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Instituto Tecnolgico de Tuxtla Gutirrez.

Ingeniera Bioqumica.
Asignatura: OPERACIONES UNITARIAS III.
Catedrtico: Ing. Amin Rodrguez Meneses.
6to Semestre.

Prctica 1
HUMIDIFICACIN


Ciclo Escolar: Agosto-Diciembre 2014
Fecha de la prctica: 25 de septiembre del 2014
Fecha de entrega: 29 de septiembre del 2014

Integrantes del Equipo 1:

Alegra Prez John Albert
Coutio Megchn Josefa Trinidad
Daz Hernndez Miriam
Hernndez Galdmez Hury Viridiana
Njera Gmez Humberto
Preciado Santiago Joanna de Jess




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ndice

Objetivo....2

Introduccin2

Marco Terico.2

Desarrollo Experimental..4

Diagrama de Flujo.........4
Materiales y Reactivos.....5
Procedimiento.5

Discusin de Resultados............7

Conclusiones..............12

Anexos: Clculos...............14

Bibliografa..............14
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Observar los rasgos principales, tanto macroscpicos como microscpicos de
Aspergillus niger, Rhizopus spp. y Fusarium solani para identificar su morfologa
colonial, adems de aprender las tcnicas adecuadas de inoculacin.




Los hongos son eucariotas, organismos cuyos ncleos celulares estn contenidos
en membranas. No obstante, los hongos presentan una combinacin de
caractersticas que justifica su ubicacin en un reino eucaritico separado. La
mayora de los hongos son pluricelulares y estn compuestos de largos
filamentos, denominados hifas. Algunas hifas, que se conocen como hifas
septadas, poseen unas paredes internas llamadas septos. Todas las hifas de un
tipo particular en un hongo forman una masa entretejida denominada micelio. Los
hongos son hetertrofos pero, como ya sabemos, no ingieren los alimentos como
los animales. Por el contrario, absorben el alimento despus de descomponerlo en
pequeas molculas, que atraviesan entonces la membrana plasmtica mediante
difusin o con la ayuda de las protenas de transporte. La mayora de los hongos
son saprobios: organismos que se alimentan de materia orgnica muerta. Otros
hongos son parsitos, seres que se alimentan de sus organismos-huspedes
vivos, o depredadores, organismos que matan al ser del que se alimentan
(Carrillo, 2003).
Un hongo se identifica por la morfologa macroscpica de la colonia, color, textura
y velocidad de crecimiento. Tambin podemos identificarlos observando la
estructura microscpica tomando un pequeo fragmento de cultivo para su
observacin en microscopio, lo que permitir confirmar la sospecha de hongo
levaduriforme o filamentoso basada en la morfologa colonial. Los hongos
filamentosos se identifican a nivel gnero especie por la morfologa del micelio,
pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de sus esporas asexuales y
los elementos que las originan. Los hongos no esporulados son difcilmente
identificables, mientras que los hongos levaduriformes se identifican mediante
pruebas metablicas, de modo semejante a las bacterias.

Objetivo



Marco Terico


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Para el cultivo de los hongos en el laboratorio se ha desarrollado una serie de
medios similares a los utilizados para las bacterias, de hecho, estos pueden crecer
en la mayora de los medios diseados para el crecimiento de bacterias. Sin
embargo los medios de cultivo se han diseado de tal manera que favorezcan el
crecimiento de los hongos e inhiba el de las bacterias. Por ejemplo, bajando el pH
del medio. Los medios de cultivo que se utilizaron es esta prctica son los
siguientes:
Agar dextrosa y papa. Es un medio utilizado para el cultivo de hongos y
levaduras a partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos
cosmticos, este medio puede ser suplementado con antibiticos o cidos para
inhibir el crecimiento bacteriano. La base del medio es altamente nutritiva y
permite la esporulacin y la produccin de pigmentos en algunos dermatofitos.
Agar Czapek. Medio para el cultivo de hongos saprfitos, bacterias del suelo y
otros microorganismos a partir de diversos materiales. En este medio la nica
fuente de carbono es la sacarosa y el nitrato aporta el nitrgeno (MCDLAB, 1998).
Para llevar a cabo la observacin del desarrollo del crecimiento de los hongos se
utilizaron cepas de las siguientes especies de hongos:
Fusarium solani. La forma y tamao de las esporas es la caracterstica principal
para el reconocimiento de los fusarios. Las esporas estn dispersas en el micelio
areo o en esporodoquios o masas limosas (pionotos). Las colonias de los
distintos fusarios que crecen moderada a profusamente, tienen diversos colores
(blanco, rosado plido, rojo, anaranjado, prpura, celeste, verde aceituna o pardo),
especialmente en el el reverso de la colonia, excepto pardo obscuro o negro. El
micelio es ralo o denso, ya sea algodonoso, como un fieltro o con una zona central
de funculos, pero en algunos casos es limoso (Seifert, 2001).
Aspergillus niger. Los mohos del gnero Aspergillus causan el deterioro de muchos
productos alimenticios. El color es la principal caracterstica macroscpica para la
identificacin de los grupos de aspergilos. Poseen distintos tonos de verde, pardo,
amarillo, blanco, gris y negro. Las cabezas conidiales presentan bajo el
microscopio cuatro formas bsicas: globosa, radiada, columnar o claviforme y a
simple vista las ms grandes suelen parecer diminutas alfileres sobre el substrato
(Kozakiewicz, 1989).
Rhizopus oligosporus. Colonias de crecimiento rpido (cubren prcticamente toda la
superficie de la placa en tres das a 25 C) de aspecto consistente, con denso
micelio areo, algodonosas, al principio blancas, despus gris oscuras (micelio
rojizo, grisceo o marrn).
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Desarrollo Experimental


PREPARACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Seguir las indicaciones
de las etiquetas de los
recipientes que
contienen los medios.
Preparado el
medio, esterilizar
en autoclave y
dejar enfriar.
Vaciar los
medios de cultivo
en cajas de petri
en condiciones
de esterilidad.
Incubar a 35-37 C para
prueba de esterilidad
por 24 horas.
Inocular las
diferentes cepas
de hongos.
HONGO TCNICA
Fusarium solani
Picadura en 4 zonas
del agar
Aspergillus niger
Picadura en 4 zonas
del agar
Rhizopus
oligosporus
Deslizar la muestra
en el centro una ves

DIAGRAMA DE FLUJO
Observar al microscopio,
tincin con azul de algodn.
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MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES
Cajas de Petri estriles
Matraz Erlenmeyer de 250 mL
Vaso de pp. de 600 mL
Pipetas graduadas de 10 mL
Porta objetos
Cubre objetos
Agitador
Esptula
Asa
Mechero de Bunsen
Vidrio de reloj
Probeta graduada de 100 mL
Esptula
Balanza analtica


Reactivos.
Medio de cultivo Agar Dextrosa
Papa
Medio de cultivo Agar Czapeck
Azul de lactofenol


PROCEDIMIENTO
1. Como primer paso se limpi el rea de trabajo con benzal.
2. Preparacin de los medios de cultivo
AGAR DEXTROSA PAPA
Rehidratar 39 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15.
Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullicin durante 1 minuto
para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121 C (15 lbs de presin)
durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45 C, vaciar de acuerdo a la
tcnica a seguir en cajas de Petri estriles.
AGAR CZAPEK
Suspender 50 g de polvo en 1 litro de agua purificada. Mezcla perfectamente
calentar con agitacin frecuente y hervir durante 1 minuto hasta disolucin
completa. Distribuir y esterilizar a 121 C por 15 minutos.
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Al inicio y trmino del periodo operacin del humidificador, se registraron los
siguientes valores:












Mediante el anlisis grfico y los correspondientes clculos (Anexos) se obtuvo la
siguiente informacin:

Con los datos iniciales tenemos:
Temperatura de roco inicial (TR)

Humedad real inicial de aire (HReal)

Porcentaje de humedad (% H)


Discusin de Resultados


Datos al inicio del proceso:
Temperatura de entrada (Te)= 25
Temperatura de saturacin (Ts)= 21.5
Volumen de agua = 6.602 L

Datos al final del proceso:
Temperatura final (Tf)=
Flujo volumtrico =
Velocidad del aire = 1 m/seg

% H=
HReal=



TR=
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Con la temperatura final tenemos:
Humedad de saturacin (HS)
Porcentaje de humedad final (% HF):

Cantidad de agua que se adiciona al aire para saturarse al 70%:

Volumen Hmedo (

):

La temperatura de entrada fue de , mientras que la de saturacin fue de
. Esto quiere decir que ocurri una disminucin de temperatura ya que el
aire se est enfriando. Podemos notar el incremento en la humedad, ya que al
inicio del proceso fue de un 60%; mientras que al final fue de 70%. Se puede
interpretar que a la salida de aire, ste llevaba


.


HS=



% HF=
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Njera Gmez, Humberto
De la presente prctica se concluye que los 3 gneros de hongos cultivados se
identificaron con xito en base a sus caractersticas morfolgicas observadas en
las cajas de Petri y al anlisis microscpico realizado despus de la tincin con
azul de algodn. Tanto Aspergillus niger, Fusarium solani y Rhizopus oligosporus
fueron capaces de crecer de manera eficiente en los medios Agar Papa Dextrosa
y CZAPECK.
Desde el punto de vista morfolgico, las principales caractersticas de las
estructuras, provenientes de los cultivos proporcionan rasgos distintivos que
permiten una adecuada identificacin. Esto quiere decir, que la presencia de
micelios, hifas y esporas (principalmente) ayudan a diferenciar entre una cepa y
otra. Comprender esto es fundamental ya que los hongos juegan un papel
importante como en la produccin de alimentos (los que son dainos y mtodos de
biocontrol), las enfermedades que causan (como las micotoxicosis, micetismos y
micosis); y en productos cuya elaboracin participan los hongos, como vitaminas,
pigmentos, toxinas, etc.












Conclusiones


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Conversin de las temperaturas.








Con los datos iniciales de las temperaturas nos vamos a la grfica de humedad
(Grfica 1) para hallar la temperatura de roco inicial (TR), la humedad real inicial de
aire (HReal) y el porcentaje de humedad (% H). La grfica arroja los siguientes
valores:



Posteriormente se obtiene la humedad de saturacin final con la grfica de
humedad.


Anexos: Clculos


Datos al inicio del proceso:
Temperatura de entrada (Te)= 25
Temperatura de saturacin (Ts)= 21.5

Datos al inicio del proceso:
Te= ( )(

)
Ts= ( )(

)

% H=
TR=
HReal=



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Te=
Ts=
TR=
HReal=
% H=
Grfica 1
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Conversin de la temperatura.





De la grfica (Grfica 2) hallamos la Humedad de saturacin (HS) y el porcentaje
de humedad final (% HF):










Tambin podemos calcular el Volumen Hmedo (

):







Datos al final del proceso:
Temperatura final (Tf)= ( )(

)

Se calcula la cantidad de agua que se adiciona al aire para saturarse
al 70%:
Cantidad de agua=
= ( )


=




% HF=

( )

( ())( )

T en = 80.6 +459.67 = 540.27

HS=



HReal=



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Te=
TF=
HReal=
% HF=
Grfica 2
HS=



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Kozakiewicz Z. 1989. Aspergillus species on stored products. CAB International
Mycological Institute, Kew, Surrey.

Seifert K. 2001. Fusarium and anamorph generic concepts. pp. 15 - 28 en:
Fusarium. Summerell BA et al., eds. APS Press. St. Paul, Minnesota.

MCDLAB. 1998. Especificaciones agar dextrose y papa.

Carrillo L. 2003. Microbiologa agrcola. Captulo 4 hongos.



Bibliografa