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ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALASA

1.- INTRODUCCIN
Las reacciones qumicas que se dan en los seres vivos no podran tener lugar sin la
presencia de los enzimas. Estas macromolculas, que generalmente son protenas,
catalizan las reacciones bioqumicas, permitiendo que los sustratos se conviertan en los
productos que necesita la clula. Como todo catalizador, los enzimas no se consumen en
las reacciones que catalizan, pero a diferencia de otros catalizadores de naturaleza
inorgnica, las reacciones que catalizan son muy especficas: slo interaccionan con
determinados sustratos, y slo facilitan el curso de determinadas reacciones.
Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa, necesaria para
descomponer el perxido de hidrgeno, un compuesto txico, que se produce durante el
metabolismo celular.
La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas de las clulas de todos los tejidos
animales y vegetales. Acta sobre el perxido de hidrgeno (agua oxigenada)
descomponindolo en agua y oxgeno, y liberando energa en forma de calor. El agua
oxigenada es un producto resultante de las reacciones metablicas y si no se destruye
puede ser txica para la clula. Si se pone un tejido en contacto con el agua oxigenada se
observa la aparicin de efervescencia (produccin de oxgeno).
En esta prctica vamos a detectar la presencia de catalasa en los diferentes tejidos y
estudiar dos factores que influyen en la actividad de la misma: pH y temperatura.








MATERIALES:

2

Papa
Hgado
Bistur o cuchillo
Pinzas
Tubos de ensayo
Gradillas para tubos
Mechero
HCl 0.1 M. o HNO
3

NaOH 0.1 M.
Hielo
Perxido de hidrogeno H
2
O
2
es el sustrato, que
reaccionara con la enzima.




















3
2. OBJETIVOS
- Comprobar la existencia de la enzima catalasa en los tejidos animales y vegetales.
- Comprobar la accin del pH sobre la actividad de la enzima
- Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de la enzima
4.- Desarrollo de la prctica
Preparar las siguientes disoluciones:

10 mL de una solucin 0.1M de NaOH





10 mL de una solucin 0.1M de HCl / HNO
3


Cortar la papa y el hgado en cinco trozos cada uno de igual tamao (1gramo
aproximadamente).
1 mol --> 40 g/l
0.1 mol--> x g/l
x = 4g/l
4 g/l *
1l/1000mol =
0.04g/mol

4


Rotular 10 tubos de ensayo con los
nmeros 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8,9 y 10.
Al tubo 1, 3, 5,7 y 9 aadir un trozo de
papa y a los tubos 2, 4, 6,8, y 10 aadir un
trozo de hgado.







Al tubo 1 y 2 agregar 2ml de H
2
O
2
a cada
uno de ellos, observar e
interpretar los resultados.









5



En los tubos 3 y 4 aadir agua para hervir la muestra. Hervir durante unos 5
minutos, despus de este tiempo, retirar el agua sobrante y agregar 2mL de H
2
O
2
,
observar e
interpretar los
resultados.
v
A los tubos 5 y 6 agregar 2ml de la disolucin de HNO3 0.1M, esperar 5 minutos,
luego retirar el cido, enjuagar con agua destilada y agregar 2ml de H2O2 observar
e interpretar los resultados



6
A los tubos 7 y 8 agregar 2ml de la disolucin de NaOH 0.1M, esperar 5 minutos
para que el NaOH surta efecto, luego retirar la base, enjuagar con agua destilada y
agregar 2ml de H2O2 observar e interpretar los resultados





A los tubos 9 y 10 hay que introducirlos en un entorno helado durante 15 minutos,
luego agregar inmediatamente 2ml de H2O2, observar e interpretar los resultados.


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TUBO TRATAMIENTO RESULTADO Y
OBSERVADO
EXPLICACIN
1 Patata + 2ml H
2
O
2
Aparecen un
cantidad menor de
burbujas.

El Hgado posee
mayor cantidad de
enzima catalasa es
por eso que se
observa una gran
cantidad de burbujas,
esas burbujas
significa que se est
liberando O
2
al medio
externo .En cambio la
papa posee menos
cantidad de enzima
catalasa, es por eso
que observamos una
menor cantidad de
burbujas respecto al
hgado.
2 Hgado + 2ml H
2
O
2
A diferencia de la
patata , aqu se
percibe una gran
cantidad de burbujas
, liberndose al
medio exterior.
3 Patata + agua destilada , hervir la
muestra por 5 minutos, luego retirar
el agua sobrante y agregar 2ml
H
2
O
2

Al someter al calor
observamos que la
papa demora en
hervir y libera
escasas burbujas.

El hgado y la papa se
ha desnaturalizado,
solo ha quedado la
estructura primaria
debido a que estas
soluciones han sido
expuestas al calor. A
estas alturas la
enzima catalasa ya
no cumple su
funcin, pero aun
sirve como alimento
debido a que la
estructura primaria
posee los
aminocidos.
4 Hgado + agua destilada dejarlo
hervir por 5 min posteriormente
vaciar el agua restante y al final
aadir 2ml H
2
O
2

En cambio en el
hgado observamos
que hirvi lo ms
rpido y presenta
una gran cantidad de
burbujas.
5 Patata + HNO
3
( 5 min de espera) ,
despus retirar el cido , luego
Se da la aparicin de
pocas burbujas y la

En este experimento

8

6. Cul es la temperatura y el pH ptimo de la catalasa?
Accin
La Catalasa Aspergillus niger trabaja facilitando la descomposicin del perxido de
hidrgeno, en agua y oxigeno siguiendo la reaccin:
2 H2O2 ========> O2 + 2 H2O
La efectividad de la catalasa sirve para degradar el perxido de hidrgeno depende de
varios factores:
aadir 2ml H
2
O
2
papa se eleva a la
superficie debido a
que su densidad ha
disminuido.
estamos midiendo el
ph .Debido a que se
encuentra en un
medio acido, la
enzima catalasa no
ha actuado, debido a
que no se encuentra
un pH
ptimo.
6 Hgado + HNO
3
( 5 min de espera)
luego retirar el cido agregando 2ml
H
2
O
2

Se percibe poca
cantidad de burbujas.
7 Patata + NaOH ( 5 min de espera)
posteriormente retirar la base y
agregar 2ml H
2
O
2

La muestra opta por
un color amarillo,
apareciendo gran
cantidad de burbujas,
dndose la liberacin
de O
2
al medio
externo.

Esta disolucin se
encuentra en un
medio bsico,
liberando mayor
cantidad de O
2
que
las disoluciones 5 y 6;
pero no es tanto si
estuviera con su pH
ptimo.
8 Hgado + NaOH ( 5 min de espera) ,
por consiguiente retirar la base e
incorporar 2ml H
2
O
2

Observamos una
gran cantidad de
burbujas, liberndose
O
2
.Las disoluciones
presentan un color
amarillo, el hgado se
eleva, debido a que
su densidad ha
disminuido
9 Patata + 15 min en la refrigeracin
aprox -15C y luego suministrar 2ml
H
2
O
2

La enzima catalasa
fue inactivada debido
a que estuvo a -15C ,
peor al agregarle
H
2
O
2
fue activando su
enzima lentamente .
10 Hgado + 15 min en la refrigeracin
aprox -15C , seguidamente
aadiendo 2ml H
2
O
2



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La concentracin inicial de perxido de hidrgeno
El tiempo de contacto disponible en proceso
La temperatura de proceso
Caractersticas
Actividad mnima: 1000 Unidades Baker / ml
pH (25C): 5.25 0.15
Definicin de Unidad Baker
Una Unidad Baker de catalasa es definida como aquella cantidad de enzima que
descompondr 264 mg de perxido de hidrgeno en una hora bajo condiciones de prueba
(25C. pH 7.0).
Efecto de temperatura
La Catalasa del es activa de 0 a 65C. Debido a que el H2O2 inactiva la catalasa, as como
esta cataliza el rompimiento del H2O2, esto dificulta establecer una relacin temperatura
/ actividad. Aunque la actividad inicial es ms rpida a temperaturas ms altas, la
capacidad total es mayor en temperaturas ms bajas.
Efecto pH
La Catalasa tiene su actividad ptima (probado a 25C, 1.5 % H2O2) en aproximadamente
pH 3 a 9. Arriba de pH 7.0, la actividad disminuye, pero an en pH 10, ms del 50 % de la
actividad permanece.








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7. graficar resultados:

8. Explique el fundamento de cada una de las pruebas desarrolladas
PRUEBA 1.
Papa: la papa contiene una enzima (Catalasa) la cual es un poderoso antioxidante, es
decir, que impide la oxidacin de las sustancias qumicas. Si agregamos agua oxigenada
(Perxido de Oxigeno H2O2) a una papa sin cocer, la catalasa separara el Oxigeno del
Perxido de Oxigeno, liberando una gran cantidad de gas (O2 - oxigeno).
Hgado: ya que en el hgado hay ms peroxisomas que en la papa , estos peroxisomas al
someterlos a la presencia del perxido de hidrogeno o agua oxigenada, el cual es
altamente reactivo y toxico para las clulas del hgado, por lo que la funcin de los
peroxisomas es proteger a las clulas del hgado del agua oxigenada. Las molculas de
Agua oxigenada son rpidamente rotas por la enzima catalasa, enzimas las cuales estn

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contenidas en los peroxisomas. Convirtiendo al agua oxigenada en compuestos no txicos
como lo son el oxgeno que es desprendido durante la efervescencia que seguro
observaste cuando le agregaste agua oxigenada al hgado y tambin se forma agua.
PRUEBA 2.
Papa: si al agregar el Perxido de Oxigeno a una papa cocinada no pasara nada, debido a
que la enzima estar desnaturalizada, es decir, debido al calor la catalasa perder sus
propiedades antioxidantes.
Hgado: el hgado al igual que la papa, al cocerse se desnaturaliza por ello la catalasa
perder sus propiedades y podremos observar que no burbujea al unir el hgado con H
2
O
2.

PRUEBA 3.
Papa: si agregas acido a la protena se degrada o simplemente no puede actuar por no
estar en el pH adecuado. El cido (depende de la cantidad y la concentracin) destruye las
enzimas, pasa igual que en la prueba 2.
Hgado: si agrego el cido al hgado este tambin lo desnaturalizar y no lo veremos
reaccionar, porque destruir la enzima.
PRUEBA 4.
Papa: libera y expone ms las enzimas, por eso en vez de burbujas fue espumosa. Mucha
liberacin de oxgeno.
Hgado: en el hgado notamos una mayor liberacin de burbujas porque est echando el
oxgeno.
PRUEBA 5.
Papa: si al agregar el Perxido de Oxigeno a una papa congelada no pasara nada, debido a
que la enzima estar desnaturalizada, es decir, debido al frio la catalasa perder sus
propiedades antioxidantes.
Hgado: el hgado al igual que la papa, al congelarse se desnaturaliza por ello la catalasa
perder sus propiedades y podremos observar que burbujea menos al unir el hgado con
H
2
O
2.

9.- Explicar las caractersticas de la catalasa y su importancia en los seres vivos
La catalasa:

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La enzima catalasa es tan crucial para nuestra salud que se encuentra en casi todos los
organismos vivos en el planeta que estn expuestos al oxgeno. Esta enzima antioxidante
puede catalizar la conversin de perxido de hidrxido en agua y oxgeno. El perxido de
hidrgeno es un subproducto del metabolismo celular que apoya algunas funciones tiles
incluyendo una respuesta inmunolgica saludable.
La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas quecataliza
la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua.2 Esta enzima
utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.2
2 H2O2 2 H2O + O22
Los Beneficios de la Catalasa para la Salud
Estos son algunos de los beneficios para la salud y los estudios que apoyan la importancia
de la enzima catalasa.
1. Poderoso Apoyo Antioxidante
La catalasa es, quizs, la enzima ms eficiente encontrada en las clulas del cuerpo
humano. Se ha demostrado que la catalasa crea una reaccin rpida en contra de los
radicales libres del perxido de hidrgeno convirtindolos en agua y oxgeno.
2. Posibles Efectos Anti-Envejecimiento y Anti-Degenerativos
La catalasa actualmente se estudia por sus aplicaciones al prolongar la vida y la vitalidad.
Cientficos de la Universidad de Washington en Seattle realizaron unas pruebas de
laboratorio con ratas y el aumento natural de catalasa en sus cuerpos. Al suplementar con
ms catalasa, la vida de estas ratas de laboratorio aument casi en un 20%. Esto equivale
a cerca de 25 aos en los humanos.
3. La Catalasa Puede Prolongar la Vida
El Dr. David Sinclair de la Escuela de Medicina de Harvard declar en The Scientist
Magazine que hay un vnculo directo entre la enzima catalasa, el dao de radicales libres y
prolongar nuestra vida. Esto tambin sugiere que la enzima catalasa puede servir para
evitar las enfermedades degenerativas. De manera similar, estudios realizados en Rusia y
Espaa tambin muestran una correlacin entre estos tipos de enzimas y la prolongacin
de la vida. En 2005, cientficos espaoles descubrieron que dosis muy elevadas de
polifenoles de manzana impulsaron la expresin de genes de la catalasa natural que hay
en el cuerpo. Estudios de China sobre el polifenol de las manzanas confirmaron que

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significativamente aumenta la catalasa.
4. Reduccin de Grasa
Estudios muy emocionantes de Japn muestran un vnculo entre la catalasa y niveles ms
reducidos de grasa en los rganos de ratas de laboratorio. Este estudio tambin demostr
una liga entre la enzima y un aumento en la fuerza muscular.
5. Ayuda a Evitar Daos al ADN
Un estudio del 2006 del Instituto de Citologa y Gentica determin que el estrs
oxidante, la acumulacin de protena y el dao al ADN podran reducirse en presencia de
enzimas antioxidantes, incluyendo la catalasa y el glutatin presentes en los extractos de
citosol y de la mitocondria de las clulas del hgado de las ratas. Este estudio tambin
descubri que los suplementos dietticos incrementan la actividad de la catalasa en el
mitocondria del hgado de las ratas produciendo una menor disfuncin mitocontrial y
desacelerando el proceso de envejecimiento en dichos animales.