Analisadoresde Massas

Analisadoresde Massas
Magnticos-Eletrostticos BE
Quadrupolos Qq
on-Traps 3D e on-Traps Lineares QIT
Tempos de Vo TOF
Ressonncia Ciclotnica de ons FT-MS
6- Orbitraps
BE ou EB
Dupla Focalizao com Setor Magntico e Eletrosttico
Thomson Aston Dempster 1918
V de acelarao tpico de 8.000V
Energia Cintica dos ons mv
2
= zeV
onde z = carga do on V = potencial aplicado
Para atravessar o analisador B e chegar ao detector, o on deve descrever
uma trajetria perfeita de raio r
B
BE ou EB
Disperso de energia cintica na fonte causa perda de resoluo.
Correo: B + E ou E + B !
EmE temos: mv
2
/ r
E
= eZE (3) sendo que mv
2
= ZeV (1)
(1) + (3) r
E
= 2V / E ons que sofreramacelerao exatamente proporcional a V
descrevero a trajetria de raio r
E
no analizador eletrosttico e sero transmitidos.
Os outros com Ec maior ou menor sero retidos !
Analisador E funciona ento com um analisador/filtro de energia cintica de ons,
aumentando assima resoluo da anlise de m/z. B resoluo 1.000; B + E ou E + B +
E resoluo 60.000
Caractersticas principais
1Pode operar em baixa (1.000) ou alta resoluo (at 60.000).
2Alta preciso nas medidas de massas (5 ppm em alta resoluo).
3Anlise discriminatria. Fendas filtram o sinal, baixa transmisso
principalmente em alta resoluo.
4Alto custo e complexidade.
5ons precisam ser acelerados com alta energia cintica para compensar
disperso de energia na fonte (8 kV).
6Escala de massas no linear: m/z B
2
.
7Varreduras relativamente lentas (efeito de esteresse de campo).
8Ideal para anlise isotpicas precisas:
12
C/
14
C
1
H/
2
H
Jurssico !
y
z
x
+
+
-
-
Quadrupolos Lineares : Q / q
Paul & Steinwedel 1953
A varredura feita variando simultaneamente U (DC) e V
0
(AC) mas
mantendo constante a relao U/V
0
.
Wolfgang Paul
Prmio Nobel 1989
Analisador de Massas Quadrupolar
Equao Mathieu
stability diagram
3 eV
3,2 eV
Ion Paths in Quadrupoles
Caractersticas principais
- Baixa resoluo: resoluo "unitriacontrolada por U/V
0
.
- Anlise discriminatria.
- ons so acelerados com baixa energia cintica (~15 V).
- Varreduras rpidas.
- Facilmente acoplados (QqQ e QqQqQ).
- Tolerantes a presses relativamente altas: 10
-4
torr.
- Quando operam somente com aplicao de AC ("rf-only) funcionam
como focalizadores de ons: cmaras de coliso ou reao.
Quadrupolo
QIT - Quadrupolos "Ion Trap Tridimensionais
(3D)
Paul & Steinwedel 1953
QIT - Quadrupolos "Ion Trap Tridimensionais (3D)
Paul & Steinwedel 1953
Ion traps
Um eletrodo hiperblico
Ring e dois endcap
Um eletrodo hiperblico
Ring e dois endcap
QIT 3D
"Bath gas": adiciona-se hlio a uma presso tpica de 10
-3
Torr para aumentar sensibilidade e
resoluo. A repulso entre ons de mesma carga confinados no centro do trap tende a
desestabilizar suas trajetrias por disperso (efeito "space-charge"). Colises com o "bath gas"
resfriam os ons (energia cintica), mantendo-os aprisionados com refocalizao para o centro do
trap.
Aprisionamento seletivo de ons: Seqncia de eventos. Aps o aprisionamento de vrios ons, um
on de m/z especfico (ex: 100) pode ser mantido no trap, e os demais eliminados. Uma voltagem rf
adicional aplicada nos eletrodos end-cap com amplitude e freqncia ajustadas para eliminar os
ons mais pesados (m/z > 100). A amplitude da voltagem rf (V) aplicada no ring electrode ento
aumentada at um valor limite (imediatamente inferior aquele necessrio para a eliminao do on
de m/z 100), e durante a varredura de V tanto os ons pesados como os leves so sucessivamente
eliminados.
Um eletrodo hiperblico simtrico na forma de um anel ou "doughnut" (ring electrode)
posicionado entre dois eletrodos hiperblicos (end cap electrodes). Aplica-se sobre o ring
electrode uma voltagem AC (rf) de amplitude (V) varivel e freqncia (~1.1 MHz) fixa (V +
coswt) que cria um potencial quadrupolar tridimensional aprisionador. Os eletrodos end cap
so aterrados (V = zero). No se aplica normalmente voltagem dc (U), portanto os QIT podem
ser classificados como quadrupolos "rf-only" tridimensionais. Liga-se o filamento e todos os
ons formados dentro do QIT (ou ali injetados) de m/z acima de um certo valor limite
(determinado por V) so aprisionados por um certo perodo de tempo (~1 ms). Aps este
perodo de captura dos ons, desliga-se o filamento e obtm-se um espectro de massas pela
varredura de V; ons de m/z crescente so acelerados na direo do eixo Z, sendo assim
ejetados atravs de orifcio no eletrodo end cap, e detectados.
Trajetria Estvel
Caractersticas principais QIT
Baixa resoluo: resoluo "unitria". Pode trabalhar em alta resoluo em
varreduras lentas.
Baixo custo, simples, robusto e pequeno: ~ 5 x 5 x 5cm. (Cilndricos
miniaturizados)
Eletrnica simples: somente voltagem RF.
Escala de massas linear: m/z V.
Permite experimentos MS
n
seqenciais no tempo (ex: MS
13
).
Trabalha com presses relativamente altas: 10
-3
torr.
Devido a possibilidade de ocorrer reaes on-molcula durante aprisionamento,
espectros de EI podem ser "contaminados" por CI.
Fcil realizao de CI a presses relativamente baixas.
Baixa preciso nas medidas de massas. Mass-shifts eletrnicos e qumicos.
Ion traps (MS
n
)
QIT - Quadrupolos "Ion Traps Lineares
Vantagens: ~50 vezes mais sensveis; maior capacidade de armazenamento. Reduzem
os problemas de charge space : repulso on-on e assim minimizam mass-shifts.
Sem problemas de self-CI e perda de 1/3 m/z em MS/MS !
QIT - Quadrupolos "Ion Traps Lineares
Ion trap
N
2
CAD Gas
linear ion trap
3x10
-5
Torr
Dipolar Aux AC
IQ2 IQ3
Exit
Skimmer
Orifice
LINAC
IQ1
Q0 Q1 Q2 Q3
Tempos de Vo TOF
Cameron 1948
Atravs de um tubo de comprimento L (~ 1m) sob alto vcuo, ons formados por
ionizao pulsada (~0.25 a 1 ms) so acelerados pela aplicao de uma voltagem V
(~1-10 KV) e adquirem velocidades proporcionais as suas m/z's. Ocorre disperso em
tempo e ons de diferentes m/z's chegam ao detector em tempos diferentes :
t = (m / 2zeV)
1/2
L
Princpio bsico: Disperso no tempo de ons por acelerao seguida da medidas de
seus tempos de vo "livre".
O patinho feio
Reflectron Instruments
Analisador de Massas por tempo de Vo.
Tof Linear
Resoluo = 600
Tof Linear
Resoluo = 600
Tof Ortogonal
Resoluo = 3400
Tof Ortogonal
Resoluo = 3400
Aumento da Resoluo em TOF
a) Acelerao Ortogonal
b) Espelho Elestrosttico
Lindo Cisne
TOF's lineares apresentam baixa resoluo devido a durao do pulso de ionizao e
disperso de energia cintica dos ons na fonte. Soluo paliativa: Aumento de L ou tcnicas
de acelerao "ps-ionizao".
Reflectors (Espelhos Eletrostticos): Uma srie de grades ou eletrodos onde se aplica um
potencial repulsivo crescente. Os ons penetram angularmente no reflector, so
desacelerados por repulso eletrosttica, fazem uma curva, e assim retornam para o tubo de
vo. Considere dois ons de mesma m/z mas com diferentes velocidades, dispersos no tempo.
O on de maior energia cintica, a frente em tempo de vo, penetra mais profundamente no
reflector e ali permanece por mais tempo. O outro penetra menos profundamente, e ali
permanece por um tempo menor. A disperso corrigida, e os ons so refocalizados em
tempo de vo, com conseqente aumento da resoluo (largura do pico) ou poder de
separao.
Acelerao ortogonal. o-TOF: ons so produzidos de forma contnua na fonte de
ionizao, e acelerados. O feixe de ons focalizado com o auxlio de lentes e
quadrupolos/octapolos "rf-only". Uma acelerao pulsada e ortogonal ao movimento do
feixe de ons aplicada. ons ento adquirem velocidades "ortogonais" que no so
influenciadas pelas suas velocidades divergentes adquiridas pela acelerao na fonte.
AumentodaResoluoemTOF
Caractersticas principais.
TOF's lineares: baixa resoluo. TOF's com reflector: mdia
resoluo. o-TOF's com reflector: alta resoluo e alta preciso (
5 ppm).
Anlise no-discriminatria. Alta sensibilidade.
Baixo custo, fcil manuteno.
Varreduras extremamente rpidas.
Ampla faixa de varredura > 10
6
u. nico analisador acoplvel
a MALDI de macromolculas.
Hoje, uma das melhores relaes custo/benefcio.
TOF
FTMS
Espectrometria de Massas com Ressonncia Ciclotrnica
de ons (ICR) e Transformada de Fourier
Comosarow & Marshal 1974
Monster MS
FT-MS
Uma cela cbica posicionada no centro de um ma supercondutor (~ 3-7 Tesla). Os
ons formados dentro da cela (ou ali injetados) se movem em uma trajetria circular
perpendicular ao eixo do campo magntico, de frequncia angular (frequncia de
ressonncia ciclotrnica) w
c
proporcional ao campo magntico B e as suas m/z's:
w
c
= zeB/m
Para evitar que ons escapem da cela, uma baixa voltagem dc aplicada aos eletrodos de
aprisionamento gerando um campo eltrico E perpendicular ao campo magntico B.
Uma voltagem rf aplicada aos eletrodos transmissores (laterais). Varre-se ento
rapidamente a frequncia da voltagem rf (pulso) mantendo-se B constante. Quando a
frequncia de rf (w
rf
) se iguala a frequncia angular de oscilao de algum on: w
c
, este
absorve energia com aumento de velocidade e do raio de sua orbita mas sem alterar a
frequncia de sua oscilao. Aps poucas rotaes, os ons que absorveram energia
estaro se movendo sincronizadamente. Esta oscilao ciclotrnica sentida pelos
eletrodos receptores (superior e inferior), produzindo uma corrente com frequncia iqual a
w
c
. Rpida variao de w
rf
pode ser realizada, sendo o espectro de massas obtido pela
aplicao de FT.
Princpio bsico: Aprisionamento de ons em uma campo magntico/eltrico, seguido da
medida de suas frequncias de ressonncia ciclotrnica.
Princpios de operaco do ICR (FTMS)
Partculas carregadas iro apresentar um movimento circular
em um campo magntico com uma frequncia ciclotrnica
relacionada ao seu valor de m/z !
F F = = z z ( (v v x x B B) )
r
zvB
=
mv
2
r m

c =
v
=
zB
F = massa . acelerao
r
F
=
mv
2
2 2m

c =

c =
zB
z 2
c
m
=
B
Caractersticas principais FT-MS
Altssima resoluo (funo de B como em RMN) que diminue com o
aumento de m/z.
Alta sensibilidade. 10-100 ons precisam normalmente oscilar para serem
sentidos pelos eletrodos receptores.
Alto custo (supercondutores), difcil manuteno.
MS
n
. Operao semelhante aos ion-traps.
Trabalham sob altssimo vcuo (< 10
-8
Torr) enquanto a quantidade de ons
aprisionados na cela pequena ("charge-spacing").
Muito utilizados em estudos de reaes on-molcula (estudos cinticos) e
em anlise de altssima resoluo-preciso.
Orbitrap
Deteco de ons
(Multiplicadores de Elctrons)
Copper-Beryllium (CuBe) Discrete Dynode Multipliers
Alta sensibilidademasrelativamenteinstveisfrentea seguidas
exposies atmosfera
Continuous Dynode Multipliers
Durveise maisresistentesa exposioesfrequentes atmosfera
1- Gramofone de vidrocom superfcieinternade xidode chumbo
causaum gradientede voltagematrativoparaeltrons.
2- onsincidindosobrea superfcieemalto potencial negativo(~-
2000V) causama emissode ~3 eltrons/on.
3- Processode multiplicaode eltronsemcascata: ganhode 10
6 -
10
8
!!
Um eletrodocomplementar ondese aplicavoltagemde 3- 20 KV.
Aumentaa sensibilidadeparaonsde altamassa!
Conversion Dynode
MCP - Micro-Channel Plates
Multiplicadoresde lectronscompactosde alto ganho. MCP
consistemde cercade 10.000.000 canaisdo mesmodiametro
formadospor drawing, etching, or firingin hydrogen a lead
glassmatrix. Dimetrotpicode ~10 microns.
MCP - microchannel plates
Detectoresultra sensveisutilizadosnamaioriados espectrmetroscom TOF. Vrioscanais
multiplicadoresde eltrons.
Detectores
Detectores
dynode
dynode
phosphor
phosphor
photomultiplier
photomultiplier
Fotomultiplicador
Dinodode conversotransformaonspositivosounegativosem eltrons. Estes
eltrons atingemumasuperfciede fsforoe emiteftons.
Os ftonsatingemum fotocatodoproduzindoeltronsquesoamplificadospelo
fotomultiplicador.
Detectores
Detectores
Os top MS so MS/MS ou
MS
n
e Hbridos !
Triploquadrupolo
Setor EBEB
EBqQ
Qtof Waters-Micromass Hybrid High-Resolution
Quadrupole Orthogonal Time-of-Flight Mass
Spectrometer (MS
2
) ESI-APCI
Qtof Waters-Micromass Hybrid High-Resolution
Quadrupole Orthogonal Time-of-Flight Mass
Spectrometer (MS
2
) ESI-APCI
QTrap - Quadrupolos com Ion Traps Lineares (QqLTQ)
N
2
CID Gas
linear ion trap
3x10
-5
Torr
Dipolar Aux RF
TM
The APEX-Q platform combines a Q-q- "front-end" and a
high field FTMS magnet (9.4 or 12 Tesla) for the ultimate
resolution proteomics mass spectrometer.
QqFT-MS
LCMS-IT-TOF
Shimadzu introduces the first high resolution LCMS-ion trap-time-of-flight mass
spectrometer
Featuring MS
n
Capability Shimadzu's new LCMS-IT-TOF is a novel hybrid mass spectrometer for biomarker discovery,
metabolite identification and human health research, and ideal for applications in forensics, drug development, and
environmental chemistry. Coupling atmospheric pressure ionization with Ion-Trap (IT) and Time-of-Flight (TOF)
technologies, the LCMS-IT-TOF delivers high mass accuracy and high mass resolution (10,000 at 1000 m/ z)
independent of MS mode.
Ion Trap Linear com FT-MS
Ion Trap Linear com FT-MS
For the first time in the history of mass spectrometry, the LTQ FT combines the ruggedness,
versatility, and MS
n
capabilities of the most advanced ion trap mass spectrometer with the
accurate mass measurement capability of a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance
analyzer. This has been achieved without compromising the analytical capabilities of either the
ion trap or the FTICR-MS.
Triploquadrupolos ?