuga, probetas, tubos de ensayo, gradilla, vasos de 50 mL, pipetas, bombillas, papel parafina Balanza analtica, bao mara.
2. PROCEDIMIENTO Fundamento de la extraccin de colesterol y lecitina del cerebro: La extraccin est basada en la diferencia de solubilidades de dichos lpidos en solventes orgnicos tales como acetona, ter, cloroformo y alcohol, y otros. El colesterol es soluble en acetona y los fosfolpidos son insolubles en este disolvente
1. Pesar 5 g de tejido cerebral y luego triturar en un mortero despus aadir 5 ml de acetona (inflamable) 2. Todo el contenido colocar en un tubo (I) y centrifugar, durante 10 minutos. Separarar el sobrenadante y colocar en otro tubo de prueba (II), dejar evaporar con ayuda de la estufa a baja temperatura. 3. Prueba cualitativa para determinar la presencia de colesterol: Reaccin de Salkowsky: A. En el tubo (II) con la muestra desecada y fra adicionar 1 ml de cloroformo B. Luego 5 gotas de H2SO4 conc sobre las paredes del tubo. Observar la presencia colesterol al formarse un anillo de color rojo intenso
4. Prueba para reconocer el fosfolpido: Fosfatidilcolina: Lecitina A. El residuo que quedo en el tubo i aadir 2 ml de cloroformo mezclar, transferir en un vaso y aadir 5 ml de NaOH 5 %, hervir por 2 minutos en B.M. B. Enfriar y luego neutralizar con aprox 5 gotas H2SO4 50% medir el pH, con la tiras de pH. C. Filtrar, separar en dos partes iguale D. Para FOSFORO: En un tubo del filtrado aadir 1 ml de HNO3 y 2 gotas de NH4OH E. Luego en calor aadir 6 gotas de Molibdato de amonio 5% F. Caliente en B.M observe el precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio G. Para COLINA. El filtrado en el tubo agregar 1 ml de NaOH 40% mas 3 gotas de lugol, calentar en B:M hirviente ligeramente por 30 seg, y perciba los vapores de amina, olor caracterstico a pescado y un precipitado amarillo, que nos demuestra la presencia de colina.(Iodoformo)
IV. RESULTADOS Colesterol Solvente de extraccin: . Ecuacin qumica de reconocimiento de colesterol
Fosfolipidos Solvente de extraccin.- Realice la ecuacin qumica de reconocimiento de colina
Elaborado: Rosario Calixto Cotos
Realice la ecuacin qumica de reconocimiento de fsforo
Cul es la estructura de la fosfatidilcolina y la fosfatidiletanolamina
V. CUESTIONARIO
1. Durante la extraccin de los lpidos, Qu ocurri con las protenas del tejido? Explique. 2. Haga una lista de disolventes orgnicos en orden decreciente de polaridad. 3. De los siguientes lpidos: colesterol, fosfolpidos y glucolpidos Cul es la de mayor polaridad y cual la de menor polaridad? 4. Realice un diagrama de la extraccin y fraccionamiento de lpidos en el cerebro.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Robinson David. Bioqumica y valor nutritivo de los alimentos. 2da edicin. Editorial Acribia 1991. Zaragoza. 2. Cheftel Claude y Cheftel Henri. Editorial. Acribia, Espaa. Introduccin a la bioqumica y tecnologa de los alimentos, Vol 1, p, 215, 2000 3. Campbell Bioqumica 6ta edicin, Editorial Cengare Learning, 2009, Mxico.