Extraccin de ADN

Objetivo
Utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN de un producto
natural
Observar la estructura fibrilar del ADN.
Introduccin
ADN es la abreviatura del cido desoxirribonucleico (en inls! DNA".
#onstitu$e el %aterial entico de los oranis%os. &s el co%ponente 'u(%ico
pri%ario de los cro%oso%as $ el %aterial del 'ue los enes estn for%ados.
)ateriales *roductos
+asos de precipitado de
,-.%l
+aso de precipitado de
-..%l.
/ubos de ensa$o
Un cuc0illo
Un colador
Una licuadora o %ortero
frutillas
pltano! to%ate! %elocotn
Aua destilada 1litro
Deterente lavavajillas en li'uido
2al -.r
3u%o de pi4a o de papa$a1..%l
Alco0ol de 567 %u$ fr(o -..%l
8ielo en cubitos
&9*&:I&N#IA
1.; #orta%os la en trozos de dados
,.; &n un vaso de aua ec0a%os < cuc0araditas de
deterente lavavajillas $ una de sal $ a4adi%os aua
destilada 0asta llenar el vaso.
<.; )ezcla%os esta solucin con los trozos de cebolla
=.; >ic?anos el conjunto! con la batidora! a velocidad
%xi%a durante <. seundos
-.; @iltra%os el l('uido obtenido con un filtro de caf.
6.; >lena%os un cuarto de un tubo de ensa$o con la
disolucin filtrada.
A4ade otro tanto de zu%o de pi4a $ %ezcla%os bien.
A.; A4adi%os un volu%en de alco0ol %u$ fr(o e'uivalente al
del filtrado! cuidadosa%ente! 0acindolo resbalar por las
paredes del vaso para 'ue for%e una capa sobre el filtrado.
8.- Dejamos reposar durante 2 3 minutos hasta que se forme una
zona turbia entre las dos capas. A continuacin introducimos la
varilla y etraemos una mara!a de fibras blancas de AD".
*recauciones
#uando a4adas el alco0ol fr(o debes 0acerlo de for%a 'ue resbale por
las paredes del tubo para 'ue for%e una capa sobre el filtrado. *uedes
utilizar la varilla de vidrio o una cuc0arilla para a$udarte.
&xplicacin cient(fica
ADN en la interfase agua-
alcohol
>a extraccin de ADN re'uiere una serie de
etapas bsicas. &n pri%er luar tienen 'ue
ro%perse la pared celular $ la %e%brana
plas%tica para poder acceder al n?cleo de la
clula. A continuacin debe ro%perse ta%bin la
%e%brana nuclear para dejar libre el ADN. *or
?lti%o 0a$ 'ue proteer el ADN de enzi%as 'ue
puedan deradarlo $ para aislarlo 0a$ 'ue 0acer
'ue precipite en alco0ol.
>a solucin de lavavajillas $ sal a$udada por la
accin de la licuadora es capaz de ro%per la
pared celular $ las %e%branas plas%tica $
nuclear.
>os zu%os de pi4a $ papa$a contienen un
enzi%a! la papa(na! 'ue contribu$e a eli%inar las
prote(nas 'ue puedan conta%inar el ADN.
&l alco0ol se utiliza para precipitar el ADN 'ue es
soluble en aua pero! cuando se encuentra en
alco0ol se desenrolla $ precipita en la interfase
entre el alco0ol $ el aua.
#uriosidades $ otras cosas
&l ADN fue identificado inicial%ente en 1B6B por @riedric0 )iesc0er! biloo
suizo! en los n?cleos de las clulas del pus obtenidas de los vendajes
'uir?ricos desec0ados $ en el esper%a del sal%n. Cl lla% a la sustancia
nucle(na! aun'ue no fue reconocida 0asta 15=< racias al experi%ento
realizado por OsDaldAver$
>a estructura del ADN es una pareja de laras cadenas de nucletidos. >a
estructura de doble 0lice del ADN fue descubierta en 15-< por Ea%es Fatson
$ @rancis #ricG. Una lara 0ebra de cido nucleico est enrollada alrededor de
otra 0ebra for%ando un par entrelazado. Dic0a 0lice %ide <!= n% de paso de
rosca $ ,!<A n% de di%etro! $ est for%ada! en cada vuelta! por 1.!= pares de
nucletidos enfrentados entre s( por sus bases nitroenadas.
2lo tene%os un <.H %s de enes 'ue un di%inuto usano! el cual tiene solo
un %il(%etro de lonitud $ posee 5-5 clulas! en tanto 'ue nosotros alrededor
de 1.. billones. I %ientras 'ue los seres 0u%anos posee%os
aproxi%ada%ente 1...... %illones de neuronas! el di%inuto usano cuenta
unica%ente con <.,.
&n co%paracin con el arroz nos va a?n peor! puesto 'ue un rano de arroz
tiene %uc0os %s enes 'ue una persona! $ todav(a no se le 0a ocurrido ni la
%s tonta de las ideas.
Jiblioraf(a
&xtraccin del ADN de una cebolla.
K#%o ver su ADN con un experi%ento caseroL.
&xtraccin de ADN
&xtraccin casera de ADN.
&xtraccin de ADN de tejidos veetales.
#uriosidades del ADN.
Oria%iDna%odel.
&xtraccin de ADN.
-- Documentos de apoyo leer
obligatorio
Extraccin del ADN de una cebolla (PR-5)
M L. Tato El rincn de la Ciencia n 5, Marzo 2000
La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen
que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al
ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear
para dejar libre el ADN. or ltimo !ay que proteger el ADN de en"imas que
puedan degradarlo y para aislarlo !ay que !acer que precipite en alco!ol.
El material que se necesita es #cil de encontrar y el procedimiento es sencillo.
Animo! e intenta acerlo en casa.
$A%E&'AL(
una cebolla grande #resca
detergente la)a)ajillas
sal
agua destilada
"umo de pi*a o papaya
alco!ol de +,- muy #r.o /puede sustituirse por )od0a !elado1
un )aso de los de agua
un )aso de cristal alto /se mantiene en la ne)era !asta que )aya a
utili"arse1
un cuc!illo
una )arilla de cristal
una batidora
!"mo acerlo#
2orta la "ona central de la cebolla en cuadrados
En un )aso de agua ec!a 3 cuc!araditas de detergente la)a)ajillas y
una de sal y a*ade agua destilada !asta llenar el )aso.
$e"cla esta solucin con los tro"os de cebolla
Lica el conjunto4 con la batidora4 a )elocidad mxima durante 35
segundos
6iltra el l.quido obtenido con un #iltro de ca#
Llena !asta la mitad aproximadamente un )aso de cristal alto con la
disolucin #iltrada
A*ade 3 cuc!araditas de ca# de "umo de pi*a o papaya y me"cla
bien
A*ade un )olumen de alco!ol muy #r.o equi)alente al del #iltrado4
cuidadosamente4 !acindolo resbalar por las paredes del )aso para
que #orme una capa sobre el #iltrado. uedes utili"ar la )arilla de
)idrio o una cuc!arilla para ayudarte.
Deja reposar durante 7 3 minutos !asta que se #orme una "ona
turbia entre las dos capas. A continuacin introduce la )arilla y extrae
una mara*a de #ibras blancas de ADN.
!$u% a ocurrido#
La solucin de la)a)ajillas y sal ayudada por la accin de la licuadora es capa" de
romper la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear.
Los "umos de pi*a y papaya contienen un en"ima4 la papa.na4 que contribuye a
eliminar las prote.nas que puedan contaminar el ADN.
El alco!ol se utili"a para precipitar el ADN que es soluble en agua pero4 cuando se
encuentra en alco!ol se desenrolla y precipita en la inter#ase entre el alco!ol y el
agua.
--
CMO EXTRAER ADN DE CUALQUIER COSA
VIVIENTE
Cmo extraer ADN de cualquier cosa viviente
iADN! Quieres decir que puedo verlo? Cmo?
Slo sigue estos tres sencillos pasos:
Alcohol
Detergente
eNzimas (ablandador de carne)
Es tan simple? iDime ms!
Primero necesitas encontrar algo que contenga ADN. Ya que el
ADN es el plano de instrucciones para la vida, cualquier cosa
viviente contiene ADN.
Para este experimento preferimos usar arvejas guisantes!
verdes.
Pero tam"i#n $a% montones de otras fuentes de ADN, como
por ejemplo:
Espinacas
Hgado de pollo
Cebollas
Brcoli
Aqu est la parte divertida. Pon en una licuadora:
Tu fuente de ADN (ms o menos 100 ml o 1/2 de taza de arvejas
)
Un pellizco grande de sal de mesa (menos de un ml o 1/8 de
cucharadita)
Agua fra. El doble de la cantidad de tu fuente de ADN (ms o
menos 200 ml o 1 de taza)
&icua todo a alta velocidad por '( segundos.
)l licuado separa las c#lulas de las arvejas unas de otras, por
lo que a$ora tienes una mu% diluida sopa de c#lulas de arvejas
. De"ido a que este paso es un revoltijo, ciertas fuentes de
ADN no de"en ser usadas, como por ejemplo:
ahora! sigue estos tres pasos:
'. *ierte tu sopa de c#lulas de arvejas a trav#s de un colador
dentro de otro contenedor como una ta+a medidora por
ejemplo!.
,-u.nta sopa de arvejas tienes/ A0ade como '12 de esa
cantidad de detergente l3quido m.s o menos 45 ml o dos
cuc$aradas soperas! % m#+clalo. Deja reposar la me+cla entre
( % '5 minutos.
*ierte la me+cla en tu"os de ensa%o u en otros contenedores
peque0os de vidrio, cada uno como '14 lleno.
Prue"a usar uno de estos detergentes o el que sea que tengas
a mano.
,Por qu# esto% usando detergente/
6. A0ade un pelli+quito de en+ima a cada tu"o de ensa%o %
ag3talo suavemente. iSe cuidadoso7 Si lo agitas demasiado
fuerte romper.s en ADN $aci#ndolo m.s dif3cil de ver.
8sa a"landador de carne como en+ima. Si no puedes encontrar
a"landador, intenta usar jugo de pi0a o solucin limpiadora
para lentes de contacto.
,9u# es una en+ima/
4. &adea tu tu"o de ensa%o % lentamente vierte el alco$ol
isoprop3lico al :5;<(= o alco$ol et3lico! so"re la pared del
tu"o de manera que forme una capa so"re la me+cla de
arvejas. Sigue virtiendo $asta que tengas en el tu"o
aproximadamente la misma cantidad de alco$ol que de me+cla
de arvejas.
)l ADN se elevar. desde la me+cla de arvejas $asta la capa de
alco$ol. Puedes usar un palito de madera u otro tipo de ganc$o
para arrastrar el ADN que est. en el alco$ol.
"#u$ es esa cosa pega%osa&
)l alco$ol es menos denso que el agua, por lo que flota en la
parte superior. De"ido a que se formaron dos capas separadas,
toda la grasa % prote3na que rompimos en los dos primeros
pasos % el ADN tiene que decir:
"Mmmmm... a que capa deer!a de ir?"
)sto es algo as3 como "uscar en una rec.mara el lugar m.s
conforta"le para sentarse. Alguien escoger. el silln, otros
qui+.s escojan la mecedora.
)n este caso, la prote3na % la grasa ir.n al fondo, que es la
capa acuosa, donde se sienten m.s conforta"les, mientras que
el ADN prefiere la capa superior, el alco$ol.
)l ADN es una larga % pegajosa mol#cula a la que le gusta
formar grumos.
i'elicitaciones( iAcabas de completar una e)tracci*n de
ADN(
A$ora que $as extra3do exitosamente ADN de una fuente,
est.s listo para experimentar un poco m.s all.. >ntenta
tra"ajar con estas o con algunas de tus propias ideas:
Experimenta con otras fuentes de ADN. Qu fuentes producen
ms ADN?, Cmo puedes compararlas entre si?
Experimenta con distintos tipos de jabones y detergentes. El
jabn en polvo funciona tan bien como el detergente lquido? y
que hay del shampoo y el jabn lquido para el cuerpo?
Trata de saltarte alguno de los pasos o simplemente cmbialos.
Te hemos dicho que necesitas realizar cada paso, pero es
cierto? Avergualo por ti mismo. Intenta cambiar la cantidad de
alguno de los ingredientes utilizados.
Solamente las cosas vivas contienen ADN? Intenta extraer
ADN de cosas que pienses que no deberan de tener ADN.