Como conseguir millones

de genes en un espacio
donde solo caben decenas donde solo caben decenas
de miles?
La fragmentacin mltiple de los exones y el
reordenamiento de los fragmentos
2 3 1
1 2
2
3
3
1 1 1 1 1 1 1 2 3
1
La recombinacin gentica en la regin variable es un
recurso para aumentar la diversidad de los anticuerpos
sin aumentar el material gnico
Recombinacin homologa
CH1 CH2 CH3 CH4 PC TM COOH Cit.
CDR
S S S S S S S S S S
S A la otra cadena pesada
S A la cadena ligera
Organizacin gnica de la cadena pesada (cromosoma 14)
5'
VH-1
VH-1
VH-51
VH-51
D-1
D-1
JH-1
JH-1
D-27
D-27
JH-6
JH-6
Librera de segmentos gnicos de la regin
variable de la cadena pesada
5'
VH-1
VH-1
VH-51
VH-51
D-1
D-1
JH-1
JH-1
D-27
D-27
JH-6
JH-6
CADENAS
PESADAS
CROMOSOMA 14
S
S S
S
S
S S
S
S
S
S
S
S S
S
S
S
S
S
S S S S
S
Cadena pesada
C V H N
2
COOH
Organizacin gnica de la cadena ligera K (cromosoma 2)
5' 3'
Vk-1
Vk-1
Vk-40
Vk-40
Jk-1
Jk-1
Jk-5 Ck
Ck
Jk-5
Librera de segmentos gnicos de la regin variable
de la cadena ligera
S S S S
S
Cadena pesada
C V H N
2
COOH
Organizacin gnica de la cadena ligera (cromosoma 22)
Diversidad Potencial:
9000 cadenas pesadas
200 +270=470 cadenas ligeras
4 millones Igs posibles
Reordenamiento gnico
Seal inicio traduccin
Secuencia lder (60-90 pb)
CACAGTG ACAAAAACC
12pb
GTGTCAC TGTTTTTGG
Vk
12-RSS
CACTGTG GGTTTTTGT
23pb
GTGACAC CCAAAAACA
23-RSS
VH
Seal inicio traduccin
Secuencia lder (60-90 pb)
CACAGTG ACAAAAACC
23pb
GTGTCAC TGTTTTTGG
Regla 12 / 23
CACAGTG CACTGTG GGTTTTTGT ACAAAAAGG
12pb 12pb
GTGTCAC GTGACAC CCAAAAACA TGTTTTTCC
CACTGTG GGTTTTTGT
23pb
GTGACAC CCAAAAACA
V no se puede
recombinar con J
Sinapsis
El proceso de recombinacin tiene cuatro fases
Reconocimiento
RSS
Escisin
Codificacin y
procesamiento
Unin
www.youtube.com/watch?v=QTOBSFJWogE
www.youtube.com/watch?v=aH02f3R37rk
Codificacin y procesamiento (diversidad de unin)
Adicin de
nucletidos por
mecanismos de
reparacin de DNA
Delecin por
exonucleasas
Adicin de nucletidos
por TdT
(deoxinucleotidil
transferasa terminal)
Unin fuera de fase
1 de cada 3 intentos es productivo
14
14
2
2
22
22
14
14
14
14
2
2
2
2
22
22
22
22

EXITO
RNAm
Cadena pesada

EXITO
RNAm
Cadena pesada

FRACASO
Muerte funcional
de la clula
Inhibe
reordenamiento
2 alelo
(exclusin allica)
Estimula reord. o
CADENAS
PESADAS
CADENAS
Reordenamiento del PRIMER ALELO FRACASO
Reord. SEGUNDO ALELO
EXITO
RNAm o
Cadena ligera o


EXITO
RNAm o
Cadena ligera o


FRACASO
FRACASO
Inhibe reordenamiento
2 alelo o
(exclusin allica)
Inhibe reordenamiento
isotipo o
(exclusin isotipo)
k

Inhibe reord. o
(exclusin isotipo)
etc.
CADENAS
LIGERAS
CELULA PRODUCTORA
DE Ac. o
CELULAPRODUCTORA
DE Ac. o
Reordenamiento del PRIMER ALELO ( o )
Reordenamiento del SEGUNDO ALELO o
http://www.youtube.com/watch?v=aH02f3R37rk
Expresin simultanea de IgM e IgD (procesamiento alternativo)
S
S
S
S
Pecado Antignico Original
Un linfocito B de memoria de alta afinidad, especfico
para el virus A, es activado preferentemente por una para el virus A, es activado preferentemente por una
nueva cepa, el virus A
1
, para producir anticuerpos que
infructuosamente se unirn a la cepa A
1
. La presencia
de estos anticuerpos inhibe la activacin de linfocitos B
vrgenes que producen anticuerpos ms eficaces
contra el virus A
1
. Este efecto lleva a una respuesta
inmune disminuida contra el virus A
1
, y aumenta la
probabilidad de una infeccin grave.
Cambio de clase
Recombinacin del cambio de clase
Cambio de clase
El cambio de clase depende:
-Regiones de cambio o de empalme
- recombinasa de cambio
- seales de las citocinas
Citocinas:
IL-4: IgE a IgG1
IFN: IgG2 a IgG3
TGF: IgG2 a IgA
Proceso que implica la introduccin de mutaciones por sustitucin de bases
codificantes en las regiones variables de las clulas B que estn
proliferando en los centros germinales de los folculos linfoides.
La hipermutacin somtica se produce con una tasa elevada, un milln de
veces ms elevada que la tasa normal de mutaciones en el genoma.
Hipermutacin Somtica
veces ms elevada que la tasa normal de mutaciones en el genoma.
Maduracin de la afinidad: La hipermutacin somtica dirigida por un
antgeno puede producir un aumento en la afinidad de unin por el receptor
de la clula B por su ligando.
Es imprescindible la accin de una enzima denominada: citidina
desaminasa inducida por activacin (AID)
Estructura qumica de la citosina Estructura qumica del uracilo
Un par citosina: guanina es mutada de este modo directamente a uracilo:guanina desapareados.
Citidina desaminasa inducida por activacin (AID)
Un par citosina: guanina es mutada de este modo directamente a uracilo:guanina desapareados.
Los residuos de uracilo no se encuentran normalmente en el ADN y para mantener la integridad del genoma la
mayor parte de esas mutaciones se deben reparar por enzimas reparadoras de ADN de alta fidelidad.
Las bases de uracilo son retiradas por la enzima reparadora Uracilo-ADN glicosilasa.
La sntesis de este nuevo ADN implica ADN polimerasas proclives al error, que frecuentemente introducen
mutaciones o bien en la posicin de la misma citosina desaminada o en las pares de bases adyacentes.
La introduccin de mutaciones en las poblaciones de linfocitos B en rpida proliferacin culmina finalmente en la
produccin de miles de linfocitos B, que poseen receptores ligeramente diferentes y varan su especificidad por el
antgeno, de manera que se selecciona aquellas con las mayores afinidades por el antgeno para diferenciarse
como clulas plasmticas productoras de anticuerpos y linfocitos B con memoria que contribuyen a intensificar la
respuesta inmunitaria tras una reinfeccin.
7 dias
14 dias
Hipermutacin somtica
Maduracin de la afinidad
(rganos linfoides secundarios)
7 dias
Maduracin de la
afinidad afinidad
(rganos linfoides
secundarios)
Diversidad de
unin
Diversidad de
unin
Sntesis, ensamblaje y secrecin de inmunoglobulinas
BiP
DNA
RNAn
T
r
a
n
s
c
r
i
p
c
i

n
S
p
l
i
c
CAMBIO DE TRANSMEMBRANA A SECRETADA
P
C
P
C
T
M
T
M
C
C
E
E

VDJ
VDJ
P
C
P
C
E
E

VDJ
VDJ
T
M
C
S
S
S
S
RNAm
Prot.
c
i
n
g
T
r
a
d
u
c
c
i

n
IgMm
T
M
C

VDJ
IgMs
P
C

VDJ
P
C
J
S
-
S
S
-
S
S
-
S
S
-
S
Desarrollo de los linfocitos B
Generacin de receptores
Tolerancia a
Ags. propios
Activ x Ags.
extraos
Fase efectora
Pro-B
temprana
Pro-B
tarda
Pre-B
grande
Seleccin
positiva?
Seleccin
negativa
central
Seleccin
negativa
perifrica
Pre-B
pequea
B Inmadura
~IgGm
~IgAm
~IgEm
~IgGs
~IgAs
~IgEs
B madura
inocente
Linf. B
Memoria
Plasmtica
Antgeno independiente
Mdula sea
Antgeno dependiente
Periferia
Plasmtica
D-J
C. pesadas
C. ligeras
CD34 + CD45 CD45: sealizacin intracelular
CD10
RAG-1
Intrace-
lulares
VLA-4: Very Late Antigen-4 (es una integrina)
VCAM-1 (CD106): Vascular Cell Adhesion Molecule-1
SCF: Stem Cell Factor RAG: recombination activating gene
Mem-
brana
RAG-1
Activacin de recombinasas
Componentes de la cadena ligera sustituta
Insercin de nucletidos
RAG-2
Recombinasas
TdT
l5 + VpreB
RAG-2
CD38 CD38
MHC clase II + CD19
Ig CD69a) + Ig (CD69b) sealizacin intracelular) ( :
CD20 + CD40 + CD45 R
PCA-1
(Plasma cell
Antigen-1)
V-DJ VDJ+C
reordenado
VJ+C
reordenado
coexpresin
IgM+IgD
Cambio de
IgMm IgMs
R.I.
primaria
R.I.
secundaria
maduracin
afinidad !
primer cont.
con Ag.
2 cont.
con Ag.
memoria
inmunolg. V-J

x
x x
x
5
VpreB
Receptor clula Pre-B
Ig
?
Ig
L sustitutiva
SUBPOBLACIONES B
B2 (Convencional, CD5-, humanos y ratones) Propiedad B1 (CD5+, todas las especies)
Marcadores de IgM + IgD IgM >>> IgD
Stem cell
Stem cell
Autoper-
petuacin
B2
B1
Clula
progenitora
Clula
progenitora
Tdt +
Se produce Durante toda la vida a partir de la stem cell
de M.O.
Durante la epoca fetal a partir de la stem-cell, despus
autorenovacin en periferia (dependiente de IL-10) sobre
todo en peritoneo y pleura. A pesar de esta respuesta a in-
terleucinas son ms independientes de T que las B2.
Autoper-
petuacin
Tdt -
IgM
IgM
Autoper-
petuacin
Hoy se cree que existen dos tipos distintos de cluas
CD5+, una que expresa CD5 de forma constitutiva y
otra que lo expresa tras estimulacin con interleucinas
Marcadores de
superficie
IgM + IgD
CD5 negativa
IgM >>> IgD
CD5 positiva
Especificidad
Existen similitudes entre los linfocitos B CD5+ y los T con TCR / :
Los T se desarrollan pronto en el desarrollo, con un repertorio
limitado de receptores y sin participacin de la TdT. Despus el
repertorio es ms amplio pero pasan a ser una linea minoritaria en
relacin a los linfocitos T con receptor / .

/

Tendencia a malignizar (Las CLL derivan de linf. B CD5+)
La proporcin B2/B1 vara con los animales ( p.e.: B1 es
ampliamente mayoritaria en el conejo).
Tdt positiva
Usa todos los genes V
Hipermutacin somtica
Especificidad alta.
Dirigida sobre todo a protenas.
Tdt negativa
Usa solo los V prximos a D
No hipermutacin somtica
Poca diversidad y baja especificidad.
Los anticuerpos tinene poca afinidad pero reconocen a
muchos determinantes (poliespecificidad) y van dirigi-
dos sobre todo a los carbohidratos bacterianos.
Respuesta temprana antibacterias?
B2
IgM
CD5
IgD
IgD
B1
Tdt: deoxinucleotidil transferasa terminal