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Bacteriologa anaerbica prctica
Eric Caballero J. - ecaballe@cwpanama.net
1. Introduccin
2. Relacin de la bacteria con el o!geno
". Recoleccin # tranporte de muetra clnica
$. %lora anaerbica normal
&. 'ntoma clnico ugeti(o de in)eccin anaerbica
*. +rigen de la in)eccione anaerbica
,. -.cnica para la identi)icacin de bacteria anaerbica
/. 0naerobio de ma#or importancia clnica
1. 'enibilidad a lo antibitico
12. 3.todo automati4ado # emiautomati4ado
11. Bibliogra)a de inter.
12. 0ne!o
Al inicio todo el mundo fue anaerobio"
"Existen infusorios animales capaces de vivir y multiplicarse indefinidamente en ausencia completa
de aire y de oxgeno libre" 56oui 7ateur8 1/*19
Introduccin
Los microorganismos varan en sus necesidades, o tolerancia de oxgeno. De hecho, los microorganismos
pueden ser divididos en diversos grupos dependiendo del efecto de ste.
Los aerobio son capaces de crecer con tensin de oxgeno total (en el aire el oxgeno es del 21! "
muchos pueden soportar incluso concentraciones m#s altas.
Los microaer)ilo, por el contrario, son aero$ios %ue pueden utili&ar este gas slo cuando su tensin es
m#s $a'a %ue la del aire, usualmente por su limitada capacidad de respirar, o por %ue contienen alguna
molcula o en&ima sensi$le al oxgeno.
Los organismos %ue carecen de sistemas respiratorios no pueden utili&ar el oxgeno como aceptor terminal
de electrones. (ales organismos se llaman anaerobios, pero existen dos clases de anaero$ios) los
anaerobio aerotolerante8 %ue pueden tolerar el oxgeno " crecer en su presencia, a*n cuando no
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pueden utili&arlo, " los anaerobio etricto (u obligado! %ue mueren en presencia del oxgeno. La ra&n
por la %ue los anaero$ios estrictos son destruidos por el oxgeno, es pro$a$lemente por %ue son incapaces
de eliminar alg*n producto txico derivado del meta$olismo del oxgeno. +uando se reduce el oxgeno, se
producen algunos elementos txicos tales como el perxido de hidrgeno (,2-2!, superxido (-2.! "
radicales hidroxilo (-,.!. /uchos anaero$ios estrictos son ricos en en&imas flavnicas, %ue reaccionan
espont#neamente con el oxgeno para dar estos productos txicos. 0or el contrario, los aero$ios poseen
en&imas %ue descomponen los productos txicos1 tales en&imas no est#n presentes en los anaero$ios.
+omo ocurre con los aero$ios, algunos de ellos pudieron tolerar la presencia de -2 " de su$stancias
oxidantes, pero en la ma"ora de los casos, el -2 se comporta como un gas txico %ue provoca$a la
oxidacin de ciertos radicales li$res altamente agresivos imposi$les de neutrali&ar. Fusobacterium,
Prevotella " Porphyromonas no so$reviven m#s de 12 a 32 minutos de exposicin al aire. Actinomyces,
Propionibacterium, Bacteroides " algunos Clostridium, son relativamente aerotolerantes.
4l meta$olismo anaero$io, pese a restringir la proporcin de energa o$tenida a partir de un nutriente " estar
limitado en el n*mero de su$stratos %ue pueden ser utili&ados como fuente de energa, tiene una importante
venta'a) la capacidad de suministrar energa de forma continua " mu" r#pidamente en tanto est presente
un su$strato capa& de ser fermentado, o $ien dos compuestos entre los cuales puedan transferirse los
electrones al oxidarse un compuesto " reducirse el otro.
Las $acterias anaer$icas difieren de las dem#s $acterias en varios aspectos. 5e desarrollan
adecuadamente en #reas del organismo %ue tienen $a'os valores de oxgeno (como el intestino! " en los
te'idos %ue sufren un proceso de degeneracin, particularmente las heridas profundas " sucias, donde otras
$acterias no pueden vivir " adonde las defensas del organismo no llegan f#cilmente.
+ientos de especies de $acterias anaer$icas viven normalmente " sin causar da6o alguno so$re la piel "
las mem$ranas mucosas, como el revestimiento de la $oca, el intestino " la vagina1 en un centmetro c*$ico
de heces pueden existir varios miles de millones de $acterias. 5i el am$iente normal de ciertas especies de
$acterias anaer$icas resulta alterado por la ciruga, un deficiente aporte sanguneo u otro tipo de lesin,
pueden invadir los te'idos del husped, causando infecciones graves, incluso mortales.
5e considera %ue las $acterias anaer$icas est#n presentes en la ma"ora de los procesos infecciosos, "a
como agente principal, o como secundario al da6o tisular producido. 4n muchas ocasiones, stas $acterias
pasan desaperci$idas por diversas ra&ones entre las %ue predominan la mala coleccin, transporte "
conservacin de la muestra, el uso de medios inadecuados para su aislamiento, su lento crecimiento, la
creencia en %ue si se ha aislado un microorganismo, "a no ha" %ue seguir $uscando " en muchos casos,
por%ue el micro$ilogo no pens en anaero$ios.
4n la actualidad existen varios sistemas automati&ados " semiautomati&ados para la identificacin de stos
microorganismos. 5in em$argo, adicional a las limitaciones %ue la literatura especiali&ada enumera,
ninguno de ellos puede ser *til sin los pasos previos de coleccin, procesamiento " aislamiento, los cuales
son la $ase de las $uenas pr#cticas de tra$a'o en la micro$iologa $#sica.
(odas estas dificultades propias de la investigacin en las %ue el conocimiento de la flora normal "
patolgica tiene una gran importancia en la $*s%ueda de los anaero$ios, nos ha estimulado en la reali&acin
de ste resumen de tcnicas para la deteccin e identificacin de estos microorganismos cu"a evaluacin
re%uiere un tra$a'o mas fino por parte del micro$ilogo.
Relacin de las bacterias con el oxgeno
Re). Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (th ed!, "#$!
4n $ase a la relacin de las $acterias con el oxgeno, estas se pueden clasificar en )
0erobio etricto ) 7n organismo el cual re%uiere utili&ar el oxgeno como aceptador terminal de
electrones , puede tolerar un nivel del oxgeno e%uivalente o ma"or de una atmsfera de aire
(oxgeno del 21!, " tiene un tipo terminantemente respiratorio de meta$olismo.
0naerobio )acultati(o) 7n organismo %ue puede crecer $ien en ausencia del oxgeno " en la
presencia de un nivel de oxgeno e%uivalente a una atmsfera del aire (oxgeno de 21!.
3icroaero)lico ) 7n organismo %ue es capa& de un crecimiento oxgeno.dependiente, pero no
puede crecer en la presencia de un nivel del oxgeno e%uivalente a una atmsfera de aire (oxgeno
de 21!.
0naerobio etricto ) 7n organismo %ue es incapa& de crecimiento oxgeno.dependiente " no puede
crecer en la presencia de una concentracin de oxgeno e%uivalente a una atmsfera de aire
(oxgeno de 21!.
RE60CI+: ;E 60' B0C-ERI0' C+: E6 +<I=E:+ E: -I+=6IC+60-+
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(u$o 8 1) 9ero$io estricto
(u$o 8 2) 9naero$io facultativo
(u$o 8 3) 9naero$io aerotolerante ( /icroaeroflico !
(u$o 8 :) 9naero$io estricto
Recoleccin y transporte de muestras clnicas
Las muestras clnicas de$en ser o$tenidas del sitio infectado usando procedimientos %ue garanticen el
mantenimiento de una atmsfera carente de oxgeno " eviten contaminacin con flora endgena. 4n general
el procedimiento recomendado es aspiracin con agu'a del material purulento o por $iopsia despus de
desinfeccin apropiada.
4stas muestras de$en ser procesadas en el la$oratorio lo m#s r#pido posi$le, manteniendo en todo
momento su estado li$re de oxgeno. La o$tencin de muestras son acepta$les solo en casos de incluir un
medio de transporte apropiado para anaero$ios " sean sem$radas antes de 32 minutos de o$tenida la
muestra. Las muestras para cultivos anaer$icos nunca de$en ser refrigeradas.
La aspiracin directa con agu'a es el me'or mtodo de o$tener una muestra representativa para cultivo. Los
especimenes o$tenidos de los l%uidos normalmente estriles tales como sangre, l%uido cefalorra%udeo o
peritoneal, se recogen despus de la descontaminacin cuidadosa de la piel.
Los dispositivos del transporte contienen generalmente am$iente li$re de oxgeno proporcionados por una
me&cla del $ixido de car$ono, hidrgeno, nitrgeno, m#s un indicador aero$io de la condicin. Los
especimenes se de$en poner en un transportador anaero$io cuanto antes. Los especimenes se inoculan en
un frasco anaero$io del transporte o una 'eringuilla con agu'a. Despus de %ue se expelan todas las
$ur$u'as de aire, el extremo de la agu'a se de$e insertar en un tapn de caucho estril, "a %ue el aire puede
difundirse gradualmente a travs de la pared pl#stica de la 'eringuilla. ;ecomendamos el Manual de
Coleccin de Muestras Microbiolgicas %ue hemos redactado en compa6a del Dr. 5ilvio <ega.
9 pesar de %ue las $acterias aero$ias " anaero$ias son indistingui$les por la tincin, el frotis directo
proporciona informacin preliminar importante con respecto a tipos de organismos presentes, sugiere
terapia inicial apropiada " sirve como control de calidad. 4stos anaero$ios pueden mostrar un patrn
morfolgico tpico %ue puede ser reconocido por un microscopista experimentado. ;ecomendamos mu"
especialmente el frotis directo por =ram de la muestra para a"udar a evaluar el cultivo posterior.
lora anaerbica normal
Las $acterias anaero$ias forman parte de la micro$iota normal del cuerpo humano " de los animales. 5e
encuentran como comensales, en algunos casos con funciones fisiolgicas importantes. >o o$stante,
tam$in pueden dar lugar a procesos infecciosos graves. 9un%ue el hom$re es un aero$io, m#s del ??.?
de la flora humana normal son anaero$ios estrictos " facultativos. @stos inclu"en)
0iel . Propionibacterium spp (0roduce #cido propinico !
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Aoca . Actinomyces, Prevotella, Porphyromonas, Peptostreptococcus
Bntestino grueso . Bacteroides spp, Bifidobacterium spp, Clostridium
perfringens, Peptostreptococcus
<agina . Lacto$acillus, 0revotella spp
$.1 3icrobiota de la piel.
Propionibacterium es el *nico anaero$io ha$itualmente presente en la piel, mientras %ue %ubacterium lo es
espor#dicamente. 4n las &onas prximas al #rea peritoneal se pueden encontrar $acterias intestinales,
como Clostridium y Bacteroides, %ue condicionan de manera distinta el tipo de infecciones de las regiones
prximas a la misma.
$.2 3icrobiota de la ca(idad oral.
4l sistema ecolgico de la $oca es mu" comple'o. 4n l se encuentran diferentes h#$itat, tales como
mucosas de distinta clase de epitelios, la placa dentaria, etc., con interrelaciones entre ellos mismos " el
resto del medio am$iente. Los factores %ue pueden afectar este sistema son muchos " variados) el lugar
donde se vive, la edad, el estado de la denticin, el tipo de alimentacin, las alteraciones en la dentadura,
los h#$itos higinicos, la cantidad de saliva, la forma de respirar, el potencia 4h, la cantidad de liso&ima, las
peroxidasas, la produccin de inmunoglo$ulinas, la capacidad fagocitaria de los leucocitos, el efecto de
su$stancias antimicro$ianas " otros. 4n la cavidad oral, es casi constante la presencia de $acterias
anaero$ias " microaerfilas, con predominio de &treptococcus, Peptostreptococcus, Fusobacterium,
Prevotella, Bifidobacterium, Propionibacterium, %ubacterium, espiro%uetas " Actinomyces!
La concentracin de $acterias en la saliva es de 12
C
por ml, la de la superficie de los dientes de 12
?
" la de
los raspados gingivales es superior, pudiendo llegar a 12
12
por ml. La proporcin de anaero$ios " aero$ios
es varia$le) de 1 a 1 en la saliva " de 1222 a 1 en el surco gingival.
+uando se pasa de la cavidad oral hacia la laringe, las $acterias pr#cticamente desaparecen1 el resto de
las vas respiratorias " los pulmones se consideran estriles.
$." 3icrobiota del tracto digeti(o.
4n condiciones normales, de$ido al $a'o 0h del 'ugo g#strico la flora del estmago es mnima o apenas
existente, menos de 12 $acteriasDml, no siendo necesariamente anaero$ios estrictos.
La micro$iota del intestino delgado es $astante simple, con conta'es de $acterias entre 12
3
" 12
E
por ml "
su$iendo en el leo terminal a 12
F
Dml, donde la proporcin entre aero$ios " anaero$ios es mu" similar1
Bacteroides " Bifidobacterium son los anaero$ios m#s comunes.
+uando las $acterias llegan al intestino delgado son sometidas a la accin de los 'ugos intestinales,
pancre#tico " $iliar, al peristaltismo " otros factores %ue tienen un evidente poder antimicro$iano1 por esta
ra&n el n*mero total de $acterias en dicho lugar es ha$itualmente escaso " seme'ante al de las partes
superiores del aparato digestivo, aun%ue con ma"or n*mero de Bacteroides fragilis.
/#s a$a'o, en el leon " &ona colorectal, ha" una gran cantidad de $acterias, pertenecientes a m#s de E22
especies distintas1 un ?? son anaero$ias, so$re todo Bacteroides, capaces de utili&ar los alimentos no
digeridos previamente " vivir entre clulas epiteliales, las cuales los utili&an " convierten en protenas
asimila$les, mucina " otras materias.
4n el intestino grueso es donde el n*mero de $acterias es ma"or1 la concentracin llega hasta 12
11
" 12
12

de $acterias vivas por gramo de heces, lo %ue representa un tercio del peso en seco. Las $acterias %ue
predominan son las anaero$ias estrictas de los gneros Bacteroides, Bifidobacterium, %ubacterium,
Peptostreptococcus " Clostridium, 'unto con algunas aero$ias como las entero$acterias, pero en
proporcin mucho m#s $a'a, de 1222 a 1. 5on precisamente las $acterias anaero$ias el factor m#s
importante en el mantenimiento de la Gresistencia a la coloni&acinG. B! fragilis, aun%ue constitu"e menos del
1 de la flora total del colon, es el %ue se aisla en el H2 de las muestras clnicas de infecciones
intraa$dominales, de$ido a %ue se adapta me'or al medio donde se produce la alteracin patolgica.
$.$ 3icrobiota del tracto genital )emenino.
(am$in en la vagina existe una flora micro$iana a$undante " comple'a en donde unas 22 especies son las
m#s ha$ituales. La micro$iota anaero$ia es diversa " comple'a. Peptococcus, Peptostreptococcus,
Bacteroides " los $acilos =ram positivos como %ubacterium " Clostridium son las $acterias %ue se aslan
con m#s frecuencia. Prevotella se encuentra como flora normal en m#s de un 22 de las mu'eres.
La micro$iota vaginal es relativamente constante, pero vara ante las distintas circunstancias fisiolgicas de
la mu'er, como el em$ara&o, el puerperio, el uso de antimicro$ianos, el empleo de dispositivos intrauterinos,
la toma de anticonceptivos, la menopausia, etc.
$.& 0cti(idade )iiolgica.
Las $acterias anaero$ias %ue constitu"en la micro$iota del hom$re tienen un papel importante en procesos
fisiolgicos. 4ste aspecto es de especial importancia a nivel del tu$o digestivo, "a %ue la flora intestinal tiene
actividades de tipo meta$lico. Bntervienen de forma significativa en el meta$olismo de los #cidos $iliares,
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pues poseen las en&imas necesarias para tal fin. 4n la misma lnea, ha" %ue citar la meta$oli&acin de
amino#cidos, mediante reacciones de desaminacin o decar$oxilacin, de forma %ue cuando disminu"e la
flora intestinal pueden aparecer situaciones de malnutricin proteica, infantilismo " alteraciones en el
meta$olismo de la urea " tiroxina. 9dem#s, las $acterias anaero$ias pueden sinteti&ar vitaminas del
comple'o A, as como #cido flico.
!ntomas clnicos sugestivos de infeccin anaerbica
Descarga maloliente
Bnfeccin en proximidad a una superficie mucosal
(e'ido necrtico, gangrena, formacin de pseudomem$rana
=as en los te'idos
4ndocarditis con los hemocultivos rutinarios negativos
Bnfeccin asociada a malignidad o de otro proceso produciendo destruccin tisular
(rom$ofle$itis sptica
+uadro $actermico con ictericia
Bnfeccin resultante de mordedura de humano u otras
Decoloracin negra de exudados sanguinolentos (pueden despedir lu& fluorescente ro'a $a'o
lu& ultravioleta en infecciones del B! melaninogenicus !
0resencia de los Ggr#nulos del a&ufreG en las descargas (actinomicosis!
+aractersticas clnicas cl#sicas de la gangrena gaseosa
+ondicin clnica secundaria a cirugas (a$orto sptico, infeccin despus de la ciruga
gastrointestinal, ciruga genitourinaria, etc!
&.1 ;itribucin de anaerobio en muetra clnica>
"rigen de las infecciones anaerbicas
Las $acterias anaero$ias son la causa de una gran diversidad de enfermedades en el hom$re " en los
animales. 4stas $acterias pueden proceder de fuentes exgenas o endgenas.
Las $acterias anaero$ias de la micro$iota del hom$re " de los animales, son comensales o saprofitas con
car#cter de oportunistas. 0or tanto, son invasores secundarios, siendo el acontecimiento primario la difusin
de la flora normal m#s all# de los lmites de sus $arreras mucocut#neas.
Los cuadros %ue originan estas $acterias son inespecficos, pudiendo afectar a cual%uier rgano o te'ido "
casi siempre son polimicro$ianos. 9dem#s, con $astante frecuencia son procesos de etiologa mixta, en
ellos tam$in est#n involucrados de forma simult#nea $acterias aero$ias.
*.1 I:%ECCI?: 0:0ER?BIC0 ;E +RI=E: E<?=E:+
Aotulismo
=astroenteritis por +l.perfringes
/ionecrosis (=angrena gaseosa !
(tano
Bnfeccin seguida de mordedura de animal o humana
9$orto sptico
*.2 I:%ECCI+: 0:0ER?BIC0 ;E +RI=E: E:;?=E:+
9$sceso en cual%uier rgano
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9ctinomicosis
+omplicacin de apendicitis
/ionecrosis clostridial
4ndocarditis
Bnfeccin periodontal
/eningitis seguida de un a$sceso cere$ral
-steomielitis
Las infecciones producidas por las $acterias anaero$ias ocurren en todas las partes del cuerpo humano.
Los te'idos infectados contienen generalmente una me&cla de varias clases de anaero$ios " tam$in
contienen con frecuencia $acterias aero$ias " facultativas. Los tipos de infecciones producidas com*nmente
por las $acterias anaero$ias son como sigue)
a! In)eccione intrabdominale. Los a$scesos, las infecciones postoperatorias de la herida " la peritonitis
generali&ada producida por los anaero$ios, ocurren como consecuencia de la perforacin del intestino
durante cirugas o por lesin.
$! In)eccione pulmonare. Las infecciones anaero$ias del pulmn pueden originarse en los $ron%uios o
la sangre. Las aspiraciones de la &ona respiratoria superior, %ue contienen una gran cantidad de $acterias
anaero$ias, son responsa$les de iniciar la infeccin en los $ron%uios.
c! In)eccione p.l(ica. Las infecciones anaero$ias de la vagina " del *tero ocurren a veces despus de
ciruga ginecolgica o en la asociacin con malignidad de rganos plvicos.
d! 0bceo del cerebro. Los anaero$ios producen infrecuentemente meningitis, pero son una causa
com*n de los a$scesos del cere$ro. Los organismos %ue provocan la infeccin se originan generalmente en
el tracto respiratorio superior.
e! 7iel e in)eccione del te@ido ua(e. Las com$inaciones de anaero$ios, de aero$io, " de organismos
facultativos act*an a menudo sinergsticamente para producir estas infecciones.
f! In)eccione orale # dentale. 4stas infecciones locales se extienden con frecuencia a la cara, el cuello
" a veces a otras #reas del cuerpo tales como el cere$ro.
0RE0' %RECAE:-E3E:-E 0%EC-0;0' 7+R 0:0ER+BI+'
*." I:CI;E:CI0 ;E I:%ECCI+:E' 0:0ER+BIC0'>
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,- 7R+CE'03IE:-+ ;E 60 3AE'-R0>
,.1 3edio utili4ado para el etudio de anaerobio>
1. Arucella agar con E de sangre de carnero, suplementado con vitamina I " ,emina. (am$in son
*tiles el +olum$ia " el 5chaedler agar.
2. Aacteroides $ili.esculina agar ( A. fragilis !.
3. 9gar sangre con Ianamicina.<ancomicina. ( Aacteroides !
:. 9gar alcohol fenil etlico. ( Bnhi$e entricos. /u" *til para Aacteroides !.
E. (ioglicolato 13E sin indicador. /edio de enri%uecimiento %ue puede suplementarse con vitamina I
(2.1ugDml !, ,emina (E ugDml ! o $icar$onato de sodio ( 1 mgDml !. +alentar en $a6o /ara por 12
minutos con la tapa flo'a.
Luego sacar, apretar la tapa " de'ar enfriar, antes de usar.
F. +arne molida.dextrosa. 0ara +lostridium, visuali&acin de esporas, determinacin de toxinas "
mantenimiento de colonias.
H. 9gar "ema de huevo (+. perfringes " cocos grampositivos anaer$icos!
,.2 'itema para el culti(o de anaerobio>
Los anaero$ios pueden crecer en las placas de agar en una atmsfera sin - 2, generalmente > 2 al C2,
+- 2 al 12 e , 2 al 12. 4l +- 2 estimula el crecimiento " el , 2 com$inado con - 2 , %ue pueda estar
presente, sirven para mantener las condiciones anaero$ias.
9lgunos sistemas para el cultivo de anaero$ios son
(cnica de 'arra anaer$ica
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(cnica de c#maras de anaero$ios
/edios 0re.reducidos
9un%ue existen varias tcnicas disponi$les para mantener un am$iente li$re de oxgeno durante el
procesamiento de los especimenes para el cultivo de anaero$ios, la 'arra anaer$ica es la m#s com*n.
,.2.1 -.cnica de la @arra anaerbica>
Los diferentes sistemas de 'arras anaer$icas inclu"en la de Arewer, =as0aJ, /cBntosh.Kildes, Larra (ol$ar,
entre otras.
>os referiremos a la 'arra =as0aJ, por ser la de ma"or utilidad en el mundo.
4l principio $#sico de sta, es como la de todas) La remocin del oxgeno presente en la c#mara ocurre por
la reaccin con el hidrgeno producido, en presencia de un catali&ador, para formar agua. La reaccin se
descri$e como 2,2 M -2 NNN 2,2-
4l catali&ador est# compuesto de un pellet de aluminio revestido de 2.E de paladio. 4l catali&ador puede
ser inactivado en la 'arra por la produccin de sulfuro de hidrgeno u otros meta$olitos vol#tiles producidos
por las $acterias. 0or ello se recomienda %ue los catali&adores sean reempla&ados cada ve& %ue se va a
cerrar la 'arra. Los mismos pueden restaurar su actividad si son calentados a 1F2 . 1H2 B+ por 2 horas1
luego de lo cual son almacenados en un lugar seco " limpio a temperatura am$iente.
4l so$re generador de =as0aJ contiene un papel de filtro, una ta$leta de $orohidruro de sodio, una ta$leta
de $icar$onato de sodio " #cido ctrico. 4l so$re es activado al a6adir 12 ml de agua " el am$iente se
o$tiene en aproximadamente 32 minutos, visuali&#ndose por una condensacin del agua dentro de la 'arra.
4l sistema produce un potencial de oxido.reduccin ( ;edox ! de .122 /v dentro de
1 hora " . 222 /v en 2 horas. Dentro de una hora de incu$acin a 3E B+ , la concentracin de gases es de
aproximadamente : a 12 de +-2.
Las condiciones anaer$icas pueden ser monitoreadas utili&ando un indicador de xido.reduccin1 una tira
de papel de filtro impregnada de a&ul de metileno puede ser utili&ada con ste propsito. 4l a&ul de
metileno se degrada a incoloro " permanece as mientras se mantengan las condiciones de ausencia de
oxgeno.
5i el la tira indicadora se o$serva a&ul, ha" falla en la produccin del am$iente " los cultivos de$en ser
repetidos. 4l a&ul de metileno se decolora en aproximadamente
: a F horas a 3E B+.
4xisten en mercado diversas marcas para generadores de am$ientes, entre los %ue llama la atencin el
=en$ox de $io/erieux %ue no re%uiere agua para su activacin ni catali&ador. >o desprende ,idrgeno "
re%uiere ser colocado en menos de 1 minuto en la 'arra, "a %ue la reaccin es inmediata.
>ormalmente el periodo de incu$acin de los platos es de :C h, sin em$argo algunos re%uieren m#s de 3
das como el Kuso$acterium " algunos cocos anaer$icos. =eneralmente el periodo m#ximo de incu$acin
es de H2 horas , con o$servacin de los platos a las :Ch.
J0RR0 ;E BRECER
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,a" otros procedimientos m#s sofisticados %ue se utili&an para aislar los microorganismos extremadamente
oxgeno.sensitivos %ue no siempre pueden ser recuperados usando la 'arra anaer$ica.
,." 3edio 7re-Reducido 57R0'9>
4n este mtodo se preparan los medios prerreducidos, se esterili&an, se almacenan en tu$os sellados " se
les inocula un am$iente li$re de oxgeno. 5iempre %ue los tu$os se a$ran por e'emplo para la siem$ra de la
muestra, inoculaciones, transferencia etc., se protegen contra la entrada del oxgeno haciendo pasar a
travs de ellos " de manera continua, una corriente de gas li$re de oxgeno ($ixido del nitrgeno o de
car$ono!. +ada tu$o es por lo tanto, su propia c#mara de anaero$iosis.
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7n mtodo mu" pr#ctico de preparacin, es el del medio prerreducido con agu@a.
5e prepararan tu$os de caldo infusin cere$ro " cora&n (A,B! " tu$os de A,B a los %ue se les incorpor un
tro&o de carne de res de 2.E cm de carne cocida desgrasada (A,B.carne!, prerreducidos, de acuerdo con las
recomendaciones de ,oldeman, +ato " /oore, para garanti&ar una atmsfera completamente anaer$ica.
0ara crear la atmsfera anaero$ia, el medio de cultivo se dispone en vol*menes de
E ml en tu$os 1F x 122 mm con tapn de hule (nuevo! " tapa de rosca a la %ue se le hi&o un orificio de 1
mm1 a travs de dicho orificio se introdu'o una agu'a 82H. Los tu$os $ien cerrados se esterili&aron durante
1E minutos a 121 B+. +oncluido el ciclo de esterili&acin, se procede a una descompresin r#pida de la
autoclave " con guantes protectores se precede a sacar las agu'as en cada uno de los tu$os %ue se
encontra$an a*n en proceso de e$ullicin. Los tu$os se de'an enfriar a temperatura am$iente " son
descartados todos a%uellos %ue presentaran evidencia de oxidacin, de acuerdo con el indicador de
resar&urina %ue tiene incorporado el medio.
,.".1 El m.todo del Roll--ube es una tcnica populari&ada por el 'irginia Polytechnic (nstitute (<B0!, el
cual consiste en un tu$o con tapa %ue contiene gas li$re de oxgeno " una capa delgada del medio
prerreducido ( 0;95 ! en su superficie interior. La muestra se inocula mientras %ue se rota el tu$o. 4sto
produce una pista en espiral en la superficie del agar. 4l tu$o se limpia con una corriente de $ixido de
car$ono para prevenir la entrada del aire mientras %ue est a$ierto durante la inoculacin, con lo %ue el tu$o
al taparlo se convierte en su propia c#mara anaer$ica de cultivo.
,.$ 6a cmara de anaerobio con guantes es otra innovacin desarrollada para aislar $acterias anaero$ias.
4s esencialmente un compartimiento grande de vinil transparente, con los guantes unidos, conteniendo una
me&cla de C2 de nitrgeno, 12 de hidrgeno " 12 de $ixido de car$ono. ;ecordar %ue el ,2 es
explosivo.
7n compartimento en un extremo de la c#mara contiene dos portillas, una %ue conduce al exterior " la otra
al interior del compartimiento. Los especimenes se ponen en el compartimento, la portilla exterior es
cerrada, " el aire en el compartimento se evacua " se su$stitu"e por la me&cla de gas. La portilla interior
entonces se a$re para introducir el espcimen en la c#mara principal cuando las presiones se igualan. 7na
de las c#maras m#s recomendadas es la de Korma 5cientific.
Cmara de anaerobio
,.& 7rincipio generale para el .!ito del culti(o>
1. 9propiada coleccin " transporte
2. 0rocesamiento de la muestra con la mnima exposicin al oxgeno
3. /edio de cultivo fresco o prerreducido.
4. 7so de un sistema anaer$ico adecuado.
,.* Caractertica Dtile en la identi)icacin de bacteria anaerbica>
9 pesar de %ue existen signos $acteriolgicos %ue sugieren crecimiento de organismos anaer$icos
como morfologa celular tpica en =ram, crecimiento en el #rea profunda de un medio l%uido, gas " mal olor
en el cultivo, los siguientes detalles a"udan a orientarnos en el diagnstico)
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1. /orfologa de la clula " de la colonia
2. 0roduccin de pigmento
3. Kormacin de endosporas
:. Aeta.hemlisis en agar de sangre
E. 0icaduras en el medio
F. Kluorescencia con la lu& ultravioleta
H. /ovilidad
C. Ondice de crecimiento
?. -lor caracterstico del cultivo
12. 0roduccin de catalasa
11. +recimiento en presencia de $ilis al 22
12. 0atrones especficos de la suscepti$ilidad a los anti$iticos
13. 4fectos del cultivo en agar "ema de huevo
1:. 0roduccin de indol
1E. ,idrlisis de la esculina
1F. 5u$productos meta$licos caractersticos de la fermentacin de la glucosa
1H. 0roduccin de toxinas
,., 3uetra no adecuada para el culti(o de anaerobio>
a! Lavado $ron%uioalveolar desprotegido.
$! ,isopo cervical.
c! 9spirado endotra%ueal.
d! Lo%uios.
e! ,isopo nasofarngeo D 5ecrecin farngea.
f! L%uido seminal o prost#tico.
g! 4sputo por expectoracin o inducido.
h! ,eces, rectal, contenido g#strico, colostoma.
i! 5ecrecin uretral D hisopo vaginal o vulvar.
'! -rina por vaciado directo o catter.
#$cnicas para la identificacin de bacterias anaerbicas
/.1 7rueba de Identi)icacin Bacteriana>
/.1.1 Etanol- epora tet
5irve para separar $acilos esporulados de los no esporulados, $asado en la resistencia de las esporas al
alcohol.
1. 7tilice un caldo de cultivo de :Ch
2. 9dicione 1 ml del caldo de cultivo a un tu$o conteniendo 1 ml de alcohol etlico al ?E.
3. /e&cle " de'e reposar por 32 a :E minutos.
:. Bntrodu&ca un hisopo dentro del tu$o " siem$re en un plato de agar sangre.
E. Bntrodu&ca otro hisopo en el caldo original " siem$re en plato de agar sangre. 4ste servir# de control
para la pure&a " via$ilidad del microorganismo.
F. Bncu$e am$os platos en am$iente anaer$ico a 3E B+ por :C h.
H. +recimiento en am$os platos indica la presencia de esporas.
/.1.2 -et de 'I3 en 0naerobioi por Epora
4ste test no est# descrito en ning*n li$ro " fue descu$ierto por nosotros de forma casual. Desde entonces
por su sencille& es utili&ado en la ma"ora de los la$oratorios del pas.
1. +olo%ue la colonia en un tu$o conteniendo medio para 5B/ (/ovilidad!.
2. Bncu$e por :Ch a 3E B+ en am$iente anaer$ico.
3. 5i ha" presencia de ,25, haga un frotis por =ram " un frotis por verde mala%uita. ( 1 minuto verde
mala%uita flameando 2 veces, lavado con agua, te6ir con safranina por 1 minuto !.
4. 4l frotis te6ido por verde mala%uita demostrar# la presencia de esporas (verdes!, si el organismo
tiene la capacidad de producirla.
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Epora o(al ub-terminal. %roti por (erde malaEuita
/.1." 7rueba de bili al 22F
4sta prue$a es *til para separar el grupo de A. fragilis $ilis resistente, del resto de los $acteroides sp. La
prue$a se puede hacer con disco impregnado de $ilis, agar o tu$o de $ilis test.
1. ,aga una solucin de $ilis pura al :2. 4sterilice por autoclave.
2. 9dicione 2.E ml de $ilis a 12 ml de tioglicolato previamente hervido. 4sto hace una concentracin de
2 de $ilis pura, e%uivalente a 22 de $ilis.
3. Bnocule al tu$o de tioglicolato.$ilis " a otro tu$o de tioglicolato sin suplemento, 1 a 2 colonias de un
plato puro de agar sangre.
:. Bncu$e por 2: a :Ch.
5. +ompare el crecimiento en am$os tu$os. La prue$a es catalogada inhi$icin por $ilis, si no ha"
crecimiento en el tu$o de tioglicolato.$ilis.
/.1.$ 6ecitinaa -et
4l componente lecitina, un componente normal de la "ema de huevo, es descompuesta por la en&ima
lecitinasa en un diglicrido insolu$le. 4sto resulta en un halo opaco en el medio conteniendo "ema de
huevo. 4s un test importante para los clostridium.
1. Bnocule el medio /c+lung (oa$e "ema de huevo agar suplementado con emulsin de "ema de
huevo, con el organismo en plato de 2:.:Ch de incu$acin.
2. Bncu$e anaer$icamente por al menos 2:h a 3E B+.
3. 4xamine por una opacidad $lanca en el medio %ue rodea la colonia " %ue se extiende al final del
crecimiento.
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Clotridium no(#i en agar #ema de Gue(o.
Reaccin de 6ecitinaa # 6ipaa poiti(a
/.1.& :agler -et
Cl! perfringes, barati, bifermentans " sordelli producen una alfa lecitinasa la cual es detectada por un test de
neutrali&acin, utili&ando perfringes antitoxina tipo 9 " A.
1. Bnocule la mitad de un plato de agar "ema de huevo con la antitoxina.
2. De'e secar. Bnocule el organismo a examinar en la otra mitad del plato li$re de antitoxina " luego
estriar a travs del lado con antitoxina.
3. Bncu$e anaer$icamente por 2: a :Ch a 3E B+.
4. 4xamine por la prdida de la tur$ide& en la mitad del plato con antitoxina, lo %ue demuestra la
neutrali&acin de la lecitinasa, lo cual es un test positivo.
Cl. per)ringe- :agler tet poiti(o en agar #ema de Gue(o
:ote la perdida de la acti(idad de la 6ecitinaa en el lado derecGo8 con antito!ina8 comparado con el
agar limpio en el lado i4Euierdo8 in antito!ina
/.1.* C037 tet re(era
4s similar al test para identificar 4streptococos $etahemolticos del grupo PAQ (4A,A!, excepto %ue en ste
test, el clostridium reempla&a al 5. aureus.
4l 4A,A puede inhi$ir algo de la hemlisis con otros clostridium " solo el
Cl! Perfringes muestra la caracterstica hemlisis en forma de ca$e&a de flecha.
1. 7tilice colonias frescas de clostridium " 4A,A.
2. Bnocule el 4streptococo en una sola lnea en el agar sangre, en #ngulo de ?2B con respecto a una
lnea de clostridium, haciendo una cru&.
3. Bncu$e anaer$icamente a 3E B+ por 2: a :Ch.
:. 7na &ona en forma de ca$e&a de flecha %ue indica una hemlisis sinergstica, es una prue$a
positiva.
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Cl. per)ringe. C037 tet re(era poiti(a
/.1., -et de ureaa en caldo
4s *til para diferenciar algunos clostridium, $acteroides " actinom"ces.
1. 0repare una suspensin fuerte del organismo en un caldo de urea estril.
2. Bncu$e aer$icamente a 3E B+ por 2: h.
3. 7n color morado $rillante a ro'o es una prue$a positiva. 4ste cam$io de color puede ocurrir entre 1E
a 32 minutos.
4s *til para diferenciar Bacteroides urealyticus de B! gracilis " B! fragilis. (am$in es *til para separar Cl!
sordellii del menos patognico Cl! Bifermentans.
C.1.C Bndol)
1- +olocar una porcin de la colonia so$re un peda&o de papel de filtro.
2- 9gregar una gota del reactivo.
3- Las colonias positivas dan un cam$io inmediato cercano al color rosado.
4- 4s 7na prue$a *til para distinguir entre Bacteroides spp. " Fusobacterium spp. " entre
miem$ros de la familia del 0eptostreptococcus spp. " clostridium spp.
/.1.1 :itrato>
4s una prue$a en disco de nitrato en 2 horas , la cual es *til para diferenciar el grupo de B! fragilis del grupo
de B! ureolyticus, " el grupo de $acilos grampositivos no esporulados %ue inclu"e al Propionibacterium
acnes " %ubacterium lentum ( ahora %ggerthella lenta$! 'eillonella es tam$in nitrato positivo.
/.1.12 Catalaa>
0ara el test de catalasa en anaero$ios, se utili&a una solucin de ,2-2 al 1E, lo cual parece ser m#s
sensi$le %ue la solucin al 3 utili&ada para estafilococos.
Bacteroides fragilis " Bacteroides thetaiotaomicron, son catalasa positiva, sin em$argo, muchos otros
miem$ros e la familia del Bacteroides fragilis son catalasa negativa. Propionibacterium acnes es catalasa
positiva " sin em$argo, %ubacterium lentum (%ggerthella lenta$ es negativa! 4l B!thetaiotaomicron convierte
el #cido litoclico en ster etlico. 4l #cido litoclico puede ser un promotor de tumores.
/.1.11 '7'>
4l 0ol"anethol . sulfonato de sodio (505!, un anticoagulante com*nmente usado, inhi$e ciertas $acterias
tales como el Peptostreptococcus anaerobius " el aero$io )ardnerella vaginalis! Los discos de papel
impregnados con el 505 al E se pueden utili&ar como herramienta para distinguir 0. anaerobius de otros
cocos anaero$ios.
%l P! anaerobius da generalmente una &ona mu" grande de inhi$icin (N 1FF mm!, mientras %ue otros
cocos anaero$ios %ue son suscepti$les al 505 dan &onas m#s pe%ue6as.
4l %ads&ort' Anaerobic (acteriology Manual recomienda %ue todos los la$oratorios de$an ser capaces
de identificar los anaero$ios al menos hasta el nivel 1, lo cual es definido como PBdentificacin presuntiva
para platos primariosQ. 4sta informacin inclu"e par#metros simples como reaccin al =ram, morfologa "
algunas prue$as $io%umicas $#sicas.
/.2 Caua de error en la in(etigacin de anaerobio >
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1. 9ceptacin para cultivo de muestras no recomendadas para anaero$ios.
2. Kalla en excluir flora normal durante la coleccin.
3. >o evitar la entrada de aire durante la coleccin " transporte de la muestra.
:. Kalla en los catali&adores e indicador.
E. >o mantener los platos anaero$ios en incu$acin por m#s tiempo.
F. 7tili&ar el mtodo de Iir$".Aauer en la sensi$ilidad.
Anaerobios de mayor importancia clnica
0 - Bacilo =ram:egati(o
a! Bacteroides fragilis ( 12.23 !
$! Bacteroides melaninogenicus
c! Fusobacterium nucleatum
B- Bacilo =ram7oiti(o Eporulado
a! Clostridium perfringes ( E.12 !
C- Bacilo =ram7oiti(o :o Eporulado
a! Propionibacterium acnes ( E.12 !
;- Coco =ram 7oiti(o
a! Peptococcus asaccharolyticus ( ?.12!
$! Peptococcus anaerobius ( C.? !
9.1 Bre(e decripcin de lo anaerobio de ma#or importancia >
9l presente existen m#s de una docena de gneros de los $acilos =ram negativos anaer$icos estrictos.
5in em$argo, en la ma"ora de las infecciones clnicas, solo los gneros Aacteroides, 0orph"romonas,
0revotella " Kuso$acterium, de$en ser considerados.
1.1.1 Bacteroide p>
Bacteroides sp es tal ve& la $acteria mas numerosa del intestino, " tam$in la $acteria anaer$ica estricta
de ma"or importancia clnica. Descrita originalmente en 1C?C es un anaer$ico estricto, =ram.negativo,
pleomrfico, %ue no se podran asignar convincentemente a ninguna otro gnero. 4l an#lisis fisiolgico de
este gnero revel heterogeneidad considera$le con respecto a sus caractersticas $io%umicas, indicando
%ue estas $acterias no representa$an un grupo filogentico verdadero. De acuerdo con esta informacin, se
ha repartido los miem$ros grupo Aacteroides original en tres gneros) Bacteroides, Prevotella, "
Porphyromonas! 4sta definicin restringe el Aacteroides a die& especies!
%l B! fragilis es el organismo anaero$io m#s com*n aislado de infecciones clnicas " los casos no tratados
tienen un ndice de mortalidad del F2 , especialmente por su capacidad de hacer resistencia a los
anti$iticos. 4sta mortalidad se puede disminuir grandemente con uso de la terapia antimicro$iana
apropiada.
1.1.1.1 %actore de (irulencia del Bacteroide.
+#psula polisac#rida
4n&imas histolticas
Lipopolisac#rido
(olerancia al oxgeno
9glutininas
Aeta lactamasa
La +#psula 0olisac#rida es detecta$le mediante tincin " tcnicas inmunolgicas. La c#psula es
antifagoctica " favorece a la formacin de a$scesos. Los B! fr*giles encapsulados se adhieren a las
superficies peritoneales con ma"or efectividad %ue las no encapsuladas, por sus aglutininas, por lo %ue ste
microorganismo se asocia a m#s del C2 de las infecciones intraa$dominales. 4s pro$a$le %ue la
adherencia interfiera con la eliminacin de las $acterias mediadas por macrfagos.
1.1.1.2 Caractertica )undamentale de in)eccione por bacteroide on>
-rigen endgeno.
9parecen como infecciones mixtas con otros grmenes.
(endencia a formar a$scesos.
1.1.1." 'indrome clnico>
B !fragiles se asocia con supuracin, peritonitis por lesin intestinal, osteomielitis, neumonas,
endocarditis, septicemia " a$scesos en pulmn, tu$o digestivo, 9(- (a$sceso tu$o ov#rico!.
4sta$lecida la infeccin, la po$lacin se puede extender desde las superficies mucosas hasta los
te'idos o l%uidos estriles so$re todo en casos de traumatismo o enfermedad previa.
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Las $acterias encapsuladas como B! fragiles desempe6an un papel destacado en infecciones "
conducen a la formacin de a$scesos.
Las infecciones se locali&an en &onas prximas a las mucosas coloni&adas.
5e asla en el 1E al 22 de infecciones pleuropulmonares, en dos tercios de infecciones plvicas supuradas
" en todas las infecciones intraa$dominales con formacin de a$scesos.
1.1.1.$ ;iagntico de laboratorio>
4l examen microscpico de las muestras puede tener utilidad cuando se sospecha una infeccin por
anaero$ios. 9un%ue las $acterias %ui&# se ti6en poco " de forma irregular, la presencia de $acilos =ram
negativos pleomrficos puede suponer una informacin preliminar *til.
B! fragilis se puede identificar adem#s por la resistencia a Ianamicina, <ancomicina " +olistina " el
crecimiento en $ilis al 22. 4s indol negativo, catalasa positiva, hidrlisis de esculina positiva, fermenta la
glucosa " lactosa.
1.1.1.& 'uceptibilidad a lo antimicrobiano>
La terapia anti$itica com$inada con intervencin %uir*rgica supone la estrategia principal para controlar
las infecciones serias por anaero$ios. 0roducen A.lactamasa por lo %ue son resistentes a penicilinas "
cefalosporinas. 5in em$argo se pueden emplear concentraciones altas de +ar$enicilina, 0iperacilina,
inhi$idores de la A.lactamasa " otros anti$iticos A.lact#micos seleccionados como) +efoxitina, imipenem.
4l /etronida&ol es activo contra la ma"ora de los Aacteroides.
4l Aacteroides es potencialmente resistente a una amplia gama de anti$iticos. La resistencia a
+lindam"cina " a 4ritromicina ha aumentado lenta pero constantemente durante los *ltimos a6os.
/etronida&ol tam$in es una posi$ilidad teraputica.
Bacteroide )ragili en agar alcoGol )enil etlico
Bacteroide )ragili )roti por =ram. +ber(ar pleomor)imo
1.1.2 %uobacterium p >
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+orresponde a los $acilos =ramnegativos anaer$icos estrictos, no esporulados, no mtil, cu"a morfologa
al frotis nos muestra $acilos largos, ligeramente curvados, con la punta fina en forma de huso. 4s indol
positivo, ,25 negativo, catalasa negativa.
usobacterium nucleatum es la especie de Kuso$acterium m#s recuperada de procesos infecciosos.
4sta especie era reconocida antiguamente como K. fusiforme, ahora las cepas fusiforme son una
su$especie del K. nucleatum.
F necrophorum es un anaero$io mu" virulento " puede causar enfermedades serias, especialmente en
ni6os, al igual %ue a$sceso peritonsilar en 'venes e infeccin pleuropulmonar.
4s encontrado en la $oca, especialmente en la placa dental, genitales, tracto gastrointestinal " respiratorio.
4st# relacionado a las mismas infecciones %ue la cepa pigmentada de 0revotella " 0orph"romonas sp.
Kuso$acterium es tradicionalmente sensi$le a la 0enicilina, +lindamicina " +loranfenicol. 4s resistente a
4ritromicina " el resto de los macrlidos.
%. necropGorum H Colonia englobada
%. nucleatum - Colonia como miga@a de pan
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%. nucleatum H %roti por =ram
1.1." Clotridium p >
Los miem$ros del gnero clostridium son $acilos =ram.positivos, formadores de esporas " anaero$ios
estrictos. 4stas $acterias mviles se encuentran en la naturale&a, especialmente el suelo. +uando el
am$iente se tensiona, las $acterias producen las esporas %ue toleran las condiciones extremas %ue no
pueden resistir las $acterias activas. 4n su forma activa, estas $acterias secretan las exotoxinas de gran
alcance %ue son responsa$les de las enfermedades tales como ttanos, $otulismo " gangrena gaseosa. Las
cuatro especies mas importantes de clostridium son ) +. tetani , +. difficile, +. perfringens, +. $otulinum.
Ciclo de la Endopora
)*+*,*+ Clostridium tetani>
4s el agente causal del ttanos en los seres humanos.
Las esporas del C! tetani se pueden ad%uirir de cual%uier tipo de trauma de la piel %ue implica un
dispositivo infectado. 5i est# presente un am$iente anaero$io, las esporas germinar#n " formar#n
eventualmente las clulas activas del C! tetani.
9 nivel del te'ido, la $acteria entonces lan&a una exotoxina llamada tetanopamina %ue causa ciertas
irregularidades del sistema nervioso por medio de su transmisin a travs de las neuronas al cere$ro. 7no
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de los efectos de la toxina inclu"e la contraccin constante del m*sculo es%ueltico de$ido a una
o$struccin de los inhi$idores de la interneuronas %ue regulan la contraccin del m*sculo.
La infeccin prolongada conduce eventualmente a la falla respiratoria, entre otras cosas.
La inmuni&acin es la me'or manera de prevenir infecciones del C! tetani en ni6os " adultos.
Bndicaciones de La$oratorio)
/vil
4spora oval terminal
>o.aerotolerante
4s importante tener presente %ue las siguientes especies de clostridium tam$in pueden presentar esporas
en posicin terminal) C! cadaveris, C! innocuum, C! paraputrificum, C! ramosum, C! sphenoides " C!
tertium!

0aciente con ttano +. tetani R 4spora terminal
?.1.3.2 +lostridium $otulinum)
Clostridium botulinum produce una de las toxinas mu" potentes %ue es la causa de la intoxicacin
alimentaria mortal conocida como $otulismo.
=eneralmente las esporas del clostridium pueden ser aerotransportadas, encuentran a veces su manera de
introducirse en los alimentos " se colocan en am$iente anaero$io tal como latas o frascos.
Los pacientes experimentar#n par#lisis muscular as como la visin $orrosa. 5e re%uiere administrar
inmediatamente la antitoxina. 4l $otulismo infantil se ad%uiere de una manera similar pero es mucho m#s
$enigna %ue la versin del adulto.
La miel, sin em$argo, es la fuente m#s com*n de contaminacin en el ni6o. La proliferacin $acteriana " la
produccin su$secuente de la toxina, causan los sntomas %ue algunos das despus desarrollan la
enfermedad.
Bndicaciones de La$oratorio)
/vil
4spora oval su$terminal
>o.aerotolerante
Lipasa M
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C. botulinum H Epora ubterminal
?.1.3.3 +lostridium perfringens )
4s la especie de clostridium de ma"or importancia clnica. 4sta $acteria no mtil es un patgeno invasor %ue
puede ser contrado de la suciedad a travs de heridas por cortes grandes. Las clulas del C! perfringens
proliferan despus de %ue ocurra la germinacin de la espora " lan&an su exotoxina. La toxina causa la
necrosis del te'ido circundante (mionecrosis clostridial!.
Las mismas $acterias producen el gas %ue conduce a una deformacin de los te'idos infectados.
4l C! perfringens es capa& de necroti&ar los te'idos intestinales " puede lan&ar una enterotoxina %ue
conduce a la diarrea severa.
4n los casos de infeccin mixta, algunos autores recomiendan calentar a C2 B+ por 22 minutos para
eliminar las $acterias no esporuladas " o$tener un cultivo puro.
4l tratamiento de la infeccin puede consistir en la 0enicilina =, el oxgeno hiper$#rico " la administracin
de una antitoxina.
Bndicaciones de La$oratorio)

>o.mvil
4spora oval su$terminal. >o siempre la forma.
>o.aerotolerante
Do$le &ona de hemlisis en agar sangre
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C. per)ringe en agar angre. +ber(ar doble 4ona de Gemlii
?.1.3.: +lostridium difficile)
4l clostridium difficile es una $acteria mvil %ue puede ser parte de la flora intestinal normal. La infeccin
puede ocurrir por el uso excesivo de anti$iticos de amplio espectro %ue disminu"en la po$lacin $acteriana
del resto de la flora normal intestinal. +uando esto ocurre, el C! difficile prolifera e infecta el intestino
grueso. La $acteria entonces lan&a dos enterotoxinas %ue destru"an la defensa intestinal " causan diarrea.
+ada enterotoxina produce signos clnicos distintivos diferentes.
4l mtodo de tratamiento preferido es la <ancomicina oral. 4l cultivo de heces por C! difficile, no es el
mtodo apropiado para confirmar la infeccin. Las prue$as %ue detectan sus toxinas son m#s confia$les.
Bndicaciones de La$oratorio)

/vil
4spora oval su$terminal
>o.aerotolerante
Deteccin de toxinas 9 " A
Clotridium di))icile en agar alcoGol-)enil etlico
1.1.$ 0ctinom#ce p>
La actinomicosis es una infeccin causada so$re todo por el Actinomyces israelii! La infeccin ocurre
generalmente en la regin de la cara " del cuello " es caracteri&ada por inflamacin del #rea mandi$ular,
con enro'ecimiento " a$sceso ( PLump" 'aw P !. E2 de casos de actinomicosis est#n entre la regin
de la ca$e&a " del cuello (Gactinomicosis maxilofacialG!, el 1E est#n en el pecho, 22 en el a$domen " el
resto en la pelvis, el cora&n " el cere$ro.
4sta $acteria est# normalmente presente en la $oca, pero puede causar enfermedad si entra en te'idos
profundos donde est#n $a'os los niveles del oxgeno. La extraccin del diente, la enfermedades dentales, el
tratamiento del canal de la ra&, la ciruga de la %ui'ada, o la higiene dental po$re pueden permitir %ue el A!
israelii cause una infeccin en la regin de la ca$e&a " del cuello. 4l sntoma principal de la actinomicosis
cervicofacial es la presencia de una inflamacin dura en la cara o el cuello. 4l diagnstico de la
actinomicosis se $asa so$re todo en los signos clnicos " el antecedente de manipulacin dental. 4l
examen microscpico del l%uido %ue drena del a$sceso demuestra los Ggr#nulos de a&ufreG (material
amarillo! producidos por el A! israelii . Las $acterias pueden ser cultivadas de ve& en cuando del l%uido de
la &ona del sitio de la lesin infectada. 4l cultivo muestra la caracterstica colonia Pmolar Q.
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La forma cervicofacial suele comen&ar como un pe%ue6o a$ultamiento, plano " duro, %ue se forma en la
$oca, so$re la piel del cuello o de$a'o de la mand$ula. 4ste a$ultamiento puede causar dolor.
0osteriormente se forman #reas $landas de donde sale un l%uido cargado de pe%ue6os gr#nulos ondeados
" amarillentos parecidos al a&ufre. La infeccin puede extenderse hacia la me'illa, la lengua, la garganta, las
gl#ndulas salivales, los huesos del cr#neo o del cere$ro " su revestimiento (meninges!.
La actinomicosis maxilofacial es la forma de actinomicosis m#s f#cilmente trata$le. 4l pronstico es peor
en las formas tor#cica, a$dominal " generali&ada. 5in em$argo, es mucho peor en los casos en %ue el
cere$ro " la mdula espinal resultan afectados) m#s del E2 de los afectados con estas infecciones
presentan lesiones neurolgicas " m#s del 2E fallecen.
Los pacientes, por lo general, me'oran lentamente con tratamiento, pero suele ser necesario administrar
anti$iticos durante meses " llevar a ca$o varias intervenciones %uir*rgicas. 4l drena'e %uir*rgico de los
a$scesos de gran tama6o " el tratamiento anti$itico especialmente con 0enicilina o con tetraciclinas,
clindamicina o eritromicina, pueden tener %ue continuarse durante varias semanas despus de %ue los
sntomas ha"an desaparecido.
6ump# Jaw
0ctinomice iraelii H colonia Imolar J
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=rnulo de 0ctinomice 5 04u)re 9 en -ioglicolato
0ctinom#ce iraelii H %roti por =ram
?.1.E +ocos anaer$icos )
Los cocos anaero$ios no est#n implicados en procesos especficos infecciosos, sino %ue pueden estar
presentes en una gran variedad de infecciones %ue implican a todas las #reas del cuerpo humano. 4stas
infecciones pueden extenderse a infecciones m#s serias " peligrosas tales como a$sceso del cere$ro,
$acteremia, pulmona necroti&ante " a$orto sptico. La infeccin por los cocos anaero$ios (" por los
anaero$ios en general! implica generalmente la invasin del te'ido por los organismos %ue son parte de la
flora normal del te'ido afectado o de los alrededores. +omo caracterstica morfolgica, son cocos gram.
positivos, anaero$ios, ocurren solos, en pares, en cadenas, o en racimos irregulares.
4l a$sceso cere$ral, con un ndice de mortalidad del :2, es una de las infecciones m#s serias %ue
implican cocos anaero$ios. Los cocos anaero$ios son un grupo fisiolgico diverso %ue ha experimentado
recientemente cam$ios taxonmicos significativos. Los cocos gram.positivos anaero$ios de importancia
clnica se encuentran en tres gneros gram.positivos (0eptostreptococcus, =emella, " estreptococo! " un
gnero gram.negativos (<eillonella!. 4ste *ltimo es el coco gramnegativo anaer$ico m#s frecuentemente
aislado en muestras clnicas. ,a" otros gneros de cocos anaero$ios, pero se aslan raramente de
especimenes clnicos.
>o todos los cocos anaero$ios re%uieren condiciones anaero$ias rigurosas1 por e'emplo, las tensiones del
5treptococcus intermedius son a$solutamente aerotolerante " pueden crecer $a'o tensin reducida del
oxgeno. Los cocos anaero$ios pueden ser proteolticos, sacarolticos o am$os. 0roducen una variedad de
#cidos grasos vol#tiles de cadena corta ( actico, propinico, $utrico " l#ctico! de la fermentacin de
a&*cares " de amino#cidos simples. %l P! magnus " el P! anaerobius poseen los antgenos especie.
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especifico de la pared celular1 0eptostreptococcus " el 5treptococcus son los grmenes de ma"or
importancia clnica, con 0. magnus como el aislamiento m#s frecuente.
0ara esta$lecer el papel definitivo de los cocos anaero$ios en infecciones, el organismo causativo se de$e
aislar del te'ido afectado o de la circulacin sangunea.
De$ido a %ue los cocos anaero$ios son una parte significativa de la flora normal, la coleccin apropiada del
espcimen es crtica. 0or e'emplo, el esputo , las heces, " las secreciones vaginales, %ue se podran
contaminar con la flora micro$iana normal, son inacepta$les.
1.1.&.1 7eptotreptococcu >
;ecientemente, con el aumento del estudio de los cocos anaero$ios como patgeno, ciertas especies se
est#n asociando a tipos especficos de infeccin. 5eg*n lo o$servado, el P! prevotii " el P! anaerobius se
asocian a infecciones genitales femeninas " de la &ona intraa$dominal. %l P! magnus es el coco anaero$io
m#s frecuentemente aislado, se asocia a menudo con infecciones crnicas del hueso " a infecciones "
*lceras comunes del to$illo. La presencia de cuerpos extra6os, tales como las prtesis, se asocian
significativamente a infecciones por P! magnus . 4n algunos estudios, los cocos anaero$ios han sido
aislados en 1E (F! de 2:F casos de $acteremia anaer$ica monomicro$ial en pacientes con c#ncer,
indicando un potencial patgeno relativamente raro, pero significativo para los cocos anaero$ios en esta
po$lacin . <eillonella " el estreptococo anaer$ico.aerotolerante, son los cocos anaero$ios aislados con
m#s frecuencia de mordeduras humanas infectadas. 4stos organismos son parte de la flora oral normal.
Los cocos gram.positivo microaeroflicos se asocian a a$scesos " a otras infecciones purulentas.
4l grupo Peptostreptococcus inclu"e el gnero anterior Peptococcus, a excepcin de Peptococcus
+iger! )aff,ya anaerobia fue renom$rada como Peptostreptococcus tetradius! Las especies de los
cocos gram.positivos anaero$ios aislados m#s com*nmente son Peptostreptococcus magnus ,
Peptostreptococcus asaccharolyticus, Peptostreptococcus anaerobius , Peptostreptococcus prevotii y
Peptostreptococcus micros !
Los cocos gram.positivos anaero$ios %ue producen cantidades grandes de #cido l#ctico durante el proceso
de la fermentacin de car$ohidratos fueron reclasificados como el &treptococcus parvulus "
&treptococcus morbillorum, en ve& de Peptococcus o de Peptostreptococcus! La ma"ora de estos
organismos son anaero$ios, pero algunos son microaeroflicos. De acuerdo con la homologa del (D>9! "
otros estudios fenotpicos, el grupo de estreptococos microaero$icos %ue eran conocidos antes como el
&treptococcus anginosus o el &treptococcus milleri , son ahora 3 especies distintas ) 5. anginosus ,
&treptococcus constellatus " &treptococcus intermedius!
-a especie microaer.bica &! morbillorum fue transferido al gnero )emella! 7na nueva especie dentro del
gnero Peptostreptococcus es Peptostreptococcus hydrogenalis/ es la especie sacaroltica del gnero "
es indol positivo.
4xisten menores diferencias morfolgicas de importancia entre los cocos gram.positivos anaero$ios,
microaeroflico " facultativos. %l P! magnus tiene un di#metro m#s grande %ue otros cocos gram.positivos
anaero$ios " los P! micros son m#s pe%ue6os en di#metro. Los P! micros forman generalmente cadenas
cortas.
4l P! anaerobius " el Peptostreptococcus productus aparecen en pares o cadenas " son a menudo
alargados.
La cromatografa gas.l%uido " prue$as $io%umicas, son re%ueridas para identificar el nivel de gnero "
separar la ma"ora de los cocos anaer$icos. 4stos organismos son fastidiosos " su identificacin completa
es a menudo la$oriosa. De$ido a las diferencias en el potencial patgeno para las diversas especies con
relacin a una enfermedad definida, la necesidad de su especificidad exacta es polmica.
Los cocos anaero$ios demuestran crecimiento adecuado pero lento en todos los medios anaero$ios no
selectivos de crecimiento. Los medios selectivos %ue contienen <ancomicina inhi$en su crecimiento.
Los cocos gram.positivos anaero$ios " los estreptococos microaeroflicos se tratan me'or con 0enicilina =.
-tros agentes eficaces inclu"en otras 0enicilinas, +efalosporinas, +loranfenicol, +lindam"cina,
<ancomicina, " el Bmipenem.
La eficacia de macrlidos (4ritromicina! " de imida&oles (/etronida&ole! es varia$le e imprevisi$le. Los
imida&oles son ineficaces contra algunos cocos gram.positivos anaero$ios " todas las cepas aerotolerantes.
Las nuevas %uinolonas se ha encontrado %ue parecen ser eficaces contra el ?2 de los cocos anaero$ios1
sin em$argo, +iprofloxacina es menos efica&.
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7eptotreptococcu anaerobiu en agar alcoGol-)enil-etlico
7eptotreptococcu tincin de =ram de la muetra
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7eptotreptococcu tincin de =ram de colonia
'treptococcu anaerobiu
1.1.&.2 7ropionibacterium p >
4l Propionibacterium acne es miem$ro de la flora normal de la piel1 es una $acilo gram positivo corto %ue
puede ser pleomrfico o ramificado, no mtil " no forma esporas. 0uede confundirse morfolgicamente con
otros $acilos cortos anaer$icos =rampositivos de importancia como el 4u$acterium ( /ovilidad varia$le,
catalasa negativa ! " con /o$iluncus ( movilidad positiva !.
+rece $ien en agar sangre en am$iente anaer$ico o microaeroflico, es generalmente un contaminante,
pero puede causar el acn, endocarditis $acteriana, especialmente posterior al implante de v#lvulas,
infeccin en pacientes inmunocomprometidos, artritis anaer$ica ( 0rtesis !. 0uede estar presente en la
flora normal de la $oca , piel " con'untiva. 4n este *ltimo caso se asocia con endoftalmitis e infeccin en
lentes de contacto.
-tros 0ropioni$acterium de inters son ) 0. granulosum, 0. avidum " 0. propionicus.
Datos de la$oratorio )
Bndol ) 0ositivo
+atalasa ) 0ositiva
=lucosa ) Kermenta
=elatina ) ,idrlisis
/ovilidad ) >egativa
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7ropionibacterium acne H %roti por =ram
0cn. e(ero por 7ropionibacterium p
1.1.&." Keillonella >
'eillonella es un coco =ram.negativo, %ue es la contraparte anaer$ica de la +eisseria. 4ste diplococo no
mtil, es parte de la flora normal de la $oca. La especie m#s com*n aislada en humanos es la <. parvula.
Las 'eillonella son negativa para la ma"ora de las prue$as $io%umicas, con la excepcin de ocasionales
cepas catalasa positiva.
Datos de la$oratorio )
/ovilidad ) >egativa >itrato ) >egativo
Bndol ) >egativo 7rea ) >egativo
+atalasa ) 0redominantemente >egativa
4sculina ) >egativa 0igmento ) >egativo

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Keillonella -incin de =ram
!ensibilidad a los antibiticos
Las prue$as rutinarias de suscepti$ilidad a los anaero$ios pueden ser a menudo innecesaria " una prdida
de tiempo. 5in em$argo, es importante pro$ar la sensi$ilidad a los aislamientos recuperados de sitios
estriles del cuerpo, los %ue son importantes clnicamente " tienen sensi$ilidad varia$les " especialmente
los aislados en cultivos puros de especimenes correctamente recogidos. Los anti$iticos pro$ados de$en
incluir la 0enicilina, una 0enicilina del amplio.espectro, una 0enicilina con un inhi$idor de $eta.lactamasa,
+lindamicina, +loranfenicol, una +efalosporina de segunda generacin (eg, +efoxitin!, m#s nuevas
%uinolonas, /etronida&ole " un car$apenmico.
Los mtodos recomendados inclu"en la dilucin en agar " la dilucin en caldo apro$ados por el >++L5.
Los nuevos mtodos inclu"en el 4.(est .
;ecomendamos seguir las recomendaciones del >++L5 ) P Method for antimicrobial susceptibility testing of
anaerobic bacteria Q <ol. 21, >o. 2, Kifth edition, >++L5.
/#s del ?? de los Aacteroides son resistentes a la 0enicilina " E2 de las 0revotella pueden producir
$eta.lactamasa, al igual %ue ocasionales cepas de +lostridium. Las vie'as %uinolonas como +iprofloxacina "
-floxacina, tienen po$re actividad contra los anaero$ios. 0or el contrario, las nuevas %uinolonas como la
Levofloxacina " la =atifloxacina, son activos contra muchas cepas de anaero$ios.
De$ido a %ue los 9minoglicsidos re%uieren oxgeno para su transporte dentro de la clula $acteriana,
ninguno es activo contra los anaero$ios. /etronida&ol, por el contrario es activo contra anaero$ios, pero no
contra los aerotolerantes como 9ctinom"ces " 0ropioni$acterium.
+lindamicina es un anti$itico histricamente utili&ado contra los anaero$ios, pero se ha incrementado la
resistencia particularmente del Aacteroides hasta un E2, " algunos +lostridium, 0eptostreptococcus "
0revotella. Bgualmente, +loranfenicol permanece activo contra la ma"ora de los anaero$ios. /uchos
anaero$ios son resistentes a la (etraciclina, sin em$argo, Doxiciclina " /inociclina muestran $uena
actividad contra una variedad de especies anaer$icas. ,a" %ue tener en cuenta %ue muchas infecciones
anaer$icas son polimicro$ianas " re%uieren el uso de anti$iticos de amplio espectro.
La sensi$ilidad a los anaero$ios es re%uerida ( Documento >++L5 /11 ! cuando la decisin teraputica es
crtica . 4sto inclu"e )
-rganismos con resistencia conocida a los anti$iticos.
0acientes con infeccin persistente %ue re%uiere un adecuado tratamiento con anti$itico
apropiado.
5ituacin en %ue la terapia emprica para una infeccin seria no es clara de$ido a m*ltiples
sitios de infeccin o falta de experiencia clnica con el tipo de infeccin.
La sensi$ilidad a los anaero$ios es recomendada en muestras de )
9$sceso cere$ral
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4ndocarditis
-steomielitis
Bnfeccin en articulacin
Bnfeccin %ue envuelve artefactos o prtesis.
Aacteremia
9islamiento de sitio estril en %ue se ha descartado contaminacin
La recomendacin de la >++L5 so$re los mtodos de anti$iograma para los anaero$ios inclu"en )
a) ;ilucin en agar ) 0ara a%uellos anaero$ios %ue crecen $ien en el medio.
7tili&ar medio de Arucella agar M <itamina I M ,emina M 5angre de carnero.
$! ;ilucin en caldo ) 5olo para Aacteroides.
7tili&ar caldo Arucella M <itamina I M ,emina M 5angre de carnero
7tili&ar colonias directas del plato " preparar una suspensin de 2.E /cKarland e incu$ar a 3E B+ por :C
horas en anaero$iosis.
5i se re%uiere terapia con 0enicilina, hacer prue$a de $etalactamasa . 5i resulta positiva, el organismo es
resistente a 0enicilina " 9mpicilina. 5i resulta negativa, no se garanti&a %ue la cepa es sensi$le a los
$etalact#micos.
Control de calidad del antibiograma >
Bacteroides fragilis 9(++ 2E2CE
Bacteroides thetaiotaomicron 9(++ 2?H:1
%ubacterium lentum 9(++ :32EE
5e recomienda reali&ar prue$as rutinarias de sensi$ilidad a los anti$iticos a a%uellos la$oratorios %ue
reali&an al menos 22 prue$as al mes.
0eferencia 1 Antimicrobial &usceptibility 2esting, Module (', CDC, "343"45335
M$todos automati-ados y semiautomati-ados
(odo procedimiento para la identificacin de anaero$ios, se inicia con la tincin de gram, primero de la
muestra " luego de la colonia, " las caractersticas morfolgicas de la colonia " la relacin de las $acterias
con el oxgeno. >o todos los anaero$ios re%uieren muchas prue$as $io%umicas para su identificacin " la
ma"ora de los la$oratorios no cuentan con la totalidad de prue$as %ue algunos de los microorganismos
re%uieren para su clasificacin. 0ara muchos la$oratorios de mediana capacidad, $asta con la
determinacin de gnero para cumplir con los re%uerimientos $#sicos de anti$ioterapia " control del
paciente. 4l mtodo est#ndar ( P=old standardQ ! para la identificacin de los anaero$ios se $asa en una
serie de prue$as convencionales de car$ohidratos " otras prue$as $io%umicas, $asadas en las
recomendaciones del 6ads7orth Anaerobe -aboratory " el 'irginia Polytechnic (nstitute ( <0B!.
5in em$argo, afortunadamente existen en el mercado muchos la$oratorios %ue ofrecen sistemas
automati&ados " semiautomati&ados con mu" $uena seguridad diagnstica. 4ntre ellos podemos mencionar
al ;apidBD 9>9 BB, Dade /icro5can, , 9(A 32 9, <iteJ 9>B, /icro5can, 0hoenix, 90B 22 9 , 90B 9n.Bdent, etc.
4stos mtodos tienen seguridad diagnstica varia$le " en muchos casos $a'as. (al es el caso del 90B 9n.
Bdent " el ;apBD 9>9 BB %ue tienen seguridad del E? " 2: respectivamente en estudios independientes.
9 continuacin un resumen de algunos mtodos comerciales " su relacin diagnstica )
'itema F Correcto F Correcto
'in tet adicional Con tet adicional
90B 22 9 E:.CE FC.?E
;apBD 9>9 BB CH ?H
<iteJ 9>B H2 C3
90B 32 9 FC.CC ?E.?F
/icro5can H2 C2
;ef. +umitech E 9 . 9merican 5ociet" for /icro$iolog" ( 95/ !.
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H. Kinegold 5./., /artin S.L.) ;iagnotic microbiolog#8 sixth edition, 5t.Louis, +.<. /os$" +ompan",
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Anexos
I;E:-I%IC0CI?: ;E B0CI6+' =R03 7+'I-IK+'
:+ E'7+R+%?R3IC+'
I;E:-I%IC0CI?: ;E B0CI6+' =R03 7+'I-IK+'
www.monografias.com
E'7+R+%?R3IC+'
I;E:-I%IC0CI?: ;E6 =RA7+ B0C-ER+I;E' 'p
www.monografias.com
I;E:-I%IC0CI?: ;E6 =RA7+ %A'+B0C-ERIA3 'p
www.monografias.com
I;E:-I%IC0CI?: ;E C+C+' =R03 7+'I-IK+'
0:0ER?BIC+' E'-RIC-+'
www.monografias.com
9utor)
6ic. Eric Caballero J.
eca$alleVcwpanama.net