La asociacin de una molcula proteica y de otra no proteica en un enzima recibe el

nombre de:
Cmo se denomina la zona del enzima donde se une el sustrato?
Los cambios de temperatura provocan cambios conformacionales en los enzimas, pero
no afectan a su actividad:
Los enzimas son muy abundantes en la clula por el consumo de los mismos durante las
reacciones metablicas:
os cambios de pH alteran la actividad enzimtica.
Las molculas no ornicas asociadas a los enzimas se denominan:
La unin enzima!sustrato se realiza mediante..
Las molculas ornicas comple"as #ue se unen debilmente al apoenzima reciben el
nombre de:
La parte proteica de un enzima recibe el nombre de:
Los enzimas estn formados e$clusivamente por aminocidos
Las molculas ornicas comple"as #ue se unen covalentemete al apoenzima reciben el
nombre de:
Los enzimas aumentan la ener%a de activacin del proceso en el #ue participan
&odos los enzimas act'an a un pH ptimo en torno a (,)
Los enzimas se pueden obtener mediante una alimentacin viariada:
*also.
+ienen codificados enticamente y por tanto los sintetiza el propio oranismo
Los cationes metlicos #ue reulan la activad de un enzima recibe el nombre de:
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
,ttp:--depa.f#uim.unam.m$-proteinas-.ebprobs-solucion.,tml/0inindi$e
1!Orden de reaccin. La enzima 2licerol!3 fosfato des,idroenasa se inactiva
irreversiblemente en presencia de ciclo,e,anediona con una cintica aparente de primer
orden. 4in embaro, cuando se var%a la concentracin del aente inactivante en la cubeta
se observa #ue la cintica se modifica. 5$pli#ue este resultado calcule el valor real de la
constante de velocidad de la reaccin.
6CH78 9m:; <.= 1
t 9min;
5nzima
activa
remanente
9>;
< 1<<.< 1<<.<
1< ?=.= ((.@
=< ?3.? )A.@
3< @@.B BA.3
B< (A.= 3A.A
A< (=.1 =<.B
?< A<.@ ?.1
1=< )B.A B.3
4uerencias:
a;7emuestre #ue la cintica de inactivacin es de primer orden aparente y calcular la
constante de primer orden y la vida media 9no olvide las unidades;.
b;7etermine si la constante de primer orden var%a con la concentracin del reactante
CH7 y escriba una e$presin para la velocidad #ue incluya a todos los reactantes.
c; C partir de esta ecuacin identifi#ue #ue es lo #ue var%a en cada e$perimento y lo #ue
se mantiene constante y dia por#ue la cintica aparece como si fuese de primer orden.
4DLECFDG
1.! 5n este problema se nos pide analizar como proresa la inactivacin de una enzima
en el tiempo. C#u%, la ciclo,e$anodiona 9CH7; es un reactivo #ue modifica
#u%micamente con la enzima y el producto de esta reaccin es una prote%na #ue pierde
su actividad enzimtica oriinal. Hor tanto, en este e$perimento, la enzima es un
reactante y su actividad enzimtica es el recurso metodolico #ue sirve para evaluar la
concentracin remanente de prote%na no modificada por la CH7, en cada uno de los
tiempos muestreados.
4e puede determinar si la reaccin #u%mica es de primer orden, o se encuentra en
condiciones tales #ue proresa como si lo fuese 9aun#ue estr%ctamente no lo sea;I ello
racias a #ue la reacciones con cintica de primer orden 9o de pseudoprimer orden;
muestran una relacin lineal entre el loaritmo natural de la concentracin de reactante
remanente y el tiempo transcurrido. 7e modo #ue, si obtenemos los loar%tmos de los
valores de concentracin de la enzima remanente 9no importa #ue se trate de un
porcenta"e; resultan las siuientes rficas.
La fiura superior muestra la rfica loar%tmica, en la #ue se puede observar #ue
ambos con"untos de puntos describen razonablemente una recta, no as% en la rfica
directa de 658 vs. tiempo 9panel inferior;. 5ste resultado indica #ue la inactivacin
observada siue una cintica de primer orden con respecto a la concentracin de enzima
en la condiciones empleadas. Las pendientes de estas l%neas son numricamente iuales
a las constantes de primer orden, o de pseudoprimerorden, pero con sino neativo, de
modo #ue basta cambiar el sino para determinar el valor de las constantes buscadas.
Gote #ue ambas rectas presentan pendientes muy distintas, esto sinifica #ue la
concentracin de CH7 si tiene un efecto sobre la velocidad de la reaccin ann#ue, en
las condiciones e$perimentales empleadas, este efecto no se manifiesta en los 1=<
minutos #ue dura el e$perimentoI pos%blemente por#ue este reactivo se encuentra en
ran e$ceso. 4in embaro, una e$presin correcta para la velocidad de la reaccin
deber%a incluir ambos reactantes y la ley de velocidad indicar%a #ue el orden de reaccin
es superior a 1 9uno para la enzima y no sabemos e$actamente cuanto para la CH7;.
*inalmente, el recuadro en la fiura superior muestra #ue las constantes aparentes
calculadas var%an linealmente con la cantidad de CH7 empleada en el e$perimento y la
l%nea cruza el punto $,y 9<,<;. 5sto nos indica #ue el orden de reaccin para la CH7 es
tambin de 1 y la pendiente de esta rfica nos indica el valor de la constante de =o
orden. y la e$presin final para la velocidad ser%a:
vJ k
=
6CH78658, en donde k
=
J <.<=A m:
!1
min
!1
J <.B3 :
!1
s
!1
.
5n condiciones en las #ue 6CH78 es muc,o mayor #ue 658, la enzima se aota sin #ue la
6CH78 disminuya apreciablemente. 5sto es muy frecuente en la inactivacin de
enzimas, ya #ue la concentracin de prote%na apenas alcanza los cientos de -mL, lo
#ue para una molcula de 1<<<< r-mol de H: 9si se trata de na prote%na pe#ueKa; o
ms, representa concentraciones inferiores a 1<
!)
:. Hor su parte el aente #u%mico
suele araarse en concentraciones superiores a 1<
!B
:, es decir 1< veces por encima
como m%nimo. Concencuentemente, el cambio en concentracin de reactante rramente
rebaza el 1<> a lo laro de la incubacin.
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Efecto de la concentracin de enzima. 5n el siuiente e$perimento con la enzima
fosfatasa cida de semillas de trio erminadas se vari la concentracin de la enzima
en cubeta a dos concentraciones de sustrato y se obtuvieron los resultados siuientes:
6enz8 9l; 6*H8 <.1 m: 6*H8 1< m:
+el
9nmol-min;
+el
9nmol-min;
) 1.?=< A.3<(
1< B.<)? 13.1A?
1) ).?)A 1?.1B)
=< (.(AA =).A?B
=) ?.B(? 3=.=@=
3< 11.@BB 3(.@@=
a; Como varia la velocidad de la reaccin en funcin de la cantidad de enzima
aKadida?
b; Lu pasa si dividimos la velocidad reistrada por la cantidad de enzima aKadida al
ensayo?
c; Etilizando la ecuacin de :ic,elis!:enten e$pli#ue sus respuestas a las preuntas
anteriores?
4DLECFDG
5n este problema se nos pide determinar rficamente la relacin entre la velocidad de
la reaccin catalizada, vs. la cantidad de solucin de prote%na aKadida al ensayo y lueo
se nos pide calcular el cociente de la velocidad 9 actividad de la enzima; y la cantidad
de solucin deprote%na aKadida al ensayo. Los resultados de tal representacin se
muentran en la siuiente fiura:
5n el panel inferior, apreciamos #ue la velocidad aumenta linealmente con la
concentracin de prote%na, esto es lo #ue cabr%a esperar, debido a #ue, si tomamos como
referencia la ecuacin de :ic,aelis!:enten, notaremos #ue la velocidad es
proporcional a la +elocidad m$ima y a su vez la +ma$ es proporcional a la
concentracin total de enzima aKadida, i.e.:
7ado #ue en cada una de las dos series de determinaciones la concentracin de sustrato
se mantuvo constante, el factor k
CC&
S - 9K
:
M S; se mantiene constante y, por tanto,
podemos decir #ue mientras se emple la misma concentracin de sustrato en todas las
medidas, v J constante 5
&
. Consecuentemente, cuando se rafica el cociente v-658 el
resultado es una constante 9vease panel superior de la fiura anterior;, mientras la
concentracin de sustrato no sea modificada.
Lo anterior sinifica #ue la velocidad de una reaccin enzimtica es proporcional a la
concentracin de enzima, lo #ue constituye la base terica de las mediciones de
actividad enzimtica como una estimacin de la cantidad de esta enzima presente en un
flu%do biolico. 5ste principio tiene, por e"emplo, muc,a importancia en la prctica
cl%nica, ya #ue nos permite determinar alteraciones en los niveles de diversas enzimas,
#ue pueden relacionarse a diversos estados patolicos. &ambin es importante en
aplicaciones en la industria de alimentos, ya #ue permite evaluar la cantidad de ciertas
enzimas presentes en los alimentos, cuya actividad puede ser indeseable, o bien, puede
ser aKadida ex professo para modificar las propiedades de los preparados alimenticios.
&odo ello, mediante un ensayo enzimtico, eneralmente sencillo, #ue tan slo re#uiere
como condicin #ue la concentracin de sustrato empleada, as% como otras condiciones
9pH, temperatura, etc.;, sean estandarizadas adecuadamente.
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Cintica de una enzima. La actividad de la Ccetil!CoC carbo$ilasa, medida con tres
diferentes concentraciones de enzima y a diferentes concentraciones de sustrato fu la
siuiente:

65nz8 9 de
prote%na;
<.1 <.= <.)
6CcetilCoC8 9:; +el 9mol
- min;
<.<) <.=() <.)BA 1.3(3
<.1B <.B@= 1.<<1 =.)<=
<.=3 <.)@< 1.1@) =.@?1
<.3= <.AB= 1.3@) 3.BA3
<.)< <.()) 1.B?B 3.A)A
<.)? <.(AA 1.B?( 3.@1<
a; Calcular para cada e$perimento el valor de Nm y el valor de +ma$.
b; 4on los valores de Nm y +ma$ iuales o diferentes?
c; 5$pli#ue si lo #ue observ es lo #ue esperaba obtener
d; 4abiendo #ue la enzima pesa ==< <<< rs-mol, ,aa una rfica de +ma$ vs mol de
enzima.
e; Lu represnta la pendiente de esta rfica?
f; 5n #u se parece el valor anterior a la Cctividad espec%fica J +ma$-m de prote%na
en mol min
!1
m de enzima
!1
?
; Lu pasa con la medida de actividad espec%fica cuando la enzima no est pura?
4olucion
! 5n este problema se nos d el valor de la velocidad como funcin de la cantidad de
sustrato aKadido a tres diferentes niveles de concentracin de enzima. 5l valor de +ma$
y Nm puede calcularse a partir de estos datos de diversas maneras. La manera directa,
aun#ue no muy precisa, consiste en raficar los datos y estimar el valor de +ma$ a
partir del valor al #ue tiende la velocidad cuando la concentracin de sustrato es muy
elevada. Como en realidad este valor es el l%mite superir de la curva, pero esta se
apro$ima indefinidamente a l sin llear a tocarlo, estimar este tec,o resulta un poco
impresiso. Con el valor obtenido, es posible calcular el valor de la Nm, ya #ue este
representa la concentracin de sustrato a la #ue )<> de los sitios activos de la enzima
estn ocupados con sustrato y )<> estn vac%os. 5n estas condiciones, la velocidad
observada deber ser iual a la +ma$-=. 9vase panel C de la fiura #ue siue a este
prrafo;. Como se describi en el problema anterior, aumentar la concentracin de
enzima resulta en un incremento en la +ma$, ya #ue v J +
:CO
5
&
. Hor tanto, las tres
curva son seme"antes en su forma, pero a mayor cantidad de enzima tenemos curvas
ms elevadas. Como es de esperar, cuando dividimos la velocidad por la concentracin
de prote%na empleada, la tres curvas se superponen 9ver panel P de la fiura;, dado #ue
a#u% la velocidad ya slo depender de la concentracin de sustrato. 5sta es una manera
com'n de representar las curvas de saturacin por su sustrato de las reaccines
enzimticas, ya #ue no su forma es la misma sin importar cuanta enzima se emple en el
e$perimento.
Los pneles de la derec,a en la fiura anterior 9C,7; son representaciones de
Line.aver!Pur0, en esta representacin se rafica 1-velocidad vs. 1-6sustrato8, por lo
#ue tambin se le conoce como la rfica de dobles rec%procos. Los valores de 1-v frente
a la 1-S describen una l%nea recta, cuya pendiente es numricamente iual a K
:
-V
:CO
y
#ue intesecta al e"e QRQ en un valor numrico iual a 1-V
:CO
y si la recta se prolona a
travs del cuarto cuadrante intersecta al e"e QOQ en un valor numrico iual a !1-K
:
. 5n
la fiura, el panel derec,o inferior 9C; muestra #ue la K
:
es independiente de la
concentracin de enzima aKadida. 5sto puede deducirse del ,ec,o de #ue la
concentracin de enzima es casi siempre muc,o menor #ue la de l sustrato 9vease
problema 1;, por lo #ue la cantidad de sustrato re#uerida para ocupar el )<> de los
sitios activos slo depende de la afinidad relativa entre la enzima y el sustrato,
propiedad #ue no cambia con la concentracin total de enzima. 5sto mismo puede
deducirse de la ecuacin de :ic,aelis!:enten, ya #ue en ella, la concentracin de E
&
y
la de sustrato no son interdependientes. 5l panel superior dere,o 97; reitera #ue al
dividir la velocidad por la concentracin de enzima empleada las tres l%neas se
superponen.
4i a,ora raficamos velocidad m$ima obtenida contra la cantidad de enzima aKadida
en mol, asumiendo #ue cada molcula de enzima posee un slo sitio activo, la
pendiente de la rfica ser:
5ste valor nos dice #ue una molcula de enzima es capz de convertir 333<< molculas
de sustrato a poducto por seundo y es e#uivalente a la actividad espec%fica de una
enzima pura 9V
:CO
-6Hrote%na8;, e$cepto por la unidades empleadas. 7ado #ue para
determinar este 'ltimo n'mero no necesitamos una estimacin e$acta del peso
molecular de la enzima, no del n'mero de sitios activos por molcula de prote%na, este
valor es el ms frecuentemente reportado en diversas tablas de parmentros cinticos y
propiedades de enzimas. 4in embaro, cuando la preparacin no es pura el denominador
de este conciente ser mayor, debido a la contribucin de los contaminantes a la
cantidad total de prote%na, en consecuencia, la actividad espec%fica disminuir. 7e este
modo, la actividad espec%fica es un buen indicador del rado de pureza de una
preparacin enzimtica.
)!Problema sobre un ensayo de actividad enzimtica. Considere a la enzima
Fnvertasa, #ue cataliza la ,idrlisis de 4acarosa a fructosa y lucosa. 5sta enzima posee
una Nm para sacarosa de <.) m: y una constante catal%tica de 1() min
!1
. 4i se mide su
actividad en presencia de <.=) m: de sacarosa con =) pmol de enzima en la cubeta !
#u velocidad de catlisis se observar? ! #u fraccin representa esto de la +ma$ #ue
se podr%a calcular en esta reaccin si se variase la cantidad de sacarosa? ! Cunto
sustrato ,abr%a #ue aKadir para #ue la velocidad observada alcanzase <.?)> de la
+ma$? ! Lu importancia podr%a tener esto para la posible aplicacin industrial de la
enzima? ! 5$pli#ue sus respuestas.
5n este problema se nos pide determinar la actividad como fraccin de la V
:CO
para la
enzima invertasa, la manera ms simple de proceder es reordenar la ecuacin de
:ic,alis y :enten como siue:
Lo #ue nos indica #ue se alcanza el 33> de la V
:CO
, como V
:CO
J k
CC&
E
&
, se tiene vel
J 1() min
!1
=.) 1<
!A
mol <.33 J una actividad de <.<<1BA mol min
!1
. C,ora,
se'n lo abtenido arriba, para obtener un ?) > de la V
:CO
bastar con #ue S-9K
:
M S; J
<.?), de donde al despe"ar 4 tendremos 4J K
:
<.?)-91!<.?); J 1? K
:
. Lo #ue sinifica
#ue ,abr #ue aKadir 1? $ <.) m: J ?.) m: de sacarosa para #ue la actividad alcance
este valor.
5ste problema suiere #ue la cantidad de sustrato es uno de los factores importantes a
considerar cuando se desea emplear una enzima para aplicaciones inductriales. 5n otras
palabras, si el producto a tratar, #ue en este caso podr%a ser un almibar ,ec,o a base de
sacarosa, posee un cancentracin de sustrato muy ba"a, o sea #ue nuestro "arabe est
muy dilu%do, deberemos aKadr muc,a ms enzima, puesto #ue sta estar%a traba"ando
muy por deba"o de su capacidad m$ima. Hor otro lado, una alternativa para a,orrar
enzima, ser%a tratar el "arabe concentrado y lueo aKadir el aua y los otros
componentes de su almibar, para tener el producto final.