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Caractersticas generales de la replicacin del ADN

Semiconservativa: tras la replicacin, en la hebra replicada, habr una hebra antigua y otra de nueva sntesis.
Punto de origen:
Procariotas: punto de origen nico (En E. Coli OriC)
Eucariotas: mltiples orgenes
REPLICN:
Ligada al ciclo celular: normalmente. Slo se replica cuando se tiene que dividir. Existen excepciones.
ADN que se replica a partir de un origen de replicacin.
Bidireccional: Direccin 5 3 en cada una de las dos hebras (antiparalelas)
Completa: se replica todo el ADN
Compleja:
Mecanismos que proporcionarn velocidad y fidelidad para no cometer errores.
Gran nmero de protenas implicadas (ADN polimerasa III es la responsable de la sntesis del ADN
en procariotas)
Gran gasto energtico

Caractersticas de las DNA polimerasas

Sntesis de ADN dirigida por un molde de ADN (hebra conductora)
Requieren un cebador de ARN con un extremo 3-OH libre
La elongacin se produce 5 3
Reaccin

(DNA)n + dNTP (DNA)n+1 + PPi
Pirofosfatasas

2 Pi

Se aade un nucletido a la cadena de ADN y se libera pirofosfato.
Actividad exonuclesica 3 5
La ADN polimerasa I tambin posee actividad enzimtica exonuclesica en direccin 5 3
Polimerasas:
ADN polimerasa I: reparacin y replicacin
ADN polimerasa II: desconocida, puede estar relacionada con la reparacin del ADN
ADN polimerasa III: sntesis de ADN en la replicacin.
HOLOENZIMA (enzima funcional): es un dmero asimtrico (PM = 800KDa)
Partcula central (2x ()): se encargan de la sntesis del ADN
El resto de las subunidades (aprox. 7): se encargan de la unin al ADN () y la
procesividad: el enzima no se separa del ADN hasta no terminar la replicacin.
DMERO ASIMTRICO
ELONGACIN 5 3
: Enzima formada por dos agregados de varias
subunidades distintas.
Requiere un molde, cebador, dNTP y Mg
+2

No se disocia durante la elongacin: PROCESIVIDAD
OPERATIVIDAD y FIDELIDAD
Velocidad alta: 1000 nucletidos/segundo (eucariotas 100 nucletidos/segundo)
Tasa de error baja (10
-8
10
-9
)
Autocorreccin 3 5 (capacidad exonuclesica, corrige un
nucletido si se detecta un error.

Protenas de la replicacin

ADN polimerasas II y III
Protenas para localizar el origen de replicacin (DnaA)
Helicasas (DNA B, DNA C, protena Rep)
Protenas estabilizadoras de ADN monocatenario (SSB)
Primasa (ARN polimerasa ADN dependiente) (DnaG)
Ligasas (ADN ligasas)
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ADN Topoisomerasa II (ADN girasa)
Protenas para determinar el final de la replicacin (Tus) (localiza genes de terminacin; ter)
La replicacin se acaba mediada por genes y no por cruce de las horquillas.
Para comenzar la replicacin del OriC debe estar no metilado y sperenrollado negativamente.
Las DnaA localizan el punto de iniciacin (Las DnaA son tetrmeros)
Reconocen secuencias determinadas
Se unen al gen OriC, la unin es cooperativa: cada vez se unen ms protenas.
Se forma un agregado que pensiona el OriC y se abre la molcula en un punto
concreto dentro del OriC.
Al ser una replicacin completa la regulacin se da en el inicio. En la zona de
apertura hay secuencias A=T repetitivas que facilitan la apertura del ADN.
Las helicasas:
Abren poco a poco las hebras rompiendo puentes de hidrgeno y haciendo ms grande la
apertura inicial.
A medida que las helicasas progresan las DnaA se disocian del ADN.
Las protenas SSB estabilizan el ADN monocatenario abierto por las helicasas
Las girasas eliminan los sperenrollamientos positivos del ADN
La primasa fabrica los cebadores para que la ADN polimerasa III empiece la replicacin
La ADN polimerasa III comienza la sntesis



En la sntesis de la hebra retardada:
La maquinaria de replicacin pasa el ADN sin copiarlo. La primasa hace un ARN cebador cada
1000 2000 nucletidos y se estabiliza con protenas SSB
Se invierte el ADN en un bucle y el ADN se orienta en la maquinaria de replicacin

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Replicacin en eucariotas

Grandes similitudes, pero mucho ms compleja y menos conocida.
Mltiples orgenes de replicacin (10
3
10
4
)
No se activan todos los orgenes al mismo tiempo (existe una secuencia establecida) unos empiezan
antes, en la fase S, y luego se activan los otros progresivamente. Se activan antes los que estn en
forma de eucromatina (cromatina activa)
Velocidad menor que en los procariotas (50 nucletidos/segundo)
Fragmentos de Okazaki ms cortos (cada 100 nucletidos)
DNA polimerasas especficas
ADN polimerasa : replicacin de la hebra retardada
ADN polimerasa : reparacin del ADN
ADN polimerasa : replicacin del ADN mitocondrial
ADN polimerasa : Replicacin de la hebra continua (complejo-PCNA
PCNA
ADN polimerasa : replicacin y reparacin del ADN
: antgeno nuclear de las clulas en proliferacin equivalente a la subunidad en la
ADN polimerasa III de E. Coli.
Telomerasas:
Replicacin de los extremos de los cromosomas



Estn formadas por una parte proteica y ARN formando una riboprotena
La secuencia de ARN de la telomerasa es la copia de la secuencia terminal del telmero.
.
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Como una transcriptasa reversa, la telomerasa hace copias de su ARN en ADN y lo aade al ADN,
as se originara un nuevo origen de replicacin y de nuevo se sintetizara el ADN que faltaba.
En el cncer, la expresin de la telomerasa aumenta, se busca inhibir su actividad para frenar los
tumores.
Unin a histonas para formar nucleosomas



Control a nivel de inicio de la replicacin (IGUAL QUE EN PROCARIOTAS

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

)

Se calienta una solucin de ADN, con una ADN polimerasa termorresistente, para su replicacin a
95C durante 15 segundos.
DESARROLLO DE LA TCNICA
Se aaden los cebadores
Bajamos la temperatura a 55C durante 1 minuto
Se produce la hibridacin del ADN
Se calienta a 72C durante 30 segundos

Ilimitadas (sobre todo para el diagnstico)
APLICACIONES

La contaminacin de la muestra
PROBLEMAS