Algunos aspectos de la conservacin

de colecciones de diatomeas
Manel Leira
Faculdade deCincias
Universidade deLisboa
Conservacin de diatomeas
Histricamente,algunas
coleccionessehansecadoen
hojasdeherbario,trozosdemica
omontadosenportaobjetosde
vidrio.
Engeneral,lapreservacindelos
especmenes secosespobreya
vecesesmuydifcilderecuperar
elmaterialparaelexamen.
Conservacin de diatomeas
Unasolamuestra,consupropio
nmerodeacceso,puedeser
conservadaenmsdeunaforma,
quevandesdepolvoolquido,en
preparacionesdemicroscopio.
Elusodecoleccionesconservadas
enlquidotambintrae
problemasasociadosconla
contaminacin,eldeterioroyla
evaporacin.
Conservacin de diatomeas
Apesardequeexisteun
procedimientoestndarpara
mantenerambostiposde
colecciones,lquidasysecas,el
usodepreparaciones
microscpicaspermanentesesla
mejormaneradeconservar
coleccionesdediatomeasparael
futuro.
Conservacin de diatomeas
Elexamendelmaterialde
diatomeasfrescorevela
orgnuloscitoplasmticosas
comolasestructuras
exoesquelticas.
Enlaactualidadestascolecciones
debenmantenerseenestado
lquido,conlaadicindeuna
solucinconservante
solucindeLugol,alcoholal
75%,formaldehdoneutro4%),o
criopreservado (McLellan 1989).
Conservacin de diatomeas
Enmuchoslaboratoriosse
desaconsejaelusode
formaldehdoyaqueacelerala
erosindelasfinasoclusionesde
losporos,elusodealcoholes
concentradosevitael
crecimientodemicroorganismos,
quenopuedesercontrolada
medianteelusodelasolucinde
Lugol (Sournia 1978,Round etal.
1990).
Conservacin de diatomeas
Laliofilizacinseutilizatambin
paralaconservacindematerial
desedimentodediatomeas,a
vecesconalgunasclulas
intactasdespusdeltratamiento.
Estatcnicatambinsepuede
aplicaralasdiatomeaslimpias
mantenidasenmuestraslquidas.
Yaseaenlquido,suspensin
oxidadaomuestrasde
sedimento,sealmacenanen
vialesdevidrioestndarde20ml
conformacnicaytapnde
revestimientodepolietilenoy
selladosconceradeparafina.
Mtodos de limpieza de diatomeas.
Elanlisisdetalladodelapared
deslice,sinembargo,requierela
eliminacindelprotoplasma,que
seconsigueporcombustin,
tratamientoenzimticoconuna
solucindepancreatina despus
dellavadoconacetonadiluida,o
cidosoxidantestalescomo
cidocrmico,cidoclorhdrico,
perxidodehidrgeno,cido
ntrico,cidosulfrico.
(Patrick yReimer 1966,Sournia
1978,Ricard 1987,Round etal.
1990)
Mtodos de limpieza de diatomeas.
Agentesoxidantes,como
unamezcladecidos
ntricoysulfricoenuna
proporcinde1:1volumen
seaplicageneralmente
paralimpiarlasmuestrasde
diatomeasdealto
contenidoorgnico,o
perxidodehidrgenocon
unafuentedecalorpara
muestrasdebajocontenido
orgnico
Mtodos de limpieza de diatomeas.
MtodosbasadosenH2O2
Elperxidodehidrgenoeseloxidante
msutilizadoyelmsrecomendado,pero
otrosmtodospuedendarbuenos
resultados.
Enaguasricasencarbonatosoenhierroes
recomendableutilizarclorhdricodiluido
(HCl).
Elperxidodehidrgenoesunagente
oxidante.Norealizarningnanlisisque
useestosproductosqumicosfueradela
campanadegases.
CuandosemanipuleH2O2esnecesario
usarguantesresistentesalcido,gafasy
unabatadelaboratorio.
Mtodos de limpieza de diatomeas.
MtodoHCl calienteyKMnO4
Estemtodoesrecomendadopara
muestrasquesuelentenerunalto
contenidodematerialorgnico.
Adems,nohaynecesidaddeeliminarel
calcioantesdeprocesarlasmuestras
comoenlasotras.
ElcidoclorhdricoesCORROSIVO.Se
desprendeGASDECLOROcuandose
combinaconpermanganatodepotasio.
Elpermanganatodepotasioesun
AGENTEOXIDANTE.Norealizarningn
anlisisqueuseestosproductos
qumicosfueradelacampanadegases.
CuandosemanipuleHCl esnecesario
usarguantesresistentesalcido,gafasy
unabatadelaboratorio.
Montaje de las preparaciones permanentes
Unavezlimpiadecualquier
materiaorgnica,elmaterialde
diatomeassepuedemontar
sobreunsustratofsicoespecfico
paraelexamenmicroscpicoa
realizar.
Montaje de las preparaciones permanentes
Antesdeexamenconel
microscopioelectrnicode
barridootransmision,los
frstulos porlogeneralse
secanalaire,peroMedlin
(1978)mostrqueelsecado
depuntocrticopuedeser
unaayudaparamejorarel
aspectogeneraldelas
valvasligeramente
silicificadas
Montaje de las preparaciones permanentes
Paramicroscopa ptica,una
suspensindematerialde
diatomeassesecasobreun
cubreobjetos
Acontinuacinsemontasobre
unportaobjetosparahaceruna
preparacinpermanenteusando
unmediodemontajedealto
ndicederefraccin(porejemplo,
Naphrax).
Montaje de las preparaciones permanentes
Muchosmediosdemontajede
diatomeasylosdisolventes
utilizadosparaestosmedios
puedencontenercompuestos
qumicosnocivosocancergenos.
Siempreelaborarlas
preparacionesenunacampana
degasesynuncainhalarelhumo
yvaporesliberadosduranteeste
procedimiento.
Montaje de las preparaciones permanentes
Lamayoradelosdetalles
ultraestructurales delasdiatomeas
seencuentranenellmitedela
resolucindelaluz.
Porestaraznlasdiatomeasdeben
serincluidasenunmediodendice
derefraccinmsaltoqueeldelas
valvasdediatomeas.
Cuatrotiposdemediosdemontaje
songeneralmenteutilizados:
"Hyrax"r.i.(ndicederefraccin)
1,71;Naphrax "r.i.1,69",ZRAX",r.i.
1,7y"Pleurax",r.i.1,73
Montaje de las preparaciones permanentes
Diluirlasuspensindefrstulos limpiosparaconseguirunaconcentracinadecuada.Deben
versepartculasfinasensuspensin.Silasuspensinestmsconcentradasepuedediluir
conaguadestilada.Ladensidadpuedecomprobarsehaciendounapreparacin
microscpicayobservndolaax400.Silasuspensinestmuydiluidapuedeconcentrarse
centrifugando.(Nota:ladilucindelasuspensintambinsepuederealizarconetanol,lo
quefacilitaladispersinhomogneasobreelcubreobjetos).
Agitarelvialquecontienelasdiatomeaslimpias.UtilizandounapipetaPasteur limpia
tomarunapartedellquidodelapartecentraldeltubo.Depositarunagotaodosenun
cubreobjetosredondo.Dejarqueseevaporeellquido,dejndolo enunsitiocaliente
protegindolodelpolvo,ocalentndolasuavementeenunaplacacalefactora.Elresultado
finaldebeserunafinacapadecolorgrissobreelcubreobjetos.
Seguirlasinstruccionesdelfabricanteenlautilizacindelmediodemontaje.Unadelas
resinasmsutilizadasesNAPHRAX.Asegurarsequeelmedioalcanzalosbordesdel
cubreobjetos.Dejarenfriaryobservaralmicroscopio.Laconcentracinidealesaquellacon
laqueseobservan1015valvasporcampox1000.Silapreparacinesmuydensasedebe
repetirconunasuspensinmsdiluida.Finalmentedebeetiquetarselapreparacin.Debe
consignarselalocalizacin,lafechaycualquiercdigonecesarioquepermitaaccederal
restodelainformacinnecesaria.
Conservacin para anlisis molecular
Lasactualestcnicasdeanlisis
moleculardemandanquelas
microalgas,yenparticularlas
diatomeas(Bacillariophyta),han
deserconservadasconlos
mejoresrecursosdisponibles.
Crioconservacin a20o80C
Conservacinconetanol
Cul es el futuro de las colecciones de
diatomeas?
Enestemomento,laexistencia
delDepartamentodediatomeas
enelMuseoBritnicose
encuentraenpeligro.
Estoilustralafragilidaddel
medioambientedeldiatomista
cuandolaposicindehastaun
museodefamaseest
erosionado.