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Eduard Buchner
Al igual que las disciplinas experimentales que han surgido como rama comn
que es la biologa, tiene una historia propia construida a travs de
observaciones, experiencias, pruebas y teoras. Se inici con el estudio de los
procesos de fermentacin y de putrefaccin y Antoine-Laurent Lavoiser (17431794) fue el primero en plantear sobre bases cuantitativas el proceso de la
fermentacin alcohlica al observar una relacin entre cantidad de azcar
presente y productos formados durante el proceso. Sostuvo que la
fermentacin poda ser considerada como una reaccin qumica cualquiera. No
obstante Pasteur demostr pronto que los procesos de putrefaccin y
fermentacin eran provocados por la presencia de bacterias y levadura
Enzimas
Las enzimas
Importancia
Sin enzimas, no sera posible la vida que conocemos. Igual que la biocatlisis
que regula la velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiolgicos, las
enzimas llevan a cabo funciones definitivos relacionadas con salud y la
enfermedad. En tanto que, en la salud todos los procesos fisiolgicos ocurren
de una manera ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados
patolgicos, esta ltima puede ser perturbada de manera profunda. Por
ejemplo, el dao tisular grave que caracteriza a la cirrosis heptica pueden
deteriorar de manera notable la propiedad de las clulas para producir enzimas
que catalizan procesos metablicos claves como la sntesis de urea. La
incapacidad celular para convertir el amoniaco txico a urea no txica es
seguida por intoxicacin con amoniaco y por ultimo coma heptico. Un conjunto
de enfermedades genticas raras, pero con frecuencia debilitantes y a menudo
mortales, proporciona otros ejemplos dramticos de las drsticas
consecuencias fisiolgicas que pueden seguir al deterioro de la actividad
enzimtica, inclusive de una sola enzima.
Despus del dao tisular grave (por ejemplo, infarto del miocardio o pulmonar,
trituracin de un miembro) o siguiendo a multiplicacin celular descontrolada
(por ejemplo, carcionoma prostatico), las enzimas propias de tejidos
especficos pasan a la sangre. Por lo tanto, la determinacion de estas enzimas
intracelulares en el suero sanguineo proporciona a los medicos informacion
valiosa para el diagnostico y el pronostico.
Caractersticas
Desde el punto de vista qumico, las enzimas estn formadas de carbono (C),
Hidrgeno (H), oxigeno (O), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero
siempre con peso molecular bastante elevado y comn propiedades catlicas
especificas. Su importancia es tal que puede considerarse la vida como un
"orden sistemtico de enzimas funcionales". Cuando este orden y su sistema
funcional son alterados de algn modo, cada organismo sufre mas o menos
gravemente y el trastorno puede ser motivado tanto por la falta de accin como
por un exceso de actividad de enzima.
Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la
velocidad a la cual se realizan los procesos fisiologicos, producidos por los
organismos vivos. En consecuencia, las deficiencias en la funcion enzimatica
causan patologias.
Las enzimas, en los sistemas biolgicos constituyen las bases de las complejas
y variadas reacciones que caracterizan los fenmenos vitales. La fijacin de la
energa solar y la sntesis de sustancias alimenticias llevadas a cabo por los
vegetales dependen de las enzimas presentes en las plantas. Los animales, a
su vez, estn dotados de las enzimas que les permiten aprovechar los
alimentos con fines energticos o estructurales; las funciones del metabolismo
interno y de la vida de relacin, como la locomocin, la excitabilidad, la
Estructura
Por su estructura y composicin qumica puede afirmarse que el origen de las
enzimas esta vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar del
origen de la vida se ha citado el xito de los experimentos realizados en el
laboratorio para la produccin de aminocidos; estos aminocidos son los que
precisamente constituyen la base del edificio proteico. Tambin en el
laboratorio se ha intentado la sntesis de protenas a partir de aminocidos.
La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen
una amplia gama enzimas encargadas de la funcin cloroflica, proceso que a
travs de reacciones qumicas complejas y encadenadas transforman
compuestos inorgnicos, como el agua, y el anhdrido carbnico, en sustancias
complejas adecuadas para ser entre otras cosas el alimento fundamental de los
animales.
En las mitocondrias existe un sistema de transporte de electrones que
determinan importantes fenmenos de oxidorreduccin, durante los cuales se
forman notables cantidades de ATP, que es un compuesto altamente energtico
del que depende la mayor parte de metabolismo, y coma, por tanto el trabajo
de las clulas; en las mitocondrias se produce el metabolismo enzimtico de
los cidos grasos, los cuales son en parte elaborados tambin en el citoplasma.
En los ribosomas tiene lugar concretamente todas la s sntesis de las
sustancias proteicas, mientras que en los lisosomas se producen enzimas
hidrolticos cuya misin escindir, con la intervencin del agua, molculas
grandes en otras menores, que pueden a su vez ser utilizadas por las clulas;
en cambio, las enzimas glucolticos estn difundidos en el citoplasma.
La localizacin de las sedes de las distintas operaciones enzimticas antes
mencionadas ha sido posible a travs del sistema de ruptura de las clulas y de
la separacin de los distintos componentes mediante centrifugacin diferencial
del homogeneizado de estas la ruptura celular y la subdivisin de los
componentes subcelulares se realizan actualmente utilizando los tejidos, por
ejemplo con saltos bruscos desde temperaturas inferiores a 0 C hasta
temperaturas mas elevadas con cambios de presin osmtica o mediante
ultrasonidos.
Naturaleza qumica
Existen numerosas razones para afirmar que las enzimas son proteinas. La
ms importantes son las siguientes:
a.
b.
c.
d.
e.
Solo protenas, que difieren entre si por la secuencia con que los
aminocidos estn combinados, como la ureasa y las enzimas digestivas (la
pepsina y la tripsina)
Los conjugados, separados en dos entidades qumicas bien definidas: la
coenzima y la apoenzima.
Nomenclatura y clasificacion
Cien aos atrs solo se conocian enzimas, muchas de estas, catalizaban la
hidrlisis de enlaces covalentes. Algunas enzimas, de manera especial las que
fueron descubiertas en un principio, recibieron nombres ligados mas bien a su
sitio de procedencia anatmica que no siguen ninguna regla ni sistema; tal es
el caso de la ptialina de la saliva, que ataca al almidn de la pepsina del
estmago y de la tripsina del pncreas, que atacan protenas; de la renina, que
cuagula la leche; de la papaina, enzima proteoltica que se encuentra en la
papaya y de las catepsinas, tambin proteasas, que se encuentran en las
clulas. Las enzimas relacionadas con la cuagulacin de la sangre, como son
la trombina, la plasmina, el plasmingeno, etc. reciben tambin nombres
sistematizados.
Al descrubir nuevas enzimas y proceder a su caracterizacin estricta se
aplicaron reglas de nomenclatura basadas en el nombre del sustrato atacado, o
en el tipo general de sustrato, o en la reaccin catalizada y se ha aadido
convencionalmente, la terminacin -asa. Por ejemplo: las lipasas (hidrolizan
lipidos o grasas), las amilasas (hidrolizan almidon), las proteasas (hidrolizan
proteinas), las esterasas (basado en la unin general de tipo ster presentes en
muchas sustancias), colesterol estrerasa (si la esterasa es especfica de los
esteres de colesterol) y acetilcolina esterasa (si la estersa de la acetilcolina).
Otros ejemplos: Las fosfatasas son enzimas que atacan las uniones ster, pero
en este caso, toman su nombre del grupo vecino a la unin que van a atacar,
de manera que se denominan fosfatasas (cuando quitan una molcula de
monofosfato), pirofosfatasas (cuando quitan el cido fosfrico como esteres
dobles (pirofosfatos), o triples, etc.) De la misma manera, las carbohidrasas se
denominan as genericamente, pero pueden comprender enzimas con nombres
proveniente del sustrato particular sobre el que actuan como la amilasa que
ataca al almidn y la celulasa que acta sobre la celulosa y, en otras
ultimo digito denota a la enzima hexocinasa o ATP: D-hexosa-6fosforotransferasa, enzima que cataliza la transferencia de fosfato desde
el ATP al grupo hidroxilo de carbono 6 de la glucosa.
Al final de sus y trabajos, clasifico las enzimas en seis grupos principales,
correspondientes por sus trminos a las raciones que cada enzima ejerce
sobre el sustrato. Estos grupos se subdividen en otro, segn el tipo de sustrato
y los tomos concretos que son sensibles a sus acciones. Estos seis grupos
son los siguientes:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Oxidoreductasas
Transferasas
Hidrolasas
Isomerasa
Liasas
Ligasas
amoniaco
(glutamina
sintetasa), y las
ligasas
cidoaminocido
o
sintetasas
de
pptidos,
algunos
de cuyos ejemplos
ms conocidos son
la
glutacin
sintetasa, la carnosina sintetasa, etc.
Grupo
Accion
ejemplos
1. Oxidoreductasas
Catalizan
reacciones
de Dehidrogenasas
oxidorreduccin. Tras la accin
Aminooxidasa
catlica quedan modificados en su
grado de oxidacin por lo que debe ser Deaminasas
transformados antes de volver a actuar
Catalasas
de nuevo.
2. Transferasas
3. Hidrolasas
4. Isomerasas
de
5. Liasas
6. Ligasas
este caso, que es cierta regla general de que el modo como se ordenan y
disponen los aminocidos de termoina el arreglo espacial que permite a las
otras partes del sistema enzimtico sustratos, cofactores, iones, etc.
adaptarse, en el espacio, en forma adecuada, para que se lleve a cabo la
accin cataltica. Por lo tanto, las estructuras indispensables que permiten la
combinacin con el sustrato y que confieren propiedades enzimticas a la
molcula se denomina "centro activo". Se acepta que el centro activo no es una
parte muy grande de la enzima completa y, en ciertos sistemas estudiados por
medio de bloqueos qumicos no parece constituir una zona de ms de 20 de
dimetro. Es muy posible que el centro activo est formado por la contribucin
de grupos funcionales de aminocidos situados en distintas cadenas o en
diferentes repliegues de una cadena, asiendo aparecer a dichos grupos muy
distantes entre ellos si se considera el orden que guardan a lo largo de la
cadena polipeptdica.
Un caso muy ilustrativo sobre lo que significa la estructura del centro activo
desde el punto de vista de la composicin de los aminocidos es el de la
triptofano pirrolasa, enzima ampliamente estudiada en bacterias desde el punto
de vista de la bioqumica gentica. En ella, la modificacin de algunos
aminocidos produce perdida e la actividad enzimtica, que se recupera si
vuelve a incluirse los aminocidos en el orden original; sin embargo, se pueden
reemplazar dos de ellos por otros completamente distintos, y la enzima vuelve
a ser totalmente activa. Es posible que con estos nuevos aminocidos se
consigan tambin las condiciones de distribucin espacial de grupos
funcionales y estructuras necesarias para la actividad enzimtica.
El concepto de arreglo tridimensional adecuado de los aminocidos que forman
la cadena polipeptdica de la enzima para lograr la actividad funcional correcta
permite entender numerosos denmenos: la necesidad de que la molcula
proteica ntegra est preservada en su forma; el hecho de que la
desnaturalizacin de la enzima al permitir la separacin de los pliegues,
conduce a la perdida de la actividad enzimtica; que al calentar una enzima
con su sustrato (por ejemplo, la invertasa con sacaroza, la transaminasa con
cido -cetoglutrico), se impide una desnaturalizacin que sin ellos se
producira, pues es posible que el propio sustrato contribuya a sostener y
reforzar la aproximacin de los pliegues de la cadena, etc.
Tambin se entiende por que al atacar la ribonucleasa con pepsina y romper
una sola unin peptdica que separa un tetrapptido del extremo con grupo
carboxilo libre se pierde la actividad, mientras que si solo se quita los tres
ltimos disminuye su accin sugiriendo as la importancia del residuo de cido
asprtico para sostener el centro activo en condiciones de eficiencia, o lo que
es ms probable, para formar parte del propio centro activo. Si se parte la
ribonucleasa entre los aminocidos 20 y 21, y se separan los dos fragmentos,
ninguno es activo, pero basta mezclarlos para que se unan en tal forma que se
restablece la actividad, aunque un poco menor que la originalmente observada.
El estudio detallado de la estructura del centro activo se hace por medio de
inhibidores o de reactivos que se combinan de modo especfico, con algunos
de los aminocidos del centro activo tales como el diisopropilfluorofosfato
(DFP), que se combina con el OH del aminocido serina, en diversas
esterasas, peptidasas, etc. , e inactiva el centro activo del que forman parte
Fosfatos de azcares
CoASH
Pirofosfato de tiamina.
Fosfato de piridoxal
Coenzimas del folato
Biotina
Coenzimas de cobamida (B12)
cido lipoico
Para la transferencia del hidrgeno:
NAD+, DADP+
FMN, FAD.
cido lipoico
Coenzima Q.
Activadores
Las enzimas son catalizadores orgnicos que disminuyen la barrera
denominada energa de activacin; y por tanto facilitan el que se inicie una
reaccin. Este proceso implica el trabajo necesario para poner a dos molculas
en un contacto lo suficientemente estrecho como para que reaccionen;
adems, el trabajo debe realizarce sobre la unin qumica una con covalencia
en sentido estricto para que pueda romperse y formar otros compuestos. Las
enzimas, como muchos catalizadores, son partculas de gran superficie y
muestran que tienen capacidad para atraer y captar diversas molculas.
Cualquier factor que permita por una parte atraer al sustrato a su centro activo
se pude considerar como un activador, adems algo que permita la rpida
salida de los productos tambin pude considerarse como un activador. Asi se
reconocen diversas posibilidades:
Especificidad enzimtica
Los distintos grupos de enzimas muestran variaciones considerables en su
grado de especificidad. Algunas de ellas muestran requerimientos estrictos
tanto para el sustrato (o los sustratos si se trata de reacciones bimoleculares)
como para el tipo de unin qumica sobre el que van a actuar; pequeos
cambios en cualquiera de ellos bastn para inactivar la reaccin; tal es el caso
de la mayora de las enzimas. En otras ocaciones, la deshidrogenasa
alcohlica, que funciona con DPN como coenzima, es absolutamente
especfica para el DPN, pero pude actuar sobre diversos alcoholes aparte del
etlico que es su sustrato caracterstico. Asi mismo, las enterasas, las
fosfatasas y ciertas peptidasas a menudo solo son especficas para el tipo de
unin atacada ster, peptdica, etc. y no requieren estructuras definidas en
el sustrato, a ambos lados de la unin. Hay ejemplo de especificidad doble: la
xantina oxidasa, altamente especfica para la xantina a la que convierte en
cido rico, y por otro lado muy activa, pero en forma inespecfica, al mostrar
gran capacidad para mostrar la activacin de gran variedad de aldehidos.
El requisito de estereoespecificidad para los sustratos es muy importante. Las
enzimas que habitualmente atacan a los azcares naturales con configuracin
D-, no lo hacen sobre sus ismeros artificiales L-; las enzimas tan activas en la
naturaleza sobre los aminocidos comunes tipo L- so inactivas para los
aminocidos artificiales (o muy raros en los organismos vivos) de tipo D-. Esto
es tan absoluto que cuando existen mezclas racmicas de ismeros D- y L-, un
mtodo conveniente de separarlas, es el de dejar que actue sobre ellas una
enzima que degradar exclusivamente a uno de los dos ismeros dejando al
otro intacto.
Cuando el sustrato es simtrico y el producto es asimtrico, la enzima provoca,
especficamente, la formacin de uno solo de los productos asimtricos, aquel
para el que la enzima es activa; tal es el caso de la deshidrogenasa lctica que,
al actuar sobre el cido pirvico (simtrico) produce exclusivamente cido Dlctico y no cido L-lctico, y el de la deshidrogenasa glutmica que al atacar el
cido -cetoglutrico produce solo cido L-glutmico:
CH3 CH3
||
C = O HCOH
||
COOH COOH
cido pirvico cido D-lctico
Existen otras formas de isomerismo geomtrico aparte del isomerismo D-, L-,
suceptibles de ser reconocidas por enzimas. Tal es la situacin de los ismeros
cis trans en que solo uno de los tipos del par es atacado. La fumarasa
introduce una molcula de agua en el cido fumrico trans, pero el ismero cis,
o sea el cido maleico, no es atacado.
H C COOH H C COOH
HOOC C H H C COOH
cido fumrico (trans) cido malico (cis)
Las enzimas tambin pueden distinguir molculas que desde el puntod e vista
estructural, como compuestos qumicos, son identicas. Por ejemplo, la glicerol
cinasa, por medio de ATP, convierte al glicerol en L-grlicerol 3- fosfato, osea
produce su fosforilacin, pero exclusivamente en la posicin 3, hecho que se
ha demostrado con glicerol marcado con C radiactio, C 14, en las dos posiciones
posibles 1 y 3.
Los mismo sucede con el cido ctrico que al ser oxidado y descarboxilado
hasta producir cido -cetoglutrico adquiere un grupo C=O, en uno de los
lados de la molcula, quimicamente simtrica. Esta capacidad de la enzima
para reconocer el sustrato obedece a que debe tener por lo menos tres grupos
qumicos orientados en el espaciod e tal modo que el sustrato, aunque en
apariencia simtrico, solo puede adaptarse por completo a la enzima en una
sola posicin. De todo esto se desprende por el sustrato a los sustratos
necesitan tener un patrn peculiar de grupos qumicos, especficos para cada
enzima particular, de modo que se adapte perfectamente a su centro activo;
mientras mayor y ms complejo sea este requerimiento mayor ser la
especificidad de la enzima.
Accion de inhibidores.
Si a un sistema enzimtico se aaden sustancias que impidan la realizacin de
la actividad propia de la enzima, se dice que el sistema ha sido inhibido, y la
sustancia usada con estos fines se denomina inhibidor.
Muchos inhibidores son agentes que desnaturalizan a las enzimas, ya que
stas son molculas protenicas, susceptibles a una diversidad de agentes,
especialmente qumicos, como aniones complejos o metales pesados, Zn ++,
Pb ++, Ag ++, etc. A menudo estos agentes que impiden la actividad enzimtica
actan sobre casi todas las enzimas, lo que demuestra que su accin no es
especfica, sino que afectan a tosa molcula protenica . Tal es el caso de los
inhibidores de sufhidrilos, -SH, los cuales forman parte de una gran variedad de
enzimas. Otras sustancias bloquean especficamente determinadas reacciones
enzimticas y su especificidad es tal, que slo cierto sustrato y cierta enzima
son los susceptibles.
De acuerdo con esto, es posible clasificar los fenmenos de inhibicin
enzimtica en diversos grupos : inhibicin por competencia e inhibicin por no
competencia y sta, a su vez, en la debida a agentes desnaturalizantes y a
agentes inespecficos.
Inhibicion competitiva
En este caso el inhibidor no permite la formacin del complejo enzima
sustrato normal, ya que se forma un complejo enzima inhibidor ; una vez que
el inhibidor ocupa el lugar activo de la enzima, el complejo enzima inhibidor,
no se separa, en vista de que la enzima no tiene accin sobre el inhibidor y, por
lo tanto, queda bloqueada la parte activa de la enzima. El sustrato no puede
entrar al lugar activo, que est ocupado por el inhibidor y, de esta manera, se
impide la accin enzimtica.
El ejemplo clsico de inhibicin competitiva es el de la enzima deshidrogenasa
succnica que, en presencia de cido succnico en cido fumrico, reduciendo,
simultneamente, al acceptor de H. Diversas sustancias parecidas al cido
Inhibicion acompetitiva
Cuando las sustancias inhibidoras actan independientemente de la calidad del
sustrato natural presente, se trata de inhibicin por no competencia. En este
caso, el inhibidor bloquea loas sitios activos de la enzima de modo irreversible ;
en ocasiones se trata de la desnaturalizacin de la enzima, como cuando se
aaden aniones o cationes que precipitan las protenas. En otros casos la
combinacin irreversible se hace con sustancias que actan de manera
especfica sobre ciertos grupos activos de la enzima, o sobre la conformacin o
estructura completa de ella ; sin embargo, en estas circunstancias, se ven
afectadas por igual todos o cuando menos varios tipos de enzimas.
Existen algunos inhibidores no competitivos que muestran cierta especificidad,
como los agentes bloqueadores del radical sulfhidrilo, -SH, presente en las
cadenas laterales del aminocido cistena, comn a todas las molculas
protenicas y, por lo tanto, a las enzimas. Entre los inhibidores de sulfhidrilos
Inhibicion alosterica
Efecto de la Temperatura
Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reaccin
hasta cierta temperatura ptima, ya que despus de aproximadamente 450 C
se comienza a producir la desnaturalizacin trmica. Las enzimas de muchos
mamferos tienen una temperatura ptima de 370 C, por encima de esa
temperatura comienzan a inactivarse y se destruyen Sin embargo existen
especies de bacterias y algas que habitan en fuentes de aguas termales y en el
otro extremo ciertas bacterias rticas tienen temperaturas ptimas cercanas
a00 C.
Enzimas:
actividades
regulacion de
La regukacion
logra
la
del metabolismo
homeostacia
Patologas
Fenilcetonuria (PKU):
La Fenilcetonuria (PKU) es una ECM de Fenilanina (Phe) capaz de causar
retraso mental irreversible en ausencia de tratamiento, debido, en el 97-99% de
los casos, a deficiencia en la enzima Phe-hidroxilasa heptica.
La enfermedad cursa con niveles de Phe aumentados en sangre, lo cual
permite establecer su diagnstico en el perodo neonatal, cuando an las
manifestaciones clnicas no son evidentes. La frecuencia con que se presenta
es de 1:10000 nacidos vivos, y su patrn de herencia es autosmico recesivo.
El tratamiento consiste en la administracin de una dieta especial restringida en
Phe, bajo control continuo y cuidadoso. Dicho tratamiento debe iniciarse antes
del mes de vida, a fin de conseguir un desarrollo intelectual normal del nio.
Existe una forma menos frecuente de PKU (1-3%), debida a deficiencia de
tetrahidrobiopterina (THB), que es un cofactor natural de la Phe-hidroxilasa,
Deficiencia de Biotinidasa:
Se trata de un error congnito del metabolismo que carece de signos clnicos
en el perodo neonatal, capaz de producir sntomas neurolgicos como
convulsiones, prdida de la audicin y la vista, ataxia, hipotona y otras
manifestaciones como retraso del crecimiento, hiperventilacin, apneas,
dermatitis y alopeca. En ausencia de tratamiento, el inicio de la enfermedad se
da en promedio a los tres meses de vida, pudiendo retrasarse hasta los 2 aos.
Desde el punto de vista bioqumico presenta una deficiencia en la enzima
Biotinidasa, la cual tiene como funcin la recuperacin de biotina, vitamina
soluble del complejo B, de la va de degradacin de las carboxilasas Piruvato
CoA-, Propionil CoA-, b-Metilcrotonil CoA- y Acetil CoA-. A consecuencia de
esto, los pacientes pueden presentar aciduria orgnica, cetoacidosis
metablica
e
hiperamonemia
moderada.
El diagnstico neonatal se efecta midiendo la actividad de Biotinidasa en
sangre entera colectada en papel de filtro, pudiendo detectarse deficiencias
absolutas o parciales de la misma, segn si su actividad es < 10 % o de un 1530
%
respectivamente.