UNIVERSIDADEFEDERALDOPARAN

CURSODEENGENHARIADEBIOPROCESSOSEBIOTECNOLOGIA

ALESSANDRAMATHIAS
BARBARATONEL
FERNANDACARIGNANO
RAFAELAVERONESI
LUISGUSTAVODOSSANTOS

TICAEMPROTENASHETERLOGAS

CURITIBA
2014
INTRODUO

Por meio da tecnologia do DNA recombinante, possvel a insero de genes em

microrganismos com a finalidade de estes produzirem uma protena de interesse. Essa
protena produzida a partir de um fragmento de DNA inserido na clula chamada de
protenaheterloga,umavezquenosintetizadapeloorganismonaturalmente.
O gene de interesse geralmente introduzido em um vetor, normalmente um
plasmdeo. O vetor precisa conter DNA e replicao independente da clula. O plasmdeo
uma estrutura bacteriana extra cromossomal que contm genes no essenciais para a
sobrevivncia da bactria em condies normais. Existem vrios tipos de plasmdeos
bacterianos, o de interesse para a produo de organismos transgnicos o R, que
contm genes de resistncia a antimicrobianos. Esses so inseridos nas clulas por
meio da transformao, absoro de fragmentos de DNA do meio, os quais sero
incorporados no material gentico da bactria. O vetor uma estrutura gentica que
possui a capacidade de se replicar de forma independente do DNA bacteriano, essa
replicao inclui a realizao de cpias do gene introduzido e esse gene passado para
as prximas geraes. O ideal que esses vetores sejam pequenos, tamanho inferior a
10 Kb, uma vez que molculas grandes de DNA so mais facilmente degradveis e mais
difceis de manipular e os plasmdeos menores aproveitam enzimas da clula hospedeira
paraareplicao.
Aps a insero do plasmdeo contendo o gene de interesse, a bactria
colocada em um meio contendo antibiticos. Assim, as bactrias que contm o
plasmdeo R so selecionadas no meio, visto que esses possuem genes de resistncia a
antibiticos, e assim sintetizam protenas que conferem a resistncia s drogas
aplicadas. Essas bactrias resistentes selecionadas so as mesmas que contm o gene
deinteresse,ouseja,soastransgnicas.
Alm dos plasmdeos, existem outros vetores, nesse caso virais, que so utilizados
na clonagem, os bacterifagos lambda e o M13. O lambda possui o ciclo ltico de
infeco bacteriana, assim, seu DNA modificado, com a insero do gene de interesse
e os fagos so liberados para a infeo das clulas. Como a eficincia da transferncia
do material gentico do vrus para a bactria altamente eficiente e os fragmentos de
lambda que no receberam o gene so muito pequenos para serem incorporados nos
fagos, ento presumese que a maioria dos fagos ali presentes possuem o DNA
exgeno. J o M13 se reproduz sem ocasionar a morte da clula hospedeira, liberando
os vrus por um tipo de brotamento. O material gentico desse fago contm uma
sequnciaintergnicaqueutilizadacomostiodeclonagem.
Os organismos geneticamente modificados (OGMs) so classificados, segundo a
CTNBio, na resoluo normativa n2, de 27 de novembro de 2006, artigo 8, em quatro
classes de risco: classe 1, de baixo risco individual e para a coletividade classe 2, de
moderado risco individual e baixo risco para a coletividade classe 3, de alto risco
individual e moderado risco para a coletividade e por fim, classe 4, de alto risco
individual e para a coletividade. Sendo risco individual aquele que afeta a sade humana
e animal e para a coletividade o que afeta os vegetais e o meio ambiente. Os nveis de
biossegurana esto associados classe de risco de que OGM est, segundo o artigo
9. Classe de risco 1, NB1 classe de risco 2, NB2 classe de risco 3, NB3 classe de
risco4,NB4.

VANTAGENS

inegvel, mediante aos exemplos de microrganismos transgnicos e suas

aplicaes, a importncia desta tcnica atualmente. Estimase que, apenas de espcies
utilizadas no ramo alimentceo, existam mais de 100 cepas bacterianas provenientes de
25 espcies nativas. No que tange a sade, atribuise aos transgnicos a possibilidade
de produo em larga escala da insulina, da vacina contra a Hepatite B do hormnio de
crescimento. Somase a isso, a produo de vitaminas, anticorpos e remdios para a
AIDS. Uma outra contribuio dos transgnicos a produo de enzimas, extremamente
utilizadas na indstria como catalisadores de reaes e presente em produtos de
consumo direto, como o sabo em p, o qual contm enzimas que degradam a gordura
presentenostecidos.
Quanto a polmica que ronda a criao de bactrias superesistentes por uma
possvel falha no processo, devese ressaltar que o Brasil contm um dos processos
regulatrios mais rgidos e completos do mundo. H, na constituio, a lei n 11.105, que
estabelece os termos da regulao de todos os aspectos do uso e manipulao de
organismos geneticamente modificados em territrio nacional. Nesta lei, esto inclusos
todos os processos envolvendo OGMs: pesquisa em conteno, experimentao em
campo, transporte, importao, produo, armazenamento e comercializao. Nela,
tambm so criados orgos entre os quais so distribuidas as responsabilidades para
quetodasasnormassejamaplicadaseparaquesetenhaumafiscalizaoeficaz.
H ainda pesquisas que visam a utilizao de outros marcadores. Um exemplo
um marcador originrio de uma medusa do mar o qual marca as protenas em que
ocorreu modificao transgnica com um verde fluorescente, neste caso, evitase a
disseminaodaresistnciaaantibiticos.

DESVANTAGENS

O uso e a manipulao gentica em microrganismos pode acarretar em srios

prejuzos para a sade. Segundo Jetacar (1999), a resistncia a antibiticos pelos
microrganismos est crescendo em virtude do uso dos antibiticos. Isso vlido
considerando que os antibiticos selecionam as microrganismos resistentes, os quais
conseguem, ento, reproduzirse mais rapidamente devida baixa presso populacional,
ou seja, menos competidores para condies de crescimento. Alm disso, a mortalidade
dealgumasdoenasantestratveisestcrescendo(JETACAR,1999).
O desenvolvimento de antibiticos, dentro de poucas dcadas, sofreu uma queda
pelas dificuldades em encontrar compostos qumicos que sejam ativos contra as
bactrias (COATES & HU, 2007). O aparecimento de bactrias multiresistentes tambm
tem se tornado mais frequente em ambientes hospitalares (LEVY, 1998). Dessa forma, o
uso dos genes marcadores resistentes a antibiticos em organismos geneticamente
modificadospodegerarsriosriscossademundialquandosoltosnoambiente.
Conforme essas bactrias geneticamente modificados so soltas no ambiente,
elas podem liberar fragmentos de DNA bacteriano. Como a insero da resistncia se d
por meios genticos, ou seja, inserido um gene de resistncia no plasmdio da bactria,
esses fragmentos podem conter o DNA plasmidial inserido responsvel pela resistncia.
As bactrias so aptas de transferncia horizontal gentica, sendo uma delas a
transformao bacteriana. Nessa transformao, as bactrias ficam em um estado
passvel de receber genes do meio. Dessa forma, pode haver a incorporao dos genes
de resistncia por uma bactria patognica via transformao bacteriana, aumentando
seriamenteoriscosadehumana.
Ademais, as outras transferncias verticais podem causar srios problemas, uma
vez que que passam o gene de resistncia para outras bactrias. Muito embora o risco
de uma transferncia de genes de resistncia para microrganismos patognicos seja
baixa, isso no pode ser confundido com o potencial risco que tal acontecimento pode
causar. Alm de que os eventos de transferncias podem ser amplificados sob uma alta
pressoseletiva.
Em outra perspectiva, muitos alimentos transgnicos que so cultivados
atualmente contm genes resistentes a antibiticos (os mesmos que so usados em
tratamentos com seres humanos). Na planta esse gene no causa problemas, porm se
for transferido (cadeia alimentar) para os seres humanos pode causar resistncia a
antibiticos. Esses genes so inseridos nas plantas para testar se o experimento
gentico funcionou. Os testes so feitos selecionando algum tipo de organismo
modificado e ento nesse organismo inserido o gene para resistncia a um
determinado antibitico, esses organismos crescem em meio com antibitico, logo, as
que conseguirem sobreviver so aquelas que possuem o gene resistente, podendo se
concluir que essas clulas foram alteradas e possuem a propriedade desejada. Porm, o
gene de resistncia antibitica continua no tecido da planta, e se transferido a seres
humanosouanimaispodecausaroaparecimentodesuperbactrias.
Outra desvantagem so as limitadas opes de genes de resistncia como
marcadores. Assim, a necessidade visa utilizar de outros meio para fazer a demarcao
dos organismos transgnicos. Uma das solues seria usar genes marcadores
selecionveis que proporcionam uma vantagem metablico sobre os outros organismos
que no receberam o gene de interesse (READ, 2000). Estudos conduzidos pela ACNFP
(1994) vem utilizados marcadores auxotrficos em cepas de S. cerevisiae e em E. coli.
Alm do uso de marcadores que regulam a produo de enzimas responsveis pela
quebradeacaresparaidentificarosorganismosmodificados.
Uma maneira de controle acerca do uso de genes de resistncia a antibiticos a
correta utilizao das prticas de biossegurana. Nesse contexto, possvel verificar a
clara unio entre a tica do uso e a biossegurana. Segundo a Lei n 11.105/05, fica
proibido a liberao de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) no ambiente
sem a deciso tcnica favorvel da CTNBio. Alm disso, obrigatrio a notificao
imediata aos rgos compententes (vide CTNBio, autaridades da sade pblica, da
agropecurio e do meio ambiente) sobre acidentens que possam provocar a
disseminao de OMGs e seus derivados. Assim, as prticas de biosseguranas visam o
uso correto, de maneira segura e tica acerca de modifcaes genticas de
microrganismos.

CONCLUSO

Como existem inmeras vantagens na utilizao de protenas heterlogas,

importante que continuem sendo produzidas e pesquisadas, uma vez que algumas so
essenciais, como a insulina e o hormnio do crescimento. Porm, de suma importncia
que novos mtodos que apresentem riscos minimizados sejam pesquisados e
otimizados. Alm disso, uma constante reviso das leis que regem esta tcnica deve ser
feita a medida que novas tecnologias forem surgindo, a fim de que a legislao fornea
base para a aplicao da biossegurana na rea. Outra ideia a criao de um plano de
ao caso haja o vazamento de tais microrganismos no meio ambiente. Devem ser
encontradas maneiras de reduzir os aspectos negativos, como a melhora na
biossegurana do processo, melhor fiscalizao de como so utilizadas essas protenas,
a realizao de um mapeamento dos efeitos que elas podem causar no meio ambiente
em que so inseridas e mais informaes ao consumidor final, para que estes conheam
aprocednciadoprodutoqueestoadquirindo.

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