Hemograma

Profa Alessandra Barone

Prof. Archangelo Fernandes
www.profbio.com.br

Hemograma

Avalia os elementos celulares do sangue
Quantitativamente
Qualitativamente

Triagem e controle de doenas
til na avaliao das anemias alm de evidenciar
indicadores que podem ser correlacionados com
infeces virticas e bacterianas.

Fatores Pr-analticos
Local da puno
Padronizao

Fatores Pr-analticos
Anticoagulantes

Em geral, interferem no mecanismo de coagulao in
vitro, inibindo a formao da protrombina ou da
trombina.

Os mais usados so:
Citrato provas de coagulao
Heparina (sdio ou litio)
EDTA (cido etileno-diamino-tetractico)
Fluoreto

Fatores Pr-analticos

EDTA K
2
Utilizado na forma seca e reveste internamente a parede dos
tubos
Homogeneizao por inverso 8 a 10 vezes
EDTA liga-se aos ons clcio, bloqueando assim a cascata de
coagulao
Obtm-se assim o sangue total para hematologia
Testes:
Eritrograma
Leucograma
Plaquetas

Oferece vantagem de no deformar
os glbulos brancos e glbulos
vermelhos, alm de proporcionar
resultado satisfatrio no Ht
EDTA
EDTA
Mantm as caractersticas histo-morfolgicas
das clulas
No altera o percentual de Ht
No altera concentrao de Hb
Possibilita a contagem das clulas em at 24
horas aps coleta, se refrigerada de 2C a 8C
Anticoagulante de escolha para contagem de
plaquetas

Fatores pr-analticos
Garroteamento: aproximadamente 1 minuto

Hemoconcentrao
Variaes do hematcrito (2 a 4%)
Pseudoneutrofilia
Homogenizao da amostra
Condies do paciente: jejum, estresse
Posio do paciente



Fatores pr-analticos
Armazenamento

Glbulos brancos

At 3 hrs: alteraes mnimas
12 a 18 hrs: alteraes aparentes

Fatores pr-analticos

Armazenamento


Glbulos vermelhos

At 6 hrs: alteraes mnimas
Aps 8 hrs: hemcias crenadas e esfercitos
Fatores fisiolgicos

Gestao
Altitude
Exerccios
Fumantes

Hemograma

Eritrograma
Leucograma
Extenso sangunea
Plaquetograma
Eritrograma
a parte do hemograma que avalia a massa
eritride circulante

Ht
Hb
GV
ndices hematimtricos

Hematcrito
a razo entre o volume da massa de eritrcitos e o
volume de sangue total.
O resultado em % exprime a concentrao de eritrcitos
obtidos por centrifugao do sangue no coagulado.
Valores normais:
: 40 a 50
:35 a 45
Crianas at um ano: 34 a 40 %
Recm-nascidos : 50 a 60 %

Microhematcrito

Realizado em tubo capilar.
Utilizao de microcentrfuga onde o tubo
colocado 10.000rpm por 5 minutos
Nesta tcnica todo material ser descartado
aps uso.
Microcentrfuga
Microhematcrito
Valores Falsamente Diminudos

Diluio com anticoagulante
Longo perodo de centrifugao
Microcentrfuga descalibrada (> fora)
Tubos mais finos
Armazenamento da amostra
Microcitose
Valores Falsamente Aumentados

Garroteamento excessivo
Curto perodo de centrifugao
< fora de centrifugao

Dosagem de hemoglobina
Principal componente eritrocitrio.

Dosagem realizada por mtodos colorimtricos
(hemoglobinometria) aps converso da
hemoglobina em cianometamoglobina expressa em
g/dl.

Dosagem de hemoglobina
Drabkin-> ferricianeto de potssio converte o ferro
ferroso da hemoglobina ferro frrico formando
metahemoglobina.

A metahemoglobina combina com o cianeto de
potssio para formar um composto estvel ->
cianometahemoglobina.

Dosagem de hemoglobina
Realizao do exame:
0,02 mL de sangue
5 mL de Drabkin
Colocar a amostra de sangue em tubo de ensaio e aguardar 10
minutos
Analisar a DO em espectrofotometria em comprimento de onda
de 540nm
Avaliar a DO do padro para clculo do fator
Portanto: F = [ P ] / [ DO ] P= 5,10 ou 15 mg/dL
Para clculo da amostra: [ Hb amostra] = do amostra x F





Tubo A

Tubo B

Amostra
0,02 mL
ou
20 L

______

Padro

_______
0,202 mL
ou
20 L

Reagente Drabkin
5,0 mL 5,0 mL
Dosagem de hemoglobina
Dosagem de hemoglobina
Valores de referncia:

Valores normais:
- 14 a 18
: 12 a 16 g/dL
Crianas de at um ano: 11 a 12 g/dl
Recm- Nascido: de 14 a 19 g/dl

Dosagem de hemoglobina
A dosagem de Hb est diretamente relacionada
com o contedo e colorao do eritrcito, de
grande valia no diagnstico das anemias.
Causas de erro:
pipetagem
lipemia
alta contagem de leuccitos
sujeira na parede de leitura
presena de carboxihemoglobinas (fumantes)


Contagem de glbulos vermelhos

Consiste na determinao do nmero de eritrcitos por mm
3

de sangue.
O sangue diludo na poro 1:200 com o lquido de Hayem
Lquido de Hayem:
Bicloreto de mercrio
Cloreto de sdio
Sulfato de sdio
gua destilada
Contagem de glbulos vermelhos
Reativo de Hayem
GV
Leuc..


Leuc.
Leuc.
Leuc.
Contagem de glbulos vermelhos
Realizao do exame:
Pipetar com a pipeta volumtrica 4,0 mL de sangue total
Pipetar com micropipeta 0,02 mL (20 L) da amostra
Aps fixao da lamnula sobre a cmera de Neubauer
preencher com o sangue diludo, proceder a contagem seguido
do clculo.
Contar os eritrcitos presentes nos cinco campos 4 laterais e 1
central) do quadrado central.
Proceder a soma e multiplicar por 10.000

He He
He He
He
Cmara de Neubauer
rea = 0,04 mm2
Altura= 0,1 mm2
V= 0,004 mm3

V x 5 = 0,02 mm3


Hemcias / mm
3
= N. cls x 200
----------------
volume

Ou
N. Cls x 10.000
Glbulos vermelhos
Valores de referncia:

- 4,5 a 5,5 milhes/mm
3
- 4,0 a 5,0 milhes/mm
3
Recm nascidos 5,5 a 7,0 milhes / mm
3
Interpretao

Valores aumentados em policitemias
Valores diminudos processos anmicos de
diversas etiologias
Contagem em cmara de Neubauer oferece
grande variabilidade de erro e dispndio de
tempo automao
ndices hematimtricos

VCM- volume corpuscular mdio
VCM= Ht x 10 / GV
Correlaciona-se inversamente com o nmero de GV.
Causas comuns de erro:
Rouleaux
Conservao prolongada in vitro VCM
Excesso EDTA- desidrata a clula-VCM
Valores normais: 82 a 92 fL


ndices hematimtricos
Atravs do VCM classifica-se as anemias
como:

Macrocticas
Microcticas
Normocticas
Alterao no VCM
Microcitose
Hemcias abaixo de 80 fL (adulto).
Est associada deficincia de ferro e talassemias.

Macrocitose
Hemcias acima de 100 fL (adulto).
Est associada deficincia de vitamina B12, quimioterapia,
doena heptica, hipotireoidismo e mieloma

ndices hematimtricos
HCM hemoglobina corpuscular mdia
HCM= Hb x 10/GV (pg)
Valores normais 27 a 32 pg

CHCM - concentrao de hemoglobina
corpuscular mdia
CHCM= Hb x 100
Ht
Valores normais 32 a36%

RDW
RDW (Red blood cell Distribution Width)
expresso numrica da anisocitose
Variao do volume das hemcias contadores
automatizados
Valores normais: 11-14,5

Anisocitose - Variao no tamanho das hemcias

Histograma

a curva de frequncia da distribuio e tamanho dos
eritrcitos, com o volume na abscissa e a frequncia na
ordenada

Quando a curva situa-se esquerda, denota-se
microcitose e direita, macrocitose

Histograma
normal
Histograma
Anemia microctica
Histograma
Anemia macroctica
Leucograma

Contagem de glbulos brancos (WBC)
Contagem diferencial
Extenso sangunea

Contagem de glbulos brancos
Realizada com pipeta de Thoma ou pipeta
volumtrica
Pipeta volumtrica
Pipetar em tubo de ensaio 20 L de sangue total
para 400 L de soluo de Turk, ou seja, diluir o
sangue de 1:20
O lquido de turk lisa as hemcias mantendo a
morfologia dos leuccitos
Homogeneizar e transferir aproximadamente 15
L para a cmara de neubauer

Contagem de glbulos brancos
Avaliao quantitativa:
Contagem cmara de Neubauer




GB
GB
GB
GB
rea = 1 mm
2
Altura = 0,1 mm
2
Volume = 0,3 mm
3

Leuccitos / mm3 sangue = N. de cls x 20
------------------
Volume

Ou
N. Clulas x 50
Contagem de glbulos brancos
Clculo:
Contar os quatro quadrados laterais externos e
multiplicar por 50

Valores de referncia:
e - 5,0 a 10.000/mm
3
Crianas at 7 anos 5,0 a 15.000/mm
3
Recm nascidos 10,0 a 25.000/mm
3

Extenso sangunea
Qual a necessidade da extenso sangunea?

Verificao da morfologia celular
Verificao dos tipos celulares
Contagem e diferenciao de glbulos brancos,
plaquetas e reticulcitos.
Colorao de glbulos vermelhos
Presena de Incluses
Maturidade celular


Extenso sangunea
Preparar duas lminas limpas
Em uma das lminas, colocar uma gota de sangue total
Com a outra lmina, realizar deslizamento para obteno de
esfregao delgado
Extenso sangunea
Fixao e colorao da lmina depois de seca:
Derivados de Romanowsky:
Giemsa (azul-eosina)
Leishman e Wright
Pantico (soluo 1 , 2 e 3)

Corante cido - eosina:
afinidade por substncias alcalinas citoplasma
Corante alcalino - azul de metileno
afinidade por substncias cidas ncleo




Extenso sangunea
Devido ao tamanho variado dos diferentes
glbulos brancos, sua distribuio no
esfregao nem sempre ser uniforme, assim:
Nas bordas e na cauda h maior quantidade de
Ne, Eo, Mo, Ba
Linfcitos restritos regio central do esfregao
Leitura feita do corpo para cauda em zig-zag.

Ler em objetiva de imerso
Extenso sangunea
Contagem diferencial de Leuccitos:
Contagem de 100 clulas

Relativo % Absoluto
Bastonete 0 a 5% 0-350
Neutrfilos 40 a 75% 2800-5250
Linfcitos 20 a 40% 1400-2800
Eosinfilo 1 a 4 % 70-280
Basfilo 0 a 1% 0-70
Moncito 2 a 8% 140-560
Extenso sangunea
Como calcular o valor absoluto?

Fcil!!!! Muito fcil!!!!

50 neutrfilos ---- 100 clulas
X neutrfilos ------ 8.000 GB (ex de gb totais)

X = 4000 neutrfilos / mm
3

Distribuio Homognea
.
Normocromia
.
VHS Velocidade de hemosedimentao

Avalia a velocidade de separao dos glbulos vermelhos e o
plasma
Utilizado para o diagnstico de processos infecciosos
Utilizao da pipeta de Westergreen ou tubo de Wintrobe
Valor de referncia:
Homens: 3 a 8 mm em 1 hora
Mulheres: 3 a 11 mm em 1 hora
VHS
Valores aumentados:
Crianas
Perodo menstrual
A partir do 4 ms de gestao
Temperaturas elevadas
Anemias
Neoplasias
Aumento do fibrinognio plasmtico
Processos infecciosos e agudos
VHS
Diminuio :
Policitemia vera
Caqueixa
Insuficincia cardio congestiva
< fibrinognio plasmtico
Anticoagulantes em excesso
Contagem de plaquetas - mtodo
de fnio
Contagem em lmina
Realizar esfregao e corar
Contar 5 campos microscpicos, contendo cerca de 200
hemcias cada um e fazer uma regra de trs com
exemplo:
5 campos:
1000hemcias--------- 15 plaquetas
n G.Vermelhos ------- X

VR:
140.000 400.000 mm
3






Contagem de plaquetas em cmara-
TCNICA DE BRECHER

Utilizao da pipeta de Thoma
Aspirar o sangue at a marca 0,5 e completar com o diluidor
de Brecher at a marca 101.
Agitar a pipeta e colocar a soluo na cmara de Neubauer.
Aguardar 10 minutos
Contar os 25 quadrados do retculo central e multiplicar por
2,000 (diluio 1:200)

LQUIDO DILUIDOR DE BRECHER:
- Azul de Metileno 1%........................................................ 2 gotas
- Oxalato de Amnia.......................................................... 1,0 g
- gua destilada q.s.p......................................................... 100 ml

Contagem de plaquetas
PLQ
Contagem de plaquetas

Causas de erro:

Agregao plaquetria EDTA, atraso na coleta,
conservao in vitro

Satelitismo plaquetario- mediado por um fator
plasmtico (IgG ou IgM). As plaquetas aderem in
vitro aos neutrfilos, envolvendo-os como uma
coroa)
Alteraes Quantitativas

Trombocitose o aumento na contagem de
plaquetas

Trombocitopenia - a diminuio na
contagem de plaquetas
Agregao Plaquetria e Satelitismo
Plaquetas normais
.
Macroplaquetas
.
Reticulcitos

Hemcia jovem aps a perda do ncleo

Clula rica em RNA ribossmico

Liberao precoce de reticulcitos da MO

Reticulcitos cerca de 20% maiores que as hemcias
apresentando maior quantidade de RNA na anemia
megaloblstica

Reticulcitos

Colorao :
Azul de metileno ou azul de cresil brilhante.

Valores normais :
0,5 - 2,0%
25.000 - 50.000/l
Reticulcitos
Procedimento:
Pipetar em tubo de ensaio 100 L de sangue
total para 50 L de azul cresil brilhante
Incubar a 37
o
C por 15 a 30 minutos
Realizar extenso sangunea
Contar 10 campos com 2.000 hemcias ou 5
campos com 1.000 hemcias

Contagem de reticulcitos

1000 hemcias ------ 10 reticulcitos (ex)
4.500.oooo hemcias ------- X reticulcitos

X = 45.000 4.500.000 100%
45.000 - X %
X = 1 %

Valor de referncia: 0,5 a 2.0 %
Correo de reticulcitos
Reticulocitose : resposta hipoxemia
Reticulocitose ou reticulocitopenia
Avaliao da anemia partir o nmero de reticulcitos.
Baixo nvel de reticulcitos: anemia carencial
Alto nvel de reticulcitos: anemia hemoltica.


Rt % corrigido = %R paciente x Ht paciente
Ht normal

Ht normal para homens (47%) em mulheres (42%).
ndice de reticulcitos
Maturao de reticulcitos:
Em pacientes com hematcritos entre 30 e 40%: 1,5 dia
Em pacientes com hematcritos entre 20 e 30% : 2 dias
Em pacientes com hematcrito menor que 20% : 2,5 dias

Calcular o ndice de reticulcitos

IR = contagem corrigida de reticulcito =
Tempo de maturao em dias.


IR
Valores:
Quando o IR for menor que 2: resposta reduzida a
solicitao pelo quadro anmico.
Quando o IR = 2: resposta considerada adequada.
Quando o IR for maior que 2: sugestivo de grande
perda de hemcias com aumento na hematopoese.

Utilizao dos ndices hematimtricos para verificao
de anemia hipo ou normocrmica, macroctica ou
microctica
Reticulcitos
Paciente do sexo masculino foi ao laboratrio para
realizao de um hemograma. Entre os resultados, foi
verificado um aumento no ndice de reticulcitos.

Rt = 10% Ht= 20

Rt
corrigido
= 10 x 20 = 200 = 4,25
47 47

IR = 4,25 = 2,12 possvel diagnstico de anemia
2 hemoltica
Reticulcitos
Paciente do sexo masculino foi ao laboratrio para
realizao de um hemograma.

Rt = 2% Ht= 30 VCM = 76 fL
Rt
corrigido
= 2 x 30 = 60 = 1,27
47 47

IR = 1,27 = 0,85 possvel diagnstico de anemia
1.5 carencial

Hemograma automatizado
Tcnica mais utilizada em todos os laboratrios clnicos do
mundo.
Mais rpida, reprodutvel e confivel do que a tcnica manual.
Amostra de sangue aspirada pelo equipamento.
Aps tratamento com solues especficas, ela passa por
eletrodos que medem o tamanho da clula e sua complexidade.
Desta maneira possvel distinguir entre os diversos tipos
celulares do sangue.
Sysmex- XE-2100
Sysmex- XE -2100
Anlise individual em tubo fechado

Princpios de medio:
Impedncia eltrica (corrente direta): RBC, PLT, HCT
(medido) e diferencial de clulas imaturas
Citometria de fluxo fluorescente: WBC, contagem de
reticulcitos, eritroblastos, plaquetas imaturas e
contagem optica de plaqueta
Radiofrequencia: diferencial de cls imaturas
Fotometria: HGB. Reao livre de cianeto

Sysmex- XE -2100
Parmetros analisados:
34 parmetros:
WBC, RBC, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC, RDW-SD,
RDW-CV, PLT, MPV, NEUT%, NEUT#, LYMPH%,
LYMPH#, MONO%, MONO#, EOS%, EOS#, BASO%,
BASO#, IG%, IG#, RET%, RET#, LFR%, MFR%,
HFR%, IRF, RETHe, PLT-O, IPF%, NRBC%, NRBC#

Sysmex- XE -2100
WBC: leuccitos RBC: eritrcitos HGB: hemoglobina
HCT : hematcrito MCV: VCM MCH: HCM
MCHC: CHCM RDW-SD RDW-CV
PLT: plaquetas MPV: volume mdio plaquetro
NEUT : neutrfilos LYMPH: linfocitos MONO:moncitos
EOS: eosinfilos BASO: basfilos IG : granulcitos
imaturos RET:reticulticos
LFR , MFR e HFR: anlise da maturao de reticulcitos pela intensidade de
fluorescncia em baixa, alta e mdia fluorescncia
IRF: porcentagem de reticulcitos imaturos
RETHe: contedo de hemoglobina dos reticulcitos
PLT-O: contagem optica de plaquetas
IPF: plaquetas imaturas NRBC: eritroblastos

Sysmex- XE-2100
Presena de canais diferenciados para anlise
celular:

Canal de hemoglobina
Canal de eritrcitos/plaquetas, que mede e conta
por impedncia em um fluxo com foco
hidrodinmico
Canal de diferencial para neutrfilos, eosinfilos,
linfcitos e moncitos aps interao com corante
fluorescente
Sysmex- XE-2100

Canal de leuccitos/basfilos, que lisa todas as
clulas menos os basfilos, sendo diferenciados
por disperso de luz frontal e lateral
Canal de eritroblastos, sendo identificados por
intensidade de fluorescncia e disperso frontal
da luz
Canal de granulcitos imaturos distintos por
impedncia e corrente de radiofrequncia.

Sysmex- XE-2100
Capacidade de processamento

Mdulo manual: 60 amostras por hora
Mdulo automtico - 150 amostras por hora

Impedncia eltrica
As diferentes clulas sanguneas so contadas
e medidas a partir dos impulsos eltricos que
geram quando imersas em um meio condutor
(soluo eletroltica).
As clulas tambm so orientadas em um
fluxo laminar e interceptadas uma a uma por
uma corrente eltrica.
Analisa RBC, PLT e HCT
Qto > intensidade do pulso, > tamanho da clula
Qto > qtde do pulso > qtde de clulas
Lei de Ohm : V=IR
A voltagem gerada (corrente constante) proporcional
ao tamanho da partcula (obstruo)
Impedncia

Citometria de fluxo
uma tcnica de medio das propriedades de clulas em
suspenso, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas
uma a uma por um feixe de luz (LASER).

COMPONENTES:
Cmara de fluxo
Conjunto ptico luminoso (LASER);
Amplificador e processador dos sinais luminosos (SENSORES);
Sistema computacional integrado para processar as informaes
oriundas dos sensores.
O feixe de laser incidir sobre cada clula (de forma individual)
A radiao incidente sofrer desvios que sero reconhecidos
pelos fotosensores

SSC- avalia a granulosidade intracelular
atravs da luz dispersada

FSC avalia o tamanho da clula pela difrao
e refrao da luz

FL: Sensores especializados em medir
fluorescncia:avalia tamanho ncleo
Contagem total e diferencial de leuccitos
Citometria de fluxo fluorescente
As informaes provenientes dos diferentes sensores,
so agrupadas, formando as caractersticas de cada
clula que so expressas em um histograma.