MTODO DE WEENDE OU ANLISE PROXIMAL

- Matria seca
- Protena bruta
- Fibra bruta
- Extrato etreo
- Matria Mineral
- Extrativos no nitrogenados amido e carboidratos solveis
UMIDADE DE GUA
feita por um equipamento chamado estufa a uma temperatura de 100 a 105 graus C.
Alimentos volumosos, precisam de uma pr secagem 55, 60 numa estufa ventilada, antes de irem para a
estufa definitiva.
Problema: Algumas substncias como Acares e cidos Orgnicos so perdidos.
Alternativa: Utilizao de uma estufa a vcuo a uma temperatura de 75 graus ou destilao com
Tolueno, porm esses mtodos so muito demorados e caros.
MATRIA MINERAL (MM)
Resultado da queima da amostra MM = MS - MO
Mufla (forno) a 600 C por 4 horas
A MO compreende a poro do alimento que fornece energia para o metabolismo animal MO = 100 - MM
Problema:
Anlise no precisa representando apenas o somatrio de todos os minerais
PROTENA BRUTA (PB)
Mtodo de Kjeldahl: determinao atravs do N total
Determina N contido na MO incluindo o N protico e outros compostos nitrogenados no proticos,
como aminas, amidas, nitrilas e aminocidos
Considera que as protenas possuem 16% de nitrognio

100 g de protena ---------- 16 g de N
x ---------- 1 g de N
x = 100/16 = 6,25
O procedimento do mtodo baseia-se em trs fases:
- Digesto: Compostos nitrogenados so decompostos na presena de cido sulfrico
concentrado a quante com produo de sulfato de amnio.
- Destilao: O sulfato de amnio resultante, na presena da soluo concentrada de hidrxido
de sdio, libera a amnia que recebida na soluo de cido brico.
No fornece
informaes
suficientes sobre a
frao carboidratos
da amostra
Fator geral na transformao de nitrognio para protena 6,25.

- Titulao: O teor de N da amostra determinado atravs da titulao com cido sulfrico ou
clordrico de fator conhecido at a viragem do indicador.
Problemas:
Parte do N no alimento no est na forma de protena (N no protico): superestima o valor de PB
Utilizao de fator nico pode trazer quando o contedo em N de um alimento muito diferente de
16%, nem toda protena tem 16% de Nitrognio. Nestes casos, existem os fatores de converso
especficos para cada alimento:
- trigo: 5,70 - leite: 6,38 - gelatina: 5,55
Nem todo Nitrognio protico (Aminas, Nitratos, anitratos, Amidas).
Ruminantes transformam o nitrogenio no protico em proteico pela ao da flora ruminal.

EXTRATO ETREO (EE)
Lipdeos Compostos insolveis em gua, mas solveis em solvente orgnico
Extrao por ter gorduras, leos, pigmentos e outras substncias solveis
O ter aquecido no processo volatiliza e ao condensar-se circula sobre a amostra arrastando a frao solvel em
ter. O material solvel extrado depositado em bales e o valor calculado por diferena de pesagem
# SUBSTNCIAS COM VALOR ENERGTICO: Triglicerdios, Lecitina e cido Graxo.
# SUBSTNCIAS SEM VALOR ENERGTICO: Clorofila, Aldedos, steres, etc.
# POR QUAIS MOTIVOS SE DEVE FAZER A DETERMINAO DE GORDURA?
- A gordura produz 2,25 vezes mais energia que carbohidratos e protenas;
- Dependendo da quantidade de cidos Graxos insaturados o alimento estragar mais ou menos;
- Fazer uma rao Peletizada atravs da gordura;
- A gordura torna o alimento mais atraente e com maior aceitao (paladar).
Problema:
Material extrado no representa apenas gordura, mas tambm outros compostos como ceras, vitaminas
lipossolveis e pigmentos (forragens)
FIBRA BRUTA (FB)
Representa a frao fibra dos alimentos Parede celular
Anlise solubiliza "teoricamente" o contedo celular da amostra
FB = Hemicelulose + Celulose + Lignina
Amostra submetida a uma digesto com soluo cida por 30 minutos seguida de digesto com soluo bsica
por mais 30 minutos
Material resultante da filtragem considerado FB
Problema:
- A hemicelulose e a lignina so parcialmente solveis em solues bsicas, portanto parte dessas fraes so
perdidas na anlise de FB subestimando seu valor
- uma anlise quantitativa e no qualitativa;
- Quanto maior a concentrao de Lignina, menos aproveitado o alimento, porque no carboidrato, no
digestvel, contendo mais em pasto velho=mais fibra.
EXTRATIVOS NO NITROGENADOS (ENN)
Extrativos No Nitrogenados (ENN): um valor calculado a partir da soma de PB, FB, EE e MM, expressos
em termos de MS e subtrado de 100. Representa os carboidratos de mais fcil digesto, como os acares e o
amido.
Frao obtida por diferena:ENN = 100 - (PB + FB + EE + MM)
Representa os carboidratos solveis (acares e amido)
Problemas:
- Todos os problemas observados nas anlises anteriores concentram-se nessa frao
- A hemicelulose e lignina solubilizadas pela anlise de FB so computadas como ENN originando em alguns
casos dados de digestibilidade inferiores para ENN em relao FB
- O EE determinado, principalmente de forragens, no totalmente fonte de gordura, contendo pigmentos que
no tem valor energtico para o animal

MTODO DE VAN SOEST
Mtodo de Weende no era mais suficiente para caracterizao dos alimentos
Vans Soest desenvolveu um mtodo para determinao da qualidade de forrageiras baseado na separao das
diversas fraes por meio de reagentes especficos (detergentes)
- Fibra em detergente neutro
- Fibra em detergente cido
- Lignina
- Carboidratos no fibrosos
um mtodo quantitativo e qualitativo utilizado com ruminantes que divide a clula vegetal em 2
compartimentos:
1) CONTEDO CELULAR: substncias mais solveis como Acares, Amido, Protena, Lipdios e cidos
Orgnicos.
2) PAREDE CELULAR: substncias e compostos menos solveis.
# FDN (Fibra Detergente Neutra): separa o Contedo Celular da Parede celular.
# FDA (Fibra Detergente cida): separa a Celulose da Hemicelulose, atravs de uma mistura de Permanganato
de Potssio e cido Sulfrico aplicada a Celulose e a Hemicelulose.
FIBRA EM DETERGENTE NEUTRO (FDN)
Frao potencialmente digestvel mas de degradao lenta
Anlise solubiliza o contedo celular da amostra + pectina
FDN = Hemicelulose + Celulose + Lignina
Processo baseado na insolubilidade da hemicelulose, celulose e lignina em soluo de pH neutro
Diviso da amostra
em contedo celular
e parede celular
Contedo celular + Pectina

Amostra Hemicelulose + Celulose + Lignina
FF
Problemas:
No solubiliza amido e N ligado a parede celular
No solubiliza todos os minerais

FIBRA EM DETERGENTE CIDO (FDA)
Frao de menor digestibilidade do alimento
Anlise solubiliza o contedo celular e a hemicelulose da amostra
FDA = Celulose + Lignina
Processo baseado na insolubilidade da celulose e lignina em soluo de pH cido

Amostra Celulose + Lignina

Problema :
No solubiliza pectina
No solubiliza todos os minerais

LIGNINA
Composto fenlico NO CARBOIDRATO
Frao indisponvel para digesto e liga-se a outros compostos comprometendo sua digesto
Anlise deve ser realizada sequencial FDA
Mtodos:
- Mtodo do Permanganato Solubiliza lignina

Amostra submetida FDA Celulose
- Mtodo do H
2
SO
4
(Klason) Solubiliza celulose

Amostra submetida FDA Lignina
Problema:
A cutina presente na epiderme dos vegetais no solubilizada por qualquer um dos mtodos podendo
trazer erros a anlise. O correto utilizar os dois mtodos de forma sequencial determinando a
concentrao exata de cutina para efetuar correes.

Soluo pH neutro / 1 hora
Filtragem
Contedo celular + Hemicelulose
Soluo pH cido / 1 hora
Filtragem
Superestima
valor de FDN
Lignina
Celulose
Superestima
valor de FDA

FRACIONAMENTO DE CARBOIDRATO E PROTENA SEGUNDO O SISTEMA CNCPS*
De acordo com o sistema CNCPS, a protena e os carboidratos utilizados na alimentao dos ruminantes so
fracionados em relao sua composio qumica, caractersticas fsicas, degradao ruminal e digestibilidade
intestinal. Com a estimativa dos parmetros cinticos dessas fraes no trato gastrintestinal, possvel adequar
o fornecimento de raes, visando mxima eficincia de sntese de protena microbiana. Ademais, possvel
reduzir perdas energticas e nitrogenadas decorrentes da fermentao ruminal pela melhor formulao de
dietas visando maximizar a sincronizao da degradao entre nitrognio e carboidratos no rmen.
O sistema Weende para anlise proximal utilizado para medir componentes como fibra bruta, extrato etreo,
matria seca e nitrognio total, sendo o extrato no-nitrogenado (ENN) calculado por diferena. Entretanto,
este sistema no pode ser usado para predizer de forma mecanicista o crescimento microbiano, porque a fibra
bruta no representa toda a fibra diettica, o extrato no nitrogenado (ENN) no representa acuradamente os
carboidratos no-fibrosos e a protena precisa ser descrita por fraes relacionadas com as suas caractersticas
de degradao ruminal. Este sistema foi amplamente utilizado, por mais de um sculo, na quantificao da
protena e energia sem levar em considerao as diferentes fraes disponveis nos alimentos.
O CNCPS assume que os alimentos so compostos por protena, carboidratos, gorduras, minerais, vitaminas e
gua. Carboidratos e protenas so subdivididos pela composio qumica, caractersticas fsicas, por suas taxas
de degradao e caractersticas de digestibilidade ps-ruminal, de modo a poder predizer valores de energia
lquida e de protena metabolizvel para cada alimento, com base nas interaes entre essas variveis. As
fraes de carboidratos e protenas bem como suas taxas de degradao so utilizadas para computar a
quantidade de nutrientes disponveis para dar suporte fermentao ruminal para cada um dos grupos de
microrganismos.
PROTENA
A protena contida nos alimentos dos ruminantes composta por uma frao degradvel no rmen (PDR) e uma
frao que escapa da degradao ruminal (PNDR). A degradao de protenas no rmen ocorre por meio da
ao de enzimas secretadas pelos microrganismos ruminais.
As exigncias em protena metabolizvel dos ruminantes so atendidas pela protena microbiana sintetizada no
rmen e pela protena diettica que escapa fermentao ruminal, o que torna a nutrio proteica dos
ruminantes bastante complexa. O modelo denominado CNCPS apresenta um procedimento mais complexo para
determinar a PDR e PNDR dos alimentos. Esse modelo utiliza reagentes qumicos para determinar as fraes
proteicas que so divididas em cinco: A, B1, B2, B3 e C. A frao A representa os componentes nitrogenados de
natureza no proteica (NNP) que instantaneamente solubilizada e sua taxa de degradao tende ao infinito,
sua determinao qumica realizada como a proporo da protena solvel em soluo de tampo borato-
fosfato que no precipita em cido tricloroactico (TCA). A frao C representa a protena que est ligada a FDA
e no degradada no rmen, contm protenas associadas lignina, taninos e produtos da reao de Maillard,
sendo conhecida como protena insolvel em detergente cido, ou PIDA. A frao B representa a frao
potencialmente degradvel e dividida em trs fraes de acordo com suas taxas de degradao, sujeitas aos
efeitos de passagem. A frao B1 representa a frao da protena solvel em tampo borato-fosfato, mas que
precipita em TCA (rapidamente degradada no rmen). A frao B3 calculada como a diferena entre a frao
da protena recuperada no resduo insolvel em detergente neutro (FDN) e a recuperada no resduo insolvel
em detergente cido (FDA). Essa frao representa a protena potencialmente degradvel existente na parede
celular das plantas, sendo lentamente degradada no rmen. A frao B2 representa a frao de protena
insolvel em tampo-borato presente no contedo celular, sendo obtida pela diferena entre o valor total da
protena do alimento e a soma das fraes A, B1, B3 e C e apresenta taxa de degradao intermediria.
Porm, em alguns trabalhos, tem-se utilizado somente quatro fraes proticas (A, B1, B2 e C) em vez de cinco
(A, B1, B2, B3 e C), devido s fraes B1 e B2 encontrarem-se no contedo celular e se comportarem de forma
nutricionalmente uniforme. Alm disso, as tcnicas laboratoriais utilizadas nesse fracionamento so mais
simples, tornado tais procedimentos mais acessveis s anlises de rotinas nos laboratrios.
CARBOIDRATOS
Os carboidratos so os principais constituintes das plantas forrageiras, correspondendo de 50 a 80% da MS das
forrageiras e cereais. As caractersticas nutritivas dos carboidratos das forrageiras dependem dos acares que
os compem, das ligaes entre eles estabelecidas e de outros fatores de natureza fsico-qumica (VAN SOEST,
1994). A fermentao de carboidratos no rmen leva produo de cidos graxos volteis, que so as principais
fontes de energia para os ruminantes. A composio qumica, caractersticas fsicas e cinticas de digesto so
caractersticas dos carboidratos que influenciam o consumo de matria seca, digesto e utilizao da rao
total. Os carboidratos so classificados em estruturais, presentes na parede celular, e no estruturais presentes
no contedo celular. Porm, a pectina trata-se de um carboidrato estrutural presente na parede celular, mas
que possui taxa de degradao similar ao dos constituintes do contedo celular. Dessa forma, a classificao
proposta refere-se s caractersticas estruturais que os carboidratos apresentam na planta e no s
caractersticas nutricionais. Em termos nutricionais, a classificao dos carboidratos em fibrosos (CF) e no-
fibrosos (CNF) tem por base as caractersticas nutritivas e no a funo estrutural exercida na planta. Nessa
classificao, os CNF representam as fraes degradadas mais rapidamente e incluem os acares, amido e a
pectina. Os carboidratos fibrosos (CF) esto presentes na parede celular e incluem a celulose e a hemicelulose,
os quais so lentamente degradados e ocupam espao no trato gastrintestinal (TGI). Associados parede celular
podem ser encontrados componentes qumicos de natureza diversa, como a lignina. Esta tem a natureza de um
polmero fenlico que se associa aos carboidratos fibrosos, celulose e hemicelulose, durante o processo de
formao da parede celular e est correlacionada indigestibilidade dos nutrientes.
Segundo o sistema CNCPS os carboidratos totais so classificados em quatro fraes, de acordo com suas taxas
de degradao no rmen:
Frao A - acares solveis prontamente degradados e que apresentam taxa de digesto de 250 a 500%/h;
Frao B1 - compreende os carboidratos no-fibrosos (amido e pectina) com fermentao intermediria de 30 a
70%/h;
Frao B2 - compreende os carboidratos fibrosos, celulose e hemicelulose, com lenta taxa de degradao (3 a
20%/h);
Frao C - parte indegradvel dos componentes fibrosos presentes na parede celular, composta principalmente
pela lignina (NRC, 1996).
O modelo CNCPS considera como carboidratos fibrosos as fraes B2 e C, que representam, respectivamente, a
fibra potencialmente digestvel e a indisponvel, ambas presentes na parede celular. Os carboidratos no-
fibrosos so representados pelas fraes A e B1, que correspondem aos acares, amido e pectina. Esta ltima,
apesar de estar presente na parede celular das plantas, apresenta degradao ruminal prxima aos
constituintes do contedo celular. Segundo o sistema CNCPS, os carboidratos no-fibrosos (acares, amido e
pectinas) so computados como 100 - (PB + FDNcp + EE + MN), em que PB, FDNcp, EE e MN correspondem,
respectivamente, protena bruta, fibra em detergente neutro corrigido para cinzas e protena, extrato etreo e
minerais.

ESTUDO DOS PRINCIPAIS MICROORGANISMOS DO RMEN
O rmen um ecossistema anaerbio, caracterizado pelo seu poder tampo, temperatura, pH e fermentao,
assim este fica favorvel aos microorganismos.
O principal interesse produtivo do ruminante esta na capacidade de aproveitar os nutrientes na digesto
microbiana. No rmen e no ceco, o desenvolvimento desta microflora e microfauna permitem o
aproveitamento eficiente de vrios nutrientes, principalmente para produo de energia, essencial na
manuteno corporal e produo do bovino, demonstrando assim a simbiose com o animal.
A microbiologia do rmen extremamente completa, devido ao grande nmero de organismos presentes,
sendo que suas diferentes naturezas e as mudanas da populao, resultam na mudana da dieta do animal
hospedeiro. Desta forma, o rmen funciona como uma cmara de fermentao, devido a uma srie de
mecanismos fisiolgicos do hospedeiro.
A ao da populao microbiana ruminal sobre o substrato (alimento do hospedeiro) tem especial importncia,
pois constitui a base da fisiologia digestiva dos ruminantes. Celulose e hemicelulose representam a maior fonte
potencial de energia para os animais herbvoros, aps a degradao pelos complexos enzimticos de
microorganismos animais. Alm dessa fundamental capacidade hidroltica, estes microorganismos reduzem
acentuadamente o volume de matria seca que passa poro ps-ruminal do trato digestivo.
O AMBIENTE MICROBIOLGICO DO RMEN
O rmen apresenta caractersticas peculiares que o tornam um ecossistema anaerbico propcio para o
desenvolvimento microbiano. Neste ambiente podem se encontrar tambm leveduras, principalmente em
animais jovens.
A temperatura ruminal est mdia entre 38 a 42 C e mantida por mecanismos homeotrmicos do
hospedeiro. O pH pode variar de 5 a 7, de acordo com o tipo de alimento ingerido, tempo de amostragem e
freqncia de fornecimento de alimentos ao hospedeiro.
Os protozorios do rmen so mais sensveis que as bactrias e podem mesmo vir a desaparecer se o pH
ultrapassar 7,8 ou decrescer abaixo de 5 embora as espcies bacterianas tenham seu crescimento reduzido em
pH menor que 5.
A capacidade de troca catinica do alimento ingerido e o volume de saliva afetam a capacidade tampo do
contedo ruminal, j a baixa concentrao de oxignio no rmen favorece o desenvolvimento de
microorganismos anaerbicos - bactrias anaerbicas facultativas; apesar dos microorganismos serem
predominantemente anaerbicos, eles podem suportar algum oxignio que chega ao rmen atravs do
alimento, gua e difuso atravs da parede ruminal. Este oxignio rapidamente metabolizado e serve como
doador de eltrons na fermentao. Os produtos resultantes da fermentao so continuamente removidos,
no havendo acumulao.
Inmeras espcies de microorganismos podem ser encontradas no rmen, porm a classificao destas como
partes da microbiota ruminal s possvel se forem satisfeitos os seguintes requisitos: ser anaerbio;
apresentar populao mnima de 1000000 clulas/g de contedo ruminal fresco; ter sido isolada pelo menos
dez vezes em dois ou mais animais; ter sido isolada em pelo menos duas diferentes localizaes geogrficas e
produzir subprodutos encontrados no rmen.
A enorme diversidade de organismos ruminais pode ser devida complexidade do substrato. Sobrevivem e
predominam as espcies que possuam em seu material gentico as informaes para a sntese de enzimas que
compe as vias metablicas mais eficientes no aproveitamento da energia contida no substrato.
BACTRIAS RUMINAIS
Apesar do papel dos protozorios e fungos do rmen, claro que so as bactrias os microorganismos mais
ativos na atividade enzimtica, apresentando assim mais de 20 espcies, com uma populao entre
1.000.000.000 a 10.000.000.000 de clulas/g de contedo ruminal. A maioria composta por bactrias
anaerbicas obrigatrias, podendo ser encontradas anaerbicas facultativas. Usualmente as bactrias so
classificadas de acordo com a atuao de cada grupo no processo fermentativo.
Bactrias celulolticas tm a habilidade bioqumica de produzir a enzima extracelular celulase, atravs da
hidrlise da celulose. As celulases da maioria dos microorganismos celulolticos esto associadas s clulas
aderidas firmemente s partculas fibrosas do contedo ruminal. A adeso inicial feita atravs do glicoclice,
medida que a celulase vai degradando a fibra, fragmentos do envelope celular passam a compor a matriz de
glicoclice, dentro da quais as celulases continuam a digerir a celulose. Os cidos graxos de cadeia ramificada
so necessrios ou estimulatrios para o crescimento das bactrias celulolticas.
As espcies celulolticas produzem, principalmente, acetato, propionato, butirato, succinato, formato, CO2 e H2.
So liberados tambm etanol e lactato. As principais espcies celulolticas so Ruminococcus flavefaciens,
Ruminococcus albus, Bacteroides succinogenes e Butyrivibrio fibrisolvens.
Bactrias Amilolticas so as responsveis pela degradao do amido (que se d pela enzima amilase), que
fermentado por espcies do gnero Bacteroides, dentre estas, Bacteroides amylophilus que utiliza amido, mas
incapaz de utilizar glicose ou outros monossacardeos. J Streptococus bovis e Selenomonas ruminantium
fermentam amido e acares solveis produzindo acetato, quando estes carboidratos so abundantes mudam
para acetato, formato e etanol ou acetato e propionato, quando a concentrao de substrato prontamente
fermentvel decresce. Esta ltima rota metablica maximiza a produo de ATP.
Muitas das bactrias Proteolticas presentes no rmen so capazes de degradar protena. Existem, no entanto,
bactrias essencialmente proteolticas, que utilizam aminocidos como fonte de energia primria (Bacteroides
amylophilus e Bacteroides ruminicola). A protena contida no alimento do animal pode ser degradada pelos
microorganismos de rmen, com liberao de amnia e cidos graxos volteis. A excessiva degradao protica
no rmen causa reduo na reteno de N pelo hospedeiro.
As Bactrias Metanognicas (anaerbias estritas) so organismos capazes de produzir metano. Estas bactrias
so especialmente importantes para o ecossistema ruminal, pois tem um papel importante na regulao de
fermentao pela remoo das molculas de H2. Praticamente todo o metano produzido pelas reaes de
reduo de CO2 acoplada ao fornecimento de eltrons pelo H2. O gnero Methanobacterium desempenha
importante papel no equilbrio qumico no ecossistema ruminal ao utilizar o H2 presente no meio, contribuindo
para a regenerao de co-fatores, como NAD+ e NADP+.
OS PROTOZORIOS DO RMEN
Os protozorios foram os primeiros microorganismos identificados no rmen. Em geral, a presena de
protozorios aumenta diretamente a digesto da celulose e hemicelulose. Sua populao de 100.000 a
1.000.000 clulas/ml de contedo ruminal. So organismos unicelulares, anaerbios, no patognicos, 10 a 100
vezes maiores que as bactrias. As bactrias constituem a fonte preferida de nitrognio para os protozorios.
Esta predao reduz significamente o nmero de bactrias no lquido ruminal. Uma caracterstica peculiar dos
protozorios o quimotactismo, isto , a capacidade de se locomoverem num gradiente de concentrao de
nutrientes, como, acares ou glicoprotenas. A subclasse Holotrica capaz de se fixar parede do retculo e
imigrar em direo ao rmen logo aps a alimentao do hospedeiro, possivelmente em funo do
aparecimento de acares solveis. Atravs deste mecanismo so seletivamente retidos no rmen, o que
permite a estes organismos sobreviver neste ambiente, uma vez que tm um tempo de gerao muito longo.
A predao por grandes populaes de protozorios reduz a biomassa bacteriana livre no lquido ruminal;
aumenta a reciclagem intra-ruminal e a perda de N pelo hospedeiro e reduz o fluxo de protena microbiana para
o intestino delgado do hospedeiro, tanto pela menor populao bacteriana quanto pela reteno dos
protozorios no rmen. A defaunao - que nutricionalmente definida como a eliminao dos protozorios do
rmen pode trazer alguns benefcios. Em alguns programas de alimentao, como em dietas com alta energia
e ricas em nitrognio no protico a ausncia dos protozorios resulta numa melhoria da performance do
animal. Mas contrapondo a presena de protozorios no rmen parece ser um fator fundamental para o
processo fermentativo, pois atravs da ingesto de partculas alimentares e pelo armazenamento de amido,
eles podem controlar o nvel de substrato disponvel, uniformizando a fermentao entre os intervalos de
alimentao. Os protozorios podem servir tambm como uma fonte contnua de nitrognio para as bactrias
aps sua morte e degradao, pois grande parte da protena do protozorio foi formada a partir da protena das
bactrias.
FUNGOS DO RMEN
Um grupo de ficomicetos anaerbios produtores de zosporos flagelados, antes considerados, erroneamente,
como protozorios flagelados, parte integrante da microbiota ruminal de animais alimentados com dietas
fibrosas (RUSSELL, 1988). Pouco ainda se sabe sobre a importncia dos fungos no processo fermentativo, mas
parece que eles esto associados com a degradao da fibra no rmen e esto presentes em grande nmero
quando a dieta rica em forragens. Os zosporos mveis aderem-se aos fragmentos das forragens, invadindo
os tecidos vegetais atravs de talos e rizides. A ao dos fungos sobre a parede vegetal diminui a rigidez
estrutural das forragens, e favorece a ruptura das partculas de forragens, aumentando tambm a superfcie
acessvel para a ao das bactrias.
DISTRIBUIO E VARIAES DOS MICROORGANISMOS RUMINAIS
O rmen apresenta contedo heterogneo composto pelas digestas lquida e slida, sujeitas a fluxos diferentes
e distribuio distinta da microbiota. Divide-se a microbiota em trs populaes bsicas: a populao do lquido
ruminal, a dos microorganismos aderentes frao slida da digesta e a populao ligada parede do rmen. A
primeira compreende a poro mais investigada, devido aos mtodos clssicos de coleta de amostra e cultivo
do contedo ruminal. Os autores incluem nesta populao os microorganismos aptos a colonizarem alimentos
recm-ingeridos ou superfcies de tecidos recm-expostos, o que os leva a atribuir-lhes grande atividade
metablica. A populao aderente frao slida est relacionada com a degradao dos alimentos fibrosos.
Um grupo totalmente distinto ocorre na parede do rmen. So anaerbios facultativos, que digerem clulas
epiteliais mortas e apresentam importante atividade ureoltica, num ambiente situado na interface entre o
tecido bem oxigenado e o contedo ruminal anaerbio. A populao microbiana encontrada no rmen,
normalmente pode sofrer uma pequena variao, dependendo da espcie de animal, da localizao geogrfica,
da dieta e outros. A variao entre o nmero e quantidade de bactrias no rmen, em geral muito pequena,
quando comparada com a variao na populao de protozorios, estes podem variar em nmero e tipo entre
animais de mesmo grupo gentico. Algumas vezes, a variao na populao de protozorios pode afetar a
populao bacteriana, devido a predao existente entre estes microorganismos.

Manipulao da fermentao ruminal: sade animal e qualidade do produto final
Atualmente, com a intensificao dos sistemas de produo de bovinos decorrente tanto do aumento das
exportaes quanto da exigncia do consumidor, faz-se necessrio recorrer a ferramentas que permitam
pequenos ajustes no sistema para que se possa explorar o mximo potencial produtivo do animal. Dentro
dessas ferramentas, a manipulao da fermentao ruminal para melhorar o desempenho produtivo de bovinos
e ruminantes em geral tem sido o sonho de alguns nutricionistas por dcadas. Essa manipulao da
fermentao um esforo que levou a extensa pesquisa na rea de microbiologia ruminal nas ltimas dcadas,
com o objetivo de controlar algum processo metablico no rmen, atingindo assim uma utilizao mais
eficiente dos nutrientes. Alguns dos objetivos da manipulao da fermentao ruminal incluem: melhorar
processos benficos e minimizar, alterar ou eliminar processos ineficientes que levem prejuzos tanto para os
microorganismos do rmen quanto para o hospedeiro.
Assim sendo, a descrio de um distrbio metablico em ruminantes conhecido como acidose, principal fator
que leva ao uso de alguns antibiticos nos sistemas de produo de ruminantes e quatro dos principais tipos de
modificadores de fermentao ruminal utilizados: os probiticos, leveduras, ionforos e imunizao contra
especficas populaes de bactrias ruminais, sero revisados neste trabalho.
2. ACIDOSE RUMINAL
O sucesso dos ruminantes pode ser largamente explicado pela habilidade destes em digerir materiais
fibrosos. O fato destes animais possurem microorganismos que produzem enzimas que degradam fibra d a
eles uma vantagem competitiva em relao aos outros animais na natureza. No entanto, altos nveis de
produtividade no podem ser sustentados por forragens apenas e frequentemente gros e seus subprodutos
so utilizados na produo de ruminantes.

Em conseqncia disso, quando bovinos so submetidos a dietas de alto concentrado (gros em geral) ou
so rapidamente passados de uma dieta de alta forragem para outra de alto concentrado, uma srie de
processos fisiolgicos so ativados resultando num distrbio metablico conhecido como acidose. Mudanas
ruminais iniciam severas mudanas sistmicas: aumento dos cidos orgnicos principalmente o cido ltico,
reduo do pH, reduzida motilidade, rumenitis e paraqueratose. Estas mudanas estabelecem condies para
penetrao de determinadas bactrias (Fusobacterium necrophorum) atravs da parede ruminal, as quais
chegam ao fgado podendo causar abscessos. Desse modo, a eficincia heptica prejudicada, levando a um
desempenho animal diminudo. Outros eventos que acontecem simultaneamente esto associados com o
aumento da presso osmtica ruminal, diminuio do volume extracelular resultando em desidratao,
batimentos cardacos inconstantes, diminuio da circulao sangunea perifrica, reduo do fluxo de sangue
para os rins, choque e morte.
O perfil de microorganismos no rmen tambm sofre mudana, h um aumento na populao de bactrias da
espcie Streptococcus bovis e das bactrias que produzem cido ltico. Concomitantemente h uma reduo no
nmero dos microorganismos consumidores de cido ltico (Megasphera elsdenii e Selenomonas ruminantium)
causando um acmulo ruminal do mesmo. A partir do momento que o pH ruminal cai abaixo de 5,2, o
crescimento de bactrias Streptococcus bovis inibido, mas bactrias do gnero Lactobacillus encontram
ambiente favorvel para se proliferar, preenchem este nicho e continuam a produzir cido ltico em pH menor
que 5.
As perdas econmicas so mais acentuadas em quadros de acidose subclnica do que em acidose clnica, pois os
sintomas na maioria dos casos no so evidentes como em casos clnicos de acidose, em funo da reduo do
desempenho animal, causada por uma menor ingesto de matria seca nos confinamentos. Quadros de acidose
so caracterizados quando o pH cai abaixo de 5,6. H dois tipos de acidose de acordo com o pH e produo de
cidos orgnicos: acidose subclnica na faixa de pH entre 5,6 e 5,2 e caracterizada pela alta concentrao de
cidos graxos volteis; acidose clnica em pH menor que 5,2 e caracterizada pelo acmulo de cido ltico.
3. ADITIVOS ALIMENTARES
3.1. Probiticos
So organismos vivos e geralmente esto presentes em suplementos bacterianos que causam um efeito
benfico para o animal, nesse caso o ruminante. A idia de inocularem ruminantes com microorganismos
benficos no recente. Por anos, produtores, zootecnistas, veterinrios tm estado transferindo fludo
ruminal de ruminantes saudveis para doentes com o objetivo de restabelecer a flora ruminal na ordem de
restaurar os padres normais de fermentao do ruminante. Efeitos benficos que os probiticos tm sobre os
animais so diversos. Vrios autores relataram um aumento do ganho de peso dirio ou uma melhora da
ingesto de matria seca. Outros pesquisadores relataram melhoramentos na sade animal e/ou da qualidade
do produto final pela reduo de microorganismos indesejveis, como E. coli, quando probiticos foram
oferecidos. Esses efeitos benficos podem ser mediados por efeitos antagonsticos diretos contra grupos
especficos de organismos, resultando no decrscimo de suas populaes, pelo efeito direto sobre metabolismo
microbiano ou pela estimulao da resposta imune do hospedeiro.

Provavelmente um dos mais interessantes efeitos benficos dos probiticos seja a habilidade de melhorar o
desempenho dos animais. Esse fenmeno de particular interesse dos animais confinados, aonde o ganho de
peso dirio e a converso alimentar so pontos chave para determinar o sucesso econmico do sistema. Um
melhor desempenho pode ser devido a vrios mecanismos resultado da alimentao com probiticos. Um dos
efeitos mais comumente observados so aqueles em que bactrias consumidoras de lactato so oferecidas,
fazendo com que haja a reduo da quantidade total de cido ltico no rmen, liderando um crescimento do pH
ruminal. Esses resultados reduzem os fatores negativos associados com o risco de acidose, especialmente em
dietas de alto gro. Em alguns experimentos in vitro sobre a fermentao ruminal, a concentrao de cido
ltico no rmen foi reduzida e o total de AGVs produzidos, principalmente o propionato, foi aumentada, quando
Megasphaera elsdenii, consumidora de lactato, foi adicionada a dieta. H tambm, por outro lado, um outro
tipo de probitico utilizado em dietas de ruminantes composto de bactrias produtoras de lactato. Observaram
uma reduo no risco de acidose ruminal quando vacas de leite foram alimentadas com uma combinao de
bactrias produtoras de lactato (Lactobacillus e Enterococcus) e consumidoras de lactato (Megasphaera
elsdenii). Segundo esse mesmo autor a adio de bactrias produtoras de lactato causa uma adaptao da
microflora ruminal presena do lactato, levando os microorganismos a uma tolerncia menor a acidez,
promovendo uma melhora nos processos fermentativos. A suplementao em dietas de bovinos confinados
com bactrias utilizadoras de lactato e/ou produtoras de lactato tm melhorado a converso alimentar e o
ganho de peso em bovinos confinados.
3.2. Leveduras
Fungos unicelulares, especialmente do gnero Saccharomyces, so tradicionalmente utilizados na fermentao
do acar de alimentos para consumo humano. O uso em alimentao de bovinos de corte foi ligado ao
aumento na digestibilidade da matria seca, especialmente da fibra, melhorando a eficincia alimentar e ganho
de peso. Tais compostos vo servir de fatores de crescimento para as bactrias do rmen, alm de contriburem
para a nutrio do bovino. Se por um lado h disponibilizao dos nutrientes armazenados nos fungos para os
microorganismos do rmen e para o bovino, h tambm reduo na taxa de crescimento de fungos. Assim, as
leveduras devem ser suplementadas. O aumento no nmero de bactrias do rmen (especialmente bactrias
celulolticas) o efeito mais comum da suplementao de levedura. Alguns tipos de bactrias apresentam
melhor desempenho na presena de leveduras, e alguns dos fatores relacionados com essa resposta so:
fornecimento de fatores de crescimento - vitaminas (complexo B, cido para-amino benzico etc.), cidos
dicarboxlicos (fumarato, malato etc.); remoo de O2 por Saccharomyces; efeito tampo (bactrias celulolticas
preferem pH>6); e reduo no nmero de protozorios. As leveduras apresentam grande capacidade de
armazenamento e podem auxiliar a manuteno do pH no rmen (a estabilizao do pH ruminal foi relacionada
com o aumento do consumo de slidos em dietas para bezerros). Alm disso, parecem contribuir para o
suprimento de nutrientes para a populao bacteriana do intestino.
necessrio um perodo de cerca de duas semanas, como o perodo de adaptao, para que a microflora se
adapte ao aporte de levedura e a fermentao ruminal seja estabilizada.
3.3. Ionforos
A manipulao da fermentao ruminal tem como principais objetivos aumentar a formao de cido
propinico, diminuir a formao de metano (responsvel pela perda de 2% a 12% da energia do alimento) e
reduzir a protelise e desaminao da protena diettica no rmen. Alguns aditivos podem alcanar parte
desses efeitos, aumentando a eficincia produtiva. A seletividade do ionforo depende da permeabilidade do
invlucro celular. Bactrias gram-positivas e aquelas com estrutura de parede celular semelhante de gram-
positivas (cujo invlucro celular composto apenas de parede celular) so mais inibidas que as gram-negativas
tpicas (cujo invlucro celular formado por parede celular e membrana externa) por monensina e outros
ionforos parecidos. As bactrias gram-positivas so as principais responsveis pela formao de cido actico,
butrico, frmico e hidrognio. As bactrias que produzem cido succnico ou fermentam cido lctico so
geralmente resistentes aos ionforos. As aes dos ionforos sobre o desempenho parecem resultar de uma
srie de efeitos sobre o metabolismo.
Os ionforos melhoram a eficincia do metabolismo de energia alterando os tipos de cidos graxos volteis
produzidos no rmen (aumento de propionato, reduo de acetato e butirato) e diminuindo a energia perdida
durante a fermentao do alimento. O melhor desempenho animal resultante de maior reteno de energia
durante a fermentao ruminal. Os ionforos reduzem a degradao de protena do alimento e podem diminuir
a sntese de protena microbiana, aumentando a quantidade de protena de origem alimentar que chega ao
intestino delgado. O mecanismo pelo qual monensina inibe a degradao da protena no est claro. Embora
essa atividade tenha poucas implicaes para bovinos sob dietas com alto teor de gro, os efeitos podem ser
significativos para bovinos em crescimento recebendo dieta base de forrageiras, quando a protena
suplementada abaixo dos requisitos. Ionforos podem reduzir a incidncia de acidose (por meio de aumento no
pH ruminal e inibio de bactrias produtoras de cido lctico), timpanismo e coccidiose. A reduo dessas
patologias melhora o desempenho.
Os ionforos podem afetar os processos da membrana celular de clulas eucariticas e de organelas
intracelulares (como a mitocndria), especialmente os sistemas dependentes de gradiente eltrico,
excitabilidade ou regulao osmtica. Aumentos na liberao de catecolaminas e na peroxidao de lpides
podem contribuir para o desequilbrio celular ligado necrose muscular observada nas intoxicaes. As clulas
do intestino delgado seriam os provveis alvos iniciais de ao dos ionforos, que poderiam alterar a absoro
de aminocidos e acares.
Em dietas com alto teor de gros, ionforos geralmente reduzem a ingesto de alimento em cerca de 8% a 10%
e melhoram a converso alimentar, mantendo ou aumentando o ganho de peso dirio, sem afetar as
caractersticas de carcaa (Tabela 3). Quando o ionforo includo na dieta, o consumo pode cair inicialmente
em torno de 15%, retornando a cerca de 90% do consumo original depois de alguns dias.
A monensina melhora a eficincia alimentar em bovinos confinados e aumenta o ganho de peso de bovinos em
pasto e de novilhas de reposio. O efeito deve-se, primariamente, sua ao nas membranas celulares,
eliminando espcies de bactrias gram-positivas. Existem indicaes de que as bactrias podem desenvolver
resistncia ao ionforo.
4. MANIPULAO DA FERMENTAO RUMINAL E QUALIDADE DE CARNE E LEITE

4.1. Efeito da Adio de Lipdeos
A adio de lipdeos dieta de vacas leiteiras tem sido uma estratgia importante de aumentar a densidade
energtica da dieta, sem que ocorram riscos de distrbios nutricionais, decorrentes do aumento da proporo
de concentrados. Adicionalmente, a utilizao de lipdeos tem sido bem vista pelo fato de aumentar a eficincia
energtica da dieta, pela reduo da metanognese e do incremento calrico. Entretanto, por interferir
negativamente na digesto da fibra, a adio de lipdeos tem sido limitada a aproximadamente 5% ou menos da
matria seca total da dieta. Considerando que a sntese ruminal e passagem de CLA para o duodeno funo da
concentrao de lipdeos poliinsaturados e das alteraes ocorridas no ambiente ruminal devido s
manipulaes dietticas, a suplementao com lipdeos uma alternativa vivel de aumentar a produo de
CLA no rmen e sua concentrao nos tecidos e leite dos ruminantes.
A adio de gorduras dieta de ruminantes pode levar o aumento na concentrao de cidos graxos
insaturados, incluindo o CLA, na carne e no leite dos ruminantes os quais so caracterizados por possuirem
propriedades especficas benficas sade humana, alm fornecer nutrientes para o metabolismo. Os AG
poliinsaturados, como os da srie mega-3 e o cido linolico conjugado (CLA), esto relacionados reduo na
incidncia de doenas cardiovasculares, preveno e tratamento de tumores e preveno da osteoporose.
A concentrao de CLA no leite e na carne reflete a quantidade a qual disponvel para absoro no
intestino delgado, desta forma, a manipulao diettica que vise aumentar a sua produo ruminal,
provavelmente refletir em maiores nveis no leite e nos tecidos. O aumento da ingesto de cido linolico o
fator primordial para o aumento na produo de CLA, portanto, a utilizao de fontes lipdicas com maior
concentrao deste cido, provavelmente melhores s respostas.
A manuteno de baixos valores de pH no rmen atravs da utilizao de dietas com alto concentrado,
pode se constituir em uma estratgia para a proteo de fontes suplementares de lipdeos insaturados (leos)
contra a biohidrogenao, possibilitando que mais cidos graxos insaturados cheguem ao intestino, onde
podero ento ser absorvidos e incorporados gordura do leite e carcaa. A utilizao de AG inertes, como na
forma de sais de clcio, tambm uma prtica que pode ser empregada para evitar ou reduzir as modificaes
na composio dos AG resultantes do metabolismo ruminal. Porm, apenas em situaes de alto pH ruminal
no ocorre dissociao dos sais de clcio de AG insaturados e estes so ento parcialmente protegidos da
biohidrogenao pela ausncia de um grupo carboxila livre. Portanto, para se obter uma maior eficincia de
proteo dos sais de clcio de AG insaturados necessrio manter um pH relativamente alto atravs da
utilizao de agentes alcalinizantes ou substncias tamponantes, aumento da frequncia da alimentao ou
fornecimento dos sais de clcio aps a alimentao (VAN NEVEL e DEMEYER, 1996).
4.2. Efeito da Adio de Ionforos
Os ionforos tm sido extensivamente utilizados na dieta de ruminantes e, embora sejam plenamente
conhecidos os seus efeitos no padro de fermentao ruminal, tais como, a reduo da relao
acetato:propionato, reduo da deaminao e a inibio da metanognese, pouco sabido dos seus efeitos no
metabolismo de lipdeos no rmen.

A biohidrogenao de cidos graxos insaturados no rmen um processo que demanda energia na reduo
destes cidos graxos. Tem sido sugerido que os ionforos reduzem a produo de CH4 pela inibio das
bactrias gram-positivas produtoras de H2, podendo interferir no processo de biohidrogenao no rmen.
Alguns estudos tm demonstrado que os ionforos alteram o metabolismo de lipdeos no rmen, aumentado a
concentrao de cidos graxos insaturados nas bactrias e na digesta duodenal. Adicionalmente, devido ao
aumento da produo de propionato com o uso de ionforos, ocorre reduo na disponibilidade de ons H+, o
que contribui para a alterao no metabolismo de lipdeos. A utilizao de ionforos parece ser mais efetiva
quando da sua associao com suplementao lipdica, a qual provavelmente, por aumentar a disponibilidade
de cidos graxos insaturados no rmen, aumenta tambm a produo de seus intermedirios, no caso o CLA,
devido reduo da biohidrogenao pela ao dos ionforos.
4.3. Efeito da Relao Concentrado : Volumoso
Os ruminantes, durante sua evoluo, adaptaram-se para uma eficiente utilizao de alimentos fibrosos,
desta forma, capacitando estes animais a no competir com outras espcies pela alimentao. Entretanto, o
melhoramento gentico imposto pelo homem permitiu a estes animais atingirem ndices de produtividade
extremamente elevados. Desta forma, por melhor que seja a qualidade do volumoso, este impe certos limites
de produtividade, tornando necessria a utilizao de gros.
Entretanto, a utilizao de gros em quantidades excessivas na dieta, embora permita ao animal atingir sua
capacidade produtiva, por apresentarem um teor de carboidratos de rpida fermentao (amido) relativamente
alto, cria um ambiente ruminal diferente daquele cujo animal adaptou-se. Pois, a presena de amido propicia o
desenvolvimento de bactrias amilolticas, as quais apresentam padro de fermentao diferente daquelas que
utilizao carboidratos fibrosos e, adicionalmente, a fermentao mais rpida do amido propicia o acmulo de
cidos orgnicos, o que pode resultar em abaixamento do pH, que uma condio considerada como sendo
anormal e indesejvel; por vrios motivos, como por afetar negativamente a digesto da fibra, e comprometer a
sade do animal. Quanto biohidrogenao de cidos graxos insaturados no rmen, a formao dos produtos e
o seu fluxo para os intestinos, dependente do ambiente ruminal e sua populao predominante.

DIGESTO DE LIPDEOS NO RMEN
Liberao das gorduras
Os lipdeos quando entram no rmen fazendo parte dos constituintes vegetais tero sua liberao conforme vai
ocorrendo o processo fermentativo dos demais componentes como carboidratos, protenas e fibra. Como no
sofrem processo de fermentao, poder em algumas situaes passarem sem grandes alteraes pelo rmen,
mas grande parte destes sofrer ao por parte das bactrias ruminais num processo chamado de hidrlise e
outro denominando biohidrogenao. Esses eventos ocorrem em sequncia sendo primeiro a hidrlise e
posteriormente a biohidrogenao.
Hidrlise (liplise) das gorduras da dieta
Os lipdeos que so liberados no rmen a partir dos alimentos, esto na forma esterificados (ligaes ster) tais
como: triglicerdeos das sementes, fosfolipdeos e galactolipdeos das folhas vegetais. A partir dessa exposio
ao meio eles so rapidamente hidrolisados por ao das enzimas lipases bacterianas e com pouca contribuio
por parte dos protozorios do rmen, fungos ou saliva e lipases das plantas. A hidrlise dos lipdeos
extracelular, e o glicerol e os acares que so liberados so rapidamente fermentados a cidos graxos volteis
(AGV). Embora a extenso da hidrlise seja geralmente alta (>85%), um nmero de fatores que afetam a taxa e
a extenso desse processo tem sido identificado. Como exemplo tem que a extenso da hidrlise reduzida
quando o nvel diettico da gordura aumentado, ou quando outros fatores como baixo pH ruminal e o uso de
ionforos inibem a atividade e o crescimento bacteriano. Portanto, a partir da liberao do glicerol estaro no
lquido ruminal cidos graxos de cadeia longatais como os cidos graxos olico, linolico e linolnico.
Biohidrogenao de cidos graxos insaturados
Os cidos graxos devem estar na forma no esterificada ou livres para que ocorra a biohidrogenao. Esta
transformao consiste em saturar os cidos graxos com ligaes duplas (insaturados) colocando hidrognio na
cadeia carbnica ficando apenas com ligaes simples. Certos cidos graxos, especialmente os poliinsaturados,
so txicos para as bactrias ruminais. As mais susceptveis so as bactrias Gram positivas, metanognicas e
protozorios. A toxicidade est relacionada natureza anfiptica dos cidos graxos, ou seja, aqueles que so
solveis, tanto em solventes orgnicos como em gua, so mais txicos. Portanto, como um mecanismo de
defesa, a biohidrogenao torna-se um evento muito importante no rmen. Portanto, o extensivo metabolismo
dos cidos graxos insaturados no rmen resulta como principal produto o cido esterico que passar ao
abomaso e ao intestino o ser absorvido. O normal processo da biohidrogenao dos cidos olico, linoleico e
linolnico formar cido esterico, mas em algumas ocasies ocorrem alteraes nessa rota e o produto final
poder ser alguns cidos graxos trans como consequncia da incompleta biohidrogenao daqueles cidos
graxos.
Digesto intestinal dos lipdeos
Os lipdeos que deixam o rmen so predominantemente cidos graxos livres (80-90%), fosfolipdeos (10-15%)
como parte das membranas celulares das bactrias e uma pequena parte de triglicerdeos e glicolipdeos no
resduo dos alimentos no completamente fermentados. No rmen, a maioria dos cidos graxos livres estaro
na forma de sabes de clcio, sdio ou potssio devido ao pH ruminal que se encontra prximo da neutralidade
(6,06,8). Aps passar pelo abomaso onde a acidez local alta (pH prximo de 2,0) ocorrer a dissociao
desses sabes e os cidos graxos voltam a forma livre agora aderidos s partculas dos alimentos. A poro livre
est na forma saturada sendo que dois teros sero formados por cido esterico e um tero de cido palmtico.
Antes que a absoro dos cidos graxos ocorra necessrio, mesmo estando aderidos s partculas das
forragens, sejam solubilizados no meio aquoso do intestino. A chave para a absoro dos lipdeos em ambos
ruminantes e no ruminantes a formao no intestino das micelas a partir da ao dos sais biliares sobre as
gotculas de gordura. Juntos com os sais biliares, o fgado secreta um composto chamado de lecitina que em
contato com as enzimas liberadas pelo pncreas (fosfolipase A) ocorre a converso para lisolecitina o qual um
potente emulsificador particularmente de cidos graxos saturados.