Integrones y cassettes genticos de resistencia: estructura y rol frente

a los antibacterianos
Integrons and resistance gene cassettes: structure and role against
antimicrobials

L
os mecanismos de resistencia bacteriana muestran una elevada sofisticacin bioqumica y
gentica, limitando seriamente la utilidad de la terapia antiinfecciosa
1,2
. El hallazgo de
determinantes de resistencia con propiedades similares en organismos y ecosistemas
notoriamente distantes sugiere la ocurrencia de un flujo gentico entre clulas de diferentes
comunidades microbianas
3-5
. En efecto, los genes que confieren resistencia a ciertos
antibiticos, en bacterias filogenticamente no relacionadas, demuestran ser idnticos
6
,
incluso en bacterias Gram positivas y Gram negativas
7,8
. Se han identificado varios elementos
genticos que participan en la transferencia de genes de resistencia, de los cuales los ms
conocidos son los plsmidos autotransferibles o movilizables
5
. Tambin se incluyen los
transposones conjugativos y no conjugativos
9
, el ADN de bacterifagos y, ms
recientemente, los integrones y cassettes genticos de resistencia
10
. La transferencia de
estos elementos entre diferentes bacterias puede ocurrir por conjugacin
11
, transformacin
12

o transduccin
13
, procesos bsicos de transferencia de genes entre bacterias.
En la actualidad, es bien conocido el rol de plsmidos y transposones en la multirresistencia
de las bacterias a los antibiticos y en la diseminacin natural de los determinantes de
resistencia
5
. Sin embargo, slo en los ltimos aos se est estudiando la participacin de los
cassettes genticos de resistencia y de los integrones en el proceso evolutivo de los
plsmidos de resistencia (plsmidos R).
La presente revisin analiza aspectos histricos y estructurales de los integrones y su
implicancia clnica, incluyendo resultados obtenidos por nuestro Grupo de Investigacin en la
Resistencia a Antimicrobianos (GIRA).
ASPECTOS HISTRICOS
El trmino integrn o elemento de integracin fue propuesto por Stokes y Hall en 1989
10
,
aunque la actual definicin fue introducida en 1995 por Hall y Collis
14
: los integrones son una
familia de elementos genticos potencialmente mviles capaces de integrar y expresar genes
de resistencia a los antibiticos. Los estudios iniciales se efectuaron con plsmidos del grupo
de incompatibilidad Inc-W y con transposones relacionados a Tn21
15-17
que posean genes de
resistencia a antibiticos en un mismo sitio, delimitado por secuencias nucleotdicas
altamente conservadas. Varios de estos genes codificaban enzimas modificantes de
aminoglicsidos (EMA)
18
, dihidrofolato reductasas
19
o -lactamasas del tipo OXA
20
. Estudios
con enzimas de restriccin y secuenciacin nucleotdica establecieron que las regiones de
ADN que delimitaban estos genes eran muy similares en diferentes plsmidos y
transposones
19
. A fines de la dcada de los 80 Stokes y Hall
10
demostraron que las
secuencias de ADN que delimitan las regiones con genes de resistencia representan zonas
conservadas, con un extremo 5' conservado (5'CS) de 1,36 kb, y un extremo 3' conservado
(3'CS) de 2 kb. La zona con los determinantes de resistencia presentaba longitud variable y
era dependiente del nmero de genes insertos en dicho sitio.
ESTRUCTURA Y CLASIFICACIN DE LOS INTEGRONES
Los integrones han sido detectados principalmente en bacilos Gram negativos fermentadores,
de las familias Enterobacteriaceae y Vibrionaceae
21-23
, y en algunos no fermentadores, como
Pseudomonas aeruginosa
24
y Acinetobacter baumannii
25
. Adems, se ha descrito un integrn
funcional en bacterias Gram positivas, en una cepa de Corynebacterium glutamicum
26
.
Formando parte de la estructura bsica del integrn (Figura 1) se encuentra el gen intI que
codifica una protena con actividad de recombinasa especfica de sitio (IntI), la integrasa,
que forma parte de una familia de enzimas cuyo prototipo es la integrasa del bacterifago l
27
,
actualmente denominadas tirosina-recombinasas
28
. Adyacente a intI se encuentra el sitio de
recombinacin especfica de sitio, attI, en el que se integra el cassette gentico de
resistencia
29
. Entre intI y attI se encuentran dos promotores divergentes, P
I
para la expresin
de intI y P
C
, para la expresin de los cassettes genticos insertos ro abajo, puesto que la
mayora de stos no tiene promotor
30
. La enzima IntI permite la interaccin entre attI y el
sitio attC o elemento de 59 pb de los cassettes genticos, uniendo ambos sitios y facilitando
la integracin o escisin del cassette de resistencia en la zona variable del integrn (Figura
1).
Hasta la fecha se han descrito varias familias de integrones de acuerdo a la secuencia
nucleotdica del gen intI
31
, al menos tres de ellas estn relacionadas con la expresin de
genes de resistencia. Sus integrasas presentan entre 45% y 58% de homologa, sugiriendo
una divergencia evolutiva por un perodo superior a 50 aos, lo que corresponde,
aproximadamente, a la era antibitica
32
. Los integrones no pueden realizar autotransposicin
pero se asocian frecuentemente a secuencias de insercin o bien, a transposones y
plsmidos conjugativos que les sirven como vehculos para su transmisin inter e intra
especie. Se han encontrado integrones de las clases 1 y 2 en plsmidos y transposones, en
tanto aquellos de clase 3 slo han sido observados en plsmidos
33
. Por ltimo, los integrones
de clase 4 o "superintegrones" se han identificado principalmente en el cromosoma de Vibrio
cholerae
22,34
.
En la mayora de los integrones clase 1 descritos hasta ahora existe un extremo 3' altamente
conservado (3'CS) con los genes qacED1, sul1 y orf5 que codifican resistencia,
respectivamente, a compuestos de amonio cuaternario, a bromuro de etidio, a sulfonamidas y
a una protena con funcin desconocida
32,35-37
. Entre los extremos 5'CS y 3'CS se encuentra
una zona variable con presencia o ausencia de cassettes genticos de resistencia. Las otras
clases de integrones relacionadas con resistencia a antibiticos no poseen extremos 3'
altamente conservados, ya que sus secuencias pueden variar por insercin o delecin de
algunos genes o secuencias de insercin.