1

GERMINACIN
La germinacin en plantas es el conjunto de procesos metablicos que vana favorecer
que una estructura quiescente reactive su maquinaria metablica y genere una estructura
independiente.
La germinacin en sentido estricto se manifiesta como la protrusin de la radcula.

CONDICIONES DE GERMINACIN
Para que una semilla germine sta tiene que estar madura, es decir, que haya sufrido
un proceso de histodiferenciacin correcto y haya acumulado las sustancias de reserva adecuadas
para mantener el eje embrionario mientras no tiene capacidad fotosinttica.
La maduracin est relacionada con la acumulacin de cido abscsico. Otros
reguladores como etileno disminuyen su expresin.
La semilla va a madurar sufriendo un incremento neto en peso seco a consecuencia de
la acumulacin progresiva de protenas lpidos y glcidos.
Si la carga en una semilla no es adecuada aunque el embrin est maduro no ser
viable. Adems las sustancias de reserva tienen que estar compartimentalizado para que el
metabolismo se mantenga a 0.
Ese nivel bioqumico a 0 se consigue porque paralelo a las sustancias de reserva existe
un descenso en el peso seco. La estructura se deseca progresivamente, esa prdida de agua por
parte de la semilla se produce por el contenido de cido abscsico.
Las partes de una semilla varan segn sea mono o dicotilednea. En
monocotiledneas el tejido de reserva es el endospermo y en dicotiledneas est slo en los
cotiledones.
En ambos casos estn cubiertos por la testa que es una estructura impermeable cuya
funcin es conseguir que el ambiente celular siga en estado metablico 0, porque el nivel hdrico
es bajo. Cuanta menos agua haya en el entorno ms viabilidad. La testa est manteniendo un
ambiente seco.

PROCESO DE GERMINACIN
Lo primero que ocurre al empezar la germinacin es una imbibicin de todo ese material
seco, la germinacin comienza con entrada de agua regulada por el grado de hidratacin de la
testa.
Hay una primera entrada de agua fsica tanto en semillas viables como en no viables y
una segunda entrada de agua que ya se produce al mismo tiempo que se desarrolla la actividad
metablica.

Los cocientes respiratorios son altos al principio porque hay poco agua y puede darse
una fermentacin y tambin hay procesos respiratorios al tiempo que se mueven las reservas.
Todos los materiales de reserva se degradan a lo largo de la germinacin.
Existen muchas actividades enzimticas a este fin: lipasa, amilasa, actividad
proteoltica...van a seguir curvas en ascenso porque la movilizacin de sustancias de reserva ira
en sentido inverso.
Adems los principios inmediatos se movilizan mediante procesos enzimticos,
isoformas o sistemas multienzimticos.
Dentro de la actividad -amilasa existen isoamilasas especficas con picos dependientes
de pH.


Actividad enzimtica especfica= U.E/cantidad de protena TOTAL
Unidad enzimtica UE SE DEFINE DE ACUERDO CON OBJETIVOS, da nmeros
totales
2
MOVIMIENTOS DE LAS PLANTAS
La luz adems de provocar efectos fotomorfogenticos influye facilitando una
orientacin espacial que va a permitir que determinados rganos o incluso orgnulos sean
capaces de orientarse a los puntos de mayor eficacia.

Cualquier sistema termodinmicamente abierto, si no puede desplazarse fsicamente al
completo, desplaza rganos u orgnulos. La capacidad de movimiento de las plantas va
orientada a dos funciones:
aprovechar al mximo las fuentes energticas
evitar situaciones de estrs
Si la cantidad de fotones es ptima los cloroplastos no se movern, si es infraptima se
movern hacia la luz y si es supraptima rotarn en contra de ella para protegerse.
La mayora de los movimientos estn basados en cambios fisiolgicos que van a tener
como respuesta la existencia de crecimiento asimtrico bien sea hacia el estmulo que lo
provoca bien sea en contra de l.
Otra posibilidad es que los cambios sean inmediatos y se deban, ya no al contenido
endgeno de ciertos reguladores sino que pueden venir producidos por cambios de
permeabilidad de membrana.
Los movimientos, por tanto, se van a englobar en estas categoras:
basados en el contenido endgeno
dependientes de permeabilidad de membrana
Los procesos de movimiento en plantas incluyen todos aquellos que van a permitir a la
planta una orientacin espacial y van a depender del estmulo que los produzca.


FOTOTROPISMO
Es un tipo de movimiento inducido por luz. Si el rgano va hacia la fuente luminosa es
fototropismo negativo y si va contra el foco es fototropismo negativo.
En general las plantas tienen fototropismo negativo en la zona radicular y positivo en la
caulinar.
La capacidad de movimiento dependiente de luz da lugar a varias posibilidades:














La respuesta fototrpica es captada por el meristemo. Un sistema experimental como
coleoptilos decapitados no sufren el efecto pero coleoptilos con pice s, por tanto, el rgano
Estmulo luminoso
Direccional No direccional
No peridico
Peridico
Desarrollo No
desarrollo
Desarrollo Transduccin
de energa
Desarrollo
Fototropismo Fotonastia Fotomorfognesis
Fotosntesis
Fotoperodo
3
responsable se encuentra en el pice, aunque no se conoce el receptor exactamente parece ser
que intervienen fitocromos y se sabe que generan un cambio fisiolgico porque la respuesta es
distinta con luz que sin luz.
En principio se pens que la luz provocaba una degradacin del AIA por estimulacin de la
AIA-oxidasa y la concentracin de AIA era menor, sin embargo, en realidad la oxidasa estaba
siempre en la misma concentracin.
Por experimentacin se comprob que existe un contenido diferencial de AIA puesto que
la luz bloquea el transporte polar en el flanco iluminado y activa permeasas que facilitan el
transporte horizontal en el que participa el meristemo.
La respuesta se transmite de manera baspeta.

OTROS MOVIMIENTOS RELACIONADOS CON LA LUZ
Si no hay cambios de crecimiento y desarrollo puede darse un movimiento tipo nasita
Cuando el estmulo luminoso mantiene cierta periodicidades produce una respuesta
llamada fotoperiodismo. Est relacionada con el fotoperodo, es decir, el nmero de horas diarias
de luz que hay en cada estacin.

GRAVITROPISMO
La gravedad provoca en la raz un gravitropismo positivo y en el tallo gravitropismo negativo.
El responsable de esa respuesta es algn mecanismo captador, ese mecanismo primario no se
conoce pero el resultado fisiolgico es un crecimiento diferencial. Este sistema permiti estudiar el
mecanismo gravitrpico.
En el pice de la raz aparecen masas densas brillantes al microscopio, corresponden a granos de
almidn y se observ que esto era comn a todas ls races en mayor o menor medida, a esta
regin se le llama estatnquima y los cuerpos brillantes se denominan estatolitos.
La disposicin diferencial de estatolitos en los flancos va a afectar a toda la estructura del
citoesqueleto y a la deposicin de pared celular.
El caso del gravitropismo negativo en los tallos no se debe a la presencia de estatnquima sino A
LA MAYOR SENSIBILIDAD A AUXINAS

37. FISOLOGIA DE LA FRUCTIFICACION. Introduccin. Polinizacin y
fecundacin. Crecimiento del fruto. Requerimientos nutricionales.
Contenido hormonal endgeno durante el desarrollo del fruto.
Partenocarpia. Maduracin. Regulacin hormonal de la maduracin.
Control externo de la maduracin.


Introduccin

Definimos Fruto como el ovario de la planta fecundada y el vulo dar lugar a las semillas.

El desarrollo del fruto depende de dos etapas:

1. El desarrollo del ovario.
2. Etapa que va a tener lugar despus de la fecundacin.

Por lo tanto, el tamao final de un fruto va depender de los acontecimientos que tienen lugar
antes de la Antesis, que es la etapa en la cual la flor queda implantada.

Esa fase es la Pre-Antesis y el tamao final del fruto va a depender del numero de divisiones
que tuvieron lugar durante la formacin del ovario, por tanto, si una planta no es cuidada de
forma adecuada durante la floracin la planta dar menos frutos y mas pequeos.

Depende tambin de todos los factores ambientales pero fundamentalmente, la concentracin
de CO2 influye favorablemente sobre la divisin celular y todas las condiciones ambientales
que afecten al estado nutricional de la planta.

Adems de esto, todas esas divisiones celulares que van a tener una base gentica,
4
independientemente de esto, los reguladores de crecimiento son responsables del numero de
divisiones celulares aunque el numero mximo de estas est determinado.

Dentro de reguladores de crecimiento el tamao final del fruto va a depender
fundamentalmente de una concentracin adecuada de citiquininas, auxinas y etileno.

Polinizacin y fecundacin
Despus de la fecundacin de los vulos, y al mismo tiempo en que estos se van
transformando en semillas, los carpelos (componentes del gineceo, parte femenina de la flor),
junto con otros rganos extracarpelares, sufren una serie de modificaciones que conducen a la
formacin del fruto, por esto podemos definir al fruto como el ovario de la planta maduro que
contiene las semillas.
Una vez que se alcanza la fase de Antesis que precede a la fecundacin, el nmero de
divisiones celulares posteriormente cambia y as tambin la situacin morfogentica ya que se
da otra lnea de diferenciacin (de flor a fruto).
Se reactiva por la fecundacin por la entrada del polen al tubo polnico. El resultado es que el
grano de polen va a provocar la fecundacin, va a mandar el estimulo, que va a generar una
nueva divisin celular y se facilitara mas o menos el incremento de la divisin.

Crecimiento del fruto
El tamao final del fruto va a depender de las divisiones Pre-Antesis y Post-Antesis, entre otros
factores.
La divisin celular va a tener un periodo potencial mximo que va a estar marcado por un
incremento en el nivel de promotores, el fruto despus de la Post-Antesis va a continuar
creciendo pero no por divisin sino por elongacin y expansin celular.

Posteriormente el fruto va a entrar en un proceso de maduracin y senescencia, aqu los
reguladores de crecimiento va a ser:

cido abscsico: Es el inhibidor ms activo, se mantendr mnimo siempre que haya proceso
de crecimiento pero cuando llega la maduracin se incrementa hasta ser mximo en la etapa
de senescencia.

Estamos viendo el fruto como un proceso de nueva diferenciacin.
No todos los frutos se desarrollan o se originan de las mismas poblaciones celulares, por
ejemplo:

Fresa Receptculo.
Manzana Tejidos accesorios.
Pia Tejidos accesorios unidos al pednculo.
Higo Pednculo.
Uva Pericarpio.
Tomate Tejido intralocular placental.

Pueden derivar de las diferentes partes de la flor porque
la sealizacin va a afectar a las clulas que sean
competentes ya que la cantidad de receptores o los
microambientes celulares determinados estimulan el
crecimiento de forma diferencial.

Las curvas de crecimiento de un fruto varan mucho dependiendo de la poblacin de la que se
hayan diferenciado:
5

Es de tipo sigmoideo en frutos carnosos, va a haber una etapa rpida de crecimiento en la cual
esa ralentizacin que se da e la maduracin de las semillas se ve muy bien en frutos carnosos
con hueso, donde las curvas sigmoideas se deben a los procesos de lignificacion de
La semilla.

Factores medioambientales que afectan al crecimiento del fruto:

Temperatura.
Fotoperiodo.
Disponibilidad de agua.
Disponibilidad de CO
2
.
Disponibilidad de minerales.


Requerimientos nutricionales

Para que el crecimiento del fruto tenga lugar de un modo satisfactorio los nutrientes juegan un
papel muy importante ya que sin ellos el crecimiento no tendra lugar.

Tamao final del fruto depender:

Condiciones nutricionales de la planta.
Nutrientes no minerales (del aire): Carbono (C), Hidrgeno (H), y Oxigeno (O).
Nutrientes minerales: Nitrgeno, Fsforo, Potasio, Calcio, Magnesio, Azufre,
boro, Cloro, Cobre, Hierro, Manganeso, Molibdeno, Zinc.
Fotoasimilados.
Reservas de almidn.


Condiciones ambientales.
Relaciones entre fuentes y sumideros.


Contenido hormonal endgeno

Las auxinas promueven el crecimiento del fruto. Normalmente, si la flor no ha sido polinizada,
el fruto no se desarrolla. En algunas plantas es suficiente la fecundacin de un nico saco
embrionario para el normal desarrollo el fruto; pero en otros frutos tales como manzanas o
melones, que tienes muchas semillas, deben ser fecundadas varias de stas para que la pared
del ovario madure y se haga carnosa.

El etileno ayuda en gran medida a la maduracin de los frutos, el efecto de ste sobre la
maduracin de los frutos tiene una gran importancia agrcola.

Las giberelinas estimulan la germinacin del polen y el crecimiento del tubo polnico, al igual
que las auxinas, las giberelinas favorecen la formacin de frutos partenocrpicos.

El cido abscsico es el inhibidor ms activo, se mantendr mnimo siempre que haya proceso
de crecimiento pero cuando llega la maduracin se incrementa hasta ser mximo en la etapa
de senescencia.


Partenocarpia

En condiciones normales, el fruto suele formarse una vez que ha tenido lugar la fecundacin
del vulo, pero en muchas plantas, casi siempre variedades cultivadas, como los ctricos sin
semilla, la uva, el banano y el pepino, el fruto madura sin necesidad de fecundacin, este
fenmeno se llama Partenocarpia.
6

En todos los casos, la maduracin del ovario provoca el marchitamiento de las estigmas y las
anteras y el agrandamiento del propio ovario (o de los ovarios, si la flor tiene ms de uno). Los
vulos presentes en el interior de los ovarios fecundados se desarrollan y forman las semillas.
En las variedades partenocrpicas stas no se desarrollan, y los vulos mantienen el tamao
original.

Maduracin

La maduracin del fruto se caracteriza porque:

El fruto alcanza su tamao potencial mximo.
Se reduce la velocidad de crecimiento.
Disminuye la concentracin de inhibidor de la maduracin.
Se agotan los promotores de semillas maduras.
Se trata de un proceso programado genticamente.

Durante la maduracin del fruto tienen lugar una serie de cambios que podemos clasificar:

1. Cambios fsicos.
2. Cambios metablicos.
3. Cambios en la expresin gnica.


1. Cambios fsicos.

Los cambios fsicos se refieren a los cambios en las propiedades organolpticos que
experimenta el fruto durante el proceso de maduracin:



Color:

Debido al desmantelamiento del aparato fotosinttico, se
produce una prdida importante de clorofila y en consecuencia
quedan al descubierto los acmulos de carotenoides antes
enmascarados por la clorofila como el -caroteno, licopeno.
Tambin se produce una sntesis de pigmentos antocinicos.

Textura:

La textura la clula en crecimiento activo, cuando deja de ser
as, se producen alteraciones en la pared celular, es que una forma o muy practica porque se
utiliza para mantener frutos viables en sentido comercial es el tratamiento con compuestos de
calcio, ya que mantiene durante mas tiempo la integridad de los componentes de las paredes
celulares.

Un fruto maduro es blando porque la integridad de los componentes de la pared celular se
pierde, por ausencia de la pared tambin el fruto es ms susceptible a la contaminacin.

Aroma y sabor:

El proceso de catabolismo de los materiales de reserva da lugar a compuestos sencillos, como
son los azcares y cidos orgnicos, por esto los frutos son dulces.

Tambin por este proceso de catabolismo se generan compuestos de naturaleza fenlica que
son voltiles y les confieren el aroma u olor caracterstico.

2. Cambios metablicos.
7

Se produce un aumento respiratorio.
Sntesis y liberacin de etileno.
Metabolismo de almidn y cidos orgnicos.
Alteracin en la regulacin de rutas metablica.


3. Cambios en la expresin gnica.

Desaparicin de mRNA y protenas sintetizadas antes de iniciarse la maduracin.
Aparicin de nuevos RNAs especficos para la maduracin.
Sntesis de novo de enzimas que catalizan los cambios que se producen durante la
maduracin.


Resumiendo todo esto, las caractersticas organolpticas de los frutos, de gran importancia a
nivel comercial dependen de:

Degradacin del aparato fotosinttico.
Predominio del catabolismo.
Predominan carotenoides.
Compuestos voltiles.

Por si comportamiento durante la maduracin los frutos se clasifican en climatricos y no
climatricos.

La respiracin se incrementa en un momento determinado e incrementa la fase de
maduracin, se conoce como Climaterio.

Se define Climaterio como aquella fase en la cual se produce un incremento significativo de la
actividad respiratoria y que generalmente va precedido de un incremento de etileno, todos los
frutos que presentan esta caracterstica son frutos climatricos.

Algunos ejemplos de frutos climatricos y no climatricos son:

Frutos climatricos

Frutos no climatricos

Manzana
Albaricoque
Aguacate
Pltano
Chirimoya
Higo
Meln
Melocotn
Pera
Tomate
Sanda

Cereza
Calabaza
Uva
Pomelo
Pia
Limn
Naranja
Mandarina
Fresa

Regulacin hormonal

La regulacin hormonal del proceso de maduracin presentes diferencias entre los frutos
climatricos y no climatricos.

La sntesis y liberacin de etileno que en el caso de los frutos climatricos precede a un gran
incremento en el pico respiratorio que despus se mantiene, a diferencia de los frutos no
climatricos en los que este fuerte incremento del pico respiratorio no tiene lugar sino que es
un proceso paulatino.

Este aumento de la respiracin en los frutos climatricos provoca la desaparicin de
mensajeros y protenas sintetizadas antes de la maduracin y la aparicin de RNAs
8
especficos sobre todo.
En frutos climatricos ejerce un papel fundamental el etileno ya que tiene propiedades
autocatalticas.

Hay un cambio en el estado fisiolgico, o sea, un cambio de balance de reguladores, mientras
haya esa molcula desconocida el fruto no va a madurar.
En los frutos climatricos la biosntesis va a provocar un proceso de sealizacin que va a
inducir la expresin de mensajeros.

En cambio en los frutos no climatricos no hay regulacin autocataltica y lo que se hipotetiza
es que son las auxinas las implicadas en la regulacin del proceso de maduracin.
El objetivo de la bsqueda de genes implicados en procesos degradativos seria controlar el
proceso de maduracin del fruto.

Control externo de la maduracin

Sobre todo el tamao del fruto tambin est controlado por el nmero y efectividad de las
semillas aunque tambin existen frutos partenocarpicos, son aquellos que de forma natural o
inducida no producen semillas, se puede obtener sustituyendo la fecundacin del vulo por
aplicacin de reguladores de crecimiento.

El tamao final del fruto depende tambin del numero de frutos por rbol, si queremos
conseguir mayor tamao, una prctica muy comn es el aclareo y se suele realizar en frutos
comerciales, consiste en eliminar el excedente de flores que haya en la fase de Pre-Antesis, lo
que se consigue es que el suministro de nutrientes vaya a menos sumideros, o sea, los
nutrientes se reparten en menos frutos, en consecuencia estos reciben mas nutrientes y crecen
mas.

Sin embargo, es muy importante mantener el numero de hojas, esto demuestra que el fruto va
a expandirse o crecer tambin en base a los fotoasimilados, que se generan, el fruto tambin
tiene capacidad fotosinttica, al menos en las primeras etapas, pero se demuestra que la
mayor parte de los fotoasimilados no son de produccin propia sino de la hojas.

Por tanto para poder controlar con fines comerciales y econmicos es fundamental conocer las
pautas de crecimiento y desarrollo.

Decamos que la floracin significa un cambio de fase del meristemo vegetativo al meristemo
reproductivo.
Una vez que se produzca tendr lugar un proceso de Antesis y despus Post-Antesis.

Cambio de fase: es la reprogramacin celular que va a estar mediada fundamentalmente por
temperatura y fotoperiodo, basada en los cambios de expresin gnica que hace que las
clulas que antes eran vegetativas van a dar la flor.

Las pautas son el cambio de:

Elongacin celular.
Carga de metabolitos.
Entrada de mediadores.

El tamao final del fruto va a depender de todo esto adems de la activacin de las semillas,
estas generan cambios metablicos y toda la actividad del fruto esta de una forma
interrelacionada con la maduracin de las semillas, es decir, paralelamente se esta realizando
procesos de histodiferenciacion.

Cuando en trminos comerciales se desean producir frutos sin semillas:

Auxinas: la aplicacin exgena de auxinas va a disparar la elongacin celular
Ms efectiva: aplicacin de polen de familias o variedades prximas a aquellas que
estamos tratando.
9


Alternativas de conservacin de frutos:

Mecanismo de almacenamiento de frutos es jugar con la temperatura, la tcnica base es
temperaturas: 5 C potencialmente efectivas
25C potencialmente efectos de bloqueo maduracin

La maduracin del fruto acontece como un cambio de actividad de respiratoria y etileno, por
tanto, cualquier factor que anule a esas variaciones o las modifique, por ejemplo, por descenso
de O
2
e incremento de CO
2
son ahora mismo junto con variaciones de temperatura los
mtodos de almacenamiento ms utilizados.
Por tanto, cualquier factor que evite o regule la sntesis de etileno, la baja temperatura, niveles
bajos de O
2
pero hasta un limite (si no se produciran fermentaciones), concentraciones altas
de CO
2
ayudaran al almacenamiento del fruto.

Mediante diferentes tcnicas y conociendo los procesos de crecimiento y desarrollo del fruto se
pueden desarrollar mtodos para su produccin ms efectiva, con mejores caractersticas
organolpticas y su mejor conservacin sobre todo para especies de inters econmico y
comercial.


26.- CITOQUININAS. Introduccin. Naturaleza qumica. Relacin
entre estructura qumica y actividad biolgica. Clasificacin.
Metabolismo. Transporte. Efectos fisiolgicos. Mecanismo y modo
de accin. Receptores.

Introduccin

CITOQUININAS: hormonas vegetales que promueven la divisin y diferenciacin celular.

En 1955, Miller y Skoog consiguieron preparar por tratamiento trmico de ADN un
compuesto, el 6-furfurilamino purina, que promova la divisin celular. Denominaron a esa
sustancia quinetina y llamaron a los reguladores que se incluan dentro de este grupo citocininas
(citoquininas), debido a su aparente implicacin en los procesos de citocinesis, o divisin celular.
La quinetina es una citocinina artificial que probablemente no existe en plantas de modo natural,
tiene una estructura relativamente simple y es activa a 10
-9
M.
En 1964, Letham y sus colaboradores aislaron una citoquinina natural a partir de semillas
de maz (Zea mays), a la que denominaron zeatina, la cual es la citoquinina natural ms activa que
se conoce.
Actualmente se han aislado citoquininas de muchas especies diferentes de plantas,
encontrndose fundamentalmente en rganos cuyos tejidos se estn dividiendo de forma activa,
es decir, en semillas, frutos y races. Recientemente, las citoquininas se han identificado en dos
plantas vasculares sin semillas, un equiseto (Equisetum arvense) y el helecho Dryopteris
crassirhizoma.


Naturaleza qumica

Son derivados de la adenina.
La biosntesis est asociada a regiones de la planta con
actividad meristemtica (meristemos apicales y cmbium), especialmente
en tejidos en crecimiento (semillas, frutos y races).

10


Relacin entre estructura qumica y actividad biolgica

En su estructura qumica puede distinguirse:

grupo hidroflico muy especfico (la adenina), cuyas alteraciones
reducen o alteran la actividad de la citoquinina.
grupo lipoflico de poca o nula actividad, correspondiente a la
cadena lateral que puede sustituirse dando compuestos con menor o
mayor actividad.



Clasificacin

Se clasifican en cuatro grupos, en funcin del sustituyente en el
nitrgeno 6 de la adenina:

Isoprenoides:
o Cadenas saturadas (dihidrozeatina)
o Cadenas insaturadas (trans-zeatina)

Aromticas:
o Quinetina (sinttica)
o N
6
-benciladenina (BA) (endgeno)

Compuestos tipo citoquininas:
o Fenilureas (sintticas, no derivadas de adenina)

Otros:
o Alcohol dihidroconiferlico
o Leucoantocianinas y otros fenoles


11


Biosntesis de citoquininas

De novo
Va t-RNA
Va infeccin bacteriana


Biosntesis de citoquininas directa (DE NOVO)

Tiene lugar gracias a una serie de reacciones catalizadas por diversos enzimas,
algunos de ellos an desconocidos:

1) DMAPP (AMP transferasa / isopentenil transferasa)
2) Trans-hidroxilasa
12
3) 5- Nucleotidasa (defosforilacin)
4) Adenosin nucleosidasa
5) 5- Nucleotidasa (defosforilacin)
6) Nucleosidasa
7) Hidroxilasa
8) Hidroxilasa
9) Trans-hidroxilasa
10) Trans-hidroxilasa

1
2
3 4
5 6
7 8
9 10
13
t RNA como fuente de citoquininas

Durante aos:
Nucletidos cuyas bases han sido modificadas para formar
citoquininas.
t-RNA asociados a codones: U--
50% de citoquininas libres procedentes del t-RNA
Problemas:
Hidrlisis de t-RNA hasta el nivel mononucletido (clulas
senescentes)
Rotura del t-RNA en todos los tejidos
Cis-zeatina es la citoquinina ms abundante en el t-RNA

Biosntesis va infeccin bacteriana

Algunas bacterias patgenas de plantas expresan genes para la biosntesis de
citoquininas. Estas citoquininas son utilizadas por las bacterias para estimular el crecimiento de
la planta infectada.
A. tumefaciens produce tumores en las plantas mediante un plsmido inductor (Ti) que
contiene genes relacionados con la produccin de citoquininas.

Transporte

Se sintetizan en el pice de la raz y se encuentran en xilema,
floema y hojas; esto indica que el transporte es xilema-floema. Se
transportan por va acrpeta, desde el pice de la raz hasta las
hojas, movindose a travs de la savia en los vasos correspondientes
al xilema.

Efectos fisiolgicos

Inducen divisin celular junto con auxinas. Alterando
ligeramente las concentraciones relativas de auxina y citoquinina, los
investigadores han podido modificar el desarrollo de las clulas
indiferenciadas de los cultivos de tejidos. Una concentracin ms o
menos igual de las dos hormonas hace que las clulas sigan
indiferenciadas, formando masa de tejido llamadas callos. Cuando la
concentracin de auxina es superior, el tejido indiferenciado organiza
races. Con una concentracin superior de citoquininas, se forman
yemas.

citoquininas / auxinas = 1 callos
citoquininas / auxinas < 1 promueve elongacin de races
citoquininas / auxinas > 1 promueve formacin de tallos

Activan el crecimiento (rompen la dormicin) de las yemas
laterales.

Inducen formacin de yemas adventicias

14
Retardan la senescencia en las hojas (promueven sntesis de
clorofila y desarrollo de cloroplastos) y estimulan la movilizacin de
nutrientes.

Inducen partenocarpia en algunos frutos

Estimulan la prdida de agua por transpiracin

Estimulan la formacin de tubrculos en patatas

Estimulan diferenciacin celular

Mantienen la sntesis de protenas

Inducen la formacin de rganos en cultivo de tejidos:
morfognesis

Eliminan la dormicin que presentan yemas y semillas de
algunas especies

Factores que influyen sobre la actividad

Luz roja: provoca un aumento rpido del nivel de
citoquininas.
Temperatura: el paso de las citoquininas desde la raz al
xilema es mayor a bajas temperaturas.
Rotura de la dormicin: aumenta el nivel de citoquininas.
O
2
atmosfrico: a altas concentraciones promueve la
germinacin e incrementa el nivel de citoquininas.
KNO
3
(NH
4
)
2
SO
4
: aplicados al suelo aumenta el nivel de
citoquininas en hojas y xilema.
Carencia de P: disminuye el nivel de citoquininas.
Estres debido a sequa, inundacin, salinidad, bajo pH:
disminuye el nivel de citoquininas en tejidos y xilema.
Mecanismo y modo de accin

Regulan la sntesis proteica afectando a las etapas post-
transcripcionales en algunas especies. Adems su presencia en los ARN-t
puede regular la sntesis proteica aunque este mecanismo es an
desconocido.
Por otro lado, la sntesis de citoquininas por los tejidos de las
agallas en corona produce la transformacin de las clulas.

Receptores

Existe controversia entre si el funcionamiento es igual para las
citoquininas con base adenina y las fenilureas.
Se han identificado protenas con receptores especficos de
citoquininas, la unin produce un cambio conformacional que emite una
seal en cascada de fosforilacin/defosforilacin de la cadena o de
15
protena G.

TEMA 27. AUXINAS. Introduccin. Naturaleza qumica. Compuestos
sintticos con actividad auxnica. Relacin entre estructura y
actividad biolgica. Metabolismo. Transporte. Niveles endgenos.
Efectos fisiolgicos. Mecanismo y modo de accin. Receptores.

OBJETIVOS
Introducir al alumno en la actividad de compuesto con
actividad auxnica.
Dar una idea global de las posibilidades de regulacin del
contenido endgeno de auxinas.
Introducir al alumno en la importancia de estos
reguladores en el control del desarrollo vegetal y sus
aplicaciones comerciales.


INTRODUCCIN
Las auxinas son reguladores de crecimiento que al unirse especficamente a receptores de
membrana de clulas vegetales manifiestan su respuesta interfiriendo en un proceso
fisiolgico de la planta como puede ser la estimulacin de la elongacin celular local.

Recordemos que la diferenciacin celular en sistemas vegetales se basa en microambientes
distintos que afectan a ncleos genmicos iguales permitiendo la expresin gnica diferencial.
Los reguladores de crecimiento son la base de la Biotecnologa Vegetal.

DESCUBRIMIENTO
Las auxinas fueron de los primeros reguladores que fueron estudiados.
El descubrimiento de los reguladores de crecimiento fue precedido de una serie de
publicaciones:
- En 1880, Francis y Charles Darwin demostraron que el pice del coleptilo de
gramneas era el responsable de que las plantas se curvaran hacia la luz. Cuando el
pice estaba al descubierto haba curvatura, sin embargo si estaba cubierto por un
material opaco no la haba. De aqu se concluye que cuando las plantas estn
expuestas a una iluminacin lateral, alguna influencia se transmite desde la parte
superior hacia la base haciendo que la planta se curve.
- En 1910, Boysen Jersen corta el pice de un coleptilo y observa que ste decapitado
no se curva y sin embargo, al reemplazar el pice unindolo al coleptilo por un bloque
de agar, hay curvatura del mismo, lo que llev a pensar que el estmulo fuera de
naturaleza qumica.
- En 1929, Paal decapit coleptilos y volvi a colocar pices de forma asimtrica
observando que el coleptilo se curvaba incluso en oscuridad. Propuso que haba una
sustancia estimulante excretada por el pice y que difunda de forma simtrica en la
oscuridad y de forma asimtrica durante el da haciendo que creciera ms la zona
oscura que la zona iluminada.
La siguiente etapa fue tratar de aislar y caracterizar la sustancia responsable de este
fenmeno. Fue Went en 1928, quien logr aislarla al cortar coleptilos y colocarlos sobre
bloques de agar. La sustancia obtenida se denomin AUXINA.

Bioensayo: proceso de cuantificacin del contenido endgeno de un regulador de crecimiento
16
a partir de la respuesta biolgica controlada en un sistema experimental sometido a estudio.
Ejemplo: estudio del nivel endgeno de auxinas a partir del grado de curvatura del coleoptilo
de gramneas.

- Bioensayos datos aproximados, no tienen en cuenta la presencia de otras sustancias
cuantificacin poco real.

Figura 1- Mtodos de valoracin biolgica de las auxinas

Hoy en da el anlisis del contenido endgeno de auxinas se basa en tcnicas de
cromatografa de alta resolucin , mtodos inmunoafines y espectrografa de masas.
Disponiendo de molculas que controlan el contenido endgeno de los reguladores de
crecimiento puede interferirse en su mecanismo de accin:
17
- inhibiendo la biosntesis del regulador
- inhibiendo la degradacin del regulador
- introduciendo molculas que antagonizan con el regulador
- inhibiendo el transporte de dicho regulador

En la regulacin del contenido endgeno de auxinas intervienen:
- cantidad de triptfano biosntesis
- capacidad de degradacin enzimtica oxidacin
- conjugacin con steres y amidas reservorio de auxinas
procesos de compartimentalizacin

ESTRUCTURA QUMICA: AIA, CARACTERSTICAS QUE CONFIEREN ACTIVIDAD
AUXNICA.
Estructura qumica:
Molcula sencilla formada por un anillo indol en cuya posicin 3 se sita una cadena lateral. La
primera auxina identificada fue el cido indolactico (AIA) pero hoy en da, existen estructuras
semejantes por lo que se reconocen varias configuraciones moleculares, incluso sin anillo
indlico.
Caractersticas electroqumicas que confieren actividad auxnica:
- cadena lateral con grupo hidroxilo responsables de la actividad.
- Distancia entre cargas positivas y negativas de 0,53 nm que es reconocida por los
receptores especficos de estas fitohormonas.



ESTRUCTURA MOLECULAR DE AUXINAS

1- NATURALES:

18

Figura 2-Estructuras qumicas correspondientes a algunas auxinas naturales
2- SINTTICAS:

19

Figura 3- Estructuras qumicas correspondientes a algunas auxinas sintticas tpicas.








.


20



MECANISMO DE ACCIN
El proceso ms aparente inducido por auxinas es la elongacin celular
local ;sta se lleva a cabo en 2 etapas:
1 Etapa: elongacin celular rpida debido a la inexistencia de regulacin gnica y al
incremento de protones que favorecen con pHs cidos, la optimizacin de enzimas hidrliticos:
celulasas , glicoxidasas, etc. que debilitan la pared celular justificando un aumento en la
presin de turgencia y provocando finalmente la elongacin celular. Esto se conoce como
TEORIA QUIMIOSMTICA O CRECIMIENTO CIDO DE LA PARED CELULAR.



Figura 7 Efectos del AIA sobre la velocidad de crecimiento


2 Etapa: elongacin a largo plazo debido a la expresin gnica diferencial para la
sntesis de enzimas responsables de la degradacin de la pared celular.

Nota: mecanismo basado en la existencia de receptores especficos para auxinas en las
clulas vegetales.

EFECTOS FISIOLGICOS

Podramos destacar como acciones especficas, y de mayor importancia, de las auxinas:
-Expansin de la pared celular
-Formacin de races




21
Adems, participan en otros importantes procesos de desarrollo, tales como:
-Organizacin de meristemos
-Promueven diferenciacin vascular
-Mantenimiento de la dominancia apical
-Abscisin
-Tropismos
-Retrasan senescencia
-Retrasan maduracin de frutos.

TEMA 28: CIDO ABSCSICO. Introduccin. Naturaleza qumica.
Metabolismo. Niveles endgenos. Efectos fisiolgicos. Mecanismo y
modo de accin. Receptores.


INTRODUCCIN

Regulador de crecimiento con carcter inhibidor. Su efecto principal no es la abscisin directa
de rganos, sino que su contenido especfico puede controlar/ disminuir los niveles endgenos
de promotores. Entre otros efectos, su accin regula las fases de desarrollo, en concreto el
incremento de este regulador favorece la imposicin de reposo-latencia en rganos y
estructuras vegetales.

DESCUBRIMIENTO

El ABA se descubri al tratar de identificar mediante cromatografa reguladores promotores,
principalmente auxinas. En estos casos siempre apareca una mancha que al someterla a
bioensayos para auxinas, ejerca carcter inhibidor, denominandose por ello inhibidor B. El
aislamiento y purificacin de ABA mediante tcnicas tradicionales consiste en:
Extraccin de material vegetal en medio hidroalcohlico.
Extracto sometido a evaporacin en rota-vapor.
Cromatografa en papel del extracto obtenido en rota-vapor.
La cromatografa revela siempre la presencia de una sustancia diferente a auxinas.
Dicha molcula, una vez solubilizada y purificada para realizar un bioensayo
determinado, inhibe el crecimiento del coleoptilo (efecto contrario al causado por
auxinas).
Aumenta el inters en el estudio de esta sustancia porque era la primera molcula
purificada, con efecto inhibidor sobre las plantas.
La accin de este regulador depende de la concentracin endgena de este en la
planta, y de la sensibilidad de las clulas ante niveles diferenciales del mismo.

DETERMINACIN DE NIVELES ENDGENOS

El modo de determinar el contenido endgeno de ABA se hace a travs de bioensayos que
permiten detectar si en una mezcla problema se encuentra el regulador, cuyo efecto fisiolgico
en la planta lo conocemos.
Actualmente, se utilizan tcnicas resolutivas para cuantificar el nivel del regulador. Estas son:
Cromatografa de alta resolucin
InmunoafinIdad.
Espectrometra de masas


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NATURALEZA QUMICA

El cido abscsico se biosintetiza en forma enantiomorfa (50% correspondiente al
ismero L y otro 50% al ismero D).
Es un sesquiterpenoide (15 carbonos) que existe de manera natural en las plantas (Fig.
1).
METABOLISMO

Para la biosntesis de este regulador de crecimiento, se han descrito 2 posibles vas (Fig. 2):
1. Directa: su precursor sera el cido mevalnico (AMV) o isopentenil pirofosfato (IPP).
Tiene lugar en cloroplastos y otros plastos.
2. Indirecta: a partir de la degradacin de ciertos carotenoides (derivados del AMV y
sintetizados en plastos).


Fig.2 Rutas biosintticas del cido abscsico





EFECTOS FISIOLGICOS

Induccin de latencia en yemas y semillas: la aplicacin de ABA a las yemas
vegetativas hace que se transformen en yemas hibernantes, debido a que los
primordios foliares se convierten en calfilos.
Respecto a las semillas, el ABA inhibe la produccin de protenas inducida por las
giberelinas.
Induccin de la senescencia y abscisin en hojas: si echamos una gota de ABA en una
zona determinada de la hoja, esta superficie mojada adquiere color amarillento
rpidamente mientras que el resto de la hoja contina verde.
Inhibicin del crecimiento de los tallos: bloquea la secrecin de H
+
y evita la
acidificacin de la pared celular y la posterior elongacin celular.
Inhibicin de la elongacin celular.
Favorece la maduracin de semillas: debido a una acumulacin de ABA, se bloquea la
divisin celular y aumenta el contenido de sustancias de reserva en el interior de las
clulas. El ambiente ser favorable para que el embrin comience a germinar y de una
plntula.
Reduccin de la transpiracin: el aumento de ABA en el interior de las clulas
oclusivas, tiene lugar el cierre estomtico. (Relacionado con el control de la apertura
estomtica)
Participa en la formacin de frutos.
23
Detencin del crecimiento activo de rganos: en plantas anuales o plurianuales durante
la poca de condiciones adversas evitando elevados gastos energticos.
Participa en la tolerancia que tienen algunas plantas a condiciones de estrs.
Control de la apertura estomtica: (ver apartado siguiente).


EFECTOS In Vitro.

Esencial para la maduracin y crecimiento normal de embriones somticos.
Crioconservacin de rganos y semillas con bajo contenido hdrico. El menor
contenido hdrico disminuye la posibilidad de formar hielo que afecta negativamente la
viabilidad de estructuras, por tanto, la conservacin a bajas temperaturas es posible.

MECANISMO Y MODO DE ACCIN. RECEPTORES

El cido abscsico es responsable del cierre de estomas. De esta forma, se previenen la
prdida de agua a travs de las hojas y las necesidades hdricas de la planta.
Cuando el organismo vegetal se encuentra en condiciones de sequedad, sus niveles de ABA
aumentan hasta 40 veces. Se consigue as, una respuesta rpida que puede detectarse a los
pocos minutos.
En las clulas oclusivas parece que existen receptores especficos para ABA. Estos se
encuentran sobre la superficie exterior de la membrana plasmtica de dichas clulas y su unin
con el cido abscsico, regula la apertura de los canales inicos de la membrana y la actividad
de las bombas de protones (Fig.4) .

Mecanismo de accin de ABA en las clulas oclusivas de estomas:

(1) El ABA se enlaza en un receptor, todava sin caracterizar, situado en la membrana
plasmtica.
(2) El ABA produce la apertura de los canales de Ca
2+
, y una despolarizacin temporal
de la membrana.
(3) Esta despolarizacin temporal promueve la apertura de los canales de Cl
-
, que
posteriormente despolarizan la membrana.
(4) El ABA incrementa los niveles de IP
3
.
(5) El IP
3
abre los canales de Ca
2+
dependientes de IP
3
, produciendo una liberacin
de calcio desde la vacuola.
(6) El incremento del calcio citoslico activa la apertura de los canales de salida de Cl
-
e inhibe la de los canales de entrada de K
+
. Este flujo neto de cargas negativas se
traduce en una gran despolarizacin de la membrana.
(7) El ABA causa un incremento en el pH citoslico.
(8) Este incremento de pH, produce la apertura de los canales de K
+
y la salida de K
+

al exterior. La turgencia de las clulas oclusivas disminuye por ello, y los estomas
se cierran.

25.- GIBERELINAS. Introduccin. Localizacin y descubrimiento.
Naturaleza qumica. Biosntesis. Transporte. Niveles endgenos.
Efectos fisiolgicos. Valoraciones biolgicas. Modo de accin.


Introduccin
Las giberelinas son reguladores de crecimiento que van a transmitir a las clulas los mensajes
necesarios para influir sobre el desarrollo y diferenciacin de los tejidos. A pesar de que no se
han encontrado receptores especficos, se sabe que concentraciones diferenciales de este
regulador provocan distintos efectos fisiolgicos en la planta como la elongacin celular
(general).
24

Localizacin
Para su localizacin a nivel experimental se marc la molcula para hacer su seguimiento y se
aplic a un cultivo. ste se tritur, se someti a un extracto bruto y se hizo una separacin
diferencial: fracciones proteicas de pared, ncleo, mitocondriaetc. A continuacin se midi la
cantidad de radiactividad y donde estaba presente y donde no. En donde estaba presente, se
purific hasta una protena especfica y se compar una con radiactividad y otra sin.
Posteriormente se busc si esa protena especfica poda unirse a una molcula del tipo
regulador de crecimiento.
Como resultado se observ que diferentes tipos de giberelinas se asociaban de forma
diferencial a distintas fracciones proteicas.

Descubrimiento
Los japoneses descubrieron en 1926 unas sustancias con propiedades reguladoras del
crecimiento al estudiar una enfermedad del arroz causada por el hongo Fusarium moniliforme
que se denomin Gibberella fujikuroi, establecindose como el agente causal. Las plantas
atacadas por esta enfermedad eran ms altas y delgadas aunque casi no tenan
lignificacin(Fig. 1) y lo llamaron sndrome de las plantas locas, siendo el mismo genotipo
aparecan dos fenotipos diferentes. Se analiz el hongo tomando el lquido de extraccin y el
propio hongo, a la sustancia que ste excretaba se la denomin giberelina

Estos trabajos permanecieron ignorados hasta los aos cincuenta, cuando unos investigadores
americanos identificaron una sustancia a la que denominaron Giberelina X. Al aplicarla a una
planta sana, sta creca mucho en longitud. Haciendo una cromatografa de alta resolucin
junto con un espectofotmetro de masas, se separaron todos los componentes de una muestra
problema que saba contena la giberelina. Como resultado se descubrieron tres compuestos
de giberelinas.

Naturaleza qumica
Las giberelinas son diterpenoides cidos derivados del hidrocarburo tetracclico ent-kaureno.
La mitad de las giberelinas poseen 20 tomos de carbono, el resto han perdido el tomo de
carbono nmero 20 durante su biosnteis, por lo que tienen slo 19 tomos de carbono. De
estos ltimos la molcula ms activa es el GA
3
o cido giberlico (Fig.2). El subndice indica,
cronolgicamente, el momento de su descubrimiento.

Fig 2.Estructura del cido giberlico, GA3

Cualquier molcula con estructura diterpenoide y
19 tomos de carbonos va a ser seguro una
giberelina.
Biosntesis
Las giberelinas deben derivar de la va del
isopreno, considerando como precursor el
kaureno, aunque ste a su vez deriva del cido
mevalnico (AMV) (Fig.3). Esta transformacin
se produce en los proplastidos y no en cloroplastos maduros, por qu?
Porque los terpenoides al ser estructuras abiertas deben experimentar una ciclacin, y una
parte de sta se produce en los proplastidios, en concreto la formacin de ent-kaureno (Fig. 4)
25

Fig 3. Esquema general de
la ruta de biosntesis

Por esto, la biosntesis de
giberelinas va a estar limitada
por la presencia de
proplastidios.
La transformacin del ent-
kaureno a giberelinas activas
se produce en el citoplasma
por meras hidroxilaciones o
por cambios isomricos (Fig.3)






Fig 4. Ciclacin del GGDP a ent-kaureno

Transporte
Las giberelinas localizadas en las hojas se desplazan junto con los productos de la fotosntesis
en el floema, aunque tambin puede haber transporte en el xilema probablemente por
desplazamiento radial desde el floema al xilema.
A diferencia de lo que suceda con las auxinas, no existe transporte polar de las giberelinas.


Niveles endgenos
Las giberelinas se producen en pices de tallos y races, hojas en expansin, frutos y semillas
en desarrollo.
Se producen cuando se necesitan, por ejemplo en semillas en germinacin se produce un
aumento brusco al aumentar la semilla de tamao, lo que las hace muy tiles para el estudio de
su biosntesis.

Efectos fisiolgicos
Las giberelinas, en general, favorecen la elongacin celular, sobretodo de forma muy
especfica en plantas que son mutantes enanos o en aquellas que de alguna forma tienen
reprimidos los genes de la ruta biosinttica de giberelinas. Hay que destacar que gracias a este
tipo de plantas se pudo descubrir la ruta biosinttica.
Preferentemente producen elongacin caulinar afectando a componentes de membrana, y a
travs de modificaciones de sta consiguen una elongacin diferencial.
En planta:
Promueven floracin (en especies que requieren da largo, que necesitan mas horas de
luz, y/o fro, lo que se conoce como vernalizacin)
Promueven la formacin de conos en conferas, ya que son reguladores del sexo,
especialmente de conos masculinos. Hay distintas giberelinas segn el tipo de cono.
26
Estimulan la germinacin de semillas que tengan algn tipo de problema para llevar a
cabo el proceso ya que facilitan la movilizacin de sustancias de reserva activando sus
enzimas de degradacin.
Estimulan la elongacin de tallos, como se dijo anteriormente, pero el problema es que
no va acompaado de lignificacin y los tallos son bastante dbiles.


Valoraciones biolgicas
La mayora de los avances realizados en el conocimiento de las giberelinas se basan en
resultados obtenidos con los bioensayos. Uno de los tratamientos ms usuales es ver el efecto
que producen concentraciones crecientes de una muestra sobre un proceso fisiolgico que
sabemos que inducen las giberelinas, como por ejemplo: (Fig.5)



Fig 5. Bioensayos ms utilizados en la
valoracin de giberelinas

A) Procesos de elongacin
del epictilo del guisante


B) Elongacin de la vaina de
maz enano


C) Elongacin del hipoctilo
de lechuga


D) Endospermo de cebada



E) Retraso de la senescencia



Modo de accin
Las giberelinas activan determinados genes, provocando la sntesis de macromolculas de
ARNm especficas que, a su vez, dirigen la sntesis de enzimas.
Se puede decir que ejercen efectos postranscripcionales, especficamente en mensajeros que
codifican para -amilasa