Graduao em Biotecnologia

Disciplina de Protemica
Caroline Rizzi
Doutoranda em Biotecnologia -UFPel
Propriedades dos Aminocidos
Slidos
Cristalizveis
Incolores
Hidrossolveis
PF (200 C)
cidos e Bases fortes e fracos
A fora das espcies varia conforme
o grau de dissociao de H
+
em soluo aquosa
cidos e Bases Fortes
HA H
+
+ A
-
H
+
+ A
-
HA
cidos e Bases Fracos
HA H
+
+ A
-
H
+
+ A
-
HA
cido
Base
Par cido fraco/base conjugada
Par base fraca/cido conjugado
pH neutro: ons dipolares
Ionizao:
grupos carboxlicos: em pH ~2,2 (pK
1
)
grupos amnicos em pH ~9,4 (pK
2
)
Podem agir como um cido ou uma base: Anfteros
H
3
N - C - H
COO
-
R
Propriedades dos Aminocidos
cido
base
Esta propriedade mostra que a
dissociao dos grupos amino
e carboxlico varia dependendo
da variao do pH do meio.
Carter Anftero dos AAS
pK: valor de pH onde a metade dos cidos ou
bases esto dissociados e a metade est
associada
H A H
+
+ A
-
v
1
v
2
pK
1
pK
2
50% COOH
50% COO-
50% NH
3
50% NH
2
Diferena de 7 unidades logartmicas entre os pKs dos grupos -amino e -carboxila
NH
3
+
s se dissocia se o COOH j estiver completamente dissociado em COO
-
.
A afinidade por prtons do -NH (pk ~9) 10
7
vezes maior que a do -COOH (pK ~2).
forma bsica forma cida forma neutra
DIFERENA DE AFINIDADE PELO H
+
medida da tendncia de ceder prtons
pK
Curva de Titulao
Representao grfica do comportamento anftero dos aas
Evidenciam a ao dos aas como tampo
Titulao: adio ou remoo gradual de H+
Com base: parte-se do pH cido at chegar ao alcalino
Com cido: parte-se do pH alcalino at chegar ao cido
Umaminocido emsoluo aquosa
H- C - NH
2
COO
R
Dissociao dos Aminocidos
H
3
H
+
H
+
H
+
H
+
H
+
pH=1
Dissociao dos Aminocidos
Umaminocido emsoluo aquosa
H- C - NH
COO
R
H
OH
-
OH
-
OH
-
OH
-
-
H
gua
pH=9
32
H
pH=2
De forma geral, ao fazer a titulao de um aa com uma
base, iniciando-se em pH=1 observa-se que o pH da
soluo aumenta at aproximadamente pH=2 quando o
grupamento COOH comea a liberar ons H
+
para o
meio, formando gua.
H- C - NH
3
+
COO
-
R
COOH
R
H- C - NH
3
+
+ OH
-
pK
1
Dissociao dos Aminocidos
H
2
O
on dipolar
COO
-
R
H-C-NH
3
+
+ OH
-
H-C-NH
2
COO
-
R
pK
2
Continuando a adio de base o pH ir progressivamente
se elevando at que o grupo NH
3
+
tenha condies de
liberar seu on H
+
, o que ocorre prximo ao pH 9 .
Dissociao dos Aminocidos
H
2
O
on dipolar
A carga da molcula varia na dependncia do
pH do meio e do pK de cada grupo
Carga +1
0
-1
Ambos grupos
protonados
on dipolar
Ambos grupos
desprotonados
Tampes
Soluo que resiste a mudanas de pH
quando se adicionam pequenas
quantidades de cido ou base.
Pode ser produzido pela mistura de um cido
fraco (HA) e de sua base conjugada (A
-
).
Compostos devem ter grupos ionizveis
capazes de doar e de receber prtons H
+
Como funcionam os tampes?
Tampes
pH = pKa
A
-
HA
+ log
Aceptor de H
+
Doador de H
+
(sal)
(cido)
Equao de Hendersen-Hasselbalch
[HX]
[X
-
]
= pK
a
+ log
pH
[HA]
[A
-
]
= pK
a
+ log
pH
[HA]
[A
-
]
= pK
a
+ log
pH
A [H
+
] , e em decorrncia, o pH, so determinados por dois
fatores: o valor de pK
a
e a razo das concentrao do par
[A
-
] / [HA].
Tampes resistem mais eficazmente variao de pH em qualquer sentido quando as
concentraes de [A
-
] / [HA] so aproximadamente as mesmas.
pK
Tampes
Para que o tampo tenha pH de 7,4, a
razo [base] / [cido] deve ser igual a um
valor de 20.
pH = 6,1 + log
10
[HCO
3
-
]
CO
2
]
Tampes sanguneos: bicarbonato e CO
2
H A
A
-
+ H
+
50% 50%
o poder tamponante mximo no pK pois h igual
proporo das formas doadora e aceptora de prtons:
quando o pH do meio igual ao pK do grupo ionizvel, este est 50%dissociado
Qual a relao
dos tampes com
os aminocidos???
Curva de titulao da
alanina
Aminocido
monoaminonomocarboxlico
Titulao: remoo gradual de
prtons
Dois estgios distintos:
desprotonao do COOH e- NH
3
pI: remoo do primeiro prton j
cessou e h ento o incio da
remoo do segundo prton
Fim da titulao: forma
predominante sem nenhum prton
Duas regies de ao tamponante
pI: pH onde 100% das molculas
possuem carga total neutra no
h capacidade tamponante
Isoeltricas/isoinicas
Ponto isoeltrico
O clculo do pI baseia-se nas formas de
dissociao do aminocido utilizando
os pKs anterior e posterior forma
isoeltrica do aminocido.
pK NH
3
+
= 9.60
pK COOH = 2.34
Clculo do ponto isoeltrico
pI = 2.34 + 9.6 = 5.97
2
+1
-H
+
+H
+
-H
+
+H
+
+1
50%
C
CH
2
NH
3
+
O HO
C
CH
2
NH
3
+
O
O
+
50%
pH 0 - 2 pH 2,34 pH 3.0 - pH 9.0 pH 9.6 pH 10 - 14
C
HC-H
NH
3
+
O HO
C
CH
2
NH
2
O O
-1
Para a glicina os valores de pK so:
-H
+
+H
+
-H
+
+H
+
Em pH < 2,34, todos os
grupos ionizveis da glicina
esto protonados. A molcula
apresenta carga +1.
Aumentando o pH, -COOH comea a
desprotonar. No pH 2,34, metade das
COOH desprotonaram, gerando a
glicina com carga zero.
Em pH 5,97 ocorre o ponto
isoletrico da glicina. 100% das
molculas esto com carga zero.
Aumentando mais o
pH, at o valor 9,6,
(pK do NH
3
+
), haver
50% de molculas de
glicina com carga -1.
C
CH
2
NH
3
+
O O
Em pH > 10
predomina a forma
de glicina com
carga -1.
C
CH
2
NH
3
+
O O
C
CH
2
NH
2
O O
+
50%
50%
-1
Clculo do Ponto Isoeltrico
Valores pK dos grupos ionizveis dos -aminocidos a 25
0
C
-Amino cido
pK
1
-COOH
pK
2
-NH
3
+
pK
R
Cadeia Lateral (R)
Alanina 2.35 9.87
Arginina 1.82 8.99 12.48 (guanidino)
Asparagina 2.1 8.84
cido Asprtico 1.99 9.90 3.90 ( -COOH)
Cisteina 1.92 10.78 8.33 (sulfidrila)
cido Glutmico 2.10 9.47 4.07 ( - COOH)
Glutamina 2.17 9.13
Glicina 2.35 9.78
Histidina 1.80 9.33 6.04 (imidazol)
Isoleucina 2.32 9.76
Leucina 2.33 9.74
Lisina 2.16 9.18 10.79 ( -NH
3
+
)
Metionina 2.13 9.28
Fenilalanina 2.16 9.18
Prolina 2.95 10.65
Serina 2.19 9.21
Treonina 2.09 9.10
Triptofano 2.43 9.44
Tirosina 2.20 9.11 10.13 (fenol)
Valina 2.29 9.74
Observe os valores de pKs da tabela abaixo.
Alguns aminocidos
apresentam grupos
ionizveis em suas
cadeias laterais
PK
R
Quando o aminocido apresenta mais de um grupo ionizvel no
radical, este aminocido possui mais um pK, o pK
R
Como exemplo, veremos a
ionizao da Lisina:
O
C
C - NH
3
+
(CH
2
)
4
NH
3
+
HO
H
pK -COOH = 2.18
pK - = 8.95
pK R-
C
-NH
3
+
NH
3
+
O HO
todos os
grupos
protonados
predomnio
carga +2
pH < 2
pI = 8.85 + 10.53 = 9.69
2
(ponto isoeltrico)
(+2)
H
+
C
-NH
3
+
NH
3
+
O O
predomnio
carga +1
pH 3 - 8
(+1)
H
+
C
-NH
2
NH
3
+
O O
ponto
isoeltrico
pH 9.69
100% (zero)
todos os
grupos
desprotonados
predomnio
carga -1
C
-NH
2
NH
2
O O
H
+
pH > 11
(-1)
H
+
50% (+1)
C
-NH
3
+
NH
3
+
O O
50% (+2)
pH 2 .18
pK -COOH
pH 8.95
H
+
C
-NH
2
NH
3
+
O O
pK -NH
3
+
50% (zero)
50% (+1)
H
+
C
-NH
2
NH
2
O O
pH 10.53
pK R- NH
3
+
50% (-1)
50% (zero)
Aminocido diamino monocarboxlico
Aminocido diamino
monocarboxlico
Aminocido monoamino
dicarboxlico
pK
1 pK
2
pK
R
pI
pK
1
: 2,19
pK
2
: 9,67
pK
R
: 4,25
pI = pK
1
+ pK
R
/ 2
pI = 2,19 + 4,25/ 2
pI= 3,22
Aminocidos essenciais
Lisina
Treonina
Triptofano
Fenilalanina
Leucina
Valina
Metionina
Histidina
Figura 1: Via do Chiquimato
Precursora de aminocidos
aromticos
L-glutamato
Superproduo de L-
glutamato por
Corynebacterium
glutamicum
Oxidao incompleta devido
ausncia de biotina
(cofator da enzima -
cetoglutarato
desidrogenase)
Produo de mutantes
Produo de mutantes ou mutantes regulatrios que
superproduzem aminocidos;
Alterao da ao do repressor ou atividade
regulatria de enzimas alostricas, permitindo a
superproduo destes aas;
L-Ornitina
Intermedirio do ciclo da Uria
Superproduo por mutantes que no produzem L-citrulina a
partir de L-ornitina
Mutantes defectivos na ornitina transcarbamilase
L-ornitina: produo de medicamentos hiperamoninemia ou
nutrio parenteral
L- Prolina
Serratia marcescens: mutante que superproduz prolina a partir de
glutamato
Enzima alostrica (glutamato quinase) no suscetvel a inibio por
feedback pela prolina
(1) Glutamato quinase, (2) semialdedo desidrogenase
glutmica (3) 1- pirolina 5-carboxylato reductase
Utilizando-se enzimas
Sntese enzimtica em escala comercial
Descarboxilao do L-Aspartato
Descarboxilase de Pseudomonas dacunhae