ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL -SEDE-JUANJUI
CURSO : ANLISIS DE PRODUCTOS NATURALES TEMA : MARCHA FITOQUIMICA PRELIMINAR DE LA DETERMINACION DE LOS CONSTITUYENTES QUIMICOS DE UNA PLANTA POR PRUEBAS DE COLORACION. ENSAYOS DE ANALISIS POR CROMATOGRAFIA DE CAPA DELGADA (CCD) UTILIZANDO UN EXTRACTO DE MALVA. DOCENTE : ING. M. Sc. ALEJANDRO A. CRUZ RENGIFO.
INTEGRANTES:
FECHA DE PRESENTACION: 18/06/12
JUANJUI_PERU 2012
INTRODUCCIN.
I.- INTRODUCCION Las plantas medicinales tienen propiedades curativas que ya eran conocidas en la antigedad, aunque tambin se han aadido al arsenal teraputico otras plantas cuya utilidad ha sido descubierta recientemente. Hasta el desarrollo de la qumica, y, particularmente, de la sntesis de compuestos orgnicos a lo largo de los siglos XIX y XX, las plantas medicinal eran prcticamente la nica fuente de principios activos capaces de mejorar el estado de salud de las personas. Las plantas medicinales continan teniendo una gran importancia para personas que no tienen acceso a las medicinas modernas y, adems, muchos medicamentos modernos dependen en gran medida en los mismos principios activos. stos difieren de unas plantas a otras debido a su biodiversidad, ya que el cdigo gentico de cada especie vegetal contiene informacin para producir compuestos qumicos diferentes. Su uso adems, deja al descubierto un proceso mgico, folklrico y cientfico, que solamente alguien conocedor de esta trada, puede relacionar para poder llegar a un buen diagnstico en caso de ingestin accidental, o de suministro inadecuado de brebajes elaborados con plantas para alguna afeccin en el nio y/o en el adulto.
Para poder entender los beneficios y riesgos del uso de las plantas como medicamentos, es necesario aprender a reconocerlas, aislar sus principios txicos, comprender sus mecanismos de accin e intentar contrarrestarlos, lo cual es una tarea delicada que apenas est comenzando.
La variedad de estos agentes, su ubicacin en la planta (hoja, semilla, tallo, etc.), su biodisponibilidad estacional y las caractersticas intrnsecas del husped humano, dificultan a la persona desinformada correlacionar la variada sintomatologa con el contacto o la ingestin de plantas. De las 1 109 plantas medicinales conocidas en el Per unas 890 especies provienen de la amazonia. Muchas de estas especies se encuentran en vas de extincin... LOS AUTORES
PRACTICA N1 MARCHA FITOQUIMICA PRELIMINAR DE LOS CONSTITUYENTES QUMICOS EN UNA PLANTA POR PRUEBAS DE COLORACIN I.- MARCO TEORICO: AJO SACHA DATOS GENERALES Familia: BIGNONIACEAE Nombre cientfico: Mansoa alliacea (Lam.) A. Gentry. Nombres comunes: Ajos del monte; Be' o-ho y Be'o-ja pusanga (ese eja); Boens, Niaboens, Posatalu (piro, yine); Shansque boains (shipibo-conibo); Frukutitei (Surinam). DATOS AMBIENTALES Clima: Zonas tropicales con precipitacin pluvial de 1 800 a 3 500 mm/ao, temperaturas entre 20 a 26C. Suelo: Suelo arenoso o arcilloso con abundante materia orgnica. Biotopo de poblaciones naturales: Habita en faldas de altura, alejada de cuerpos de agua, chacras nuevas, reas sombreadas o poco sombreadas tanto de purmas como de bosque primario. No es resistente a la inundacin. Comparte su hbitat con las siguientes especies: aguaje, algodn, bijao, caa agria, carahuasca, castaa, cedro, cetico, cordoncillo, charichuelo, chiricsanango, chuchuhuasi, espintana, huacap, huamansamana, huito, limn, patiquina, pijuayo, poma rosa, pona, sangre de grado, sapohuasca, shapaja,ubos, umar, ua de gato, uvilla, yarina, zapote. CULTIVO poca de siembra: La plantacin debe coincidir con el inicio de la temporada lluviosa. En la Amazona Peruana es recomendable plantar durante los meses de noviembre a diciembre. Espaciamiento: Distanciamiento de 3 m x 3 m. Labores de cultivo: En un sistema semi-intensivo, es necesario el tutoraje, preferentemente mediante espalderas. Las podas deben realizarse con la finalidad de estimular un mayor nmero de rebrotes y facilitar las cosechas al limitar su altura. Enemigos naturales: Curuhince (hormiga del gnero Atta), hongos y araas. Propuesta de asociacin de cultivos: Sembrar en fajas de enriquecimiento en purmas (bosque secundario) de 3 a 5 anos o en asociacin de especies forestales tales como cedro, marupa, angre de grado, chuchuhuasi y especies frutales como palto, pijuayo, huito y coco. La plantacin de esta especie con tutoraje determina su ubicacin en el estrato intermedio del sistema. Propagacin: Mediante el empleo de estacas de tallos y races entre 5 a 8 cm de largo. Tambin se emplean esquejes y acodo terrestre. COSECHA Y CONSERVACION DEL PRODUCTO Partes aprovechadas: Corteza, hoja, tallo y raz. Cosecha: Se realiza manualmente durante todo el ao. Manejo post-cosecha: Para su conservacin, las partes vegetales
areas deben ser desecadas colgndolas bajo sombra, por un tiempo mnimo de una semana. La raz se debe poner a secar al sol, segn las tcnicas indicadas, durante 4 das. INFORMACION COMPLEMENTARIA Componentes qumicos: Alildi-sulfxido, alcaloides, allina, allicina, disulfuro propilalilo, estigmasterol, flavonas, pigmentos flavnicos, saponinas, sulfuro de dialil, sulfuro de dimetilo, sulfuro de divinilo. Naftaquinonas citotxicas: la 9-metoxy-(alfa)-lapachona y la 4-hidroxy-9-metoxi-(alfa)- lapachona. Distribucin geogrfica: En el Per, se encuentra distribuida en los departamentos de Amazonas, Hunuco, Loreto (Tamshiyacu, Valentn e Indiana, ro Amazonas; Llachapa y Corazn de Jess, ro Napo; Padre Cocha, ro Nanay; Contamana, ro Ucayali) y San Martn. Descripcin botnica: Arbusto semitrepador de 3 m de altura o ms, partes vegetativas con olor a ajos o cebolla, pseudo estpulas pequeas, aplanadas y cnicas. Hojas bifolioladas con zarcillo trfido, foliolos abovados a elpticos de 5-27 x 2-18 cm, de pice agudo a obtuso y base cuneada. Inflorescencias axilares en racimos o panculas pausifloras; cliz cupular de 5-10 cm x 6-11 mm; corola violeta tubular campanulada de 6 a 9 cm de largo. Fruto cpsula linear oblonga lignificada, fuertemente angulosa, de superficie lisa. Semillas con dos alas membranceas, parduzcas y subhialinas en el borde. II.- MATERIALES Y PROCEDIMIENTO: 2.1- MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES: REACTIVO: Mortero y piln 20-25 ml Etanol Balanza analtica Wagner Vaso de precipitacin Mayer Probeta Acido clorhdrico al 1% Embudo Cloruro Frrico Matraz Agua destilada Gradilla Tubo de ensayo
MUESTRA: Material fresco (hojas de ajo sacha).
2.2- PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA:
MUESTRA MOLIDA=2gr +20ml metanol extraer Por 100mm filtrar EXTRACTO DE SOLUCION Dividir en 6 tubos de pruebas (1 tubo ser de patrn) +1 Gota HCL 1% + H2O (DOBLE DE VOLUMEN) agitar por 30 seg.
Reactivo -Wagner -Prueba De La Espuma -Reactivo: Shinoda -Reactivo: FeCl - Mayer
ALCALOIDES
FLAVONOIDES
SAPONINAS
FENOLES
1. Tomamos la muestra de Ajo Sacha y convertimos en partcula pequeas, luego pesamos 3gr de Ajo Sacha en la balanza analtica, con un vaso de precipitacin de 20 ml, y agregamos 20 Alcohol.
2. Maceramos la concentracin por un lapso de 10 minutos, luego dejamos en reposo, y Despus se filtr.
3. Tomamos el extracto en solucin y lo dividimos en 6 partes iguales, luego estas muestras se le coloco en 6 tubos de ensayo respectivamente.
4. En dos tubos sern accionados para la determinacin de alcaloides el cual se usaron dos reactivos: Wagner (dando como resultado verde petrleo) y en Mayer (dio como resultado un color verde petrleo claro) y con el testigo pudimos observar que hubo un cambio de coloracin, eso significa que si contiene alcaloides.
Muestra+ 1 gota de HCL al 1%+Wagner y Mayer
5. En un tubo la determinacin de saponinas se uso agua destilada ms el volumen de la muestra dando por resultado despus de agitar se observo la formacin de espuma teniendo en cuenta el tiempo de 30 seg para deducir si hay o no presencia de saponinas.
Se observo presencia de saponinas
6. Para la determinacin de flavonoides se empleara la Prueba de SHINODA.
2HCl + Mg MgCl + H
7. Para la determinacin de fenoles, bastara agregar 2 o 3 gotas de FeCl, para el extracto del tubo para observar la presencia de este metabolito.
Agregamos, 2 limaduras de Mg+3gotas de HCLconcentrado . Como resultado, Observamos un color marron claro , y la expulcion del hidrogeno al ambiente
9. Anotamos los resultados en cada determinacin que observamos sobre los metabolitos sealados.
a.) Resultado N1: Alcaloides: Wagner Marrn Claro
En el porta tubos, observamos claramente los resultados finales de las seis muestras elaboradas.
b.) Resultado N2: Alcaloides: Mayer Marrn Oscuro
c.) Resultado N3 : saponinas: Color Verde claro ( hay espuma)
d.) Resultado N 4: Reaccin de Shinoda: Color verde claro y al agitar la parte de arriba se tornaba color marrn claro.
e) Resultado N 5:
Fenoles: Color Verde Oscuro
f) Resultado N 6:
Testigo : Color Verde
PRACTICA N2
ENSAYO DE ANLISIS POR CROMATOGRAFA DE CAPA DELGADA (CCD) UTILIZANDO UN EXTRACTO DE MALVA
I.- MARCO TEORICO: Cromatografa:
Es un mtodo de anlisis qumico para la separacin de los componentes de una mezcla por distribucin entre dos fases, una estacionaria y otra mvil, que en un principio se utiliz para separar sustancias coloreadas.
El cromatografa, emplea un medio adsorbente que, al ser colocado en contacto con una muestra, adsorbe sus distintos componentes a velocidades diferentes. De esta forma se separan los componentes de una mezcla. La cromatografa tiene muchas aplicaciones importantes, como la determinacin del nivel de contaminantes en el aire, el anlisis de medicinas y el anlisis de sangre y de orina.
Cromatografa De Capa Delgada (Ccd):
La cromatografa de capa delgada llamada tambin cromatografa de capa fina, es una tcnica muy simple y til para determinar los componentes de una mezcla o identificar los componentes de una muestra que desde luego depender de muchos factores como: tipo de disolvente(s) para eluir, constitucin y estructura de la placa, medio donde detecta los componentes en el proceso cromatografico, espesor y grado de activacin del adsorbente, cantidad de muestra, valor de R f
para cada sustancia, etc., es decir se debe cumplir con todas las condiciones cuando se pretende realizar un trabajo de investigacin.
En la cromatografa de capa delgada un adsorbente (solido) est depositado formando una delgada capa sobre una placa de vidrio o de otro material a travs del cual ascienden arrastrados por el disolvente una o ms substancias que se pretende separar o identificar.
Genero: Bixa Especies: B. orellana, B. orellana, B. upatensis, B. platicarpa, B. azara Sinonimos: Bixa odorata, Orellana americana. Las anteriores son las cinco especies ms conocidas en el pas, siendo la B. Orellana la ms cultivada y reconocida comercialmente (Vallejo 1991).
DESCRIPCIN BOTNICA El achiote (Bixa orellana) es un arbusto o rbol pequeo, cuyas ramas se inician aproximadamente a un metro del suelo y puede crecer hasta 5 6 mt, dependiendo de las caractersticas ecolgicas de la regin; tiene un rpido desarrollo. Su aspecto es robusto, muy frondoso y de copa redonda (crdoba 1987). Es un rbol muy ornamental, especialmente los que tienen cpsulas de colores encendidos (Rivero 1973) Raz: Presenta una raz principal pivotante que puede penetrar a profundidad si el suelo es apropiado. Son adems leosas, cilndricas y ramificadas (Ramos 1991) Tallo: Es redondo, de corteza ligeramente fisurada y numerosas lenticelas y puede presentar hasta 20 o 30 cm de dimetro en la base (Vallejo, et al 1981). Hojas: Son grandes, cordiformes, color verde pardo con algunas vetas rojizas. Son alternas, sencillas, de borde liso y pice acuminado, con un peciolo de 4 a 6 cm de largo
Flores: Son hermafroditas, muy vistosas, son blancas o rosadas. Se agrupan en panculas terminales al final al final de las ramas. Frutos y semillas: Se presenta en cpsulas de dos valvas hemisfricas, ovoides, elipsoidales o cnicas. Cubierta de espinas rgidas o pelos; presentan dehiscencia dorsal, color pardo rojizo o amarillo verdoso. Contiene de 30 a 45 semillas de 3 a 4 mm de largo en forma obcnica o pirmides, cubiertas por una delgada capa o arilo, y por su contenido de bixina es de color rojo o anaranjado y constituye la sustancia tintrea o achiote propiamente CULTIVO Preparacin del Terreno: La preparacin del terreno depende de varios factores tales como: topografa, tecnologa por aplicar, recursos econmicos disponibles y otros. En terrenos de montaas con cierta pendiente, la preparacin consiste en voltear el terreno para luego hacer los hoyos, mientras en terrenos planos la
preparacin puede realizarse en forma mecanizada, efectuando una arada y una rastada del terreno para luego hacer los hoyos. (Arce, 1983) Distancia de Siembra: No existe una distancia de siembra nica y definitiva, pues ella depende del tipo de Achiote y del lugar en que se siembre (Arce, 1984). Segn (Crdoba, 1987) las distancias ms recomendadas en una plantacin de achiote son 4.5 X 4.5 mt; en terrenos frtiles con buena cantidad de materia orgnica las distancias pueden ser de 5 X 5 mt y hasta de 6 X 6 disminuyendo as la densidad de la plantacin. Control De Malezas: Para que las plantas crezcan satisfactoriamente conviene tenerlas libres de malas hierbas, por esto es conveniente hacer un control peridico de malezas para evitar la competencia por agua y nutrimentos (Arce, 1984) Riego: En sitios de alta precipitacin no es necesario el riego suplementario. En aquellos lugares muy soleados, el riego por surcos una vez a la semana, despus que el cultivo se ha establecido, es suficiente. La lmina de agua a aplicar debe ser suficiente para que humedezca completamente la profundidad radical del cultivo. Fertilizacin: Existe poca informacin sobre la fertilizacin del achiote; en Venezuela se han obtenido cosechas precoces y abundantes con el siguiente plan de fertilizacin previo a un anlisis de suelo, iniciando la siembra a principios del periodo lluvioso. COSECHA La primera cosecha comienza entre los 18 y 24 meses, dependiendo del mtodo de propagacin, del tipo de achiote y del lugar que se encuentre creciendo. Se ha observado que el crecimiento es ms rpido y vigoroso en las zonas costeras. Entre los 3 y 4 aos despus de la siembra se pueden tener abundantes cosechas. El momento oportuno de cosecha es cuando las cpsulas se encuentren duras al tacto no cediendo fcilmente al presionarlas con los dedos (Arce 1884), las cpsulas terminales son siempre las ultimas en madurar y cuando estn maduras las inferiores pueden estar ya secas. Los racimos deben ser cortados con tijeras bien afiliadas justo por encima del primer nudo del manojo. (Ingram,1969
RENDIMIENTOS En la principal regin achiotera de Costa Rica los rendimientos oscilan entre 860 y 960 kilogramos de semilla fresca por hectrea. Estos rendimientos se consideraban bajos, si se toma en cuenta que en las plantaciones bien establecidas y con buen manejo se pueden obtener 2500 kilogramos o ms semilla fresca (arce, 1984). II.- MATERIALES Y PROCEDIMIENTO:
2.1.- MATERIALES Y REACTIVOS: MATERIALES: REACTIVOS: *Cmara Cromatografa * 2.5 ml Hexano *Placa Cromatografa * 2.5 ml Acetato De Etilo MUESTRA: 0.01 gr. De material vegetal seco ( Extracto de achiote)
2.2.- PROCEDIMIENTO DE LA PRCTICA: 1.- Diluimos un aproximado de 0.01 mg. del extracto en 0.5ml. De etanol.
2.- obteniendo as una biracion de color que es generado por el metanol y que es de color verde petrleo.
3.- luego se mescla los dos solventes en la cmara cromatografica, de las cuales se utiliza 2.5 ml d acetato de etilo, y 2.5 ml de hexano, formando asi una disolucin en la cual se va a colocar placa cromatografa.
4.- ahora se coloca la muestra a la cual fue suministrada los0.5 ml de metanol.
5.- una vez que se ha podido identificar los punto que han podido alcanzar los metabolitos de la sustancia en la placa.
6.- Las coloraciones variadas nos indican presencia del numero de metablicos secundarios.
7.- Anotar los resultados del recorrido de las manchas segn ecuacin.
Datos: 0.010g pesado de la muestra. 2.5ml hexano 2.5ml acetato de hexilo.
Expo 14, ESTUDIO FITOQUÍMICO CUALITATIVO PRELIMINAR Y CUANTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES Y TANINOS DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE HOJAS DE Desmodium Vargasianum Schubert