Professional Documents
Culture Documents
1
DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE EN ACEITE DE SEMILLAS
DE UVA ISABELLA (Vitis labrusca) EXTRAIDO CON CO2 SUPERCRÍTICO
POR:
CARLOS MARIO MARTÍNEZ O. (0732038)
CHRISTIAN ALONSO CEBALLOS R. (0732117)
2
DEDICATORIA
A mi familia,
Por todo su apoyo, confianza y por el esfuerzo entregado a mi educación.
A mi madre y mi abuela quienes lo entregaron todo por mi.
3
DEDICATORIA
A mi familia, que siempre ha estado allí y ha sido instrumento de Dios para sacarme
adelante sin importar qué fuera necesario para hacerlo.
A mis amigos y compañeros de clase porque de verdad aprendí demasiadas cosas para
mi vida y la llenaron de la compañía y sabiduría de Dios todos los días.
4
AGRADECIMIENTOS
5
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................ 12
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................................. 13
2. JUSTIFICACIÓN..................................................................................................................... 14
2.1 Disponibilidad de la materia prima en el Valle del Cauca ........................................ 15
2.2 Ventajas de producción ................................................................................................. 15
2.3 Proporción semilla / fruto ............................................................................................... 16
3. OBJETIVOS ............................................................................................................................ 17
3.1 Objetivo general .............................................................................................................. 17
3.2 Objetivos específicos ..................................................................................................... 17
4. MARCO DE REFERENCIA .................................................................................................. 18
4.1 Generalidades de la semilla ........................................................................................ 18
4.2 Características del aceite de semilla de uva .............................................................. 18
4.3 Estados físicos del CO2 ................................................................................................. 18
4.4 Extracción supercrítica con CO2 .................................................................................. 19
4.5 Propiedades fisicoquímicas .......................................................................................... 20
4.5.1 Contenido de humedad (C.H) ............................................................................... 20
4.5.2 Contenido graso (C.G) ........................................................................................... 21
4.5.3 Tamaño de partícula .............................................................................................. 21
4.5.4 Solubilidad, presión y temperatura ..................................................................... 22
4.5.5 Punto crítico (P.C) .................................................................................................. 23
4.6 Indicadores ...................................................................................................................... 23
4.6.1 Contenido de aceite extraído (C.A.E.)................................................................. 23
4.6.2 Actividad antioxidante (A.A.) ................................................................................. 24
5. ANTECEDENTES .................................................................................................................. 27
6. METODOLOGÍA ..................................................................................................................... 29
6.1 Materiales ........................................................................................................................ 29
6.2 Métodos ........................................................................................................................... 31
6.2.1 Pruebas preliminares ............................................................................................. 31
6.2.1.1 Determinación de contenido de humedad (Curvas de secado) .................. 31
6.2.1.2 Determinación de contenido de aceite mediante método Soxhlet .............. 31
6.2.1.3 Determinación de densidad de empaque de semillas molidas ................... 31
6
6.2.2 Método de extracción supercrítica ....................................................................... 32
6.2.2.1 Recepción y limpieza de la materia prima ...................................................... 32
6.2.2.2 Molienda, selección y preparación de las muestras ..................................... 32
6.2.2.3 Proceso de extracción del aceite ..................................................................... 32
6.2.3 Determinación de actividad antioxidante: Método FRAP ................................. 35
6.2.3.1 Reactivos ............................................................................................................. 35
6.2.3.2 Preparación de las muestras ............................................................................ 36
6.2.3.3 Preparación del reactivo de FRAP................................................................... 36
6.2.3.4 Preparación de solución buffer (pH 3.6) ......................................................... 36
6.2.3.5 Preparación de solución de cloruro de hierro (III) hexa-hidratado.............. 36
6.2.3.6 Preparación de solución TPTZ ......................................................................... 36
6.2.3.7 Curva de calibración .......................................................................................... 37
6.2.3.8 Medición con método FRAP ............................................................................. 37
6.3 Diseño experimental ...................................................................................................... 38
6.3.1 Hipótesis del modelo .............................................................................................. 39
7. RESULTADOS Y DISCUSION ............................................................................................. 40
7.1 Cinéticas de secado ....................................................................................................... 40
7.2 Contenido de aceite extraído. ....................................................................................... 40
7.3 Actividad antioxidante de aceite de semillas por método FRAP ............................. 42
7.3.1 Curvas de calibración para α–tocoferol .............................................................. 42
8. CONCLUSIONES ................................................................................................................... 46
9. RECOMENDACIONES.......................................................................................................... 47
10. REFERENCIAS .................................................................................................................. 48
A. ANEXOS .............................................................................................................................. 52
7
LISTA DE TABLAS
8
LISTA DE FIGURAS
9
LISTA DE ANEXOS
10
NOMENCLATURA
11
INTRODUCCIÓN
12
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Por tanto es necesario investigar un proceso de extracción que sea limpio, eficiente y
rentable. El uso de fluidos supercríticos (FSC) requiere el correcto manejo de algunas
variables de operación como la presión y temperatura. El método de ESC, extrae con
mayor rendimiento el aceite vegetal evitando trabajar a altas temperaturas (Hoffmann,
1989), lo cual lo hace ideal para la conservación de compuestos bioactivos iniciales que
contiene este aceite. De la misma manera, se requiere demostrar la presencia de
sustancias con alta actividad antioxidante por medio de un análisis químico del aceite
extraído, ya que de este aceite se tiene poca información sobre sus compuestos
antioxidantes y su respectivo valor nutricional.
Por todo lo expuesto, se propone investigar la factibilidad de este método para extraer
aceite vegetal proveniente de semillas de uva Isabella (Vitis labrusca), identificar las
condiciones óptimas de extracción supercrítica y evaluar su efecto sobre el rendimiento de
extracción y el potencial antioxidante de dicho aceite, comparando los resultados con el
método “Soxhlet” (extracción con solventes orgánicos).
13
2. JUSTIFICACIÓN
De otra parte, la legislación establece restricciones acerca del uso de solventes orgánicos
empleados en la extracción de productos destinados al consumo humano, entre los que
se incluyen los aceites de semillas; en este sentido, el CO2 supercrítico ofrece la ventaja
de ser fácil y totalmente eliminable del extracto. Para este tipo de aplicaciones, el CO2 es
el disolvente idóneo a emplear dado que no es tóxico, ni inflamable, ni corrosivo, ni
contaminante, es químicamente inerte, barato, abundante y, por último, fácilmente
obtenible en diversos grados de pureza. Además, a diferencia de los disolventes
orgánicos utilizados en la actualidad, el CO2 se separa de los extractos por
despresurización, pasando a estado gaseoso, evitando algún residuo del solvente en el
14
producto extraído (Friedrich et al., 1982; Guerrero et al., 1992; Luque de Castro et al.,
1993).
15
manejo de la plantación, el viñedo produce en promedio 2,2 cosechas al año. Mientras
tanto, en las regiones productoras de Estados Unidos y Brasil el producto no tiene el
mismo nivel de cosecha (Producción de la uva Isabella – Periódico El Tiempo, 2011).
En Colombia se consume la uva negra tanto fresca como procesada, en 2009 tuvo un
área de 2,580 ha de vid, cuya producción fue de 39,493 toneladas de uva, con un
rendimiento de 15,307 kg/ha., siendo la más importante la uva Isabella (Revista I.
Alimentos, 2009).
De acuerdo a la información anterior y teniendo en cuenta que el Valle del Cauca equivale
al 85% de la producción nacional, se puede estimar que anualmente, en este
departamento se producen 1600 toneladas de semillas de uva, aproximadamente.
16
3. OBJETIVOS
Extraer aceite de semillas de uva tipo Isabella (Vitis labrusca), empleando CO2
supercrítico, y determinar la presencia de compuestos antioxidantes en el aceite.
17
4. MARCO DE REFERENCIA
Como cualquier sustancia orgánica, el CO2 cambia sus propiedades intermoleculares por
la influencia de la presión y temperatura, de esta manera a condiciones normales el CO2
siempre es gaseoso y cambiar su estado (a líquido) se requiere comprimirlo y cumplir
cierto rango térmico. Más aún, para llevarlo a un estado supercrítico se requiere presiones
muy altas pero temperaturas moderadas.
18
En la Figura 1, se representa el diagrama de fases para el CO2 donde se evidencian los 4
estados: sólido, líquido, gas y supercrítico. Para este último estado se requiere
sobrepasar el punto crítico (P.C). La presión crítica (Pc) es 73 atm ó 7,4MPa y la
temperatura crítica (Tc) es 304,2 °K ó 31°C. Estas condiciones hacen que los FSC
presenten propiedades fisicoquímicas peculiares, asemejándose en parte a los líquidos
(densidad y poder disolvente) y en parte a los gases (propiedades de transporte y
compresibilidad), lo que les confiere características excepcionales como disolventes
(Martínez de la Ossa, 1990).
PRESIÓN
FLUIDO
LÍQUIDO SUPERCRÍTICO
PUNTO
CRÍTICO
73 ATM
SÓLIDO
GAS
TEMPERATURA 31°C
19
El CO2 en estado supercrítico presenta ventajas en los procesos de extracción, ya que al
comportarse como un líquido facilita la disolución de los solutos, a la vez que, su
comportamiento como gas permite una fácil separación de la matriz. Esto permite un
proceso de extracción más rápido, eficiente y selectivo que en el caso de la extracción
líquido-líquido. Además, el CO2 por ser un disolvente considerado GRAS (Generalmente
reconocido como seguro) permite descartar el uso de los habituales disolventes clorados
de las extracciones líquido-líquido. El CO2 en estado supercrítico presenta un alto
coeficiente de difusión (10 veces más que un líquido normal). De este modo, el CO2
supercrítico extrae con alta pureza, componentes de materiales biológicos como los
aceites y componentes bioactivos que, por lo general, son sensibles a las temperaturas
altas o a cambios de acidez (Gómez. et al., 1996).
Por medio de la Ec. (1) se calcula el contenido de humedad (C.H) en base húmeda (bh):
(1)
20
4.5.2 Contenido graso (C.G)
Este análisis proporciona un valor muy cercano al contenido total de aceite de la muestra
analizada. Muchas semillas tienen altos contenidos grasos, pero debido a la dureza del
material se ha dificultado la extracción eficaz de éstos.
Para llevar a cabo este análisis se emplea un método denominado “Soxhlet” el cual
consiste en retirar el contenido graso por arrastre con un solvente orgánico, en el cual sea
soluble el aceite.
(2)
21
En la Figura 2 se observa que las fracciones presentan características diferentes según el
tamaño de la partícula, destacando que la fracción menor a 0,6 mm, posee un alto
contenido en aceite y bajo contenido en fibra cruda, a diferencia de la fracción entera (sin
tamizar) que presenta un menor contenido en aceite y mayor contenido en fibra cruda.
El desarrollo de procesos de FSC depende marcadamente del poder solvente del fluido,
de la volatilidad del soluto, y de la variación de estas propiedades con las condiciones de
operación. Aún cuando se necesita conocer el equilibrio de fases para explotar
satisfactoriamente las peculiaridades que presentan algunos sistemas, existen
generalidades satisfactorias para la solubilidad de solutos en FSC (Williams, 1981).
22
fenómeno de ’condensación retrógrada’, un descenso pronunciado de la solubilidad a
medida que la temperatura aumenta. Por otro lado, a presiones mucho mayores que la
presión crítica del solvente, se observan las variaciones normales de solubilidad, es decir,
la solubilidad aumenta con la temperatura, y la disminución de la densidad del FSC es
pequeña (Hoyer, 1985).
4.6 Indicadores
23
El contenido de aceite extraído (C.A.E.) en porcentajes, se calcula empleando la Ec. (3).
(3)
Un radical libre es cualquier especie (átomo, molécula o ión) que contenga al menos un
electrón desapareado en su orbital más externo, y que sea a su vez capaz de existir en
forma independiente (Williams, et al., 1995). El efecto de un antioxidante se representa
en la Figura 4.
24
no siempre existe una correlación lineal entre la actividad antioxidante total y el poder
reductor (Yildirim et al., 2001). En un trabajo posterior (Yildirim, 2001) descarta esta
hipótesis. Estos autores trabajaron sobre hojas y semillas de Rumexcrispus L., verificando
que el poder reductor de los extractos aumenta con la concentración de los mismos,
presentando una correlación estadísticamente significativa (r =0,99) entre los compuestos
fenólicos totales y el poder reductor. También establecieron correlaciones
estadísticamente significativas entre el contenido de fenoles totales y la capacidad de
capturar radicales libres, así como entre el poder reductor y la capacidad de capturar
radicales libres. Finalmente, su conclusión fue que el poder reductor de un compuesto
depende de la capacidad de transferir electrones del propio compuesto; por lo tanto, el
poder reductor de un compuesto y la capacidad de capturar radicales libres de otra
sustancia sirven como indicadores significativos de la actividad antioxidante (Yildirim, et
al., 2001).
El método FRAP (Ferric Reducing Ability of Plasma) utiliza el poder reductor de una
sustancia para indicar su actividad antioxidante total. Dado el hecho de que existen gran
variedad de moléculas que poseen capacidad antioxidante, la medición de la actividad
antioxidante de una sola molécula en el cuerpo no es realmente significativa. Por esta
razón, se propuso la medición del FRAP proporcionado por el consumo de los productos,
ya que este considera la capacidad antioxidante total de las moléculas dispuestas en el
cuerpo, y su complementación entre ellas, para la actividad antioxidante (Dragland, 2003).
Fue presentado por primera vez en 1996, como una técnica sencilla, rápida y fácilmente
reproducible para la medición de antioxidantes en el plasma sanguíneo de un individuo; la
técnica fue fácilmente adaptable en otros experimentos con otras sustancias y ha tenido
buenos resultados tanto en mezclas de antioxidantes, como en soluciones puras (Benzie
y Strain, 1996).
25
Figura 5. Estructura oxidada y reducida del Fe (TPTZ)
26
5. ANTECEDENTES
27
Tabla 1. Estudios de extracción de aceites con CO2 supercrítico
(Aguilera et al., 1999)
28
6. METODOLOGÍA
6.1 Materiales
Materia prima: Las semillas de uva tipo Isabella (Vitis labrusca) fueron
proporcionadas por la empresa procesadora de pulpas de frutas FRESH&NATURAL
S.A.S, ubicada en la ciudad de Cali. Esta materia prima se ilustra en la Figura 6.
29
Nombre: Balanza analítica
Nombre: Estufa con aire para secado
Marca:Mettler Toledo
Marca: WTC Binder
Precisión:± 0.0001 g
30
Reactivos:
o CO2 (provisto por la Escuela de Ingeniería Química, proveedor Cryogas)
o Benzina de petróleo y ácido clorhídrico (0,1N) (provistos por la Escuela de
Ingeniería de Alimentos)
o Vitamina E (98%), ácido acético glacial, acetato de sodio tri-hidratado, TPTZ y
cloruro de hierro (III) hexa-hidratado (provistos por el Departamento de
Química Pura).
6.2 Métodos
Para llevar a cabo este análisis, se pesaron las cajas petri vacías, luego se agregaron
entre 4-5g de semilla molida (Peso muestra), se llevaron a la estufa a la temperatura
seleccionada, registrando cada 30 minutos el peso de la cápsula con la muestra seca
(Peso final). La suma del peso de la caja de petri más muestra húmeda es el Peso inicial.
Este proceso se repitió hasta alcanzar un peso constante. Finalmente mediante la Ec. (1)
se determinaron los contenidos de humedad y se construyó la curva de secado.
32
Figura 7. Diagrama de bloques del proceso de extracción de aceite por ESC
33
desplazamiento positivo, con una capacidad de flujo de 0.5 a 2,0 L/min. La presurización
en el extractor se realiza a través de las válvulas reguladoras de presión, mientras que el
caudal de disolvente se controla a través de la válvula micrométrica, provista de un
sistema de calefacción para evitar la congelación del disolvente al despresurizar.
El extractor se carga con las semillas procesadas de uva (7.0±0,5 g), colocando lana de
vidrio en sus extremos para evitar el posible arrastre de las semillas hacia las
conducciones del sistema. A continuación, el C02 líquido procedente de la bomba se hace
pasar a través de un serpentín sumergido en líquido refrigerante mantenido a una
temperatura de 1 °C, con objeto de evitar su gasificación, y se introduce en el extractor a
la presión de trabajo empleando de la bomba de alta presión. Alcanzadas las condiciones
de operación (presión y temperatura) en el extractor, se inicia el proceso de extracción
ajustando el flujo del disolvente con la válvula micrométrica y el medidor de caudal
másico. El aceite extraído se recoge en el separador, en tanto que el C02 (en estado
gaseoso) circula hasta el escape. La cantidad de aceite extraído, se determina
gravimétricamente. El contenido de aceite extraído se expresa, como la relación
34
porcentual entre la cantidad de aceite extraído y la carga inicial de semillas en el extractor.
Este ciclo de ESC se ilustra en la Figura 9.
Presión
Calentamiento
F.S.C. Extracción
Compresión
P.C.
Descompresión
Separación
Condensación
Extracto
Temperatura
6.2.3.1 Reactivos
La Tabla 4 resume los reactivos utilizados para realizar el ensayo FRAP.
35
6.2.3.2 Preparación de las muestras
Se diluyeron muestras de aceite en acetona, tomando una cantidad de aceite no superior
a 0.4g y enrazando con acetona en matraces de 25 mL.
36
6.2.3.7 Curva de calibración
Se realizaron curvas de calibración con un estándar: α–tocoferol (vitamina E),
recomendado como un estándar alimenticio apto para reportar valores de importancia
nutricional. El α – tocoferol a temperatura ambiente es un aceite, cuya densidad es
0.93g/cm3, lo cual dificultó la realización de las respectivas diluciones por relación v/v
(volumen / volumen); por esta razón se trabajó en relación p/v (peso / volumen).
(5)
Donde m es la pendiente, b es intercepto y X es la concentración de α-tocoferol en µmol/L
de solución.
A.A.= (6)
35 35°C 35°C
TEMPERATURA 0.8g/cm3 0.9g/cm3
DE OPERACIÓN (°C) 50°C 50°C
50
0.8g/cm3 0.9g/cm3
Corrida Coordenada Temperatura (°C) Densidad del CO2 (g/cm3) Presión del CO2 (psi)
38
extracto (Flores y Forero, 2001). La presión de cada corrida se encontró a partir de la
temperatura y la densidad con el programa “Bender”, el cual se basa en la ecuación de
estado de Bender (Brunner, 1994), la cual es específica para CO2 especialmente en la
región supercrítica.
Otras variables de extracción que permanecieron constantes durante las pruebas son:
Diámetro de partículas< 0,6mm
Humedad < 12% h.b.s.
Flujo CO2 supercrítico: 1,5L/min
Tiempo de extracción: 1 hora.
Para analizar el efecto de los factores en las variables de respuesta se realizó un análisis
de varianza empleando el software MINITAB15, con un índice de confianza de 95%. Las
combinaciones totales de los niveles suman 4 ensayos con réplica y adicionalmente se
realizaron dos puntos centrales, para un total de 10 corridas experimentales.
39
7. RESULTADOS Y DISCUSION
25
20
Humedad Base Seca (%)
15 T=50°C
T=60°C
10 T=70°C
0
0 100 200 300 400 500
Tiempo (min)
A estas condiciones se logró obtener muestras de semilla molida de uva aptas para el
proceso de extracción de aceite, ya sea por método Soxhlet o por ESC.
40
Tabla 7. Contenido de aceite extraído por método Soxhlet
CONTENIDO GRASO
MEDICIÓN S.D
PROMEDIO (%)
1 11,23 ±0,241
2 11,37 ±0,529
3 11,12 ±0,574
Figura 11. Efecto de las condiciones de operación sobre el contenido de aceite extraído
41
Teniendo en cuenta las Tablas 7 y 8, fue evidente el mayor contenido de aceite extraído
por ESC en algunas condiciones, comparado con extracción por Soxhlet. De acuerdo a lo
anterior, el uso de temperaturas superiores a 42,5°C fue contraproducente para el
rendimiento de extracción. La densidad del gas tiene un efecto favorable si se garantiza
un rango entre 0,85 y 0,9 g/cm3.
En el anexo (Figura A-5) se muestra que la densidad tiene un mayor efecto sobre el
contenido de aceite extraído que la temperatura, ya que al cambiar la densidad, éste varía
más que cuando cambia la temperatura. Así mismo, se muestra que el contenido de
aceite extraído es mayor cuando la densidad varía a 35°C que a 50°C (Ver anexo, Figura
A-6). Se obtuvo un gráfico de contorno (Ver anexo, Figura A-7) que muestra las diferentes
zonas de interacción de los factores y su efecto en el rendimiento de extracción. Así
mismo, este gráfico muestra que las condiciones más favorables para un mayor
rendimiento de extracción supercrítica corresponden a los puntos centrales del diseño
(42,50°C y 0,85g/cm3), es decir que no se requieren temperaturas muy altas, si se
asegura una densidad del gas aproximada de 0.85g/cm3; A esas condiciones se
obtuvieron los porcentajes de aceite extraído más altos: 17,50 y 18,65%. Estos valores
son superiores al valor máximo (11,5%) reportado en un estudio similar de ESC de aceite
de semillas de uva usando temperaturas y densidades iguales realizado por Passos et.al.
(2009).
La Tabla 10 muestra los resultados de actividad antioxidante del aceite de semillas de uva
extraído con ESC y Soxhlet empleando la Ec. (6).
43
En la Figura 12 se ilustra el efecto de las condiciones de operación sobre la actividad
antioxidante de ambos métodos de extracción.
4,0
3,5
(µmol α-tocoferol/g aceite)
Actividad antioxidante
Figura 12. Efecto de las condiciones de operación sobre la actividad antioxidante de las
muestras de aceite extraído
Como es posible notar, el aceite extraído por medio del método convencional Soxhlet
presentó mayor actividad antioxidante. De acuerdo al análisis de varianza y análisis post-
anova (Ver Anexo, Tablas A-8 y A-9) se concluyó que los tratamientos tuvieron un efecto
significativo sobre la actividad antioxidante del aceite extraído, en especial la densidad, ya
que p<0.05, pero la temperatura no influye significativamente sobre esa variable de
respuesta, dado que su p-valor es mayor a 0.05; este argumento es sustentado con el
valor F, el cual en tablas es 5,79 y el calculado por el análisis ANOVA es de 17,4 y por
tanto la hipótesis nula es rechazada y se concluye que los tratamientos no tienen el
mismo efecto sobre la capacidad antioxidante y que si influyen sobre la misma
significativamente, resultados que han sido muy similares en otros estudios (Passos,
et.al., 2009, Molero Gómez, et,al., 1996, Bork M., et.al., 1981).
El hecho de que la actividad antioxidante del aceite extraído presente mayores valores
mediante el método convencional Soxhlet que a través de la ESC con CO2 obedece a que
el dióxido de carbono no extrae los ácidos grasos libres de las semillas de las uvas, pues
a diferencia del hexano, el CO2 es selectivo a los triglicéridos. Por tanto, según Tangugi,
44
et.al., (1986) es posible que los triglicéridos presentes en las semillas se hayan disociado
por efecto de la temperatura. Como consecuencia, aumentó la concentración de ácidos
grasos libres y glicerol y disminuyó la de triglicéridos.
De acuerdo a la gráfica de contorno (Ver anexo, Figura A-12), las zonas más favorecidas
por las variables de proceso fueron aquellas con densidad alta (entre 0.85 y 0.9 g/cm 3) y
temperatura media (42.5°C).
Sin embargo en este mismo estudio se reportaron valores de A.A en el rango de 580-910
µmol α-tocoferol/L aceite para ESC y de 1020 µmol α-tocoferol/L aceite para método
Soxhlet, siendo estos valores menores a los obtenidos en este trabajo: 1100-2020 µmol
α-tocoferol/L aceite para ESC y 3627 µmol α-tocoferol/L aceite para método Soxhlet.
45
8. CONCLUSIONES
La densidad del CO2 ejerció mayor influencia que la temperatura del mismo sobre
el contenido de aceite extraído.
La densidad del CO2 presentó un efecto superior con respecto a la temperatura del
mismo sobre la actividad antioxidante del aceite.
46
9. RECOMENDACIONES
Utilizar otras técnicas de secado como, por ejemplo, secado al vacío, en donde no
favorezca la separación de los triglicéridos en el aceite extraído.
47
10. REFERENCIAS
Gómez, A.M., López, C.P. (1996). Recovery of grape seed oil by liquid and
supercritical carbon dioxide extraction: a comparison with conventional solvent
extraction, Chemical Engineering Journal and The Biochemical Engineering
Journal (61) 227–231.
Aguilera, J.M. del Valle J.M. (1999). Extracción con CO2 a alta presión.
Fundamentos y aplicaciones en la industria de Alimentos. FoodScience and
Technology International. (10)
Alma, M.H., Mavi, A., Yildirim, A., Digrak, M. y Hirata, T. (2003). Screening
chemi-cal composition and in vitro antioxidant and antimicrobial activities of the
essential oils from Origanumsyriacum L. growing in Turkey. Biol. Pharm. Bull.
26(12), 1725-1729.
Benzie, F y Strain J.J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of
“antioxidant power”: the FRAP assay; Anal. Biochem; Nº 239,p. 70-76, (1996).
Passos, C., Silvaa, M., Da Silva, M., Coimbra, M., Silvaa, L. (2003) Supercritical
fluid extraction of grape seed (Vitis vinifera L.) oil. Effect of the operating conditions
upon oil composition and antioxidant capacity. Chemical Engineering Journal.
(160) 634–640.
Crews, C., Hough, P., Godward, H., Brereton, P., Lees, M., Guiet, S., Winkelmann,
W. (2006) Quantitation of the main constituents of some authentic grape-seed oils
of different origin. Journal of Agricultural and Food Chemistry (54), 6261–6265.
48
Catchpole, O.J., Tallon, S.J., Eltringham, W.E., Grey, J.B., Fenton, K.A., Vagi,
E.M., Vyssotsky, M.V., MacKenzie, A.N., Ryan, J., Zhu, Y. (2009). The extraction
and fractionation of specialty lipids using near critical fluids. The Journal of
Supercritical Fluids. (47) 591-597.
Flores, I.C., Forero, C.A. (2001). Diseño preliminar de una planta de extracción de
fracciones antioxidantes a partir de residuos de la producción de jugos y pulpa de
mora con CO2 supercrítico. Grupo de Investigación de Termodinámica Aplicada.
Universidad del Valle.
Goodrum, J.W., Kilgo, M.B. (1987). Peanut oil extraction with SC- CO2: Solubility
and kinetic functions. Journal of the American Society of Agricultural Engineering,
(30) 1865-1868.
Hoffmann, G. (1989) The chemistry and technology of edible oils and fats and their
high fat products. Food Science and Technology, A Series of monographs. (32)
29-137. Academic Press Limited, London.
Horrobin, D. (1983) Essential fatty acids in clinical medicine”, Nutr. Health. (2) 127-
134,
Hoyer, G.G. (1985). Extraction with supercritical fluids: Why, how and so what.
Journal of Chemestry. 440-448.
49
Huang, D. (2005). The chemistry behind antioxidant capacity assays. Journal of
Biochemestry.
Luque de Castro, M.D. Valcárcel, M. Tena, M.T. (1993) Extracción con Fluidos
Supercríticos en el Proceso Analítico. Ed. Reverte, S.A.
Bravi, M., Spinoglio, N., Verdone, M., Adami, A., Aliboni, A., D’Andrea, A.,
Santis, D., Ferri, A. (2007). Improving the extraction of tocopherol enriched oil from
grape seeds by supercritical CO2. Optimisation of the extraction conditions, Journal
of Food Engineering 78, 488–493.
Marrone, C., Poletto, M., Reverchon, E., Stasis, A. (1998). Almond oil extraction
by supercriticalCO2: Experiment and modeling. Chemical Engineering Science,
(53) 3711-3718.
Meir,S., Kanner, J., Akiri, B., Hadas, S.P. (1995). Determination and involvement
of aqueous reducing compounds in oxidative defense systems of various
senescing leaves. J. Agric. FoodChem. Vol. 43, 1813-1819.
Molero G.A., Pereyra López C. and Martinez de la Ossa E. (1995) Optimización del
proceso de extracción del aceite de semilla de uva con dióxido de carbono líquido
y supercrítico”. Alimentación, Equipos y Tecnología (12) 35–40.
Murga, R., Ruiz, R., Beltrán, S., Cabezas, J. (2000). Extraction of natural complex
phenols and tannins from grape seeds by using supercritical mixtures of carbon di-
oxide and alcohol. J. Agric. FoodChem. Vol. 48, 3408-3412.
Palazoglu, T.K., Balaban, M.O. (1998). Supercritical CO2 extractions of lipids from
roasted pistachio nuts. Journal of American Society of Agricultural Engineering,
(41) 679-684.
50
Passos, C.P., Cardoso, S.M., Barros A.S., Silva, C.M., Coimbra, M.A. (2010).
Application of FT-IR spectroscopy and O-PLS/PLS1 regression for estimation of
Flavan-3-ols average degree of polymerization, Analytica Chimica Acta 661 (2010)
143–149.
Bail, S., Stuebiger, G., Krist, S., Unterweger, H., Buchbauer, G. (2008).
Characterisation of various grape seed oils by volatile compounds, triacylglycerol
composition, total phenols and antioxidant capacity”, Food Chemistry (108) 1122–
1132. Kulmbach, Alemania.
Williams, W., Orson, W., (1995). Use of a free radical method to evaluate
antioxidant activity. Lebens. Wiss. U. Technol., (28) 25-30.
Yildirim, A., Mavi A. y Kara, A.A. (2001). Determination of antioxidant and antim-
icrobial activities of Rumexcrispus L. extracts. J. Agric. Food Chem. (49) 4083-
4089.
AOAC. (2002) References about free radical methodology: 920.39. Report 145.
(43) 165-167.
AOAC (2000) References about fat determination: 920.42. Report 145. (43) 165-
167.
51
A. ANEXOS
Diámetro Diámetro
de de
partícula: partícula:
<3mm <1.5mm
Diámetro Diámetro
de de
partícula: partícula:
<1mm <0.85mm
Diámetro
de
partícula:
<0.6mm
52
Tabla A-2. Muestras y extracto final de ESC de semillas de uva
Tabla A-4. Análisis post-ANOVA para contenido de aceite extraído (prueba Tukey-95%)
Efectos y coeficientes estimados para Contenido de aceite extraído (unidades
codificadas)
Source Difference of means SE of Difference T-Value Adjusted P-Value
Temperatura
35°C 0.37937 0.04913 5.90 0.073
50°C 0.22163 0.02814 7.26 0.051
Densidad
0,8g/cm3 0.33745 0.04431 5.73 0.010
0,9g/cm3 0.25076 0.02974 6.11 0.003
53
Gráfica de efectos principales para Rendimiento de extracción
Medias de datos
15.0
Media
12.5
10.0
7.5
5.0
10
54
50
15-20 %
42,5 10-15 %
5-10 %
0-5 %
35
0.8 0.85 0.9
Densidad del CO2 (g/cm3)
Tabla A-8. Análisis de varianza para la actividad antioxidante del aceite extraído
Tabla A-9. Análisis post-ANOVA para la actividad antioxidante del aceite extraído
Efectos y coeficientes estimados para Actividad Antioxidante (unidades
codificadas)
Source Difference of Means SE of Difference T-Value Adjusted P-Value
Temperatura
35°C 0.01728 0.04913 -0.18 0.864
50°C 0.01133 0.01244 -0.27 0.755
Densidad
0.8g/cm3 0.57937 0.04913 5.90 0.008
0.9g/cm3 0.69423 0.06172 7.84 0.000
55
Gráfica de interacción para Actividad Antioxidante
Medias de datos
2.2 Tipo de
Temperatura punto
2.1 35.0 Esquina
42.5 Centro
2.0 50.0 Esquina
1.9
1.8
Media
1.7
1.6
1.5
1.4
1.3
0.80 0.85 0.90
Densidad
1.9
1.8
Media
1.7
1.6
1.5
1.4
35.0 42.5 50.0 0.80 0.85 0.90
56
50
2-2.5
42.5 1.5-2
1-1.5
0.5-1
0-0.5
35
0.8 0.85 0.9
Densidad del CO2 (g/cm3)
Y=0,0013X + 0,0347
R2=0,99806
57