PRACTICA N 9

ESPECTROFOTOMETRIA MOLECULAR
(Azul de metileno)
I. OBJETIVOS
Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de
onda de mxima absorcin) los ni!eles de concentracin
tambi"n adecuados #ara el anlisis cuantitati!o #or
es#ectro$otometr%a&
II. FUNAMENTO
'a es#ectro$otometr%a es uno de los m"todos de anlisis (ue se
em#lean con ms $recuencia dentro del cam#o del anlisis de
los alimentos) las regiones del es#ectro ms usadas en dic*o
cam#o son el ultra!ioleta el !isible+ en algunos casos el
in$rarro,o cercano&
'a determinacin cuantitati!a #or es#ectro$otometr%a se basa
en la le combinada de -eer.'ambert/
A 0 a&b&c
Dnde/
A 0 absorbancia o extincin o densidad #tica
a 0 absorti!idad
b 0 longitud de #aso o recorrido de lu1
c 0 concentracin
2sta ex#resin muestra (ue existe una relacin lineal entre la
absorbancia (A) la concentracin (c) de una solucin dada+
siendo constante la longitud del traecto #tico la longitud de
onda&
2sta relacin se cum#le #or lo tanto el anlisis
es#ectro$otom"trico cuantitati!o se #uede a#licar cuando/
a) Todos los cuantos de energ%a tienen la misma #osibilidad
de ser absorbidos #or la sustancia+ es decir+ la lu1
em#leada debe ser monocromtica a la de mxima
absorcin&
b) Todas las mol"culas de la sustancia deben tener la misma
#osibilidad de absorber los cuantos de energ%a+ es decir+
la sustancia debe estar lo su3cientemente diluida #ara
(ue ninguna molecular (uede oculta o a la sombra de
otra& 4e estima como #romedio una concentracin de 5 x
567.8 mol9'&
III. MATERIALES ! METOOS"
A. M#te$i#le% & E'ui(o%"
2s#ectro$otmetro :; < ;I4 < =arca Turner
Celda de Cuar1o
>iolas de 8?6 ml+ 566 ml 8? ml
Pi#etas !olum"tricas de 8? ml+ 56 ml ? ml
2mbudo de !idrio
Pa#el 3ltro
Pa#el Tissue
Pi1eta con agua destilada
A1ul de metileno
B. M)todo%
1. Manejo del Espectrofotmetro
4e siguen las instrucciones del manual del e(ui#o&
2. Procedimiento
2s#ectro$otmetro :; < ;I4 < =arca
Turner
Pi#eta de #recisin
a) Determinacin de la longitud de onda de mxima
absorcin&
Pesar 6&5 g de a1ul de metileno&
Colocamos a una 3ola de 566 ml a$oramos
con agua destilada&
@acemos diluciones de 8 ##m+ A ##m B
##m&
Pre#aramos el blanco&
'eemos la absorbancia !s longitud de onda
desde A66 < C66 nm&
Dra3camos la absorbancia !s la longitud de
onda #ara cada una de las concentraciones
reali1adas&
b) Determinacin del rango de concentracion
adecuado
Traba,amos con longitud de onda
seleccionada&
Pre#aramos el rango su3ciente de
concentraciones (*asta donde se des!ie la le
de -eer)
'eer absorbancia !s E F a longitud de onda
max&
Dra3car
>i,ar el rango o#timo o adecuado
c) Determinar el coe3ciente de extincin molar
G 0 29 c&d
Dnde/
G 0 coe$iciente de extincin molar
c 0 concentracin molar
d 0 es#esor de la cubeta
2 0 densidad #tica de extincin
IV. RESULTAOS E ISCUSION
Presentar resultados mediante cuadros gr3cos sus
res#ecti!os clculos&
CUESTIONARIO
*)+u) ti(o de %olu,ione% no ,um(len l# le& de L#m-e$t .
BEER.
'a le& de L#m-e$t/Bee$ (a !eces llamada sim#lemente le de
-eer) establece la relacin entre la absorbancia de una
disolucin de una sustancia absorbente su concentracin en la
misma&
Cabe destacar que la ley de Lambert-Beer slo se
cumple para disoluciones diluidas. Para concentraciones
superiores a .1M+ la distancia #romedio entre los iones o
mol"culas de analito disminuen *asta tal #unto (ue sus
distribuciones de carga se !en a$ectadas #or consiguiente+ la
magnitud de la absorcin (no ol!idemos (ue la absorcin de
##m

absorbancia
8 6&H88
A 6&AB9
B 6&?A
absorbancia
##m
Concentraci
n =
radiacin+ en este caso :;.;I4+ im#lica trnsitos entre ni!eles
electrnicos cuanti1ados)
0)1e #,ue$do #l ,olo$ de l# %u%t#n,i# #n#liz#d#2 ,u3l
%e$4# l# lon5itud de ond# m3% #($o(i#d# (#$# $e#liz#$
l# le,tu$# e%(e,t$o6otom)t$i,#7
De acuerdo con lo traba,ado en la #rctica de laboratorio+ la
longitud de onda ms adecuada #ara reali1ar la lectura
es#ectro$otom"trica es de !2" nm.
8)Con%ulte #(li,#,ione% indu%t$i#le% de
e%(e,t$o6otomet$4# de #-%o$,i9n
'a absorcin atmica es una t"cnica ca#a1 de detectar
determinar cuantitati!amente la maor%a de los elementos
(u%micos+ #or lo (ue sus cam#os de a#licacin son !ariados&
2ste m"todo se #uede a#licar #ara la determinacin de ciertos
metales tales como/ antimonio# cadmio# calcio# cesio#
cromo# cobalto# oro# plomo# n$quel# entre otros&
4e em#lea en an%lisis de a&ua# de suelos# bioqu$mica#
to'icolo&$a# medicina# industria farmac(utica#
alimenticia# petroqu$mica# etc(tera.
2l instrumental em#leado en estos anlisis es un 2s#ectrmetro
de Absorcin Atmica&
2ste e(ui#o generalmente est com#uesto #or una lm#ara del
ti#o ctodo *ueco+ un (uemador o mec*ero+ com#uesto a su
!e1 #or un nebuli1ador de la muestra+ dis#ositi!os seleccin
de longitudes de onda (monocromador ti#o re,illa de di$raccin)+
transduccin am#li3cacin (tubo $otomulti#licador) lectura
de la seIal&
)u importancia radica en (ue mediante su identi3cacin se
e!itan costos maores en el mantenimiento #rogramado+
eludiendo $allas im#re!istas de $uncionamiento
es#ecialmente+ #re!enir costos maores #or $allas maores&
2sta #rueba es una con3rmacin cualitati!a cuantitati!a de
las otras #ruebas (ue se reali1an en los aceites usados+ como
#or e,em#lo/ *iscosidad# punto de in+amacin# insoluble
en pentano# etc..
Idealmente+ esta #rueba debe lle!arse #eridicamente en los
motores dems sistemas *idrulicos+ con el ob,eto de detectar
cada cierto #eriodo de o#eracin de un !e*%culo+ la e!aluacin
del desgaste de los distintos elementos constituti!os de "stos&
:n sJbito aumento de uno o !arios elementos debe ser
#roducto de una #reocu#acin es#ecial& 2sto+ unido al resto de
las #ruebas reali1adas dar un cuadro com#leto o a#roximado
de las #robables $allas sus consecuencias&
V. BIBLIO:RAFIA"
-ors$ort R& 4c*ol1+ =& 59BA& 4#eKtrosKo#isc*e =et*oden
in der organisc*en& C*emie& -erlin&
4anc*e1 D& 599?& Instrumentacion en -io(uimica& Conce,o
Nacional de Ciencia Tenologia (CLNCMT2C)& 'ima
Nalton Rees& 59CO& Analisis Puimico e Instrumental
=oderno& 2ditorial Re!erte& 4&A& 2s#aIa&
*tt#/99#(.H55.organica&blogs#ot&com9865596B9es#ectrosco#ia.
de.absorcion.atomica&*tml
PRACTICA N 56
ESPECTROFOTOMETRIA MOLECULAR
(i,$om#to de Pot#%io)
I. OBJETIVOS
Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de
onda de mxima absorcin) los ni!eles de concentracin
tambi"n adecuados #ara el anlisis cuantitati!o #or
es#ectro$otometr%a&
II. FUNAMENTO
'a es#ectro$otometr%a es uno de los m"todos de anlisis (ue se
em#lean con ms $recuencia dentro del cam#o del anlisis de
los alimentos) las regiones del es#ectro ms usadas en dic*o
cam#o son el ultra!ioleta el !isible+ en algunos casos el
in$rarro,o cercano&
'a determinacin cuantitati!a #or es#ectro$otometr%a se basa
en la le combinada de -eer.'ambert/
A 0 a&b&c
Dnde/
A 0 absorbancia o extincin o densidad #tica
a 0 absorti!idad
b 0 longitud de #aso o recorrido de lu1
c 0 concentracin
2sta ex#resin muestra (ue existe una relacin lineal entre la
absorbancia (A) la concentracin (c) de una solucin dada+
siendo constante la longitud del traecto #tico la longitud de
onda&
2sta relacin se cum#le #or lo tanto el anlisis
es#ectro$otom"trico cuantitati!o se #uede a#licar cuando/
c) Todos los cuantos de energ%a tienen la misma #osibilidad
de ser absorbidos #or la sustancia+ es decir+ la lu1
em#leada debe ser monocromtica a la de mxima
absorcin&
d) Todas las mol"culas de la sustancia deben tener la misma
#osibilidad de absorber los cuantos de energ%a+ es decir+
la sustancia debe estar lo su3cientemente diluida #ara
(ue ninguna molecular (uede oculta o a la sombra de
otra& 4e estima como #romedio una concentracin de 5 x
567.8 mol9'&
III. MATERIALES ! METOOS"
C. M#te$i#le% & E'ui(o%"
2s#ectro$otmetro :; < ;I4 < =arca Turner
Celda de Cuar1o
>iolas de 8?6 ml+ 566 ml 8? ml
Pi#etas !olum"tricas de 8? ml+ 56 ml ? ml
2mbudo de !idrio
Pa#el 3ltro
Pa#el Tissue
Pi1eta con agua destilada
Dicromato de Potasio
. M)todo%
,. Manejo del Espectrofotmetro
4e siguen las instrucciones del manual del e(ui#o&
". Procedimiento
d) Determinacin de la longitud de onda de mxima
absorcin&
Pesar 6&5 g de dicromato de #otasio
Colocamos a una 3ola de 566 ml a$oramos
con agua destilada&
2s#ectro$otmetro :; < ;I4 < =arca
Turner
Pi#eta de #recisin
@acemos diluciones de 8 ##m+ A ##m B
##m&
Pre#aramos el blanco&
'eemos la absorbancia !s longitud de onda
desde A66 < C66 nm&
Dra3camos la absorbancia !s la longitud de
onda #ara cada una de las concentraciones
reali1adas&
e) Determinacin del rango de concentracion
adecuado
Traba,amos con longitud de onda
seleccionada&
Pre#aramos el rango su3ciente de
concentraciones (*asta donde se des!ie la le
de -eer)
'eer absorbancia !s E F a longitud de onda
max&
Dra3car
>i,ar el rango o#timo o adecuado
$) Determinar el coe3ciente de extincin molar
G 0 29 c&d
Dnde/
G 0 coe$iciente de extincin molar
c 0 concentracin molar
d 0 es#esor de la cubeta
2 0 densidad #tica de extincin
IV. RESULTAOS E ISCUSION
Presentar resultados mediante cuadros gr3cos sus
res#ecti!os clculos&
##m absorbancia
8 6&66?
A 6&6H
B 6&6C5
CUESTIONARIO
*. 1e #,ue$do #l ,olo$ de l# %u%t#n,i# #n#liz#d#2 ,u3l
%e$4# l# lon5itud de ond# m3%
#($o(i#d# (#$# $e#liz#$ l#
le,tu$#
e%(e,t$o6otom)t$i,#7
De acuerdo con lo traba,ado en la #rctica
de laboratorio+ la longitud de onda ms
adecuada #ara reali1ar la lectura
es#ectro$otom"trica es de ," nm.
V. BIBLIO:RAFIA"
-ors$ort R& 4c*ol1+ =& 59BA& 4#eKtrosKo#isc*e =et*oden
in der organisc*en& C*emie& -erlin&
4anc*e1 D& 599?& Instrumentacion en -io(uimica& Conce,o
Nacional de Ciencia Tenologia (CLNCMT2C)& 'ima
Concentraci
n =
Nalton Rees& 59CO& Analisis Puimico e Instrumental
=oderno& 2ditorial Re!erte& 4&A& 2s#aIa&
*tt#/99#(.H55.organica&blogs#ot&com9865596B9es#ectrosco#ia.
de.absorcion.atomica&*tml