Lunes 06 de octubre de 2014 Resumen: Se realiz cromatografa en capa delgada con el principal objetivo de conocer los disolventes y las proporciones ms adecuadas para llevar a cabo la separacin de los compuestos de colores amarillos y rojos (, y carotenos) que se encuentra en el chile guajillo, para posteriormente realizar la cromatografa en columna empleando la mezcla de disolventes con proporcin inicial de 9 a 1 heptano-tolueno con la que se obtuvieron buenos resultados Introduccin: Comentarios: Fundamento teorico: La cromatografa es una tcnica que se emplea para separar entre si los componentes de una sustancia. Esta tcnica fue creada por el botnico ruso Michael Tswett en 1906, el cual llam a su mtodo cromatografa, palabra griega que significa escritura a color, porque lo utilizo para separar compuestos coloreados. Tswett llev a cabo una extraccin de una mezcla de pigmentos de hojas verdes utilizando ter de petrleo, un disolvente no polar, y descubri que era capaz de separar los pigmentos al hacer pasar el extracto a travs de una columna, un tubo de vidrio rellenado con carbonato de calcio (tiza). Tswett utiliz como detector del experimento la simple observacin, ya que los compuestos que separ tenan color y era posible detectar bandas o zonas de distintas materias por su color en la columna, demostrando que la clorofila es solo uno de los muchos pigmentos que se encuentran en las hojas de las plantas. Las tcnicas cromatogrficas para el anlisis y purificacin de los productos de reaccin son ampliamente utilizadas en el laboratorio orgnico. La tcnica cromatogrfica de purificacin consiste en separar mezclas de compuestos mediante la exposicin de dicha mezcla a un sistema bifsico equilibrado. Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido. Las combinaciones de estos componentes dan lugar a los distintos tipos de tcnicas cromatogrficas. Es difcil definir rigurosamente el trmino de cromatografa, ya que se ha aplicado ese nombre a varios sistemas y tcnicas. Sin embargo, todos esos mtodos tienen en comn el uso de una fase estacionaria y una fase mvil. En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se desplaza con una fase mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
Cromatografa de adsorcin.
Dentro de esta tcnica pueden diferenciarse dos tipos de cromatografas de adsorcin denominadas cromatografa cromatografa de columna y de capa fina (abreviada TLC, del ingls Thin Layer Chromatography). Para la tcnica de cromatografa de adsorcin en columna se emplean columnas verticales de vidrio cerrada en su parte inferior con una llave que permita la regulacin del flujo de la fase mvil. Las columnas se rellenan con un adsorbente, como almina o gel de slice (fase estacionaria), mojado con el disolvente que se vaya a emplear en el proceso cromatogrfico. En la parte superior de la columna se pone la disolucin de la mezcla a separar y a continuacin un depsito que contenga el eluyente (fase mvil) que se va a utilizar en la separacin. Se abre la llave inferior de manera que el eluyente comience a bajar por la columna. En este proceso, los componentes de la mezcla son adsorbidos por la fase estacionaria con diferente intensidad, de manera que el proceso de adsorcin- desorcin hace que unos componentes avancen ms rpidamente que otros. El lquido que sale por la parte inferior de la columna se recoge de manera fraccionada. Si los componentes de la mezcla avanzan a muy diferente velocidad se podrn obtener fracciones cromatogrficas constituidas por un solo componente.[16]
matriz de la columa. Sustancia que est empapada de solvente y que se empaqueta en la columna. Tambin se denomina el lecho de la columna. longitud de la columna. Longitud del dispositivo en el que se empaqueta la columna. Es importante en algunos tipos de cromatografa como la de filtracin en gel y poco importante en otras como la cromatografa de afinidad. volumen de la columna. Volumen total de gel que se empaqueta en una columna cromatogrfica. volumen muerto de la columna. Cantidad de solvente que tiene que atravesar la columna para asegurar que se ha reemplazado completamente. Coincide con el volumen de solvente que sale de la columna desde que se aplica la muestra hasta que empieza a salir la primera protena. En general, y dependiendo del tipo de cromatografa puede ser de 1 a varias veces el volumen de la columna. 'Run Throught'. Es, en columnas de intercambio inico o de afinidad, el volumen de solvente ms protenas que atraviesa la columna sin quedar retenido en ella. Correspondera en el caso de la cromatografa de afinidad al volumen de solvente que contiene las protenas no afines al ligando. En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula A tiene ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A. Existen muchos tipos de cromatografa de columna. En el laboratorio se usan tres tipos de ellas. Filtracin en gel: En esta las molculas son separadas por su tamao. El gel consiste de una cama de esferas con poros de un tamao dado. El gel se conoce como sefadex, el cual viene con poros de distintos tamaos. Las molculas de igual o menor tamao que el poro entran a las esferas mientras que las molculas ms grandes pasan rpidamente por la columna. Las molculas de tamao intermedio pueden entrar las esferas pero pasan menos tiempo en ellas. Las molculas salen en orden de tamao por el eludo. Aunque para efectos de este laboratorio las muestras que usaremos estn coloreadas, al hacer esta cromatografa en la vida real hay que usar otras pruebas para determinar qu fracciones contienen las muestras de inters, las cuales suelen ser protenas. El material que se escoja para la fase estacionaria depender del tipo de muestra que estemos corriendo. Cada tipo de gel presenta poros de distinto tamao. Intercambio inico: Se usa para purificar protenas. Separa molculas en base a su carga inica. La fase estacionaria presenta una matriz con carga. Al eluir una muestra, las molculas de igual carga salen con el amortiguador. Las molculas de carga opuesta se adhieren al material de empaque con distintos grados de afinidad. Para desprender las protenas adheridas se usa una solucin alta en cloruro de potasio o de sodio. Esto puede hacerse usando soluciones con incrementos moderados de salinidad, o de un solo paso, echando la solucin de mayor concentracin de sal primero. Al subir la concentracin poco a poco podemos recolectar las muestras desde las que menos afinidad por la columna tiene hasta las de mayor afinidad. Durante la elucin, la sal va compitiendo con la protena por las cargas de la matriz de la columna, hasta que la desprende. La columna puede ser de matriz negativa (intercambio catinico) o positiva (intercambio aninico). El tipo de empaque depender de qu queremos aislar. En este tipo de columna el pH es importante porque puede alterar la carga de la columna. Fase inversa: Esta es una cromatografa de interaccin en la que la fase estacionaria, con molculas hidrofbicas, interacta con molculas hidrofbicas en la muestra. La matriz consiste de fibras de silicato con cadenas de hidrocarburos. Estas atraern a las molculas hidrofbicas de la muestra mientras que las hidroflicas salen con el amortiguador. Las molculas son eludas de la columna lavando con soluciones de distinta concentracin de alcohol o cualquier otro solvente no polar. Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidrio. La fase mvil se encuentra formada por la solucin que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna. La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Las sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total, la separacin, y por tanto la resolucin, aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede ensancharse con el tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la resolucin.
Objetivos Aplicar experimentalmente los mtodos de extraccin de cromatografa en capa fina y cromatografa en columna Identificar los solventes ideales para extraer los pigmentos del chile guajillo. Hiptesis Si realizamos una extraccin de los pigmentos del chile guajillo que es un chile de color rojo, con disolventes orgnicos como el heptano en el cul los carotenos son solubles, y adems realizamos una cromatografa de adsorcin por columna, utilizando disolventes apropiados como tolueno en heptano los cules presentan afinidad por estos pigmentos, entonces podremos separar y obtener los carotenos , y del chile guajillo que componen los pigmentos
Material y reactivos
Cromatografa en capa fina 9 frascos de boca ancha Papel filtro Porta objetos Pipetas de 5 mL (una para cada disolvente) Vaso de precipitado de 50 mL Probeta de 50 mL Tubos capilares Superficie de vidrio de 20 x 20 Regla
Hexano Heptano ter de petrleo Cloruro de metileno Alcohol etlico Acetato de etilo Tolueno Cloroformo Dicloro etano Gel de slice para cromatografa en capa fina
Equipo Estufa Campana de extraccin
Esquema de aparatos
Cmara de elucin
Etapas del empleo de la C.C.F a) aplicacin de la disolucin a la placa, b) desarrollo de la placa, c) clculo del R F .
Procedimiento Para la cromatografa en capa fina del chile guajillo se debe primero macerar el chile guajillo para lo cual lo cortamos en trozos pequeos y lo depositamos en un frasco mbar ya que en los pigmentos se descomponen con la luz, le colocamos ter de petrleo (que apenas cubra el chile picado dentro del frasco, este proceso de maceracin necesita de tiempo (2 o tres das). Para preparar las palcas se prepar una papilla de gel de slice con metileno, y se unto sobre los porta objetos de manera uniforme, para activar las placas se metieron sobre una placa de vidrio a la estufa durante unos minutos una ves listas se les coloco tres gotas de la muestra con un capilar a unos .5cm del borde inferior de la placa se introduce la placa en las cmaras de elucin que se prepararon previamente con diferentes proporciones y combinaciones de disolventes y con un papel filtro que cubre por el interior las paredes del frasco dejando un espacio de 2cm de ventana para poder observar el avance del disolvente sacar la placa antes de que este llegue a la parte superior dejar secar la placa dibujar la placa y calcular el R F .
Material y reactivos para cromatografa en capa delgada. Bureta de 50mL Soporte universal Pinzas dobles para soporte universal 10 Matraz bola de 50mL Matraz Erlenmeyer de 250mL Gradilla Tubos de ensaye Gradilla Algodn Arena fina Varilla de vidrio
Heptano Tolueno Cloruro de metileno Muestra macerada de chile guajillo en heptano
Macerar el chile guajillo con heptano Prepara la papilla con gel de slice y heptano Untar la papilla en los porta objetos para preparar las placas Para activar las placas meter las placas sobre una placa preparativa durante unos 5 minutos Aplicar la muestra en las placas activadas a unos .5 cm del borde inferior e introducir la placa en la cmara de elucin Sacar la placa antes de que el eluyente llegue a la parte superior Secar, dibujar, medir y calcular el R F Equipo Campana de extraccin Rota vapor Bomba de vaco
Esquema de aparatos
Mezcla de disolventes 9:1 heptano-tolueno Matraz erlenmeyer como receptor del eluyente tapn de algodn Capa de arena aprox. Un centmetro embudo Soporte universal Fase estacionaria gel de slice aprox. 35 cm Pinzas de tres dedos Procedimiento Hacer un tapn que entre exacto en la buera sin que quede apretado y empujarlo con la perilla de vidrio hasta el fondo de la bureta, montar la bureta en el soporte universal cuidando que quede bien nivelada agregar una capa de arena de un centmetro aproximadamente, preparar la papilla con gel de slice para cromatografa en columna y agregar una capa de 35 cm aprox. Agregar otra capa de arena, agregar una porcin de la mezcla de eluyentes para mantener humectada la fase estacionaria (nunca dejar de agregar el eluyente ya que la columna se podra secar) agregar la muestra del chile guajillo en heptano y volver a llenar constantemente la columna con las proporciones adecuadas de disolventes segn el avance de los pigmentos. Una vez obtenida la primera muestra de color colocarla en un matraz bola y llevarla al rota vapor, realizar C.C.F. a las muestras obtenidas.
kdk
Costo de los reactivos. 1L heptano anhidro 99% 1418.00 1L tolueno anhidro 99.8% 914.00 1L Hexano anhidro 95% 1455.00 1L Cloroformo anhidro 99% 1206.00 1L Benceno anhidro 99.8% 1346.00 1L Etanol - 1L Acetato de etilo - 1L ter de petrleo - 1L Acetona - 1L ter etlico - 1L Cloruro de metileno - 1Kg Gel de slice p/CCF 18580.00 1Kg Gel de slice p/CC 29120.00 Montar la columna Agregar la mezcla de disolventes y la muestra del guajillo Llenar contantemente la columna sin permitir que se seque la papilla Separar todo el eluyente que presente pigmentacin y colocarlo en pequeas muestras en los matraces bola Llevar las muestras al rota vapor y posteriormente realizar C.C.F a las muestras obtenidas Anlisis de resultados Los mtodos de cromatografa en capa delgada y cromatografa en columna se llevaron a cabo de manera correcta y se obtuvieron, en primera instancia la combinacin de disolventes, ideal para la separacin de los pigmentos por cromatografa en columna la cual tambin resulto y con lo cual se cumpli la hiptesis. Se sugiere el uso de un fondo blanco debajo de los tubos de ensaye que reciben el eluyente para una mejor distincin del pigmento Conclusiones La cromatografa de capa delgada es un mtodo que requiere mucha prctica y dado que la tcnica se aplic de manera correcta tanto en cromatografa en columna como en capa delgada se obtuvieron buenos y se cumpli el objetivo. Bibliografa Domnguez XA, E. Limusa, Qumica Orgnica Experimental, 1982. Dupont H, E. Reverte, Qumica Orgnica Experimental, 1985 Scribd.com, Laboratorio de qumica orgnica. Disponible en: http://es.scribd.com/doc/63927220/Laboratorio-Quimica-Organica
A qu grupo de compuestos pertenecen los pigmentos? , y carotenos. A qu se debe que estos compuestos sean coloridos? El color de un pigmento depende de la absorcin selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la reflexin de otras.
Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin. Se llama efecto de particin a la distribucin de un soluto entre dos o ms solventes que no se mezclan. El solvente o el lquido que es atrapado por el medio del sostn sea este papel, gel, slice o almina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelador se le llama fase mvil. La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de cromatografa de lquidos. La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la superficie de un slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de una sustancia a la superficie de otra. Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin con la cromatografa en columna? Ventajas: la cantidad de disolvente y de gel empleados, el tiempo para obtener los resultados Desventajas: la C.C.F es un proceso de separacin que solo sirve como criterio de identificacin y si no se cuenta con todo el material necesario se vuelve un proceso muy laborioso. Explique las diferencias que existen entre el adsorbente usado en cromatografa en capa delgada y el de columna hacer una lista de ellos en orden creciente de actividad. Los adsorbentes se dividen en dos grupos principales: los polares y los no polares. Entre los del primer grupo la intensidad de adsorcin es determinada por la polaridad de las molculas. En los del segundo grupo el papel fundamental es desempeado por las dimensiones y formas de las molculas. Adsorbentes en orden de menor a mayor Azcar, almidn, insulina, talco, carbonato sdico o potsico, magnesia, gel de slice y almina. Hacer una lista de los eluyentes usados comnmente en cromatografa en columna y en capa delgada en orden creciente de polaridad. ter de petroleo, hexano, heptano, benceno, ter etlico, tolueno, cloroformo, cloruro de etilo, cloruro de metilo, dicloroetano, cetona, etanol, metanol. Hacer una lista de la capacidad de adsorcin de los grupos funcionales de los compuestos orgnicos Qu compuesto es ms retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en una placa cromatogrfica? Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca? mediante calentamiento de una varilla de vidrio para volverla maleable, se retira y se tira de ambos extremos para formar un capilar delgado fcil de cortar Por qu es necesario que la cmara de elucin este saturada con los vapores del eluyente? Para alcanzar un equilibrio entre el disolvente y la atmosfera y ayudar a una mejor elucin de la muestra. Adsorbente: fase sobre la cual se acumula el adsrbato. Eluyente: disolvente o mezcla de disolventes usados Elato: fracciones obtenidas durante la cromatografa en columna Particin: solubilidad de las sustancias en dos fases diferentes Elucin: es el recorrido de los pigmentos en las cromatoplacas Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria? Fase mobil-fase estacionaria y tipo de cromatografia Vapor-solida cromatografa de gases Vapor-liquida cromatografa de gases (CGL) Liquida-solida cromatografa de adsorcin (CLS) Liquida-liquida cromatografa liquido-liquido (CLL) Cul es la funcin de la fase mvil? Eluir o desplazar un componente a lo largo de la fase estacionaria Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina? En un frasco de 150 a 200mL se pesa el recipiente elegido, se aade la cuarta parte de gel de slice o de almina, y se pesa de nuevo la diferencia entre ambos pesos es el peso de adsorbente se aade ahora de tres a cuatro veces el peso de cloruro de metileno y se agita hasta tener un pasta de consistencia similar a la de un biscocho. Como se activa una placa? Metindola en la estufa por un lapso de 10 a 15 min. Que espesor debe tener la fase estacionaria en la CCD? 0.1 a 0.2 mm aprox.