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UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA
FACULDADE DE ENGENHARIA QUMICA

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA
QUMICA

FERMENTAO ALCOLICA COM LEVEDURAS DE
CARACTERSTICAS FLOCULANTES EM REATOR TIPO TORRE
COM ESCOAMENTO ASCENDENTE

THLYTA FRAGA PACHECO

Uberlndia - MG
2010

UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA
FACULDADE DE ENGENHARIA QUMICA

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA
QUMICA

FERMENTAO ALCOLICA COM LEVEDURAS DE
CARACTERSTICAS FLOCULANTES EM REATOR TIPO TORRE
COM ESCOAMENTO ASCENDENTE

Thlyta Fraga Pacheco

Orientador: Prof. Dr. Elozio J lio Ribeiro

Dissertao submetida ao Programa de Ps-
Graduao em Engenharia Qumica da
Universidade Federal de Uberlndia como
parte dos requisitos necessrios obteno
do ttulo de Mestre em Engenharia Qumica

Uberlndia - MG
2010

Dados Internacionais de Catalogao na Publicao (CIP)

P116f

Pacheco, Thlyta Fraga, 1985-
Fermentao alcolica comleveduras de caractersticas floculantes em
reator tipo torre comescoamento ascendente [manuscrito] / Thlyta Fraga
Pacheco. - 2010.
106 f. : il.

Orientador: Elozio Jlio Ribeiro.
Dissertao (mestrado) Universidade Federal de Uberlndia, Pro-
grama de Ps-Graduao em Engenharia Qumica.
Inclui bibliografia.

1. lcool - Teses. 2. Fermentao - Teses. I. Ribeiro, Elozio Jlio. II.
Universidade Federal de Uberlndia. Programa de Ps-Graduao em
Engenharia Qumica. III. Ttulo.

CDU: 663.52

Elaborada pelo Sistema de Bibliotecas da UFU / Setor de Catalogao e Classificao

DISSERTAO DE MESTRADO SUBMETIDA AO PROGRAMA DE PS-
GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE
UBERLNDIA COMO PARTE DOS REQUISITOS NECESSRIOS PARA OBTENO
DO GRAU DE MESTRE EM ENGENHARIA QUMICA, EM 26 DE FEVEREIRO DE
2010.

BANCA EXAMINADORA:

____________________________________________________________
Prof. Dr. Elozio J lio Ribeiro
Orientador (PPGEQ/UFU)

____________________________________________________________
Prof. Dra. Miriam Maria de Resende
Co-Orientadora (PPGEQ/UFU)

____________________________________________________________
Prof. Dra. Vicelma Luiz Cardoso
(PPGEQ/UFU)

____________________________________________________________
Prof
a
. Dra. Eliana Setsuko Kamimura
(FZEA/USP)

Agradecimentos

Meus sinceros agradecimentos a todos aqueles que, de alguma forma, doaram um pouco de si
para que a concluso deste trabalho se tornasse possvel:

Ao professor doutor Elozio J lio Ribeiro, orientador desta dissertao, pela confiana
em meu trabalho, por todo o conhecimento transferido, pela sabedoria e amizade.
professora doutora Miriam Maria de Resende, pela co-orientao, disponibilidade
irrestrita, empenho, pacincia, estmulo e dedicao.
professora doutora Vicelma Luiz Cardoso, pelo apoio, prestatividade e auxlio
estatstico no trabalho.
Aos demais professores e funcionrios da FEQUI/UFU, pela contribuio no meu
crescimento acadmico, profissional e pessoal.
Aos membros da banca examinadora pelas contribuies.
Aos meus pais, meus heris, sou-lhes grata por todo apoio, carinho e esforo
dispensados para o meu engrandecimento como pessoa.
Ao meu irmo e familiares, que muito me apoiaram e incentivaram nesta caminhada.
A todos os amigos que conquistei nesse caminho, que j deixam saudades, mas que
sero levados comigo por onde for. Pela pacincia e grande amizade com que sempre me
ouviram e sensatez com que sempre me ajudaram. Pela diverso, aprendizado e convivncia,
que muito me estimularam nessa jornada.
aluna de graduao Hvala Barbosa Reis, pelo companheirismo e imensa
contribuio na execuo da parte experimental do projeto.
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior, CAPES, pelo apoio
financeiro durante os anos do curso.
Tambm sou grata a todos aqueles que, direta ou indiretamente, me deram
oportunidades, confiaram em mim, me incentivaram a lutar pelos meus ideais e me
acompanharam.
Agradeo, por fim, a Deus, que me concedeu o privilgio de nascer e viver entre estas
pessoas sensacionais que so o alicerce desta conquista.

Volta teu rosto sempre na direo do sol,
e ento, as sombras ficaro para trs.
(Sabedoria Oriental)

Sumrio

Lista de Figuras.......................................................................................................................i
Lista de Tabelas....................................................................................................................iii
Resumo.................................................................................................................................iv
Abstract................................................................................................................................. v
CAPTULO 1 - INTRODUO............................................................................................1
CAPTULO 2 - REVISO BIBLIOGRFICA......................................................................6
2.1. Histrico.....................................................................................................................6
2.2. Conduo da fermentao alcolica.............................................................................6
2.2.1. Processo em Batelada...........................................................................................7
2.2.2. Processo em Batelada Alimentada........................................................................8
2.2.3. Processo Contnuo................................................................................................9
2.2.4. Recirculao de Leveduras................................................................................. 10
2.2.5. Tratamentos finais.............................................................................................. 12
2.3 Fatores que Afetam a Fermentao Alcolica............................................................. 12
2.4. O Agente da Fermentao Alcolica..........................................................................13
2.5. Bioqumica da Fermentao Alcolica......................................................................17
2.6. Rendimento da Fermentao Alcolica......................................................................20
2.7. Aumento da Produtividade........................................................................................ 21
2.7.1. Biorreatores com Imobilizao...........................................................................22
2.7.2. A Levedura Floculante........................................................................................ 24
2.8. Biorreatores Empregados........................................................................................... 29
2.8.1. Biorreatores Tipo Torre...................................................................................... 30
2.9. Estudo Cintico da Fermentao Alcolica................................................................ 32
CAPTULO 3 - MATERIAL E MTODOS........................................................................36
3.1. Material..................................................................................................................... 36
3.2. Mtodos.................................................................................................................... 37
3.2.1. Metodologia Experimental.................................................................................. 37
3.2.2. Metodologia Analtica........................................................................................ 39
3.3. Testes Preliminares....................................................................................................41
3.4. Planejamento Experimental ....................................................................................... 42
3.5. Clculos das Respostas das Fermentaes.................................................................44
3.5.1. Rendimento........................................................................................................44

3.5.2. Produtividade.....................................................................................................45
3.6. Modelagem Matemtica............................................................................................ 45
3.6.1. Ajuste dos parmetros cinticos..........................................................................48
3.6.2. Validao do Modelo.......................................................................................... 48
CAPTULO 4 - RESULTADOS E DISCUSSO.................................................................49
4.1. Testes Preliminares....................................................................................................49
4.2. Planejamento Experimental ....................................................................................... 51
4.2.1. Rendimento........................................................................................................52
4.2.2. Produtividade.....................................................................................................58
4.2.3. Sacarose Residual ............................................................................................... 66
4.3. Reprodutibilidade do Ponto Otimizado......................................................................73
4.5. Modelagem Matemtica............................................................................................ 77
4.5.1. Validao do Modelo.......................................................................................... 79
CAPTULO 5 - CONCLUSES.......................................................................................... 82
CAPTULO 6 - SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS........................................84
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.................................................................................. 85
APNDICE A - CURVAS DE CALIBRAO...................................................................93

i
Lista de Figuras

1.1 - Brasil: produo de cana-de-acar, acar e etanol (Fonte: Unica, 2009) ......................2
2.1 - Sequncia de reaes enzimticas pela fermentao alcolica de carboidratos endgenos
(glicognio e trealose) ou exgenos (sacarose e maltose), conduzida por Saccharomyces
cerevisiae (Fonte: Lima, Basso, Amorim, 2001) .....................................................................19
2.2 - Clulas floculantes de Saccharomyces cerevisiae observadas em microscopia eletrnica
de varrimento (barra corresponde a 10 m) (Fonte: Domingues, 2001) .................................26
2.3 - Leito de leveduras floculadas (Fonte: Andrietta, 2005) ..................................................26
3.1 - Representao esquemtica da unidade de trabalho ........................................................37
3.2 - Unidade de trabalho utilizada nos experimentos .............................................................39
4.1 - Aparncia das leveduras utilizadas quando consumida toda a sacarose do meio ............49
4.2 - Perfis de concentrao celular, substrato e inculo em funo do tempo .......................50
4.3 - Valores preditos por valores experimentais pelo modelo para o rendimento ..................54
4.4 - Distribuio dos resduos para a resposta rendimento .....................................................55
4.5 - Superfcie de resposta e curva de contorno para a resposta rendimento em funo da
concentrao celular no inculo e da concentrao inicial de sacarose ...................................55
concentrao celular no inculo e da vazo de recirculao ....................................................56
concentrao inicial de sacarose e da vazo de recirculao ...................................................57
4.8 - Valores preditos por valores experimentais pelo modelo para a produtividade ..............60
4.9 - Distribuio dos resduos para a resposta produtividade .................................................61
4.10 - Superfcie de resposta e curva de contorno para a produtividade em funo da
concentrao celular no inculo e da concentrao inicial de sacarose ...................................61
concentrao celular no inculo e vazo de recirculao ........................................................62
concentrao inicial de sacarose e da vazo de recirculao ...................................................63
4.13 - Valores preditos por valores experimentais pelo modelo para a resposta sacarose
residual .....................................................................................................................................67
4.14 - Distribuio dos resduos para a resposta sacarose residual ..........................................68

ii
4.15 - Superfcie de resposta e curva de contorno para a concentrao residual de sacarose em
funo da concentrao celular no inculo e da concentrao inicial de sacarose ..................69
funo da concentrao celular no inculo e vazo de recirculao ........................................70
funo da concentrao inicial de sacarose e da vazo de recirculao ..................................71
4.18 - Perfis de concentrao celular, substrato e inculo em funo do tempo para a condio
mxima das superfcies de resposta .........................................................................................75
4.19 - Perfis de concentrao celular, substrato e inculo em funo do tempo para a condio
mxima do rendimento .............................................................................................................76
4.20 - Perfil de concentrao celular e de substrato ao longo do tempo e da posio do reator
para o experimento 16...............................................................................................................77
4.21 - Variao na concentrao de biomassa (), sacarose (o), etanol () para o
experimento de validao das condies de otimizao obtido pela superfcie de resposta e
curvas de contorno. Os smbolos representam os resultados experimentais e as linhas
representam o ajuste do modelo proposto para os dados adimensionalizados ........................78
representam o ajuste do modelo proposto para os dados dimensionais ...................................79
experimento (16) do ponto central. Os smbolos representam os resultados experimentais e as
linhas representam a aplicao do modelo aos dados experimentais .......................................80
4.24 - Variao na concentrao de biomassa (), sacarose (o) e etanol () para o
experimento de validao das condies do experimento de validao do ponto timo do
rendimento. Os smbolos representam os resultados experimentais e as linhas representam a
aplicao do modelo proposto aos dados experimentais .........................................................81

iii
Lista de Tabelas

1.1 - Indicadores da evoluo tecnolgica da indstria sucroalcooleira (Fonte: DEDINI, 2008)
.....................................................................................................................................................4
2.1 - Composio Molecular de Levedura Comercial (Fonte: HARRISON, 1971) ................16
2.2 - Concentraes de nutrientes minerais no mosto para se obter adequada fermentao
alcolica (Fonte: AMORIM, 2005) .........................................................................................17
3.1 Relao entre concentraes celulares no inculo e no reator ........................................38
3.2 - Valores utilizados no planejamento para as trs variveis independentes ......................43
3.3 - Matriz do DCC com valores codificados e originais das variveis .................................44
4.1 - Variveis utilizadas no DCC e suas respostas aps 7 horas de fermentao ...................52
4.2 - Regresso mltipla para a resposta rendimento ...............................................................53
4.3 - Regresso mltipla apenas com variveis significativas para a resposta rendimento .....53
4.4 - Regresso mltipla para a resposta produtividade ...........................................................59
4.5 - Regresso mltipla apenas com variveis significativas para a resposta produtividade .59
4.6 - Regresso mltipla para a resposta sacarose residual ......................................................66
4.7 - Regresso mltipla apenas com variveis significativas para a resposta sacarose residual
...................................................................................................................................................67
4.8 - Parmetros obtidos a partir dos dados experimentais e do ajuste do modelo...................78
4.9 Parmetros calculados para as duas condies de validao ..........................................80

iv

Resumo

O etanol tem sido considerado como um combustvel alternativo para diminuir problemas
ambientais e energticos no mundo, em razo da escassez e alta dos preos dos combustveis
fsseis, e da poluio causada por estes. O setor sucroalcooleiro brasileiro acredita que ser
um dos maiores fornecedores mundiais de lcool combustvel e de tecnologias para
montagem de destilarias em outros pases. Portanto, tecnologias capazes de melhorar o
desempenho da produo do setor ganham importncia fundamental no pas. Dessa forma, o
presente trabalho estudou o processo de produo de etanol utilizando um reator tubular de
escoamento ascendente com recirculao externa e uma cepa de leveduras com caractersticas
floculantes. Avaliou-se o rendimento, a produtividade de etanol e a concentrao residual de
sacarose por meio de um delineamento composto central, no qual a porcentagem de clulas no
inculo variou de 4,7 a 45,3%, a concentrao de sacarose de 100 a 220 g/L e a vazo de
recirculao de 2,6 a 17,1 mL/s como variveis. Todos os experimentos foram conduzidos at
o completo consumo da sacarose presente no meio, entretanto, fixou-se o tempo de anlise
das respostas em sete horas, com base nos testes preliminares realizados. A cepa no
apresentou capacidade de flocular e formar flocos bem definidos, porm teve alta capacidade
de sedimentao. A vazo de recirculao exerceu pouca influncia sobre as respostas
analisadas. Estas foram fortemente influenciadas pela concentrao celular no inculo. Foram
avaliadas duas condies de mximo, uma fornecida pela anlise das superfcies de resposta
(45% de clulas no inculo, concentrao inicial de sacarose de 200 g/L e vazo de
recirculao de 15 mL/s) e outra pelo ponto estacionrio do rendimento (33% de clulas no
inculo, concentrao inicial de sacarose de 180 g/L e vazo de recirculao de 12,7 mL/s). O
ponto estacionrio do rendimento foi a melhor condio, dentre as avaliadas, para se conduzir
uma fermentao alcolica utilizando-se esta cepa e a configurao de reator em estudo.
Obteve-se, nesse experimento, um rendimento de 98%, produtividade de 13,4 g
etanol
/L.h e
concentrao residual de sacarose de 3,1 g/L.

Os modelos obtidos pelo mtodo das superfcies
de resposta apresentaram boa reprodutibilidade, pois previram, para esse caso, um rendimento
de 100%, produtividade de 13,5 g
etanol
/L.h e concentrao residual de sacarose de 7,4 g/L. Foi
feito tambm um estudo cintico desse processo de fermentao alcolica nas condies
otimizadas pelo planejamento experimental. O modelo cintico de Tosetto foi ajustado para os
dados experimentais. A fermentao alcolica, usando um reator tipo torre com uma cepa de
leveduras com caractersticas floculantes forneceu maior produtividade e rendimentos quando
comparados a dados reportados pela literatura ou a processos industriais de produo de
etanol.

Palavras-chave: fermentao alcolica, levedura floculante, reator de escoamento
ascendente, etanol

v
Abstract

Ethanol has been considered an alternative biofuel to replace oil reducing environmental and
energy problems in the world. The Brazilian sugar industry believes that it will be one of the
world's largest suppliers of alcohol fuel and technology to other countries. Therefore,
technologies that improve the performance of the sector output gain importance in the
country. Thus, in this work was studied the ethanol fermentation using upflow tower reactor
with external recirculation and one strain of yeast with flocculent characteristics. It was
evaluated the ethanol yield, productivity and the residual sucrose concentration through a
central composite design (CCD), in which the percentage of cells in the inoculum ranged from
4.7 to 45.3%, sucrose concentration from 100 to 220 g/L and the recycle flow rate from 2.6 to
17.1 mL/s as variables. All experiments were conducted until the complete consumption of
medium sucrose, however it was chosen seven hours for analysis of responses in the CCD.
The strain did not show ability to form flakes well defined, but presented capacity of
sedimentation. The recirculation stream exerted little influence on the analyzed responses.
These were heavily influenced by the inoculum cell concentration. The responses were also
influenced by initial sucrose concentration. It was evaluated two conditions of maximum
responses, one by an analysis of response surfaces (45% of cells in the inoculum, initial
sucrose concentration 200 g/L and recirculation flowate of 15 mL/s) and the other by the yield
stationary point (33% of cells in the inoculum, initial sucrose concentration in 180 g/L and
recycled flow of 12.7 mL/s). The yield stationary point was the best condition among those
evaluated to conduct an alcoholic fermentation using this strain and reactor configuration
under study. It was obtained in this experiment, an ethanol yield of 98%, productivity of 13.4
g
ethanol
/L.h and a residual sucrose concentration of 3.1 g/L. The models obtained by the
response surface presented a good reproducibility, as predicted, for this case, a 100% of yield,
13.5 g/L.h for ethanol productivity and the residual sucrose concentration of 7.4 g/L. A
kinetic study of fermentation was realized on the optimized conditions by experimental
design. The Tosetto kinetic model was adjusted to the experimental results. The ethanol
fermentation in tower reactor using the strain of yeast with flocculent characteristics presented
a greater productivity and higher yield when compared to data reported in the literature or in
the industrial processes for ethanol production.

Key Words: alcoholic fermentation, flocculent yeast, upflow reactor, ethanol.

1
CAPTULO 1
INTRODUO

O etanol tem sido considerado uma alternativa para diminuir problemas ambientais e
energticos no mundo, em razo da escassez e alta dos preos dos combustveis fsseis e da
poluio causada por estes. Comparado com combustveis fsseis, o etanol apresenta as
vantagens de ser uma fonte renovvel de energia, que contribui com a reduo das emisses
de dixido de carbono.
A crise do petrleo, na dcada de 70, conduziu ao desenvolvimento do Programa
Nacional do lcool (Pr-lcool), que visava, principalmente, substituir a gasolina por um
combustvel alternativo. Atravs do Pr-lcool, pesquisadores brasileiros foram encorajados a
desenvolver processos de produo de um biocombustvel com baixos custos. Optou-se,
ento, pela produo de etanol a partir da cana-de-acar por via fermentativa, em razo da
baixa nos preos do acar na poca. No incio do sculo XXI, na certeza de escassez e de
crescente elevao no preo dos combustveis fsseis, priorizam-se novamente os
investimentos na pesquisa e produo de etanol (ALTINTAS et al., 2002).
O Brasil o segundo maior produtor de etanol do mundo, o maior exportador mundial,
lder internacional da tecnologia de produo, a primeira economia do globo a atingir o uso
sustentvel dos biocombustveis, e juntamente com os Estados Unidos foi responsvel por
90% da produo mundial de etanol combustvel em 2006 (DUARTE, LOURENO e
RIVEIRO, 2006).
Embora os Estados Unidos da Amrica em 2006 tenham sido apontados como os
maiores produtores de etanol no mundo, produzindo 4265 milhes de gales de etanol contra
4227 produzidos no mesmo perodo no Brasil, a utilizao da cana-de-acar como substrato
faz com que o custo de produo por litro de etanol brasileiro seja consideravelmente inferior
ao obtido pelos americanos. Enquanto as 97 plantas instaladas naquele pas processam
principalmente o milho, matria prima que necessita de um processo de hidrlise para
obteno dos acares fermentescveis, a cana-de-acar possui os acares j na forma
disponvel para a levedura ferment-lo. O custo de produo do etanol brasileiro de US$
0,17/L contra US$ 0,32/L para esse combustvel produzido pelos Estados Unidos da Amrica
(ANDRIETTA, STECKELBERG e ANDRIETTA, 2006).
O mercado consumidor de etanol crescer ainda mais, tanto nacional quanto
mundialmente, em um futuro prximo devido s legislaes ambientais que obrigam o uso de
Captulo 1 Introduo
___________________________________________________________________________
2
biocombustveis em meios de transporte, ao cumprimento das exigncias do Protocolo de
Kyoto, mistura deste na gasolina e a disponibilizao crescente de automveis
bicombustveis.
Na prtica, o lcool j avana sobre a gasolina. No primeiro semestre de 2008, a soma
do consumo de lcool hidratado (o combustvel) e do lcool anidro (misturado proporo de
25% na gasolina) foi de 9,037 bilhes de litros, enquanto o de gasolina A (sem a mistura) foi
de 9,038 bilhes de litros, segundo a Agncia Nacional do Petrleo (ANP, maio/2009).
O Brasil possui 2,9 milhes de hectares em que se cultiva cana-de-acar destinada
produo de etanol, e outros 3,2 milhes de hectares utilizados na produo de acar.
Somadas essas reas, ocupa-se menos de 10% da rea cultivvel do territrio nacional,
indicando elevado potencial para crescimento (GOLDEMBERG, 2008).
Outro estudo, divulgado pela Companhia Nacional de Abastecimento (Conab) aponta
que a demanda interna pelo etanol deve saltar de 16,47 bilhes de litros no ano de 2008 para
24,78 bilhes de litros em 2011, um incremento de 50,46%. De acordo com a pesquisa, as
exportaes tambm tero crescimento. No ano de 2008 foram enviados a outros pases 4,17
bilhes de litros, ou 18,21% a mais que os 3,53 bilhes de litros de 2007. J em 2011 as
exportaes devem chegar a 6,10 bilhes de litros, um aumento de 72,85% sobre o resultado
de 2007 (ETHANOL BRASIL BLOG, maio/2009).
Esse crescimento da demanda, que pode ser observada na Figura 1.1, foi o motor
propulsor da expanso da produo de etanol, que saltou de 14,8 bilhes de litros na safra
2003/04 para mais de 22 bilhes em 2007/08, devendo atingir 27 bilhes de litros na safra
2008/09 (RODRIGUES, 2008).

Figura 1.1 Brasil: produo de cana-de-acar, acar e etanol (Fonte: Unica, 2009)

So vrias as vantagens do uso do etanol como combustvel no Brasil, tais como:
Captulo 1 Introduo
___________________________________________________________________________
3
- Menor dependncia de combustveis fsseis importados, e da variao do preo
destes;
- Menor emisso de poluentes (grande parte dos poluentes resultantes da queima do
etanol no motor so reabsorvidos no ciclo de crescimento da cana-de-acar, e os resduos das
usinas so totalmente reaproveitados na lavoura e na indstria);
- Maior gerao de empregos, sobretudo no campo, diminuindo o xodo rural;
- Os subprodutos da cana so utilizados no prprio ciclo produtor de lcool, como
fonte de energia eltrica obtida pela queima do bagao, e como fertilizante da terra utilizada
no plantio, tornando uma usina de lcool auto-suficiente em termos energticos;
- Fonte de gerao de divisas internacionais, sobretudo em tempos de escassez de
petrleo e conscincia ecolgica (RODRIGUES, 2008).
Nesse cenrio, tecnologias capazes de melhorar o desempenho da produo do setor
ganham importncia fundamental no pas. O setor sucroalcooleiro brasileiro acredita que ser
um dos supridores mundiais de lcool combustvel e de tecnologias modernas para montagem
de destilarias em outros pases do mundo. Especialistas alertam que ganhos de eficincia na
produo do etanol so fatores preponderantes para competitividade em mercados mundiais
(ABARCA, 2005).
No perodo 1975-1994, foi incrementada a capacidade de moagem em 100%, o
processo de extrao elevou sua eficincia de 93% para 97%, enquanto que a eficincia do
processo de fermentao aumentou de 80% para 91%. Por outro lado, a recuperao geral na
produo de lcool aumentou em 30% e o consumo de vapor na destilao foi reduzido em
44%, entre outros indicadores (ABARCA, 2005).
A Tabela 1.1 apresenta alguns dos indicadores da evoluo tecnolgica na rea
industrial do complexo sucroalcooleiro entre 1975 e 2008.
Esses ganhos foram alcanados, exclusivamente, a partir de inovaes incrementais,
pela instalao de uma srie de equipamentos perifricos e de novos procedimentos
operativos nas moendas e na extrao, que resultou na elevao diferencial do rendimento
industrial (ABARCA, 2005).

Captulo 1 Introduo
___________________________________________________________________________
4
Tabela 1.1 Indicadores da evoluo tecnolgica da indstria sucroalcooleira
Varivel Tecnologia 1975 2008
Capacidade de moagem (TCD) DH1 / MCD01 5.500 13.000
Tempo de fermentao (h) CODISTIL Ferm. Bat. / Cont. 12 4 / 6
Teor alcolico do vinho (OGL) CODISTIL Fermentao 7,5 10
Rendimento extrao (% acar
cana)
DH1/ MCD01/ Difusor 93 97
Rendimento fermentativo (%) CODISTIL Ferm. Bat/ Cont 80 91
Rendimento da destilao (%) Destiltech 98 99,5
Rendimento Total (L
lcool
hidratado
/t
cana
)
Tecnologia CODISTIL 66 91
Consumo total de vapor (kg/t
cana
) Tecnologia CODISTIL 600 380
Consumo de vapor- hidratado
(kg/L)
Destiltech 3,4 2
Consumo vapor-anidro (kg/L)
Destiltech (+) Destilplus/ Peneira
Molecular / MEG
4,5 2,8
Caldeira-Eficincia (% PCI) 66 87
Presso (bar) / Temperatura (C)
AZ/ AT/ COGEMAX
21 / 300 100 / 530
Bagao excedente (%) Tecnologia CODISTIL At 8 At 78
(Fonte: DEDINI, 2008)

Baseado no exposto, o presente trabalho apresenta como objetivo geral estudar o
processo de produo de etanol utilizando um reator tubular de escoamento ascendente com
recirculao externa, que garante maior eficincia de produo com menor tempo de
fermentao e uma cepa de leveduras com caractersticas floculantes.
Como objetivos especficos pode-se citar:
- Estudar o efeito da concentrao celular, da concentrao do substrato e da vazo de
recirculao neste processo de fermentao alcolica utilizando a metodologia de superfcies
de resposta;
- Validar os experimentos nas condies timas calculadas;
Captulo 1 Introduo
___________________________________________________________________________
5
- Realizar um estudo cintico do processo de fermentao alcolica nas condies
otimizadas pelo delineamento composto central.

6
CAPTULO 2
REVISO BIBLIOGRFICA

2.1. Histrico

Produtos de fermentao so usados desde a Antigidade. H registros que
comprovam o uso de alimentos fermentados pelos sumrios, egpcios antigos, assrios e
babilnios. A produo de bebidas alcolicas pela fermentao de gros de cereais j era
conhecida antes do ano 6.000 a.C. (VILLEN, 2009).
Atribui-se a Bechner, no sculo XVII, a afirmao de que somente os lquidos
aucarados so capazes de entrar em fermentao alcolica. Ao contrrio do que pensavam
alguns pesquisadores que o antecederam, para Bechner o lcool se formava durante o
processo de fermentao, julgando erradamente, no entanto, a necessidade de ar para causar o
fenmeno que ele considerava semelhante combusto. Os primeiros estudos envolvendo o
mecanismo da fermentao alcolica relacionavam apenas formao dos produtos inicial e
final. Foi Black que primeiro postulou, no sculo XVIII, que o lcool etlico e gs carbnico
eram os nicos produtos formados do acar durante a fermentao alcolica (MENEZES,
1980).
Entretanto, o primeiro a efetuar um estudo quantitativo da fermentao alcolica foi
provavelmente Lavoisier, em 1789. Coube a Pasteur, a partir de 1857, a explicao clara
sobre a natureza da fermentao alcolica, atribuindo-a a seres vivos, as leveduras, como
agentes causais. Segundo ele, 100 partes de sacarose proporcionam 105,4 partes de acar
invertido, que, por sua vez, produzem 51,1 partes de etanol, 49,4 partes de gs carbnico, 3,2
partes de glicerol, 0,7 parte de cido succnico e uma parte de outras substncias. As
pesquisas subseqentes no desvendamento das reaes intermedirias receberam novo mpeto
com a constatao por Bchner, em 1897, que extratos livres de clulas de levedura possuam
a capacidade de provocar, a fermentao alcolica (MENEZES, 1980).

2.2. Conduo da fermentao alcolica

H vrias maneiras de se conduzir a fermentao. O reator biolgico pode ser
operado de forma descontnua, semicontnua, descontnua alimentada (ou batelada
alimentada) ou contnua, todos podendo trabalhar com ou sem recirculao do fermento
Captulo 2 Reviso Bibliogrfica
___________________________________________________________________________
7
(SCHIMIDELL e FACCIOTTI, 2001). Na produo industrial de etanol em grande escala, os
processos fermentativos se classificam em processos em batelada e contnuos, sendo que a
denominao batelada na prtica industrial da produo de etanol se refere batelada
alimentada.
A nvel industrial, os biorreatores, tambm denominados de dornas, que so reatores
de ao do tipo tanque agitado, normalmente fechadas e mantidas a uma temperatura entre 33 e
35C at o final do processo, quando a concentrao de etanol se situa entre 7 e 12 GL. Nas
dornas fechadas usual a presena de um sistema de lavagem do gs de sada para
recuperao do etanol evaporado (as perdas por evaporao correspondem a 1,5% de todo
etanol gerado). No incio da fermentao utilizada alta concentrao celular inicial (10
6
a
10
7
clulas/mL) e ao fim da fermentao a concentrao celular atinge valores 10 a 100 vezes
maiores que o inicial (concentrao final de 10
8
clulas/mL) (DUARTE, LOURENO e
RIVEIRO, 2006).

2.2.1. Processo em Batelada

Esse processo tambm conhecido como processo descontnuo cuja descrio tpica
pode ser enunciada da seguinte forma: prepara-se um meio de cultura adequado nutrio e
ao desenvolvimento do micro-organismo e tambm ao acmulo do produto desejado; coloca-
se este meio de cultura em um biorreator; adiciona-se o micro-organismo responsvel pelo
processo biolgico e se aguarda que o processo ocorra. Aps um determinado tempo de
fermentao, retira-se o caldo fermentado do reator e executam-se as operaes unitrias
necessrias para a recuperao do produto (SCHIMIDELL e FACCIOTTI, 2001).
No que se refere manuteno e assepsia, o processo descontnuo considerado o
mais seguro, pois, ao final de cada batelada, o reator pode ser esterilizado juntamente com um
novo meio de cultura, recebendo um novo inculo que deve ser submetido a todos os
controles necessrios para assegurar a presena nica do micro-organismo responsvel pelo
processo (SCHIMIDELL e FACCIOTTI, 2001). Alm do menor risco de contaminao, este
processo apresenta grande flexibilidade de operao pela possibilidade de utilizao dos
fermentadores para a fabricao de diferentes produtos e por permitir uma melhor condio de
controle com relao estabilidade gentica do micro-organismo (CARVALHO e SATO,
2001).
___________________________________________________________________________
8
A fermentao em batelada pode levar a baixos rendimentos e produtividades quando
o substrato adicionado de uma s vez, no incio da fermentao, exerce efeitos de inibio,
represso ou desvia o metabolismo celular a produtos que no interessam (CARVALHO e
SATO, 2001).
Assim, o processo batelada sempre utilizado como base para as comparaes de
eficincias atingidas com relao aos outros processos, mas a sua baixa eficincia estimula o
surgimento de formas alternativas (SCHIMIDELL e FACCIOTTI, 2001).
A conduo da fermentao alcolica por processo batelada praticamente s ocorre
em escala de laboratrio e em pequenas destilarias de aguardente.

2.2.2. Processo em Batelada Alimentada

Os processos em batelada alimentada so eficientes e versteis na grande maioria dos
processos fermentativos, inclusive nos de fermentao alcolica. Em tais processos,
especialmente naqueles com altas densidades celulares, a produtividade alta devido ao
grande nmero de clulas viveis no meio em fermentao. A batelada alimentada permite o
controle da concentrao de acar, minimizando os efeitos de inibio pelo substrato e
permitindo a sua adio em momentos propcios durante a fermentao (MACNEIL e
HARVEY, 1990; VIEGAS, 2003).
O processo batelada alimentada, tambm conhecido como Melle-Boinot, um
processo em que o substrato alimentado sob condies controladas at atingir o volume do
biorreator. Este processo, apesar de antigo, muito conveniente e satisfatrio quanto
operao e eficincia de converso de acares a lcool (ZARPELON e ANDRIETTA, 1992;
CARVALHO e SATO, 2001).
Tais processos possibilitam uma vazo de alimentao constante ou varivel com o
tempo e a adio de mosto de forma contnua ou intermitente. Devido flexibilidade de
utilizao de diferentes vazes de enchimento dos reatores com meio nutriente, nos processos
batelada alimentada possvel controlar a concentrao de substrato no fermentador, de modo
que, por exemplo, o metabolismo microbiano seja deslocado para uma determinada via
metablica, levando ao acmulo de um produto especfico (CARVALHO e SATO, 2001).
possvel tambm que se trabalhe com altas concentraes de substrato tendo-se um acrscimo
em produtividade do etanol e uma diminuio do volume do reator e da quantidade de vinhaa
produzida (IMPE VAN et al., 1994).
___________________________________________________________________________
9
A migrao das plantas de batelada alimentada para contnua ocorre de forma lenta nas
indstrias brasileiras. Acredita-se que no Brasil 70% das destilarias instaladas ainda utilizem o
processo do tipo batelada alimentada (ANDRIETTA, STECKELBERG e ANDRIETTA,
2006).

2.2.3. Processo Contnuo

O processo contnuo caracteriza-se por possuir uma alimentao contnua do meio de
cultura a uma determinada vazo, sendo o volume de reao mantido constante pela retirada
contnua do caldo de fermentao (FACCIOTTI, 2001). importante manter o cultivo
contnuo sob regime estacionrio, isto , quando as propriedades do meio permanecem
constantes com o tempo em cada ponto (MENEZES, 1980).
O processo contnuo de fermentao alcolica pode ser dividido em trs partes:
unidade de tratamento cido, fermentadores e unidade de separao de clulas (centrfugas).
O nmero total de dornas de fermentao e o volume de cada uma delas tem sido objeto de
estudo para diversos pesquisadores (VIEGAS, 2003). Ghose e Thyagi (1979) concluram que
na operao utilizando-se duas dornas iguais em srie, o volume total de reatores 58%
menor do que usando um reator.
Tal processo pode ser mais vantajoso que o de batelada ou batelada alimentada, pois
inclui otimizao das condies de processo para uma maior produtividade, perodo longo de
produtividade contnua, maior produtividade volumtrica, maior uniformidade do produto,
reduo dos custos laboratoriais uma vez alcanado o estado desejado, reduo do tempo de
limpeza e sanitizao das dornas e maior facilidade de controle automtico. A maior
desvantagem que as fermentaes contnuas so mais suscetveis contaminao bacteriana
por longos prazos de exposio (CYSEWSKI e WILKIE, 1978; FACCIOTTI, 2001).
Vrias indstrias montaram processos contnuos de produo de etanol, que quando
bem operados levam a uma maior produtividade, porm a custos iniciais e de operao muito
maiores, exigindo sistemas de controle mais sofisticados. Alm disso, a fermentao contnua
um processo que requer maior conhecimento do comportamento do micro-organismo em
relao ao meio ambiente onde ele atua. Fatores como pH, temperatura, concentrao de
sacarose e lcool, concentrao de biomassa, viabilidade celular dentre outros, influenciam na
produtividade do sistema, requerendo assim, maior controle sobre o processo (ATALA et al.,
2000).
___________________________________________________________________________
10
Segundo Zarpellon e Andrietta (1992) vrios processos para fermentao contnua tem
sido utilizados e alguns dos quais no tiveram xito. Os principais processos podem ser
divididos em dois grupos: fermentao em dorna nica, onde todo o processo realizado
numa nica dorna, de mistura completa, onde o teor de acares e de lcool constante e
fermentao em cascata, onde as dornas individuais so conectadas em srie, passando-se
consecutivamente de uma para outra.
A escolha entre processo contnuo ou em batelada para produo de etanol por
fermentao gera muita discusso. Tradicionalmente as destilarias e usinas brasileiras usam o
sistema descontnuo ou de batelada alimentada, processo que comea a enfrentar concorrncia
do modelo contnuo, porm apolmica entre processos concorrentes sempre existiu na rea
industrial das usinas. No Brasil, o sistema de batelada considerado mais confivel por
muitos engenheiros, por apresentar sistema de assepsia mais fcil. No h estatsticas exatas,
mas os pesquisadores acreditam que o processo contnuo seja responsvel pela produo de
25% a 30% do etanol fabricado no Brasil o sistema batelada domina o mercado das
operaes fermentativas. Algumas usinas voltaram ao processo batelada aps alguns anos de
operao contnua. Quando se faz acar e lcool, o sistema mais aceito pelos tcnicos o
batelada alimentada, porm o assunto est longe de ser esgotado, sendo exigido ainda muito
estudo de Engenharia e Cintica da Fermentao Alcolica (ALCOOLBRS, 2006).
Segundo Amorim (2005), o sistema em batelada alimentada apresenta maior
rendimento, maior teor alcolico no final da fermentao, maior flexibilidade e menos
sujeito contaminaes. O sistema contnuo apresenta menor custo de instalao,
automatizao mais fcil e menor volume de equipamentos, tais como dornas e trocadores de
calor.

2.2.4. Recirculao de Leveduras

Aps o trmino da fermentao alcolica em um processo industrial, as leveduras
devem ser separadas do produto ou resduo produzido. Estas so novamente utilizadas no
processo, garantindo menor custo para reposio de fermento e melhores condies de
operao, pois os micro-organismos reciclados no necessitam consumir substrato para fase
de crescimento e j esto adaptados ao meio. As clulas devem ser separadas do produto
produzido tambm a fim de evitar a contaminao deste (LIMA, 2004).
Para se obter melhores valores de converses, ou quando necessrio um aumento da
concentrao celular no interior do reator, utilizam-se reatores contnuos com reciclo. O
___________________________________________________________________________
11
reciclo de clulas usual em diversas fermentaes como a fermentao alcolica e
tratamento de resduos (BELTER, CUSSTER e HU, 1988).
No processo de reciclo a vazo da sada do reator passa por um separador, e uma
bomba, geralmente centrfuga, para o reenvio de clulas para o reator. No processo de
separao das clulas, usam-se centrfugas, filtros e decantadores (COUTINHO FILHO,
2007). Segundo Furtado e Scandiffio (2006), nos processos convencionais usados por
praticamente todas as cerca de 400 usinas brasileiras, o processo de separao do mosto
fermentado utilizado a centrfuga, onde ocorre a separao das leveduras e do etanol. O
vinho gerado encaminhado para as colunas de destilao, o passo final do processo de
produo do etanol, enquanto o fermento centrifugado, contendo as clulas de leveduras,
passa por um tratamento severo antes de retornar ao processo fermentativo, que consiste em
diluio com gua e adio de cido sulfrico at, normalmente, pH=2,5, ou mais baixo (pH
=2) no caso de haver infeco bacteriana. Esta suspenso de fermento diludo e acidificado,
conhecido na prtica com o nome p-de-cuba, permanece em agitao de uma a trs horas,
antes de retornar dorna de fermentao (FURTADO e SCANDIFFIO, 2006).
Esse tratamento cido pratica comum para o controle de bactrias contaminantes
contidas no leite de leveduras. Observa-se a reduo de 44,3% da microbiota contaminante,
em funo do vigor e tempo desse tratamento. Entretanto, o tratamento cido da levedura,
quando floculada indesejavelmente pela ao de bactrias, induz a disperso do fermento e
das bactrias, mas no a sua total eliminao (SOUZA e MUTTON, 2004).
A corrente reenviada por reciclo contm concentrao celular maior que a da sada do
reator e possibilita o processamento de uma maior quantidade de material e maiores taxas de
diluio do que a utilizada em um reator sem reciclo (COUTINHO FILHO, 2007).
Aumentando-se a taxa de reciclo celular, a taxa de crescimento celular se torna maior
que a taxa de diluio, que causa a diminuio dos efeitos de perturbaes e
consequntemente o aumento da estabilidade do processo, alm de se economizar substrato,
pois as clulas que entram no processo em uma alimentao nova consomem substrato para
crescer, e as clulas que voltam ao processo pela corrente de reciclo j se encontram aptas
fermentao e adaptadas ao meio (BELTER, CUSSTER e HU, 1988).
Existem, logicamente, limites para a razo de reciclo utilizada em processos aerbios,
pois, medida que a frao de clulas recuperada aumenta, a concentrao de clulas no meio
cresce at se tornar impossvel o suprimento de oxignio a estas. Isto no se aplica ao
processo anaerbio, em que no h esta limitao, mas h outras limitaes como as
associadas ao suprimento dos nutrientes (COUTINHO FILHO, 2007).
___________________________________________________________________________
12
2.2.5. Tratamentos fi nais

Concluda a fermentao, o produto contido nas dornas denomina-se vinho, que uma
mistura hidroalcolica, contendo alm dos componentes principais o etanol e a gua
outras substncias como dixido de carbono que se encontra dissolvido em pequenas
quantidades, clulas de leveduras, micro-organismos, sais minerais, acares no
fermentados, partculas slidas em suspenso provenientes da matria-prima, leo fsel,
aldedos, steres e cidos orgnicos.
As leveduras so separadas por centrifugao e da mistura lquida restante separa-se o
etanol pelo processo de destilao-retificao, o qual decompe essa soluo mltipla em seus
constituintes, recolhendo-se o lcool como o principal. Isso se consegue selecionando as
condies de temperatura e presso timas de maneira tal que uma fase lquida e uma fase
vapor coexistam e se obtenha uma diferena de concentrao relativa das substncias a serem
separadas nessas duas fases. Quando as duas fases esto em estado de equilbrio fsico
ocorrer diferena relativa mxima da concentrao nessas fases (BELTER, CUSSTER e
HU,1988).
O lcool hidratado obtido apresenta uma concentrao alcolica de 96 a 97,2% em
volume. Quando se deseja obter lcool absoluto preciso desidratar o lcool, pois o processo
de destilao fracionada no consegue separar o lcool da gua em uma concentrao
alcolica de 97,2%, quando se forma uma mistura azeotrpica, isto , uma mistura que
apresenta ponto de ebulio fixo, assim como vapor com a mesma composio que o lquido
com o qual est em equilbrio. A desidratao do lcool pode ser feita por processos qumicos
ou fsicos, utilizando substncias desidratantes ou promovendo-se o deslocamento do ponto
azeotrpico (MENEZES, 1980).

2.3 Fatores que Afetam a Fermentao Alcolica

Diversos fatores fsicos (temperatura, presso osmtica), qumicos (pH, oxigenao,
nutrientes minerais e orgnicos, inibidores) e microbiolgicos (espcie, linhagem e
concentrao da levedura, contaminao bacteriana), afetam o rendimento da fermentao e a
eficincia da converso de acar em etanol (LIMA, BASSO e AMORIM, 2001).
Durante a fermentao, a levedura pode estar exposta a vrios fatores estressantes.
Dentre esses fatores, os mais freqentemente mencionados so os altos teores alcolicos, a
temperatura elevada, a acidez do meio (inclusive no tratamento cido), a presena de sulfito, a
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13
contaminao bacteriana e, mais raramente documentada, a contaminao com leveduras no
Saccharomyces (BASSO, 1991; BASSO, 2004).
Segundo Menezes (1980), a faixa de temperatura recomendada est entre 25 e 36C.
Temperaturas inferiores ao limite retardam a fermentao e temperaturas superiores
ocasionam a evaporao do lcool e favorecem o aparecimento de contaminaes. A
temperatura adequada deve ser mantida na fermentao por meio de dispositivos para o
resfriamento de dornas. medida que a temperatura aumenta, a contaminao bacteriana
favorecida e a levedura fica mais sensvel toxidez do etanol. As linhagens industriais de S.
cerevisiae so normalmente resistentes a alta temperatura, mas este fator interfere na
viabilidade celular quando em sinergia com a presena de etanol ou meio com baixo pH
(SILVA FILHO et al., 2005). As leveduras so mesfilas. A faixa de temperatura ideal para a
fermentao um aspecto bastante divergente entre os tcnicos. Um ponto considerado que
temperatura acima de 35C favorece a multiplicao de bactrias, reduz a viabilidade do
fermento e aumenta a acidez. Amorim (2005) afirma que a temperatura poder chegar aos
35C se conseguir manter a contaminao entre 5.10
6
a 1.10
7
bactrias/mL. Nesta temperatura
a levedura multiplica menos e aumenta o rendimento.
O pH correto para favorecer a levedura e inibir o desenvolvimento de muitos tipos de
bactrias est entre 4,0 e 5,0 (MENEZES, 1980). Nos mostos industriais, os valores de pH
geralmente se encontram na faixa de 4,5 a 5,5. No processo com reutilizao da levedura,
realizado tratamento com cido sulfrico em pH de 2,0 a 3,2, durante uma a duas horas,
visando reduo da carga microbiana. Desta forma, a fermentao alcolica se inicia com
valores de pH baixos, finalizando com valores de 3,5 a 4,0 (LIMA, BASSO e AMORIM,
2001).

2.4. O Agente da Fermentao Alcolica

As leveduras so os micro-organismos mais importantes na obteno do lcool por
via fermentativa. Bactrias, entre as quais a Zymomonas mobilis, so tidas como capazes de
produzir etanol, mas, economicamente, as leveduras ainda so os agentes largamente
utilizados (LIMA, BASSO e AMORIM, 2001).
O gnero Saccharomyces um dos grupos de micro-organismos mais estudados pela
comunidade cientfica. Esse interesse funo da ampla aplicao desses micro-organismos
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na indstria de biotecnologia. Essa levedura tem sido relatada como agente de transformao
desde 1800 (ANDRIETTA, STECKELBERG, ANDRIETTA, 2006).
As leveduras so agentes biolgicos ativos responsveis pela fermentao alcolica
e, por isso, a escolha da linhagem apropriada de importncia fundamental para o xito da
fermentao. So definidas como fungos especializados, monocelulares, desclorofilados. Do
aspecto das exigncias nutricionais esse grupo situa-se entre aquele que se desenvolve em
substratos mais simples, constitudos por fontes de carbono e sais minerais, e aquele que exige
meios mais complexos (MENEZES, 1980).
A fermentao alcolica , portanto, um processo biolgico conduzido pela levedura,
normalmente Saccharomyces cerevisiae, na forma unicelular com 2 a 8 micrmetros de
dimetro, cuja fisiologia e bioqumica tem sido negligenciada em favor de uma viso fsico-
qumica e mecnica do processo. Porm, trata-se de um organismo vivo, com mltiplas
habilidades metablicas, podendo alterar a estequiometria da fermentao em resposta a
alteraes no meio, com grande impacto no rendimento do processo (LIMA, BASSO e
AMORIM, 2001). Estas se reproduzem basicamente por gemao (brotamento), em que a
clula me, aps um perodo de unio entre os citoplasmas, d origem a uma nova clula
(STECKELBERG, 2001).
Somente poucas espcies desses micro-organismos so utilizadas na fabricao de
lcool. Entre as espcies indicadas muito importante a escolha de linhagens selecionadas e
aclimatadas para realizao da fermentao alcolica e que devem apresentar certos requisitos
para a boa eficincia da fermentao:
- Velocidade de fermentao: a quantidade de acar transformado em lcool por
unidade de tempo e de massa de levedura deve ser elevada;
- Resistncia ao lcool: de grande interesse a obteno de leveduras que podem
resistir a concentraes elevadas de etanol, uma vez que se pode operar com mostos com
concentraes elevadas de acar. Isso possibilita a obteno de vinhos com maior teor
alcolico reduzindo os custos com a destilao;
- Eficincia de converso: representa a capacidade da levedura de converter o acar
em lcool. Leveduras que no utilizam ou utilizam pouco substrato para transform-lo em
etanol no se prestam fermentao alcolica;
- Resistncia ao pH e antisspticos: alm da resistncia ao lcool, a levedura precisa
tolerar o baixo pH do meio e antisspticos, uma vez que um dos recursos usados para
combater as infeces do mosto e do vinho baixar o pH ou adicionar antissptico;
___________________________________________________________________________
15
- Estabilidade gentica: essas propriedades mencionadas devem ser mantidas nas
geraes subseqentes da linhagem genitora. Ou seja, as transferncias contnuas e sucessivas
em meios de cultura no devem alterar suas propriedades fermentativas desejveis (LIMA,
BASSO e AMORIM, 2001).
A necessidade de determinao do desempenho industrial de uma levedura se justifica
pela ocorrncia de cepas que apresentam diferenas significativas de desempenho
fermentativo, mesmo apresentando padres cromossmicos iguais. A determinao do
desempenho fermentativo, alm de avaliar a performance industrial de uma cepa de levedura,
pode proporcionar a diferenciao final entre cepas S. cerevisae de mesmo caritipo
(STROPPA, ANDRIETTA e ANDRIETTA, 2003).
As leveduras Saccharomyces cerevisiae so micro-organismos de alta eficincia
fermentativa. Este fato tem permitido a seleo de cepas industriais com caractersticas
adquiridas que as tornam produtores superiores de etanol mais tolerantes aos produtos da
fermentao. Estudos relacionados com a melhoria das caractersticas da levedura ou com o
processo de produo de etanol tm sido apresentados na literatura com o objetivo de
aumentar o rendimento e a produtividade dos processos fermentativos. Estes estudos incluem
a utilizao de novas cepas de micro-organismos, mudanas na composio e concentrao de
nutrientes do meio de cultura e reciclagem de resduos (AMORIM, 2005).
As leveduras (organismos saprfitos) exigem uma fonte de carbono elaborada
glicose ou outro acar que fornece a energia qumica e o esqueleto carbnico de suas
estruturas celulares, constitudas predominantemente de carbono, oxignio e hidrognio. A
Tabela 2.1 ilustra a composio molecular de levedura comercial (HARRISON, 1971).
Fontes de carbono, nitrognio e fsforo so imprescindveis fermentao
(MENEZES, 1980). O meio de cultura, alm do carbono, hidrognio e oxignio deve,
igualmente, fornecer nitrognio, fsforo, enxofre, potssio, magnsio, clcio, zinco,
mangans, cobre, ferro, cobalto, iodo e outros elementos em quantidades diminutas (LIMA,
BASSO e AMORIM, 2001).
Segundo AMORIM (2005), as clulas de leveduras, durante o processo de
fermentao alcolica, apresentam necessidades nutricionais e os nutrientes influenciam
diretamente a multiplicao e o crescimento celular e tambm a eficincia da transformao
do acar em lcool.
A levedura Saccharomyces cerevisiae utiliza o nitrognio nas formas amoniacal,
(NH
4
+
), amdica (uria) ou amnica (na forma de aminocidos), no tendo habilidade
metablica para aproveitar o nitrato e com pouqussima ou nenhuma capacidade de utilizar as
___________________________________________________________________________
16
protenas do meio. O fsforo absorvido na forma de on H
2
PO
4
-
, forma predominante em pH
4,5, enquanto enxofre pode ser assimilado do sulfato, sulfito ou tiossulfato (AMORIM, 2005).

Tabela 2.1 - Composio Molecular de Levedura Comercial Saccharomyces cerevisiae
Constituinte Levedura (g/100g matria seca)
Carbono (C) 45,00 - 47,00
Hidrognio (H) 6,00 - 6,50
Oxignio (O) 31,00 - 32,00
Nitrognio (N) 7,50 - 9,00
Potssio (K) 0,90 - 3,5 0
Fsforo (P) 1,10- 2,00
Enxofre (S) 0,30 - 0,50
Magnsio (Mg) 0,15 - 0,50
Clcio (Ca) 0,04 - 0,90
Sdio (Na) 0,02 - 0,20
Zinco (Z) 0,004 -0,13
Ferro (Fe) 0,003-0,10
Cobre (Cu) 0,002 -0,12
Mangans (Mn) 0,0004 -0,0035
Cobalto (Co) 0,0005
Molibdnio (Mo) 0,000005 - 0,000009
Cloro (Cl) 0,004 -0,10
Iodo (I) 0,00005 -0,0004
Chumbo (Pb) 0,0001 -0,0007
Arsnio (As) 0,00001
(Fonte: HARRISON, 1971)

A Tabela 2.2 apresenta as concentraes dos principais nutrientes minerais para uma
boa fermentao alcolica. Tais nutrientes podem j estar presentes no mosto, sendo
desnecessrias adies (AMORIM, 2005).

___________________________________________________________________________
17
Tabela 2.2 - Concentraes de nutrientes minerais no mosto para se obter adequada
fermentao alcolica
Mineral Variao no Mosto (mg/L) Recomendao (mg/L)
N-assimilvel (NH
4
+
R - NH2) 7 350 100 300
Fsforo (P) 20 200 50 250
Potssio (K) 300 1200 700 1300
Magnsio (Mg) 80 3900 100 200
Enxofre (S) 80 3900 Menor que 80
Clcio (Ca) 150 2000 Menor que 150
Zinco (Zn) 0,45 9 1 5
Cobre (Cu) 0,20 8 1 5
Mangans (Mn) 2 8 1 5
Alumnio (Al) 5 240 <300 (mosto de caldo)

2.5. Bioqumica da Fermentao Alcolica

A fermentao alcolica a ao de leveduras sobre acares fermentescveis contidos
em uma soluo. um processo biolgico no qual a energia fornecida por reaes de
oxidao parcial pode ser utilizada para o crescimento de leveduras e a oxidao parcial
anaerbia da hexose na produo de lcool e CO2 (LIMA e MARCONDES, 2002).
A transformao da sacarose em etanol e CO2 envolve 12 reaes em seqncia
ordenada, cada qual catalisada por uma enzima especfica, conforme apresentado na
Figura 2.1. Tal aparato enzimtico encontra-se confinado no citoplasma celular, sendo,
portanto, nessa regio da clula que a fermentao alcolica se processa (LIMA, BASSO e
AMORIM, 2001).
Os carboidratos considerados substratos para a fermentao tanto podem ser
endgenos (constituintes da levedura, como o glicognio e trealose) como exgenos
(sacarose, glicose, frutose e outros), estes ltimos fornecidos levedura (LIMA, BASSO e
AMORIM, 2001).
A principal rota metablica envolvida na fermentao etanlica a gliclise, na qual
uma molcula de glicose metabolizada e duas molculas de piruvato so produzidas. Sob
condies anaerbias, o piruvato convertido a etanol com desprendimento de CO
2
.
Teoricamente, o rendimento 0,511 para etanol e 0,489 para CO
2
em base mssica, utilizando
como substrato uma hexose. Dois ATPs produzidos na gliclise so usados na conduo da
biossntese das leveduras, que envolve diversas biorreaes que requerem energia. Portanto, a
produo de etanol est fortemente relacionada com o crescimento das leveduras, o que
___________________________________________________________________________
18
significa que leveduras devem ser produzidas como subproduto. Sem o consumo contnuo de
ATP pelo crescimento celular, o metabolismo glicoltico seria interrompido imediatamente,
em razo do acmulo intracelular de ATP, que inibe a fosfofrutoquinase, uma das mais
importantes enzimas reguladoras da gliclise (BAI, ANDERSON e MOO-YOUNG, 2008).
O objetivo principal da levedura, ao metabolizar anaerobiamente o acar, gerar uma
forma de energia (ATP, adenosina trifosfato) que ser empregada na realizao de diversas
funes fisiolgicas (absoro, excreo e outras) e biossnteses necessrias manuteno da
vida, crescimento e multiplicao. O etanol e CO
2
resultantes se constituem to somente em
produtos de excreo, sem utilidade metablica para a clula em anaerobiose (LIMA, BASSO
e AMORIM, 2001).
___________________________________________________________________________
19

Figura 2.1 - Seqncia de reaes enzimticas pela fermentao alcolica de carboidratos
endgenos (glicognio e trealose) ou exgenos (sacarose e maltose), conduzida por
Saccharomyces cerevisiae (LIMA, BASSO e AMORIM, 2001)

Durante a fermentao, as leveduras sofrem vrios tipos de estresse. Alguns em razo
do meio, como deficincia nutricional, alta temperatura e contaminao, outros pelo prprio
___________________________________________________________________________
20
metabolismo da levedura, como o acmulo de etanol e a conseqente inibio do crescimento
celular e produo de etanol. Alguns desses estresses afetam mais severamente as leveduras
que outros, reduzindo a viabilidade celular e diminuindo o rendimento do etanol (BAI,
ANDERSON e MOO-YOUNG, 2008).

2.6. Rendimento da Fermentao Alcolica

Por razes econmicas importante exercer uma constante e sistemtica vigilncia da
produo de uma destilaria, o que deve ser efetuado por um balano material e energtico,
alm do prprio balano econmico. Quanto mais completo o balano material, considerando
todos os insumos e exumos materiais, representados pelas matrias-primas, pelos subprodutos
e resduos, tanto mais efetivo ser o controle do processo, permitindo uma melhor fiscalizao
de sua economicidade (MENEZES, 1980).
O caldo da cana, at o presente momento a nica matria-prima utilizada em escala
industrial para a produo do etanol no Brasil, apresenta rendimento perto de 80 litros de
etanol por tonelada de cana-de-acar (ANDRIETTA, STECKELBERG e ANDRIETTA,
2006). Para produzir um quilograma de etanol so necessrios 30,1 quilogramas de cana-de-
acar (LUO, VOET e HUPPES, 2008).
Pode-se estabelecer assim que a eficincia geral de fabricao o produto da
eficincia de preparo da matria-prima (moagem, extrao do caldo) pela eficincia da
fermentao e pela eficincia da destilao. Para os substratos indiretamente fermentescveis
inclui-se tambm a eficincia da hidrlise. Partindo-se da equao de Gay Lussac

2 5 2 6 12 6
2 2 CO OH H C O H C + (2.1)
obter-se-ia, estequiometricamente, a partir de 100 g de glicose, 51,11 g de lcool ou 64 mL.
Entretanto, em condies de trabalho, embora com todo o rigor da tcnica, obtm-se a partir
de 100 g de glicose em torno de 48,5 g de etanol ou 61 mL de etanol a 15C. Isto porque
aproximadamente 5% do acar so reservados para o crescimento celular e para a formao
dos subprodutos da fermentao, como glicerol, cido succnico, etc. (MENEZES, 1980).
As hexoses so reagentes primrios no metabolismo da fermentao alcolica.
Estequiometricamente, o rendimento do processo fermentativo 0,511 g/g de hexose, porm
ocorrem, juntamente com a fermentao alcolica, reaes secundrias, resultando na reduo
de rendimento terico. Quando se trabalha com substratos complexos, em processos
industriais, notadamente na presena de corpos estranhos ao meio (fibras, gomas, leveduras
___________________________________________________________________________
21
selvagens) observa-se a gerao de novos subprodutos e o rendimento industrial reduzido
para at 90% (LIMA e MARCONDES, 2002).
Quando se considera o substrato formado de sacarose, juntamente com pequenas
porcentagens de glicose e frutose, como na indstria brasileira de etanol, o acar definido
como acar redutor total (ART) e o rendimento estequiomtrico da fermentao 0,511 g de
etanol por grama de ART. Quando o rendimento estequiomtrico calculado com base na
sacarose o valor do mesmo 0,538 g de etanol por grama de sacarose. Na prtica industrial o
rendimento da fermentao alcolica bem conduzida atinge de 90 a 92% do rendimento
estequiomtrico, havendo um consumo de acar para formao de biomassa celular e
subprodutos. Se ocorrer contaminao acentuada do meio, este rendimento ainda menor
(LIMA, BASSO e AMORIM, 2001).
O etanol representa o produto principal da fermentao alcolica e pode alcanar
concentraes de at 12 a 14% v/v em fermentao normal. O gs carbnico, segundo produto
da fermentao alcolica, tem um rendimento de 0,4 a 0,5 gramas de CO
2
por grama de
acar degradado consumido (BARRE et al., 2004).
Segundo Viegas (2003), uma unidade de fermentao contnua convencional, ou seja,
que utiliza separadoras centrfugas e clulas de leveduras no floculantes, geralmente opera
com rendimento de 87% e produtividade de 7,9 g
etanol
/L.h quando melao utilizado como
matria-prima.
A quantidade e o nmero de subprodutos presentes dependem de uma srie de fatores.
Os principais so o tipo de matria-prima, a linhagem de levedura empregada e o processo de
fabricao. Freqentemente, encontram-se os seguintes produtos: glicerol, cido succnico,
cido actico, lcoois superiores, steres, aldedos, cetonas, cidos graxos, gs sulfdrico,
furfurol e leos essenciais. O gs carbnico e leo fsel (lcoois superiores) so os nicos
subprodutos teis da fermentao alcolica (MENEZES, 1980).

2.7. Aumento da Produtividade

Atualmente, clulas livres suspensas no meio fermentativo so amplamente utilizadas
em plantas industriais de produo de etanol. Entretanto, no se consegue operar com altas
densidades de leveduras e a produo de etanol inevitavelmente mais baixa, a menos que as
clulas sejam separadas por centrifugao e recicladas ao reator. Altos investimentos de
capital e elevado custo energtico de operao das centrfugas entravam sua aplicao em
___________________________________________________________________________
22
plantas qumicas produtoras de etanol, especialmente em pases em desenvolvimento, nas
quais o custo energtico relativamente alto (XU, ZHAO e BAI, 2005).
Aps o trmino da fermentao no processo industrial, os micro-organismos
(leveduras e nutrientes para mant-las) devem ser separados do produto produzido. O ponto
em que a fermentao acaba monitorado pela avaliao da concentrao de acar (Brix) no
meio (CUNHA et al., 2006).
A forma mais usual de promover a separao das leveduras o uso de centrfugas,
visto que a sedimentao natural se mostra invivel (a deposio das clulas pode ser at 6000
vezes mais rpida na centrifugao que na sedimentao natural, sob ao da fora
gravitacional somente) (COUTINHO FILHO, 2007).
Entretanto, o uso de centrfugas nesse processo requer alto investimento de capital,
elevado custo energtico na operao, alm de ser um setor do processo que no admite
automao total. Tais fatores, somados ao custo de tratamento e bombeamento da corrente de
reciclo, elevam o custo do produto final (ABARCA, 2005).
Em reatores contnuos com centrifugao de clulas, pode no ser economicamente
vantajoso trabalhar com altas concentraes celulares, pois se empregaria um grande nmero
de centrfugas na separao, tornando o processo invivel economicamente, pelo alto custo do
equipamento, considervel consumo de energia e necessidade de manuteno peridica
(VIEGAS, ANDRIETTA e ANDRIETTA, 2002).
Segundo ABARCA (2005), tecnologias capazes de melhorar o desempenho da
produo do setor ganham importncia fundamental no pas. O setor sucroalcooleiro
brasileiro acredita que ser um dos supridores mundiais de lcool combustvel e de
tecnologias modernas para montagem de destilarias em outros pases do mundo. Especialistas
alertam que ganhos de eficincia na produo do etanol so fatores preponderantes para
competitividade em mercados mundiais.
Uma alternativa possvel para o aumento da concentrao celular no interior dos
fermentadores, e conseqente aumento da produtividade, a utilizao de clulas
imobilizadas (BAPTISTA et al., 2006).

2.7.1. Bi orreatores com Imobi li zao

Estratgias para a reteno das clulas no interior do biorreator incluem a separao da
corrente de produto seguida do reciclo para o fermentador ou imobilizao no interior do
biorreator. A separao das clulas da corrente de produto pode ser feita por sedimentao,
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23
centrifugao ou separao por membrana e reciclo, ou ainda pela imobilizao do agente da
fermentao no interior do fermentador. Processos de separao e reciclo requerem
equipamentos adicionais e consumo de energia, sendo, portanto, menos adequado por
aumentarem o custo de produo da fonte renovvel de energia. J a imobilizao das clulas
no requer separao nem reciclo (BAPTISTA et al., 2006).
Essa imobilizao pode ser artificial, incorporada em um gel polimrico ou natural,
suportadas por biomassa ou anexadas a suportes slidos.
Numerosos estudos tm sugerido a produo de etanol pelo uso de clulas
imobilizadas (ANDRIETTA, STECKELBERG e ANDRIETTA, 2008). Fermentaes
utilizando leveduras Saccharomyces em biorreatores batelada tradicionais para produo de
etanol tm sua produtividade limitada a somente 1,8-2,3 g/L.h, que no vivel
economicamente. Embora fermentaes contnuas possam aumentar esse valor de
produtividade, maiores valores podem ser conseguidos se as clulas forem retidas no
fermentador (BAPTISTA et al., 2006).
Fermentaes alcolicas utilizando clulas imobilizadas podem aumentar
significativamente a produtividade e diminuir o investimento de capital na construo dos
fermentadores. Entretanto, tecnologias de imobilizao convencional com suportes inertes
tem se mostrado no competitivas com tecnologias de fermentao alcolica utilizando
clulas livres suspensas em razo do custo do suporte, imobilizao das clulas em escala
industrial e preveno de contaminao durante o processamento (GE, ZHANG e BAI, 2006).
J oekes et al. (1998) imobilizou Saccharomyces cerevisiae em crisotila. O rendimento
final foi 26% maior que com clulas livres. Wendhausem et al. (2001) trabalhou com um
fermentador contnuo e clulas imobilizadas, conseguindo um rendimento de etanol de 97,3%.
Esse mesmo sistema conduzido com clulas livres garante um rendimento menor que 84,5%.
Najafpour et al. (2004) estudou a fermentao alcolica em reator com S. cerevisiae
imobilizada em alginato de clcio, atingindo rendimento de at 83,53% do rendimento terico
com uma converso mxima de sacarose de 92,68%.
Os principais problemas da imobilizao artificial so: a necessidade de uma operao
unitria para produzir partculas de clulas imobilizadas, aumentando o custo do processo; e o
fato de clulas imobilizadas terem um menor tempo de meia-vida, por perderem a atividade
ou morrerem (BAPTISTA et al., 2006). Alm disso, clulas imobilizadas em suporte,
especialmente em gis, tem seu crescimento significativamente retardado por fatores como
restries fsicas, diminuio de nutrientes e acmulo de metablitos txicos, em razo da
potencial limitao da transferncia de massa (BAI, ANDERSON e MOO-YOUNG, 2008).
___________________________________________________________________________
24
Portanto, a produo de etanol usando leveduras imobilizadas em gel no se mostra
produtiva. Alguns outros mtodos de imobilizao, especialmente adsoro de superfcie, tem
mostrado melhores resultados que imobilizao em gel, reteno por membrana ou micro-
encapsulao. Quando clulas so imobilizadas por adsoro, seu crescimento no
significativamente afetado, porm as clulas podem ser arrastadas para fora do biorreator,
pois a adsoro das clulas geralmente fraca (BAI, ANDERSON e MOO-YOUNG, 2008).
Por essas razes, utiliza-se imobilizao natural, em que a reteno de clulas em um
biorreator resulta em uma maior concentrao de biomassa comparada com uma cultura
suspensa. A imobilizao natural de clulas ativas operando em leito fluidizado apresenta
diversas vantagens quando comparada a outros tipos de imobilizao, especialmente quando
comparada a mtodos de imobilizao que envolvem incorporao em gis polimricos
(BAPTISTA et al., 2006).
A tecnologia de floculao espontnea de clulas, e consequente aumento da
concentrao celular pela reteno dos flocos no interior do reator, sem o uso de um suporte
inerte, se mostra economicamente competitiva e representa um novo conceito de imobilizao
(GE, ZHANG e BAI, 2006).
A habilidade de flocular de cepas de S. cerevisiae tem sido considerada como a
produo de etanol em sistema auto-imobilizado. Clulas floculantes permanecem no interior
do reator sem que seja necessrio um suporte inerte (ANDRIETTA, STECKELBERG e
ANDRIETTA, 2008).

2.7.2. A Levedura Floculante

Dentre as vrias tcnicas de imobilizao, a utilizao de clulas floculantes muito
atraente devido sua simplicidade e baixo custo, no havendo necessidade de suporte. Esta
uma vantagem substancial frente a outros sistemas de imobilizao, uma vez que o suporte
est associado ao maior custo de clulas imobilizadas (DOMINGUES, 2001).
Com o objetivo de melhorar o desempenho de plantas industriais, aumentar a
densidade celular no interior de fermentadores e diminuir os custos de produo
pesquisadores conseguiram selecionar linhagens de leveduras que desempenham papel
diferenciado no processo de fermentao do lcool. Estas so ditas leveduras floculantes e
tm a habilidade de se agregarem espontaneamente e formar flocos. Aps transformar os
acares presentes no caldo da cana em lcool, esta levedura se agrega em forma de flocos e
concentra-se no fundo do reator. Dessa forma, o combustvel pode ser extrado sem a
___________________________________________________________________________
25
necessidade da centrifugao, pois a levedura floculante fica retida no reator e pode ser
reutilizada sem necessidade de qualquer cuidado extra (PARAZZI, 2007; XU, ZHAO e BAI,
2005).
At bem pouco tempo acreditava-se que a floculao ocorria exclusivamente quando
da presena de algum tipo de bactria nas dornas. Hoje se conhece algumas linhagens de
leveduras do gnero Saccharomyces que apresentam propriedade de floculao. Essas
linhagens apresentam, em sua composio genmica, genes que expressam protenas
conhecidas como floculinas que permitem que essas leveduras cresam de forma floculada
(ANDRIETTA, STECKELBERG e ANDRIETTA, 2006).
Para que ocorresse essa agregao das clulas era necessrio um mecanismo que
funcionasse como floculante para a levedura ou a capacidade de a substncia se juntar sozinha
e descer ao fundo da dorna. Pesquisas em leveduras indicavam a existncia de um gene, o
FL01, capaz de fazer a levedura se agregar e sedimentar. Apesar de haver um gene expresso
com esta capacidade no havia como controlar esta floculao (BAPTISTA et al., 2006).
Buscava-se um gene que, expresso na levedura, tivesse capacidade de deflagrar o
processo de sedimentao quando a fermentao fosse concluda, ou seja, quando toda a
glicose fosse convertida em lcool. A pesquisa identificou ento um promotor chamado lcool
desidrogenase (ADH2), conhecido por ser regulado pela presena da glicose. O gene
dividido em duas partes, estrutural e promotora, esta responsvel por informar parte
estrutural a necessidade de executar uma funo. Foi ento efetuada a troca da posio do
promotor ADH2 no gene para a levedura Saccharomyces cerevisiae, a espcie mais utilizada
em processos industriais. A mudana de posio do promotor que permitiu o mecanismo de
ativao e desativao do funcionamento da levedura. Em laboratrio, a levedura
geneticamente modificada (no transgnica), j com o promotor que funciona com a ausncia
da glicose, respondeu exatamente como previsto (BAPTISTA et al., 2006).
Enquanto h glicose presente no meio, a levedura permanece em suspenso
promovendo a converso do acar em lcool. Com o fim da glicose, o promotor ADH2 inicia
a aglomerao das leveduras, que se decantam por estarem pesadas. O mosto fermentado
sobre a levedura ento retirado para a destilao. Ao adicionar nova carga de caldo de cana,
o gene percebe a presena de glicose, o promotor emite a informao e a levedura se
desaglomera para reiniciar o processo. A substncia fica em suspenso at o fim do processo,
quando sedimenta novamente (BAPTISTA et al., 2006).
Na Figura 2.2, pode-se observar, por meio de microscopia eletrnica de varredura,
essa agregao espontnea, que forma flocos macroscpicos.
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26

Figura 2.2 Clulas floculantes de Saccharomyces cerevisiae observadas em microscopia
eletrnica de varredura(barra corresponde a 10 m) (Fonte: Domingues, 2001)

No processo de floculao de leveduras fenmenos biolgicos, qumicos e fsicos
esto envolvidos (GINOVART et al., 2006).
Na Figura 2.3 pode-se observar a aparncia do leito de leveduras quando estas se
encontram aglomeradas e decantadas. Essa aglomerao ocorre pois formam-se ligaes entre
as protenas e a parede da clula. Formam-se pontes entre os grupos funcionais aninicos nas
superfcies das clulas adjacentes por ctions divalentes, ocorrendo a neutralizao das cargas
da superfcie celular (PARAZZI, 2007).

Figura 2.3 - Leito de leveduras floculadas (Fonte: Andrietta, 2005)

___________________________________________________________________________
27
Segundo Stan e Despa (2000), a floculao requer a presena de protenas e receptores
de ons na superfcie celular, sendo a floculao uma propriedade intrnseca da parede celular.
No entanto, no se sabe como fatores regulatrios agem nos genes envolvidos na produo de
protenas e como estas se tornam receptoras, sendo a regulao da floculao um desafio para
as indstrias at o momento.
Entretanto, algumas caractersticas importantes desse processo de floculao de
Saccharomyces j foram identificadas: ons Ca
2+
so necessrios para induzir o processo, ons
Na
+
tm um efeito inibitrio na floculao, alguns tipos de acares inibem a floculao,
clulas no floculantes podem interagir com floculantes, a floculao afetada pelas
condies do meio de cultivo e est fortemente relacionada com o aumento da
hidrofobicidade da parede celular. A floculao de leveduras uma interao entre as paredes
celulares, em que ons Ca
2+
atuam como cofatores ativando o processo (TEIXEIRA et al.,
1995).
A floculao de cepas de levedura um processo diretamente associado a protenas
tipo lectinas (lectin-like proteins), tambm conhecidas como floculinas, saem da parede
celular das leveduras floculantes e atuam se ligando seletivamente a resduos de manose
(mananas) presentes na parede celular de outras cepas que compem o meio (GALASSI,
2007).
Fatores proticos associados a sais minerais e s mananas esto envolvidos na
floculao de leveduras e a ao de proteases eficaz na desfloculao do fermento. Para que
a floculao se desenvolva necessria a movimentao entre as clulas, para que se acelere o
processo de floculao, provavelmente devido ao aumento de coliso entre as clulas,
facilitando a adeso (VIEGAS, 2003).
As clulas de leveduras se agregam devido foras de Van der Waals, que na ausncia
de outro tipo de fora atrativa, estas so importantes para que as clulas de leveduras superem
as foras de repulso eletrostticas promovendo ento a floculao das mesmas
(STRATFORD, 1996).
Com a aplicao industrial dessa tecnologia as usinas obtero uma economia
significativa, visto que no precisaro investir na aquisio e manuteno de equipamentos de
centrifugao, nem tampouco no tratamento qumico. Clculos realizados previamente
indicam que o emprego dessa nova tecnologia representar uma economia entre R$ 0,02 e R$
0,03 por litro de etanol produzido, o que muito significativo para as usinas. A eliminao
dos estgios de centrifugao e reciclo representa uma economia de 16% nos custos de
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28
processamento. Para os custos de instalao, a economia de 10% (ANDRIETTA,
STECKELBERG e ANDRIETTA, 2008).
Comparada com a tecnologia de imobilizao celular desenvolvida previamente, a
levedura floculante um sistema de imobilizao que no utiliza nenhum suporte, o que torna
essa tcnica potencialmente mais competitiva do ponto de vista econmico (XU, ZHAO e
BAI, 2005). Alm disso, a auto-imobilizao elimina a possibilidade de contaminao; o
crescimento celular no significativamente afetado; os flocos podem ser retirados do
fermentador sob condies controladas, mantendo a concentrao de biomassa nos nveis
desejados; os flocos podem ser recuperados do reator por sedimentao, dispensando
investimento com centrfuga e diminuindo o gasto energtico (BAI, ANDERSON e MOO-
YOUNG, 2008).
Comparando-se o desempenho de uma fermentao que utiliza levedura floculante e
outra que utiliza clulas comuns, pode-se perceber que, para os mesmos nveis de etanol e
acar residual no efluente, o tempo mdio requerido pela cepa de leveduras floculantes foi
aproximadamente 50% do requerido pela cepa comum e a produtividade mdia na
fermentao com floculantes foi o dobro, em razo da alta concentrao celular no interior do
reator. Alm disso, a perda da viabilidade na fermentao que utiliza leveduras floculantes
menor (XU, ZHAO e BAI, 2005). Entretanto, pesquisas ainda so necessrias para
transformar esse processo em um sistema industrial rentvel e robusto (BAPTISTA et al.,
2006).
A Usina Noroeste Paulista, no municpio de Sebastianpolis, no estado de So Paulo
utiliza o processo de produo de etanol, em processo contnuo, utilizando leveduras com
caractersticas floculantes, separando o fermento aps o ltimo reator da srie por decantao.
Apesar da aplicao de clulas floculantes estar muito bem estabelecida na indstria
cervejeira, a sua aplicao em outras indstrias biotecnolgicas fortuita. A floculao de
clulas de levedura apresenta potencialidades ainda no exploradas devidamente
(DOMINGUES, 2001).
Embora os estudos utilizando levedura floculante em escala de laboratrio se mostrem
promissores, o mesmo pode no ocorrer em escala industrial, pois o substrato a ser
fermentado (normalmente melao de cana-de-acar) contem micro-organismos nativos que
podem dominar o processo e conseqentemente eliminar a cepa floculante utilizada como
inculo (ANDRIETTA, STECKELBERG e ANDRIETTA, 2008).

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29
2.8. Biorreatores Empregados

Usualmente, em fermentaes alcolicas industriais, utilizam-se reatores de mistura
no agitados mecanicamente. O principal problema deste tipo de reator que as leveduras
tendem a decantar em sua parte cnica, o que implica em diminuio da produtividade, pois o
micro-organismo deixa de estar em contato com o substrato (PARAZZI, 2007).
Em decorrncia disso, inovaes tecnolgicas tm sido empregadas com o intuito de
melhorar o desempenho das fermentaes alcolicas. Alguns processos industriais j
empregam agitadores mecnicos na parte inferior das dornas, evitando, assim, a decantao
das clulas (PARAZZI, 2007).
O projeto do reator e o estudo das condies de operao so determinantes na
eficincia de um sistema contnuo de elevada densidade celular com clulas floculantes. Estas
permitem modelar e manter o tamanho, forma e densidade dos flocos de forma a permitir a
reteno de biomassa no reator, mas mantendo simultaneamente a atividade celular. Isto
significa que o compromisso entre as condies hidrodinmicas do reator e as propriedades
fsicas do floco devem ser mantidos (DOMINGUES, 2001).
Diferentes configuraes de fermentadores, incluindo air-lift, leito fluidizado simples
e leito fluidizado em dois estgios em srie, leito suspenso em CO
2
acoplado com um tanque
de separao foram desenvolvidos para fermentao alcolica. Entretanto, algumas dessas
configuraes no so aplicveis industrialmente tecnologia das leveduras floculantes em
razo da baixa produtividade de etanol, baixo consumo de acar ou pequenos rendimentos
(XU, ZHAO, BAI, 2005).
Como o processo de inibio bem conhecido na fermentao etanlica, sistemas de
fermentadores em srie so amplamente utilizados na indstria (XU, ZHAO e BAI, 2005).
A fermentao contnua em um sistema constitudo de trs tanques agitados,
associados em srie, com dois sedimentadores, operando com leveduras floculantes, reduz em
um tero o tempo de fermentao, alm de aumentar em 2,5 vezes a produtividade e em dez
vezes a concentrao celular, comparada com um fermentador convencional com clulas
suspensas, para um mesmo nvel de produo de etanol e de acar residual. Comparado com
um sistema sem recirculao de clulas o tempo de fermentao reduzido a 42% e a
produtividade aumentada em 70% (WANG et al., 2006).
Andrietta, Steckelberg e Andrietta (2008) estudaram o processo de fermentao
contnua com uma cepa de leveduras com caractersticas floculantes em um sistema de dois
___________________________________________________________________________
30
reatores ligados em srie, simulando as condies operacionais da indstria, obtendo
rendimento de 83,53%, e uma converso menor que a esperada.

2.8.1. Bi orreatores Tipo Torre

As vantagens de se empregar biorreatores de leito fluidizado so relatadas em vrios
estudos. A alta produtividade e estabilidade so alguns dos fatores que so levados em conta
quando se trabalha com biorreatores de leito fluidizado (VIEGAS, ANDRIETTA e
ANDRIETTA, 2002).
Segundo Gdia e Sol (1995), a depender das condies de operao, o lquido escoa
em um biorreator de leito fluidizado de forma empistonada, o que extremamente vantajoso
principalmente em reaes que sofrem inibio pelo produto, como o caso da fermentao
alcolica.
Harshbarger et al. (1995) analisaram o impacto econmico da utilizao de um
biorreator de leito fluidizado de uma planta para produo de etanol comparado a um
processo tradicional em batelada. Utilizando-se o biorreator de leito fluidizado operando
continuamente com 30% de catalisador v/v e uma concentrao de glicose na alimentao de
15%, obteve um rendimento em etanol de 98% e uma converso de substrato de 99,5%. O
pesquisador concluiu que o custo da planta industrial utilizando-se o biorreator de leito
fluidizado cerca de 17% mais baixo comparado ao processo tradicional.
Trabalhando com um sistema de fermentao contnua com reciclo de clulas formado
por dois fermentadores tipo torre e um decantador utilizando leveduras floculantes para
produo de etanol, Viegas (2003) obteve converso de substrato maior que 98% e
produtividade de 26,3 g
etanol
/L.h, trabalhando com diferentes concentraes de substrato (125
a 181 g/L) e diferentes condies de aerao num sistema estvel por 80 dias operando
continuamente. O autor ressalta ainda que tal produtividade cerca de seis vezes a obtida pelo
processo batelada Melle-Boinot.
Segundo Liu, Wang e Ou-Yang (2009) um reator contnuo de leito fluidizado com
clulas imobilizadas demonstrou significativo aumento da produtividade volumtrica quando
comparado com sistemas batelada tradicionais ou outros reatores contnuos.
Quando opera com leveduras com caractersticas floculantes em um sistema contnuo
com recirculao de clulas, o reator de leito fluidizado fornece uma converso de substrato
maior que 95%, com estabilidade por um longo perodo de tempo (VIEGAS, ANDRIETTA e
___________________________________________________________________________
31
ANDRIETTA, 2002). Estes mesmo autores, operando com dois reatores do tipo torre
conectados em srie obtiveram uma produtividade de 15,4 g
etanol
/L.h com rendimento de 93%.
Segundo Paiva et al. (1996), possvel operar um reator tipo torre com alta
concentrao de clulas e alta produtividade (18 g
etanol
/L.h) utilizando decantadores como
unidade de separao quando a cepa de levedura utilizada possui caractersticas floculantes.
Utilizando uma estirpe floculante e um reator de leito fluidizado alimentado com meio
contendo glicose, BuLock et al. (1984), referido em Domingues (2001), conseguiram uma
produtividade volumtrica mxima em etanol de 50 g/L.h para uma concentrao de etanol de
75 g/L e um rendimento mdio de 83% do terico.
A fermentao contnua de melaos com uma estirpe floculante de Saccharomyces
cerevisiae foi avaliada utilizando um reator de leito fluidizado, obtendo-se produtividades
entre 15 e 20 g/L.h (WIECZOREK e MICHALSKI, 1994). Com essa mesma estirpe, Souza et
al. (1994) referem uma produtividade mxima em etanol de 12,9 g/L.h na fermentao de
meio contendo glicose usando um reator tipo airlift de circulao interna.
Os sistemas de reatores de leito fluidizado com clulas de leveduras floculantes
apresentam alta estabilidade e produtividade (25 mL etanol/L.h), enquanto que os processos
contnuos otimizados com centrifugao de clulas atingem 12 mL etanol/L.h (VIEGAS,
2003).
Segundo Viegas (2003) possvel operar reatores tipo torre com altas produtividades e
elevados rendimentos sem a necessidade de se utilizar unidade de separao de clulas
(centrfugas). A maior dificuldade de operao desses reatores a manuteno da estabilidade
do leito de clulas formado no primeiro reator para altas taxas de aplicao de substrato (g
substrato/h). Esse fato se deve grande quantidade de CO
2
produzido em funo da alta
velocidade de fermentao alcanados nestas condies, o que causa uma fluidizao
excessiva do leito, arrastando as clulas para o segundo reator.
Sipsas et al. (2009) fizeram um estudo comparativo da produo em batelada e
contnua em fermentadores de torre, multi-estgios de leito fixo. O sistema multi-estgios de
leito fixo resultou em maior produtividade de lcool quando comparado a um nico
fermentador de leito fixo. A produo batelada e contnua nos fermentadores de leito fixo
resultaram em produtividades de etanol similares a de fermentadores tradicionais.
Prince e Barford (1982) relatam a capacidade de um fermentador tipo torre operando
continuamente por 14 semanas com leveduras floculantes acumular altas concentraes
celulares (70-90 g/L), em que a produtividade e converso em etanol so obtidos em funo
da vazo de alimentao e da concentrao de glicose.
___________________________________________________________________________
32
Paiva et al. (1996) obtiveram produtividade de etanol de 14,4 g/L.h e rendimento de
88,3% usando um sistema de reatores tipo torre de leito fluidizado com reciclo e separao de
clulas por decantao. Viegas (2003) estudou o desempenho de leveduras com caractersticas
floculantes em um sistema de trs reatores em srie, obtendo um elevado rendimento, 27,5
g/L.h, atribudo cepa de leveduras utilizada.
Diante da viabilidade observada no emprego de biorreatores de leito fluidizado em
escala laboratorial, alguns estudos tentaram seu scale-up para aplicao industrial (VIEGAS,
ANDRIETTA e ANDRIETTA, 2002).
Prince e Barford (1982) ressaltam que a configurao dos reatores tipo torre pode ser
tambm um avano comparado aos sistemas convencionais com respeito ao controle de
contaminao microbiolgica, uma vez que as bactrias presentes no incio do processo so
rapidamente eliminadas do sistema, uma vez que os contaminantes so lavados do reator.
Outra vantagem citada a alta concentrao de clulas de leveduras acumuladas no reator, o
que torna o sistema apropriado para operar com altas produtividades.
Outro ponto relevante para a aplicao industrial deste processo a relao entre a
concentrao de glicose na alimentao e a concentrao dos flocos de leveduras na sada do
sistema, uma vez que o aumento da concentrao de acar na alimentao aumenta a
viscosidade do meio fermentativo, aumentando assim o carregamento hidrulico dos flocos de
clulas (VIEGAS, 2003).

2.9. Estudo Cintico da Fermentao Alcolica

O objetivo bsico do estudo da cintica de processos microbianos o de quantificar a
taxa de crescimento celular, de consumo de substrato e formao de produtos e demais
parmetros relacionados, alm de avaliar a influncia de fatores externos como pH,
temperatura, inibidores, etc. nestas taxas. No caso da fermentao alcolica, estes valores so
essenciais para se projetar adequadamente uma unidade industrial de produo de etanol
(VIEGAS, 2003).
A cintica da fermentao alcolica um assunto de interesse dos centros de pesquisa
especializados, tendo em vista seu potencial industrial e econmico (LIMA e MARCONDES,
2002).
Segundo Bailey e Ollis (1986), os modelos cinticos normalmente usados em
fermentaes podem ser divididos em: no-estruturados e no segregados, nos quais as clulas
___________________________________________________________________________
33
de micro-organismos so consideradas como soluto; estruturados e no segregados, onde as
clulas so tratadas como seres individuais de mltiplos componentes, porm com
composio mdia semelhante; no-estruturados e segregados, onde as clulas so tratadas
como seres individuais distintos, porm descritos por um nico componente; e estruturados e
segregados, onde as clulas de micro-organismos so consideradas como indivduos distintos
e formados por mltiplos componentes. Para o estudo da fermentao alcolica, o modelo
no-estruturado e no segregado o mais utilizado para descrever o comportamento das
variveis envolvidas.
A complexidade da descrio cintica que requerida e apropriada depende das
situaes fsicas e da aplicao pretendida. No possvel a formulao de um modelo que
inclua todas as caractersticas e detalhes celulares. O modelo deve ser formulado a partir de
algumas aproximaes (STREMEL, 2001).
A equao mais simples e popular para descrever o crescimento microbiano a
equao de Monod, que considera a presena de substrato como limitante para o crescimento
(LUONG, 1985), sendo descrita matematicamente pela Equao 2.2.

S K
S
S
max
+
= (2.2)
Em que: a taxa de crescimento celular,
mx

a mxima taxa de crescimento
celular, S a concentrao do substrato limitante e K
S
a constante de Monod, que representa o
valor de S no qual a taxa especfica de crescimento a metade do seu valor mximo.
Componentes presentes em altas concentraes no meio de cultura no afetam
significativamente a taxa de crescimento celular segundo esse modelo, ou seja, a equao de
Monod somente se aplica para casos em que no h presena de inibidores de crescimento no
meio de cultura (BAI, ANDERSON e MOO-YOUNG, 2008).
Entretanto, na fermentao alcolica, o rendimento de biomassa diminui com aumento
da concentrao de etanol, indicando uma relao entre o rendimento da biomassa e a inibio
pelo produto. O etanol comea a ter efeito inibitrio na taxa de crescimento celular acima de
15 g/L. A concentrao mxima de etanol permitida, acima da qual as clulas no crescem,
foi predita em 112 g/L. O fenmeno de inibio pelo substrato normalmente menos
importante do que a inibio pelo etanol (THATIPALAMA, ROHAI e HILL, 1992). Este
autor prope o modelo descrito pela Equao 2.3.

|
|
.
|
\
|
=
min max
max
max
S S
S S

(2.3)
___________________________________________________________________________
34
Sendo: S
mx
a mxima concentrao de substrato acima da qual no existe
crescimento celular e S
min
a concentrao ode se inicia o efeito de inibio.
Thatipamala et al. (1992) apresentaram um modelo que representa a diminuio do
rendimento da biomassa (Y
x/s
) com o aumento das concentraes iniciais de etanol e de
substrato e a diminuio da taxa de crescimento especfico com o aumento da concentrao
inicial de substrato. Os autores sugeriram um modelo especfico para a fase Lag e observaram
experimentalmente que a inibio pelo substrato afetou mais o rendimento em etanol do que a
inibio pelo produto, por provocar a diminuio da viabilidade celular. Observaram ainda
que a fase Lag aumentou com o aumento da concentrao inicial de substrato.
Moulin et al. (1980) propuseram duas diferentes expresses para representar a inibio
pelo substrato, a primeira delas para S >100 g/L e P <32 g/L (Equao 2.4) e a segunda para
S >100 g/L e P >32 g/L (Equao 2.5).

( ) | | 100
1

=
S K
i
(2.4)

( ) | | ( ) | | P S K S K
i
100 100
2 1

= (2.5)
Em que: K
1
e K
2
so constantes empricas e
i
possui dependncia exponencial com o
produto (P).
Tosetto (2002) analisou o comportamento cintico da cepa de levedura Y904 em nove
diferentes matrias-primas provenientes de unidades produtoras de acar e lcool. Estudou-
se as cinticas de produo de etanol, clulas e de consumo de substrato, assim como o
desempenho da cepa em cada matria-prima com relao produtividade e rendimento em
etanol. Para a avaliao cintica, foram utilizados seis modelos do tipo no estruturado. Os
que mais se adequaram aos dados experimentais foram os modelos de Ghose e Thyagi (1979),
representado pela Equao 2.6 e o de J in et al. (1981), dado pela Equao 2.7, citados em
Tosetto (2002).

|
|
.
|
\
|
+ +
=
mx I S
mx
P
P
K S K S
S
1
2

(2.6)

( )
|
|
.
|
\
|
+
=
S K
S
S K P K
S
mx 2 1
exp (2.7)
Esse modelo descrito por J in et al. (1981) leva em considerao o efeito do substrato
limitante (K
s
), inibio pelo substrato (K
i
) e inibio pelo produto exponencial (P
mx
).
___________________________________________________________________________
35
O modelo de Tosetto e Andrietta (2002) semelhante ao de Ghose e Thyagi (1979),
porm o valor do expoente do termo de inibio pelo produto pode assumir valores diferentes
de 1.
Levenspiel (1980) generalizou uma equao matemtica para o crescimento celular
contendo um termo para inibio pelo produto, alm de levar em considerao o efeito do
substrato limitante (Ks), dada pela Equao 2.8.
X
S K
S
P
P
X r
s
n
m
mx x (
+
(
= = 1 (2.8)
Em que P
m
a concentrao limite do produto inibidor. Para uma concentrao de P bem
menor que o valor de P
m
, a Equao 2.8 se reduz Equao 2.9, que equivalente cintica
de Monod (LEVENSPIEL, 1980).
X
S K
S
X r
s
x (
+
= = (2.9)
A multiplicidade de modelos cinticos que descrevem o crescimento microbiano se
deve ao fato de que eles so construdos para uma levedura especfica, em condies
experimentais pr-definidas (DOURADO et al., 1987).
Vasconcelos, Pinto e Silva (1992) realizaram vrios ensaios e observou que a
velocidade especfica de produo de etanol esteve vinculada velocidade especfica de
crescimento microbiano at determinada fase da fermentao. Aps esta fase, a diminuio da
velocidade de crescimento microbiano no causou a diminuio da velocidade especfica de
produo de etanol, mostrando que as mesmas no esto mais associadas. Estes autores
testaram dez modelos cinticos para o processo de fermentao alcolica industrial em
batelada alimentada e concluram que o modelo de Ghose e Thyagi (1979) foi o que
apresentou os melhores ajustes dos dados experimentais.
Apesar dos vrios trabalhos que tratam da cintica de fermentao, pouca influncia
estes tiveram sobre o arranjo das plantas industriais instaladas no Brasil. No entanto, o projeto
rigoroso de uma planta de fermentao tem que passar, obrigatoriamente, por uma
modelagem detalhada do processo, pelo uso de modelos cinticos precisos que possibilitam a
obteno de condies timas de operao. Por outro lado, a manuteno destas condies
depender da escolha de uma estratgia de controle adequada que s possvel conhecendo-se
o comportamento do processo. Isto pode ser adequadamente realizado pelo estudo prvio de
modelagem da planta e simulao em computador (ANDRIETTA, 1994).
36
CAPTULO 3
MATERIAL E MTODOS

3.1. Material

O meio em que foram realizadas as fermentaes foi preparado de forma a ter
caractersticas prximas das condies industriais.
Utilizou-se uma cepa de leveduras com caractersticas floculantes doada pela Usina
Noroeste Paulista. Essa unidade industrial de fermentao alcolica opera com levedura
floculante, usando mosto a base de caldo e melao.
A cultura proveniente da Usina foi mantida em laboratrio nos estados lquido e
slido. Ambas as culturas foram mantidas em refrigerador, a 7 1C, e eram mensalmente
repicadas.
Os reagentes utilizados foram todos de grau analtico, com exceo do acar, que foi
sacarose comercial (acar cristal).
Diferentemente das condies industriais, em que a fermentao alcolica realizada
com mosto de caldo de cana-de-aar e melao, preparou-se um meio fermentativo com
sacarose comercial. A composio do meio para cultivo das leveduras consistiu-se de sacarose
(em concentrao varivel de acordo com o planejamento experimental), KH
2
PO
4
(5 g/L),
MgSO
4
7H
2
O (1 g/L), [NH
4
]
2
SO
4
(2 g/L) e extrato de levedura (6 g/L).
Os experimentos foram realizados em um reator tubular de bancada, do tipo torre, de
escoamento ascendente, em batelada, sem agitao, com capacidade para 2,5 L e dotado de
camisa para controle de temperatura, na qual se manteve temperatura constante de 32 0,5C
ao longo de todos os ensaios. A alimentao do meio fermentativo foi feita por recirculao
externa por meio de bomba peristltica. O meio fermentativo foi alimentado pelo fundo do
reator, retirado pela parte superior, e encaminhado novamente ao fundo do reator. Esse
fermentador possui ainda, na parte superior, uma sada para exausto de CO
2
e dez diferentes
pontos ao longo da altura para retirada de amostras. Destes pontos, apenas trs foram
utilizados, nas posies inferior, central e superior, conforme representao esquemtica dessa
unidade de trabalho mostrada na Figura 3.1.
Captulo 3 Material e Mtodos
___________________________________________________________________________
37

Figura 3.1 - Representao esquemtica da unidade de trabalho

3.2. Mtodos

3.2.1. Metodologia Experimental

O micro-organismo utilizado nos ensaios foi obtido por meio de repiques da cultura
estoque do micro-organismo advindo da usina, e foi reaproveitado e reutilizado em sucessivas
fermentaes.
Os ensaios experimentais foram realizados de acordo com o planejamento
experimental utilizado, sem ajuste de pH e sem suplementao de fontes minerais. O pH
inicial do meio era de 5,4. As variveis independentes foram a concentrao de clulas no
___________________________________________________________________________
38
inculo, na faixa de 4,7% a 45,3%, a concentrao de sacarose no meio, de 100 a 220 g/L, e a
vazo de recirculao, variando entre 2,6 e 17,1 mL/s.
Os experimentos foram conduzidos em batelada com recirculao em um reator com
volume til de 2,5 L. O volume do inculo correspondeu, em todos os experimentos, a 30%
do volume total do meio. O volume total de cada fermentao foi 3 L, sendo 0,9 L de inculo
e 2,1 L de meio fermentativo, para que se pudesse manter a recirculao at que toda a
sacarose do meio fosse consumida.
Aps cada experimento, os micro-organismos foram recuperados por centrifugao e
mantidos sob refrigerao a 71C, suspensos em gua. O inculo, com concentrao varivel
de clulas, definida pelo planejamento experimental, foi preparado diluindo-se esta suspenso
de micro-organismos. Para o preparo do inculo da fermentao seguinte, efetuava-se a
centrifugao dessa suspenso de leveduras em tubo graduado, sendo possvel ento conhecer
a concentrao volume/volume de micro-organismos na suspenso. Conhecida essa
concentrao, utilizava- se a regra de diluio (C
1
.V
1
= C
2
.V
2
), em que o volume e
concentrao finais eram conhecidos, e determinava-se o volume de suspenso de leveduras
necessrio para que fosse produzido um inculo na concentrao celular desejvel.
A concentrao celular no inculo (v/v) variou de 4,7% a 45,3%. Esta concentrao
celular no inculo de 4,7% corresponde concentrao celular no reator de 1,41% (v/v), que,
utilizando uma curva padro que relaciona absorbncia com concentrao celular em termos
de massa seca (Apndice A.3), corresponde a uma concentrao de 4,7 g/L. Procedimento
anlogo para determinao das concentraes celulares em g/L foi feito para as demais
concentraes celulares no inculo, e est indicado na Tabela 3.1.

Tabela 3.1 - Relao entre concentraes celulares no inculo e no reator
Conc. de Leveduras no Inculo Conc. Inicial no Reator
% (v/v) % (v/v) (g/L)
4,7 1,41 4,50
10 3,00 9,50
25 7,50 23,75
33 9,90 31,35
40 12,00 38,10
45 13,50 42,75
45,3 13,59 43,04

A Figura 3.2 mostra a foto da unidade de trabalho utilizada nos experimentos,
constituda de reator, bomba peristltica, recipiente para armazenamento do meio para
___________________________________________________________________________
39
recirculao, e banho termosttico, que no mostrado nesta Figura. As dimenses mais
importantes do reator so: altura de 75 cm, dimetro interno de 8 cm e dimetro externo de
10,2 cm.

Figura 3.2 Unidade de trabalho utilizada nos experimentos (1) controle de temperatura, (2)
exausto de CO
2
, (3) duto de recirculao, (4) bomba peristltica, (5) recipiente para
recirculao, (6) pontos de amostragem

3.2.2. Metodologia Analtica

Cada fermentao foi monitorada por amostragens peridicas do meio fermentativo,
para acompanhamento das concentraes de sacarose, etanol e clulas. Inicialmente, as
amostras foram retiradas na parte inferior, no meio e na sada do reator, sendo possvel desta
forma obter os perfis de concentrao celular, de etanol e de acares redutores totais (ART)
ao longo do reator. Porm, devido baixa variabilidade da concentrao de ART, optou-se
por fazer a anlise de concentrao de sacarose apenas na sada do reator. O perfil de
concentrao celular foi avaliado nos trs pontos do fermentador em todos os experimentos.
___________________________________________________________________________
40
A concentrao celular e de substrato ditava a periodicidade com que foram retiradas
amostras. Esta retirada aconteceu em intervalos de 45 minutos ou uma hora.
Amostras de 35 mL foram retiradas do reator e centrifugadas por 3 minutos a 12500
rpm (9800 G). Do sobrenadante foram feitas as anlises de concentrao de sacarose e etanol.
Para avaliar a concentrao celular apenas retirava-se a amostra de 10 mL do reator, no
sendo necessria a etapa de centrifugao.
A partir dos resultados experimentais traou-se o perfil de consumo de substrato e
produo de etanol em funo do tempo, e o perfil de concentrao celular em funo da
altura do fermentador e do tempo.

Dosagem de Sacarose

A concentrao de sacarose presente no meio fermentativo foi determinada por meio
da anlise de glicose, feita por um teste enzimtico colorimtrico da marca Laborlab, no qual
a glicose obtida pela hidrlise da sacarose oxidada pela glicose-oxidase produzindo
perxido de hidrognio, que em presena da peroxidase reage com a 4-aminoantipirina e
fenol, formando um cromgeno vermelho cereja cuja intensidade de cor proporcional
concentrao de glicose.
A hidrlise da sacarose foi realizada misturando-se de 1 mL da soluo sobrenadante
centrifugada, com 1 mL de HCl 2N, a 67C por 12 minutos. Decorrido este tempo, a mistura
era neutralizada com 3 mL de NaOH 1N. Em um tubo de ensaio, a 20 L da amostra j
hidrolizada e devidamente diluda, adicionava-se 2 mL do reativo enzimtico preparado
seguindo as especificaes do fabricante. Aps 10 minutos em banho-maria a 37C, efetuava-
se a leitura da absorbncia em espectrofotmetro a 505 nm e comparava-se com uma curva
padro (Apndice A.1). Para essa leitura, utilizava-se somente o reativo enzimtico como
branco. Todas as anlises foram feitas em triplicata.

Dosagem de Etanol

A dosagem de etanol foi feita pelo mtodo espectrofotomtrico do dicromato de
potssio. Esse mtodo se baseia na oxidao de uma mistura hidroalcolica a cido actico,
pela reao com dicromato de potssio em meio cido. A soluo adquire uma tonalidade
verde proporcional concentrao de lcool na amostra, possibilitando a leitura em
espectrofotmetro (STECKELBERG, 2001).
___________________________________________________________________________
41
Para a utilizao deste mtodo, necessrio que o lcool produzido esteja destilado.
Para isto, colocava-se 25 mL do sobrenadante e 50 mL de gua destilada em um balo
volumtrico para destilao, que era interrompida quando fossem recolhidos
aproximadamente 50 mL de destilado em um erlenmeyer. Este era ento diludo na proporo
de 1:25. Transferia-se 5 mL do destilado diludo pra um tubo de ensaio e adicionava-se 2 mL
de gua destilada e 2 mL do reagente de cor. O tubo era tampado e colocado por 30 minutos
em banho-maria a 601C, resfriado temperatura ambiente, e, em seguida, o valor de
absorbncia era lido em espectrofotmetro a 600 nm. Os valores obtidos eram comparados
com uma curva padro (Apndice A.2). Utilizou-se gua destilada ao invs da soluo
destilada diluda para confeco do branco. Estas anlises tambm foram feitas em triplicata.

Dosagem de clulas

Para acompanhar o crescimento celular ao longo da fermentao, foi utilizado o
mtodo espectrofotomtrico. Diluiu-se na proporo 1:100 o meio fermentativo e leu-se a
absorbncia em espectrofotmetro a 650 nm. Esse valor lido era comparado com uma curva
padro que relaciona absorbncia com concentrao celular em termos de massa seca em
gramas por litro, previamente determinada (Apndice A.3). O branco utilizado para leitura foi
meio fermentativo adequadamente diludo, sem clulas.

3.3. Testes Preliminares

Foram realizados testes preliminares para completa definio dos mtodos analticos a
serem utilizados, para eliminao de possveis causas de erros sistemticos, definio do
tempo do ciclo fermentativo a ser considerado e das condies timas que promovessem a
floculao das leveduras.
Foram realizadas fermentaes em reator de mistura, reator tipo torre e no shaker,
variando as condies fermentativas e concentrao de nutrientes no meio para avaliar a
capacidade floculante da cepa utilizada. As diferentes condies testadas foram:
- Fermentao com ajuste de pH em 4,5 e 4;
- Fermentao com e sem controle de temperatura;
- Utilizao de antibiticos eficazes contra espcies Gram-positivas, Gram-negativas
ou contra ambas simultaneamente em concentraes variveis;
___________________________________________________________________________
42
- Fermentao em reator de mistura variando a velocidade de agitao;
- Fermentao em reator tipo torre variando a vazo de recirculao de 2,6 a 17,1
mL/s;
- Variao da faixa de concentrao celular no inculo, acompanhada por contagem
em cmara de Neubauer, variando da ordem de 10
6
a 10
11
leveduras/cm, ou por mtodo
espectrofotomtrico;
- Adio, em concentrao varivel, de bactrias indutoras da floculao, cultivadas
em tubo;
- Fermentao utilizando caldo de cana concentrado e diludo, testado com e sem o
uso de antibiticos;
- Adio, no meio, de CaCl
2
em concentraes de 0,1 a 2 g/L;
- Preparo do meio com adio de CaSO
4
, em diferentes concentraes (0,1 a 3 g/L)
- Adio de (NH)
4
Cl em concentraes que variam de 0,1 a 2 g/L;
- Adio de KCl ao meio fermentativo, em concentraes que variam de 0,1 a 2 g/L;
Foram testadas, tambm, a influncia conjunta de fatores citados acima.
Para as fermentaes dos testes preliminares foram acompanhados o consumo de
sacarose, a produo de etanol, concentrao e viabilidade celular at que todo o substrato
fosse consumido.

3.4. Planejamento Experimental

Para anlise da interao entre as variveis de entrada e o estudo emprico das relaes
entre uma ou mais respostas obtidas utiliza-se a tcnica do planejamento experimental, com o
qual se faz a otimizao por anlise da superfcie de resposta.
Para se fazer a anlise da superfcie de resposta, necessrio primeiramente programar
ensaios por meio de um planejamento experimental, em que se seleciona um nmero fixo de
nveis para cada uma das variveis de entrada. Ento foi possvel executar experimentos com
todas as possveis combinaes.
Foi realizado um Delineamento Composto Central (DCC) com dois nveis originais,
utilizando-se o software Statistica 7.0, tendo-se 2
3
pontos fatoriais, 2 x 3 pontos axiais e 3
repeties no ponto central, totalizando 17 experimentos.
A porcentagem de clulas no inculo variou de 4,7% a 45,3%, a concentrao de
sacarose no meio, de 100 a 220 g/L, e a vazo de recirculao, esteve entre 2,6 e 17,1 mL/s. O
___________________________________________________________________________
43
alfa de ortogonalidade utilizado neste planejamento experimental foi de 1,35313 e as
equaes de codificao para a porcentagem de clulas no inculo (X
0
), a concentrao de
sacarose (S
0
) e a vazo de recirculao (F) so mostradas, respectivamente, nas Equaes 3.1,
3.2 e 3.3.

( )
15
25
0
1

=
X
X (3.1)

( )
4 , 44
160
0
2

=
S
X (3.2)

( )
3 , 5
9 , 9
3

=
V
X (3.3)

Na Tabela 3.2 podem ser vistos os valores utilizados no Planejamento Experimental
para as trs variveis independentes analisadas.

Tabela 3.2 Valores utilizados no planejamento para as trs variveis independentes
- -1 0 +1 +
X
0
(% no inculo) 4,7 10 25 40 45,3
S
0
(g/L) 100 115,7 160 204,4 220
F (mL/s) 2,6 4,5 9,9 15,2 17,1

A faixa de concentrao celular no inculo foi determinada com base em dados
industriais e da literatura. Amorim (2005) afirma que a concentrao de levedo varia de
destilaria para destilaria, mas, por meio de anlise estatstica, determinou-se que o nvel timo
de fermento nas dornas est em torno de 12% (v/v). Finguerut (2006) recomenda que a
quantidade de fermento na dorna no se ultrapasse 13% (v/v) no final do processo
fermentativo. Neste planejamento experimental a concentrao inicial de levedo no reator
variou de 1,41% (v/v), (quando a concentrao celular no inculo era 4,7% (v/v)) a 13,59%
(em que a concentrao celular no inculo era de 45,3% (v/v)).
A faixa de concentrao inicial de substrato foi atribuda com base em dados prticos
de indstrias sucroalcooleiras. Essa faixa foi proposta em torno da situao mdia industrial,
que de 180 g/L, testando ainda concentraes de substrato acima de 200 g/L, a fim de
avaliar o comportamento do sistema sob ao de efeitos inibitrios.
___________________________________________________________________________
44
A faixa vazo de recirculao, variando de 2,6 a 17,1 mL/s, foi atribuda por restries
da bomba peristltica utilizada na recirculao.
A Tabela 3.3 mostra a Matriz do Delineamento Composto Central com valores
codificados e originais das variveis em estudo. Os ensaios foram realizados de forma
aleatria, a fim de evitar tendenciosidade dos resultados.

Tabela 3.3 - Matriz do DCC com valores codificados e originais das variveis
Experimento
X
1
(X
0
)
(% no inculo)
X
2
(S
0
)
(g/L)
X
3
(F)
(mL/s)
1 -1 (10) -1 (115,7) -1 (4,5)
2 -1 (10) -1 (115,7) +1 (15,2)
3 -1 (10) +1 (204,4) -1 (4,5)
4 -1 (10) +1 (204,4) +1 (15,2)
5 +1 (40) -1 (115,7) -1 (4,5)
6 +1 (40) -1 (115,7) +1 (15,2)
7 +1 (40) +1 (204,4) -1 (4,5)
8 +1 (40) +1 (204,4) +1 (15,2)
9 - (4,7) 0 (160) 0 (9,9)
10 + (45,3) 0 (160) 0 (9,9)
11 0 (25) - (100) 0 (9,9)
12 0 (25) + (220) 0 (9,9)
13 0 (25) 0 (160) - (2,6)
14 0 (25) 0 (160) + (17,1)
15 (C) 0 (25) 0 (160) 0 (9,9)
16 (C) 0 (25) 0 (160) 0 (9,9)
17 (C) 0 (25) 0 (160) 0 (9,9)

Realizado o planejamento experimental e anlise dos resultados, para um tempo de
fermentao de sete horas, efetuou-se experimentos nos pontos estacionrios obtidos pela
anlise das superfcies de resposta e curvas de contorno e por uma rotina implementada no
software Maple Release 9.5, para verificao dos pontos timos, com o objetivo de testar a
reprodutibilidade dos modelos obtidos.

3.5. Clculos das Respostas das Fermentaes

3.5.1. Rendimento

O rendimento em grama de etanol por grama de acares redutores totais (ART), ao
final de 7 horas de fermentao, foi determinado pela Equao 3.4.
___________________________________________________________________________
45

( )
7 0
7
053 , 1
tan
/
sac sac
ol e
ART P
C C
C
Y

=
(3.4)
Para expressar o rendimento em porcentagem, utilizou-se a Equao 3.5, que
considera o rendimento terico de 0,511 g
etanol
/g
ART
como 100%.

511 , 0
% 100
(%) Re
/

=
ART P
Y
nd (3.5)
Em que:
Y
P/ART
=rendimento de etanol formado em relao aos acares redutores totais consumidos
(g
etanoL/
g
ART
);
7
tanol e
C =concentrao de etanol (g/L) ao final de 7 horas de fermentao;
0
sac
C =concentrao de sacarose inicial (g/L);
7
sac
C =concentrao de sacarose (g/L ) ao final de 7 horas de fermentao.

3.5.2. Produti vidade

O clculo da produtividade, em relao ao etanol produzido, uma grandeza cintica
que expressa a velocidade mdia de produo. Ao final de 7 horas de fermentao, a
produtividade foi calculada pela Equao 3.6.

t
C
P
ol e
ol e
7
tan
tan
= (3.6)
Em que:
ol e
P
tan
=produtividade do etanol (g/ L.h);
7
tanol e
C =concentrao de etanol (g/L) ao final de 7 horas de fermentao;
t

=tempo de fermentao (h) =7h

3.6. Modelagem Matemti ca

A modelagem matemtica de reatores tem sido utilizada por diversos autores com
diferentes objetivos. Neste trabalho, um modelo matemtico foi desenvolvido para um reator
___________________________________________________________________________
46
do tipo torre operando em loop com o objetivo de descrever o comportamento dinmico deste
para fins de estudos de aumento de escala do mesmo.
A modelagem matemtica e simulao de dados experimentais pelos mtodos
computacionais so ferramentas de extrema importncia para se entender o comportamento
dos biorreatores. Procurou-se ento desenvolver um modelo capaz de representar o
comportamento das respostas biomassa, concentrao de substrato e de produto com relao
s mudanas nas condies operacionais.
A modelagem de biorreatores tipo torre que operam com clulas de levedura
floculantes bastante complexa e de extrema importncia para o estudo de aumento de escala,
principalmente pelo efeito de desestabilizao do leito que pode ocorrer pela velocidade de
gerao de dixido de carbono durante o processo fermentativo. O desenvolvimento de um
modelo que possibilite a representao real do comportamento deste reator fundamental
para que se possam determinar as condies de operao dos reatores industrialmente para
que este efeito no ocorra, pois seria uma situao inaceitvel em um biorreator industrial,
devido aos custos que esse fenmeno causaria.
A modelagem do reator permite desenvolver ferramentas computacionais para
verificar o comportamento de todos os fatores que possam interferir na estabilidade do
biorreator em diferentes condies de operao, sem que novos ensaios em escala de bancada
sejam realizados.
Neste trabalho o modelo matemtico foi desenvolvido considerando o sistema em loop
como um modelo de reator em batelada para descrever o processo de fermentao alcolica
no reator do tipo torre com recirculao. Foram consideradas as equaes do balano de
massa para um reator descontinuo e o modelo cintico proposto por Ghose e Thyagi (1979)
em que o valor do expoente do termo de inibio pelo produto pode assumir valores diferentes
de 1, conforme Tosetto e Andrietta (2002). Este modelo cintico considera os efeitos da
biomassa, bem como das inibies pelo substrato e produto. O esquema do processo do reator
com recirculao em loop foi apresentado na Figura 3.2. Neste sistema o frasco (bquer) que
permaneceu com as entradas e sadas foi considerado como uma simples unidade de mistura,
com volume de reao desprezvel
Para um reator em batelada, assume-se que a temperatura e a composio so
espacialmente uniformes, ou seja, no variam com a posio ao longo do reator. Entretanto, a
composio varia com o tempo e, considera-se que no ha fluxo de massa entrando ou saindo,
os reagentes so introduzidos no sistema antes do inicio do processo reacional. Esta
___________________________________________________________________________
47
considerao de no variao espacial das grandezas de estado pode ser utilizada uma vez que
os resultados obtidos experimentalmente praticamente no tiveram variao com a posio.
Outras consideraes do modelo matemtico foram:
- O sistema em loop foi considerado como uma mistura quase perfeita;
- Reator de volume constante;
- Volume de bolhas desprezvel;
- Densidade constante.
As equaes do modelo foram obtidas pelos balanos no volume total do reator e as
formas adimensionais das mesmas esto apresentadas nas Equaes 3.6, 3.7, 3.8 e 3.9.

Balano de substrato:

A A
dS dX
X
d d
o |
t t
= + (3.6)

Balano de produto:

A A
dP dX
X
d d
o
t t
= + (3.7)

Balano de clulas:

dX
X
d

t
= (3.8)

Com:

2
1
n
mA
S A I A m
S P
K S S K P

| |
=
|
+ +
\ .
(3.9)

Sendo:
0 0 0
0 0
; ; ; ; ; ; ; ;
; ; ;
f f m f
A A A mA m m
m m m f
f m
s I
SA I A A
m
x x t x
x s p t
X S P t
x s p t s s p
x t
K K
K K
s s p
t o o | |
o o
= = = = = = = =
= = =

___________________________________________________________________________
48
Os parmetros do modelo foram determinados utilizando uma tcnica de regresso
multirresposta aplicada as Equaes 3.6 a 3.9 para o conjunto de dados experimentais
definidos pelos experimentos de validao nas condies definidas pelas superfcies de
resposta e curvas de contorno.

3.6.1. Aj uste dos parmetros ci nticos

Os valores dos parmetros foram identificados pelos resultados gerados pela tcnica
de regresso no linear aplicada aos dados experimentais obtidos pela validao nas
condies definidas pelas superfcies de resposta e curvas de contorno (X
0
=45 %(v/v) de
clulas no inoculo, F =15 mL/s e S
0
=200 g/L) utilizando um algoritmo multirresposta
(MARQUARDT, 1963). A integrao do conjunto de equaes diferenciais do modelo foi
realizada utilizando o algoritmo de quarta-ordem de Runge-Kutta (GILL, 1951). Os resduos
entre os valores experimentais e calculados pelo modelo foram obtidos pela minimizao da
soma dos quadrados dos resduos como definido pela Equao 3.10.

=
=
N
i
theor xp e
y y SRS
1
2
) ( (3.10)

3.6.2. Validao do Modelo

O modelo obtido aps o ajuste dos parmetros cinticos foi validado em duas
condies diferentes. Uma para o experimento do ponto central (Experimento 16) e a outra
para a condio de validao do ponto timo obtido para a maximizao do rendimento.

49
CAPTULO 4
RESULTADOS E DISCUSSO

4.1. Testes Preliminares

Os testes preliminares foram realizados para se confirmar os mtodos analticos a
serem utilizados, eliminar possveis causas de erros sistemticos e definir um tempo ideal de
anlise das respostas para as fermentaes. O tempo de 7 horas foi escolhido baseado no
tempo de consumo completo do substrato nas fermentaes que apresentavam altas
concentraes celulares.
Durante a fase de testes preliminares avaliou-se, tambm, a capacidade floculativa da
cepa que seria utilizada nas fermentaes. Foram realizadas fermentaes no reator e shaker,
variando-se pH, temperatura, velocidade de agitao, vazo de recirculao e concentrao de
nutrientes no meio fermentativo. A levedura no apresentou, sob nenhuma condio testada,
capacidade de se agregar e formar flocos bem definidos, apesar de se sedimentar facilmente
quando no submetida agitao. Optou-se, ento, por trabalhar com o meio de cultura pr-
estabelecido, a temperatura constante, sem ajuste de pH e sem adio de antibiticos.
Na Figura 4.1 pode-se observar a aparncia das leveduras utilizadas quando toda a
sacarose do meio foi consumida.

Figura 4.1 Aparncia das leveduras utilizadas quando consumida toda a sacarose do meio

Captulo 4 Resultados e Discusso
___________________________________________________________________________
50
Na Figura 4.1, no ocorreu a formao de flocos, mas pode-se notar que estas se
agregaram e se sedimentaram, fazendo com que a concentrao no fundo do reator fosse
maior que na sada. Tal efeito foi ainda mais pronunciado quando se utilizou baixas vazes de
recirculao.
Um exemplo de perfil de concentrao celular, de substrato e produto ao longo do
tempo pode ser visto na Figura 4.2, em que se observa a tendncia sedimentao das
leveduras ao longo do processo fermentativo. Pode-se observar que a concentrao celular na
sada do reator (na parte superior), menor que no fundo do mesmo. Esse experimento foi
realizado com concentrao de inculo, concentrao inicial de substrato e vazo de
recirculao, 40%, 204,4 g/L e 4,5 mL/s, respectivamente.

Figura 4.2 - Perfis de concentrao celular, substrato e inculo em funo do tempo

Na condio experimental mostrada na Figura 4.2, iniciou-se o processo fermentativo
com alta concentrao celular no inculo e, por esta razo, no ocorreu crescimento
pronunciado das clulas. Pode-se observar tambm que praticamente no ocorreu fase lag. A
sacarose, assim que se iniciou a fermentao, foi consumida em favor da produo de etanol.
Em outros experimentos, que foram realizados com menor concentrao de clulas no
inculo, pde-se observar maior taxa de crescimento destas, alm de um perodo de fase
adaptativa at que se iniciou a produo de etanol.
Na Figura 4.2 pode-se observar, tambm, que decorridas sete horas de processo
fermentativo, j havia sido formado 94% do etanol total produzido nessa condio
___________________________________________________________________________
51
experimental e mais de 90% da sacarose presente inicialmente no meio j havia sido
consumida. Tal fato justifica o tempo de anlise determinado em sete horas, j que esse
experimento trabalhou com alta concentrao inicial de substrato.

4.2. Planejamento Experimental

Neste planejamento experimental estudou-se como o rendimento g
etanol
/g
sacarose
, a
produtividade de etanol e a quantidade residual de sacarose so afetados pela concentrao
inicial de substrato, concentrao celular no inculo e pela vazo de recirculao do reator.
Estas trs variveis independentes que afetam fortemente o desempenho da fermentao
alcolica foram avaliadas nas faixas: concentrao inicial de sacarose (100 a 220 g/L),
concentrao celular no inculo (4,7 a 45,3%), e vazo de recirculao do reator (2,6 a 17,1
mL/s), todas estas variveis foram analisadas durante 7 horas de processo fermentativo. No
entanto, todos os experimentos foram conduzidos at o completo consumo de sacarose. A
partir desses resultados experimentais pde-se traar o perfil de consumo de substrato e
produo de etanol em funo do tempo, bem como o perfil de concentrao celular em
funo da altura do fermentador e do tempo para cada experimento.
A Tabela 4.1 mostra os valores codificados e originais das variveis de estudo e as
respostas rendimento percentual g
etanol
/g
sacarose
, produtividade de etanol e quantidade residual
de sacarose.
Observa-se na Tabela 4.1 que o rendimento variou de 52,4% (experimento 9) a 100%
(experimento 10) e a produtividade de etanol esteve entre 4,42g
etanol
/L.h (experimento 3) e
13,32 42 g
etanol
/L.h (experimento 8). J a quantidade de sacarose residual variou de zero, nos
experimentos 10 e 11, em que a sacarose foi consumida totalmente em tempo menor que as 7
horas propostas, a 125,1 g/L (experimento 3). Verifica-se tambm que os pontos centrais
apresentaram uma variao pequena para todas as respostas indicando uma boa repetibilidade
do processo.
Pode-se observar que a maior produtividade de etanol no ocorreu para a maior
concentrao de substrato presente no meio, e que o menor valor de rendimento ocorreu para
o menor nvel de concentrao celular presente no inculo, e o maior rendimento foi
observado no maior valor de concentrao celular inicial. Sabe-se que o raciocnio cartesiano
linear no deve ser aplicado para processos fermentativos complexos, pois uma srie de
___________________________________________________________________________
52
fatores interligados determinam o comportamento do sistema. Este fato justifica a anlise
conjunta das variveis propostas.
Tabela 4.1 Variveis utilizadas no DCC e suas respostas em 7 horas de fermentao
X
1
(X
0
) X
2
(S
0
) X
3
(F) Rendimento Produtividade Sac. Residual
Experimento
(% no inculo) (g/L) (mL/s) (%) (g
etanol
/L.h) (g/L)
1 -1 (10) -1 (115,7) -1 (4,5) 67,9 6,02 0,32
2 -1 (10) -1 (115,7) +1 (15,2) 72,7 6,46 0,15
3 -1 (10) +1 (204,4) -1 (4,5) 72,5 4,42 125,1
4 -1 (10) +1 (204,4) +1 (15,2) 78,2 5,84 107,3
5 +1 (40) -1 (115,7) -1 (4,5) 82,2 7,32 0,2
6 +1 (40) -1 (115,7) +1 (15,2) 89,1 7,92 0,07
7 +1 (40) +1 (204,4) -1 (4,5) 92,3 12,72 25,2
8 +1 (40) +1 (204,4) +1 (15,2) 91,3 13,32 14,7
9 - (4,7) 0 (160) 0 (9,9) 52,4 6,22 25,7
10 + (45,3) 0 (160) 0 (9,9) 100 12,31 0
11 0 (25) - (100) 0 (9,9) 72,1 5,54 0
12 0 (25) + (220) 0 (9,9) 99,8 11,72 67,2
13 0 (25) 0 (160) - (2,6) 89,4 10,12 12,7
14 0 (25) 0 (160) + (17,1) 96,5 11,87 0,05
15 (C) 0 (25) 0 (160) 0 (9,9) 98,8 12,14 0,07
16 (C) 0 (25) 0 (160) 0 (9,9) 98,2 12,07 0,11
17 (C) 0 (25) 0 (160) 0 (9,9) 98,9 12,16 0,05

Devido grande variabilidade inerente aos bioprocessos, foi considerado um nvel de
significncia de 90%, ou seja, foram considerados significativos os parmetros em que p<0,1.
Com os resultados apresentados na Tabela 4.1, foi possvel analisar estatisticamente o
comportamento de cada resposta. Para isto, determinaram-se os coeficientes de regresso aps
a realizao da regresso mltipla no programa Statistica 7.0.

4.2.1. Rendimento

A Tabela 4.2 mostra os coeficientes de regresso das variveis e interaes com
parmetros significativos e no significativos para a resposta rendimento, bem como os
valores dos nveis de significncia relacionados aos mesmos.
A partir desta anlise foi obtida a Equao 4.1:
Rendimento(%)=97,30+10,98.X
1
-10,59.X
1
+5,13.X
2
-5,27.X
2
+2,23.X
3
-1,45.X
3
+0,28.X
1
.X
2
-
0,58.X
1
.X
3
-0,88.X
2
X
3
(4.1)

___________________________________________________________________________
53
Tabela 4.2 Regresso mltipla para a resposta rendimento
Variveis e interaes
Coeficiente de
Regresso
Desvio t(7) p
Termo Independente 97,3038 3,975628 24,47507 0,000000
(X
1
)%inculo(L) 10,9767 2,243021 4,89370 0,001766
%inculo(Q) -10,5943 2,958184 -3,58136 0,008960
(X
2
)Sacarose(L) 5,1348 2,243021 2,28924 0,055870
Sacarose(Q) -5,2692 2,958184 -1,78124 0,118081
(X
3
)Vazo (L) 2,2301 2,243021 0,99424 0,353225
Vazo (Q) -1,4461 2,958184 -0,48885 0,639891
X
1
.X
2
0,2750 2,708155 0,10155 0,921965
X
1
.X
3
-0,5750 2,708155 -0,21232 0,837906
X
2
.X
3
-0,8750 2,708155 -0,32310 0,756058
R=0,86

A Tabela 4.3 mostra os coeficientes de regresso das variveis e interaes com nveis
de significncia (p) menores que 10% para a resposta rendimento, aps a eliminao de
parmetros no significativos.

Tabela 4.3 Regresso mltipla apenas com variveis significativas para a resposta
rendimento
Variveis e interaes
Coeficiente de
Regresso
Desvio t(12) p
(X
1
)%inculo(L) 10,9767 1,875224 5,85352 0,000078
%inculo(Q) -10,5943 2,473118 -4,28378 0,001062
Sacarose(Q) -5,2692 2,473118 -2,13060 0,054496
(X
2
)Sacarose(L) 5,1348 1,875224 2,73824 0,017990
R=0,84

Os parmetros no significativos, que puderam ser desprezados para o nvel de
significncia adotado, foram: todas as interaes entre as variveis e os termos relacionados
vazo (linear e quadrtico).
A Equao 4.2 representa o modelo com as variveis significativas codificadas para a
resposta rendimento.
Rendimento(%) =96,31+10,98.X
1
-10,59.X
1
-5,27.X
2
+5,13.X
2
(4.2)
O coeficiente de correlao (R
2
) obtido aps o ajuste foi de 0,84, indicando que os
resultados foram explicados pela equao emprica proposta com 84% da variabilidade dos
dados. Esses resultados indicam uma boa concordncia entre os valores experimentais e
previstos pelo modelo, expressos na Figura 4.3.
___________________________________________________________________________
54

Figura 4.3 - Valores preditos por valores experimentais pelo modelo para o rendimento

Analisando-se a Equao 4.2 pode-se verificar que a vazo de recirculao (X
3
) no
exerceu influncia significativa sobre o rendimento, quer seja de forma linear, quadrtica ou
por interaes com outras variveis.
Pela anlise dos coeficientes das variveis isoladas na Equao 4.2, pode-se observar
que a concentrao celular no inculo (X
1
) contribui consideravelmente para o aumento da
resposta rendimento, desde que assuma valores codificados superiores ao nvel central (0,0).
Um aumento na concentrao inicial de sacarose (X
2
) tambm contribui para o aumento do
rendimento de etanol.
O sinal positivo dos coeficientes X
1
e X
2
indica que maiores concentraes de clulas
e de sacarose contribuem para um aumento do rendimento na produo de etanol. A Tabela
4.1 confirma a interpretao dada ao modelo, deixando evidente que maiores concentraes
celulares no inculo (X
1
) e maiores concentraes de sacarose (X
2
) produzem maiores
rendimentos. claro tambm que h um limite para esse aumento, determinado pelo
custo/benefcio.
Pela Figura 4.4 pode-se observar que os erros de ajustamento se mostram
independentes e normalmente distribudos em torno da reta, o que indica normalidade para a
resposta rendimento.
Como o modelo foi significativo, foi possvel construir as superfcies de resposta e
definir regies de interesse. A Figura 4.5 ilustra a superfcie de resposta e a curva de contorno
em funo de X
1
e X
2
para o rendimento. Por se tratar de um planejamento que visa otimizar
trs variveis de processo, elas sero apresentadas graficamente duas a duas junto resposta
avaliada. Sendo assim, a Figura 4.6 ilustra a superfcie de resposta e a curva de contorno em
funo de X
1
e X
3
, e a Figura 4.7 ilustra a superfcie de resposta e a curva de contorno em
funo de X
2
e X
3
.
___________________________________________________________________________
55

Figura 4.4 Distribuio dos resduos para a resposta rendimento

Figura 4.5 - Superfcie de resposta e curva de contorno para a resposta rendimento em funo
da concentrao celular no inculo e da concentrao inicial de sacarose

___________________________________________________________________________
56

da concentrao celular no inculo e da vazo de recirculao

Analisando as curvas de contorno das Figuras 4.5 e 4.6 definiu-se a faixa de
concentrao celular no inculo que maximiza o rendimento.
A curva de contorno que representa o efeito da concentrao celular no inculo em
sinergismo com a concentrao inicial de substrato (Figura 4.5) indica uma faixa aproximada
de 26 a 40% para a maximizao da resposta em questo. O efeito combinado da
concentrao celular no inculo e da vazo de recirculao (Figura 4.6) indica uma faixa
tambm de 26 a 40%. Portanto, esta a faixa que satisfaz ambos os efeitos combinados, ou
seja, pode-se afirmar que para maximizao do rendimento na produo de etanol, dentro da
regio experimental trabalhada, a concentrao celular de inculo deve estar entre 26 e 40%.

___________________________________________________________________________
57

da concentrao inicial de sacarose e da vazo de recirculao

Da mesma forma que para a concentrao de leveduras, a partir das curvas de
contorno das Figuras 4.5 e 4.7, definiu-se a faixa de concentrao inicial de sacarose que
maximiza o rendimento na regio experimental trabalhada. A faixa aproximada de sacarose
inicial correspondente ao mximo rendimento est entre 160 e 200 g/L.
Para a definio da vazo de recirculao que maximiza o rendimento na produo de
etanol foi realizada a anlise das curvas de contorno das Figuras 4.6 e 4.7. De acordo com esta
anlise, seguindo o procedimento descrito para obteno da concentrao celular que
maximiza o rendimento, e visando tambm nesse caso um maior rendimento interessante
que a vazo de recirculao seja maior que 9 mL/s.
Com o objetivo de encontrar o ponto estacionrio para o rendimento, ou seja, o ponto
correspondente maximizao da resposta rendimento dentro da regio de otimizao,
realizou-se uma anlise cannica utilizando o modelo completo representado pelos
coeficientes de regresso mostrados na Tabela 4.2. Utilizou-se um algoritmo implementado
___________________________________________________________________________
58
no software Maple Release 9.5 e definiram-se as condies que maximizaram a resposta
rendimento: concentrao celular no inculo em 33%, concentrao inicial de sacarose em
aproximadamente 180 g/L e vazo de recirculao em 12,7 mL/s. Tal resultado mostra-se em
concordncia anlise anterior j que todas as variveis determinadas se encontram dentro da
faixa definida.
A partir da Equao 4.2, obteve-se um rendimento de 99,8% quando da substituio
do ponto timo.
Lima e Marcondes (2002) encontraram para fermentaes alcolicas rendimentos
mdios de 90%, devido gerao de subprodutos, observada especialmente na presena de
corpos estranhos no meio.
Viegas (2003) obteve rendimento em torno de 87% em uma unidade de fermentao
contnua convencional, ou seja, que utiliza separadoras centrfugas e clulas de leveduras no
floculantes, em reatores de mistura, utilizando melao como matria-prima.
Harshbarger et al. (1995) utilizando-se de um biorreator de leito fluidizado operando
continuamente com 30% de catalisador v/v e uma concentrao de glicose na alimentao de
150 g/L encontrou um rendimento em etanol de 98%. Viegas, Andrietta e Andrietta (2002)
conseguiram um rendimento de 93% operando continuamente com dois reatores do tipo torre
conectados em srie, sistema de recirculao de clulas e leveduras floculantes.
Segundo Paiva et al. (1996) um sistema de reatores tipo torre de leito fluidizado com
reciclo e separao de clulas por decantao, resultou em um rendimento de 88,3%.
Comparando-se os valores de rendimentos obtidos nos experimentos e nos trabalhos
citados, nota-se que no presente trabalho foram obtidos resultados superiores aos apresentados
na literatura com a utilizao do reator de escoamento ascendente aliado utilizao de uma
cepa com caractersticas floculantes.

4.2.2. Produti vidade

A Tabela 4.4 mostra os coeficientes de regresso das variveis e interaes com
parmetros significativos e no significativos, alm dos nveis de significncia, desvio e valor
do teste de t de student associado a cada um.
A Equao do modelo, considerando parmetros significativos e no significativos
dada pela Equao 4.3.
Produtividade (g
etanol
/L.h)=12,13+2,30.X
1
-1,57.X
1
+1,45.X
2
-1,92.X
2
+0,47.X
3
-
0,63.X
3
+1,63.X
1
.X
2
-0,08.X
1
.X
3
-0,12.X
2
X
3
(4.3)
___________________________________________________________________________
59
Tabela 4.4 - Regresso mltipla para a resposta produtividade
Variveis e interaes
Coeficiente de
Regresso
Desvio t(7) p
(X
1
)%inculo(L) 2,29641 0,221288 10,37747 0,000017
%inculo(Q) -1,57443 0,291843 -5,39477 0,001014
(X
2
)Sacarose(L) 1,45279 0,221288 6,56516 0,000314
Sacarose(Q) -1,92124 0,291843 -6,58312 0,000309
(X
3
)Vazo (L) 0,46544 0,221288 2,10334 0,073508
Vazo (Q) -0,62957 0,291843 -2,15722 0,067886
X
1
.X
2
1,62750 0,267176 6,09148 0,000495
X
1
.X
3
-0,08250 0,267176 -0,30878 0,766473
X
2
.X
3
0,12250 0,267176 0,45850 0,660490
R=0,97

Aps a eliminao dos parmetros no significativos, com p >0,10, foi obtida as
seguintes relaes apresentadas na Tabela 4.5. A equao resultante deste ajuste apresentada
pela Equao 4.4.

Tabela 4.5 - Regresso mltipla apenas com variveis significativas para a resposta
produtividade
Variveis e interaes
Coeficiente de
Regresso
Desvio t(9) p
(X
1
)%inculo(L) 2,29641 0,199372 11,51823 0,000001
Sacarose(Q) -1,92124 0,262939 -7,30678 0,000045
X
1
.X
2
1,62750 0,240715 6,76109 0,000083
%inculo(Q) -1,57443 0,262939 -5,98780 0,000206
(X
2
)Sacarose(L) 1,45279 0,199372 7,28684 0,000046
Vazo (Q) -0,62957 0,262939 -2,39435 0,040269
(X
3
)Vazo (L) 0,46544 0,199372 2,33455 0,044415
R=0,97

Produtividade(g
etanol
/L.h)=12,13+2,30.X
1
-1,92.X
2
+1,63.X
1
.X
2
-1,57.X
1
+1,45.X
2
-
0,63.X
3
+0,47.X
3
(4.4)
O coeficiente de regresso (R
2
) obtido aps o ajuste foi de 0,97, indicando que a
equao emprica proposta reproduz com fidelidade os resultados obtidos experimentalmente.
Esses resultados indicam excelente concordncia entre os valores experimentais e previstos
pelo modelo, como mostra a Figura 4.8.
___________________________________________________________________________
60

Figura 4.8 - Valores preditos por valores experimentais pelo modelo para a produtividade

Os parmetros no significativos eliminados nesse caso foram as interaes entre as
variveis X
1
.X
3
e X
2
.X
3
, que apresentaram p>0,1. Pode-se perceber, pela anlise da Equao
4.4, que o efeito da vazo de recirculao se mostrou significativo nesse caso, ao contrrio do
que se observava na resposta rendimento, porm atua de forma pouco expressiva na
produtividade.
A concentrao celular no inculo e a concentrao inicial de sacarose no meio
apresentam efeito aproximado em relao resposta analisada, sendo mais expressivo o efeito
da concentrao de leveduras presente no inculo, seguido da concentrao de substrato, e
finalmente da vazo de recirculao, nesta ordem.
A varivel X
1
, relacionada concentrao celular, contribui consideravelmente para o
aumento desta resposta, desde que assuma valores codificados superiores ao nvel central
(0,0). O sinal tambm positivo atribudo ao coeficiente da varivel X
2
, concentrao inicial de
substrato, contribui com o aumento da produtividade, porm com menos intensidade, desde
que assuma valores codificados superiores ao nvel central (0,0). Para X
3
, vazo de
recirculao, valores inferiores ao nvel central, diminuem a produtividade de etanol e valores
superiores ao nvel central, aumentam essa resposta. claro que, como no caso da resposta
rendimento, h um limite para o aumento das variveis, determinado pela relao
custo/benefcio.
Observando a Figura 4.9, verifica-se que a distribuio dos resduos comportou-se
aleatoriamente em torno do zero, no apresentando qualquer tendncia quanto distribuio.
___________________________________________________________________________
61

Figura 4.9 - Distribuio dos resduos para a resposta produtividade

Nesse caso, foi possvel, construir as superfcies de resposta e definir a regio de
interesse. A Figura 4.10 ilustra a superfcie de resposta e a curva de contorno em funo da
concentrao celular no inculo (X
1
) e da concentrao inicial de sacarose (X
2
) para a
produtividade.

Figura 4.10 - Superfcie de resposta e curva de contorno para a produtividade em funo da
concentrao celular no inculo e da concentrao inicial de sacarose
___________________________________________________________________________
62

A Figura 4.11 ilustra a superfcie de resposta e a curva de contorno em funo da
concentrao celular no inculo (X
1
) e da vazo de recirculao (X
3
) para a resposta
produtividade.

concentrao celular no inculo e vazo de recirculao

A Figura 4.12 mostra a superfcie de resposta e a curva de contorno em funo da
concentrao inicial de sacarose (X
2
) e da vazo de recirculao (X
3
) para a resposta
produtividade.
___________________________________________________________________________
63

concentrao inicial de sacarose e da vazo de recirculao

concentrao celular no inculo que maximiza a produtividade de etanol ao final do ciclo
fermentativo. A curva de contorno da Figura 4.10, que representa o efeito da concentrao
celular no inculo em sinergismo com a concentrao inicial de sacarose no meio indica que
para a maximizao da resposta em questo, deve-se utilizar uma concentrao celular no
inculo maior que 30%. O efeito combinado da concentrao celular e da vazo de
recirculao (Figura 4.11) indica que a faixa de concentrao celular deve ser maior que 27%.
Buscando-se uma faixa que satisfaa ambos os efeitos combinados, pode-se afirmar que, para
maximizao da produtividade de etanol, na regio experimental adotada, a concentrao de
clulas no inculo deve ser superior a 30%.
___________________________________________________________________________
64
Da mesma forma que para varivel relacionada ao inculo, a partir das curvas de
contorno das Figuras 4.10 e 4.12 definiu-se a faixa de concentrao inicial de sacarose que
maximiza a produtividade na regio experimental trabalhada. O efeito combinado da
concentrao celular e da sacarose inicial indica que a faixa de concentrao de substrato no
incio do processo fermentativo deve ser maior que 160 g/L. O efeito da concentrao de
substrato em sinergismo com a vazo de recirculao indica que, para a maximizao da
produtividade de etanol seja, deve-se iniciar a fermentao com uma concentrao de sacarose
entre 160 e 200 g/L. Portanto, para que ambos os efeitos sejam satisfeitos, ideal que se
utilize uma concentrao inicial de sacarose entre 160 e 200 g/L.
Com o objetivo de se definir a vazo de recirculao que maximiza a produtividade de
etanol foi realizada a anlise das curvas de contorno das Figuras 4.11 e 4.12. De acordo com a
Figura 4.11, a produtividade maximizada se a vazo de recirculao estiver entre 7 e 16
mL/s. Pela Figura 4.12, que avalia a vazo de recirculao em sinergismo com a concentrao
inicial de sacarose, conclui-se que esta varivel deve estar entre 9 e 15 mL/s. Nesse caso, para
que a produtividade de etanol seja maximizada, deve-se operar com vazes de recirculao
compreendidas entre 9 e 15 mL/s.
Com o objetivo de encontrar o ponto estacionrio para a produtividade de etanol, ou
seja, o ponto correspondente de maximizao da resposta produtividade dentro da regio de
otimizao foi realizada a implementao de um algoritmo no programa Maple Release 9.5.
Este procedimento foi adotado com intuito de definir a condio operacional dentro da regio
de otimizao. Os valores codificados deste ponto foram os seguintes: X
1
=1,19; X
2
=0,89 e
X
3
=0,38.
Utilizando as Equaes de codificao 3.1, 3.2 e 3.3, foi possvel calcular os valores das
variveis em sua forma real, resultando em: X
0
=42,8% de clulas no inculo, S
0
=199,7 g/L
de sacarose e V =11,9 mL/s.
A produtividade obtida a partir da equao do modelo (Equao 4.4) foi 14,23
g
etanol
/L.h, quando substitudo as condies do ponto timo calculado.
Tal resultado mostra-se em concordncia anlise das superfcies de resposta e curvas
de contorno anteriores, uma vez as variveis determinadas se encontram dentro da faixa
definida.
Nota-se, com base nas anlises em relao ao rendimento e produtividade dentro da
faixa experimental trabalhada, que maiores concentraes celulares no inculo, maiores
concentraes iniciais de sacarose e altas vazes resultam em melhores resultados decorridas
sete horas de processo fermentativo.
___________________________________________________________________________
65
Comparando-se os valores de produtividade obtidos no presente trabalho com outros
estudos, observa-se uma melhora considervel da produtividade da fermentao alcolica
quando se utilizam leveduras com caractersticas floculantes e reatores do tipo torre. Enquanto
o modelo obtido sugere uma produtividade de 14,23 g
etanol
/L.h, de acordo com Viegas (2003),
uma fermentao contnua convencional, usual de um processo industrial, em que se utilizam
separadoras centrfugas, reatores de mistura e clulas de leveduras no floculantes, geralmente
opera com produtividade de 7,9 g
etanol
/L.h quando melao utilizado como matria-prima.
Este mesmo autor constatou que sistemas de reatores de leito fluidizado com clulas de
leveduras floculantes apresentam alta estabilidade e produtividade de at 20 g
etanol
/L.h,
enquanto que os processos contnuos otimizados com centrifugao de clulas atingem 9,6
g
etanol
/L.h.
Utilizando leveduras com caractersticas floculantes, Souza et al. (1994) referem-se a
uma produtividade mxima em etanol de 12,9 g/L.h na fermentao de meio contendo glicose
usando um reator tipo airlift de circulao interna.
Operando com dois reatores do tipo torre conectados em srie consegue-se uma
etanol
/L.h, quando se opera com leveduras com caractersticas
floculantes em um sistema contnuo com recirculao de clulas, com estabilidade por um
longo perodo de tempo (VIEGAS, ANDRIETTA e ANDRIETTA, 2002).
Viegas (2003) estudou o desempenho de leveduras com caractersticas floculantes em
um sistema de trs reatores em srie, obtendo um elevado rendimento, 27,5 g/L.h, atribudo
cepa de leveduras utilizada.
Paiva et al. (1996) operou continuamente um reator tipo torre, utilizando decantadores,
com alta concentrao de clulas e produtividade aproximada de 18 g etanol/L.h. A
fermentao contnua de melaos com uma estirpe floculante de Saccharomyces cerevisiae foi
avaliada utilizando um reator de leito fluidizado obtendo-se produtividades entre 15 e 20
g/L.h (WIECZOREK e MICHALSKI, 1994).
O modelo obtido no presente trabalho ainda indica que a produtividade pode ser
aumentada se a faixa de concentrao celular no inculo utilizada no planejamento
experimental for ampliada. Produtividades ainda maiores tambm poderiam ter sido obtidas
se o sistema fosse operado de forma contnua, ou com reatores associados em srie, como
apontam os estudos citados.

___________________________________________________________________________
66
4.2.3. Sacarose Resi dual

Outra varivel resposta analisada foi a sacarose residual, ou seja, a concentrao de
sacarose presente no meio aps sete horas de fermentao. interessante que essa varivel
seja minimizada, afinal no se deseja que cessado o processo ainda haja matria-prima a ser
consumida, pois tal fato resultaria em prejuzo para a indstria, e esse acar pode acabar
sendo agregado ao efluente do processo, provocando problemas ambientais.
Na Tabela 4.6 podem ser vistos os coeficientes de regresso das variveis e interaes,
incluindo os parmetros significativos e no significativos para a resposta sacarose residual.
Nesta tabela podem ser vistos, tambm, os valores dos nveis de significncia relacionados
aos parmetros, o desvio padro com relao a cada um, e o valor do teste de t de student
associado.
Tabela 4.6 Regresso mltipla para a resposta sacarose residual
Variveis e interaes
Coeficiente de
Regresso
Desvio t(7) p
Termo Independente -1,5242 5,524832 -0,27588 0,790604
(X
1
)%inculo(L) -19,5058 3,117071 -6,25774 0,000421
%inculo(Q) 8,9725 4,110916 2,18261 0,065389
(X
2
)Sacarose(L) 31,0832 3,117071 9,97194 0,000022
Sacarose(Q) 20,3054 4,110916 4,93937 0,001676
(X
3
)Vazo (L) -3,9202 3,117071 -1,25766 0,248847
Vazo (Q) 5,4361 4,110916 1,32236 0,227615
X
1
.X
2
-24,0375 3,763456 -6,38708 0,000372
X
1
.X
3
0,9175 3,763456 0,24379 0,814383
X
2
.X
3
-3,5000 3,763456 -0,93000 0,383324
R=0,96

Por esta anlise, obtm-se a Equao 4.5.
Sacarose Residual (g/L) =-1,52-19,51.X
1
+8,97.X
1
+31,08.X
2
-20,31.X
2
-3,92.X
3
+5,44.X
3
-
24,04.X
1
.X
2
+0,9175.X
1
.X
3
-3,50.X
2
X
3
(4.5)
Porm, como nem todas as variveis e interaes se mostraram significativos, construiu-
se uma nova Tabela 4.7, que mostra os coeficientes de regresso das variveis e interaes
com nveis de significncia (p) menores que 10% para a resposta sacarose residual, aps a
eliminao de parmetros no significativos.
A equao do modelo, considerando apenas os parmetros significativos dada pela
Equao 4.6.
Sacarose Residual (g/L) =2,20+31,08.X
2
-24,04.X
1
.X
2
+20,31.X
2
-19,51.X
1
+8,97.X
1
(4.6)

___________________________________________________________________________
67
Tabela 4.7 Regresso mltipla apenas com variveis significativas para a resposta sacarose
residual
Variveis e interaes
Coeficiente de
Regresso
Desvio t(11) p
(X
2
)Sacarose(L)
31,0832 3,152947 9,85847 0,000001
X
1
.X
2

-24,0375 3,806770 -6,31441 0,000057
Sacarose(Q) 20,3053 4,158229 4,88317 0,000484
(X
1
)%inculo(L)
-19,5058 3,152947 -6,18654 0,000068
%inculo(Q)
8,9725 4,158229 2,15777 0,053914
R=0,94

Pode-se perceber que, assim como na resposta rendimento, a vazo no exerceu
influncia sobre a resposta sacarose residual para o nvel de significncia adotado, nem sob
sua forma linear, quadrtica ou interaes com as demais variveis.
Obteve-se, aps a retirada dos parmetros no significativos, um coeficiente de
correlao (R
2
) de 0,94, indicando que os resultados so explicados pela equao emprica
proposta com 94% da variabilidade dos dados. Esses resultados indicam uma boa
concordncia entre os valores experimentais e previstos pelo modelo, expressos na Figura
4.13.

Figura 4.13 - Valores preditos pelo modelo por valores experimentais para a resposta sacarose
residual

Pela anlise da Equao 4.6 pode-se verificar que a concentrao inicial de sacarose
no meio exerce forte influncia sobre a quantidade residual de sacarose, devido magnitude
deste parmetro. Se essa varivel assume valores codificados superiores ao nvel central (0,0),
tem-se uma alta concentrao de sacarose residual. Para valores codificados inferiores ao
nvel central tm-se uma reduo da quantidade de sacarose residual medida que o valor
___________________________________________________________________________
68
absoluto da varivel aumenta. Tal observao perfeitamente condizente com o
comportamento esperado. natural que, para um tempo fixo de fermentao, quanto mais
sacarose estiver presente no meio no incio da fermentao, para uma concentrao fixa de
leveduras, maior ser seu nvel residual cessado o tempo proposto.
J a concentrao celular no inculo tem um comportamento oposto ao da
concentrao inicial de sacarose. Para valores codificados superiores ao ponto central,
medida que este aumenta, tem-se um menor valor de sacarose residual. Se a varivel assumir
valores inferiores ao nvel central, ocorre um aumento na concentrao residual de substrato
no meio. Esse comportamento tambm esperado, pois quanto maior a concentrao de
leveduras no meio, mais rpido acontecer o consumo da sacarose.
A vazo de recirculao (X
3
) no exerceu influncia significativa sobre o rendimento,
quer seja de forma linear, quadrtica ou por interaes com outras variveis.
Na Figura 4.14 observa-se que os erros de ajustamento se mostram independentes e
normalmente distribudos em torno da reta, o que indica normalidade para a resposta sacarose
residual.
Para ilustrar os efeitos das variveis na concentrao de sacarose presente no meio
decorridas as 7 horas de fermentao, esto apresentadas nas Figuras 4.15, 4.16 e 4.17 as
superfcies de resposta e as curvas de contorno para associao, duas a duas, das variveis
do planejamento.

Figura 4.14 - Distribuio dos resduos para a resposta sacarose residual

___________________________________________________________________________
69

Figura 4.15 - Superfcie de resposta e curva de contorno para a concentrao residual de
sacarose em funo da concentrao celular no inculo e da concentrao inicial de sacarose

___________________________________________________________________________
70

sacarose em funo da concentrao celular no inculo e vazo de recirculao

concentrao celular no inculo que minimiza a concentrao residual de sacarose decorridas
7 horas de fermentao.
A curva de contorno da Figura 4.15, que representa o efeito da concentrao celular no
inculo em combinao com a concentrao inicial de sacarose no meio indica que para a
minimizao da resposta em questo, deve-se utilizar uma concentrao celular no inculo
maior que 25%, at o limite superior da faixa trabalhada. O efeito da concentrao celular em
sinergismo com a vazo de recirculao (Figura 4.16) indica que a faixa de concentrao
celular deve ser maior que 33%. Buscando-se uma faixa que satisfaa ambos os efeitos
combinados, pode-se afirmar que, para maximizao da produtividade de etanol, na regio
experimental adotada, a concentrao de clulas no inculo deve ser superior a 33%.
___________________________________________________________________________
71

sacarose em funo da concentrao inicial de sacarose e da vazo de recirculao

A partir das curvas de contorno das Figuras 4.15 e 4.17, e seguindo-se o mesmo
procedimento descrito anteriormente, definiu-se a faixa de concentrao inicial de sacarose
que minimiza a concentrao final de sacarose residual na regio experimental trabalhada. O
efeito combinado da concentrao celular e da sacarose inicial indica que a faixa de
concentrao de substrato no incio do processo fermentativo deve estar entre 110 e 140 g/L
para que a quantidade residual de sacarose seja mnima. O efeito da concentrao de substrato
em sinergismo com a vazo de recirculao indica que, para que a concentrao de substrato
residual no meio seja minimizada, deve-se iniciar a fermentao com uma concentrao de
sacarose entre 120 e 135 g/L. Portanto, para que ambos os efeitos sejam satisfeitos, ideal
que se utilize uma concentrao inicial de sacarose entre 120 e 135 g/L.
___________________________________________________________________________
72
Da mesma forma que para a concentrao celular no inculo e para a concentrao
inicial de sacarose, a partir das Figuras 4.16 e 4.17 definiu-se a faixa de vazo de recirculao
que minimiza a concentrao residual de sacarose no meio decorrido o tempo total definido
para a fermentao. De acordo com esta anlise, seguindo o mesmo procedimento dos casos
anteriores, conclui-se que a vazo de recirculao deve estar entre 6 e 15 mL/s.
Com o objetivo de encontrar o ponto estacionrio para a sacarose residual, ou seja, o
ponto correspondente minimizao da resposta concentrao residual de sacarose dentro da
regio de otimizao, realizou-se uma anlise cannica utilizando o modelo completo
representado pelos coeficientes de regresso mostrados na Tabela 4.6. Foi possvel definir as
condies que minimizaram a concentrao de sacarose ao final do processo fermentativo
pela utilizao de um algoritmo implementado no software Maple Release 9.5. Os valores
codificados deste ponto foi: X
1
=0,35; X
2
=-0,55 e X
3
=0,16. Utilizando as Equaes de
codificao 3.1, 3.2 e 3.3, calculou-se os valores das variveis em sua forma real, resultando
em: X
0
=30,2% de clulas no inculo, S
0
=135,8 g/L de sacarose e V=10,7 mL/s.
Este resultado mostrou-se em concordncia com a anlise das superfcies de resposta e
curvas de contorno com exceo do valor obtido para concentrao celular no inculo, na qual
esta anlise das superfcies de resposta indica a utilizao de uma concentrao celular maior
que 33%, e o ponto estacionrio mostrou que a mnima sacarose residual seria obtida em uma
fermentao que utilizasse aproximadamente 30% de clulas no inculo. Porm essa
discrepncia pequena e ser checada na validao dos pontos timos.
A concentrao residual de sacarose obtida a partir do modelo dado pela Equao 4.6
forneceu um valor negativo de aproximadamente -10 g/L de sacarose. Tal valor indica que,
utilizando as variveis nos nveis dados pelo ponto timo, a sacarose j teria sido totalmente
consumida cessado o tempo fixo de fermentao de 7 horas, ou seja, a completa fermentao
do meio nessas condies acontece em um tempo menor que sete horas.
As fermentaes experimentais realizadas apresentaram converso de substrato
comparvel a processos industriais e a estudos de processos fermentativos. Quando se opera
com leveduras floculantes num sistema contnuo com recirculao de clulas, o reator de leito
fluidizado fornece uma converso de substrato maior que 95% (VIEGAS, ANDRIETTA e
ANDRIETTA, 2002). Viegas (2003) obteve converso de substrato maior que 98%
trabalhando com diferentes concentraes de substrato (125 a 181 g/L) e diferentes condies
de aerao num sistema estvel por 80 dias operando continuamente, em um sistema de
fermentao contnua com reciclo de clulas formado por dois fermentadores tipo torre e um
___________________________________________________________________________
73
decantador. Segundo Harshbarger et al. (1995), com um biorreator de leito fluidizado
operando continuamente obtm-se converso de substrato de 99,5%.

4.3. Reprodutibilidade do Ponto Otimizado

O principal objetivo desta etapa foi verificar se ocorreria reprodutibilidade dos
resultados apontados pelos modelos, quando empregadas as condies experimentais
indicadas pela anlise das superfcies de resposta e curvas de contorno e pelos pontos
estacionrios determinados pela utilizao de rotina implementada no software Maple Release
9.5.
Pela anlise das superfcies de resposta e curvas de contorno, concluiu-se que a
concentrao celular no inculo deve estar entre 26 e 40% para a resposta rendimento, deve
ser maior que 30% para maximizar a produtividade e deve ser estar em um nvel superior a
33% para que a concentrao residual de sacarose ao final do processo fermentativo seja
mnima. Como a concentrao celular no um entrave econmico para uma fermentao
alcolica, optou-se por trabalhar com altos nveis celulares no inculo na tentativa de otimizar
as respostas.
A concentrao inicial de sacarose que otimiza a resposta rendimento deve estar entre
160 e 200 g/L, mesma faixa que garante uma produtividade mxima. No entanto, para a
minimizao da concentrao de sacarose residual, a anlise das superfcies e curvas de
contorno sugerem concentrao de substrato entre 120 e 135 g/L. Esta mesma anlise conclui-
se a vazo de recirculao deve ser maior que 9 mL/s para maximizao do rendimento, estar
entre 9 e 15 mL/s para otimizao da produtividade e estar compreendida entre 6 e 15 mL/s
para que a sacarose residual seja mnima ao final de sete horas de fermentao.
Pela anlise dos pontos estacionrios, nota-se que a concentrao celular no inculo
que favorece o rendimento 33%, para maximizao da produtividade ideal que se
aproxime de 43%, e para que a concentrao residual de sacarose seja mnima deve-se
preparar um inculo com aproximadamente 30% de clulas em volume. Esta mesma anlise
afirma que, para que o rendimento seja maximizado, deve-se iniciar a fermentao com 180
g/L de sacarose. Para que a produtividade de etanol atinja seu mximo valor, a concentrao
inicial de sacarose deve ser de 200 g/L e para que se tenha uma mnima quantidade residual
de sacarose, deve-se operar o processo fermentativo com 136 g/L de sacarose inicial.
___________________________________________________________________________
74
A vazo de recirculao que otimiza o rendimento de aproximadamente 13 mL/s, de
12 mL/s para maximizar a produtividade e est em torno de 11 mL/s para beneficiar a
minimizao da sacarose residual, segundo a anlise dos pontos estacionrios feita no
algoritmo implementado no softwareMaple Release 9.5.
Se a fermentao fosse realizada no ponto estacionrio do rendimento,
utilizando as equaes dos modelos para produtividade e sacarose residual (Equaes 4.4 e
4.6, respectivamente), obter-se-ia uma produtividade de 13,5 g
etanol
/L.h e 7,4 g/L de sacarose
residual no meio decorridas as sete horas de reao, para um rendimento de praticamente
100%. Se a fermentao fosse conduzida no ponto mximo de produtividade, e substituindo
esse ponto nos modelos de rendimento e concentrao residual de sacarose (Equaes 4.2 e
4.6, respectivamente), ter-se-ia um rendimento de aproximadamente 84% e uma concentrao
de sacarose ao final do tempo estipulado de 10,2 g/L, para uma produtividade de 14,23
g
etanol
/L.h. Se a fermentao fosse conduzida no ponto estacionrio da resposta sacarose
residual, conseguir-se-ia, utilizando os modelos para rendimento (Equao 4.2) e
produtividade (Equao 4.4), respectivamente 86,83% e 11,13 g
etanol
/L.h, sem que haja
concentrao residual de sacarose ao trmino do processo fermentativo.
Nessa etapa, optou-se por eleger e avaliar duas situaes distintas consideradas ser as
melhores para a fermentao alcolica em questo: um ponto timo a partir das superfcies de
resposta e curvas de contorno e outro pela anlise dos pontos estacionrios feita por rotina
implementada no software Maple Release 9.5.
Portanto, baseando-se nas faixas de interesse para as respostas avaliadas na literatura,
e considerando-se critrios tcnicos e econmicos definiu-se as condies para realizao dos
experimentos para validao.
Pela anlise das superfcies de resposta e curvas de contorno, definiu-se a condio
tima a ser reproduzida experimentalmente: utilizou-se alta concentrao celular no inculo,
45%, concentrao inicial de sacarose de 200 g/L e vazo de recirculao de 15 mL/s.
Pode-se perceber que, trabalhando no ponto mximo do rendimento, a produtividade
no consideravelmente prejudicada, e a concentrao residual de sacarose decorridas sete
horas de fermentao baixa. Esta a situao, dentre as sugeridas pela anlise dos pontos
estacionrios, mais favorvel, e foi selecionada para testar a reprodutibilidade do modelo
segundo este mtodo. Portanto, a outra condio reproduzida foi: concentrao celular no
inculo de 33%, concentrao inicial de sacarose de 180 g/L e vazo de recirculao de 13
mL/s.
___________________________________________________________________________
75
Ambas as escolhas atendem plenamente o domnio de validade da regio de
otimizao e a alternativa de aumentar a concentrao celular no inculo e concentrao
inicial de substrato no ponto timo indicado pelas superfcies de resposta representa um ganho
vinculado economia do processo.
Na Figura 4.18 pode-se observar os perfis de consumo de sacarose e de produo de
etanol em funo do tempo, bem como o crescimento celular em funo do tempo e da altura
do reator para a condio mxima obtida pela anlise das superfcies de resposta (45% de
clulas no inculo, concentrao inicial de sacarose de 200 g/L e vazo de recirculao de 15
mL/s). Obteve-se um rendimento de 89,1% e uma produtividade de 13,5 g
etanol
/L.h, com
concentrao residual de sacarose de 3,1 g/L.

Figura 4.18 - Perfis de concentrao celular, substrato e inculo em funo do tempo para a
condio mxima das superfcies de resposta

Os perfis de concentrao celular, de sacarose e etanol obtidos no ponto mximo do
rendimento (33% de clulas no inculo, concentrao inicial de sacarose de 180 g/L e vazo
de recirculao de 12,7 mL/s) so mostrados na Figura 4.19. Conduzindo a fermentao
alcolica nessas condies obteve-se um rendimento de aproximadamente 98% e uma
etanol
/L.h, com concentrao residual de sacarose de 2,3 g/L ao final do
tempo pr-determinado.
___________________________________________________________________________
76

Figura 4.19 - Perfis de concentrao celular, substrato e inculo em funo do tempo para a
condio mxima do rendimento

A produtividade e o rendimento obtidos na prtica foram bastante prximos aos
valores previstos pelos modelos (Equaes 4.4 e 4.2, respectivamente), podendo-se atribuir
essa pequena diferena a erros experimentais. O rendimento se mostrou ligeiramente inferior
quando comparado com o valor previsto pela equao do modelo, enquanto a equao previa
um rendimento de 99,8%, obteve-se, na prtica, 98% de rendimento, enquanto a
produtividade prevista e obtida so coincidentes em aproximadamente 13,5 g
etanol
/L.h. A
concentrao residual de sacarose no experimento que visava a reprodutibilidade pode ser
negligenciado, embora o modelo presumisse uma concentrao de 7,4 g/L de sacarose ao
trmino do processo fermentativo.
Comparando os resultados obtidos nos experimentos que visavam a reprodutibilidade,
percebe-se que conduzir a fermentao alcolica na condio do mximo do rendimento
mais vantajosa em termos das respostas analisadas, pois conseguiu-se uma mesma
produtividade, com um maior rendimento, e utilizando-se uma menor concentrao de
substrato.
O menor rendimento obtido no experimento que reproduziu a condio tima
fornecida pelas superfcies de resposta pode ser associado inibio pelo substrato, que
___________________________________________________________________________
77
ocorre quando se inicia a fermentao alcolica com altas concentraes de sacarose, 200 g/L
no caso.
Os valores obtidos pelo experimento e o modelo esto bastante prximos, o que indica
que houve reprodutibilidade dos resultados tanto em termos de rendimento quanto de
produtividade de etanol e concentrao residual de sacarose.

4.5. Modelagem Matemtica

Pode-se observar, na Figura 4.20, o perfil de concentrao celular e de substrato ao
longo do tempo e da altura do reator para o experimento 16, ponto central, que se inicia com
25% de clulas no inculo, 160 g/L de sacarose e tem vazo de recirculao de 9,9 mL/s.
Existe uma pequena variao da concentrao de substrato e de leveduras ao longo da
posio, que justifica a utilizao de um modelo batelada, que no considera variao espacial
das grandezas de estado com a posio.

Figura 4.20 Perfil de concentrao celular e de substrato ao longo do tempo e da posio do
reator para o experimento 16

O algoritmo de quarta-ordem de Runge-Kutta foi acoplado com o mtodo de regresso
no linear para a soluo das equaes (3.6 a 3.9). Os parmetros foram obtidos para o
conjunto de dados adimensionalizados (Tabela 4.8). Os parmetros
mA,
o
A,
e
A
foram
___________________________________________________________________________
78
calculados a partir dos dados experimentais, enquanto os demais foram determinados pelo
ajuste do modelo aos dados experimentais.

Tabela 4.8 Parmetros obtidos a partir dos dados experimentais e do ajuste do modelo

O somatrio dos quadrados dos resduos calculados foi relativamente baixo sugerindo
o bom ajuste do modelo como indicado na Tabela 4.8 e Figuras 4.21 e 4.22. Outro indicativo
de bom ajuste foi o desvio padro obtido para os parmetros calculados.
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

d
e

e
t
a
n
o
l

(
-
)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

d
e

s
a
c
a
r
o
s
e

(
-
)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

c
e
l
u
l
a
r

(
-
)
Tempo (-)

Figura 4.21 - Variao na concentrao de biomassa (), sacarose (o), etanol () para o
representam o ajuste do modelo proposto para os dados adimensionalizados

PARMETROS ADIMENSIONAIS PARMETROS DIMENSIONAIS
Calculados pelos dados experimentais
mA
[-] 0,39
m
[h
-1
] 0,065
o
A
|-| 6,75 o |gS.(gX)
-1
| 26,638
A
[-] 6,85 [gP.(gX)
-1
] 12,244
Ajustados pelo modelo
p
mA
[-]
1,350 6,148x10
-1

p
m
[g.L
-1
]
122,30
n [-]
0,120 1,252x10
-2

n [-] 0,12
|
A
[-] 0,905x10
-1
0,174x10
-1
| [gS.(gX.h)
-1
] 0,0599
o
A
[-] 0,645x10
-1
0,172x10
-1
o

[gP.(gX.h)
-1
] 0,0192
K
SA
| -| 0,171 0,766x10
-1
K
S
| gS.L
-1
| 34,2
K
IA
[-] 0,908 0,267 K
I
[gS.L
-1
] 181,6
SRS
3,650x10
-2
- -
___________________________________________________________________________
79
0 1 2 3 4 5 6
15
20
25
30
35
40
45
50
0
50
100
150
200
0
20
40
60
80
100
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

d
e

e
t
a
n
o
l

(
g
/
L
)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

c
e
l
u
l
a
r

(
g
/
L
)
Tempo (h)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

d
e

s
a
c
a
r
o
s
e

(
g
/
L
)

representam o ajuste do modelo proposto para os dados dimensionais

Substituindo-se os valores dos parmetros obtidos a partir dos dados experimentais e
do ajuste do modelo nas equaes de balano de substrato e produto, em sua forma
dimensional, tem-se, respectivamente, as Equaes 4.7 e 4.8.
X
dt
dX
dt
dS
0599 , 0 638 , 26 + =
(4.7)
X
dt
dX
dt
dP
0192 , 0 244 , 12 + = (4.8)
Pode-se observar, pela magnitude dos parmetros, que tanto o consumo de substrato
quanto a formao de produto se mostraram fortemente associados ao crescimento celular e
fracamente associados concentrao celular do meio. Entretanto, como os experimentos em
questo foram conduzidos com altas concentraes celulares no inculo e apresentaram baixa
taxa de crescimento celular, ambos os termos de cada equao se mostraram importantes, pois
apresentam ordem de grandeza semelhante.

4.5.1. Validao do Modelo

sempre desejvel a verificao da coerncia entre os experimentos e o modelo, antes
que o mesmo possa ser considerado vlido. O modelo foi validado pela simulao do modelo
___________________________________________________________________________
80
em duas condies experimentais diferentes e pela comparao dos resultados da simulao
com os obtidos experimentalmente.
A Tabela 4.9 apresenta os parmetros calculados e utilizados para as duas condies
utilizadas na validao.
Tabela 4.9 - Parmetros calculados para as duas condies de validao

A boa correlao entre os valores experimentais e os valores obtidos pelo modelo
podem ser observados nas Figuras 4.23 e 4.24 validando o modelo.
0 1 2 3 4 5 6
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
0
20
40
60
80
100
C
o
n
c
n
t
r
a
o

d
e

e
t
a
n
o
l

(
g
/
L
)
C
o
n
c
n
t
r
a
o

d
e

s
a
c
a
r
o
s
e

(
g
/
L
)
C
o
n
c
n
t
r
a
o

c
e
l
u
l
a
r

(
g
/
L
)
Tempo (h)

experimento (16) do ponto central. Os smbolos representam os resultados experimentais e as
linhas representam a aplicao do modelo aos dados experimentais

PARMETROS Exp.(16) ponto central Ponto timo rendimento
Calculados pelos dados experimentais
m
[h
-1
] 0,065 0,090
o |gS.(gX)
-1
| 37,142 19,981
[gP.(gX)
-1
] 18,317 10,050
Dados do modelo
p
m
[g.L
-1
]
122,30 122,30
n [-] 0,12 0,12
| [gS.(gX.h)
-1
] 0,0599 0,0599
o

[gP.(gX.h)
-1
] 0,0192 0,0192
K
S
| gS.L
-1
| 34,2 34,2
K
I
[gS.L
-1
] 181,6 181,6
___________________________________________________________________________
81
0 1 2 3 4 5 6 7
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
38
40
42
44
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
0
20
40
60
80
100
C
o
n
c
n
t
r
a
o

d
e

e
t
a
n
o
l

(
g
/
L
)
C
o
n
c
n
t
r
a
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d
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s
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c
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r
o
s
e

(
g
/
L
)
C
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n
c
n
t
r
a
o

c
e
l
u
l
a
r

(
g
/
L
)
Tempo (h)

Figura 4.24 - Variao na concentrao de biomassa (), sacarose (o) e etanol () para o
experimento de validao das condies do experimento de validao do ponto timo do
rendimento. Os smbolos representam os resultados experimentais e as linhas representam a
aplicao do modelo proposto aos dados experimentais

Vasconcelos, Pinto e Silva (1992) testaram dez modelos cinticos para o processo de
fermentao alcolica industrial e concluram que o modelo de Ghose e Thyagi (1979) foi o
que apresentou os melhores ajustes dos dados experimentais. Amaral (2009) tambm chegou
aos melhores resultados com tal modelo para as condies experimentais adotadas.
Ferreira (2003) modelou matematicamente um biorreator tipo torre de leito pseudo-
expandido. Diferentes modelos cinticos foram testados para descrever o comportamento
deste biorreator em diferentes condies de operao. O modelo proposto por Tosetto e
Andrietta (2002) foi o que apresentou menor oscilao nos valores dos parmetros cinticos e
mais se aproximou do comportamento de um biorreator de leito pseudo-expandido.

82
CAPTULO 5
CONCLUSES

- A utilizao de um reator tipo torre com escoamento ascendente e recirculao externa
se mostrou uma alternativa promissora para fermentaes alcolicas, por ter
apresentado elevados rendimentos percentuais e produtividades.
- A utilizao de uma cepa de leveduras com caractersticas floculantes se mostrou
bastante eficaz, pelos altos nveis de produtividade obtidos, diminuio do tempo de
fermentao e economia de processamento e instalao estimados para plantas
sucroalcooleiras.
- A concentrao celular no inculo foi a varivel que mais afetou as respostas
analisadas. Como era esperado, um aumento na concentrao celular no inculo
provocam um aumento no rendimento e na produtividade, e diminui os nveis
residuais de sacarose.
- A concentrao inicial de substrato tambm exerceu forte influncia sobre as variveis
analisadas, porm um aumento na concentrao inicial de substrato no aumenta,
linearmente, o rendimento e produtividade ou diminui os nveis residuais de sacarose.
As melhores respostas foram obtidas para uma concentrao inicial de sacarose em
torno de 180 g/L.
- A vazo de recirculao afetou de maneira significativa apenas a resposta
produtividade. As demais respostas no sofreram influncia significativa dessa
varivel.
- Os modelos obtidos foram satisfatrios na reprodutibilidade dos dados experimentais.
- Foram avaliadas duas condies de mximo: uma fornecida pela anlise das
superfcies de resposta (45% de clulas no inculo, concentrao inicial de sacarose de
200 g/L e vazo de recirculao de 15 mL/s) e outra pelo ponto estacionrio do
rendimento (33% de clulas no inculo, concentrao inicial de sacarose de 180 g/L e
vazo de recirculao de 12,7 mL/s). Comparando-se estas duas condies, conclui-se
que mais vantajoso conduzir o processo fermentativo no ponto estacionrio do
rendimento, que forneceu uma mesma produtividade e um maior rendimento,
utilizando-se uma menor concentrao inicial de substrato. Obteve-se, nesse
experimento, um rendimento de 98%, produtividade de 13,4 g
etanol
/L.h e concentrao
residual de sacarose de 3,1 g/L.
Captulo 5 Concluses
___________________________________________________________________________
83
- Os valores das respostas preditas pelos modelos e as obtidas experimentalmente esto
prximas, o que indica a validade dos modelos ajustados.
- O modelo cintico de Tosetto e Andrietta (2002) se ajustou bem aos dados
experimentais. Houve uma boa correlao entre os valores experimentais e os valores
obtidos pelo modelo indicando que este foi validado.
- Os valores de produtividade e rendimento obtidos nos experimentos que operam nas
condies timas analisadas apresentam nveis mais elevados que processos
industriais usuais de produo de etanol.
- Fica evidente que a levedura floculante aliada ao uso de reatores tipo torre se mostra
uma alternativa promissora para melhorar o desempenho e reduzir os custos do
processo.

84
CAPTULO 6
SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS

- Testar diferentes meios nutricionais e condies fermentativas para que se obtenha
uma eficiente floculao da cepa;
- Operar os experimentos de forma contnua, na tentativa de elevar os ndices de
produtividade e rendimento obtidos pelo processo batelada;
- Trabalhar com uma faixa maior para a concentrao celular no inculo, visto que esta
exerce influncia decisiva sobre as respostas em questo, e no se trata de uma
restrio econmica para o processo.

85
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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Brasil. COPPE/Universidade Federal do Rio de J aneiro, DEPRO/Universidade Federal de
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93
APNDICE A

CURVAS DE CALIBRAO

A.1 - Curva de calibrao para concentrao de glicose

A.2 - Curva de calibrao para concentrao de etanol

Apndice A Curvas de Calibrao
___________________________________________________________________________
94
A.3 Curva de calibrao para concentrao celular

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