EVALUACION DE DIFERENTES METODOS DE EXTRACCION DE

ADNBACTERIANOPARA USO MOLECULAR

RESUMEN:
La extraccin del ADN constituye el primer y fundamental paso para cualquier tipo de
estudio o propsito cientfico en el campo de la Biologa Molecular, por lo que es de vital
importancia tener una muestra de ADN de buena calidad !ara obtener un ADN de
buena calidad, frecuentemente se requiere tener conocimiento de un buen m"todo de
aislamiento #n este estudio se reali$ la comparacin de % m"todos diferentes para
dic&o propsito y con el ob'etivo de brindar una alternativa en cuanto a un m"todo que
sea confiable y econmico a la &ora de reali$ar la extraccin de ADN Los m"todos
utili$ados para este estudio fueron el de !&enol()&loroform(*soamyl Alco&ol+,-(,.(/0 de
1*2MA Labs, basado en el m"todo de fenol3cloroformo, que se fundamenta en el uso
de solventes org4nicos que por diferencia de densidades y por su capacidad para
degradar protenas permite la purificacin de aislamiento de ADN5 el otro m"todo fue el
de 6ig& !ure !)7 8emplate!reparation 9it de 7:)6# Labs, que se fundamenta en la
ruptura de la membrana a trav"s de una incubacin de la muestra con liso$ima, para
posteriormente &acer pasar los 4cidos nucleicos por un filtro especifico donde quedara
atrapado y su posterior elucin5 y el ultimo m"todo para nuestro proyecto fue
denominado como ;)asero< ya que es un m"todo de procedimiento relativamente
sencillo, fundamentado en base a lisis mediante el &ervido de la muestra y posterior
separacin del ADN crudo con cloroformo y agua destilada
#l rendimiento y calidad de ADN de los % m"todos fue variado debido a que los
procedimientos y reactivos que se utili$an en los tres son muy diferentes y esto nos
lleva a que los resultados tambi"n lo sean
)on los resultados que se obtengan, se espera comprobar que el m"todo del 9it de
7oc&e Labs sea el de me'ores resultados, pero compararlos con los del m"todo de
1*2MA y el ;)asero< estimando que uno de ellos o ambos proporcionen un ADN de
similar o igual calidad, desvirtuando el pensamiento de que un m"todo costoso sea el
=nico medio de obtener una muestra de ADN de calidad
!ara dic&o proceso de comparacin cuantitativa y cualitativa de los resultados
proporcionados por los diferentes m"todos se utili$ara como medio de evaluacin la
electroforesis con una corrida a /,> volts en gel de agarosa al /?, te@ido con bromuro
de etidio, adem4s se reali$ara el conteo de ADN de cada muestra en un equipo de
espectrofotometra
#l presente traba'o pretende evaluar comparativamente los diferentes m"todos de
extraccin utili$ados, con el fin de encontrar un m"todo ptimo y de ba'o costo
1. ANTECEDENTES Y JUSTIFICACIN:
#l proceso de extraccin de ADN es un paso importante para poder reali$ar estudios en
el 4rea de la biologa molecularLas bacterias son ob'etos de estudio elementales en
los campos de labiologa, la gen"ticay labioqumicamoleculares debido a su capacidad
para crecer r4pidamente y a la facilidad relativa con la que pueden ser manipuladas
7eali$ando modificaciones en el ADN bacteriano degenes,en$imasyrutas metablicas,
pudiendo trasladar posteriormente estos conocimientos y examinando losfenotiposque
resultan, los cientficos pueden determinar la funcin a organismos m4s comple'osa
medida que la tecnologa avan$a tambi"n los descubrimientos, es as que, recordamos
un poco de &istoria de cmo se obtuvo las primeras extracciones de ADN bacteria
#l ADN lo aisl por primera ve$ en /ABC, el m"dico sui$o Driedric& Miesc&er Este
reali$aba experimentos acerca de la composicin qumica del pus de vendas
quir=rgicas desec&adas, cuando not un precipitado de una sustancia desconocida que
caracteri$ qumicamente m4s tarde La llam nuclena, debido a que lo &aba
extrado a partir de n=cleos celulares 1e necesitaron casi F> a@os de investigacin
para poder identificar los componentes y la estructura de los 4cidos nucleicos #n
/C%> Levene y su maestro Albrec&t9ossel probaron que la nuclena de Miesc&er es
un 4cido desoxirribonucleico +ADN0 formado por cuatro bases nitrogenadas, el
a$=car desoxirribosa y un grupo fosfato, y que, en su estructura b4sica, el
nucletido est4 compuesto por un a$=car unido a la base y al fosfato 1in embargo,
Levene pensaba que la cadena era corta y que las bases se repetan en un orden fi'o
La funcin biolgica del ADN comen$ a dilucidarse en /C,A, con una serie b4sica de
experimentos reali$ados por DredericG 2riffit&, quien estaba traba'ando con cepas
HlisasH +10 o HrugosasH +70 de la bacteria !neumococcus +causante de la neumona0,
seg=n la presencia +10 o no +70 de una c4psula a$ucarada, que es la que confiere
virulencia
i
!or tal ra$n vimos la importancia de reali$ar esta investigacin porque es
necesario conocer y utili$ar un m"todo adecuado en el laboratorio, ya que el ob'etivo
dela extraccin es el de obtener una muestra de buena calidad, es decir que tenga
buen porcenta'e de pure$a como de rendimiento, es por tal ra$n que vimos la
importancia de reali$ar un estudio comparativo de tres m"todos de extraccin de ADN
para determinar la eficiencia cualitativa y cuantitativa de cada uno de ellos
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA:
6oy en da, existen muc&os m"todos de extraccin de ADN que son utili$ados de
acuerdo a las caractersticas y ob'etivos de cada estudio, estos m"todos muestran
variabilidad en su rendimiento, sobre todo aquellos m"todos simples y de ba'o costo #s
necesario conocer la eficiencia cualitativa y cuantitativa de los diferentes m"todos de
extraccin de ADN con el fin de su correcta aplicacin, ya que el "xito de la aplicacin
de una t"cnica molecular depender4 de la calidad del ADN extrado #n este sentido se
pretende dar respuesta a las siguientes preguntas de investigacin(/0 I)u4l ser4 el
m"todo de extraccin de ADN bacteriano de me'or calidadJ, ,0 I)u4les son las ra$ones
fundamentales para no utili$ar el m"todo casero m4s econmicoJ, %0 I)u4les son las
ra$ones para utili$ar el m"todo de extraccin m4s caroJ
3. HIPTESIS
8omando en cuenta los tres m"todos de extraccin de ADN bacteriano que proponemos
+i3High Pure PCR TemplatePreparation Kit de ROCHE Labs.,ii3
Phenol:Chloroform:Isoaml !l"ohol#$%:$&:'( de )I*+!, iii, +"todo;Crudo<0, el m"todo
con mayor eficiencia cualitativa y cuantitativa es el m"todo de 7:)6# 9it, basado en
columnas de filtracin selectiva para ADN, que puede ser utili$ado en muestras
biolgicas de cualquier origen
3.1. OBJETIVO GENERAL
- #valuar la eficiencia cualitativa y cuantitativa de tres m"todos de extraccin de
ADN genmico bacteriano para uso en t"cnicas moleculares
3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
)omparar la calidad del ADN extrado por tres m"todos de extraccin de ADN
en bacterias 2ram Negativas y 2ram !ositivas
)omparar la cantidad del ADN extrado por tres m"todos de extraccin de
ADN en bacterias 2ram Negativas y 2ram !ositivas
#valuar la aplicabilidad de los m"todos de extraccin de ADN bacteriano en
funcin al tipo de estudio y al costo
4. MARCO TERICO
B!"#$%&( son c"lulas procariotas muy abundantes que pueden encontrarse en
cualquier medio debido a la gran variedad de metabolismos que pueden
presentar
K ad&erirse a las distintas superficies, como a nuestras mucosas o a los
cat"teres
P$#' (!"#$%). Las funciones de la pared bacteriana son(
3 Dar forma a la c"lula
3 !roteger a la c"lula frente al c&oque osmtico, las bacterias sueles sobrevivir
en ambientes &ipoosmticos, por lo que el agua de fuera tiende a entrar &acia el
citoplasma 1i entra demasiada agua en la c"lula esta se &inc&ara y explotara
La pared bacteriana evita que la c"lula se &inc&e demasiadoLa pared bacteriana
tendr4 siempre un componente que es el peptidoglicano, una macromol"cula
formada por una parte peptdica y otra glucdica +N3 acetilglucosamina y Lcido N3
acetilmur4mico0
Los polisac4ridos se unen entre si por enlaces beta3/3.( NAM3NA23NAM3NA23
NAM #sta cadena rodea totalmente a la bacteria, formando una especie de
anillo a su alrededor #l NAM, tiene un grupo carboxilo libre que e'erce una gran
atraccin sobre los amino4cidos, que constituir4n la parte peptdica que
conforma el peptidoglicano Al carecer las c"lulas &umanas de pared este
proceso es un buen lugar de actuacin para los antibiticos
Las (!"#$%& G$*+, est4 compuesta por m=ltiples capas a de peptidoglicano,
pudiendo alcan$ar unas ,>3%> capas !ara aumentar la co&esin entre las
capas, existen unas mol"culas especiales llamadas 4cidos teitoicos, que se
sit=an perpendicularmente a las distintas redes que cubren la bacteria !or esta
ra$n, la pared de estas bacterias es muy grande y porosa
Las (!"#$%& G$*,, tiene una =nica capa de peptidoglicano rode4ndola Dic&a
capa se complementa con una capa m4s externa denominada membrana
externa que no gobierna los intercambios pero que tiene una composicin
seme'ante a la membrana plasm4tica #sta membrana dificulta la entrada y
salida de sustancias de la c"lula !ara ello, existen una especie de poros
perpediculares a la membrana, comunicando la parte de dentro con la de fuera
ADN (!"#$%)-( el ADN est4 constituido por una sola mol"cula circular de tipo
bicatenario, muy plegada, y que suele estar unida a los mesosomas 8ambi"n
puede &aber una o m4s mol"culas peque@as de ADN extracromosmico,
denominadas pl4smidos La regin del ADN bacteriano que se encuentra
condensada, asociada a protenas parecidas a las &istonas, se denomina
nucleoide La funcin del ADN es mantener y perpetuar la informacin gen"tica y,
mediante su expresin, dirigir el funcionamiento del metabolismo
ii
M-./!0. '# 1!%'- '#&-2%$$%(-)0!.#%!- 3ADN4 de doble cadena y circular,
cerrado por enlace covalente Dic&a mol"cula se denomina cromosoma
bacteriano Muc&as bacterias poseen adem4s ADN extracromosmico, tambi"n
circular y cerrado, denominado ADN plasmdicopor estar contenido en los
pl4smidos Estos, portan informacin g"nica para muc&as funciones que no son
esenciales para la c"lula en condiciones normales de crecimiento
#n t"rminos bioqumicos la composicin y estructura de los 4cidos nucleicos
bacterianos,
es la misma que para cualquier c"lula )onviene recordar brevemente, que los
4cidos nucleicos son macromol"culas compuestas de nucletidos unidos en
forma covalente por
medio de enlaces fosfodiester entre los carbonos de las posiciones %M y -M de dos
residuos de a$=cares adyacentes #sta estructura forma un esqueleto de
a$=cares y fosfatos constante en toda la macromol"cula La variacin entre los
nucletidos que constituyen la cadena de 4cido nucleico, esta dada por sus
bases nitrogenadas5 para el ADN son( adenina +A0, timina +80, citocina +)0 y
guanina +20 y para el 4cido ribonucleico +A7N0 son en lugar de timina, el uracilo
+N0 La A y 2 se denominan bases p=ricas o purinas, mientras que 8, N, y )
sedenominan bases pirimidnicas o pirimidinas As, una cadena o &ebra de 4cido
nucleico, tendr4 una estructura primaria determinada por la secuencia de las
bases que la componen
#l ADN como macromol"cula, esta compuesto por dos cadenas nucleotdicas o
&ebras
antiparalelas que se enla$an entre s formando una doble &"lice Los enlaces
entre ambas &ebras de ADN est4n determinados por puentes de &idrgeno entre
las purinas de una cadena,con las pirimidinas de la otra #ntonces, la A forma
dos puentes de &idrgeno con la 8, mientras que la ) forma tres puentes de
&idrgeno con la 2 Dic&o fenmeno se conoce como complementariedad de
bases, es decir que la A es complementaria a la 8 y la ) lo separa la 2 #stos
enlaces mantienen estable la estructura de doble &"lice deADN, en la cual se
pueden distinguir pares de nucletidos o pares de bases +pb0 #stos pb
iii
R#!!%5) '# .-& $#!"%6-& 7 *"#$%.#&.
F#)-. 8 !.-$-9-$*-. #limina las protenas
I&-:$-:)-. 7 #")-.( precipitacin del ADN
P#:&%):disuelve el citoplasma sin atacar el n=cleo
E(0..%!%5) +combinado con congelacin0 Algunos fabricantesincorporan un paso
de ebullicin de la muestraprevio a la !)7 como =nica accin para extraer el
ADN dela muestra
F#)-.: es, naturalmente, un poco soluble en agua, y da una interfa$ difusa, que
se afila por la presencia de cloroformo y alco&ol isoamlico reduce la formacin
de espuma La mayora de las soluciones tambi"n tienen un antioxidante, como
oxidado da@os fenol los 4cidos nucleicos !ara la purificacin del ADN, el p6 es
por lo general cerca de F, momento en el que todos los 4cidos nucleicos se
encuentran en la fase acuosa
A.!-;-. %&-*<.%!-( alco&ol isoamlico puede reducir la formacin de espuma y
garanti$ar la desactivacin de 7Nasas
G#. '# =$-&: #l m"todo se suele llevar a cabo sometiendo a las muestras de
ADN extrado a un campo el"ctrico para que las mol"culas se muevan, a trav"s
de una matri$ de agarosa que contiene bromuro de etidio, en funcin de su
tama@o +la t"cnica de electroforesis la veremos con detenimiento en el apartado
A de este traba'o0 A la ve$ que las muestras problema, se procesanmuestras de
ADN de cantidad conocida +patrones0 ypor simple comparacin de unas con las
otras podremos estimara grosso modo la cantidad de ADN de cada muestra
problema 1e trata de un sistema de cuantificacin poco sensible pues es
realmente difcil observar en el minigelcantidadesde ADN menoresque -Ogr
totales !ero tiene la gran venta'a de que con este m"todo se puede visuali$ar el
grado de degradacin de nuestras muestras problema5 si el ADN est4 en buen
estado aparecer4 en el gel como una banda ntida que no &a recorrido muc&a
distancia desde el punto de aplicacin de la muestra por tratarse de ADN de alto
peso molecular, es decir, de gran tama@o 1i, por el contrario, muestro ADN est4
fragmentado, aparecer4 en el gel una especie de ;cola de degradacin< +smear0
a lo largo de la calle en la cual &emos aplicado la muestra debido a que existen
fragmentos de diferentes tama@os que recorren diferentes distancias desde el
punto de aplicacin #n este tipo de muestras degradadas, la cuantificacin se
&ace a=n m4s difcil por no poder reali$arse una comparacin adecuada con los
patrones que son de alto peso molecular y aparecen como bandas ntidas
F.0$-*#"$%
La medida de la cantidad de ADN mediante fluorimetra se basa en la capacidad de
unin del ADN a ciertos tintes fluorescentes como 6 %%,-A +bisben$idimidi$ole0 A
mayor cantidad de ADN, mayor n=mero de mol"culas del tinte se unir4 y por lo tanto
mayor fluorescencia detectaremos La fluorescencia de dic&o tinte depende de la
cantidad de pares A38 presentes en la mol"cula de ADN, por lo que es un m"todo que
detecta fundamentalmente ADN de doble &ebra +BrunG y cols, /CFC5 Labarca y
!aigen, /CA>0
La determinacin de la cantidad exacta de ADN se reali$a mediante la comparacin de
la muestra problema con muestras de cantidad de ADN conocida +patrones0 #s
imprescindible que los patrones est"n formado por ADN de las mismas caractersticas
que la muestra a medir, es decir, deben de tener la misma proporcin de pares A38 +la
mayora del ADN de animales y plantas presenta un B>? de pares A38 y un .>? de
pares 23)0 y la misma conformacin !ara medir la fluorescencia se utili$an aparatos
especficos llamados fluormetros que constan de una l4mpara de mercurio y un
detector para medir fluorescencia relativa a .B> Om
#ste m"todo presenta la venta'a de que la presencia de A7N en la muestra no
interfiere en el resultado de la cuantificacin de ADN, ya que el A7N no compite con el
ADN en la unin con el tinte !ero presenta la desventa'a de que mide cantidad de
ADN sin discriminar si se trata de ADN &umano o no &umano y sin darnos informacin
alguna sobre el estado de conservacin del mismo Adem4s no es compatible con la
extraccin de ADN con resinas quelantes, ya que no permite la cuantificacin de ADN
de &ebra sencilla
iv
>. MATERIALES Y METODOS
>.1. TIPO DE ESTUDIO
#xperimental correlacional
>.2. METODOS DE EXTRACCION DE ADN BACTERIANO
>.2.1. CRUDO
>.2.2. FENOL CLORO
FENOL,CLOROFORMO,ISOAMIL ALCOHOL 32>:24:14 SIGMA P3?@3
MN#187A(
Bacterias en medio de cultivo lquido
!7:8:):L:
8omar ,>>ul del cultivo lquido
Agregar ,>>ul de Denol3)loroformo3*soamil Alco&ol +,-(,.(/0, vortex para
&omogenei$ar y centrifugar a /,>>> rpm a 8P amb por - min
1e forman dos fases, fase de acuosa en la parte superior y la org4nica en la
parte inferior5 en la interfase se forma un disco opaco que contiene las protenas
desnaturali$adas, separar cuidadosamente la fase acuosa en un tubo nuevo, +si
la fase acuosa es aprox Menor a /A>ul, repetir la centrifugacin0 desec&ar la
interface y la fase org4nica
7epetir los pasos /3% &asta que en la interface no se vean protenas
A@adir igual volumen de cloroformo a la fase acuosa, vortex y centrifugar a
/,>>>rpm por %3- min #ste paso elimina el fenol residual
1eparar cuidadosamente la fase acuosa en un tubo nuevo, desec&ar la interface
y la fase org4nica
!recipitar el DNA a@adiendo ,>>ul de isopropanol, vortex +% veces por /
segundo0, de'e precipitar a 3,>P) por %- min, o toda la noc&e
)entrifugar a /,>>> rpm por /> min, eliminar toda la fase lquida evitando
desec&ar el precipitado +ADN0 del fondo del tubo
Lavar el ADN +, veces0 con ->>ul de etanol F> ?, centrifugar a /,>>> rpm por />
min
Descartar el sobrenadante e incubar el precipitado por /- min entre %F3->P)
7e suspender en DNA con />>ul de 6,: est"rile incubar a %F3->P) por /- min y
vortex
Almacenar a 3,> P)
>.2.3. ROCHE
E2"$!"%-) '# ADN
6ig& pure !)7 template preparation Git, 7:)6#+/>> determinaciones0
N De cat4logo //FCBA,A>>/
R#!"%6-& )#!#&$%-&:
A !roteinasa 9+ vial %, tapa color rosada0(reconstruir el liofili$ado con .,-ml
de agua tridestilada, &omogeni$ar y alicuotar de acuerdo al n=mero de muestras
a extraer +e' Alcuotas de ,->Ql para - extracciones, .> Ql cRu0
S *n&ibitor removal buffer+vial . tapa color negro0(a@adir ,> ml de etanol
absoluto !A anotar la fec&a que corresponda en el frasco, mantener a 8P
Ambiente
S Tas& Buffer+vial . tapa color a$ul0(a@adir A> ml de etanol absoluto !A
anotar la fec&a que corresponda en el frasco, mantener a 8 P Ambiente
E2"$!!%5) '# ADN :$"%$ '# !0."%6- (!"#$%&.
Antes de comen$ar la extraccin, alicuotar la cantidad de reactivos que se
usaran esto para no contaminar los frascos originales
)alentar la cantidad necesaria de buffer de elucin a F>P)
a0 8omar ,>>QL del cultivo de bacterias y centrifugar - min a A>>> rpm
b0 #liminar el sobrenadante y resuspender el pellet con ,>>Ql de !B1 #st"ril
o solucin salina
c0 A@adir -Ql de liso$ima +/>mgRml0 incubar /- min a %FP)
d0 A@adir ,>>QL de Binding Buffer y .> Ql de proteinasa 9, &omogeni$ar por
vortex , a %seg
e0 *ncubar a F>P) durante /> min
f0 Agregar />>Ql de *sopropanol !A me$clar en vortex por /- seg
g0 )entrifugar / spin, luego transferir toda la me$cla a la ;columna de
extraccin< y centrifugar / min a />>>> rpm, eliminar el filtrado
&0 Agregar a la columna ->>Ql de *n&ibitor7emovalBuffer+*7B0, centrifugar a
/>>>> rpm por / min, eliminar el filtrado
i0 Agregar ->>Ql de Uas&Buffer+TB0 y centrifugar a />>>> rpm por / minuto
eliminar el filtrado
'0 Luego agregar nuevamente a la columna ->> Ql de Tas& Buffer y
centrifugar a /,>>> rpm por % min eliminar el filtrado
G0 !asar la columna a un tubo est"ril;tipoeppendorf< de /,- ml y agregar
/>>Ql de #lution Buffer< precalentada a F>P)< Luego centrifugar por % min a
/>>>> rpm
l0 Almanecer la elucin a 3,>P)
>.3. CUANTIFICACION DE ADN
>.4. ELECTROFORESIS DE GELES DE AGAROSA
La agarosa es un polisac4rido natural que se obtiene principalmente a partir de algas
marinas capa$ de gelificarse con la suficiente rigide$ para poder ser manipulada
!ueden prepararse geles a varias concentraciones, desde >%? a ,? seg=n el tama@o
de los fragmentos de ADN a separar, teniendo en cuenta que a mayor concentracin, el
di4metro del poro del gel ser4 menor y por ello presentar4 mayor resistencia al avance
de la muestra de ADN )onvencionalmente se &an descrito como geles que se pueden
usar para separar fragmentos de />>3B>>> pares de bases pero no son muy
resolutivos, es decir, no sirven para separar fragmentos que difieran en unas cuantas
pares de bases entre s 1in embargo, recientemente se &a demostrado que un
peque@o gel de agarosa +/> cm de longitud y /mm de espesor0 puede tener un poder
de resolucin suficiente para separar 187s del tipo tetranucletidos +T&ite y
9usuGaUa, /CCF0 !ara poder ver los fragmentos de ADN separados en este tipo de
geles suele utili$arse la tincin con Bromuro de #tidio y posterior observacin del gel
ba'o la lu$ NV 1e trata de una sustancia que se intercala entre las bases nitrogenadas
del ADN y produce fluorescencia ba'o este tipo de lu$
B. RESULTADOS
B.1. EXTRACCION DE ADN BACTERIANO
B.2. CUANTIFICACION DE ADN
CONCENTRACION DE ADN EN )=8C.
T/!)%!
E2:#$%*#)"- CEPA E2"$!!%5) C$0' F#)-. C.-$-9-$*- D%" R-!;#
1 2 3 4 5
6 7
/ E. "oli
2ram 3
,,/C %,-. //,.F
, E. "oli ,,-C %,%B /B,%/
% E. "oli ,,A- %,B> /A,-C
. E. "oli ,,/> %,F, //,>>
- E. "oli ,,-A %,-> /B,,>
/ 1A.
2ram W
,,B> -,.. ,-,%>
, 1A. ,,B> %,A, /B,%>
% 1A. ,,%. %,-% ,.,%%
. 1A. ,,B. %,%. /B,.%
- 1A. ,,-, .,,- /C,%/
CONCENTRACION DE ADN EN )=8C.
CUANTIFICACION !-*:$"%6 =#)#$. DE ADN
CEPA E. !-.% G$* E
CEPA SA4 G$* +
P-$ #2:#$%*#)"-:
CEPA E. !-.% G$* E
P-$ #2:#$%*#)"-
CEPA SA4 G$* +
F. CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados de la electroforesis de geles de agarosa, la calidad
de ADN extrado por los m"todos , y % pueden ser considerados similares, se
muestran bandas de ADN integras sin degradacin que indican una buena
calidad de ADN extrado, sin embargo para el m"todo de extraccin / no se
muestra ninguna banda de ADN, lo cual indica que no fue posible su evaluacin
debido a la escasa la cantidad de ADN que imposibilita la visuali$acin en el gel
de agarosa
#xiste una notable variacin en relacin a la cantidad de ADN extrado por los %
m"todos evaluados #l m"todo por 9it de 7oc&e muestra una diferencia
considerablemente mayor frente a los otros dos m"todos evaluados,
obteni"ndose un rendimiento mayor con igual cantidad de muestra inicial
)onsideramos que los m"todos de extraccin basados en Gits podr4n utili$arse
en procedimientos donde se traba'e con muestras clnicas caracteri$adas por
tener escasa cantidad de ADN blanco !or otra parte, los m"todos de extraccin
/ y ,, podr4n utili$arse en muestras provenientes de cultivo, donde la masa
celular en mayor y no necesariamente se requiere alta eficiencia de extraccin
?. PERSPECTIVAS
Actualmente se cuenta con muc&as firmas comerciales, que ofertan Gits de
extraccin basados en diferentes principios De acuerdo a los resultados
obtenidos en el presente estudio, ser4 importante conocer la eficiencia de
extraccin de cada uno de estos m"todos, con fin de optimi$ar el proceso de
extraccin en funcin al tipo de material biolgico con el que se pretende
traba'ar
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