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Resumen

Listo para comer cereales para el desayuno son una importante fuente de micronutrientes a pesar de
las prdidas de estos elementos durante el procesamiento. Desde un punto de vista analtico, estos
materiales son muestras heterogneas complejas que contienen hasta 13 componentes. Es
fundamental que la muestra sea representativa y molienda de la muestra es esencial antes de tomar
una submuestra para los pasos posteriores del procedimiento analtico. En este trabajo se estudi el
uso de la molienda criognica como un procedimiento rpido y eficaz para la trituracin y
homogeneizacin de la muestra. Este procedimiento es eficaz y los polvos obtenidos fueron
digeridos con cido usando un procedimiento asistida por microondas. Hierro, manganeso y zinc se
determinaron por espectrometra de absorcin atmica de llama. 2001 Elsevier Science Ltd. Todos
los derechos reservados.
Introduccin
La homogeneidad de la muestra es un problema en el anlisis de elementos traza de materiales
complejos heterogneos y puede comprometer la precisin y la exactitud de los resultados. Anlisis
instrumental moderna utiliza muestras con masas bajas. Para la consecucin de una muestra
representativa con masas bajas es esencial para triturar muestras para disminuir la heterogeneidad.
Las muestras se pueden triturarse usando dispositivos mecnicos. Por lo general, los procedimientos
mecnicos para la homogeneizacin de la muestra pueden contribuir a la contaminacin por metales
del aparato de trituracin y los componentes voltiles pueden perderse debido a la excesiva
generacin de calor (Markert, 1995). Un procedimiento para la reduccin de tamao de partcula y la
homogeneizacin es la molienda criognica, tambin llamada la "tcnica de fractura frgil". Iyengar y
Kasperek (1977) estudiaron el comportamiento de distribucin de los elementos en los diferentes
niveles de concentracin en matrices biolgicas utilizando esta tcnica. Las precisiones obtenidas
para la determinacin de Fe, Mn, Rb, Se, Zn, en la plantilla de g 'gama, y Ag y Co, en el ng g' gama,
variada para homogeneizada y bovina no homogeneizaron.
muestras de hgado, con los valores ms altos obtenidos para muestras no homogeneizadas. Para
las muestras homogeneizadas por molienda criognica las precisiones para estos elementos fueron
similares a los obtenidos para macroconstituyentes, tales como K, P, Cl y Na presente en mg g rango
'. Ms tarde, De Boer y Maessen (1980) aplicaron esta tcnica para la molienda de muestras de
placenta humana. Estos autores compararon la eficacia de la reduccin de partculas usando dos
medios de enfriamiento diferente: hielo seco-acetona (-78 C) y nitrgeno lquido (-196 C). Ellos
demostraron que la molienda a temperatura ms baja dio lugar a tamaos de partcula ms
pequeos. Zeisler, Langland, y Harrison (1983) demostraron la eficiencia de un molino de criognica
para la homogeneizacin de los tejidos del hgado, tejido adiposo y msculo. Otro aspecto
importante es la cantidad de muestra que puede ser tratada en el equipo de molienda criognica.
Aunque no es crtico para el anlisis qumico cuantitativo teniendo en cuenta las pequeas masas es
necesario, la masa es crucial para la preparacin de materiales de referencia con garantas estrictas
de homogeneidad como se comenta por Rossbach. Ostapczuk, y Emons (1998). Esta cuestin fue
abordada mediante el desarrollo de equipos de molienda criognica capaz de triturar hasta 3 kg de la
muestra por hora (Kramer y Pauwels, 1990). Un nuevo dispositivo de alta capacidad para la
molienda criognica fue desarrollado recientemente por Singh y Goswami (1999), y su desempeo
fue evaluado para la molienda de especias y sin prdidas de aceites voltiles y componentes vouring
fla. Segn mayo y Kaiser (1984) las principales caractersticas de la tcnica de molienda criognica
impacto son la proteccin de los componentes calientes lbil, tiempo de molienda corto por muestra,
la incorporacin de liofilizacin para facilitar la manipulacin y el almacenamiento, la limpieza rpida
y fcil del equipo,. Estos autores hicieron hincapi en que los principales problemas son la
contaminacin de las muestras con Cr, Fe, Mo y Ni y el tamao limitado del contenedor. El presente
trabajo se propone un procedimiento de molienda criognica rpida para reducir el tamao de las
partculas de muestras de cereales de desayuno. Booth. Reilly, y Farmakalidis (1996) comentaron
que el procesamiento de granos enteros de cereales alimentos a los resultados de los productos
finales en las prdidas de todos los minerales.

Experimental
2.1. aparato
Las muestras se prepararon usando un molinillo de impacto Congelador Mill Modelo 6750 con el
Modelo 6751 viales de molienda, (Spex Certiprep., EE.UU.), y con un bao de nitrgeno lquido
autnomo (4-5 1). El rectificado cilndrico conjunto de vial constaba de dos tapones finales
ferromagntico 440C acero inoxidable, una seccin central de policarbonato, y un impactador de
acero inoxidable 440C. El perfonnance de este dispositivo se compar con un cuchillo convencional
de molienda tipo Willey, modelo TE-048 (Marconi, Brasil). Un horno de microondas equipado con
PFA cerrado vasos (Milestone, ETHOS 1600, Alemania) se utiliz para la muestra de la
descomposicin. Hierro, Mn y Zn se determinaron en las soluciones diluidas digeridos por
espectrometra de absorcin atmica de llama (FAAS. SpectrAA 640, Varian. Australia). Todas las
mediciones se hicieron con una llama airC2H2, y las condiciones instrumentales se mostraron en la
Tabla 1. mediciones del tamao de partcula se realizaron utilizando un microscopio electrnico de
barrido, Modelo LEO Stereoscan 440, (Cambridge, Reino Unido).

2.2. Los reactivos y muestras
Todas las soluciones se prepararon a partir de grado reactivo analtico usando agua Milli-Q con
una conductividad inferior a 18 rn? 2 cm '(Millipore, EE.UU.). Las soluciones concentradas de grado
analtico HNO3 y H2O2 (Mallinckrodt, Mxico) fueron utilizados para la descomposicin de la
muestra. Soluciones de referencia que contienen Fe, Mn, Zn y se prepararon a partir de soluciones
madre que contienen 1000 mg L_i de cada metal (Merck, Alemania). Cuatro muestras de diferentes
cereales para el desayuno eran em pleados para evaluar el rendimiento del procedimiento de
molienda. De acuerdo con las etiquetas de la muestra los principales componentes fueron: copos de
avena, fibras de trigo, copos de maz, nueces de anacardo, man, trigo en grano, nuez de Brasil, y el
azcar moreno (muestra 1); copos de avena, fibra de trigo, copos de maz, merey, man, granos de
trigo, nueces de Brasil, el azcar morena, y pasas (muestra 2); avena tostado, copos de maz, copos
de avena, azcar, pasas de uva, copos de arroz, manzana deshidratada, salvado de trigo, polvo de
malta, miel, sal yodada, coco rallado, y el grano de trigo (muestra 3); y avena, azcar, pasas y canela
en polvo (muestra 4).
2.3. Procedimiento
Una masa de la muestra 1-g se insert en el tubo de policarbonato equipado con una barra
magntica de acero inoxidable. El tubo de policarbonato se cerr con tapones de acero inoxidable.
Un campo magntico alterno se aplic y los impactos de barras magnticas cada extremidad de este
tubo de acuerdo con la frecuencia del campo aplicado. Este movimiento hace que la molienda de la
muestra. El tubo se coloc en el recipiente de molino lleno de nitrgeno lquido. Un programa de
molienda de dos etapas se aplic. Las muestras se enfriaron inicialmente durante 2 min antes de la
molienda durante 2 min. Las muestras se molieron utilizando una frecuencia de 20 Hz. Despus de
la molienda, 300 mg de cada muestra se transfiri a los vasos de microondas PFA. Tres ml de HCl
conc. HNO3 ms 0,5 ml de HCl conc. Soluciones H202 se aadieron a cada buque. El programa de
calentamiento por microondas se llev a cabo en cuatro etapas sucesivas, con un tiempo de ciclo
total de 11 y 12 min de cereales para el desayuno y las muestras de maz, respectivamente (Tabla
2). Los digeridos se transfirieron cuantitativamente a matraces volumtricos de 25,00 ml y los
volmenes se hicieron con agua. Cuatro rplicas fueron preparados para cada muestra de cereal
para el desayuno. El efecto de la manipulacin y la barra magntica de acero inoxidable sobre la
contaminacin se evalu usando tres veces diferentes de molienda (60, 120 y 180 s) y con 2 min
para el enfriamiento inicial. Este experimento se realiz con una muestra de maz debido a la dureza
de sus semillas crudas. El efecto del tamao de partcula en la homogeneidad de la muestra se
investig mediante la determinacin de Fe, Mn, Zn y por FAAS en una muestra de cereales con y sin
moler. Para la comparacin tambin se molieron dos muestras de cereales para el desayuno en un
molino de cuchillas utilizando 10 g de cada muestra. Este molino estaba amueblada con un tamiz de
25 mallas. La distribucin de tamaos de partculas obtenidos usando ambas plantas se determin
por microscopa electrnica de barrido. Las mediciones se llevaron a cabo la suspensin de la
muestra pulverizada en etanol y el uso de esta suspensin sobre un soporte de cavidad muestra de
latn. La superficie de la muestra se recuper con una pelcula de oro para mejorar la conduccin y
la resolucin de electrones.
Resultados y discusiones
El procedimiento de homogeneizacin criognico convierte el tejido congelado slido en un polvo.
Con frecuencia, el tiempo total implicado es menos de 5 min y la eficiencia del proceso depende de
las caractersticas de la matriz de la muestra. Las muestras con un alto contenido de agua, que casi
no se desmenuzan por dispositivos mecnicos a temperatura ambiente sin una etapa de secado
previo, pueden ser fcilmente pulverizados por molienda criognica. A pesar de esta posibilidad, se
recomienda secar o liofilizar las muestras antes de la molienda para obtener los resultados sobre la
base de la masa seca. En otro estudio en progreso, la molienda criognica mostr accin
insatisfactoria slo para las muestras que contienen altos contenidos de aceites o grasas, como se
ha observado para las nueces de Brasil que contienen 68,2% de grasa (Holland et al., 1991). Mayo y
Kaiser (1984) tambin observaron que el contenido de lpidos de las muestras de peces caus la
formacin de grumos en polvo despus de la molienda criognica.

3. 1. Evaluacin de contaminacin de la muestra
Teniendo en cuenta el contacto entre las muestras y las partes metlicas de la amoladora criognico,
se realiz un experimento para evaluar la contaminacin. Debido a la dificultad de simular una
muestra en blanco con dureza similar a las muestras, se dise un experimento basado en el efecto
de aumentar el tiempo de molienda en el contenido de Fe y Zn. Estos elementos fueron elegidos
porque se determinaron, y la contaminacin afecta crticamente la determinacin tanto a nivel de
trazas. Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla 3 A Q-test para recction de los resultados
mostr que todos los resultados son estadsticamente aceptable a un nivel de confianza del 95% lo
que indica que no hay un aumento en el contenido de Fe y Zn causadas por el contacto con partes
metlicas. Los grupos 1 y 2 se refieren a los experimentos hechos con dos conjuntos diferentes de
rectificado de cilindros, tapones y barras magnticas.
3.2. Efecto de la homogeneidad de la muestra
Cereales para el desayuno son muestras complejas que contienen muchos componentes que se
caracterizan por diferentes composiciones qumicas, dureza y tamaos. El contenido de Fe, Mn y Zn
se evaluaron para la muestra 1 despus y antes de la molienda criognica. Sin moler las
desviaciones estndar relativas fueron altos debido a la heterogeneidad de la muestra (Fig. 1). Esta
es una indicacin clara del efecto esperado de la muestra heterogeneidad. Para muestras complejas,
slo es posible obtener representatividad para una pequea masa despus de reducir drsticamente
los tamaos de partcula. Para una muestra de cereales de 300 mg. la presencia de uno de pasas
puede representar hasta el 25% de la masa total y ejerce un efecto pronunciado sobre la
composicin elemental.

3.3. Criognico y knft'-m molienda enfermos: los tamaos de partculas
Se evaluaron dos tipos diferentes de cereales para el desayuno, con (muestra 4) y sin (muestra 1)
pasas, teniendo en cuenta los tamaos de partcula obtenidos segn los dos probados
procedimientos de molienda: criognico y cuchillo-molino. Este ltimo molino fue elegido debido a su
amplio uso en la preparacin de muestras orgnicas.
Los procedimientos de molienda utilizando el cuchillo-molino y los dispositivos criognicos utilizados
10 y 1 g de la muestra, respectivamente. Diez moliendas sucesivas de cada muestra se realizaron
con el molino criognico, y los polvos se mezclaron para garantizar la representatividad adecuada y
para obtener suficiente masa de la muestra para todos los experimentos llevados a cabo.
Muestras de cereales para el desayuno que contienen las pasas eran difciles de moler utilizando el
molino de cuchillas, porque el agua y las fibras forman una pasta que se pegan a las cuchillas y
afectaron su rendimiento, lo que requiere la interrupcin del proceso y la limpieza manual de las
cuchillas antes de reiniciar. Segn Holland et al. (1991) Las pasas de uva contener 13,2% y 6,1% de
agua y fibras, respectivamente. Esto fue completamente superado en el procedimiento de molienda
criognica debido a la etapa de enfriamiento preliminar de que se evita cualquier formacin de pasta
para estas muestras. Higo. 2 obtenida por microscopa electrnica de barrido (2000x aumentos),
muestra los tamaos de partcula obtenidos con cada procedimiento para la muestra 1. criognico
(Fig. 2 (a)) y molino de cuchillas (Fig. 2 (b)) procedimientos generado tamaos de partcula similares.
Partculas para ambas muestras, despus de aplicar ambos procedimientos de molienda, tena un
dimetro de alrededor de 30 pm. Sin embargo, no se puede asegurar que los polvos obtenidos por
cada procedimiento representados adecuadamente, la composicin de la muestra original debido a
los efectos anteriormente citados. Algunos resultados obtenidos para Fc, Mn y Zn en muestras
picados utilizando el dispositivo de molino de cuchillas indican errores negativos y las desviaciones
estndar altas en comparacin con los obtenidos utilizando el procedimiento de molienda criognica.
Formas de partculas fueron similares con las dos fbricas y la mayora de las partculas tenan una
forma esfrica irregular.

3.4. Molienda Determinacin de Fe, Mn, Zn,, uI combinacin de Cr-ro gnica y la descomposicin
microwauc asistida
Cuatro muestras se molieron criognicamente y los polvos fueron digeridos con cido usando un
procedimiento asistida por microondas-recipiente cerrado. Los resultados obtenidos se muestran en
la Tabla 4 La precisin del procedimiento no se puede comprobar el uso de materiales de referencia
estndar porque no existen normas con una composicin similar a las muestras de cereales para el
desayuno y, adems, estas normas se venden normalmente en forma de polvos listos para ser
secadas y digeridas, y no como materia prima para moler. Por lo tanto la idoneidad del procedimiento
de molienda criognica no se puede probar por este enfoque. Las desviaciones estndar fueron
inferiores a los obtenidos con el molino de cuchillas que indica una mejor homogeneidad y sin
efectos crticos causados por constituyentes de la muestra o manipulacin de la muestra. La
molienda criognica es un procedimiento eficaz y rpido para la reduccin de tamao de partcula
apropiado. Efectos de la contaminacin deben ser mejor evaluado por otros materiales de muestra
de alimentos. Trabajar con muestras ms difciles y tcnicas de anlisis ms sensibles, como AAS
de horno de grafito. los problemas de contaminacin pueden llegar a ser crtico. Mayo y Kaiser
(1984) sugirieron que cubre la barra de impacto ferromagntico con un polmero, tal como PTFE,
resistente a temperaturas de nitrgeno lquido, pero no es seguro que este material puede soportar
una temperatura tan baja.
Conclusin
La molienda criognica es un procedimiento muy eficaz para la muestra rpida reduccin del tamao
de partcula. La ocurrencia de la contaminacin puede ser un problema crtico, pero esto tambin es
cierto para otros dispositivos de fresado. Tanto los tamaos de partculas y la homogeneidad
obtenida del procedimiento de molienda criognica son caractersticas tiles que tambin pueden ser
explotadas para la preparacin de suspensiones para la introduccin directa por muestreador
automtico o bien nebulizacin neumtica. Las investigaciones basadas en este enfoque estn en
curso.