Captulo 6: Introduccin a los mtodos espectromtricos

La espectrometra trata las distintas interacciones de la radiacin con la materia. Hace referencia
a la medida de la intensidad de la radiacin mediante un detecto fotoelctrico (o con otro tipo de
dispositivo electrnico). Los mtodos ms utilizados son los relacionados con la radiacin
electromagntica.
La radiacin electromagntica no necesita un medio de apoyo para transmitirse, se propaga
fcilmente a travs del vaco.
El modelo de onda sinusoidal eplica adecuadamente alguna de las propiedades, utilizando
parmetros como la longitud de onda, la frecuencia, velocidad y la amplitud. !ero falla al intentar
eplicar fenmenos asociados con la a"sorcin o emisin de energa radiante. Hay #ue acudir a
un modelo crepuscular en el #ue la radiacin electromagntica se contempla como un $u%o de
partculas discretas o pa#uetes de energa denominados fotones, en los #ue la energa de un
fotn es proporcional a la frecuencia de la radiacin.
!armetros ondulatorios& 'mplitud, perodo, frecuencia, longitud de onda. La frecuencia de un
(az de radiacin est determinada por la fuente y permanece invaria"le. En el vaco, la velocidad
de radiacin es independiente de la longitud de onda y alcanza su valor mimo. En otro medio,
la propagacin disminuye a causa de la interaccin entre el campo electromagntico de la
radiacin y los electrones enlazantes de la materia. La longitud de onda disminuye cuando pasa
del vaco a alg)n otro medio.
*e denominan mtodos pticos no slo a los #ue utilizan la radiacin visi"le sino tam"in
radiaciones ultravioleta e infrarro%a. *e dice #ue se origina una interferencia constructiva mima
cuando la diferencia entre fases es de + grados, ,-+ o alg)n m)ltiplo entero de esta. En cam"io,
(ay interferencia destructiva mima cuando la diferencia es de ./+ grados o ./+ ms un
m)ltiplo entero de ,-+.
Difraccin de la radiacin: proceso por el #ue un (az paralelo de radiacin se curva cuando
pasa por un o"stculo puntiagudo o a travs de una a"ertura estrec(a. La difraccin es una
consecuencia de la interferencia. (Eperiencia de 0oung)
Radiacin coherente: Es necesario #ue la radiacin procedente de las rendi%as sea co(erente
para #ue se produzca un modelo de refraccin como el de 0oung. !ara #ue eista la co(erencia,
las dos fuentes de radiacin de"en tener idntica frecuencia y las relaciones de fase entre los
dos (aces de"en permanecer constantes en el tiempo.
En las fuentes inco(erentes (lmparas de 1olframio u otros 2lamentos), la luz es emitida por
tomos o molculas individuales, y el (az resultante es la suma de innumera"les procesos
individuales. 3n (az proveniente de estas fuentes no es continuo, sino #ue est constituido por
una serie de trenes de ondas
Transmisin de la radiacin: La velocidad de propagacin en cual#uier sustancia es menor a
la de vaco. *e deduce #ue la radiacin interact)a de alguna manera con la materia. 4ado #ue
no se o"serva ning)n cam"io en la frecuencia, no puede implicar una transferencia permanente
de energa. La interaccin implicada en la transmisin puede de"erse a la polarizacin peridica
de las especies atmicas y moleculares, donde la polarizacin es la deformacin transitoria de
las nu"es de electrones asociadas a los tomos o a las molculas por el campo electromagntico
alternante de la radiacin. 5o (ay un cam"io neto de la energa en este proceso, por eso la
frecuencia no vara, pero la velocidad disminuye a causa del tiempo necesario para #ue se
produzca la retencin y la reemisin. Es decir, la transmisin a travs de un medio se puede
considerar como un proceso por etapas en las #ue intervienen tomos, iones o molculas
polarizadas.
Refraccin de la radiacin: el ndice de refraccin de un medio es una medida de su
interaccin con la radiacin. *e o"serva como consecuencia de una diferencia en la velocidad en
los dos medios. 6ara con la longitud de onda. Esta variacin se denomina dispersin refractiva,
#ue presenta la regin normal, en la #ue el ndice aumenta gradualmente con la frecuencia y la
regin anmala, en cuyos intervalos (ay un cam"io "rusco del ndice. ' dic(a frecuencia se
produce una transferencia permanente de energa desde la radiacin a la sustancia y se o"serva
una a"sorcin del (az. La refraccin sigue la ley de *nell.
Refexin de la radiacin: 7uando la radiacin atraviesa una interfase entre medios con
diferente ndice de refraccin siempre se produce una re$ein, y es mayor cuanto mayor sea la
diferencia entre ndices.
Dispersin de la radiacin: una fraccin muy pe#ue8a de la radiacin se transmite en todas
las direcciones a partir de la trayectoria inicial y la intensidad de esta radiacin dispersada
aumenta con el tama8o de la partcula.
7uando la radiacin se a"sor"e o se emite, se produce una transferencia permanente de energa
al medio a"sor"ente o procedente del o"%eto emisor. !ara descri"ir estos fenmenos (ay #ue
tratar a la radiacin como un $u%o de partculas discretas denominadas fotones o cuantos. La
necesidad de este modelo corpuscular fue evidente a raz del descu"rimiento del efecto
fotoelctrico (fundamento similar al detector de fotones).
(6er pag .,9). :"servaciones #ue resultan del
eperimento&
7uando una luz de frecuencia constante se enfoca
so"re el nodo a un "a%o potencial negativo aplicado,
la fotocorriente es directamente proporcional a la
intensidad de la radiacin incidente.
La magnitud del potencial um"ral depende de la
frecuencia de la radiacin irradiada so"re el
fotoctodo
El potencial um"ral depende de la composicin
#umica del recu"rimiento del fotoctodo
El potencial um"ral (potencial en el cual se (ace
cero la fotocorriente) es independiente de la intensidad de la radiacin incidente
Este efecto se de"e eplicar con el modelo cuntico. Es necesario asumir #ue la energa no se
distri"uye uniformemente por todo el frente del (az, sino #ue se concentra en pa#uetes, o (aces
de energa. El n)mero de fotoelectrones li"erados es proporcional a la intensidad del (az
incidente.
Emisin de la radiacin: se origina cuando las partculas ecitadas se rela%an a niveles de
menor energa cediendo su eceso de energa en forma de fotones. *e presentan espectros de
lneas (serie de picos agudos y "ien de2nidos), de "andas (varios grupos de lneas #ue no se
llegan a resolver completamente) y continuos.
Los espectros continuos se o"servan cuando los slidos se calientan (asta la incandescencia. *e
denomina radiacin del cuerpo negro y se produce por innumera"les oscilaciones atmicas y
moleculares ecitadas en el slido condensado por la energa trmica. ' mayor temperatura, los
iones #ue oscilan como resortes tienen mayor energa y la suma de todas las emisiones de todos
los iones del metal da un espectro continuo.
Asorcin de la radiacin: cuando la radiacin atraviesa una capa de un slido, un l#uido, o
un gas, ciertas frecuencias pueden eliminarse selectivamente por a"sorcin, un proceso en el
#ue la energa electromagntica se trans2ere a los tomos, iones o molculas. !rovoca #ue estas
partculas pasen de su estado fundamental, a uno o ms estados ecitados de energa superior.
En general, el tiempo de vida de un tomo o molcula ecitado por a"sorcin es "reve, ya #ue
eisten diversos procesos de rela%acin #ue les permiten regresar al estado fundamental.
Transmitancia: como consecuencia de las interacciones entre fotones y tomos o molculas, la
potencia del (az disminuye. La ;ransmitancia del medio es la fraccin de radiacin incidente
transmitida por el medio. T=P/P0
Asorancia: aumenta cuando la atenuacin se (ace mayor. A=-log T = log P0/P
!e" de #eer: para una radiacin monocromtica, la '"sor"ancia es directamente proporcional
al camino ptico " a travs del medio y la concentracin c de la especie a"sor"ente. A=abc (a:
absortividad)
Captulo $: Componentes de los instrumentos para espectroscopia ptica
Los instrumentos espectroscpicos caractersticos incluyen cinco componentes&
.. 3na fuente esta"le de energa radiante
<. 3n recipiente transparente para contener la muestra
,. 3n dispositivo #ue asle una regin restringida del espectro para la medida
=. 3n detector de radiacin, #ue convierte la energa radiante en una se8al utiliza"le
(elctrica)
9. 3n sistema de procesamiento y lectura de la se8al
%uentes de radiacin: de"e generar un (az, y su potencia de salida de"e ser esta"le durante
perodos de tiempo razona"les. 4e"e ser esta"le, esto se soluciona con dise8os de do"le (az. *e
encuentran dos tipos de fuentes&
7ontinuas& se usan en a"sorcin molecular. Lmpara de deuterio para la regin
ultravioleta. Lmpara de 2lamento de 1olframio para regin visi"le del espectro.
4e lneas& emiten pocas lneas discretas y son utilizadas en a"sorcin atmica. Lmparas
de ctodo (ueco y de descarga sin electrodos.
&electores de lon'itud de onda: !ara la mayora de anlisis espectroscpicos, se necesita
una radiacin constituida por un grupo limitado, estrec(o y continuo de longitudes de onda,
denominado "anda. 3na anc(ura de "anda estrec(a aumenta la sensi"ilidad de las medidas de
a"sor"ancia. >dealmente, la se8al de salida de un selector de longitud de onda correspondera a
una radiacin de una )nica longitud de onda, pero no eiste ning)n selector #ue se aproime al
caso ideal.
?iltros
a) ?iltros de interferencia& operan en la regin ultravioleta, visi"le y "uena parte del
infrarro%o. *e fundamentan en las interferencias pticas para producir "andas estrec(as.
7onsta de un dielctrico, cuyo espesor se controla cuidadosamente y determina la
longitud de onda transmitida. El resultado es #ue se refuerza esta determinada longitud
de onda, mientras #ue la mayora de las otras longitudes, #ue no estn en fase, sufren
una interferencia destructiva.
") ?iltros de a"sorcin& se limitan al espectro visi"le. *on ms "aratos. El tipo ms (a"itual es
un vidrio coloreado o una suspensin de un colorante en gelatina #ue se coloca entre dos
placas de vidrio. *u funcionamiento es inferior al de interferencia.
@onocromadores& se dise8an para realizar "arridos espectrales. Airando el elemento
dispersante, se puede enfocar una u otra "anda en la rendi%a de salida. 7omponentes&
Bendi%a de entrada, #ue proporciona una imagen ptica rectangular
Lente colimadora o un espe%o #ue produce un (az paralelo de radiacin
Un prisma o una red que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales
3n elemento focalizador #ue forma de nuevo la imagen y la enfoca en el plano focal
3n rendi%a de salida #ue asla la "anda espectral deseada
Hay dos clases de elementos dispersantes&
a) Bedes de re$ein& son ms "aratas, proporcionan me%or separacin de longitudes de
onda y dispersan linealmente la radiacin a lo largo del plano focal.
") !rismas& las longitudes de onda ms cortas se dispersan en mayor grado #ue las
largas.
!onocromadores de prisma: La dos con2guraciones ms usadas son (a) de cuarzo, tipo
7ornu, #ue es un prisma de -+C (< de ,+C, uno detrgiro y otro levgiro para #ue el cuarzo
pticamente activo no produzca una polarizacin neta de la radiacin emitida) y (") tipo Littro1,
#ue es un prisma de ,+C con la cara posterior especular.
!onocromadores de red (red de transmisin, red de re$ein). La calidad del monocromador
depende de la pureza de su radiacin de salida, de su capacidad para separar longitudes de
onda adyacentes, de su poder de captacin de la luz y de su anc(ura de "anda.
"ed de escalerilla& proporciona una difraccin muy e2caz. 7ada una de las caras
anc(as se puede considerar como una fuente puntual de radiacin. !ara #ue la
interferencia sea constructiva es necesario #ue los caminos pticos di2eran en un
m)ltiplo entero de la longitud de onda del (az incidente.
"edes cncavas: permite el dise8o de un monocromador sin espe%os o lentes
colimadores y focalizadores auiliares, por#ue la super2cie cncava dispersa y focaliza
la radiacin en la rendi%a de salida. Es ms "arata
"edes #ologr$%cas: se fa"rican so"re super2cies de vidrio. !roducen espectros con
menos radiacin parsita y fantasmas de"ido a su mayor perfeccin en la forma y
dimensiones de las lneas.
!ureza espectral& los efectos de la radiacin no deseada se minimizan introduciendo
pantallas en lugares apropiados del monocromador y recu"riendo las super2cies interiores
con pintura negra mate.
4ispersin& la dispersin angular aumenta a medida #ue la distancia d entre lneas disminuye
o a medida #ue el n)mero de lneas por milmetro aumenta. *i el ngulo es pe#ue8o, la
dispersin lineal de un monocromador de red es constante, lo #ue simpli2ca el dise8o.
!oder de resolucin& indica el lmite de su capacidad para separar imgenes adyacentes #ue
tienen longitudes de onda ligeramente diferentes. 3na me%or resolucin es caracterstica de
redes ms largas, de menor espaciado entre
surcos y de rdenes de difraccin ms
elevados.
!onocromadores de escalera: contienen dos elementos dispersantes en serie, el primero es
un tipo especial de red, denominada red de escalera. El segundo es en general un prisma de
"a%a dispersin o, a veces, una red. 3no de los pro"lemas es #ue a rdenes altos de
difraccin, la dispersin lineal es tan grande #ue para cu"rir un intervalo espectral razona"le
es necesario utilizar muc(os rdenes sucesivos.
Bendi%as del monocromador& los "ordes de las rendi%as de"en ser paralelos y estar en el
mismo plano. La rendi%a de entrada sirve como fuente de radiacin, su imagen se enfoca en
el plano focal #ue contiene la rendi%a de salida. *i las rendi%as son del mismo tama8o, la
imagen ocupar eactamente la a"ertura de salida cuando se a%uste en la longitud de onda
de la radiacin. @oviendo la montura se produce una disminucin continua de la intensidad
emitida, #ue llega a ser cero cuando la imagen de la rendi%a de entrada se desplaz una
distancia igual a su anc(ura.
Recipientes para la muestra: las celdas o cu"etas #ue contienen las muestras se de"en
fa"ricar de un material #ue sea transparente a la radiacin de la regin de inters. !ara regin
ultravioleta& cuarzo o slice fundida (no usar vidrio). !ara regin infrarro%a& cloruro de sodio
cristalino. Begin visi"le& plstico y vidrio silicatados entre ,++ y <+++nm.
Detectores de radiacin: convierten la energa radiante en una se8al elctrica. El detector
ideal de"e tener una elevada sensi"ilidad, una elevada relacin se8alDruido y una respuesta
constante en un intervalo considera"le de longitudes de onda. 4e"e tener un tiempo de
respuesta rpido y una se8al de salida igual a cero en ausencia de iluminacin.
&etectores de fotones& tienen una super2cie activa, #ue es capaz de a"sor"er la radiacin. En
algunos tipos, la energa a"sor"ida causa la emisin de electrones y el desarrollo de una
fotocorriente. En otros, la radiacin promociona electrones a las "andas de conduccin y la
deteccin se "asa en el aumento de la conductividad resultante. *on muy usados para medir las
radiaciones ultravioleta, visi"le e infrarro%a cercana. La se8al elctrica de estos detectores es
consecuencia de una serie de sucesos individuales. *u comportamiento lo limita el ruido de
disparo.
a) ?ototu"os de vaco, en los #ue la radiacin causa la emisin de electrones de una
super2cie slida fotosensi"le. 7onsiste en un ctodo semicilndrico y un nodo de
2lamento encerados (ermticamente en un recipiente transparente a vaco. La super2cie
cncava del electrodo se recu"re de una capa de material fotoemisor #ue al ser irradiado
tiende a emitir electrones. 7uando se aplica un potencial a travs de los electrodos, los
electrones emitidos $uyen (acia el nodo generando una fotocorriente (fcil
ampli2cacin). El n)mero de electrones emitidos es proporcional a la potencia radiante del
(az #ue incide en la super2cie. La fraccin de electrones emitidos aumenta cuando lo
(ace el potencial aplicado. 7uando se alcanza el potencial de saturacin, prcticamente
todos los electrones son recogidos en el nodo. La corriente llega a ser independiente del
potencial y directamente proporcional a la potencia radiante.
") ;u"os fotomultiplicadores, contienen una super2cie fotoemisora, as como varias
super2cies adicionales #ue emiten una cascada de electrones cuando son alcanzadas por
los electrones procedentes de rea fotosensi"le. 5o slo mide la se8al, tam"in la
ampli2ca. Los dnodos (electrodos adicionales) (acen #ue los electrones se aceleren (acia
ellos y al incidir, cada fotoelectrn origina la emisin de varios electrones adicionales #ue
son acelerados por el segundo dnodo, etc. ;ienen tiempos de respuesta etremadamente
rpidos. *u sensi"ilidad viene limitada por la emisin de corriente oscura. !uede
me%orarse enfrindolo. *e limitan a medir radiacin de "a%a potencia, de"ido a #ue la luz
intensa causa un da8o irreversi"le en la super2cie fotoelctrica.
c) 4etectores de fotoconductividad, en los #ue la a"sorcin de la radiacin por un
semiconductor produce electrones y (uecos, dando lugar as a un aumento de la
conductividad.
&etectores de fotones multicanal: constan de una serie de pe#ue8os elementos fotoelctricosE
sensi"les dispuestos en una estructura lineal o "idimensional en un )nico c(ip semiconductor. El
c(ip contiene los circuitos electrnicos #ue (acen posi"les determinar la se8al de salida elctrica
de cada elemento fotosensi"le secuencialmente o simultneamente.
?otodiodos en serie& son detectores unidimensionales en los #ue los elementos
fotosensi"les estn dispuestos en una lnea en la cara del transductor. Estos elementos son
pe#ue8os fotodiodos de silicio, con una unin pn polarizada inversamente. La luz incide so"re
estos elementos crea cargas en am"as regiones. Las cargas positivas se recogen y almacenan
en las "arras tipo p para su siguiente integracin. El circuito tam"in dispone de un condensador
de almacenamiento y de un circuito para realizar un "arrido secuencial de los circuitos
individuales de diodoEcondensador. La anc(ura de la rendi%a del espectrmetro se suele a%ustar
de forma #ue la imagen ocupe eactamente el rea super2cial de uno de os diodos #ue
componen la serie. 's, la informacin es e#uivalente a la registrada durante un "arrido con un
espectrmetro tradicional.
(rocesadores de se)al " dispositi*os de lectura: El procesador de se8al es un dispositivo
electrnico #ue ampli2ca la se8al elctrica del detector.
Becuento de fotones& la se8al de salida de un tu"o fotomultiplicador provoca un impulso de
electrones por cada fotn #ue alcanza la super2cie del detector. En general esta se8al analgica
se 2ltra para eliminar las $uctuaciones indesea"les. *in em"argo, si la intensidad de la radiacin
es demasiado "a%a para proporcionar una relacin se8alDruido satisfactoria, conviene convertir la
se8al analgica en un tren de impulsos digitales #ue se pueden contar. En este caso, la potencia
radiante es proporcional al n)mero de impulsos por cantidad de tiempo ms #ue a la corriente o
potencial promedio. Este tipo de medida se denomina recuento de fotones. !resenta una serie de
venta%as respecto al tratamiento analgico de la se8al, tales como me%ora de la precisin para un
tiempo dado de medida, y me%or sensi"ilidad a las $uctuaciones de tensin y temperatura del
tu"o fotomultiplicador. *in em"argo, la instrumentacin necesaria es ms comple%a y cara. *e
elige para la deteccin en $uorescencia.
Tipos de instrumentos pticos:
'spectroscopio& para la identi2cacin visual de lneas de emisin atmicas. 7onsta de un
monocromador, en #ue el #ue la rendi%a de salida se reemplaza por un ocular #ue puede
moverse a lo largo del plano focal.
(olor)metro& para medidas de a"sorcin, en el #ue el o%o (umano es el detector utilizando
uno o ms patrones de comparacin de color.
*otmetro& consta de una fuente, un 2ltro y un detector fotoelctrico, adems de un
procesador de se8ales y un sistema de lectura.
'spectrgrafo& construccin similar a los @onocromadores de prisma y de red, pero se
reemplaza la disposicin de la rendi%a por una gran a"ertura #ue alo%a el detector o
transductor.
'spectrmetro& proporciona informacin so"re la intensidad de la radiacin en funcin de
la longitud de onda o de la frecuencia. ;am"in se denominan policromadores
'spectrofotmetro& es un espectrmetro e#uipado con una o ms rendi%as de salida y
detectores fotoelctricos #ue permiten la determinacin de la relacin entre la potencia de
dos (aces en funcin de la longitud de onda.
;odos utilizan 2ltros o @onocromadores para aislar una regin del espectro para la medida. !or el
contrario, un instrumento multiple+ o"tiene informacin espectral sin dispersar o 2ltrar primero
la radiacin. *on dispositivos monocanal en los #ue todos los componentes de la respuesta
analtica se recogen simultneamente.
Captulo +,: Introduccin a la espectrometra de asorcin molecular
ultra*ioleta-*isile
Longitudes de onda comprendidas entre .-+ y F/+ nm. *e "asa en la medida de la ;ransmitancia
; o de la a"sor"ancia ' de disoluciones #ue se encuentran en cu"etas transparentes #ue tienen
un camino ptico de " cm. La concentracin c de un analito a"sor"ente est relacionada
linealmente con la a"sor"ancia. A=-log T = log P0/P
La potencia del (az transmitido por la disolucin del analito se compara, generalmente, con la
potencia del (az transmitido por una cu"eta idntica #ue slo contiene disolvente.
!e" de #eer .p/,012:
;am"in se puede aplicar a un medio #ue contenga ms de una clase de sustancias a"sor"entes.
*iempre #ue no (aya interaccin entre las distintas especies, la a"sor"ancia total viene dada
por&
Limitaciones& se encontraron desviaciones de la proporcionalidad entre ' y c cuando " es
constante. !ueden estar relacionadas con el fundamento de la ley. :tras veces surgen como
consecuencia de la forma en #ue se realizan las medidas de a"sor"ancia (desviaciones #umicas)
o como resultado de cam"ios #umicos asociados con cam"ios de concentracin (desviaciones
#umicas).
,imitaciones propias: Esta ley descri"e de forma correcta el comportamiento de a"sorcin de un
medio #ue contiene concentraciones "a%as de analito. ' concentraciones altas (G+.+.@), la
distancia entre las molculas disminuye (asta el punto en #ue cada molcula altera la
distri"ucin de carga de molculas vecinas. Esto puede alterar la capacidad de las molculas
para a"sor"er la radiacin. La aparicin de este fenmeno da lugar a desviaciones de la
linealidad entre ' y c. *imilarmente, en medios #ue contienen concentraciones de a"sor"ente
"a%as pero concentraciones altas de otras especies (electrolitos), la estrec(a proimidad de iones
al a"sor"ente altera la a"sortividad molar de ste por interacciones electroestticasH el efecto se
reduce mediante dilucin.
;am"in surgen desviaciones como consecuencia de la dependencia de I con el ndice de
refraccin del medio. *i los cam"ios de concentracin causan alteraciones en el ndice de
refraccin se o"servarn desviaciones. *e puede corregir pero en general no es signi2cativa para
cJ+.+.@
&esviaciones qu)micas& cuando un analito se disocia, asocia o reacciona con un disolvente para
dar lugar a un producto con un espectro de a"sorcin diferente al del analito. !or e%emplo,
disoluciones acuosas de los indicadores cidoD"ase.
&esviaciones instrumentales originadas por la radiacin policrom$tica& el cumplimiento estricto
de la ley de Keer slo se o"serva cuando la radiacin es realmente monocromtica. En la
prctica es raro el uso de radiacin restringida a una sola longitud de onda. 7uando las
a"sortividades a las distintas longitudes de onda de un (az policromtico son iguales, se cumple
la ley de Keer. 7uando estas di2eren entre s de%a de ser lineal y cuanto mayor es la diferencia,
mayor es la desviacin. Estas desviaciones no son aprecia"les si la radiacin utilizada no a"arca
una regin del espectro en la #ue el a"sor"ente muestre cam"ios grandes en la a"sorcin en
funcin de la longitud de onda. ;ampoco es signi2cativa esta desviacin si las medidas en el
mimo de los picos estrec(os son con una anc(ura de "anda efectiva menor de .D.+ de la
mitad de la anc(ura del pico en la semialtura.
Efecto de la anchura de la rendi3a en las medidas de asorancia& para conseguir
espectros comple%os "ien resueltos se re#uieren anc(uras de rendi%a estrec(as. 7on anc(ura de
"anda efectiva amplia, la prdida de los detalles es clara y para estudios cualitativos es de gran
importancia. La medida cuantitativa de las "andas de a"sorcin estrec(as re#uieren el uso de
anc(uras de rendi%a estrec(a o a%ustes de anc(ura de rendi%a muy reproduci"les. !ero, una
disminucin en la anc(ura de rendi%a va acompa8ada con una reduccin eponencial de segundo
orden en la energa radianteH cuando se usan a%ustes muy estrec(os pueden perderse detalles
espectrales como consecuencia de un aumento en la relacin se8alDruido. Esto se (ace
importante cuando la se8al de salida de la fuente es "a%a o el detector tienen una "a%a
sensi"ilidad. En estos casos el ruido puede originar una prdida parcial o total de la estructura
2nal del espectro. Es aconse%a"le no estrec(ar la rendi%a ms de lo necesario para el espectro. El
a%uste se (ace (asta #ue se logran alturas de pico constante. Aeneralmente esto se da cuando la
ac(ira de "anda efectiva del instrumento es +.. o inferior a la anc(ura de "anda efectiva del pico
de a"sorcin.
I4&TR56E4TACI74
%uentes: 7ontinuas, cuya potencia no cam"ie "ruscamente en un intervalo considera"le de
longitudes de onda.
,$mparas de deuterio e #idrgeno& la ecitacin de estos elementos produce a "a%a
presin, un espectro continuo en la regin ultravioleta (entre .-+ y ,F9 nm). ' longitudes de
onda ms largas producen una emisin #ue se superponen so"re el espectro continuo. El
mecanismo re#uiere la formacin inicial de una especie molecular ecitada seguida de la
disociacin de sta para dar dos especies atmicas ms un fotn ultravioleta. Las lmparas
modernas contienen deuterio y son de "a%o volta%e, en ellas se forma un arco entre un 2lamento
caliente recu"ierto de ido y un electrodo metlico. El 2lamento caliente suministra electrones
para mantener una corriente continua cuando se aplica un potencial de =+ 6 apro, para
intensidades constantes es necesario una fuente de alimentacin esta"ilizada. La forma de la
apertura entre los dos electrodos reduce la descarga a una trayectoria estrec(a, producindose
una esfera de radiacin intensa (. a ..9 mm de dimetro). La del deuterio es mayor. 4e"en
presentar ventanas de cuarzo ya #ue el vidrio a"sor"e fuertemente a LG,9+nm.
,$mparas de %lamento de -olframio& para radiacin visi"le del infrarro%o cercano. La
distri"ucin de energa se aproima a la del cuerpo negro, y por ello depende de la temperatura.
Es )til para L entre ,9+ y <9++ nm. !ara conseguir una fuente de radiacin esta"le se re#uiere
un control minucioso del potencial. Es necesario el uso de cuarzo por la alta ; de tra"a%o
(,9++M). Las lmparas de 1olframioD(algeno contienen una pe#ue8a cantidad de yodo, lo #ue
le da una vida )til del do"le #ue una lmpara normal, de"ido a la reaccin entre am"os. Estas
son "astantes ms e2cientes y etienden el intervalo de se8al de salida (asta "ien entrada la
regin ultravioleta.
,$mparas de arco de +enn: El espectro continuo es en un intervalo de L entre <++ y .+++
nm, con el mimo de intensidad a 9++nm. En algunos instrumentos la lmpara funciona de
forma intermitente mediante descargas regulares #ue proceden de un condensador. *e o"tienen
altas intensidades.
Becipientes para la muestra& se de"en construir de un material #ue de%e pasar la radiacin de la
regin espectral de inters. Las me%ores cu"etas tienen ventanas perfectamente
perpendiculares a la direccin del (az para minimizar las prdidas por re$ein. *e de"e
reproducir la posicin de a cu"eta con respecto al (az, de lo contrario, las variaciones en el
camino ptico y en las prdidas por re$ein en las super2cies curvas pueden causar errores
signi2cativos. Es indispensa"le la limpieza, las ventanas no de"en tocarse. Las cu"etas de"eran
cali"rarse regularmente entre s con una disolucin a"sor"ente.
!ara la regin ultravioleta (LJ,9+nm) se re#uiere cuarzo o slice fundida. Los vidrios silicatados
pueden emplearse en la regin entre ,9+ y <+++nm. En la regin visi"le se pueden utilizar
recipientes de plstico.
Tipos de instrumentos
.. Haz sencillo& normalmente necesitan una fuente de alimentacin esta"ilizada para evitar
errores como resultado de los cam"ios en la intensidad del (az durante el tiempo
re#uerido para a%ustar el .++N de ; y determinar el N de ; del analito. Hay grandes
diferencias en cuanto a su comple%idad y caractersticas de funcionamiento. El ms
sencillo tiene una "om"illa de 1olframio, 2ltros de vidrio, tu"os de ensayo, clula
fotovoltaica y un pe#ue8o microampermetro. Los ms so2sticados tienen lmparas de
1olframioDdeuterio intercam"ia"les, cu"etas de slice, monocromador de red de alta
resolucin con rendi%a varia"le fotomultiplicadores. ;ienen mayor rendimiento energtico,
"uena relacin se8alDruido y compartimientos de muestra menos llenos.
<. 4o"le (az espacial& un (az pasa a travs de la disolucin de referencia y contin)a (asta
un fotodetector, simultneamente el segundo atraviesa la muestra (asta un segundo
detector contrastado. Las dos se8ales de salida se ampli2can y su cociente se visualiza en
un dispositivo de lectura. La medida manual se (ace en dos etapas, primero se a%usta el
cero mediante un o"turador y luego este se a"re y se lee directamente la ; o '.
,. 4o"le (az temporal& los (aces se separan en el tiempo mediante un espe%o en sectores
rotatorio #ue dirige todo el (az primero a travs de la cu"eta de referencia y luego a
travs de la cu"eta de la muestra. Los impulsos de radiacin se recom"inan mediante otro
espe%o #ue transmite un impulso y re$e%a el otro (acia el detector. La ; o ' se lee
directamente en el indicador de escala unido a la cu8a.
Los instrumentos de do"le (az ofrecen la venta%a de compensar las $uctuaciones #ue
salen de la fuente y las derivadas del detector y ampli2cador. ;am"in compensan las
grandes variaciones en la intensidad de la fuente con la longitud de onda. !ermiten el
registro continuo de espectros.
=. @ulticanales& en el mercado en los /+ apareci un espectrofotmetro de (az sencillo con
un detector de diodos en serie. La radiacin de la lmpara se enfoca so"re el recipiente de
la muestra o del disolvente pasando despus por un monocromador de red 2%a. La
radiacin dispersada incide en el detector de fotodiodos (en c(ip de silicio). 3n registrador
de cam"io controlado por un ordenador cierra secuencialmente cada interruptor en forma
momentnea, lo #ue (ace #ue cada condensador se cargue a E96. la radiacin #ue incide
so"re la super2cie de alg)n diodo da lugar a una descarga parcial de su condensador. La
corriente resultante, #ue es proporcional a la potencia de la radiacin, se ampli2ca,
digitaliza y almacena. El ciclo completo se realiza en unos pocos milisegundos. Es una
(erramienta poderosa para estudios de productos intermedios en reacciones
moderadamente rpidas, para estudios cinticos y para determinaciones cuantitativas y
cualitativas de los componentes #ue eluyen de una columna de cromatografa l#uida. El
inconveniente es su resolucin, algo limitada (. a <nm) y su alto precio.
%otmetros: los ms convenientes, ro"ustos y fciles de mantener y utilizar son los fotmetros
de 2ltros. ;ienen elevado rendimiento energtico, "uena relacin se8alDruido, incluso con
detectores y circuitos relativamente sencillos y "aratos. *e suministran con varios 2ltros. El color
de la luz a"sor"ida es el complementario del color de la propia disolucin.
Espectrofotmetros
.. !ara la regin visi"le (,/+ a /++nm)& son generalmente de un solo (az, "aratos, ro"ustos
y fciles de transportar. 'plicacin ms es para el anlisis cuantitativo, aun#ue algunos
proporcionan "uenos espectros de a"sorcin. *pectronic <+, satisfactorias caractersticas
de funcionamiento.
<. 4e (az sencillo para la regin ultravioletaDvisi"le& los ofrecen sin registrador para estas
regiones. Estn e#uipados con lmparas de 1olframio y de (idrgeno o deuterio
intercam"ia"les, tu"os fotomultiplicadores y redes. 'lgunos tienen dispositivos de salida
digitales, otros usan medidores de gran tama8o. 3no usa red cncava, resultando un
dise8o ms sencillo y compacto.
,. 4e (az sencillo computarizados& se realiza primero un "arrido de longitudes de onda con
la disolucin de referencia. La se8al de salida del detector se digitaliza y se almacena en
la memoria. 4espus se realiza el "arrido con la muestra y se calcula la ' con la ayuda de
los datos de la disolucin de referencia almacenados. EL registro de las se8ales de salida
para la solucin de referencia y muestra sucesivamente no fue satisfactorio de"ido a la
deriva o ruido de parpadeo en las fuentes y detectores.
=. 4e do"le (az& son ms caros.
9. 4e do"le dispersin& se dise8aron para me%orar la resolucin espectral y conseguir una
marcada reduccin de la radiacin parsita. !oseen dos redes o prismas colocados en
serie con una rendi%a entre ellos.
-. 4e diodos en serie& se puede o"tener un "arrido electrnico en lugar de mecnico, todos
los datos necesarios para de2nir un espectro se pueden recoger simultneamente. Los
espectros se o"tienen a gran velocidad y es aplica"le a las determinaciones simultneas
de multicomponentes. 3no particular, de"ido a sus pocos componentes pticos el total de
la radiacin es muc(o mayor #ue la de los espectrofotmetros tradicionales. !osee una
red de re$ein (ologr2ca. El detector es una serie de diodos. *e consigue una resolucin
de <nm. 7omo no contiene partes en movimiento, la reproduci"ilidad en la longitud de
onda de un "arrido a otro es ecelentemente alta y la se8al promedio puede usarse para
lograr un considera"le incremento en la relacin se8alDruido. 7on tiempos de eposicin
tan cortos se minimiza la fotodescomposicin de la muestra, a pesar de situarla entre la
fuente y el monocromador. La esta"ilidad de la fuente y el sistema electrnico es tal #ue
slo es necesario o"servar y almacenar la se8al cada 9 o .+ minutos.
Captulo +1: Aplicaciones de la espectrometra de asorcin molecular
ultra*ioleta-*isile
Estas medidas tienen gran aplicacin en la identi2cacin y determinacin de una enorme
cantidad de especies inorgnicas y orgnicas. Es vlida para identi2car grupos funcionales en
una molcula ya #ue como resultado de la ecitacin de los electrones de enlace, los picos se
pueden correlacionar con los tipos de enlaces de las especies o"%eto de estudio. Estos mtodos
son los ms utilizados de entre todas las tcnicas de anlisis cuantitativo. *on las aplicaciones
ms importantes para la determinacin cuantitativa de compuestos #ue contienen grupos
a"sor"entes.
Las a"sortividades molares van desde cero (asta un mimo del orden de .+
9
. Los picos #ue
tienen a"sortividades molares menor de .+
,
se clasi2can de "a%a intensidad. *on el resultado de
las llamadas transiciones pro(i"idas, #ue tienen una pro"a"ilidad de suceder menor de +.+..
!ara las transiciones permitidas, #ue dan lugar a "andas intensas, los valores de ! estn
comprendidos entre +.. y ..
Aplicacin al an8lisis cualitati*o:
@odalidades de registro gr2co de datos espectrales& lo ms (a"itual es representar en
ordenadas el porcenta%e de ;, ', log ' o I. En a"scisas, la longitud de onda o el n)mero de onda,
o a veces, la frecuencia. 7omparando, se o"serva #ue en el registro de ', las diferencias entre
alturas de los picos en funcin de la concentracin son mayores #ue en el registro de ;. Estas
diferencias son mayores a altas ;. El registro de log ' conduce a una prdida de detalle, pero es
conveniente para comparar espectros de disoluciones de distintas concentraciones ya #ue las
curvas se desplazan la misma magnitud a lo largo del e%e vertical para m)ltiplos iguales de
concentracin.
4isolventes& para elegirlo (ay #ue tener en cuenta su transparencia y sus posi"les efectos so"re
el sistema a"sor"ente. Es imprescindi"le utilizar el mismo solvente cuando se comparan
espectros de a"sorcin con 2nes de identi2cacin. Los solventes polares tienden a "orrar la
estructura de capa 2na del espectro. 7uando se utilizan solventes no polares como los
(idrocar"uros es ms pro"a"le tener espectros parecidos a los originados en fase gaseosa. Las
posiciones de los mimos son afectadas por la naturaleza del disolvente. Hay un mnimo en la
longitud de onda, por de"a%o del cual el disolvente no se puede utilizar, #ue depende de la
pureza del mismo. Los disolventes (a"ituales para ultravioleta son agua, etanol O9N,
ciclo(eano. !ara la regin visi"le, cual#uier disolvente incoloro.
Aplicacin al an8lisis cuantitati*o:
Las caractersticas importantes son&
Aran aplica"ilidad tanto para sistemas orgnicos como inorgnicos.
*ensi"ilidades caractersticas de .+
E=
a .+
E9
@
*electividad de moderada a alta
Kuena precisin (normalmente incertidum"res relativas del . al ,N)
'd#uisicin de datos fcil y adecuada.
En el campo de sanidad, el O9N de las determinaciones se llevan por este mtodo.
'plicaciones a especies a"sor"entes& varios compuestos orgnicos, numerosas especies
inorgnicas, diversos metales de transicin. :tras especies #ue presentan a"sorcin
caracterstica son los iones de nitrito, nitrato y cromato, yodo molecular y ozono.
'plicaciones a especies no a"sor"entes& numerosos reactivos reaccionan selectivamente con
especies no a"sor"entes y generan productos #ue a"sor"en fuertemente en estas regiones. El
ito de esta aplicacin re#uiere #ue la reaccin formadora de color sea completa. 3n gran
n)mero de agentes comple%antes se aplican para la determinacin de especies inorgnicas. Los
agentes #uelantes orgnicos forman comple%os esta"les con cationes.
4etalles del procedimiento& las primeras etapas incluyen el esta"lecimiento de las condiciones
de tra"a%o y la preparacin de una curva de cali"rado #ue relacione la a"sor"ancia con la
concentracin.
.eleccin de longitud de onda: se realizan normalmente a una longitud de onda
correspondiente a un pico de a"sorcin, o"tenindose una mima sensi"ilidad (mnima
incertidum"re). 'dems la curva de cali"racin es plana en esta reginH "a%o estas circunstancias
se puede esperar una "uena o"servancia de la ley de Keer ya #ue en esta zona los valores de I
varan muy poco y se comporta como luz monocromtica.
/ariables que in0u1en en la absorbancia: naturaleza del solvente, pH de la disolucin,
temperatura, concentraciones de electrlito y la presencia de sustancias interferentes. *e de"en
conocer los efectos de estas sustancias y elegirse las condiciones ptimas.
,impie2a 1 manipulacin de las cubetas: de"en usarse cu"etas contrastadas de "uena
calidad. *e de"en cali"rar con regularidad. Es importante el uso de tcnicas de limpieza y
secado.
&eterminacin de la relacin entre absorbancia 1 concentracin: se prepara la curva de
cali"rado a partir de una serie de disoluciones patrn #ue a"ar#uen el intervalo de concentracin
esperado en las muestras. 5o es seguro asumir el cumplimiento de la ley de Keer y utilizar slo
un )nico patrn para determinar la a"sortividad molar. Lo ideal es #ue los patrones de
cali"racin tengan una composicin parecida a la de las muestras a analizar, no slo en cuanto a
concentracin del analito, sino a otras especies presenten en la matriz para minimizar efectos de
los distintos componentes en la a"sor"ancia de la muestra medida.
!3todo de adicin est$ndar: cuando resulta difcil o imposi"le la preparacin de patrones
similares a la muestra. *upone la adicin de uno o ms vol)menes iguales de disolucin
estndar a alcuotas de la muestra del mismo tama8o. 7ada disolucin se diluye (asta un
volumen 2%o antes de medir su a"sor"ancia.
An$lisis de me2clas de sustancias absorbentes: la a"sor"ancia total es igual a la suma de
las a"sor"ancias #ue presentan los componentes individuales. Estas relaciones son vlidas slo
si se cumple la ley de Keer y si los dos componentes se comportan de manera independiente el
uno del otro. La mayor eactitud se alcanza cuando se seleccionan longitudes de onda en #ue las
diferencias entre las a"sortividades molares sean grandes. La incertidum"re se (ace mayor
cuando el n)mero de las medidas aumenta (mayor cantidad de compuestos a"sor"entes en la
muestra). *e necesitan los espectros de las disoluciones patrn de cada uno de los
componentes.
Captulo 9: Introduccin a la espectrometra ptica atmica
En la espectrometra ptica los elementos presentes en una muestra se convierten en tomos o
iones elementales en estado gaseoso por medio de un proceso denominado atomizacin.
Espectros de asorcin atmica& a temperatura am"iente, esencialmente todos los tomos
de una muestra de materia se encuentran en el estado fundamental. La ecitacin de un
electrn eterno a or"itales superiores puede lograrse por el calor de una llama, un plasma o una
c(ispa o arco elctrico. El tiempo de vida de un tomo ecitado es "reve y su regreso al estado
fundamental va acompa8ado de la emisin de un fotn.
Espectros de asorcin atmica& en un medio gaseoso a elevada temperatura, los tomos
son capaces de a"sor"er radiacin a longitudes de onda determinadas. 7onsta principalmente
de lneas de resonancia #ue son el resultado de transiciones desde el estado fundamental a
niveles superiores.
La anchura de las lneas atmicas es de considera"le importancia. Las lneas estrec(as son
muy convenientes dado #ue as se reduce la posi"ilidad de interferencias de"idas al
solapamiento de espectros. Es muy importante para el dise8o de instrumentos. La anc(ura de
lnea efectiva se de2ne como la anc(ura en unidades de longitud de onda, medida a la mitad de
la se8al mima. El ensanc(amiento de la lnea se de"e a = causas&
.E 'fecto de incertidumbre& las lneas tienen anc(ura 2nita por#ue los tiempos de vida de los
estados de transicin son 2nitos, lo #ue conlleva a incertidum"res en los tiempos de
transicin y a un ensanc(amiento de lnea como consecuencia del principio de
incertidum"re. *i los tiempos de vida de los dos estados se aproiman a in2nito, entonces
la anc(ura de lnea de esta transicin se aproimara a cero. *e denominan en ocasiones
anc(uras naturales de lnea y son del orden de .+
E=
'.
<E 'fecto &oppler& la longitud de onda de la radiacin emitida o a"sor"ida por un tomo #ue
se mueve rpidamente disminuye si el movimiento es (acia el detector y aumenta si el
tomo se ale%a del mismo. La magnitud del desplazamiento 4oppler aumenta con la
velocidad a la #ue las especies a"sor"entes o emisoras se aproiman o se ale%an del
detector. El mimo desplazamiento lo tienen a#uellos tomos #ue se mueven a
velocidades altas y en lnea recta acercndose o ale%ndose del detector. Los tomos #ue
no se mueven perpendicularmente al detector no eperimentan ning)n desplazamiento.
En las llamas, origina lneas cuya anc(ura es dos rdenes de magnitud mayor #ue las
anc(uras naturales de lneas.
,E 'fectos de presin debidos a colisiones entre $tomos del mismo tipo 1 con $tomos
e+tra4os . Estas colisiones provocan pe#ue8os cam"ios en los niveles de energa y se
origina una dispersin de las longitudes de onda (se desplazan, se desdo"lan las "andas).
En la llama, las colisiones se dan en gran parte entre los tomos del analito y los
productos de la com"ustin del gas com"usti"le, produciendo un ensanc(amiento de < o ,
veces mayor #ue la anc(ura natural de lnea. En las lmparas de ctodo (ueco y descarga
sin electrodos el ensanc(amiento es producto de las colisiones entre los tomos #ue
emiten y otros del mismo tipo.
=E 'fectos del campo magn3tico 1 el3ctrico .
Efecto de la temperatura en los espectros atmicos& la temperatura e%erce un gran efecto
so"re la rela%acin entre el n)mero de partculas atmicas ecitadas y no ecitadas en un
atomizador. !or lo general, un incremento de la temperatura aumenta la e2cacia del proceso de
atomizacin (y el n)mero de tomos en el vapor). 'dems se produce un ensanc(amiento de la
lnea con la consiguiente disminucin de la altura de pico, de"ido a #ue las partculas atmicas
se desplazan a mayor velocidad, lo #ue aumenta el efecto 4oppler. Las variaciones de ; afectan
al grado de ionizacin del analito y por tanto, la concentracin de analito no ionizado en #ue se
"asa el anlisis.
Espectros de andas " continuos asociados a los espectros atmicos& en la
determinacin de elementos por espectrometra de a"sorcin atmica se encuentran
frecuentemente espectros de "andas. *in em"argo, la presencia de radiacin continua (resultado
de la radiacin trmica de la materia en forma de partculas calientes en el medio de
atomizacin) y de "andas moleculares representa una fuente potencial de interferencias, #ue
de"en controlarse por medio de una adecuada eleccin de la longitud de onda, por la correccin
de la se8al de fondo o por un cam"io en las condiciones de atomizacin.
6todos de atomi:acin& los componentes de la muestra de"en convertirse en tomos o
tomos ionizados en estado gaseoso. El proceso por el cual la muestra se convierte en un vapor
se denomina atomizacin. La precisin y eactitud de estos mtodos dependen de forma crtica
de las etapas de atomizacin y del mtodo de introduccin de la muestra en la zona de
atomizacin.
6todos de introduccin de la muestra& es la etapa limitante de la eactitud, precisin y
lmites de deteccin de las medidas espectromtricas atmicas. *u o"%etivo es transferir una
parte reproduci"le y representativa de la muestra a un atomizador con elevada e2cacia y sin
efector interferentes. 6er ta"la /E. y /E<
>ntroduccin de muestras en disolucin& se introducen normalmente por ne"ulizacin, en la #ue
la muestra se convierte en una nie"la de pe#ue8as gotitas 2namente dividida (aerosol) por
medio de un c(orro de gas comprimido. El $u%o de gas conduce a la muestra a la zona en #ue
tiene lugar la atomizacin. :tro mtodo es por vaporizacin electrotrmica.
5e"ulizadores neumticos& el ms com)n es el de tubo conc3ntrico, en el #ue la muestra
l#uida es aspirada a travs de un capital por una corriente de gas a elevada presin #ue
$uye alrededor del etremo del capilar (efecto 6enturi). El gas a elevada velocidad rompe
el l#uido en 2nas gotitas de distinto tama8o, #ue son conducidas al atomizador. :tro es
de 0u5o cru2ado en el #ue el gas a elevada presin cruza perpendicularmente al etremo
del capilar. En el de disco fritado, la disolucin se "om"ea so"re una super2cie de vidrio
fritado a travs de la cual $uye el gas portador, produciendo un aerosol muc(o ms 2no.
En el de 6abington, #ue consiste en una esfera (ueca en la #ue el gas se "om"ardea a
travs de un pe#ue8o ori2cio en la super2cie, el l#uido, #ue cae formando una delgada
pelcula so"re la super2cie de la esfera, se ne"uliza al epandirse el c(orro de gas. Est
menos epuesto a sufrir o"strucciones, y por ello, es de mayor utilidad en muestras con
un contenido salino elevado o de suspensiones con un contenido de partculas alto.
5e"ulizadores ultrasnicos& la muestra se "om"ardea so"re la super2cie de un cristal
piezoelctrico #ue vi"ra a una frecuencia de <+ PHz a varios @Hz. !roducen aerosoles ms
densos y ms (omogneos #ue los neumticos.
6aporizadores electrotrmicos& es un evaporador situado en una cmara cerrada a travs
de la cual un gas inerte ('r) transporta la muestra vaporizada al atomizador. 3na muestra
l#uida o slida se sit)a so"re un conductor. 3na corriente elctrica evapora la muestra
rpida y completamente mezclndose con el argn. !roduce una se8al discreta en vez de
continua. La se8al aumenta (asta un mimo y despus disminuye (asta cero a medida
#ue sale del atomizador.
;cnicas de generacin de (idruros& para la introduccin de muestras #ue contienen
arsnico, antimonio, esta8o, selenio, "ismuto y plomo. @e%ora de los lmites de deteccin
de estos elementos de .+ a .++ veces. 7omo muc(os son ticos de"e ser posi"le la
determinacin a concentraciones "a%as y su eliminacin de"e ser e2caz y segura.
>ntroduccin de muestras slidas& La introduccin de slidos en forma de polvo, metal o
partculas en atomizadores de plasma o llama tienen la venta%a de evitar la etapa de
descomposicin y disolucin de la muestra. La mayora de estas tcnicas producen se8ales
discretas en vez de continuas.
>nsercin manual directa de la muestra& pueden reducirse a polvo y situarse so"re o
dentro de una zonda #ue se inserta dentro del atomizador.
6aporizadores electrotrmicos& el calentamiento se produce por calentamiento conductivo
de la muestra mantenida so"re o dentro de una "arra o navecilla de gra2to o tntalo. 3n
gas inerte transporta la muestra vaporizada al interior del atomizador.
'"lacin por arco y c(ispa& se lleva a ca"o una descarga elctrica, cuya interaccin con la
super2cie de la muestra slida crea una nu"e formada por la muestra en forma de
partculas y vaporizada, #ue es transportada al atomizador por medio de un gas inerte.
Este mtodo de introduccin se denomina a"lacin. La muestra de"e ser conductora de la
electricidad o de"e mezclarse con un conductor. 4ependiendo de la naturaleza de la
muestra, la se8al puede ser discreta o continua.
'"lacin por lser& mismo funcionamiento. Es una tcnica verstil ya #ue es aplica"le a
slidos conductores y no conductores, muestras orgnicas e inorgnicas, materiales
pulverulentos o metlicos. !ermite el anlisis de pe#ue8as reas de la super2cie de los
slidos.
;cnica de la descarga luminiscente& permite introducir y atomizar la muestra
simultneamente. ;iene lugar en una atmsfera de argn a "a%a presin entre un par de
electrodos con un potencial. El potencial aplicado causa la descomposicin del argn en
iones positivos y electrones. El campo elctrico acelera los iones argn (acia la super2cie
del ctodo #ue contiene la muestra. *e produce la epulsin de tomos neutros de la
muestra por un proceso denominado c(isporroteo. La aplicacin ms importante fue el
anlisis de metales y otras muestras conductorasH aun#ue con alguna modi2cacin,
tam"in se (a utilizado con muestras l#uidas y materiales no conductores mezclndolos
con un conductor.
Captulo ;: Espectrometra de asorcin atmica
T<C4ICA& DE AT=6I>ACI74 DE !A 65E&TRA
Atomi:acin con llama: la disolucin de la muestra es ne"ulizada mediante un $u%o de gas
oidante, mezclado con el gas com"usti"le y se transporta a una llama donde se produce la
atomizacin. ;ienen lugar una serie de procesos encadenados. El primero es la desolvatacin, en
el #ue se evapora el disolvente (asta producir un aerosol molecular slido 2namente dividido.
Luego, la disociacin de la mayora de estas molculas producen un gas atmico. La mayora de
los tomos as formados se ionizan originando cationes y electrones. *e producen tam"in otras
reacciones no deseadas, los tomos, molculas y iones se ecitan por el calor de la llama. La
presencia de todos estos procesos comple%os (ace #ue la atomizacin sea la etapa ms crtica y
la #ue limita el proceso.
;ipos de llamas& cuando se utiliza el aire como oidante se o"tienen temperaturas de .F++ a
<=++C7. ' estas temperaturas, slo las muestras #ue se descomponen fcilmente se atomizan.
!ara la mayora de las muestras refractarias se de"e emplear ogeno u ido nitroso como
oidante (<9++ a ,.++C7). Las llamas slo son esta"les en ciertos intervalos de caudal, por ello
es importante la velocidad de com"ustin. *i el caudal no so"repasa la velocidad de com"ustin,
la llama se propaga (acia el interior del #uemador, dando un fogonazo. 7uando el caudal
aumenta, la llama su"e (asta alcanzar un punto por encima del #uemador, donde el caudal y
velocidad se igualan. En esta regin la llama es esta"le. ' caudales ms elevados, la llama su"e
y al 2nal alcanza un punto donde se aparta del mec(ero y se apaga. *e re#uiere controlar el
caudal com"usti"leDoidante para #ue esto no ocurra.
Estructura de llama& las regiones ms importantes son la zona de com"ustin primaria (azul para
(idrocar"uros), la regin interconal y la zona de com"ustin secundaria. El aspecto y tama8o
relativo de estas regiones vara considera"lemente con la relacin com"usti"leDoidante, as
como el tipo de estos. En la zona de com"ustin primaria no se suele alcanzar el e#uili"rio y rara
vez se utiliza en la espectroscopia de llama. La regin interconal es frecuentemente rica en
tomos li"res y es la parte de la lama ms ampliamente utilizada en espectroscopia. En la zona
de com"ustin secundaria, los productos formados se convierten en idos moleculares esta"les
#ue se dispersan por los alrededores. El per2l de llama es una representacin #ue muestra las
regiones de la llama donde una varia"le de inters tiene valores similares (temperatura,
a"sor"ancia, intensidad radiante, composicin #umica)
!er2les de temperatura& la temperatura mima se localiza aproimadamente . cm por encima
de la zona de com"ustin primaria de la llama.
!er2les de a"sor"ancia de la llama& el @g presenta un mimo de a"sor"ancia a la mitad de la
llama de"ido a dos efector opuestos. El aumento inicial de la a"sor"ancia a medida #ue la
distancia a la "ase de la llama aumenta se de"e al gran n)mero de tomos de magnesio
producidos por el mayor tiempo de eposicin al calor de la llama. 'l acercarse a la zona
secundaria, comienza una aprecia"le oidacin del magnesio, originando el descenso de la
a"sor"ancia (ya #ue las partculas oidadas no a"sor"en a la longitud de onda empleada). La 'g,
#ue no se oida fcilmente presenta un aumento continuo del n)mero de tomos y por lo tanto
de la a"sor"ancia desde la "ase (asta la periferia. El 7r, por el contrario, #ue forma idos muy
esta"les, muestra una disminucin continua de la a"sor"ancia desde una zona prima al
etremo del mec(ero. !ara cada uno de estos elementos de de"e utilizar una zona distinta de la
llama. Los monocromadores comunes analizan solo la radiacin de una pe#ue8a regin de la
llama, es por eso #ue el a%uste de la posicin de la llama respecto de la rendi%a de entrada es
crtico.
'tomizadores de llama& (2gura OE9 p.<<<) El e#uipo de la 2gura emplea un ne"ulizador de tipo
concntrico. El aerosol, formado por el $u%o de gas oidante, se mezcla con el com"usti"le y
pasa a travs de una serie de de$ectores #ue eliminan las gotitas de disolucin #ue no sean muy
2nas. 7omo consecuencia, la mayor parte de la muestra se recoge en el fondo de la cmara de
mezcla, donde se drena (acia un contenedor de desec(os. Los mec(eros de $u%o laminar
proporcionan una llama relativamente esta"le y larga. Estas propiedades tienden a aumentar la
sensi"ilidad y la reproduci"ilidad. La cmara de mezcla se puede prender por el retroceso de la
llama, por eso el mec(ero est e#uipado con unas vlvulas para reducir la presin.
Beguladores de com"usti"le y oidante& constituyen varia"les importantes. Es desea"le poder
variar cada uno en un intervalo amplio para encontrar eperimentalmente las condiciones
ptimas. !or lo general am"os se #ueman en una proporcin este#uiomtrica. En la
determinacin de metales #ue forman idos esta"les es ms conveniente una llama con eceso
de com"usti"le. Los caudales se controlan por medio de reguladores de presin de do"le
diafragma seguidos de vlvula agu%a. *e emplea un rotmetro para medir el caudal.
7aracterstica del funcionamiento de los atomizadores de llama& es superior a los dems en
trminos de reproduci"ilidad. En trminos de e2cacia y sensi"ilidad, otros mtodos de
introduccin de la muestra son me%ores. La menor e2cacia se de"e a #ue gran proporcin de la
muestra se pierde por el drena%e y #ue el tiempo de residencia de los tomos individuales en el
camino ptico en la llama es "reve (.+
E=
s).
Atomi:acin electrotrmica: proporciona una mayor sensi"ilidad de"ido a #ue toda la
muestra se atomiza en un perodo muy corto y el tiempo promedio de permanencia de los
tomos en el camino ptico es de un segundo o ms. 3nos pocos mililitros de la muestra se
evaporan primero a "a%a temperatura y luego se calcinan a una temperatura algo ms alta en un
tu"o de gra2to o cu"eta de gra2co calentado elctricamente. ;ras la calcinacin, la corriente
incrementa lo #ue eleva la temperatura a unos <+++ o ,+++C7H la atomizacin se produce en
unos pocos milisegundos. En estas condiciones se mide la a"sorcin de las partculas atmicas
situadas por encima de la super2cie calentada.
'tomizadores electrotrmicos& ((orno gra2to, 2g OE-. p.<<=)& en este sistema la atomizacin
tiene lugar en un tu"o de gra2to a"ierto por am"os etremos y #ue tiene un ori2cio central para
la introduccin de la muestra mediante micropipeta. El tu"o se a%usta a un par de contactos
elctricos #ue se u"ican en los dos etremos del tu"o. Eisten dos corrientes de gas inerte. La
corriente eterna previene la entrada de aire eterior y la consiguiente incineracin del tu"o. La
corriente interna $uye por entre los dos etremos del tu"o y sale por el ori2cio central del
compartimiento de la muestra (elimina el aire y desalo%a los vapores generados a partir de la
matriz durante las dos primeras etapas de calentamiento). La muestra se evapora y se calcina
so"re la plataforma LQvov. 7uando la temperatura del tu"o se eleva rpidamente, la atomizacin
se retrasa ya #ue la muestra no est el tiempo su2ciente en contacto directo con la pared del
(orno. !or lo tanto, la atomizacin tiene lugar en un medio en el #ue no se produce un cam"io
tan rpido de temperatura, o"tenindose picos ms reproduci"les. Beduciendo la porosidad
natural del tu"o de gra2to se eliminan algunos efectos de la matriz y la po"re reproduci"ilidad.
*e suelen cu"rir con una delgada capa de car"ono piroltico #ue sella los poros.
*e8al de salida& se necesita un sistema de ad#uisin de datos de alta velocidad ya #ue la se8al
del detector aumenta al mimo luego de la ignicin y cae rpidamente a cero. Los anlisis
cuantitativos se "asan en la medida de la altura de pico o rea de pico.
7aractersticas del funcionamiento de los atomizadores electrotrmicos& elevada sensi"ilidad
para pe#ue8os vol)menes de muestra. La precisin relativa lo de los mtodos sin llama se
encuentra generalmente en el intervalo del 9N al .+N en comparacin con el .N en el de llama.
Los mtodos de (orno son lentos y se re#uiere varios minutos por elemento. :tra desventa%a es
#ue el intervalo analtico es pe#ue8o. !or todo eso es #ue slo se utiliza cuando la atomizacin
con llama o plasma proporcionan lmites de deteccin inadecuados.
'nlisis de slidos con atomizadores electrotrmicos& mayoritariamente las muestras se
introducen como disoluciones pero puede utilizarse para el anlisis directo de muestras slidas.
*e pesa la muestra 2namente pulverizada y se inserta en el (orno. : "ien, se prepara una
suspensin de la muestra pulverulenta mediante agitacin por ultrasonidos en un medio acuoso
y la suspensin se pipetea al interior del (orno para su atomizacin.
I4&TR56E4TACI74
7onsiste en una fuente, una zona de muestra, un selector de longitud de onda, un detector y un
procesador de la se8al y lectura de salida. La zona de muestra es el atomizador #ue contiene la
muestra gaseosa atomizada.
%uentes de radiacin: las lneas de a"sorcin atmicas son muy estrec(as (+.++< a +.++9 nm)
y las energas de transicin son )nicas para cada elemento. Las limitadas anc(uras generan un
pro"lema, ya #ue para #ue se cumpla la ley de Keer, es necesario #ue la anc(ura de "anda de la
fuente sea estrec(a respecto a la anc(ura de un pico de a"sorcin. *in em"argo, incluso los
monocromadores de "uena calidad tienen anc(uras de "anda mayores #ue las lneas. !or eso, si
se utiliza un espectrofotmetro normal e#uipado con una fuente continua se o"tienen curvas de
cali"rado no lineales y "a%as sensi"ilidades.
Esto se resolvi empleando fuentes de lneas con anc(uras de "anda a)n ms estrec(as #ue los
picos de a"sorcin. Las condiciones de tra"a%o de la fuente se eligen de manera #ue el
ensanc(amiento por efecto 4oppler de las lneas emitidas sea menor #ue el ensanc(amiento del
pico de a"sorcin #ue tiene en la llama. Es decir, la temperatura de la fuente se mantiene por
de"a%o de la de la llama. 3n inconveniente de esta tcnica es la necesidad de una lmpara
distinta para cada elemento (o grupos de elementos).
Lmparas de ctodo (ueco& es la fuente ms com)n. 7onsiste en un nodo de 1olframio y
un ctodo cilndrico cerrados (ermticamente en un tu"o de vidrio lleno con nen o argn a una
presin de . a 9 torr. El ctodo est construido con el metal cuyo espectro se desea o"tener, o
"ien, sirve de soporte para ese metal. 7uando se aplica un potencial del orden de ,++ 6 se
produce la ionizacin el gas inerte, lo #ue da lugar a una corriente de 9 a .9 m' al tiempo #ue
los iones y electrones migran (acia los electrodos. *i el potencial es su2cientemente alto, los
cationes gaseosos ad#uieren la su2ciente energa cintica como para arrancar algunos de los
tomos metlicos de la super2cie del ctodo y producir una nu"e atmica, a este proceso se lo
llama c(isporroteo. 3na parte de los tomos metlicos estn ecitados y luego vuelven al estado
fundamental. 'l 2nal, se vuelven a depositar difundiendo de nuevo (acia la super2cie del ctodo
o (acia las paredes del tu"o. La con2guracin cilndrica tiende a concentrar la radiacin en una
regin limitada del tu"o, aumentando la posi"ilidad #ue la redeposicin sea en el ctodo y no es
las paredes. La e2cacia de la lmpara depende de su geometra y del potencial aplicado. Los
potenciales elevados y corrientes elevadas originan intensidades de radiacin mayores. Esta
venta%a se neutraliza por un aumento del ensanc(amiento por efecto 4oppler de las lneas de
emisin de la lmpara. Las corrientes mayores tam"in provocan un aumento del n)mero de
tomos no ecitados en la nu"e, #ue son capaces de autoa"sor"er la radiacin, reduciendo la
intensidad. Los ctodos pueden construir por una mezcla de varios metales, permitiendo el
anlisis de ms de un elemento.
Lmparas de descarga sin electrodos& producen por lo general intensidades de radiacin
de uno o dos rdenes de magnitud superior #ue las de ctodo (ueco. Estn constituidas por un
tu"o de cuarzo (ermticamente cerrado #ue contiene un gas internet, como el argn, a unos
pocos torr y una pe#ue8a cantidad de metal (o su sal) cuyo espectro se desea o"tener. !ara su
activacin se utiliza un campo intenso de radiofrecuencia o radiacin de microondas. *e produce
la ionizacin del argn, originndose iones #ue son acelerados por la componente de
radiofrecuencia del campo (asta #ue ad#uieren su2ciente energa para ecitar a los tomos del
metal cuyo espectro se desea. Eisten para ms de .9 elementos.
@odulacin de la fuente& es necesario eliminar las interferencias producidas por la emisin
de radiacin en la llama. La mayor parte se elimina mediante el monocromador. ' 2n de eliminar
los efectos de la emisin en la llama, es necesario modular la salida de la fuente para #ue su
intensidad oscile a una frecuencia constante. 4e este modo el detector reci"e dos tipos de se8al,
una alternante de la fuente y otra continua de la llama. *e de%a pasar la de la fuente y se elimina
la continua con un 2ltro B7 de alto paso por e%emplo.
Espectrofotmetros: el instrumento de"e ser capaz de proporcionar una anc(ura de "anda lo
su2cientemente estrec(a para #ue se pueda aislar, para la medida, la lnea elegida de las otras
lneas #ue pueden interferir o disminuir la sensi"ilidad del anlisis. Lo ideal es #ue el anc(o de
"anda instrumental sea un orden menor #ue el anc(o de "anda espectral para poder ver con
precisin. !ara algunos metales es su2ciente un 2ltro de vidrio, pero la mayora utilizan
monocromadores ultravioletaDvisi"le de "uena calidad. La mayora utiliza fotomultiplicadores
como detectores. La mayora estn e#uipados con ordenadores #ue se utilizan para el control de
los parmetros instrumentales y para el control y tratamiento de datos.
4e (az sencillo& (?ig OE.,a p.<,.) consiste de varias fuentes de ctodo (ueco, un cortador
o una fuente de alimentacin de impulsos, un atomizador y un espectrofotmetro sencillo de red
de difraccin con un fotomultiplicador como detector.
4e do"le (az& (?ig OE.," p.<,.) el (az #ue proviene de la fuente de ctodo (ueco se divide
mediante un cortador re$ectante, una mitad pasa por la llama y la otra fuera de ella, los dos
(aces se %untan y llegan a un monocromador, luego el fotomultiplicador funciona como detector,
cuya salida alimenta un ampli2cador de cierre sincronizado con el movimiento del cortador. El
(az de referencia no pasa a travs de la llama, por lo #ue no eiste una correccin de la prdida
de potencia radiante de"ida a la a"sorcin o dispersin de la radiacin por la propia llama.
I4TER%ERE4CIA&
Interferencias espectrales: cuando la a"sorcin o emisin de una especie interferente se
solapa o aparece muy prima a la a"sorcin o emisin del analito, de modo #ue su resolucin
por el monocromador resulta imposi"le. 4ado #ue las lneas son muy estrec(as, es rara la
interferencia por superposicin. *e producen tam"in de"ido a la presencia de productos de
com"ustin #ue poseen "andas anc(as. 4isminuyen la potencia del (az transmitido. *e corrige
por un "lanco. 7uando la dispersin se de"e a la matriz de muestra es ms complicado pero se
pueden evitar modi2cando los parmetros analticos. Eiste un mtodo de correccin de las dos
lneas y un mtodo de correccin con una fuente continua.
Interferencias ?umicas& son consecuencia de diversos procesos #umicos #ue ocurren
durante la atomizacin y #ue alteran las caractersticas de a"sorcin del analito. *on ms
comunes #ue las espectrales. @uc(os de los procesos #ue suceden en el seno de la llama estn
primos al e#uili"rio. Los e#uili"rios de mayor inters son la formacin de compuestos de "a%a
volatilidad, las reacciones de disociacin y las de ionizacin.
T<C4ICA& A4A!@TICA&
(reparacin de la muestra: para atomizacin de llama se de"e disolver la muestra, pero
muc(os materiales de inters no son directamente solu"les en los disolventes (a"ituales y
re#uieren un tratamiento previo la"orioso. La descomposicin de estos materiales por lo general
re#uiere tratamientos drsticos a altas temperaturas con prdida de analito por volatilizacin.
'dems los reactivos utilizados suelen introducir interferentes #umicos y espectrales e incluso
traer como impureza al analito. 'lguno de los mtodos ms (a"ituales para la descomposicin y
disolucin son& tratamiento con cidos minerales en caliente, oidacin con reactivos l#uidos,
com"ustin en una "o"a de ogeno, digestin a elevada temperatura con reactivos como ido
"rico.
3na de las venta%as de la atomizacin electrotrmica es #ue algunos materiales pueden
atomizarse directamente evitando la disolucin. *in em"argo, la cali"racin es difcil y re#uiere
de patrones #ue se aproimen a la composicin de la muestra.
Disol*entes or'8nicos: se o"tienen mayores picos de a"sorcin, ya #ue me%oran la e2cacia de
la ne"ulizacin, producen gotas de menor tama8o por tener menor tensin super2cial, y por lo
tanto se produce un aumento en la cantidad de muestra #ue llega a la llama. La mayor velocidad
de evaporacin del disolvente tam"in puede contri"uir a este efecto. 4e"en emplearse llamas
con relacin com"usti"leDoidante ms "a%a para compensar la presencia de la sustancia
orgnica a8adida, aun#ue las mezclas ms po"res en com"usti"le producen llamas de
temperatura menor y aumentan la posi"ilidad de interferencias #umicas. La aplicacin ms
importante es la utilizacin de disolventes inmisci"les para la etraccin de algunos compuestos,
aumentando la sensi"ilidad y reduciendo las interferencias.
Cur*as de calirado: de"era cumplir la ley de Keer, pero con frecuencia se encuentran
deviaciones de la linealidad, por lo #ue se de"e preparar una curva de cali"rado #ue cu"ra el
intervalo de concentraciones correspondiente a la muestra.
6todo de la adicin est8ndar: se usa ampliamente con el o"%eto de contrarrestar
parcialmente y por completo las interferencias #umicas y espectrales introducidas por la matriz
de la muestra.
Aplicaciones: es un mtodo sensi"le para la determinacin cuantitativa de ms de -+
elementos metlicos o metaloides. Las lneas de resonancia de los elementos no metlicos se
localizan por de"a%o de los <++nm y slo se pueden determinar con espectrofotmetros #ue
operan en vaco.
Lmites de deteccin& para muc(os elementos los lmites de deteccin en espectroscopia
de a"sorcin atmica de atomizacin con llama se encuentran en el intervalo de . a <+ ngDml,
con atomizacin electrotrmica +.++< a +.+. ngDml. *e pueden (allar lmites muy ale%ados de
estos intervalos.
Eactitud& en condiciones normales, el error relativo asociado con el anlisis de a"sorcin
con llama es del orden del . al < N, pudindose reducir a dcimasN con precauciones
especiales. Los errores con la atomizacin electrotrmica son de 9 a .+ veces mayor #ue los de
atomizacin con llama.
Captulo 00: Introduccin a la ?umica electroanaltica
Aenta3as&
Las tcnicas electroanalticas son capaces de proporcionar lmites de deteccin
ecepcionalmente "a%os.
*on espec2cas para un estado de oidacin particular de un elemento.
La instrumentacin es relativamente econmica
!roporcionan informacin so"re las actividades en vez de las concentraciones (desventa%a)
Celdas electro?umicas: consta de dos electrodos, cada uno sumergido en una disolucin
adecuada de analito. !ara #ue circule corriente en la celda es necesario #ue&
Los electrodos se conecten eternamente mediante un conductor metlico
Las dos disoluciones de electrlito estn en contacto para permitir el movimiento de los
iones de una a otra
!ueda tener lugar una reaccin de transferencia de electrones en cada uno de los
electrodos
Las dos disoluciones estn unidas por un puente salino, #ue consiste en un tu"o relleno con una
disolucin saturada de M7l. En los dos etremos (ay tapones porosos #ue permiten el
movimiento de los iones pero evitan el paso de l#uido. *u funcin es aislar los contenidos
mientras se mantiene el contacto elctrico.
*uelen tener uniones l)quidas, las cuales desarrollan un potencial de unin en cada una de las
interfases, #ue puede llegar a ser importante y afectar a la eactitud de los anlisis.
Conduccin en una celda: en los electrodos, los electrones sirven de portadores, movindose
desde el nodo al ctodo a travs del conductor eterno. En las disoluciones (ay migracin de
cationes y aniones. 4entro del puente salino (ay migracin de M
R
(acia el nodo y de 7l
E
(acia el
ctodo. En las super2cies de los electrodos la conduccin inica de la disolucin se acopla con la
conduccin electrnica del electrodo, mediante una reaccin de reduccin u oidacin, para
proporcionar un circuito completo para el $u%o de carga.
Estructura de la dole capa: un electrodo slo puede donar o aceptar electrones #ue estn
adyacentes al mismo. Esta capa puede tener una composicin #ue di2ere de la del seno de la
disolucin. 7omo consecuencia de aplicar un potencial, el electrodo se carga positivamente en la
super2cie. !or la movilidad inica, las capas adyacentes a l ad#uirirn la carga opuesta. 's, en
la capa interior compacta el potencial disminuye linealmente con la distancia a la super2cie del
electrodo. Luego, en la capa difusa el potencial disminuye eponencialmente. Esta disposicin se
denomina do"le capa elctrica.
Celdas 'al*8nicas: producen energa elctrica. Celdas electrolticas: consumen energa
elctrica.
El potencial #ue se desarrolla en las celdas es una medida de la tendencia de la reaccin a
evolucionar (acia el e#uili"rio. 3na celda en la #ue invirtiendo la direccin de la corriente se
invierten las reacciones en los electrodos se llama celda #umicamente reversi"le.
C8todo: electrodo en el #ue tiene lugar la reduccin. Bnodo& electrodo en #ue tiene lugar la
oidacin.
(otenciales de unin l?uida: proviene de la desigual distri"ucin de los cationes y aniones
en la super2cie en contacto de"ido a las diferencias en las velocidades a las #ue difunden estas
especies. El resultado 2nal es una separacin de carga. En el caso de H7l, el lado ms diluido se
carga positivamente de"ido a la difusin ms rpida de H
R
mientras #ue el lado ms concentrado
ad#uiere una carga negativa por el eceso de 7l
E
, #ue se mueve ms lento. La carga #ue se
desarrolla tiende a contrarrestar esta diferencia y pronto se alcanza el e#uili"rio. La diferencia de
potencial de unin puede alcanza los ,+m6 o ms. La magnitud del potencial de unin se puede
reducir introduciendo un puente salino. *u e2cacia me%ora al aumentar la concentracin de la sal
o medida #ue se aproiman entre s los valores de las movilidades de los iones de la sal. ' veces
es posi"le y venta%oso construir celdas en las #ue los electrodos tienen un electrolito com)n y se
elimina as el efecto de los potenciales de unin.
(=TE4CIA!E& DE E!ECTR=D=: SETEcatEEanodo am"as escritas como reducciones. *e de2nen
como potenciales de celda para una celda #ue se componen del electrodo en cuestin actuando
de ctodo y del E5H actuando de nodo. Es una constante fsica #ue proporciona una descripcin
cuantitativa de la fuerza impulsora relativa de una reaccin de semiEcelda. El signo del potencial
de electrodo implicar si la reduccin es o no espontnea respecto al electrodo estndar de
(idrgeno.
*e de2ne el potencial de electrodo estndar cuando adems de lo anterior, la actividad de todos
los reactantes y productos presentes es uno.
El potencial de electrodo depende de la temperatura. El signo de un potencial estndar es
idntico al del conductor en contacto con la semiEcelda de inters en una celda galvnica.
4aturales de los potenciales de electrodo: el potencial de una celda electro#umica es la
diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo, y es una medida de la energa de los
electrones de un electrodo. 5o eiste ning)n mtodo para determinar el valor a"soluto del
potencial de un )nico electrodo, sino #ue slo se miden las diferencias de potencial. !ero son
igualmente )tiles los potenciales de semiEcelda relativos. Es necesario tener un electrodo de
referencia #ue sea aceptado&
Electrodo normal de hidr'eno .E4C2: !t, H< (p atm) U H
R
(aH
R
T ) El conductor se fa"rica a
partir de una lmina de platino #ue (a sido platinizada, un proceso en el #ue el metal se recu"re
con una capa de platino 2namente dividido mediante un rpida reduccin #umica del H<!t7l-.
's, no re$e%a la luz, de forma #ue muestra de color negro. !or eso se denomina negro de platino,
y proporciona un rea super2cial grande para asegurar la reaccin <H
R
R <e
E
EEG H< (g) proceda
rpidamente en la super2cie del electrodo.
El electrodo de (idrgeno es electro#umicamente reversi"le. 4epende de la temperatura, de la
actividad del ion (idrgeno en la disolucin y de la presin del (idrgeno en la super2cie del
electrodo. Estos valores de"en ser de2nidos para #ue sirva de electrodo de referencia. Las
especi2caciones son una actividad H
R
T., pT .atm. !or convenio, ECT + 6 a todas las
temperaturas.
Este electrodo es poco prctico, muy difcil de preparar. Es un electrodo (ipottico, ya #ue
desconocen cmo preparar una disolucin con aH
R
T. En cam"io, (ay otros electrodos de
referencia ms sencillos de construir, ms ro"ustos y ms fciles de utilizar&
Electrodo de plata-cloruro de plata: es uno de los ms comunes. *e puede fa"ricar mediante
la aplicacin de un potencial oidante a un alam"re de plata sumergido en una disolucin de H7l.
*e forma una delgada capa de 'g7l #ue se ad(iere fuertemente al alam"re, #ue luego se
introduce en una disolucin saturada de M7l. 3n puente salino conecta esta disolucin al sistema
electrdico en cuestin. 'g7l (s) R e
E
EEG 7l
E
R 'g (s) ECT +.< 6.
Electrodo de calomelanos saturado .EC&2: consiste en una piscina de mercurio en contacto
con una disolucin #ue est saturada de cloruro de mercurio y cloruro de potasio. 3n alam"re de
platino sumergido en el mercurio proporciona el contacto elctrico para el otro conductor y un
puente salino (asta el segundo electrolito completa el circuito. Hg<7l< R <e
E
EEG < 7l
E
R <Hg
(l) ECT +.<= 6
(otenciales de electrodo en presencia de reacti*os de precipitacin " formadores de
comple3os: van a modi2car el potencial, como consecuencia, por e%emplo de la reduccin de
iones li"res de una especie en presencia de otra #ue la comple%a o la precipita. !or lo tanto,
disminuye la concentracin y su tendencia a su reduccin u oidacin, dependiendo de #u ion
se trate.
(otenciales formales: ECV. 'dems de cumplir con EC, estn cuidadosamente especi2cadas
todas las concentraciones de cual#uier otro constituyente de la disolucin.
C=RRIE4TE& E4 CE!DA& E!ECTR=D5@6ICA&: con corrientes pe#ue8as se cumple la ley de
:(m (ET iB). La resistencia depende de los tipos y concentraciones de los iones en disolucin.
7uando (ay corriente continua, el potencial de la celda medido di2ere del o"tenido mediante
clculos termodinmicos. Esta desviacin puede atri"uirse a cierto n)mero de fenmenos
incluyendo la resistencia (mica y diversos efectos de polarizacin. Aeneralmente esos
fenmenos tienen el efecto de reducir el potencial en una celda galvnica o de aumentar el
potencial necesario para producir una corriente en una celda electroltica.
(otencial hmicoE cada iR: para #ue circule corriente es necesario vencer la resistencia de
los iones al movimiento (acia el nodo y el ctodo. Esta fuerza se conoce como potencial (mico
o cada iB. El efecto neto es aumentar el potencial re#uerido para operar en una celda
electroltica y disminuirlo en una galvnica.
(olari:acin: si "ien de"era eistir una relacin lineal entre el potencial de celda y la
intensidad de corriente, se encuentra una desviacin de"ido a la polarizacin. !uede ser #ue el
electrodo est polarizado idealmente o no polarizado ideal. (2g <<E- p.-,+)
El electrodo polari2ado ideal es a#uel en #ue la intensidad de corriente permanece constante e
independiente del potencial en un intervalo considera"le.
En el caso de un electrodo no polari2ado #ue se comporta
idealmente7 el potencial es independiente de la intensidad de
corriente.
=r'enes de la polari:acin: puede tener origen en , regiones& en el propio electrodo, en una
capa super2cial de disolucin adyacente al electrodo y en el seno de la disolucin. *e puede
presentar en = etapas intermedias y dependiendo de cul de ellas limite la intensidad de
corriente ser la polarizacin.
Polari2acin por concentracin8 7uando el movimiento de la forma : desde el seno a la
capa super2cial o la transferencia de masa inversa limitan la velocidad de reaccin glo"al.
!olarizacin de reaccin. 7uando la velocidad de formacin o de descomposicin de los
productos intermedios por medio de la reaccin #umica en la capa super2cial (:EG :V
BedQEGBed) limita la intensidad de corriente.
!olarizacin de adsorcin, de desorcin o de cristalizacin. El lmite es la velocidad de un
proceso fsico.
Polari2acin de transferencia de carga (cin3tica)8 La limitacin se origina por la lenta
velocidad de transferencia de electrones desde el electrodo a las especies oidadas en la
capa super2cialH o desde las especies reducidas al electrodo.
&orepotencial .F2: mide el grado de polarizacin de un electrodo. Es la diferencia entre el
potencial de e#uili"rio y el real. Es positivo y aumenta la ?E@ necesaria para #ue circule
corriente.
6ecanismos de transporte de masa:
4ifusin& la velocidad de difusin viene dada por dcDdtT P (cEc+). 7uando c+ tiende a cero
se dice #ue la polarizacin de concentracin es completa. 4onde c es la concentracin en
el seno de la disolucin y c+ en el e#uili"rio en la super2cie del electrodo.
@igracin& por el #ue los iones se mueven "a%o la in$uencia de un campo electroesttico.
*uele ser el proceso principal.
7onveccin& medio mecnico. La conveccin forzada (agitacin) tiende a disminuir esta
polarizacin y la natural (diferencia de temperatura o densidad) ayuda al transporte de
materia.
(olari:acin de concentracin: se o"serva cuando la difusin, migracin y conveccin son
insu2cientes para transportar el reactante a la super2cie del electrodo o desde la misma, a la
velocidad eigida por la intensidad de corriente terica. El grado de polarizacin viene in$uido
eperimentalmente por&
7oncentracin de los reactantes (a "a%as conc. es ms pro"a"le la polarizacin)
7oncentracin total de electrolito (a mayor conc es ms pro"a"le)
'gitacin mecnica (menor polarizacin al (a"er mayor super2cie del electrodo)
(olari:acin cintica& surge cuando la velocidad de oidacin o reduccin no es
su2cientemente rpida para producir corrientes de la intensidad demandadas por la teora. El
so"repotencial tiene las siguientes caractersticas&
'umenta con la densidad de corriente
4isminuye con el aumento de temperatura
6ara con la composicin #umica del electrodo
*on ms adecuados en procesos #ue generan productos gaseosos (H<, :<)H son
desprecia"les cuando se est depositado un metal o un in est eperimentando un
cam"io de estado de oidacin
5o se puede predecir eactamente su magnitud
La diferencia entre el so"repotencial del (idrgeno y ogeno en las super2cies pulidas y en las
platinizadas es nota"le. Las )ltimas ofrecen una super2cie muc(o mayor, lo #ue (ace #ue la
densidad de corriente real sea signi2cativamente menor a la esperada por las dimensiones del
electrodo, por lo #ue disminuye la densidad de corriente (asta incluso un nivel donde el
so"repotencial es desprecia"le.
Captulo 0,: (otenciometra
Estos mtodos se "asan en las medidas del potencial de celdas electro#umicas en ausencia de
corrientes aprecia"les. El e#uipo re#uerido es sencillo y econmico e incluye un electrodo de
referencia, un electrodo indicador y un dispositivo para la medida del potencial.
Electrodos de referencia: de"e ser conocido, constante y completamente insensi"le a la
composicin de la disolucin en estudio. Wunto con este se emplea un electrodo indicador o de
tra"a%o, cuya respuesta depende de la concentracin de analito. El electrodo de referencia ideal&
Es reversi"le y o"edece a la ecuacin de 5erst
!resenta un potencial #ue es constante en el tiempo
Betorna a su potencial original despus de (a"er estado sometido a corrientes pe#ue8as
!resenta poca (istresis con ciclos de temperatura.
Electrodo de calomelanos& El ms utilizado es el electrodo saturado ya #ue se prepara
fcilmente, sin em"argo su coe2ciente de temperatura es signi2cativamente mayor #ue los
otros. :tra desventa%a es #ue cuando cam"ia la temperatura, el potencial slo alcanza el nuevo
valor lentamente, de"ido al tiempo re#uerido para resta"lecer el e#uili"rio de solu"ilidad del
cloruro de potasio y de calomelanos. El contacto con el sistema indicador se puede (acer por
medio de un tapn de porcelana fritada, una 2"ra porosa o "ien mediante una camisa de vidrio,
#ue tiene una resistencia muc(o menor pero tiende a derramar pe#ue8as cantidades de M7l en
la muestra.
Electrodos de plataDcloruro de plata& tienen la venta%a #ue pueden utilizarse a temperaturas
superiores a -+C7, mientras #ue los electrodos de calomelanos no. Los iones mercurio
reaccionan con menos componentes de la muestra #ue los iones plataH tales reacciones pueden
conducir a la o"turacin de la unin entre el electrodo y la disolucin de analito.
!recauciones en la utilizacin de electrodos de referencia& el nivel de l#uido de"era
mantenerse siempre por encima del de la disolucin de la muestra para impedir la
contaminacin de la disolucin del electrodo y la o"turacin de la unin de"ido a la reaccin de
la disolucin del analito con iones plata o mercurio de la disolucin interna. *e de"e evitar esta
fuente de error. *e podra interponer un segundo puente salino entre el analito y el electrodo de
referencia.
E!ECTR=D=& I4DICAD=RE& 6ETB!IC=&: un electrodo indicador ideal responde de forma
rpida y reproduci"le a los cam"ios de actividad del ion analito. Hay dos tipos de electrodos
indicadores& metlicos y de mem"rana.
Electrodos de primera clase& estn en e#uili"rio directo con el catin #ue deriva del
electrodo metlico. @ide el mismo ion, es directa. 5o son muy utilizados por#ue no son muy
selectivos y responden no solo a sus propios cationes sino tam"in a otros ms fcilmente
reduci"les. 'lgunos solo pueden usarse en soluciones neutras o "sicas por#ue se disuelven con
cidos (Xn, 7d). :tros se oidan tan fcilmente #ue su uso #ueda restringido a disoluciones
previamente desaireadas. 7iertos metales duros no proporcionan potenciales reproduci"les (?e,
7r, 7o, 5i). Lo #ue se utilizan son 'gD'g
R
y HgDHg<
<R
en disoluciones neutras y 7uD7u
R<
, XnDXn
R<,
7dD7d
R<
, ;lD;l
R
y !"D!"
R<
en disoluciones desaireadas.
Electrodos de segunda clase& un metal #ue responde a la actividad de un anin con el #ue
forma un precipitado o un comple%o esta"le. @ide el contra ion. !or e%emplo, la plata para (aluros
y aniones pseudo(aluros. :tro se "asa en la respuesta de de un electrodo de mercurio en
presencia de una pe#ue8a concentracin del comple%o esta"le del E4;' con Hg(>>) para medir la
actividad del anin 0
E=
.
Electrodos de tercera clase& se puede (acer #ue un electrodo metlico responda a un
catin diferente. !or e%emplo, agregando al electrodo anterior de mercurio un pe#ue8o volumen
de disolucin #ue contiene el comple%o E4;' con el calcio, se transforma en un electrodo para
medir el ion calcio.
>ndicadores redo metlicos& los electrodos construidos con platino, oro, paladio u otros
metales inertes sirven frecuentemente como electrodos indicadores para sistemas de
idoDreduccin. El electrodo inerte act)a como una fuente o suminidero de los electrones
transferidos desde un sistema redo presente en la disolucin.
E!ECTR=D=& I4DICAD=RE& DE 6E6#RA4A: el potencial o"servado es un tipo de potencial
de unin #ue se desarrolla en la mem"rana #ue separa la disolucin del analito de la disolucin
de referencia.
(ropiedades: #ue proporcionan la sensi"ilidad y la selectividad de los electrodos de mem"rana
(acia ciertos cationes y aniones&
!)nima solubilidad& su solu"ilidad en disoluciones del analito de"e aproimarse a cero. 's,
muc(as estn formadas por molculas grandes o agregados moleculares tales como los
vidrios de slice o resinas polimricas
(onductividad el3ctrica& de"e presentar algo de conductividad, aun#ue sea pe#ue8a.
Aeneralmente esta conduccin se de"e a la migracin en el interior de la mem"rana de
iones con una sola carga.
"eactividad selectiva con el analito: la mem"rana o alguna de las especies contenidas en
la matriz de"e ser capaz de unirse selectivamente con los iones del analito. Hay tres tipos
de uniones& por intercam"io inico, por cristalizacin y por comple%acin.
El electrodo de *idrio para medidas de
pC& esta celda consiste en un electrodo de
vidrio y un electrodo de referencia
sumergidos en una disolucin cuyo pH se
va a determinar. El electrodo indicador
consiste en una delgada mem"rana de
vidrio sensi"le al pH sellada en el etremo
de un tu"o de vidrio de paredes gruesas o
de plstico. El tu"o contiene H7l diludo,
saturado con 'g7l. En esta disolucin un
alam"re de plata forma un electrodo de
referencia de 'gD'g7l #ue se conecta a una
de las terminales de un dispositivo para
medir el potencial. El electrodo de
referencia se conecta a la otra terminal.
;iene entonces < electrodos de referencia,
el eterno y el interno. El elemento
sensi"le al pH es la delgada capa de vidrio,
en la "ase del electrodo.
El ms utilizado es el vidrio 7orning +.9, consta aproimadamente de un <<N de 5a<:, -N 7a:,
F<N *i:<. ;iene una respuesta espec2ca a los iones (idrgeno (asta un pH de O. ' valores
superiores empieza a dar cierta respuesta al sodio. El vidrio consiste en una red tridimensional
in2nita de grupos *i:=
E=
. 4entro de los intersticios (ay su2cientes cationes para compensar la
carga negativa de los grupos silicato. Los cationes monovalentes (5a, Li) se pueden mover en la
red y son los responsa"les de la conduccin elctrica en el interior de la mem"rana.
La super2cie de una mem"rana de vidrio de"e estar (idratada antes de funcionar como
electrodo de pH. Los vidrios no (igroscpicos no responden al pH. *i se des(idratan tam"in
pierden su sensi"ilidad pero es reversi"le y al (idratarlos se produce una reaccin de
intercam"io inico entre los cationes monovalentes de la red del vidrio y los protones de la
disolucin.
La mem"rana de"e conducir la electricidad. En el interior de la capa de gel (idratado, la
conduccin se de"e al movimiento de iones (idrgeno. Los iones de sodio son los portadores de
carga en el interior seco de la mem"rana.
*e (an desarrollado electrodos de vidrio para otros cationes, como 5a
R
, M
R
, 5H=
R
, B"
R
, 7s
R
, Li
R
,
'g
R
(otenciales de memrana: Eref+ y Eref0 son los potenciales de los electrodos de referencia. E3
es el potencial de unin a travs del puente salino. Es es el potencial de super2cie, #ue vara con
el pH de la disolucin del analito. El potencial del electrodo de vidrio tiene dos componentes& Eref<
y Es, adems eiste un tercer potencial #ue no se muestra, el de asimetra.
(otencial de superGcie: Es T E. E E< depende slo de las actividades del ion (idrgeno en las
disoluciones a am"os lados de la mem"rana. En el lado interno la actividad se mantiene
constante.
(otencial del electrodo de *idrio: Eind T Es R Eref< R Easi
Error alcalino: en disoluciones "sicas, los electrodos de vidrio responden a la concentracin
tanto del ion (idrgeno como de los iones de metales alcalinos. ;odos los cationes monovalentes
inducen un error alcalino cuya magnitud depende tanto del catin en cuestin como de la
composicin de la mem"rana de vidrio. El error es negativo (se miden valores ms "a%os #ue los
verdaderos)
CoeGcientes de selecti*idad: PH.K van desde cero (no (ay interferencia) (asta valores mayores
de la unidad. 3n coe2ciente igual a uno signi2ca #ue el electrodo responde por igual al ion del
analito y al ion interferente. *e desea #ue sea muy pe#ue8o. !ara pH inferiores a O el producto
PH.K.". es desprecia"le. ' pH elevados se (ace ms importante y se o"serva un error alcalino.
Error 8cido: en disoluciones de pH inferior a +.9 presenta error cido. El error es positivo (se
miden valores ms elevados).

Electrodos de memrana l?uida: se forman a partir
de l#uido inmisci"les #ue se unen selectivamente con
algunos iones. *on particularmente importantes por#ue
permiten la determinacin potenciomtrica directa de
las actividades de varios cationes polivalentes y
tam"in de algunos aniones y cationes monovalentes.
3n disco poroso de plstico (idrfo"o sirve para
mantenerla capa orgnica entre las dos disoluciones
acuosas. El efecto de capilaridad (ace #ue los poros del
disco permanezcan llenos con el l#uido orgnico
procedente del depsito formado entre los tu"os
concntricos. 7omo alternativa al uso del disco poroso,
se (a conseguido inmovilizar l#uidos intercam"iadores
en mem"ranas resistentes de cloruro de polivinilo. El l#uido intercam"iador de iones y el cloruro
de polivinilo se disuelven en un solvente tal como ;H?. La evaporacin del disolvente da lugar a
una mem"rana $ei"le. En la actualidad la mayora son de este tipo. Las sustancias activas en
las mem"ranas l#uidas son de , tipos& intercam"iadores catinicos, intercam"iadores aninicos
y comple%os neutros macrocclicos, #ue comple%an selectivamente a ciertos cationes.
3no de los ms importantes es el selectivo al ion calcio en medios aproimadamente neutros.
:tro es el de potasio.
I4&TR56E4T=&: un instrumento para medir potenciales de celda es #ue su resistencia de"e
ser grande con respecto a la celda. *i no lo es, se producirn errores signi2cativos como
consecuencia de la cada >B en la celda. *e (an empleado dos tipos de instrumentos, el
potencimetro y el voltmetro electrnico de medida directa. 'm"os se conocen como pHEmetros
cuando sus resistencias internas son su2cientemente elevadas para utilizarse con electrodos de
vidrio y otras mem"ranas.
Instrumentos de lectura directa: son dispositivos de estado slido #ue emplean un transistor
de efecto de campo o un seguidor de potencial como primera etapa de ampli2cacin con el 2n
de proporcionar la elevada resistencia interna necesaria.
Instrumentos comerciales: se (an desarrollado = categoras de medidores "asadas en el
precio e inters. @edidores utilitarios& +.. unidades de pH o incluso menos. @edidores de uso
general& +.+9. >nstrumentos de escala epandida& +.+.. @edidores de investigacin& +.++.. La
2a"ilidad es mayor #ue la mayora de electrodos selectivos de iones.
6EDIDA& (=TE4CI=6<TRICA& DIRECTA&: son rpidas y sencillas re#uiriendo slo la
comparacin del potencial desarrollado por el electrodo indicador en la disolucin pro"lema, con
el potencial o"tenido cuando se sumerge en las disoluciones patrones.
!or convenio, el electrodo indicador se considera ctodo y el electrodo de referencia nodo.
Cur*as de caliracin: es esencial #ue la composicin inica de los estndares se aproime
muc(o a la del analito. 7uando las concentraciones del electrlito no son demasiado grandes es
)til saturar las muestras y los patrones con un eceso medido de electrolito inerte. Entonces, el
efecto adicional del electrolito de la muestra se (ace desprecia"le y la curva de cali"racin
emprica proporciona resultados en trminos de concentracin. Las curvas de cali"racin son
)tiles para electrodos #ue no responden linealmente al p'.
6todo de la adicin est8ndar: el potencial del sistema se mide antes y despus de la
adicin de un pe#ue8o volumen de un patrn a un volumen conocido de la muestra. *e (ace la
suposicin de #ue esta adicin no altera la fuerza inica y por lo tanto el coe2ciente de actividad.
*e supone #ue el patrn a8adido no altera signi2cativamente el potencial de unin.
Resumen de los errores ?ue afectan a las medidas de pC con el electrodo de *idrio:
limitaciones&
Error alcalino& son sensi"les a iones de metales alcalino a pH superiores a .. o .<
Error cido& a un pH menor a +.9, los valores tienden a ser un poco elevados.
4es(idratacin& da lugar al funcionamiento inesta"le y a errores
6ariacin en el potencial de unin& este potencial conlleva una ineactitud fundamental en
la medida del pH a la #ue no puede aplicarse ninguna correccin. Aeneralmente no se
pueden o"tener valores a"solutos ms eactos #ue +.+. unidades de pH.
Error en el pH del tampn patrn& cual#uier ineactitud en la preparacin de la disolucin
tampn utilizado para la cali"racin, o cam"ios en su composicin durante el
almacenamiento, se propagarn como errores en las medidas del pH. 3na causa frecuente
es la accin de las "acterias en los componentes orgnicos.
Aaloraciones potenciomtricas& el potencial de un electrodo indicador adecuado se emplea
para esta"lecer el punto de e#uivalencia de una valoracin. Este tipo de valoraciones
proporciona una informacin diferente #ue la de la medida potencionmtrica directa. El punto
2nal potenciomtrico es ampliamente aplica"le y proporciona datos ms eactos #ue el mtodo
correspondiente #ue utiliza indicadores. Es )til para la valoracin de disoluciones coloreadas o
tur"ias y para detectar la presencia de especies insospec(adas. 3na desventa%a es #ue emplea
ms tiempo.
Captulo 01: Culomimetra
;res mtodos se "asan en la oidacin o reduccin electrdica de un analito durante un tiempo
su2ciente para asegurar su conversin cuantitativa a un nuevo estado de oidacin&
culom"imetra a potencial constante, a intensidad constante (o las valoraciones
culom"imtricas) y la electrogravimetra. En los procedimientos culom"imtricos es la
electricidad necesaria para completar la electrlisis la #ue sirve como medida de la cantidad de
analito presente.
;ienen una moderada selectividad, sensi"ilidad y rapidez. 5o re#uieren cali"racin frente a
patrones.
3na electrlisis se puede llevar&
.. @anteniendo constante el potencial aplicado.
<. @anteniendo constante la intensidad de corriente.
,. @anteniendo constante el potencial del electrodo de tra"a%o.
E!ECTR7!I&I& A (=TE4CIA! C=4&TA4TE
Camios de corriente durante una electrlisis a
potencial G3o aplicado constante: es la manera ms
simple, pero suele tener diversas limitaciones. *e espera
una disminucin de la intensidad de corriente con el
tiempo, as como un aumento en la polarizacin de
concentracin catdica. En realidad, con la aparicin de la
polarizacin de concentracin, la intensidad de corriente
disminuye de forma eponencial con el tiempo.
Camios de potencial durante una electrlisis a
potencial aplicado constante:
El potencial del nodo se mantiene constante de"ido al
gran eceso de reactante y al pe#ue8o cam"io en la
composicin del producto.
El potencial del ctodo aumenta a medida #ue disminuye
la concentracin de co"re. Este desplazamiento es
aproimadamente lineal durante un perodo considera"le.
La cada iB es paralela a la 2gura anterior
El potencial cintico del nodo disminuye a medida #ue
la intensidad de corriente y por lo tanto la densidad de
corriente disminuyen.
El cam"io ms signi2cativo es en el potencial catdico
total, y la mayor parte de esta cada es consecuencia del
aumento de la polarizacin (se (ace ms positivo para
nosotros). Es decir, los iones co"re no llegan a la super2cie del electrodo con su2ciente
rapidez como para evitar la polarizacin.
El desplazamiento del potencial del ctodo provoca con frecuencia la codeposicin de otras
especies y la prdida de selectividad. Esto se puede evitar disminuyendo en valor a"soluto el
potencial aplicado para #ue el desplazamiento del potencial del ctodo no alcance el valor en
#ue los interferentes reaccionan. *in em"argo, esto lleva a una disminucin en la intensidad de
corriente y un gran aumento en el tiempo para completar el anlisis.
*e puede usar para separar cationes fcilmente reduci"les (!", 7d, 'g, ;l, 7u, Xn).
E!ECTR7!I&I& A I4TE4&IDAD C=4&TA4TE: se re#uiere
aumentar peridicamente el potencial aplicado mientras tiene
lugar la electrlisis. Las fuerzas electroestticas posponen el
inicio de la polarizacin de concentracin al aumentar la rapidez
a la #ue los iones co"re llegan a la super2cie del electrodo. !ero
la disolucin #ueda llena de iones co"re #ue la difusin, la
atraccin electroesttica y la agitacin no pueden mantener en la
super2cie del electrodo a"astecida con su2cientes iones co"re
como para mantener la corriente deseada. 7uando esto ocurre
tiene lugar la codeposicin de (idrgeno (o de otras especies
reduci"les). ?inalmente, el potencial del ctodo se esta"iliza.
E!ECTR7!I&I& A (=TE4CIA!E& DE! E!ECTR=D= DE
TRA#AH= C=4&TA4TE: *e utiliza para las separaciones
cuantitativas, en las cuales se acepta una reduccin en la
concentracin del analito (asta .+
E-
@. se deduce #ue los
iones divalentes #ue di2eren en sus potenciales estndares
en aproimadamente +..96 o ms, pueden, tericamente
separarse cuantitativamente por electrodeposicin. !ara
a"ordar esas separaciones se re#uiere una tcnica ms
so2sticada, por#ue si no se restringiera la polarizacin de
concentracin en el ctodo, impedira todas las
separaciones salvo las ms simples. ' intensidades de
corriente elevadas, el cam"io en el potencial del ctodo es
elevado. >ntensidades de corrientes "a%as, el tiempo puede
ser muy largo. La solucin es iniciar la electrlisis aplicando
un potencial elevado para asegurar una intensidad
razona"leH en ese momento el potencial se disminuye de
forma continua para mantener el potencial del ctodo al
nivel necesario para efectuar la separacin deseada. *e
mide el potencial del electrodo de tra"a%o frente a un tercer
electrodo cuyo potencial en la disolucin es conocido y
constante (un electrodo de referencia). La diferencia de
potencial entre el electrodo de referencia y el ctodo se
mide con un voltmetro electrnico. La diferencia de
potencial aplicada entre el electrodo de tra"a%o y su
electrodo auiliar se controla con un divisor de volta%e a 2n
de #ue el potencial del ctodo se mantenga a un nivel
adecuado para la separacin. La 2nalizacin de la electrlisis vendr indicada por la
aproimacin de la intensidad de corriente a cero.
6<T=D=& C5!=6#I6<TRIC=& DE A4B!I&I&: conllevan la medida de la cantidad de
electricidad necesaria para modi2car cuantitativamente el estado de oidacin del analito.
6enta%as& la constante de proporcionalidad entre la cantidad medida y el peso del analito se
puede deducir a partir de constantes fsicas conocidas. 5o se re#uiere cali"racin o
estandarizacin. *on tan eactos como los procedimientos gravimtricos o volumtricos, son
ms rpidos y ms adecuados. *e adaptan fcilmente a la automatizacin.
El culombio es la cantidad de carga #ue es transportada en un segundo por una intensidad de
corriente constante de un amperio. El farada1 es la carga en culom"ios asociada con un mol de
electrones.
Tipos de mtodos:
Potencioest$tica: potencial del electrodo de tra"a%o constante
Amperoest$tica: intensidad de corriente constante. ;iene ms aplicaciones #ue el primero.
*e denomina valoracin culom"imtrica.
3n re#uisito fundamental es #ue el analito reacciones con la corriente con una e2cacia del .++N.
Esto no implica necesariamente #ue el analito tenga #ue participar directamente en el proceso
de transferencia electrnica en el electrodo. En la mayora de ocasiones, la sustancia #ue se est
determinando participa total o parcialmente en una reaccin #ue es secundaria respecto a la
reaccin electrdica.
Aaloraciones culomimtricas: la intensidad de corriente se mantiene en un nivel constante y
conocido mediante el amperostatoH el producto de esta intensidad y del tiempo re#uerido para
alcanzar el punto 2nal, da el n)mero de culom"ios. El (ec(o de mantener la intensidad
constante impide la oidacin o reduccin cuantitativas de las especies desconocidas en el
electrodo generador, ya #ue es inevita"le la polarizacin de concentracin antes de #ue la
electrlisis pueda completarse. El potencial del electrodo de"e entonces aumentar si se va a
mantener la corriente constante. Be#uiere algunos
medios para detectar el punto de e#uivalencia
#umico.
'paratos elctricos& incluye un fuete de
corriente constante y un interruptor #ue
simultneamente inicia la corriente y pone en
marc(a un relo% electrnico. *e necesita un medio
para medir la corriente. En este es#uema se utiliza la
cada de potencial a travs de la resistencia patrn
Bstd
7eldas para valoraciones culom"imtricas& una
celda tpica consta de un electrodo generador en el
#ue se forma el reactivo y un electrodo auiliar para
completar el circuito. El electrodo generador, #ue de"e tener un rea super2cial grande, es a
menudo una lmina rectangular o un alam"re de platino es espiral. Los productos #ue se forman
en el segundo electrodo representan fuentes potenciales de interferencia. !ara eliminar estas
di2cultades, se asla mediante un disco fritado o alg)n otro medio poroso. :tra alternativa es #ue
el reactivo se genere eternamente.
'plicaciones&
/aloraciones de neutrali2acin& se pueden utilizar tanto determinaciones
potenciomtricas de los puntos 2nales como indicadores. 3na venta%a del mtodo
culom"imtrico es #ue la interferencia por el ion car"onato es "astante menos
di2cultosa
/aloraciones de precipitacin 1 formacin de comple5os: los puntos 2nales se
detectan potenciometricamente o con indicadores #umicos.
/aloraciones de o+idacin reduccin
Comparacin de las *aloraciones culomimtricas " *olumtricas: am"os re#uieren un
punto 2nal o"serva"le y estn su%etos a errores de valoracin. En am"as tcnicas la cantidad de
analito se determina evaluando su capacidad de com"inacin (en un caso con una disolucin
patrn y en el otro con electrones). Las reacciones de"en ser rpidas, prcticamente completas y
li"res de reacciones secundarias.
La fuente de intensidad de corriente constante y conocida tiene la misma funcin #ue la
disolucin patrn en un mtodo volumtrico. El relo% y el interruptor se corresponden con la
"ureta (llave de cierre).
Las valoraciones culom"imtricas presentan algunas venta%as, como la eliminacin de los
pro"lemas asociados con la preparacin, estandarizacin y almacenamiento de las disoluciones
patrn. :tra es cuando se re#uieren cantidades de reactivo pe#ue8as, si se eli%e adecuadamente
la intensidad de corriente se pueden introducir microcantidades de una sustancia con facilidad y
eactitud. Estas valoraciones estn su%etas a 9 fuentes de error&
.. 6ariacin de la intensidad de corriente durante la electrlisis
<. 4esviacin del proceso del .++N de e2cacia en la corriente
,. Error en la medida de la intensidad de corriente
=. Error en la medida del tiempo
9. Error de valoracin de"ido a la diferencia entre el punto de e#uivalencia y el punto 2nal.
(idem en volumtricos)
Aaloraciones culomimtricas autom8ticas& este mtodo se adapta fcilmente a las
valoraciones automticas. La mayora utiliza el punto 2nal potenciomtrico.
Captulo 06: Introduccin a las separaciones cromato'r8Gcas
Las separaciones analticas se realizan en la mayora de los casos por cromatografa y
electroforesis, en especial las mezclas comple%as y multicomponentes. Las especies separadas
aparecan como "andas coloreadas, de a( su nom"re.
La muestra se desplaza con una fase mvil, #ue puede ser un gas, un l#uido o un $uido
supercrtico. Esta fase mvil se (ace pasar a travs de una fase estacionaria con la #ue es
inmisci"le, y #ue se 2%a a una columna o a una super2cie slida. Las dos fases se eligen de tal
forma, #ue los componentes de la muestra se distri"uyan de modo distinto entre las dos fases.
'#uellos componentes #ue son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el $u%o de la fase mvilH por el contrario, los componentes #ue se unen
d"ilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. 7omo consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se separan en "andas o zonas discretas #ue pueden
analizarse cualitativa yDo cuantitativamente.
*e pueden clasi2car de dos modos. El primero tiene en cuenta la forma en la #ue las fases se
ponen en contacto y se divide en cromatograf)a en columna (un tu"o estrec(o contiene la fase
estacionaria y se (ace pasar la fase mvil por presin) y cromatograf)a en plano (la fase
estacionaria se 2%a so"re una placa plana y la mvil se desplaza a travs de ella por capilaridad o
gravedad). La otra clasi2cacin se "asa en el tipo de fase mvil y estacionaria y en la clase de
e#uili"rios implicados en la transferencia de los solutos entre las fases. Eiste la cromatograf)a
de gases, cromatograf)a de l)quidos y cromatograf)a de 0uidos supercr)ticos.
Cromato'rafa de elucin en columna: la elucin implica el transporte de una especia a
travs de una columna por la adicin continua de nueva fase mvil. La introduccin de fase
mvil adicional (eluyente) (ace #ue la fase mvil #ue contiene una parte de la muestra avance
por la columna, donde tiene lugar un posterior reparto entre la fase mvil y las porciones frescas
de fase estacionaria a las #ue accede. 'l mismo tiempo tiene lugar una distri"ucin en entre el
disolvente nuevo y la fase estacionaria en el lugar en el #ue inicialmente se u"ica"a la muestra.
El movimiento de los solutos slo ocurre en la fase mvil, por ello la velocidad media a la #ue
una zona de soluto migra en la columna depende de la fraccin de tiempo #ue reside en esta
fase. Esta fraccin es pe#ue8a para las sustancias #ue son retenidas fuertemente por la fase
estacionaria y es grande cuando ms pro"a"le es la retencin en la fase mvil. El aislamiento de
las especies separadas se lleva a ca"o (aciendo pasar su2ciente cantidad de fase mvil a travs
de la columna (asta #ue las "andas individuales salen de ella, pudiendo as detectarse o
recogerse.
La dilucin del analito acompa8a esas separaciones. El tama8o de la fran%a original #ue contiene
los analitos es ms pe#ue8o #ue las dos zonas #ue llegan al detector, lo #ue muestra la dilucin.
Los detectores de"en ser ms sensi"les #ue los #ue seran necesarios si el proceso de
separacin no fuese imprescindi"le.
*i se registra la se8al del detector en funcin del tiempo o del volumen de la fase mvil a8adido
se o"tienen una serie de picos. Este gr2co se denomina cromatograma. ' posicin de los picos
en el e%e del tiempo permite identi2car los componentes de la muestraH las reas "a%o los picos
proporcionan una medida cuantitativa de la cantidad de cada componente.
El aumento del tiempo aumenta la distancia entre las dos "andas, pero
al mismo tiempo tiene lugar un ensanc(amiento de am"as zonas, lo
#ue disminuye la e2cacia de la columna. *i "ien el ensanc(amiento es
inevita"le se pueden encontrar condiciones en las #ue ocurra ms
lentamente #ue la separacin de "andas. En el segundo caso de la
2gura se (an modi2cado las condiciones y el primer componente
avanza a ms velocidad #ue el segundo. En el tercer caso se
disminuyeron las velocidades y el ensanc(amiento de zona para las dos
especies.
Aelocidades de mi'racin de los solutos: la e2cacia depende, en parte, de las velocidades
relativas con las #ue eluyen las dos especies. Estas velocidades estn determinadas por la
magnitud de las constantes de los e#uili"rios.
7onstantes de distri"ucin (M)& tam"in denominado razn de distri"ucin o coe2ciente de
distri"ucin . 4epende de la temperatura. ' mayor temperatura, M desciende ya
#ue el tiempo de retencin disminuye, y la concentracin en la fase mvil aumenta. La ecuacin
es aplica"le en cromatografa lineal, donde los picos son gaussianas simtricas y los tiempos de
retencin son independientes de la cantidad de analito inyectado.
;iempos de retencin& El tiempo #ue transcurre despus de la inyeccin de la muestra
(asta #ue el pico de la concentracin del analito alcanza el detector se denomina tiempo de
retencin (tB). El tiempo muerto (t@) es el necesario para #ue las especies no retenidas alcancen
el detector. La velocidad de migracin de estas especies coincide con la velocidad promedio del
movimiento de la fase mvil.
?actor de retencin (PV)& , suele variar entre < y .+. 7uando es muc(o
menor #ue la unidad, la velocidad es tan rpida #ue es difcil determinar los tiempos de
retencin. 7uando es del orden de <+ o ,+ los tiempos son muy largos y las "andas se
ensanc(an.
?actor de selectividad& . @e indica cun separados estn relativamente los dos
picos.
Ensanchamiento de anda " eGcacia de la columna: la reduccin del ensanc(amiento
me%ora la e2cacia de la columna.
?orma de los picos& se aseme%an a Aaussianas (curvas de error normal). Esto se puede
atri"uir a la com"inacin aditiva de los movimientos aleatorios de las numerosas molculas de
soluto en la "anda cromatogr2ca. La anc(ura de una "anda aumenta a medida #ue se mueve a
travs de la columna. La anc(ura de la zona est relacionada directamente con el tiempo de
permanencia en la columna e inversamente con la velocidad a la #ue $uye la fase mvil.
@todos para descri"ir la e2cacia de la columna& se utilizan la altura de plato (H) y el
n)mero de platos (5). 5TLDH. La e2cacia aumenta cuanto mayor es el n)mero de platos y cuanto
menor es la altura de plato.
6aria"les cinticas #ue in$uyen en el
ensanc(amiento de "anda&
9n0uencia del caudal de la fase mvil& H pasa
por un valor mnimo (o mimo en e2cacia) a
"a%os caudales. Los mnimos en 7L se dan a
caudales "astante menores #ue en 7A. Esta
gr2ca es la representacin de la ecuacin de
van 4eemter. Las velocidades lineales de la fase
mvil en 7L son menores #ue las de 7A. Esto
signi2ca #ue las separaciones en 7A se
completan en tiempos menores. H es al menos
un orden menor en 7L, pero eso se contrarresta
ya #ue es poco prctico emplear columnas ms
largas de los <9 a 9+ cm de"ido a la elevada
cada de presin #ue se producen (7A& 9+m o ms). 7omo consecuencia en 7A se
realizan separaciones ms rpidas y con mayor e2cacia (aun#ue am"as no se dan
necesariamente de forma simultnea)
"elacin entre la altura de plato 1 las variables de la columna: Ecuacin de van
4eemter
A2 Trmino del camino mIltiple: el ensanc(amiento de "anda surge, en parte, de"ido a la
multitud de caminos por los cuales las molculas pueden caminar a travs de la columna rellena
(el tiempo tam"in es varia"le). *e denomina tam"in difusin en remolino y es directamente
proporcional al dimetro de las partculas #ue componen el relleno de la columna. !uede ser
compensado por la difusin ordinaria. *i la velocidad de $u%o es muy pe#ue8a, las molculas no
se dispersan aprecia"lemente ya #ue se compensa por la difusin ordinaria. 7on velocidades
moderadas o elevadas, no se dispone de tiempo su2ciente para #ue se produzca el promediado
por difusin y por ello se o"serva ensanc(amiento de "anda de"ido a las diferentes longitudes
del camino.
#2 Trmino de difusin lon'itudinal: es una causa del ensanc(amiento de "anda por la #ue
los solutos difunden desde la zona central (mayor concentracin) (acia las regiones ms
diluidas, situadas por delante y por detrs del centro de la "anda, es decir, en el mismo sentido y
opuesto al $u%o de la fase mvil. Esta contri"ucin es inversamente proporcional a la velocidad
de la fase mvil. 7uanto ms alto es el caudal, ms "reve es el perodo de tiempo #ue el analito
reside en la columna, por lo #ue tiene menos tiempo para producirse esta difusin (acia los
etremos. Este efecto es muc(o menos pronunciado en AL (pendiente negativa de la gra2ca)
C2 CoeGcientes de transferencia de masa: siempre se tra"a%a en condiciones ale%adas del
e#uili"rio, por#ue se esta"lece muy lentamente. El ensanc(amiento de "anda por transferencia
de masa se de"e a la difusin #ue tiende a ocurrir perpendicularmente a la direccin del $u%o.
7uanto ms rpido se mueve la fase mvil, menos tiempo (ay para #ue se alcance el e#uili"rio
(res"ala), por ello est relacionado a la velocidad de la fase mvil. !ara #ue las molculas del
analito difundan desde el interior de las fases a la interfase se necesita un tiempo, #ue eplica
#ue se mantengan condiciones ale%adas del e#uili"rio. Las molculas #ue estn al frente son
arrastradas (acia adelante antes de #ue tengan tiempo de e#uili"rarse con la fase estacionaria.
Resumen de los mtodos para reducir el ensanchamiento:
4imetro de las partculas del relleno y dimetro de la columna.
7on fases mviles gaseosas, la difusin longitudinal se puede reducir disminuyendo la
temperatura y as el coe2ciente de difusin 4m. *e tienen alturas de plato menores a
"a%as temperaturas.
=ptimi:acin de la columna: una separacin se optimiza variando las condiciones
eperimentales (asta #ue los componentes de una mezcla se separan completamente en el
menor tiempo posi"le. Los eperimentos de optimizacin tienen como o"%etivos (.) reducir el
ensanc(amiento de "anda o "ien (<) modi2car las velocidades relativas de migracin de los
componentes (variando PV y Y).
Besolucin de la columna& constituye una medida cuantitativa de su capacidad para
separar dos analitos. !ara una fase estacionaria dada, la resolucin puede me%orarse alargando
la columna, aumentando as el n)mero de platos. 3na consecuencia negativa es el incremento
del tiempo re#uerido para la separacin.
'l "uscar las condiciones ptimas para conseguir una separacin adecuada de"e tenerse en
cuenta #ue los parmetros fundamentales PV, Y y 5 (o H) se pueden a%ustar ms o menos
independientemente. La manera ms fcil de modi2car PV y Y es variando la temperatura o la
composicin de la fase mvil, aun#ue tam"in se puede conseguir cam"iando el relleno de la
columna. Es posi"le cam"iar 5 modi2cando la longitud de la columna y H po alteracin del
caudal de la fase mvil, el tama8o de la partcula de relleno (disminuyndolo), la viscosidad de la
fase mvil (reduciendo) y el espesor de la pelcula del l#uido a"sor"ido #ue constituye la fase
estacionaria.
6ariacin de Y& cuando se aproima a la unidad, optimizar PV y aumentar 5 no suele ser
su2ciente para conseguir una separacin satisfactoria de dos solutos en un tiempo razona"le. *e
tiene #ue "uscar un procedimiento para aumentar Y mientras se mantiene PV en el intervalo
ptimo (< a .+). Las opciones son& (.) cam"iar la composicin de la fase mvil, incluyendo los
cam"ios en el pH (para cidos o "ases ioniza"les), (<) cam"iar la temperatura de la columna (su
incremento aumentan PQ pero tiene poca variacin en Y, ecepto en cromatografa de
intercam"io inico), (,) cam"iar la naturaleza de la fase
estacionaria, (=) utilizar efectos #umicos especiales (incorporar a
la fase estacionaria una especie #ue forme comple%os o #ue
interact)e de otra forma con alg)n componente de la muestra).
6ariacin de PV& Aeneralmente los incrementos en el factor
de retencin puede me%orar la separacin, aumentando la
resolucin pero a epensas del tiempo de elucin.
El prolema 'eneral de la elucin:
una manera de solucionar este
pro"lema es cam"iar las condiciones
#ue determinan los valores de PQ
mientras tiene lugar la separacin. 'l
principio pueden ser las
correspondientes al (a), luego al (c) y
por )ltimo al ("). en AL las variaciones
de PQ se o"tienen por variaciones en la
composicin de la fase mvil durante la
elucin (elucin con gradiente o
programacin del disolvente). En 7A el
incremento de la temperatura
(programacin de la temperatura)
permite conseguir las condiciones
ptimas para las separaciones.
A(!ICACI=4E&: Es el principal mtodo para la separacin de especies #umicas estrec(amente
relacionadas entre s. *e puede emplear para la identi2cacin cualitativa (limitada) y para la
determinacin cuantitativa de las especies.
An8lisis cualitati*o: slo proporciona el tiempo de retencin o su posicin en la fase
estacionaria tras cierto perodo de elucin. La cantidad de informacin es pe#ue8a comparada
con otros mtodos (>B, B@5). La longitud de onda espectral o los datos de frecuencia de los
espectros suelen determinar con muc(a ms precisin #ue los tiempos de retencin. La
con2rmacin de la identidad re#uiere la investigacin #umica o espectral de los componentes
aislados. *i "ien no conducen a una identi2cacin positiva de las especies presentes en una
muestra, da la evidencia segura de la ausencia de ciertos compuestos. *i no aparece un pico con
el mismo tiempo de retencin #ue el patrn en las mismas condiciones, se puede asumir #ue el
compuesto en cuestin est ausente.
An8lisis cuantitati*o: rapidez, sencillez, "a%o costo y gran aplica"ilidad como (erramienta de
separacin son motivo de su gran crecimiento. Los mtodos cuantitativos se "asan en la
comparacin de la altura o del rea del pico del analito con la de uno o ms patrones.
'nlisis "asados en la altura de pico& se o"tiene uniendo las lneas "ase a cada lado del
pico por una lnea recta y midiendo la distancia vertical desde esta lnea al pico. Las alturas
estn inversamente relacionadas con las anc(uras de pico. !or lo #ue slo se o"tienen resultados
eactos si las variaciones en las condiciones de la columna no alteran las anc(uras de pico. Las
varia"les #ue de"en controlarse estrec(amente son la temperatura de la columna, el caudal del
eluyente y la velocidad de inyeccin de la muestra. *e miden ms fciles y para picos estrec(os
son muy eactos.
'nlisis "asados en las reas de los picos& el rea del pico es independiente de los efectos
de ensanc(amiento. *on un parmetro analtico ms adecuado.
Caliracin " patrones: el mtodo ms sencillo para el anlisis cuantitativo implica la
preparacin de una serie de disoluciones de patrn de composicin conocidas parecida a la
muestra. La fuente ms importante de error es la incertidum"re en el volumen de la muestra, a
veces, la velocidad de inyeccin de la muestra es tam"in un factor a considerar.
6todo del patrn interno: consigue una mayor precisin de"ido a #ue se evitan las
incertidum"res asociadas a la inyeccin de la muestra. *e introduce en cada estndar y en la
muestra una cantidad medida del patrn interno y la relacin de las reas del analito y del
patrn interno sirve como parmetro analtico.
6todo de normali:acin de 8reas: evita las incertidum"res asociadas con la inyeccin de la
muestra. Es necesario #ue se produzca la elucin completa de todos los componentes de la
muestra. Es difcil conseguir condiciones en las #ue todos los componentes de la mezcla eluyan
de la columna en un perodo de tiempo razona"le, por ello tiene aplicacin limitada este mtodo.
Captulo 0$: Cromato'rafa de 'ases
La muestra se volatiliza y se inyecta en la ca"eza de una columna cromatogr2ca. La elucin se
produce por el $u%o de una fase mvil de un gas inerte #ue no interacciona con las molculas del
analito, slo lo transporta a travs de la columna. Eisten dos tipos de cromatografa de gases&
cromatografa gasEslido (7A7) y cromatografa gasEl#uido (7ALT7A). La 7A* produce la
retencin de los analitos en una fase estacionaria slida como consecuencia de la adsorcin
fsica. ;iene una aplicacin limitada (a especies gaseosas de "a%o !@) de"ido a la retencin
semipermanente de las molculas activas o polares y a la o"tencin de picos de elucin con
colas muy signi2cativas. La 7AL se "asa en la distri"ucin del analito entre una fase mvil
gaseosa y una fase l#uida inmovilizada so"re la super2cie de un slido inerte.
CR=6AT=JRA%@A JA&K!@D5ID=
' 2nes de tener en cuenta los efectos de la presin y de la temperatura es ms aconse%a"le
utilizar los vol:menes de retencin en vez de los tiempos de retencin. El caudal de gas a la
salida de la columna se mide con un medidor de pompas de %a"n. ;anto 6B como 6@ dependen
de la presin promedio en el interior de la columna, cuyo valor es intermedio entre la presin de
entrada y la presin de salida (atm).
6g& volumen de retencin espec2co, a una temperatura dada depende solamente de la
constante de distri"ucin del soluto y de la densidad del l#uido #ue constituye la fase
estacionaria. Es un parmetro )til para la identi2cacin de la especie.
Efecto del caudal de la fase m*il: de"ido a #ue las velocidades de difusin longitudinal son
muc(o mayores en los gases, el trmino KDu es ms importante es esta cromatografa.
I4&TR56E4T=&
En esta disposicin el caudal de
gas se divide antes de entrar en
la columna. Este tipo de
disposicin se utiliza cuando el
detector empleado mide un
cam"io en las propiedades de la
corriente del gas por la presencia
de las molculas de analito. 5o
se utiliza con otros detectores.
La introduccin de los
integradores electrnicos y
e#uipos de procesamiento de
datos (F+), la utilizacin de
ordenadores para el control
automtico de la mayora de los
parmetros instrumentales (/+)
resultaron en instrumentos de
muy alto rendimiento a un coste
moderado.
Jas portador: de"en ser #umicamente inertes& (elio, nitrgeno e (idrgeno. La eleccin de los
gases muc(as veces est determinada por el tipo de detector #ue se utiliza. El sistema de gas
portador contiene un tamiz molecular para eliminar el agua y otras impurezas. Los caudales se
controlan mediante un regulador de presin de dos niveles colocado en el cilindro de gas y alg)n
tipo de regulador de presin instalado en el cromatgrafo. .+J!eJ9+psi lo #ue conduce a
caudales de <9 a .9+ mlDmin en columnas rellenas y de . a <9 mlDmin en columnas a"iertas
(capilares). *e supone #ue los caudales sern constantes si la presin de entrada se mantiene
constante. 7audales se pueden determinar por rotmetro o ms eacto por un medidor de
pompas de %a"n.
&istema de in"eccin de la muestra: la e2cacia de la columna re#uiere #ue la muestra sea
de un tama8o adecuado y #ue sea introducida como un Ztapn[ de vapor. La inyeccin lenta de
muestras demasiado grandes provoca un ensanc(amiento de las "andas y una po"re resolucin.
El mtodo ms com)n implica el uso de una micro%eringa para inyectar una muestra l#uida o
gaseosa a travs de un diafragma o Zseptum[ de goma de silicona en una cmara de
vaporizacin instantnea (9+C7 por encima del punto de e" del menos voltil) situada en la
ca"eza de la columna. !ara columnas ordinarias, el tama8o de la muestra vara desde unas
pocas dcimas de microlitro a <+\L. las columnas capilares eigen muestras muc(o menores (.+
E
,
\L) y se emplea un divisor de la muestra #ue permite pasar a la ca"eza de la columna
solamente una pe#ue8a fraccin de la muestra, desec(ndose el resto. Las muestras slidas se
introducen como disoluciones (o viales).
ConG'uracin de la columna " del horno para la columna: se utilizan las columnas
rellenas y las abiertas o capilares7 siendo las )ltimas ms e2caces y rpidas. Las columnas van
desde menos de < (asta 9+ m de longitud o ms. Estn construidas con acero inoida"le, vidrio,
slice fundida o te$n. 5ormalmente se con2guran como (elicoides (dimetros de .+ a ,+cm) a
2n de poder colocarse en el interior de un (orno termostatizado.
La temperatura de la columna es una varia"le importante a regular, por ello se introduce dentro
de un (orno de temperatura controlada. La temperatura ptima de la columna depende del
punto del punto de e"ullicin de la muestra y del grado de separacin re#uerido. En la prctica,
con una temperatura igual o ligeramente superior al punto de e"ullicin promedio de la muestra
se o"tienen tiempos de elucin razona"les. *i los componentes presentar un amplio intervalo de
temperaturas se emplea una programacin de temperatura, con lo #ue se aumenta la
temperatura "ien de forma continua o por etapas al mismo tiempo #ue tiene lugar la separacin.
En general la resolucin ptima se asocia con una temperatura mnima, en contrapartida, la
reduccin de temperatura produce un aumento en el tiempo de elucin y por lo tanto del tiempo
necesario para completar un anlisis.
&istemas de deteccin: se pueden acoplar a espectrmetros de masas y a espectrofotmetros
de >B con el 2n de no slo detectar la aparicin de los picos, sino tam"in para identi2carlos. Las
caractersticas del detector ideal son&
.. 'decuada sensi"ilidad& en general la sensi"ilidad de los detectores actuales se encuentran
en el intervalo de .+
E.9
a .+
E/
g solutoDs.
<. Kuena esta"ilidad y reproduci"ilidad.
,. Bespuesta lineal para los solutos #ue se etienda a varios rdenes de magnitud.
=. >ntervalo de temperaturas de tra"a%o comprendido desde la temperatura am"iente (asta
al menos =++C7.
9. ;iempo de respuesta corto #ue sea independiente del caudal.
-. 'lta 2a"ilidad y mane%o sencillo.
F. Bespuesta seme%ante para todos los solutos o por el contrario, una respuesta selectiva y
altamente predeci"le para uno o ms tipos de solutos.
/. 5o destructivo de la muestra.
4etectores de ionizacin de llama& es el detector ms etensamente utilizado y por lo general
el ms aplica"le en 7A. El e$uente de la columna se mezcla con el (idrgeno y con aire para
luego encenderse elctricamente. La mayora de los compuestos orgnicos, cuando se
pirolizan a la temperatura de una llama (idrgenoDaire, producen iones y electrones #ue
pueden conducir la electricidad a travs de la llama. 7uando se aplica una diferencia de
potencial entre el etremo del #uemador y un electrodo colector situado por encima de la
llama, la corriente #ue resulta se dirige para su medida (acia un ampli2cador operacional de
alta impedancia.
La ionizacin en la llama de compuestos de 7 no es un
proceso "ien esta"lecido, aun#ue se o"serva #ue el
n)mero de iones #ue se produce es proporcional al
n)mero de tomos de 7 reducidos en la llama. Besponde
entonces al n)mero de tomos de 7 #ue entra en el
detector por unidad de tiempo, por ello es ms "ien un
sistema sensi"le a la masa. 'lgunos grupos funcionales no
originan iones en la llama (car"onilo, alco(ol, amina). Es
insensi"le a los gases no com"usti"les (H<:, 7:<, *:<, 5:),
lo #ue lo (acen uno de los detectores ms utilizados para
compuestos orgnicos. La insensi"ilidad (acia el agua lo
(ace particularmente )til para la deteccin de
contaminantes en muestras naturales de agua.
/enta5as: elevada sensi"ilidad (.+
E.,
gDs), gran intervalo de
respuesta lineal (.+
F
) y un "a%o ruido. Es resistente y fcil
de utilizar.
&esventa5a: destructivo de la muestra
4etectores de conductividad trmica& se "asa en los cam"ios en la conductividad trmica de
la corriente de gas ocasionados por la presencia de las molculas de analito. *e denomina
catarmetro. El sensor consiste en un elemento calentado elctricamente cuya temperatura,
a una potencia elctrica constante, depende de la conductividad trmica del gas circundante.
La resistencia del (ilo o del termistor da una medida de la conductividad trmica del gas. *e
emplean dos pares de elementos, uno de los pares se coloca en el $u%o del e$uente de la
columna y el otro en la corriente de gas previa a la cmara de inyeccin de la muestra. Las
resistencias de los pares de detectores gemelos se comparan entre s. Las conductividades
trmicas del (elio y del (idrgeno son de - a .+ veces mayores #ue la mayora de los
compuestos orgnicos, de modo #ue con pe#ue8a cantidad de materia orgnica se logra una
disminucin grande de la conductividad trmica del e$uente de la columna y el detector
eperimenta un marcado aumento de la temperatura. *e usa (idrgeno o (elio como gas
portador para o"tener una "uena sensi"ilidad.
/enta5as: sencillez, amplio intervalo lineal (.+
9
), respuesta universal a especies orgnicas e
inorgnicas y carcter no destructivo.
&esventa5a: sensi"ilidad relativamente "a%a (.+
E/
gsolutoDml gas portador). Esto (ace
imposi"le la utilizacin de columnas capilares, de"ido al pe#ue8o tama8o con el #ue operan.
4etectores de captura de electrones& es ampliamente utilizado en los anlisis de muestras
medioam"ientales de"ido a su selectividad para detectar compuestos #ue contienen
(algenos. El e$uente de la columna pasa por un emisor ](ni#uelE-,). 3n electrn del emisor
provoca la ionizacin del gas portador y la produccin de una rfaga de electrones. En
ausencia de especies orgnicas se produce una corriente constante, la cual disminuye
signi2cativamente en presencia de molculas orgnicas #ue tienden a capturar electrones. La
respuesta no es lineal, a no ser #ue el potencial a travs del detector se apli#ue en forma de
impulsos.
/enta5as& es de respuesta selectiva, siendo muy sensi"le a molculas con grupos funcionales
electronegativos. ;iene aplicacin en la deteccin y determinacin de insecticidas clorados.
*on altamente sensi"les y no alteran la muestra de manera signi2cativa.
&esventa5a& su intervalo de respuesta lineal se limita a uno o dos rdenes de magnitud.
Columnas aiertas o capilares: la fase estacionaria era una pelcula uniforme de l#uido de
unas pocas dcimas de espesor #ue recu"ra uniformemente el interior del tu"o. *u demora en
la generalizacin se de"e a su capacidad limitada a muestras pe#ue8as, su fragilidad, algunos
pro"lemas mecnicos relacionados con la introduccin de la muestra y la conein de la columna
al detecto, di2cultades en la reproduci"ilidad del recu"rimiento de la columna, columnas mal
preparadas y de corta duracin, tendencia a o"struirse y patentes. Luego, muc(os de estos
de%aron de ser pro"lemas serios y se comenzaron a ofrecer en el mercado a un precio razona"le.
*on de dos tipos "sicos& columna a"ierta de pared recu"ierta (^7:;) y columna a"ierta
recu"ierta con soporte (*7:;). Las primeras son simples capilares con la pared interna
recu"ierta de fase estacionaria. En las segundas, la super2cie interna del capilar est revestida
de una capa delgada de material soporte (tierra diatomeas), conteniendo varias veces la fase
estacionaria y por lo tanto tienen una mayor capacidad de carga, pero menor e2cacia.
Las nuevas columnas ^7:; son columnas a"iertas de slice fundida (?*:;). ;ienen las paredes
muc(o ms delgadas #ue las e#uivalentes de vidrio. *on "astantes $ei"les y se pueden do"lar
en forma (elicoidal con un dimetro de algunos cm. *us venta%as son& resistencia fsica,
reactividad menor frente a los componentes de la muestra y $ei"ilidad. (,<+ y <-+ \m)
*e (an incorporado columnas megacapilares #ue admiten muestras de tama8o similar a los
empleados en las columnas rellena, pero tienen una e2cacia signi2cativamente mayor #ue esta
(y menor #ue las de dimetros ms pe#ue8os).
Columnas rellenas: la fase estacionaria era una pelcula delgada de l#uido adsor"ida en la
super2cie de un soporte slido inerte 2namente dividido. 'ctualmente se fa"rican con tu"o de
vidrio, metal, o de te$n, con una longitud de < a , m y un dimetro de < a = mm. *e rellenan
densamente con un material de relleno o soporte slido 2namente dividido y (omogneo #ue se
recu"re con una delgada capa de fase estacionaria l#uida.
@ateriales de soporte slidos& sirve para retener y u"icar la fase estacionaria l#uida de tal
forma #ue eista la mayor super2cie de contacto posi"le con la fase mvil. El soporte ideal
consiste en partculas esfricas, pe#ue8as y uniformes con una "uena resistencia mecnica y
una super2cie espec2ca de al menos .m
<
Dg. El material de"era ser inerte a elevadas ; y poder
(umectarse (omogneamente con la fase l#uida. El soporte ms utilizado es a partir de tierras
de diatomeas de procedencia natural.
;ama8o de partcula de los soportes& la e2cacia aumenta cuando disminuye el tama8o de
partcula del relleno. *in em"argo, la diferencia de presin #ue se re#uiere para mantener un
determinado caudal de gas portador vara inversamente con el cuadrado del dimetro de
partcula. 5o es conveniente tra"a%ar con S!G9+ psi .
Adsorcin sore los rellenos de la columna o paredes del capilar: uno de los pro"lemas
es la adsorcin de los analitos polares o polariza"les (alco(oles o (idrocar"uros aromticos)
so"re las super2cies de silicato de los materiales soporte de las columnas o las paredes del
capilar. 4a como resultado picos distorsionados los cuales se ensanc(an y a menudo presentan
una cola. *e produce como consecuencia de los grupos silanol #ue se forman en la super2cie
de"ido a la (umedad. Los materiales soporte pueden desactivarse por siliacin con
dimetilclorosilano (4@7*). Las columnas de slice fundida tienen menos pro"lemas de adsorcin.
%ase estacionaria: las propiedades desea"les son&
Ka%a volatilidad (idealmente el punto de e"ullicin del l#uido de"e ser al menos .++C7
mayor #ue la temperatura de tra"a%o mima de la columna).
Esta"ilidad trmica
_umicamente inerte
7aractersticas de disolvente tales #ue los valores de PQ y Y de los solutos a resolver estn
dentro de un intervalo conveniente.
El tiempo de retencin de un soluto en una columna depende de su constante de distri"ucin,
#ue a su vez est relacionado con la naturaleza #umica de la fase estacionaria. El l#uido
inmovilizado de"era originar diferentes coe2cientes de distri"ucin para los distintos solutos.
Estos coe2cientes no de"en ser ni etremadamente grandes (tB muy grandes), ni
etremadamente pe#ue8os (tB tan cortos #ue las separaciones son incompletas). !ara #ue tenga
un tB razona"le de"e presentar cierto grado de compati"ilidad (solu"ilidad) con la fase
estacionaria. Las fases estacionarias polares contienen grupos funcionales como `75, E7: y `:H.
Las fases del tipo (idrocar"onado y dial#uilsiloanos son no polares, mientras #ue las fases
polister son altamente polares. Entre los solutos polares se incluyen los alco(oles, cidos y
aminasH especies de polaridad intermedia son los teres, cetonas y alde(dos. Los (idrocar"uros
saturados son no polares. La polaridad de la fase estacionaria de"e ser parecida a la de los
componentes de la muestra. 7uando la igualdad es "uena, el orden de elucin viene
determinado por el punto de e"ullicin de los compuestos a eluir.
'lgunas fases estacionarias de uso etendido son&
%ase estacionaria Aplicaciones comunes
!olidimetilsiloano ?ase estacionaria no polar de uso generalH (idrocar"uros,
aromticos, polinucleares, frmacos, esteroides.
!oli(fenilmetildimetil)siloan
o (.+N fenil)
asteres mettilos de cidos grasosH compuestos (alogenados
!oli(fenilmetil)siloano (9+N
fenil)
?rmacos, esteroides, pesticidas, glicoles
!olietilenglicol bcidos li"res, alco(oles, teres
A(!ICACI=4E& JC!: Wuega dos papeles importantes& (.) como (erramienta de separacin
e2caz resulta inme%ora"le cuando se aplica a muestras orgnicas comple%as, a organometlicos y
a sistemas "io#umicos #ue sean especies voltiles o especies #ue pueden derivarse para dar
sustancias voltiles. (<) proporciona un medio para llevar a ca"o un anlisis. *e emplean los
tiempos o vol)menes de retencin para la identi2cacin cualitativa (limitada), mientras #ue las
alturas de los picos o sus reas dan informacin cuantitativa.
An8lisis cualitati*o: se utilizan como criterio de pureza de compuestos orgnicos. Los
contaminantes se mani2estan por la aparicin de picos adicionales., cuyas reas dan una
aproimacin del grado de contaminacin. Los tiempos de retencin de"eran servir como
identi2cacin de compuestos de una mezcla. !ero est limitada por el n)mero de varia"les #ue
de"en ser controladas para asegurar resultados reproduci"les. Es un medio ecelente para
con2rmar la presencia o ausencia de un supuesto componente en una mezcla, siempre #ue se
disponga un patrn.
cndice de retencin& ndice de Movats. Es un parmetro para identi2car solutos a partir de
los cromatogramas. Los alcanos normales son los patrones en los #ue se "asa la escala de
ndices de retencin. El >B para un alcano normal es .++ veces el nC de 7 del compuesto, sin
considerar el relleno de la columna, la temperatura u otras condiciones cromatogr2cas. En una
serie (omloga la gr2ca del logaritmo del tiempo de retencin a%ustado frente al n)mero de
tomos de 7 es lineal. !ermite predecir los tiempos de retencin para otras series (omlogas.
;iene la venta%a de "asarse en materiales de referencia disponi"les fcilmente #ue cu"ren un
amplio intervalo de puntos de e"ullicin.
An8lisis cuantitati*o
'coplamiento con mtodos espectroscpicos& proporcionan (erramientas para la
identi2cacin de los componentes de mezclas comple%as. *e aplica un detector selectivo para
controlar continuamente el e$uente de la columna. Be#uieren control de los instrumentos
mediante ordenador y el uso de una memoria para almacenar los datos espectrales y su
posterior presentacin como espectros y cromatogramas.
(romatograf)a de gases/espectrometr)a de masas&
El caudal de las columnas capilares
en general es su2cientemente "a%o
como #ue para la salida de la
columna pueda introducirse
directamente en la cmara de
ionizacin de un espectrmetro de
masas. En el caso de las columnas
rellenas y megacapilares se emplea
un separador de c(orro para
eliminar la mayor parte del gas
portador #ue acompa8a al analito.
*u rapidez y alta sensi"ilidad son
especialmente venta%osas. El
detector de masas ms simple para
7A es el detector de trampa de iones, en el cual los iones se generan por impacto de electrones
o por ionizacin #umica a partir de la muestra eluda y luego se mantienen en un campo de
radiofrecuencia. ' continuacin los iones atrapados se epulsan del rea de almacenamiento
(acia un detector multiplicador de electrones. La epulsin se controla de tal forma #ue es
posi"le un "arrido en funcin de la relacin masaDcarga. Este detecto es compacto y ms "arato
#ue los instrumentos de cuadrupolo.
*e (an utilizado para la identi2cacin de cientos de componentes #ue estn presentes en
sistemas naturales y "iolgicos. !or e%emplo (an permitido caracterizar los componentes
responsa"les del olor y del sa"or en los alimentos, identi2car contaminantes del agua, llevar a
ca"o diagnsticos mdicos "asados en componentes del aliento y estudios so"re los
meta"olismos de frmacos.
Captulo 09: Cromato'rafa de l?uidos de alta eGcacia
*e divide en&
.. (romatograf)a de reparto& especies poco polares no inicas y series (omlogas
<. (romatograf)a de adsorcin o cromatograf)a l)quido-slido: especies no polares, ismeros
estructurales
,. (romatograf)a inica& especies inicas de !@ pe#ue8o
=. (romatograf)a de e+clusin por tama4o o cromatograf)a en geles: solutos con !@
superiores a .+.+++
H!7L (cromatografa de l#uidos de alta e2cacia)& tama8os de partculas del orden de , a .+ \m,
re#uiere una instrumentacin so2sticada para poder tra"a%ar a altas presiones. Es la tcnica de
separacin ms ampliamente utilizada de"ido a su sensi"ilidad, su fcil adaptacin para las
determinaciones cuantitativas eactas, su idoneidad para la separacin de especies no voltiles
o termol"iles y gran aplica"ilidad a sustancias de inters en industria y ciencia.
EGcacia de la columna
Efectos del tama8o de partcula del relleno& la e2cacia me%ora cuando disminuye el
tama8o de partcula. Estas gr2cas no presentan el mnimo #ue predice van 4eemter, ya #ue
ocurre a caudales demasiado "a%os para las aplicaciones prcticas.
Ensanc(amiento de "anda etraEcolumna& tiene lugar cuando se transporta el soluto a
travs de tu"os como los #ue se utilizan en los sistemas de inyeccin, en los detectores y en los
tu"os #ue conectan los distintos componentes del sistema. !roviene de las diferencias en la
velocidad de $u%o de las capas de l#uido adyacentes a las paredes del tu"o y las del centro. En
columnas de pe#ue8o dimetro se (ace "astante importante.
Efecto del tama8o de muestra& el me%or comportamiento es el de los rellenos de fase
unida #umicamente en
fase inversa.
I4&TR56E4TACI74&
!ara alcanzar un caudal
de eluyente razona"le
con rellenos de tama8o
de partcula entre < y .+
\m se re#uieren
presiones de algunos
cientos de Pgf. 7omo
consecuencia de estas
elevadas presiones, el
e#uipo necesario para la
H!L7 tiende a ser ms
so2sticado y caro.
Recipientes para la fase m*il " sistemas para el tratamiento de disol*entes& estn
e#uipados con recipientes de vidrio o de acero inoida"le conteniendo <++ a .+++ ml de
disolvente. *e e#uipan con un sistema para eliminar los gases disueltos (:< y 5< #ue inter2eren
formando "ur"u%as en la columna, ensanc(ando la "anda y en sistemas de deteccin). !ueden
consistir en "om"eo por vaco, destilacin, o un purga #ue arrastra los gases fuera de la solucin
mediante 2nas "ur"u%as de un gas inerte de "a%a solu"ilidad. ;am"in contienen un dispositivo
para la 2ltracin del polvo y de las partculas slidas en suspensin para evitar #ue da8en la
"om"a o a los sistemas de inyeccin y o"turen la columna. 3na separacin #ue utiliza solo un
disolvente de composicin constante se denomina una elucin isocr$tica. La e2cacia de la
separacin se aumenta con elucin con gradiente, donde se utilizan dos o tres sistemas
disolventes con una polaridad signi2cativamente distinta. 3na vez #ue comienza la elucin se
vara la relacin de los disolventes de forma programada, o continua o mediante etapas
escalonadas. 'corta el tiempo de separacin sin sacri2car la resolucin de los picos.
&istemas de omeo: los re#uisitos incluyen&
Aeneracin de presiones por encima de -+++ psi
?lu%o li"re de pulsaciones
>ntervalo de caudales de +.. a .+ mlDmin
7ontrol y reproduci"ilidad del caudal me%or del +.9N relativo
7omponentes resistentes a la corrosin
Kom"as recprocas& son las #ue ms se utilizan. 7onsisten en una pe#ue8a cmara en la #ue
el disolvente es impelido por el movimiento vaivn de un pistn accionado por un motor de
arrastre. 4os vlvulas con cierre "ola controlan el $u%o (acia adentro y (acia afuera de un
cilindro.
&esventa5a& producen un $u%o pulsado #ue se (a de amortiguar dado #ue su presencia se
mani2esta como ruido en la lnea "ase del cromatograma.
/enta5as& pe#ue8o volumen interno, altas presiones de salida, fcil adaptacin a la elucin
con gradiente y caudales constantes, #ue son prcticamente independientes de la
contrapresin de la columna y de la viscosidad del disolvente.
Kom"as de desplazamiento& venta%as& el $u%o tiende a ser independiente de de la viscosidad y
contrapresin y es li"re de pulsaciones. 4esventa%as& capacidad de disolvente limitada e
incomodidad para el cam"io de disolventes.
Kom"as neumticas& venta%as& "aratas y eentas de impulsos. 4esventa%as& limitada
capacidad y presin de salida y el caudal depende de la viscosidad del disolvente y de la
contrapresin de la columna. 5o son utiliza"les en la elucin con gradiente y estn limitadas
a presiones menores de <.+++ psi.
&istemas de in"eccin de la muestra: el factor limitante en la precisin suele ser la
reproduci"ilidad con #ue se puede introducir la muestra en la columna. La so"recarga trae el
ensanc(amiento de las "andas, por ello los vol)menes son muy pe#ue8os, de unas pocas
dcimas de \l a 9++ \l. *e tiene #ue introducir la muestra sin despresurizar al sistema. El medio
ms simple y antiguo era la inyeccin con %eringa a travs de un elastmero #ue cierra
(ermticamente. Es sencillo pero su reproduci"ilidad es rara vez me%or de un < o ,N.
'ctualmente el mtodo ms usado utiliza "ucles de muestra. *on normalmente una parte
integrada del e#uipo y (ay "ucles intercam"ia"les #ue permiten la eleccin de tama8os de
muestra desde 9 a 9++ \l. *e pueden introducir a presiones de (asta F.+++ psi.
Columnas: se construyen con tu"os de acero inoida"le de dimetro interno uniforme aun#ue
se encuentran tu"os de vidrio de paredes resistentes tam"in (!J-++psi)
7olumnas analticas& tienen una longitud entre .+ y ,+ cm. La forma (elicoidal presenta
una prdida de e2cacia. *uelen ser rectas. El dimetro interno es a menudo de = a .+ nm y los
tama8os de partculas ms comunes son de 9 o .+ \m. La ms utilizada es de <9cm de longitud,
=.- nm de dimetro y partculas de 9 \m. otras ms rapidas, con menores dimensiones
presentan la venta%a del mnimo consumo de disolvente, lo cual es clave de"ido al alto costo #ue
surge de su pureza.
!recolumnas& se colocan adelante para aumentar la vida de la columna analtica,
eliminando no slo la materia en suspensin y los contaminantes del disolvente sino tam"in los
componentes de la muestra #ue se unen irreversi"lemente a la fase estacionaria. En
cromatografa l#uidoEl#uido sirve para saturar la fase mvil con la fase estacionaria. La
composicin del relleno de esta columna de"era ser seme%ante al de la analtica, pero mayor
tama8o de partcula para minimizar la perdida de presin.
7olumnas termostatizadas& se usan para cuando se re#uiere controlar la temperatura de la
columna para me%orar el cromatograma. @uc(as llevan (ornos para controlarla pero tam"in se
pueden colocar en camisas con agua #ue provena de un "a8o a temperatura constante.
Tipos de rellenos de la columna:
!elicular& "olas de vidrio o de polmero, no porosas y esfricas (dimetro de ,+ a =+ \m),
en cuyas super2cie se deposita una capa delgada y porosa de slice, al)mina. !ara algunas
aplicaciones se aplica un recu"rimiento adicional, constituido por una fase estacionaria l#uida
#ue se mantiene 2%a por adsorcin. *e utilizan en las precolumnas y no en las analticas.
4e partcula porosa& formadas por micropartculas porosas (dimetro de , a .+ \m) y con
la menor dispersin posi"le con respecto al tama8o determinado. *on de slice, al)mina. Las de
*i se preparan aglomerando partculas de slice de tama8os inferiores #ue dan dimetros
mayores muy uniformes. @uc(as veces se cu"ren con pelculas orgnicas.
Detectores: *on de dos tipos "sicos& los #ue se "asan en la medida de una propiedad de la
disolucin responden a una propiedad del e$uente (ndice de refraccin, constante dielctrica,
densidad). Los #ue se "asan en una propiedad del soluto responden a alguna de las propiedades
del soluto (a"sor"ancia, $uorescencia o corriente lmite #ue no son in(erentes a la fase mvil).
Las caractersticas del detector ideal son&
.. 'decuada sensi"ilidad& en general la sensi"ilidad de los detectores actuales se encuentran
en el intervalo de .+
E.9
a .+
E/
g solutoDs.
<. Kuena esta"ilidad y reproduci"ilidad.
,. Bespuesta lineal para los solutos #ue se etienda a varios rdenes de magnitud.
=. 6olumen mnimo a 2n de reducir el ensanc(amiento de "anda.
9. ;iempo de respuesta corto #ue sea independiente del caudal.
-. 'lta 2a"ilidad y mane%o sencillo.
F. Bespuesta seme%ante para todos los solutos o por el contrario, una respuesta selectiva y
altamente predeci"le para uno o ms tipos de solutos.
/. 5o destructivo de la muestra.
4etectores de a"sor"ancia& para minimizar el ensanc(amiento de "anda etraEcolumna el
volumen de las cu"etas es el menor posi"le (. a .+ \l), pero se limitan a !J-++psi. La
mayora son dispositivos de do"le (az #ue utilizan detectores fotoelctricos contrastados.
;am"in se utilizan de un solo (az y se almacenan las medidas en la memoria de un
ordenador.
4etectores de a"sor"ancia 36 con 2ltros& los ms simples son los fotmetros de 2ltros con
una lmpara de mercurio como fuente. Lo ms com)n es aislar la lnea intensa a <9= nm
por medio de 2ltros. *e usa en forma restringida para los solutos #ue a"sor"en en esas
longitudes de onda (<9+, ,.,, ,,=, ,-9, <9=). Las fuentes de deuterio o 2lamento de
1olframio con 2ltros de interferencia tam"in proporcionan una forma sencilla de detectar
las especies a"sor"entes. 'lgunos e#uipos tienen discos porta2ltros #ue pueden
intercam"iarse rpidamente a medida #ue eluyen los componentes.
4etectores de a"sor"ancia 36 con monocromadores& consisten en un espectrofotmetro
de "arrido con una red entre sus componentes pticos. Los ms potentes son los
instrumentos de diodos en serie.
4etectores de ndice de refraccin& el disolvente en su camino (acia la columna pasa a
travs de una mitad de la cu"eta y eluyente de la columna pasa por la otra mitad. Los dos
compartimientos estn separados por una placa de vidrio montada a un ngulo tal #ue si
las dos disoluciones di2eren en el ndice de refraccin se produce una desviacin del (az
incidente. El desplazamiento del (az con respecto a la super2cie fotosensi"le del detector
provoca una variacin de la se8al de salida, la cual una vez ampli2cada y registrada,
proporciona el cromatograma.
/enta5as& son detectores universales (responden a casi todos los solutos). *on 2a"les y no
dependen del caudal.
&esventa5as& son muy sensi"les a los cam"ios de temperatura (se tienen #ue mantener
casi constantes). 5o son tan sensi"les como otros detectores.
4etectores electro#umicos& se "asan en la voltamperometra, la culom"imetra y la
conductimetra. /enta5as& elevada sensi"ilidad, sencillez, adecuacin y etensa
aplica"ilidad.
4eteccin por espectrometra de masas& un pro"lema en el acoplamiento es el contraste
#ue eiste entre o vol)menes relativamente grandes de disolvente para H!L7 y los
re#uerimientos de vaco en la de masas.
CR=6AT=JRA%@A DE RE(ART=: es el ms utilizado. *e aplica a compuestos polares, no
inicos de "a%a a moderada !@ y se etendieron a los compuestos inicos. *e su"divide en
l)quido-l)quido, en la cual la fase estacionaria l#uida se retiene so"re la super2cie del soporte por
adsorcin fsica, pero tiene una prdida de fase estacionaria por disolucin en la fase mvil, lo
#ue (ace necesario un recu"rimiento peridico y no permite la elucin con gradienteH y de fase
unida qu)micamente7 donde la fase estacionaria se une #umicamente a la super2cie del soporte.
Columnas para cromato'rafa de fase unida ?umicamente: los soportes se preparan con
slice rgida o composiciones constituidas "sicamente por slice. Estn formados por partculas
mecnicamente resistentes, porosas y uniformes, con dimetro de ,, 9 o .+ \m. la super2cie de
la slice totalmente (idrolizada est constituida por grupos silanol #umicamente activos. Los
recu"rimientos ms utilizados son los siloanos #ue se forman por reaccin de la super2cie
(idrolizada con un organoclorosilano. Los grupos *i:H #ue no reaccionaron proporcionan una
polaridad indesea"le #ue origina picos con cola. !ara reducir este efecto, los rellenos se
desactivan por un proceso de "lo#ueo mediante reaccin con clorometilsilano #ue se une a los
grupos silanol #ue no (a"an reaccionado.
?ase normal& el componente menos polar se eluye primero y un aumento de la polaridad
de la fase mvil provoca una disminucin del tiempo de elucin. Los rellenos son de fase normal
cuando el recu"rimiento contiene grupos polares.
?ase estacionaria& elevada polaridad soportadas so"re partculas de *i o 'l
?ase mvil& disolvente relativamente apolar ((eano o isoEproEpileter)
?ase inversa& los componentes ms polares aparecen primeros y un aumento en la
polaridad de la fase mvil aumenta el tiempo de elucin. Los rellenos son de fase inversa cuando
el recu"rimiento tiene caracter no polar. Es la ms utilizada.
?ase estacionaria& no polar ((idrocar"uros)
?ase mvil& relativamente polar.
!or lo general, el grupo B del siloano en estos recu"rimientos es una cadena 7/ o 7./. Los
grupos (idrocar"uros se alinean el uno %unto al otro y en perpendicular a la super2cie de la
partcula. Las molculas de la fase mvil compiten con las del analito por una posicin en la
super2cie orgnica. Las cadenas ms largas originan rellenos #ue muestran una mayor
retencin. 'dems, permiten mayor cantidad de muestra. En la mayora de estas separaciones,
la elucin se lleva con una fase mvil de elevada polaridad, como es el caso de una disolucin
acuosa conteniendo disolventes como metano, acetonitrilo o ;H?. Hay #ue cuidar #ue el valor del
pH no sea mayor #ue F.9 apro por#ue si no puede tener lugar la (idrlisis del siloano (degrada
o destruye el relleno).
Estalecimiento del mtodo: cuando la fase mvil es li#uida, los componentes de la muestra
interaccionan con am"as fases, la estacionaria y la mvil (en 7A la fase mvil solo es portadora).
El ito de una separacin depende de #ue la fase mvil sea acetonitrilo, (eano o dioano.
.eleccin de la columna& *e re#uiere un e#uili"rio adecuado entre las fuerzas intermoleculares
eistentes entre los tres participantes activos en el proceso de separacin& el soluto, la fase
mvil y la fase estacionaria. La polaridad de la fase estacionaria tiene #ue ser "astante similar a
la de los analitos y para la elucin se utiliza una fase mvil con una polaridad considera"lemente
distinta. *i la polaridad del soluto T fase mvil y totalmente distinta a la fase estacionaria
tendramos tiempo de retencin demasiado cortos. *i polaridad del soluto T fase estacionaria y
contraria a fas mvil tendramos tiempos ecesivamente largos.
.eleccin de la fase mvil& el factor PQ es el #ue se puede manipular eperimentalmente ms
fcil, de"ido a #ue depende de la composicin de la fase mvil. !ara una e2cacia ptima PQ
de"era estar entre < y 9, pero para mezclas comple%as se etiende de +.9 a <+. *i el a%uste de PQ
no es su2ciente se recurre al factor de selectividad Y. *e puede variar modi2cando la
composicin de la fase mvil procurando mantener PQ dentro de un intervalo razona"le.
cndice de polaridad& se "asa en las medidas de la solu"ilidad para la sustancia en cuestin en
tres disolventes& diozano, nitrometano y etanol. 6ara desde .+.< para un compuesto muy polar
como el agua (asta E< para los $uoralcanos muy poco polares. 7ual#uier ndice de polaridad #ue
se desee entre estos lmites se puede conseguir por mezcla de dos disolventes adecuados. PQ
puede modi2carse cam"iando este ndice. @uc(as veces se emplea una mezcla de disolventes
formada por agua y un disolvente orgnico polar. El factor de retencin se manipula variando la
concentracin de agua.
*i con el a%uste de PQ aun se superponen dos "andas se de"e aumentar el factor de selectividad
para las dos especies. *e puede llevan a ca"o cam"iando la naturaleza #umica de la fase mvil
mientras PQ se mantiene ms o menos en el mismo valor.
Aplicaciones: los rellenos con fases unidas #umicamente, cuando se utilizan en fase inversa en
com"inacin con disolventes muy polares se aproiman al sistema ideal y universal para la
cromatografa de l#uidos.
*ormacin de derivados& en algunos casos es conveniente transformar los componentes de una
muestra en unos derivados. !uede ser necesario para& reducir la polaridad de las especies y de
este modo utilizar columnas de reparto y no de adsorcin o de intercam"io inico, para
aumentar la respuesta del detector (sensi"ilidad), y para aumentar la selectividad de la
respuesta del detector para determinados componentes de la muestra.
(romatograf)a de pares inicos& se utiliza para la separacin y determinacin de especies
inicas. La fase mvil est constituida por una disolucin tampn acuosa #ue contiene un
disolvente orgnico como metanol o acetonitrilo y un compuesto inico #ue aporta un contrain
de carga opuesta a la del analito, formndose una pare%a de iones, #ue es una especie neutra
#ue es retenida por el relleno de fase inversa. La elucin de los pares inicos se consigue
mediante una disolucin acuosa de metanol o de otro disolvente orgnico solu"le en agua. *e
suele usar para la separacin de iones grandes, y anlisis de mezclas de iones clorato y nitrato, y
con tensioactivos, no solo por el tama8o sino por#ue tienen gran a2nidad por lo
intercam"iadores de iones.
CR=6AT=JRA%@A DE AD&=RCI74: las )nicas fases #ue se utilizan son la slice (preferida por
su mayor capacidad de carga y diversidad de presentaciones) y la al)mina. Las ole2nas tienen
en el menor tiempo de retencin y los cidos car"olicos el mayor.
&eleccin del disol*ente& la )nica varia"le #ue se puede utilizar para optimizar PQ y Y es la
composicin de la fase mvil. Las modi2caciones del disolvente provocan una gran variacin en
la resolucin y en el tiempo de retencin.
@e%or #ue el ndice de polaridad para estos casos es la fuerza eluyente, #ue es la energa de
adsorcin del disolvente por unidad de super2cie. 4epende del adsor"ente. *e eligen dos
disolventes compati"les, uno de los cuales es demasiado fuerte y el otro demasiado d"il.
6ariando la relacin de volumen entre am"os se puede o"tener un valor adecuado de PQ. 5o
vara linealmente con la relacin de vol)menes, como pasa"a con el ndice de polaridad, por lo
#ue es ms difcil calcular la mezcla ptima. 7uando se produce un solapamiento de picos, el
cam"io de un disolvente fuerte por otro, mientras se mantiene PQ permitir cam"iar los valores
de Y y o"tener la resolucin #ue se desea.
Aplicaciones& es la ms adecuada para compuestos no polares con masas moleculares
inferiores a 9.+++. La de reparto y adsorcin tienden a ser complementarias. Es ms adecuada
para muestras #ue son solu"les en disolventes no polares. Es capaz de diferenciar compuestos
ismeros en mezclas.
CR=6AT=JRA%@A I74ICA: para la separacin y determinacin de pe#ue8os iones inorgnicos
y orgnicos #ue se "asan en el uso de las resinas de intercam"io inico. 5o se generaliz (asta
desarrollarse la tcnica de supresin del eluyente #ue (ace posi"le la determinacin
conductimtrica de los iones eluidos.
E?uilirios de intercamio inico: los procesos de intercam"io inico se "asan en los
e#uili"rios de intercam"io entre los iones de una disolucin y los iones del mismo signo #ue
estn en la super2cie de un slido de elevada masa molecular y esencialmente insolu"le. Las
resinas de intercam"io inico sintticas disminuyen la dureza del agua, desionizan el agua y
puri2can las disoluciones. Los sitios activos ms comunes en las resinas de intercam"io catinico
son los grupos de cido sulfnico (un cido fuerte) y los grupos de cido car"olico (un acido
d"il). Los aninicos tienen grupos amino terciario ("ases fuertes) o amino primario ("ases
d"iles). 7uando la constante de e#uili"rio tiene un valor alto, la fase slida tienen gran
tendencia a retener los iones K
R
y cuando es pe#ue8a lo contrario. Los iones polivalentes se
retienen muc(o ms fuertemente #ue las especies con una sola carga.
Rellenos: las partculas polimricas porosas no resultan completamente satisfactorias como
rellenos cromatogr2cos de"ido a la "a%a velocidad de difusin de las molculas de los analitos a
travs de los microporos de la matriz polimrica y tam"in de"ido a la compresi"ilidad de la
matriz. !ara solventar este pro"lema se desarrollaron < nuevos tipos de relleno. 3no es el relleno
de partcula pelicular, en el #ue la super2cie de una partcula relativamente grande esfrica y no
porosa, de vidrio o polimrica, se recu"re con una resina sinttica de intercam"io inico. El
segundo tipo de relleno se prepara recu"riendo micropartculas porosas de slice, con una
delgada pelcula del intercam"iador. *e o"tiene un aumento de la e2cacia de"ido a #ue la
difusin en el polmero es ms rpida. La capacidad de carga de estos rellenos es menos #ue los
del tipo pelicular.
Aplicaciones:
'plicacin inorgnica& la fase mvil de"e solu"ilizar la muestra, tener fuerza disolvente #ue
conduzca a tiempo de retencin razona"les (PQ adecuados) y de"e interaccionar con los solutos
de tal forma #ue favorezca la selectividad (Y adecuados). *uelen ser disoluciones acuosas #ue
pueden contener cantidades moderadas de metanol y otros disolventes orgnicos misci"les con
el agua. En general los iones de la fase mvil compiten con los iones del analito por los puntos
activos del relleno del intercam"iador inico. 5o se desarrollo por falta de un "uen sistema de
deteccin universal.
7romatografa inica con columnas supresoras& los detectores de conductividad pueden
tener una elevada sensi"ilidad, son universales para las especies cargadas y responden de una
forma predeci"le a los cam"ios de concentracin. !ero su limitacin retras su uso generalizado.
Esta limitacin proviene de la elevada concentracin de electrolito #ue se re#uiere para eluir la
mayora de los iones analito en un tiempo razona"le. La conductividad de los componentes de la
fase mvil tiende a enmascarar la de los analitos y por ellos se reduce la sensi"ilidad del
detector. Este pro"lema fue resuelto mediante la introduccin de la columna supresora de
eluyente despus de la columna analtica de intercam"io inico. Est rellena con una segunda
resina de intercam"io inico, #ue convierte los iones del disolvente en especies moleculares
poco ionizadas, sin alterar los iones del analito. !ara la separacin de aniones, el relleno supresor
es la forma cida de una resina de intercam"io catinico. 3n inconveniente de estas columnas es
la necesidad de regenerarlas peridicamente a 2n de convertir los rellenos otra vez en forma
cida o "sica original.
7romatografa inica con una sola columna& se "asan en las pe#ue8as diferencias de
conductividad entre los iones eluidos presentes en la muestra y los iones de eluyente #ue
prevalecen. !ara aumentar estas diferencias, se utilizan intercam"iadores de "a%a capacidad #ue
(acen posi"le la elucin con especies de "a%a conductancia e#uivalente. ;iende a ser menos
sensi"le y a tener ms limitaciones #ue con columna supresora.
Cromato'rafa de exclusin de iones: separan especies neutras y no iones. *e utilizan
columnas de intercam"io de iones para realizar las separaciones. La columna analtica va
seguida de la supresora. ;iene distintas aplicaciones en la identi2cacin y determinacin de
especies cidas.
CR=6AT=JRA%@A DE ELC!5&I74 (=R TA6AM=: se aplica a especies de elevado peso
molecular. Los rellenos estn constituidos por pe#ue8as partculas polimricas o de slice #ue
contienen una red de poros uniforme en los #ue pueden difundir las molculas de soluto y del
disolvente. Las molculas son atrapadas en los poros y eliminadas del $u%o de la fase mvil. Las
molculas #ue son ms grandes #ue el tama8o medio de los poros son ecluidas y no se
retienen, son las primeras #ue eluyen. Las molculas #ue tienen dimetros menores #ue los
poros pueden penetrar en el la"erinto de poros y as resultan atrapadas durante ms tiempo
(son las )ltimas en eluir). 5o implican una interaccin #umica o fsica entre los analitos y la fase
estacionaria, sino #ue se procura evitarla dado #ue originan una mala e2cacia de la columna.
Hay un lmite superior para el tiempo de retencin, ya #ue ning)n analito es retenido ms #ue
a#uel para el cual la penetracin en la fase estacionaria es total.
Rellenos: partculas polimricas y partculas de slice (dimetro entre 9 a .+ \m). 6enta%a de los
de *i& gran rigidez, lo #ue facilita el relleno y permite el empleo de ! ms elevadasH mayor
esta"ilidad, lo #ue permite el uso de una gran variedad de disolventes incluyendo el aguaH
e#uili"racin ms rpida al cam"iar de disolventeH "uena esta"ilidad a altas temperaturas.
>nconvenientes& tendencia a retener solutos por adsorcin y capacidad para catalizar la
degradacin de las molculas del soluto. !ara reducir la adsorcin, se modi2can las super2cies
por reaccin con sustituyentes orgnicos.
El coe2ciente de distri"ucin del soluto (M), oscila entre + (molculas grandes totalmente
ecluidas) y . (molculas pe#ue8as). Es un parmetro )til para comparar distintos rellenos. El
lmite de eclusin de2ne el peso molecular de una especie por encima del cual no eiste
retencin. El lmite de penetracin corresponde al peso molecular por de"a%o del cual las
molculas de soluto pueden penetrar completamente en lo poros.
Aplicacin& los mtodos de eclusin por tama8o de dividen en& cromatografa de 2ltracin
so"re gel, y cromatografa de penetra"ilidad so"re gel. En el primero tipo se usan disolventes
acuosos y rellenos (idroflicos. En el segundo disolventes orgnicos no polares y rellenos
(idrfo"os. 'm"os son complementarios. 3na de las aplicaciones ms )tiles es la separacin de
las molculas de alto peso molecular de productos naturales de las especies de "a%o peso
molecular y de las sales. La de penetra"ilidad en gel separa (omlogos y oligmeros. :tra
aplicacin es la determinacin rpida de los pesos moleculares, o de la distri"ucin de !@ en los
grandes polmeros o en los productos naturales.
/enta5as&
;iempos de separacin cortos y "ien de2nidos
Kandas estrec(as ("uena sensi"ilidad)
5o (ay prdida de muestra (por#ue los solutos no interaccionan con la fase estacionaria)
5o se desactiva la columna de"ido a la ausencia de interaccin del soluto con el relleno.
&esventa5as&
*lo se pueden acomodar un n)mero limitado de "andas en el cromatograma de"ido a
#ue la escala de tiempo es corta
5o es aplica"le a muestra de componentes de tama8o seme%ante (como mezclas de
ismeros), se necesita un diferencia de al menos un .+N en los !@.